芽孢桿菌生物被膜的處理方法
[0065] 將載有培養(yǎng)24h生物被膜的不銹鋼片用無菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除去 浮游菌和粘附不牢的菌，加入10mL所制備的酸性電解水在室溫下靜置15min，迅速將不銹 鋼片轉(zhuǎn)入10mL中和劑中作用10min，然后用無菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)漂洗不銹鋼片3次， 加入10mL無菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)，超聲處理15min(250W)，對菌懸液進行平板菌落計數(shù)， 平行試驗3次。超聲平板菌落計數(shù)法的檢測限為0. 541og CFU/cm2(即10CFU/不銹鋼片）， 用ND表示實驗結(jié)果低于檢測限。使用Microsoft Office Excel軟件和SPSS Statistics 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。
[0066] 實施例1。
[0067] 采用CE-7001型酸性氧化電位水發(fā)生器，以質(zhì)量濃度為0. 1 %的氯化鈉溶液作為 電解液，電解槽中電解l〇min，在陽極區(qū)得到pH 2. 73、ACC為79. 6mg/L，0RP為1179mV的 酸性電解水，然后取新制備的酸性電解水，分裝在l〇〇〇mL棕色的玻璃瓶中，塞緊瓶塞，放入 35 °C的培養(yǎng)箱中，儲存時間不超過9天。
[0068] 實施例2。
[0069] 采用CE-7001型酸性氧化電位水發(fā)生器，以質(zhì)量濃度為0. 1 %的氯化鈉溶液作為 電解液，電解槽中電解l〇min，在陽極區(qū)得到pH 2. 75、ACC為73. 7mg/L，0RP為1174mV的 酸性電解水，然后取新制備的酸性電解水，分裝在l〇〇〇mL棕色的玻璃瓶中，塞緊瓶塞，放入 35 °C的培養(yǎng)箱中，儲存時間不超過9天。
[0070] 實施例3。
[0071] 采用CE-7001型酸性氧化電位水發(fā)生器，以質(zhì)量濃度為0. 1 %的氯化鈉溶液作為 電解液，電解槽中電解lOmin，在陽極區(qū)得到pH 2· 78、ACC為71. 3mg/L，ORP為1170mV的 酸性電解水，然后取新制備的酸性電解水，分裝在l〇〇〇mL棕色的玻璃瓶中，塞緊瓶塞，放入 35 °C的培養(yǎng)箱中，儲存時間不超過9天。
[0072] 試驗例1 :
[0073] 將實施例1制備的酸性電解水（pH 2. 73、ACC為79. 6mg/L，0RP為1179mV)用去離 子水分別稀釋為初始濃度的80 %、60 %、40 %，得到不同ACC的酸性電解水，取100mL稀釋后 的酸性電解水，分別向其中加入40、80、100 μ L 1M的鹽酸溶液，使其與電解水原液的pH - 致。在此過程中，酸性電解水的0RP基本不變，最后得到ACC分別為51. 3、33. 6、18. 6mg/L 的酸性電解水a(chǎn)、b、c。利用ACC分別為51. 3、33. 6、18. 6mg/L的酸性電解水a(chǎn)、b、c殺滅蠟 樣芽孢桿菌生物被膜，步驟同2. 5,電解水作用時間為15min。
[0074] 試驗例2 :
[0075] 向100mL實施例1制備的酸性電解水（pH 2. 73、ACC為79. 6mg/L，0RP為1179mV) 分別加入350、375、400 μ L 1M的氫氧化鈉溶液，得到pH分別為3. 67、4. 76、5. 82的酸性電 解水d、e、f，在此過程中，酸性電解水的ACC和0RP變化較小。利用pH分別為3. 67、4. 76、 5. 82、6. 66的酸性電解水d、e、f殺滅蠟樣芽孢桿菌生物被膜，步驟同2. 5,電解水作用時間 為 15min〇
[0076] 試驗例3 :
[0077] 將3%溴水與p實施例1制備的酸性電解水（pH 2. 73、ACC為79. 6mg/L，0RP為 1179mV)分別以1 :9和9 :1的比例調(diào)配，得到不同0RP的酸性電解水。取100mL以1 :9調(diào) 配的電解水，向其中加入80 μ L次氯酸鈉，得到0RP為976mv的酸性電解水g。取100mL以 9 :1調(diào)配的電解水，向其中加入lmL次氯酸鈉和3mL 1M的氫氧化鈉，得到0RP為881mv的酸 性電解水h。利用0RP分別為976、881mv的酸性電解水g、h殺滅蠟樣芽孢桿菌生物被膜， 步驟同2. 5,電解水作用時間為15min。
[0078] 試驗結(jié)果及分析：
[0079] ( -）酸性電解水的貯存穩(wěn)定性對酸性電解水殺滅蠟樣芽孢桿菌生物被膜的影響
[0080] 盡管酸性電解水具有成本低、環(huán)境友好、安全等優(yōu)點，但其缺點是穩(wěn)定性不好。
[0081] 基于酸性電解水在貯存過程中主要理化性質(zhì)的變化，取新制備的酸性電解水，分 裝在lOOOmL透明和棕色的玻璃瓶中，塞緊瓶塞，分別放入20、35、50 °C的培養(yǎng)箱中貯存28d， 定時取電解水樣品，測定其pH、ACC及0RP。
[0082] 將載有培養(yǎng)24h生物被膜的不銹鋼片用無菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除 去浮游菌和粘附不牢的菌，加入10mL不同條件下貯存的酸性電解水于室溫下靜置作用 15min，迅速將不銹鋼片轉(zhuǎn)入10mL中和劑中作用10min，然后用無菌PBS(0. 05M，pH 7. 2)漂 洗不銹鋼片3次，加入10mL無菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)，超聲處理15min (250W)，對菌懸液進 行平板菌落計數(shù)，平行試驗3次。
[0083] 結(jié)果表明，酸性電解水的ACC和0RP隨貯存時間的延長而減小，而pH隨貯存時間 的延長而增大；并且在避光、35°C的密閉條件下貯存不超過9天的酸性電解水pH、ORP、ACC 變化很小。隨著貯存時間的延長，由于(：12的揮發(fā)和H0C1的分解導(dǎo)致ACC顯著降低，會大 大削弱了酸性電解水的滅蠟樣芽孢桿菌生物被膜的活性。
[0084] (二）酸性電解水對蠟樣芽孢桿菌生物被膜的殺滅效果
[0085] 將載有培養(yǎng)24h生物被膜的不銹鋼片用無菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除去 浮游菌和粘附不牢的菌，分別加入10mL實施例1和試驗例所制備的酸性電解水，在室溫下 分別靜置作用1、3、5、10、15、2〇11^11，迅速將不銹鋼片轉(zhuǎn)入1〇1^中和劑中作用1〇1^11，然后 用無菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗不銹鋼片3次，加入10mL無菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)，超聲 處理15min (250W)，對菌懸液進行平板菌落計數(shù)，平行試驗3次。超聲平板菌落計數(shù)法的 檢測限為0. 541og CFU/cm2 (即10CFU/不銹鋼片），用ND表示實驗結(jié)果低于檢測限。使用 Microsoft Office Excel軟件和SPSS Statistics軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。實施例1 至3的酸性電解水對蠟樣芽孢桿菌生物被膜的殺滅效果如表1所示。
[0086] 表1實施例1至3的酸性電解水對蠟樣芽孢桿菌生物被膜的殺滅效果
[0089] 由表1可知，本發(fā)明制備的酸性電解水對食源性致病菌生物被膜，特別是蠟樣芽 孢桿菌這一類抗性較強的被膜菌的生物被膜具有很強的殺滅效果。
[0090] (三）酸性電解水對蠟樣芽孢桿菌生物被膜的殺滅機理的研究
[0091] 1、對比酸性電解水和化學(xué)改性水對蠟樣芽孢桿菌生物被膜的殺滅效果
[0092] 將載有培養(yǎng)24h生物被膜的不銹鋼片用無菌PBS (0. 05M，pH 7. 2)漂洗3次，除去 浮游菌和粘附不牢的菌，分別加入10mL去離子水（空白）、實施例1的酸性電解水、0. 05% 次氯酸鈉仏0：為78.211^/1)、5%乙酸（?!12.68)、0.0041鹽酸（?!12.71)、0.0邡鹽酸 +0.05%次氯酸鈉（100mL 0.01M鹽酸中加入50 μ L次氯酸鈉）和10%乙酸+0.05%次氯酸 鈉（lOOmLlO%乙酸中加入50yL次氯酸鈉）在室溫下靜置作用15min，迅速將不銹鋼片轉(zhuǎn) 入10mL中和劑中作用1