一種歐洲越橘提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物提取物，具體是一種歐洲越橘提取物及制備這種提取物的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] BV :樹脂柱體積
[0003] DVB :二乙烯苯
[0004] 總花色苷：是15種花色苷的混合物，它們分別是：
[0005] 1.氯化飛燕草素-3-0-半乳糖苷，英文名稱delphinidin-3-O-galactoside chloride
[0006] 2.氯化飛燕草素-3-0-葡萄糖苷，英文名稱delphinidin-3-〇-glucoside chloride
[0007] 3.氯化矢車菊素-3_〇-半乳糖苷，英文名稱cyanidin_3-〇-galactodise chloride
[0008] 4.氯化飛燕草素-3-0-阿拉伯糖苷，英文名稱delphinidin_3-〇-arabinoside chloride
[0009] 5.氯化矢車菊素-3-0-葡萄糖苷，英文名稱 cyanidin_3-〇-glucoside chloride
[0010] 6.氯化矮牽牛素-3-0-半乳糖苷，英文名稱petunidin-3-〇-galactoside chloride
[0011] 7.氯化矢車菊素-3-0-阿拉伯糖苷，英文名稱cyanidin-3-〇-arabinoside chloride
[0012] 8.氯化矮牽牛素-3_〇-葡萄糖苷，英文名稱 petunidin_3-〇-glucoside chloride
[0013] 9.氯化巧藥素-3_〇-半乳糖苷，英文名稱 peonidin_3-〇-galactoside chloride
[0014] 10.氯化矮牽牛素-3-0-阿拉伯糖苷，英文名稱petunidin_3-〇-arabinoside chloride
[0015] 11.氯化巧藥素-3-0-葡萄糖苷，英文名稱 peonidin_3-〇-glucoside chloride
[0016] 12.氛化錦奏素-3_〇-半乳糖音，英文名稱 malvidin_3-〇-galacoside chloride
[0017] 13.氯化巧藥素-3-0-阿拉伯糖苷，英文名稱peonidin_3-〇-arabinoside chloride
[0018] 14.氯化錦葵素-3-0-葡萄糖苷，英文名稱 malvidin_3-〇-glucoside chloride
[0019] 15.氯化錦葵素-3-0-阿拉伯糖苷，英文名稱 malvidin-3-〇_arabinoside Jiloride
[0020] AB-8和D101天津南開和成科技有限公司，
[0021] XAD-7HP陶氏化學(xué)公司，
[0022] HPD100滄州寶恩吸附材料科技有限公司
[0023] 上柱液：以歐洲越橘果或市售總花色苷含量36%歐洲越橘提取物為原料，制備含 總花色苷濃度為1. 5-5. 5mg/ml的酸性水溶液，該酸性水溶液在此定義為上柱液。
[0024] 歐洲越橘提取物（Bilberry Extract)是以成熟的歐洲越橘（Vaccinium myrtillus)漿果為原料，經(jīng)提取、純化得到的植物提取物，已載入歐洲藥典（EP)植物藥及 制法專論部分（Monographs on Herbal Drugs and Herbal drug preparations)，并作為膳食 補(bǔ)充劑（Dietary Supplments)載入美國(guó)藥典（USP)。因其所含的花色苷類成分具有抗氧化、 清除自由基等生理活性，歐洲越橘提取物主要應(yīng)用于功能性食品及醫(yī)藥工業(yè)中。EP及USP 中均對(duì)歐洲越橘提取物中總花色苷含量做出了規(guī)定。EP中規(guī)定，以高效液相色譜法（HPLC) 檢測(cè)，以氯代矢車菊素-3-0-葡萄糖苷計(jì)，總花色苷含量在32. 4 %至39. 6 %范圍內(nèi)。USP規(guī) 定總花色苷含量不低于36%。
[0025] 花色苷分子由苷元（即花色素）及糖配基兩部分組成?；ㄉ厥蔷哂悬S酮類化合 物C6-C3_C6結(jié)構(gòu)的，2-苯基苯并吡喃的多羥基和甲基衍生物，以0-糖苷鍵與糖配基連接。 由于黃烊鹽陽(yáng)離子缺乏電子，游離的花色素很不穩(wěn)定。在歐洲越橘提取物制備過程中，應(yīng)盡 力避免糖配基的丟失，從而影響其穩(wěn)定性。EP及USP均規(guī)定以氯代矢車菊素計(jì)總花色素含 量低于1% (HPLC)。
[0026] 現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道中，存在于歐洲越橘中的花色苷苷元主要有五種，與3種糖配基形 成15種花色苷。不同花色苷生理活性上存在差異。各花色苷的比例是歐洲越橘提取物生 理活性的影響因素之一。EP中給出了這15種花色苷的HPLC指紋圖譜，并作出了相關(guān)規(guī)定。
[0027] 目前，市售歐洲越橘提取物規(guī)格多為總花色苷含量36% (HPLC)，即符合USP規(guī)定， 未見指紋圖譜符合歐洲藥典規(guī)定，且總花色苷含量更高的產(chǎn)品報(bào)道?，F(xiàn)有工業(yè)化制備歐洲 越橘提取物工藝的基本流程是：以酸化醇水溶液自歐洲越橘果中提取總花色苷，經(jīng)回收溶 劑、濃縮的提取液通入大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附。吸附結(jié)束后，水洗，以適當(dāng)解吸劑對(duì)吸附于 樹脂上的花色苷進(jìn)行洗脫。洗脫液回收溶劑，濃縮，干燥，得到產(chǎn)品。其中大孔吸附樹脂純 化步驟決定產(chǎn)品中總花色苷含量。
[0028] 目前找到的和本發(fā)明的制備方法最為接近的現(xiàn)有技術(shù)為CN102240316B，其中針對(duì) 花色苷的熱敏性，使用納濾膜濃縮方法避免了回收溶劑、濃縮過程中加熱造成的花色苷分 解。所制備的越橘提取物中花色苷含量未高于40%。該方法采用納膜濃縮最大的缺陷就是 納膜非常容易堵塞，需要頻繁的清洗更換納膜，不適于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
[0029] 另一篇對(duì)比文獻(xiàn)CN103467545A公開了一種從歐洲越橘中提取花色苷的方法。 歐洲越橘以酸性乙醇水溶液提取，提取液濃縮后，通入D101大孔吸附樹脂柱，水洗，以 40-60%乙醇水溶液洗脫花色苷。洗脫液濃縮、干燥后所得粗提物。截止到粗提物這一步基 本與CN102240316B的技術(shù)方案相似，得到粗提物后又以丙酮進(jìn)行亞臨界萃取。這篇對(duì)比文 件中盡管總花色苷含量約為70%，但是所得成品收率僅為0. 5%，并且亞臨界萃取需在密 閉、無氧、低壓的壓力容器內(nèi)進(jìn)行，對(duì)設(shè)備要求高，生產(chǎn)成本高，工藝復(fù)雜。此外，此發(fā)明并未 明確描述總花色苷檢測(cè)方法、含量測(cè)定基準(zhǔn)物、以及指紋圖譜，無法獲知其產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控的 所有條件。
[0030] 近年來由于花色苷具有增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能，預(yù)防心血管疾病，預(yù)防癌癥，抑制腫瘤 細(xì)胞生長(zhǎng)，預(yù)防關(guān)節(jié)炎、腫脹等炎癥，緩解過敏癥，增強(qiáng)動(dòng)脈、靜脈及毛細(xì)血管彈性等眾多生 理功能而備受關(guān)注。但是卻缺少為諸多研究提供1?濃度的花色昔的物質(zhì)基礎(chǔ)，得到1?濃度 總花色苷的方法尚且如此困難，從中分離高濃度的單體更是難上加難，因此亟需一種高濃 度的總花色苷作為藥理、臨床、以及進(jìn)一步分離提純單體作為研究的物質(zhì)基礎(chǔ)；當(dāng)然要想得 到這樣高濃度花色苷首先需要建立一種簡(jiǎn)單、高效的花色苷提取物制備方法、檢測(cè)方法作 為技術(shù)支持。當(dāng)然這些研究開發(fā)對(duì)歐洲越橘提取物進(jìn)一步的成分開發(fā)、利用也具有十分重 要社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0031] 本申請(qǐng)發(fā)明人通過創(chuàng)造性的勞動(dòng)發(fā)現(xiàn)，在用大孔吸附樹脂提取歐洲越橘物的現(xiàn)有 方法中，大孔吸附樹脂內(nèi)部結(jié)構(gòu)是制備高純度花色苷方法中關(guān)鍵中的關(guān)鍵步驟，換句話說， 只要選對(duì)大孔吸附樹脂的結(jié)構(gòu)，并控制好大孔吸附樹脂的投料比就攻克了該方法的最核心 部分；其次關(guān)鍵步驟還包括解析劑所用酸醇的比例。該方法不僅不需要像CN103467545A那 樣對(duì)上柱液先濃縮，更不需要對(duì)得到的提取物進(jìn)行像CN102240316B那樣的濃縮處理，就能 夠達(dá)到總花色苷的含量高達(dá)95%，且收率為大于60%。本發(fā)明另一個(gè)顯著地有益效果體現(xiàn) 在沒有放大效應(yīng)，適于大工業(yè)生產(chǎn)，是目前工藝步驟最為簡(jiǎn)便、成本最為低廉的方法。更具 體的本發(fā)明體現(xiàn)在以下兩個(gè)方面：
[0032] 首先，本發(fā)明提供了一種總花色苷含量55% -95%的歐洲越橘提取物，并提供了 該提取物的鑒定以及監(jiān)控方法：歐洲越橘提取物為紫黑色，具有越橘特殊氣味的均勻無定 形粉末。以歐洲藥典規(guī)定的高效液相色譜方法檢測(cè)，以干物計(jì)，總花色苷含量在55%至 95%范圍內(nèi)，總花色素含量不高于1%。HPLC指紋圖譜符合歐洲藥典要求。
[0033] 其次，本發(fā)明提供了一種制備總花色苷含量在55% -95%的歐洲越橘提取物的方 法，的目的通過下述的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0034] 制備方法是以歐洲越橘果或市售總花色苷含量36%歐洲越橘提取物為原料，制備 含有越橘總花色苷的酸性水溶液，以大孔吸附樹脂吸附其中花色苷，酸水洗后，酸性乙醇水 溶液解吸花色苷，解吸液濃縮、噴霧干燥，即得產(chǎn)品。制備過程中總花色苷保留率，即收率 聞?dòng)?0 %。
[0035] 本發(fā)明提供的歐洲越橘提取物制備方法包括的步驟：
[0036] 1)以歐洲越橘果或市售總花色苷含量36%歐洲越橘提取物為原料，制備含總花 色苷濃度為1. 5-5. 5mg/ml的酸性水溶液，該酸性水溶液又稱為上柱液。
[0037] 2)上柱液通入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹脂柱，進(jìn)行吸附。吸附結(jié)束后，以酸性水洗至 流出液澄清，再以乙醇、或者甲醇或者丙酮酸性水溶液為解吸劑，進(jìn)行解吸，分部接受洗脫 液合并其中總花色苷含量為55% -95%的部分，濃縮，噴霧干燥，即得成品。
[0038] 上述技術(shù)方案中：
[0039] 步驟1)中如以歐洲越橘果為原料，以如下步驟制備酸性水溶液：
[0040] 以組織勻漿機(jī)將歐洲越橘果破碎為果漿。以2-5倍果漿質(zhì)量的、體積分?jǐn)?shù)為 30-80%的、并以鹽酸調(diào)pH值2-3的乙醇水溶液，于40-60°C加熱回流提取2-3次，過濾，濾 液合并，回收乙醇，濃縮。優(yōu)選的提取溶劑體積分?jǐn)?shù)為60%，并以鹽酸調(diào)pH值為2的乙醇水 溶液，用量為果漿質(zhì)量的3倍，于50°C加熱回流提取2次。
[0041] 步驟1)中如以市售總花色苷含量36%的歐洲越橘提取物為原料，稱取提取物，加 水?dāng)嚢枞芙?，配制提取物濃度?-15mg/ml的溶液，并以鹽酸調(diào)pH值至酸性，優(yōu)選pH在2-5 范圍內(nèi)。
[0042] 步驟2)中所用大孔吸附樹脂為以聚苯乙烯為主要骨架自制大孔吸附樹脂。
[0043] 自制大孔吸附樹脂可由以下步驟制備：
[0044] a)將聚乙烯醇和氯化鈉配制為水溶液，作為懸浮聚合水相；
[0045] b)將質(zhì)量純度為55-80 %的二乙烯苯（DVB)與酯類單體依投料比混合，加入致孔 劑、引發(fā)劑，混合均勻后，為懸浮聚合油相；
[0046] c)將a)制得水相加熱至30_50°C，將b)制得的油相加入上述水相中，在攪拌下 65-75°C下反應(yīng)4-6小時(shí)，升溫至80-85°C繼續(xù)反應(yīng)2-3小時(shí)，經(jīng)過濾，依次以熱水、乙醇洗 滌，干燥，即得成品。
[0047] 在自制大孔吸附樹脂的技術(shù)方案中：
[0048] 步騾a)中水相中聚乙烯醇質(zhì)量濃度為0. 5-1. 5%，氯化鈉水溶液質(zhì)量濃度為5%。
[0049] 步驟b)中酯類單體為二甲基丙烯酸乙二醇酯，或者丙烯酸甲酯，或者甲基丙烯酸 甲酯中的一種或幾種；
[0050] DVB與酯類單體投料比為19 : 1-7 : 3,優(yōu)選的為9-4 : 1 ;
[0051] 致孔劑為甲苯、或200#汽油、或環(huán)己烷、或甲基環(huán)己烷中的一種或幾種，優(yōu)選的為 甲苯、200#汽油混合物，兩者質(zhì)量比為4-1 : 1;致孔劑加入量為DVB與酯類單體質(zhì)量總和 的 100-200% ;
[0052] 引發(fā)劑為偶氮二異丁腈或過氧化苯甲酰，加入量為DVB及酯類單體質(zhì)量和的 1-2%。
[0053] 步驟c)中水相與油相的體積比為2. 5-4 : 1。
[0054] 步驟2)中大孔吸附樹脂柱柱徑比為3-10 : 1。
[0055] 步驟