一種蒲公英提取物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種蒲公英提取物的制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 蒲公英為菊科植物蒲公英Taraxacum mongo 1 icum Hand. -Mazz.、堿地蒲公英 Taraxacum borealisinenseKitm.或同屬數(shù)種植物的干燥全草，全國各地均有分布。春至 秋季花初開時采挖，除去雜質(zhì)，洗凈，曬干，鮮用或生用。蒲公英是臨床常用中藥，《本草備 要》謂之"專治癰腫、療毒，亦為通淋妙品"，古方記載蒲公英為"解熱涼血之要藥"、"至賤而 有大功"。蒲公英味苦、甘，性寒，歸肝、胃經(jīng)。有清熱解毒，消腫散結(jié)，利尿通淋之功效，用于 乳癰、肺癰、腸癰、痄腮、瘰病，疔瘡腫毒，目赤，咽痛，濕熱黃疽，熱淋澀痛，蛇蟲咬傷等。蒲公 英的主要有效成分為黃酮類、酚酸類、香豆素類、酯類、維生素及礦物質(zhì)等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研 究表明，蒲公英對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌及卡他球菌具有較強的抑制作用，還有利 膽、保肝、抗內(nèi)毒素及利尿等作用。
[0003] 中藥的作用特點之一就是多成分起作用，蒲公英中多種成分如黃酮、酚酸等皆有 明顯的藥效作用。目前，針對蒲公英藥效成分的分離、純化主要以單一成分做指標(biāo)，例如中 國專利CN103070899A提供了一種蒲公英總黃酮的分離純化方法，具體包括甲醇回流提取、 濃縮、調(diào)節(jié)pH、大孔樹脂柱分離、硅膠層析柱分離等步驟，制備了含量在96%以上的總黃 酮；但該方法使用85% -100%甲醇提取，再用甲醇、丙酮及其混合溶液作為洗脫劑進(jìn)行分 離、純化，容易造成提取物中毒性溶劑殘留，且該方法同時使用了大孔樹脂柱和硅膠層析柱 進(jìn)行分離、純化，操作步驟繁多，不適合大生產(chǎn)。中國專利CN103494858A公開了一種蒲公英 總黃酮的大孔樹脂富集方法，包括石油醚脫脂、乙醇回流提取、濃縮、調(diào)節(jié)pH、大孔樹脂柱分 離純化等步驟，獲得了含量在60%以上的總黃酮，但該方法提取前用石油醚脫脂，易造成有 機溶劑的殘留，不適于大生產(chǎn)。李喜鳳等對蒲公英中有機酸類成分的提取工藝進(jìn)行了研究， 結(jié)果表明，蒲公英中有機酸最佳提取條件為：80%的乙醇，料液比為1:40,水浴回流1. 5小 時，各有機酸的提取率均較高；但該方法并沒有提供進(jìn)一步分離純化有機酸的方法，且該方 法僅以有機酸作為評價指標(biāo)，并沒有涉及蒲公英總類成分的提取、分離（李喜鳳，郝哲，邱 天寶，等.蒲公英中有機酸類成分的提取工藝研究[J].中成藥，2011，33(2) :262-265.)。
[0004] 以上都是關(guān)于蒲公英中黃酮類和酚酸類成分的提取、分離，但有關(guān)蒲公英總有效 成分提取物的提取、純化研究卻甚少。雖然總黃酮和酚酸是蒲公英的藥效成分之一，但僅以 總黃酮或總酚酸作為指標(biāo)，并不能全面體現(xiàn)蒲公英提取物藥效作用。
[0005] 鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，有必要發(fā)明一種新的制備蒲公英提取物的方法，使之既能 簡化操作過程，在最大程度上少用或不用有害溶劑，適合工業(yè)化大生產(chǎn)，又能提高提取物中 多種藥效成分的含量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有提取、純化工藝的不足，提供一種簡單、有 效的制備蒲公英提取物的方法。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的。
[0008] 本發(fā)明蒲公英提取物的制備方法包括：水提醇沉、過濾濃縮、調(diào)節(jié)pH值、大孔樹脂 純化和濃縮、干燥等步驟。
[0009] 進(jìn)一步，本發(fā)明所涉及的一種蒲公英提取物的制備方法包括以下步驟：
[0010] 1)取蒲公英藥材，水提取，濾過，合并濾液，減壓濃縮，得濃縮液；
[0011] 2)步驟1)濃縮液加乙醇至含醇量為40%-70%，靜置、過濾、減壓濃縮、回收乙醇， 得濃縮液；
[0012] 3)步驟2)濃縮液加水稀釋至相當(dāng)于1-3倍藥材重量，調(diào)節(jié)pH為2-6,加于預(yù) 處理好的大孔樹脂柱上進(jìn)行吸附，先以l_3BV/h的流速用1-3BV pH = 3-7的稀鹽酸溶 液洗脫，再以2-3BV/h的流速用1-3BV純水洗脫，棄去洗脫液，然后以l-4BV/h的流速用 1-38￥40%-60%乙醇洗脫，最后以2-48￥/11的流速用1-38￥60%-80%的乙醇洗脫；
[0013] 4)合并步驟3)醇洗脫液，濃縮，干燥，得蒲公英提取物。
[0014] 優(yōu)選地，步驟1)所述水提取加水量為8-12倍藥材重量，提取次數(shù)為3次，每次1 小時。
[0015] 優(yōu)選地，步驟2)所述濃縮液的乙醇含量為70 %。
[0016] 優(yōu)選地，步驟3)所述的大孔樹脂為HPD-826、HPD-750、HPD-100、D-101和AB-8中 的一種，最優(yōu)為HPD-750。
[0017] 優(yōu)選地，步驟3)所述濃縮液加水稀釋至相當(dāng)于3倍藥材重量并調(diào)節(jié)pH為3-5,除 雜用稀鹽酸溶液pH為3-5,洗脫用乙醇溶液的濃度分別為40%和70%。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明蒲公英提取物制備方法具有以下顯著的進(jìn)步：
[0019] 1、操作簡單，條件可控，具良好的可重復(fù)性，所用大孔樹脂可重復(fù)利用，制備成本 低且不污染環(huán)境，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0020] 2、本發(fā)明使用水提取，藥效成分提取率高，其中總黃酮提取率高于醇提法；所用提 取及洗脫溶劑為水或乙醇，廉價易得，所得提取物無有害溶劑殘留，藥物安全性高；
[0021] 3、與現(xiàn)有蒲公英有效成分提取純化方法相比較，用本發(fā)明方法制備的蒲公英提取 物藥效成分更全，不僅含有黃酮類、酚酸類成分，也保留了香豆素類、酯類等成分，可最大程 度保證蒲公英藥材的原有功效，且降低了服用量，利于制劑及提高了患者用藥的順應(yīng)性。
[0022] 4、與現(xiàn)有的蒲公英有效成分制備方法相比較，用本發(fā)明方法制備的蒲公英提取物 中總黃酮含量由藥材中2%提高到50%以上，咖啡酸含量由藥材中0.02%提高到0.8%以 上。
【具體實施方式】
[0023] 以下通過蒲公英有效成分提取物抗炎作用和抗病毒試驗例及蒲公英提取物制備 的【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根 據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本 發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0024] 實施例1蒲公英提取物抗炎作用試驗
[0025] 1、試驗?zāi)康?br>[0026] 采用二甲苯所致小鼠耳廓腫脹試驗?zāi)Ｐ脱芯科压⑻崛∥锟寡鬃饔?br>[0027] 2、試驗材料
[0028] 2. 1、受試藥品
[0029] 蒲公英提取物，批號：20110615 (以本發(fā)明最佳實施例6所得的蒲公英提取物），棕 黑色粉末，氣香味苦、質(zhì)地干脆，難溶于水和乙醇。
[0030] 2. 2、陽性對照藥
[0031] 999皮炎平（復(fù)方醋酸地塞米松乳膏），華潤三九醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品；
[0032] 適應(yīng)癥：用于局限性瘙癢癥、神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、脂溢性皮炎以及慢性濕 疹；
[0033] 批號：國藥準(zhǔn)字 H44024170,生產(chǎn)日期：2011. 11. 13,有效期：2013. 09. 01 ;
[0034] 性狀：白色乳膏，有樟腦的特異芳香；
[0035] 規(guī)格：20g/15 毫克；
[0036] 用法用量：外用，一日1~2次，取少量涂于患處，并輕揉片刻。
[0037] 2. 3、劑量設(shè)計
[0038] 2. 3、復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（999皮炎平）
[0039] 按照說明書提供的用法用量，本品臨床外用，一日1~2次，取少量涂于患處，輕揉 片刻。本試驗采用每日在小鼠右耳殼正反兩面均勻涂抹（每鼠每日用量為0.1ml)。
[0040] 2. 3. 3、蒲公英提取物
[0041] 根據(jù)使用劑量預(yù)試驗結(jié)果，采用55mg/kg體重、45mg/kg體重、35mg/kg體重三種劑 量給藥，一半灌胃給藥，一半涂抹耳部給藥，灌胃給藥部分三個劑量依次取55mg/kg體重、 45mg/kg體重、35mg/kg提取物溶于0. 5%羧甲基纖維素中配成20ml給藥液；涂抹給藥部分 三個劑量依次取27. 5mg、22. 5mg、17. 5mg提取物溶于3%羧甲基纖維素中配成10ml給藥膏， 置冰箱4 °C冷藏備用。
[0042] 2. 4、動物
[0043] ICR小鼠（SPF/VAF級），體重20±2g，雌雄兼用，北京市維通利華有限責(zé)任公司提 供。試驗動物100只，動物許可證：SCXK (京）2009-0004。
[0044] 2. 5、試驗試劑
[0045] 二甲苯C6H4(CH3)2,分析純，含量不少于80. 0%，批號：20101104,中國人民解放 軍第九零六六工廠生產(chǎn)。
[0046] 2. 6、