i-Q水中，并 且添加6.9ml乙酸酐并將瓶填充直至11。將約IOmg多糖溶解于Iml流動相中，并且用針筒過 濾器(0 · 22mm，mStarII，CoStar Cambridge，MA)過濾粒子。在0 · 5ml/min的流速下進行測量。 使用串聯(lián)連接的多角度激光散射檢測器和維持在恒溫下的折射計作為檢測器。Astra軟件 (5.3.4.14版，Wyatt Technology Cooperation)用于使用0· 147的dn/dc來確定樣品的平均 Mw和平均Μη。根據(jù)以下文獻以及如WO 2012/004007 Al，實施例1.9中所述在λ = 690nm下測 定值（溶劑NaOAc/H2〇/0 · 02 % NaN3，T = 20°C):W.M. Ku licke，U. Kaiser，D. Schwengers， R. Le_es，Starch，第43卷，第10期（1991 )，392-396。然而，在本說明書中提及的HAS和HES的 Mw和Mn值是根據(jù)Sommermey er等(在上述引文中）的方法測定的值。
[0037]優(yōu)選地，多糖選自由以下組成的組:未取代的支鏈淀粉、取代的支鏈淀粉、未取代 的淀粉、取代的淀粉、未取代的麥芽糖糊精、未取代的右旋糖苷、未取代的艾考糊精、取代的 麥芽糖糊精、取代的右旋糖苷和取代的艾考糊精。更優(yōu)選地，多糖選自由以下組成的組：（任 選取代的）右旋糖苷、艾考糊精、麥芽糖糊精和羥烷基淀粉，更優(yōu)選地，多糖選自由以下組成 的組:右旋糖苷、艾考糊精和羥烷基淀粉。
[0038]特定來說，多糖不是透明質(zhì)酸，并且優(yōu)選不是包含葡糖胺或其衍生物的多糖。
[0039] 根據(jù)一優(yōu)選實施方案，本發(fā)明涉及一種用于通過向罹患癌癥的受試者的體腔施用 來預防轉(zhuǎn)移形成和/或復發(fā)的多糖，其中所述多糖包含如上所述的取代或未取代的α-1，4_ 糖苷鍵連接的和/或α-1，6_糖苷鍵連接的脫水葡萄糖單元。更優(yōu)選地，多糖包含以下或基本 上由以下組成:α-1，4_糖苷鍵連接的和/或α-1，6_糖苷鍵連接的取代或未取代的脫水葡萄 糖單元。甚至更優(yōu)選地，多糖是右旋糖苷或艾考糊精，包括其取代的衍生物。
[0040] 術(shù)語"右旋糖苷"為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知，并且涉及通常包含α-l，6-糖苷鍵連 接的脫水葡萄糖單元的主鏈以及α-l，4_和α-l，3_和任選α-l，2_鍵聯(lián)作為分支點的葡聚糖。 天然右旋糖苷具有在介于10與50，000kDa之間的范圍內(nèi)的分子量。優(yōu)選右旋糖苷是分子量 在介于10與l〇,〇〇〇kDa之間，更優(yōu)選10與I ,OOOkDa之間，以及最優(yōu)選35與75kDa之間的范圍 內(nèi)的右旋糖苷。
[0041] 優(yōu)選地，包含右旋糖苷作為唯一多糖的組合物用于手術(shù)前、手術(shù)后或手術(shù)期內(nèi)施 用，如下文所詳述。
[0042] 術(shù)語"艾考糊精"也為熟練人士所知，并且涉及通常包含α-1，4-糖苷鍵連接的脫水 葡萄糖單元的主鏈以及α-1，6_鍵聯(lián)作為分支點的葡聚糖。優(yōu)選艾考糊精具有5至30kDa、更 優(yōu)選10至20kDa、以及最優(yōu)選13至16kDa的Mw。優(yōu)選艾考糊精具有3至10kDa、更優(yōu)選4至 7.5kDa、以及最優(yōu)選5至6kDa的Μη。因此，在一優(yōu)選實施方案中，艾考糊精具有13至16kDa的 Mw和 5 至 6kDa 的 Μη。
[0043] 當如本文所述的多糖已與它在它的產(chǎn)生過程中先前與之相伴的大多數(shù)組分分離 時，它可被稱為"分離的"或"純化的"。優(yōu)選地，如本文所述的包含多肽的組合物可為至少或 約75%、80%、85%、90%、95%或99%純凈的。
[0044] 優(yōu)選地，包含艾考糊精作為唯一多糖的組合物用于手術(shù)前施用，如下文所詳述。
[0045] 根據(jù)一甚至更優(yōu)選實施方案，本發(fā)明涉及一種用于通過向罹患癌癥的受試者的體 腔施用來預防轉(zhuǎn)移形成和/或復發(fā)的多糖，其中所述多糖包含至少一個取代的脫水葡萄糖 單元，其中所述至少一個脫水葡萄糖單元優(yōu)選被至少一個選自由以下組成的組的取代基取 代:糖基、烷基、環(huán)烷基、芳基、鹵素、氛基酸和 _(烷基_)n-H，其中n = l_6,優(yōu)選是1_3,并且其 中各重復單元（"η"）中的烷基可相同或可彼此不同，并且其中在存在于所述多糖中的各基 團_(烷基-〇) η-Η中，η可相同或可彼此不同。應了解當脫水葡萄糖單元的羥基被取代時，形 成基團取代基"?；蛘撸u基可被相應取代基置換。因此，術(shù)語"取代的脫水葡萄糖單元" 是指其中取代基可連接于羥基的氧，由此形成基團-〇-取代基，或可直接連接于糖單元的碳 原子的脫水葡萄糖單元。
[0046] 如本文所用的術(shù)語"取代的脫水葡萄糖"或"取代的單糖"或"取代的多糖"為本領(lǐng) 域普通技術(shù)人員所知，并且涉及包含在本發(fā)明的多糖中的在優(yōu)選至少一個化學修飾反應中 通過化學修飾加以修飾的脫水葡萄糖單元或單糖。術(shù)語"化學修飾反應"為本領(lǐng)域普通技術(shù) 人員所知，并且涉及修飾本發(fā)明的多糖或包含在其中的脫水葡萄糖或單糖單元的化學結(jié) 構(gòu)，優(yōu)選不改變它的特征性結(jié)構(gòu)特征的化學反應。因此，優(yōu)選地，術(shù)語化學修飾反應涉及部 分水解或修飾本發(fā)明的多糖的側(cè)鏈。優(yōu)選地，對側(cè)鏈的所述修飾使本發(fā)明的多糖在施用部 位的半衰期增加。優(yōu)選地，對側(cè)鏈的修飾是烷基化(例如甲基化或乙基化）、酰化(更優(yōu)選是 乙?；?、糖基化、羥基化、羥烷基化、脫?；蛎摷谆⒒蛴眠哙?、哌啶、哌啶胺、甘紫草酸 (teneraic acid)、哌啶丙醇、鹵素、氨基酸或多肽(優(yōu)選是脂肽）、官能團衍生化或其任何組 合。更優(yōu)選地，對側(cè)鏈的所述修飾是烷基化，甚至更優(yōu)選是甲基化，或最優(yōu)選是乙基化。優(yōu)選 地，衍生物與如本文所述的母體多糖關(guān)于本文提及的疾病具有相同或類似活性。優(yōu)選地，對 術(shù)語"取代"的定義在加以必要的變更下適用于對其它單糖單元的取代。優(yōu)選地，對側(cè)鏈的 修飾是用無抗癌活性的取代基進行修飾。在任何情況下，取代的多糖的取代基(諸如烷基， 如乙基)本身不具有迄今為止已知的癌癥活性。
[0047]如本文所用，術(shù)語"烷基"是指由優(yōu)選具有2至12個碳原子的鏈長度的飽和烴組成 的直鏈或支鏈官能團或側(cè)鏈。所述飽和烴可為直鏈，諸如丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛 基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基殘基；或支鏈，即其中碳主鏈在一個或多個方向上分 裂，包括例如異丙基、異丁基、叔丁基、1 _異戊基、2-異戊基、3-異戊基和新戊基剩余部分。
[0048] 優(yōu)選地，多糖包含至少一個取代的單糖單元，特定來說是被至少一個基團_(烷基_ 〇)n-H取代的脫水匍萄糖單兀，其中η = 1_6，優(yōu)選是1_3，并且其中各重復單兀η中的烷基可 相同或可彼此不同，并且其中在存在于多糖中的各基團_(烷基-〇) η_Η中，η可相同或可彼此 不同。特定來說，多糖包含-〇-(烷基-〇)η_Η基團，其中羥基的質(zhì)子被基團-(烷基-0) η-Η取代。 整數(shù)η優(yōu)選是1至6,更優(yōu)選是1至4,諸如1、2、3或4,其中，如果存在超過一個基團-(烷基-0 ) η-Η，那么η可相同或可彼此不同，并且烷基可相同以及可彼此不同，優(yōu)選地，在各基團中， 烷基是相同的。
[0049] 優(yōu)選地，多糖包含至少一個取代的脫水葡萄糖單元，其被至少一個基團-(乙基- 〇)n-H取代，優(yōu)選包含至少一個取代的脫水葡萄糖單元，其中至少一個羥基的質(zhì)子被基團-(乙基_〇)n-H置換（由此形成-〇-(乙基-〇) n-H)，其中η = 1_6，優(yōu)選是1_3，并且其中各重復單 元η中的乙基可相同或可彼此不同，并且其中在存在于多糖中的各基團-(乙基-0)η-Η中，η 可相同或可彼此不同。
[0050] 在一特別優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的多糖是羥烷基淀粉(HAS)。羥烷基淀粉羥丙基 淀粉和羥乙基淀粉是優(yōu)選的，其中羥乙基淀粉是最優(yōu)選的。
[0051] 優(yōu)選地，包含HAS作為唯一多糖的組合物用于手術(shù)前、手術(shù)后或手術(shù)期內(nèi)施用，如 下文所詳述。
[0052]淀粉是一種依據(jù)式(C6HnjO5)n的熟知多糖，其基本上由通過糖苷鍵聯(lián)偶聯(lián)的α-D葡 萄糖單元組成。通常，淀粉基本上由直鏈淀粉和支鏈淀粉組成。直鏈淀粉由直鏈組成，其中 葡萄糖單元通過a-1，4_糖苷鍵聯(lián)加以連接。支鏈淀粉是具有a-1，4_糖苷鍵聯(lián)和a-1，6_糖苷 鍵聯(lián)的高度分支結(jié)構(gòu)?？捎善渲苽淞u烷基淀粉的天然淀粉包括但不限于谷物淀粉和馬鈴薯 淀粉。谷物淀粉包括但不限于稻米淀粉、小麥淀粉(諸如單粒小麥(e inkorn)淀粉、斯佩耳特 小麥（spe 11)淀粉、軟質(zhì)小麥淀粉、二粒小麥（emmer)淀粉、硬粒小麥淀粉或卡姆特小麥 (kamut)淀粉）、玉米淀粉、黑麥淀粉、燕麥淀粉、大麥淀粉、黑小麥淀粉、斯佩耳特小麥淀粉 和粟淀粉(諸如高粱淀粉或苔麩(teff)淀粉）。由其制備羥烷基淀粉的優(yōu)選天然淀粉具有相 對于直鏈淀粉，高含量的支鏈淀粉。這些淀粉的支鏈淀粉含量是例如至少70重量％、優(yōu)選至 少75重量％、更優(yōu)選至少80重量％、更優(yōu)選至少85重量％、更優(yōu)選至少90重量％，諸如多達 95重量％、多達96重量％、多達97重量％、多達98重量％、多達99重量％或多達100重量％。 具有尤其高支鏈淀粉含量的天然淀粉是例如優(yōu)選從屬于傳統(tǒng)育種(例如天然Eliane種類） 或遺傳修飾的支鏈淀粉馬鈴薯種類的基本上無直鏈淀粉馬鈴薯提取的適合馬鈴薯淀粉(諸 如蠟質(zhì)馬鈴薯淀粉)和蠟質(zhì)種類的谷物(諸如蠟質(zhì)玉米或蠟質(zhì)稻米)的淀粉。
[0053] 羥烷基淀粉(HAS)是部分水解的天然淀粉的醚衍生物，其中淀粉中的羥基被適合 地羥烷基化；因此，HAS包含-0-(烷基-0) n-H基團，其中至少一個羥基的質(zhì)子被基團-(烷基-〇)n_H置換，其中η是1至6,優(yōu)選是1至4,更優(yōu)選是1至2,以及更優(yōu)選是1。作為聚合物以及由 于制備方法，HAS是一種多分散化合物，其中個別羥烷基淀粉分子就聚合度、分支位點的數(shù) 目和樣式以及取代樣式（即羥烷基的數(shù)目和/或位點）而言可不同。因此，通常通過統(tǒng)計平均 參數(shù)來表征羥烷基淀粉。這些參數(shù)通常是分子量分布、取代度和C2/C6取代比率。
[0054] 有兩種可能的方式描述取代度。關(guān)于相對于所有葡萄糖部分被取代的葡萄糖單體 的部分來描述羥烷基淀粉的取代度(DS)。羥烷基淀粉的取代樣式也可描述為摩爾取代度 (MS)，其中計數(shù)每個葡萄糖部分的羥烷基的數(shù)目。在本發(fā)明的情形下，羥烷基淀粉的取代樣 式以MS描述。關(guān)于MS，也參照Sommermeyer等，（1987)Krankenhauspharmazie ,8(8) ,271-278，特定來說第273頁。在總體水解羥烷基淀粉之后，通過氣相色譜法測定MS。給出相應羥 烷基淀粉起始物質(zhì)的MS值。假定在本發(fā)明的方法期間，MS值不受影響。
[0055] 此外，特定羥烷基淀粉溶液優(yōu)選借助于統(tǒng)計手段，通過平均分子量來定義。在這個 情形下，視分子的數(shù)目和它們的分子量而定，MJ^Mn被計算為算術(shù)平均值。數(shù)量平均分子量 Mn*以下等式定義：
[0056] Mn= Σ imMi/ Σ im
[0057] 其中m是具有摩爾質(zhì)量Mi的種類i的輕烷基淀粉分子的數(shù)目。或者，質(zhì)量分布可通 過重量平均分子量MwSMw來描述。重量平均分子量^由以下等式定義：
[0058] Mw= Σ iruMi2/ Σ iruMi
[0059] 其中m是具有摩爾質(zhì)量1的種類i的羥烷基淀粉分子的數(shù)目。根據(jù)本發(fā)明，MW值優(yōu) 選在1至2000kDa、更優(yōu)選5至700kDa、更優(yōu)選10至300kDa、以及更優(yōu)選70至150kDa的范圍內(nèi)。
[0060] 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應了解可根據(jù)Sommermeyer等（Krankenhauspharmazie，8， 1987，08,第271-278頁)或根據(jù)歐洲藥典7.0,01/2011:1785,第984頁測定平均分子量。兩種 方法之間的差異是所用光散射值dn/dc的值:在Sommermeyer方法中，使用dn/dc值0.135，而 在藥典方法中，這個值變?yōu)?.147+/-0.001。如果不另外指示，那么如本文所用的平均分子 量的值涉及如用So_ermey er方法(在上述引文中）測定的值。
[0061] 通常被稱為MS(分子取代度）的第二參數(shù)描述給定羥烷基淀粉的每個脫水葡萄糖 單元的輕烷基化位點的數(shù)目，并且可根據(jù)Sommermeyer等(Krankenhauspharmazie 8(8)， 1987，第271-278頁，特定來說第273頁)或根據(jù)歐洲藥典7.0，01/2011:1785，第984頁加以測 定。MS的值對應于由α-淀粉酶對羥烷基淀粉的可降解性。通常，羥烷基淀粉的MS值越高，它 的相應可降解性越低。也可根據(jù)Ying-Che Lee等，Anal · Chem · 55，1983，第334-338頁；或 K.L.Hodges等，Anal.Chem.51,1979,第2171頁測定參數(shù)MS。根據(jù)這些方法，使已知量的羥烷 基淀粉在二甲苯中經(jīng)受醚裂解，借此添加己二酸和氫碘酸。隨后通過氣相色譜法，使用甲苯 作為內(nèi)部標準物以及碘代烷校正溶液作為外部標準物來測定釋放的碘代烷的量。根據(jù)本發(fā) 明，MS值優(yōu)選在0.1至3、更優(yōu)選0.2至1.3、以及更優(yōu)選0.3至0.7的范圍內(nèi)。
[0062]被稱為"C2/C6比率"的第三參數(shù)描述在C2位置中被取代的脫水葡萄糖單元的數(shù)目 相對于在C6位置中被取代的脫水葡萄糖單元的數(shù)目的比率。在制備羥烷基淀粉期間，C2/C6 比率可通過用于羥烷基化反應的pH來影響。通常，pH越高，C6位置中越多羥基被羥烷基化。 可例如根據(jù)Sommermeyer等，Krankenhauspharmazie 8(8) ,1987,第271-278頁，特定來說第 273頁測定C2/C6比率。根據(jù)本發(fā)明，C2/C6比率的典型值在2至20、優(yōu)選2至14、以及更優(yōu)選2 至12的范圍內(nèi)。
[0063]出于實際原因，以下命名應用于識別不同HAS和HES制劑:縮寫字母代碼指示修飾 的種類(例如"HES"代表羥乙基淀粉），繼之以兩個分別指示平均分子量和分子取代度的數(shù) 字。因此，"HES 130/0.4"指示具有130kDa的平均分子量和0.4的MS的羥乙基淀粉。本領(lǐng)域普 通技術(shù)人員應了解因為部分水解以及側(cè)鏈取代是統(tǒng)計性過程，所以指示的值是平均值，包 括某一范圍。優(yōu)選地，MS值和C2/C6值指示值的± 20 %、更優(yōu)選± 10%以及最優(yōu)選± 5 %范 圍。
[0064] 因此，本發(fā)明的多糖的優(yōu)選實施方案是HES 70/0.5、HES 130/0.4和HES 450/0.7。 所述特定HES衍生物尤其優(yōu)選用于手術(shù)前、手術(shù)期內(nèi)和手術(shù)后施用。
[0065 ] 關(guān)于制備輕烷基淀粉，更特定來說制備輕乙基淀粉，參照例如S omme r me y e r等， Chromatographia，25，1988，第167-168頁;C.Jungheinrich等,Clin.Pharmacokin·,44(7)， 2005,第681-699頁；J.-M.Mishler IV，Pharmacology of hydroxyethyl starches，Oxford Medical Publications，202002，第1-30頁。
[0066]優(yōu)選地，多糖具有滲透活性。如本文所用，術(shù)語"滲透活性"意指化合物具有導致滲 透發(fā)生的性質(zhì)。因此，當存在于在半透膜的一側(cè)的溶液中時，本發(fā)明的滲透活性多糖導致存 在于另一側(cè)的蒸餾水經(jīng)所述半透膜擴散。優(yōu)選地，通過根據(jù)英國藥典第V卷，附錄V : N. Osmo I a I i ty (2012)中所述的標準方法測定5 %多糖溶液的重量摩爾滲透濃度來確定多糖 具有滲透活性的性質(zhì)。如通過上述方法所測定，具有IOOmOsmoVkg的重量摩爾滲透濃度的 多糖被視為具有滲透活性。
[0067] 優(yōu)選地，多糖是生物可降解的，并且最優(yōu)選地，多糖具有滲透活性并且是生物可降 解的。
[0068] 如本文所用的術(shù)語"生物可降解"意指本發(fā)明的多糖在特定時段內(nèi)通過活生物體 的作用被分解。優(yōu)選地，所述術(shù)語涉及本發(fā)明的多糖通過已向其施用所述多糖的受試者的 代謝作用被分解。更優(yōu)選地，所述術(shù)語涉及本發(fā)明的多糖在施用部位通過存在于受試者中 的細胞和/或酶的作用被分解。優(yōu)選地，為降解初始施用的多糖的一半量所需的時段是至少 或約一天，更優(yōu)選是至少或約兩天，并且最優(yōu)選是至少或約三天。優(yōu)選地，為降解初始施用 的多糖