α-(8-喹啉氧基)單取代酞菁鋅治療銀屑病的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種α-(8-喹啉氧基）單取代酞菁鋅光動(dòng)力療法治療銀屑病的用途， 適用銀屑病細(xì)胞、動(dòng)物模型和各種類型銀屑病患者的治療。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀屑病是一種以表皮過度增殖伴角化不全及真皮淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的慢性炎 癥性皮膚病，以紅斑、鱗屑為主要表現(xiàn)，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病程長(zhǎng)，易復(fù)發(fā)，難治愈，嚴(yán)重影響患 者的生活質(zhì)量。與歐美國(guó)家相比，中國(guó)的銀屑病患病率較低，但患者絕對(duì)數(shù)較多且正在逐年 增加。銀屑病治療的目的在于控制病情，延緩向全身發(fā)展的進(jìn)程，減輕紅斑、鱗屑、局部斑片 增厚等癥狀，穩(wěn)定病情，避免復(fù)發(fā)，盡量避免副作用，提高患者生活質(zhì)量，應(yīng)遵循正規(guī)、安全、 個(gè)體化的治療原則。目前銀屑病的治療方法主要有外用藥治療和物理療法。其中外用藥包 括潤(rùn)膚劑、角質(zhì)促成劑、角質(zhì)松解劑、糖皮質(zhì)激素、維Α酸類、維生素D3衍生物、地蒽酚、焦油 類、細(xì)胞毒性藥物等。他扎羅汀、中效與強(qiáng)效的糖皮質(zhì)激素、卡泊三醇為局部治療的一線藥 物。物理療法包括長(zhǎng)波紫外線（UVA)、寬譜UVB、窄譜UVB和光化學(xué)療法（PUVA)。對(duì)于中重 度銀屑病、膿包性銀屑病等難治型銀屑病，局部治療往往難起到較好的治療效果，而光療特 別是PUVA已被證實(shí)具有較好的療效。PUVA是結(jié)合口服或外用補(bǔ)骨脂素（8-M0P、5-M0P)與 UVA(少數(shù)亦可應(yīng)用UVB)的方法。但UVA大量照射可致皮膚紅斑、灼熱、水皰等；長(zhǎng)期應(yīng)用 PUVA可致皮膚老化、色素沉著和皮膚癌，有增加白內(nèi)障的危險(xiǎn)性。寬譜UVB亦可致紅斑、曬 傷、色素沉著長(zhǎng)期照射有致癌的可能性。窄譜UVB的紅斑、色素沉著，DNA損傷及致癌等副 作用小，有效性與PUVA的早期階段相同，但緩解期不持久。
[0003] 光動(dòng)力療法（photodynamictherapy,FOT)是二十世紀(jì)七十年代末興起的一種新 治療技術(shù)，是指在光敏劑參與下，在光的作用下，使有機(jī)體細(xì)胞或生物分子發(fā)生機(jī)能或形態(tài) 變化，甚至導(dǎo)致細(xì)胞損傷和壞死，從而達(dá)到治療效果的方法。PDT興起之初主要是針對(duì)（血 管）增生性病變，后成為世界腫瘤防治科學(xué)中最活躍的研究領(lǐng)域之一。近年來，PDT用于非 腫瘤型疾病，如尖銳濕疣、銀屑病、鮮紅斑痣、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、眼底黃斑病變、血管成型術(shù)后 再狹窄等疾病治療的研究日益得到重視。目前，PDT治療銀屑病尚處于研究階段，盡管一些 光敏劑介導(dǎo)的PDT在臨床前、臨床試驗(yàn)及個(gè)別病例治療中表現(xiàn)出良好的治療效果和較高的 安全性，但在世界范圍內(nèi)尚缺乏多中心、大規(guī)模的臨床推廣，亦缺乏以銀屑病為主要適應(yīng)癥 的光敏劑藥物。PDT治療銀屑病的機(jī)制尚未完全明確，目前研究表明可能與以下機(jī)制有關(guān)： ①PDT可減少炎癥發(fā)病機(jī)理中細(xì)胞因子分泌，改變銀屑病患者單核細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的模 式；②PDT可抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的增生；③PDT可促進(jìn)銀屑病患者皮損部位T細(xì)胞的凋亡， 糾正淋巴細(xì)胞特別是T淋巴細(xì)胞分類的改變，對(duì)免疫功能具有一定調(diào)節(jié)作用。與PUVA相比， PDT所采用照射光源為激光，長(zhǎng)期應(yīng)用的毒副作用小，安全性高，隨著光敏劑的發(fā)展，用于銀 屑病PDT療法的光敏劑在提高療效的基礎(chǔ)上，毒性亦較補(bǔ)骨脂素等早期光敏藥物降低。
[0004] PDT的作用在很大程度上取決于光敏劑的性質(zhì)，PDT的提出、發(fā)展及應(yīng)用都是隨著 光敏劑的發(fā)展而逐漸完善的。從1900年德國(guó)首次發(fā)現(xiàn)了光和光敏劑結(jié)合能夠產(chǎn)生細(xì)胞毒 性效應(yīng)開始，到1993年4月加拿大衛(wèi)生部在世界上首次正式批準(zhǔn)了卟吩姆鈉應(yīng)用于臨床，PDT的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用得到廣泛的關(guān)注。光敏劑或其代謝產(chǎn)物是一種能選擇性的濃集 于作用靶點(diǎn)的化學(xué)物質(zhì)。理想的光敏劑應(yīng)具備以下特點(diǎn)：①組分單一，結(jié)構(gòu)明確，性質(zhì)穩(wěn)定； ②對(duì)靶細(xì)胞具有較強(qiáng)的光毒性，療效強(qiáng)，但暗毒性較低，副作用??；③在靶組織內(nèi)存有較長(zhǎng) 存留時(shí)間，但不會(huì)在體內(nèi)長(zhǎng)久滯留或蓄積；④具有較高的單線態(tài)氧產(chǎn)量及較長(zhǎng)壽命；⑤在 光療窗口（600~900nm)有強(qiáng)吸收，以利于治療時(shí)采用對(duì)人體組織穿透較深的光源；⑥在 生理pH值可溶解。光敏劑根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和組成可分為卟啉類、葉綠素類、染料類、中草藥 等；按發(fā)展的時(shí)間及性質(zhì)可分為第1、2、3代光敏劑。第1代光敏劑出現(xiàn)于20世紀(jì)70年代和 80年代初，以血卟啉衍生物（HpD)為主，多為復(fù)雜的卟啉混合物，組成不定，結(jié)構(gòu)有爭(zhēng)議， 對(duì)紅光的吸收較差且組織穿透能力差，給藥至光照的時(shí)間間隔長(zhǎng)，排泄緩慢，用藥后避光時(shí) 間長(zhǎng)。由于第1代光敏劑的以上不足，自20世紀(jì)80年代末開始了第2代光敏劑的研究。 最早開展的是對(duì)卟啉衍生物的結(jié)構(gòu)改進(jìn)及單體成分分離等，如苯并卟啉衍生物（Bro)，血卟 啉單甲醚（HMME)等。其他研究較多的是一氫卟吩類、酞菁類、葉綠素a降解產(chǎn)物衍生物等。 其中酞菁類是卟啉類的配合物，它是由4個(gè)吡咯單元通過4個(gè)N原子連接起來，形成一個(gè)大 的共軛體系。酞菁大環(huán)可以絡(luò)合金屬元素，也可以被各種取代基取代。酞菁類光敏劑的吸 收波長(zhǎng)在600~800nm，具有純度較高，光熱穩(wěn)定性和生理活性較好，紅光區(qū)吸收較強(qiáng)，兩親 性（疏水性和親水性）較好，暗毒性低，對(duì)腫瘤的選擇性好，摩爾消光系數(shù)較高等優(yōu)點(diǎn)。與 第1代光敏劑相比，第2代光敏劑組分單一，分子結(jié)構(gòu)明確，具有更高的單線態(tài)氧量子產(chǎn)率， 副作用較小，體內(nèi)排泄快。近年來發(fā)展起來的第3代光敏劑研究除了致力于進(jìn)一步提高療 效和減少副作用，還把目光投向了光敏劑在診斷、劑量監(jiān)測(cè)、療效評(píng)估等方面的應(yīng)用。在提 高療效、減少副作用的方面，主要策略是通過在第2代光敏劑的基礎(chǔ)上交聯(lián)上某些特殊的 化學(xué)物質(zhì)，通過提高靶組織的選擇性或賦于光敏劑新的功效實(shí)現(xiàn)協(xié)同治療的作用。
[0005] α- (8-喹啉氧基）單取代酞菁鋅是一種金屬酞菁類配合物，系將酞菁和喹啉兩種 結(jié)構(gòu)融合在一起，使其同時(shí)具有金屬酞菁和喹啉的結(jié)構(gòu)特性。該配合物具有結(jié)構(gòu)確定、易于 分離等特點(diǎn)。其吸收波長(zhǎng)在670nm左右，熒光量子產(chǎn)率較高，氧化穩(wěn)定性高，可制成穩(wěn)定的 水溶液使用。前期藥效學(xué)研究已證實(shí)具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供一種α-(8-喹啉氧基）單取代酞菁鋅治療銀屑病的用途，適用銀屑病 細(xì)胞、動(dòng)物模型和各種類型銀屑病患者的治療。能較好的抑制HaCaT細(xì)胞增殖，抑制己烯雌 酚誘導(dǎo)的小鼠陰道上皮細(xì)胞過度增殖，對(duì)普萘洛爾誘導(dǎo)豚鼠銀屑病樣病變有較好的治療效 果。
【具體實(shí)施方式】
[0007] 1、α-(8-喹啉氧基）單取代酞菁鋅對(duì)HaCaT細(xì)胞存活率的影響。
[0008] HaCaT細(xì)胞株是正常突變的永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞株，是目前研究銀屑病應(yīng)用最 廣泛的細(xì)胞模型之一。與原代培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞相比，HaCaT細(xì)胞的生物學(xué)特性類似，但 操作更為簡(jiǎn)單。
[0009] HaCaT細(xì)胞以含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液予37°C，5%C02培養(yǎng)箱中常規(guī) 培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用0.25%胰蛋白酶（含EDTA)消化后，調(diào)整細(xì)胞密度為2X105 個(gè)/mL接種于96孔板中，每孔100μL，培養(yǎng)24h后給予a- (8-喹啉氧基）單取代酞菁鋅 0. 001、0. 01、0. 1、1、10μg/mL每濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，另設(shè)空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組。給藥后繼 續(xù)孵育4h，采用670nm光動(dòng)力治療儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行照光。光照條件為：輸出功率1500mW，光斑 直徑8cm，照射時(shí)間180s。照光結(jié)束后將96孔板重新放回C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h。棄去 培養(yǎng)液，每孔加入200μLMTT溶液（0. 5mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后每孔加入二甲亞砜200μL， 酶標(biāo)儀545nm測(cè)量各孔的吸光度值（參比波長(zhǎng)450nm)。平行測(cè)定3次取平均值。計(jì)算增殖 抑制率，Bliss法計(jì)算IC50。