一種組合物及其在抗腫瘤藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 癌癥是對人類生命健康危害最大的疾病之一，每年都有大量的人死于癌癥。抗癌 藥物的研發(fā)一直是藥學研究的熱點。抗腫瘤藥物中有74%是天然產(chǎn)物或其衍生物，如紫杉 醇及其衍生物就是目前臨床上應用效果比較好的抗腫瘤藥物。因此，從天然產(chǎn)物中尋找化 合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最有重要 價值。
[0003] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al.，2011. Artalbic acid, a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters, 52(2011)4543 - 4545)的化合物， 我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化 合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗腫瘤活性進行了評價，其具有抗腫瘤活 性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為45%和55%。
[0005]
[0006] 藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗腫瘤作用。
[0007] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0008] 實施例1化合物Artalbic acid的制備
[0009] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的 文南犬(Antonella Maggio et al. , 2011. Artalbic acid, a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba (Asteraceae) from Sicily. Tetrahedron Letters, 52(2011)4543 - 4545)的方法。
[0010]
[0011] 實施例2Artalbic acid的O-溴乙基衍生物（II)的合成
[0012] 將化合物I (266mg，1.0 Ommol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.0 Ommol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0 攝氏度攪拌16h。16h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相 溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮 =100:1.0, v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（272mg， 73% ) 〇
[0013] 1H NMR (500MHz，DMS0-d6) δ 11. 41 (s，1H)，6. 06 (s，1H)，5. 76 (s，1H)，4. 99 (s，1H)，4 .71 (s, 1H), 4. 56 (s, 1H), 3. 86 (s, 2H), 3. 54 (s, 2H), 2. 65 (s, 1H), 2. 43 (s, 2H), 2. 33 (s, 2H), 2 .10 (s, 1H), I. 64 (s, 3H), I. 54 (s, 1H), I. 44 (s, 2H), 0. 95 (s, 3H).
[0014] 13C NMR (125MHz，DMS0-d6) δ 201. 95 (s)，175. 93 (s)，149. 13 (s)，148. 15 (s)，117. 0 5 (s)，109. 43 (s)，81. 86 (s)，70. 27 (s)，57. 68 (s)，41. 26 (s)，39. 07 (s)，38. 86 (s)，35. 69 (s) ，33. 36 (s)，30. 72 (s)，20. 44 (s)，18. 42 (s).
[0015] HRMS (ESI)m/z[M+H]+calcd for C17H26BrO4:373. 1014 ；found 373. 1017.
[0017] 實施例3Artalbic acid的0-(哌啶基）乙基衍生物（III)的合成
[0018] 將化合物II (187mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和哌啶（852mg，lOmmol)，混合物加熱回流 10h。 反應結束后將反應液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0.5, v/v)，收集棕色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物ΠΙ的棕色粉末（118. 76mg，63% )。
[0019] 1H MMR(500MHz，DMS0-d6) δ 13. 93(s，1H), δ 6. 13(s，1H)，5. 83(s，1H)，4. 74(s， 1H), 4. 64 (s, 1H), 3. 97 (s, 1H), 3. 56 (s, 2H), 2. 71 (s, 1H), 2. 61 (s, 2H), 2. 51 (d, J = 4. 4Hz ,4H), 2. 46 (s, 4H), 2. 16 (s, 1H), I. 69 (s, 3H), I. 55 (d, J = 13. 5Hz, 6H), I. 44 (d, J = 12. 0Hz, 3H), I. 03 (s, 3H).
[0020] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 201. 95 (s)，175. 95 (s)，149. 17 (s)，148. 18 (s)，117. I 0 (s)，109. 45 (s)，81. 87 (s)，67. 09 (s)，57. 73 (s)，54. 60 (d，J = 12. 4Hz)，41. 31 (s)，39. 09 ( s)，38. 87 (s)，35. 72 (s)，30. 78 (s)，24. 60 (s)，23. 47 (s)，20. 46 (s)，18. 45 (s) ·
[0021] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C22H36NO4:378. 2644 ;found:378. 2639。
[0023] 實施例4Artalbic acid的0_(嗎啉基）乙基衍生物（IV)的合成
[0024] 將化合物II (187mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (345mg，2. 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0. 5mmol)和嗎啉（1742mg，20mmol)，混合物加熱回流 6h。 反應結束后將反應液倒入30mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水 和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物 粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:0.5, v/v)，收集棕色 集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物IV的棕色粉末（108. Omg，57% )。
[0025] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) δ 16. 75(s, 1H), δ 6. I 3 (dt, J = 4. 0, I. 9Hz, 1H) , 5. 83 (dt, J = 3. 9, 1. 8Hz, I Η) , 4. 79 - 4. 68 (m, 2Η) , 4. 68 -4. 59 (m, 1Η), 3. 58 (dt, J = 15. 2, 8. 1Hz, 6Η), 2. 79 - 2. 38 (m, 11Η), 2. 03 (dd, J = 24. 7, 17. 8Hz, 1Η), 1. 70 (t, J = 2. 0Hz, 3Η), 1. 50 (ddd, J = 20. 4, 17. 8, 4. 5Hz, 3Η), 1. 02 (s, 3Η).
[0026] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) δ 201. 95 (s), 175. 95 (s), 149. 18 (s), 148. 19 (s), 117. 1 2 (s)，109. 45 (s)，81. 88 (s)，67. 10 (s)，66. 88 (s)，57. 72 (s)，54. 57 (s)，53. 02 (s)，41. 31 (s) ，39. 09 (s)，38. 90 (s)，35. 72 (s)，30. 78 (s)，20. 47 (s)，18. 46 (s) ·
[0027] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C21H34NO5:380. 2437 ;found:380. 2431。
[0029] 實施例5體外抗腫瘤活性篩選
[0030] 篩選細胞株為H印G2 (人肝癌細胞），PANC-I (人胰腺癌），MCF-7 (人乳腺癌細胞）， SW620 (人結腸癌細胞），A549 (人肺癌細胞），HGC-27 (人胃癌細胞），L02 (人正常肝實質(zhì)細 胞）。
[0031] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的45mg化合物III的粉末和研磨之后過 200目網(wǎng)的55mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組 合物，使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0032] 實驗方法：
[0033] 取對數(shù)生長期狀態(tài)良好的細胞，胰蛋白酶消化，制成5X IO4細胞/mL的懸液。將 細胞懸液移入96孔培養(yǎng)板，每孔lOOyL，置37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)24h。
[0034] 將受試化合物III、化合物IV和組合物分別用DMSO配制成一定濃度的母液，再用 RPMI1640培養(yǎng)基將衍生物母液稀釋成不同作用濃度的稀釋液。移去舊培養(yǎng)基，加入不同濃 度的含藥培養(yǎng)基，每孔100 yL。另設空白對照組。藥物作用48h后，吸棄含藥培養(yǎng)基，于每 孔加入無血清、無酚紅1640培養(yǎng)基100 μ L，再加入MTT溶液（5mg/mL) 10 μ L，繼續(xù)溫育4h。
[0035] 吸去各孔內(nèi)上清液，每孔加入DMSO 150 μ L，暗處振蕩lOmin，使結晶物充分溶解， 酶標儀測定490nm處各孔的光吸收值（0D值），計算細胞的增殖抑制率：抑制率（％ )= (1-用藥組平均OD值/空白對照組平均OD值）X 100%。應用SPSS16. 0軟件進行數(shù)據(jù)處 理并計算癌細胞增殖的半數(shù)抑制濃度（IC5。)，結果見表1。
[0036] 表1化合物或組合物對7種癌細胞的體外增殖抑制作用
[0037]
[0038] 如表1結果所示，組合物對不同的腫瘤細胞均具有一定的增殖抑制作用；而對于 正常的肝實質(zhì)細胞L02的IC 5。非常大（MO μΜ)、沒有增殖抑制作用，說明安全性非常高?；?合物III和化合物IV對于所有腫瘤細胞沒有增殖抑制作用。組合物表現(xiàn)出較好的抗癌活 性，具有開發(fā)抗癌藥物的潛力。
[0039] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0040] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0041] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0042] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100 粒。
【主權項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為45%和55%，2. 如權利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為：將化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為45 %和55 %充分混合。3. 如權利要求1所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應用。4. 如權利要求3所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應用，其特征為：所述腫瘤為消化系 統(tǒng)腫瘤。5. 如權利要求4所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應用，其特征為：所述消化系統(tǒng)腫瘤 為肝癌、胰腺癌、結腸癌或者胃癌。6. 如權利要求3所述的組合物在抗腫瘤藥物中的應用，其特征為：所述腫瘤為乳腺癌 或者肺癌。
【專利摘要】一種組合物及其在抗腫瘤藥物中的應用，本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及一種組合物及其在抗腫瘤藥物中的應用。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有抗腫瘤的作用，具有開發(fā)抗腫瘤藥物的價值。
【IPC分類】C07D295/088, A61K31/5375, A61P35/00, A61K31/4453
【公開號】CN105326845
【申請?zhí)枴緾N201510746933
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年11月5日