P25和約500yg脂 質(zhì)A。
[0067] 但是，其它微克量的MUC-I脂肽和脂質(zhì)A也包括在本發(fā)明之內(nèi)。例如，BLP25脂 肽的量可足以提供多劑量的所述疫苗。因此，所述MUC-I核重復(fù)制劑可包含例如約50yg、 約 100yg、約 200yg、約 300yg、約 400yg、約 500yg、約 600yg、約 700yg、約 800yg、約 900yg、約 1，000yg、約 1，010yg、約 1，020yg、約 1，030yg、約 1，040yg、約 1，050yg、 約 1，060yg、約 1，070yg、約 1，080yg、約 1，090yg、約 1，100yg、約 1，200yg、約 1，300yg、約 1，400yg、約 1，500yg、約 1，600yg、約 1，700yg、約 1，800yg、約 1，900yg、 約 2, 000yg、約 3000yg、約 4000yg、約 5000yg、約 6000yg、約 7000yg、約 8000yg、約 9000yg、約10000yg、約15000yg、約25000yg或更多的MUC-I核重復(fù)。MUC-I核重復(fù)的 一種特定劑量的范圍為約500yg至約1500yg，約500yg至約1500yg和約1000yg。
[0068] 類似地，可改變脂質(zhì)A的量以與用于配制成疫苗的MUC-I肽的量相匹配。因此，月旨 質(zhì)A的量可以是約 50yg、約 100yg、約 200yg、約 300yg、約 400yg、約 500yg、約 600yg、 約 700yg、約 800yg、約 900yg、約 1，000yg、約 1，010yg、約 1，020yg、約 1，030yg、約 1，040yg、約 1，050yg、約 1，060yg、約 1，070yg、約 1，080yg、約 1，090yg、約 1，100yg、 1，200yg、1，300yg、1，400yg、1，500yg、1，600yg、1，700yg、1，800yg、1，900yg或約 2, 000yg或更多。尤其是可以有約500yg的脂質(zhì)A。
[0069] 所述BLP25脂肽和脂質(zhì)A可與在該干粉再水合中形成的脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層締合。
[0070] 所述制劑被保存在管形瓶中，如5ml的I型硼硅玻璃瓶。容納MUC-I制劑的小瓶 還可裝有其它疫苗組分。例如，管形瓶可包含其它的脂質(zhì)體樣類脂，如二棕櫚?；字Ｄ?堿、膽固醇和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油。那些特定脂質(zhì)的各量可以變化。因此，管形瓶中任何 一種二棕櫚酰基磷脂酰膽堿、膽固醇和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油的量可以是約lmg、約2mg、 約3mg、約4mg、約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg、約10mg、約llmg、約12mg、約13mg、 約14mg、約15mg、約16mg、約17mg、約18mg、約19mg、約20mg、約25mg、約30mg、約35mg、 約40mg、約45mg、約50mg、約55mg、約60mg、約65mg、約70mg、約75mg、約80mg、約85mg、約 90mg、約95mg或約IOOmg或超過(guò)約lOOmg。可將該脂質(zhì)體樣脂質(zhì)包裝在第二種小瓶中，而可 將所述MUC-I制劑包裝在第一種小瓶中。
[0071] 當(dāng)然，存在本發(fā)明目的的其它實(shí)施方案。因此，僅以實(shí)例形式給出以上量的MUC-I 脂肽BLP25、輔藥和L-BLP25中的脂質(zhì)體樣類脂。可很容易完成對(duì)適當(dāng)量的各組分的測(cè)定， 包括MUC-I脂肽的量。在某些實(shí)施方案中，MUC-I脂肽的量將大于或小于約300yg。所述 疫苗不必裝填于5mlI型硼硅玻璃瓶中，但可以以本領(lǐng)域已知的任何方式供給。
[0072] 在一實(shí)施方案中，所述BLP25脂肽是在接近其C-末端含有脂質(zhì)化氨基酸衍生物的 一種線形27-殘基肽。明確地講，BLP25在該多肽的26位的賴氨酸殘基上包含一個(gè)棕櫚酰 基脂質(zhì)。所述BLP25脂肽的序列在以下表明的SEQIDNO. : 2中所示：
[0073] SEQIDNO. 2:STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK(棕櫚酰）G
[0074] 在具有MUC-I核序列的其它實(shí)施方案中，可出現(xiàn)在所述肽的天然序列內(nèi)的氨基 酸，如蘇氨酸、絲氨酸、賴氨酸、精氨酸或半胱氨酸，可以是一種可與脂質(zhì)連接的便利位置。 另外，所述脂質(zhì)可連接在一種合成氨基酸或在MUC-I核序列中非天然發(fā)現(xiàn)的氨基酸上。此 外，可將一或多種天然或合成氨基酸加入到MUC-I核序列的末端或之內(nèi)以促進(jìn)脂質(zhì)的連 接。
[0075] 可加入到MUC-I核序列中的氨基酸的數(shù)目并不被限定，原因是可加入任何數(shù)目的 氨基酸，只要所述肽在本發(fā)明方法中仍發(fā)揮功能即可。如上所示，已向BLP25多肽中加入兩 個(gè)其它的氨基酸。即MUC-I核序列的C-末端以脯氨酸結(jié)束，因此是25-殘基長(zhǎng)度。然而， 在BLP25多肽情況下，已向該C-末端脯氨酸中加入一個(gè)賴氨酸和甘氨酸以促進(jìn)棕櫚酰的連 接。因此，BLP25多肽的長(zhǎng)度是27個(gè)氨基酸長(zhǎng)度。可使用常規(guī)的肽合成方法向肽序列中加 入一或多個(gè)這種其它的氨基酸。另外，可重組制備所述MUC-I核序列肽或BLP25。
[0076] 在一具體的實(shí)施方案中，BLP25脂質(zhì)體疫苗（"L-BLP25"）可包含BLP25脂肽、月旨 質(zhì)A、膽固醇、DMPG和DPPC。所述BLP25脂肽可包含SEQIDN0:2的序列，一種免疫活性 片段，或其免疫學(xué)活性變體。這種BLP25脂質(zhì)體疫苗（LiposomeVaccine)的劑量可包含 約1000yg的BLP25脂肽、約500yg脂質(zhì)A、約17.3mg膽固醇、約3. 6mgDMPG和約29.Img DPPC0
[0077] 還可將這種特定的疫苗組合物和劑量以"每瓶"量描述。因此，一管形瓶可包含約 300yg的BLP25脂肽、約150yg的脂質(zhì)A、約5. 2mg的膽固醇、約I.Img的DMPG和約8. 7mg 的DPPC。
[0078] 可將該疫苗凍干，然后在給藥前重新構(gòu)成溶液，如氯化鈉溶液。可將上述BLP25 脂質(zhì)體疫苗的量重新構(gòu)成例如約為〇. 6ml液體的體積的溶液，雖然根據(jù)所要求的劑量可使 用任何體積的液體，如約 〇?lml、0. 2ml、0. 3ml、0. 4ml、0. 5ml、0. 6ml、0. 7ml、0. 8ml、0. 9ml、 10ml、11ml、12ml、13ml、14ml、15ml、16ml、17ml、18ml、19ml或 20ml或 20ml以上。加入到凍 干MUC-I疫苗中重新構(gòu)成溶液的液體體積不必是給予患者的體積。
[0079] A.MUC-I核重復(fù)變體
[0080] 作為SEQIDNOs: 1和2中所示的另一種MUC-I核重復(fù)序列，本發(fā)明的制劑可混合 有那些MUC-I核重復(fù)序列的免疫活性同系物。因此，本發(fā)明包括應(yīng)用具有類似于但不等同 于SEQIDNO: 1或SEQIDNO: 2中所示的氨基酸序列的MUC-I核重復(fù)肽。所以，本發(fā)明還包 括使用與SEQIDN0:1 或SEQIDN0:2 相比具有 99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、 92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81% 或 80% 序列同一性且 具有免疫活性的MUC-I核重復(fù)。
[0081] 可對(duì)本發(fā)明的MUC-1核重復(fù)蛋白進(jìn)行修飾以含有保守的變體，或者可進(jìn)行修 飾以改變非關(guān)鍵殘基或非關(guān)鍵區(qū)域的殘基。非關(guān)鍵的氨基酸可通過(guò)本領(lǐng)與已知的方法 鑒定，如位點(diǎn)定向誘變、結(jié)晶、核磁共振、光親和標(biāo)記或丙氨酸掃描誘變（Cunninghamet al.,Science, 244:1081-1085(1989)；Smithetal. ,JMol.Biol, 224:899-904(1992)；de Vosetal.，Science, 255:306-312(1992))。通過(guò)諸如蛋白酶結(jié)合底物、裂解、體外活性或 體內(nèi)活性等方法，可很容易測(cè)試所修飾的蛋白質(zhì)誘發(fā)免疫反應(yīng)的活性和能力。
[0082] 具體地講，MUC-I核重復(fù)變體可結(jié)合有1、2、3、4或5個(gè)改善MUC-I核重復(fù)穩(wěn)定性的 氨基酸取代基，或帶有改善對(duì)抗氧化的MUC-I核重復(fù)穩(wěn)定性的不同的疏水性氨基酸，或者 帶有改善對(duì)抗蛋白酶的MUC-I核重復(fù)穩(wěn)定性的不同氨基酸。因此，本發(fā)明的"可變"MUC-I 核重復(fù)多肽通過(guò)一或多個(gè)取代、刪除、插入、倒轉(zhuǎn)、截?cái)嗷蚱浣M合使得其氨基酸序列與SEQ IDN0s:l或2中呈現(xiàn)的序列存在差異。可制備含有氨基酸取代的這樣的變體，該取代為用 類似性質(zhì)的另一種氨基酸取代一種給定的氨基酸。保守取代包括丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸 和異亮氨酸的脂族氨基酸相互交換；羥基殘基絲氨酸和蘇氨酸的相互交換；酸性殘基天冬 氨酸（aspartate)和谷氨酸（glutamate)的交換；酰胺殘基天冬氨酸和谷氨酸的取代；堿 性殘基賴氨酸和精氨酸的交換；以及芳族殘基苯丙氨酸和酪氨酸的置換。參見(jiàn)Bowieet al,Science, 247 :1306-1310(1990)〇
[0083] B.MUC-I核重復(fù)融合蛋白
[0084] 具有SEQIDNOs: 1或2的全長(zhǎng)序列或其變體的MUC-I核重復(fù)肽還可結(jié)合另一種非 正常相關(guān)的多肽。因此，可將MUC-I核重復(fù)肽在其N-末端或C-末端與具有基本上與MUC-I 核重復(fù)不一致的氨基酸序列的異源多肽有效連接（operatively)。"有效連接"表明所述 MUC-I核重復(fù)肽和異源多肽都在構(gòu)架內(nèi)。
[0085] 融合蛋白可能或不可能影響MUC-I核重復(fù)或其官能變體誘發(fā)宿主系統(tǒng)的免疫反 應(yīng)的能力。例如，所述融合蛋白可以是谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST)-融合蛋白，其中MUC-I核 重復(fù)體與GST序列的C-末端或者流感HA標(biāo)記物融合。其它類型的融合蛋白包括但不限于 酶性融合蛋白，例如P_半乳糖苷酶融合蛋白，酵母雙-雜交GAL融合蛋白、聚-His融合蛋 白和Ig融合蛋白。這些融合蛋白，尤其是聚-His融合蛋白，可促進(jìn)用于本發(fā)明的重組產(chǎn)生 的MUC-I核重復(fù)體的純化。在某些宿主細(xì)胞中，通過(guò)使用與蛋白酶融合的異源信號(hào)序列， 可增強(qiáng)蛋白的表達(dá)和/或分泌，所述蛋白酶將MUC-I核重復(fù)肽傳遞至細(xì)胞外基質(zhì)中或者將 MUC-I核重復(fù)蛋白集中在細(xì)胞膜中。
[0086] 其它融合蛋白可影響MUC-I核重復(fù)誘發(fā)免疫反應(yīng)的能力。例如，可將MUC-I核重 復(fù)的亞區(qū)域置換，例如用MUC-I蛋白的另一區(qū)域的對(duì)應(yīng)的區(qū)域或亞區(qū)域置換。因此，可制備 嵌合體性MUC-I核重復(fù)體。同樣地，可改變底物的親和力或者甚至防止底物的蛋白水解。 因此，可使用一種具有例如SEQIDN0:1或2或其變體的氨基酸序列的蛋白質(zhì)作為另一種 MUC-I核重復(fù)肽的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。
[0087] C.MUC-I核重復(fù)修飾
[0088] MUC-I核重復(fù)變體還包括衍生物或同系物，其中（i)將氨基酸用不是遺傳密碼編 碼的氨基酸殘基取代，（ii)使成熟的多肽與另一種化合物（如聚乙二醇）融合，或者（iii) 將另外的氨基酸與MUC-I多肽融合，如前導(dǎo)或分泌序列或純化多肽的序列。
[0089] 典型的修飾包括但不限于乙?；?、?；?、ADP-核糖基化、酰胺化、黃素的共價(jià)連接、 血紅素（heme)部分的共價(jià)連接、核苷或核苷衍生物的共價(jià)連接、脂質(zhì)或脂質(zhì)衍生物的共價(jià) 連接、磷脂酰肌醇的共價(jià)連接、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、脫甲基化、共價(jià)交聯(lián)的形成、胱氨酸 形成、焦谷氨酸形成、甲?；羧基化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、甲基化、十四 燒?；╩yristoylation)、氧化、蛋白酶解加工、磷酸化、異戊稀化（prenylation)、外消旋 化、硒化、硫酸化、轉(zhuǎn)移-RNA介導(dǎo)的氨基酸加入到蛋白中（如精氨?；╝rginylation))和 遍在蛋白化。
[0090] 可用于MUC-I核重復(fù)的特別常用的肽修飾包括糖基化、脂質(zhì)連接、硫酸化、谷氨 酸殘基的T-羧基化、羥基化和ADP-核糖基化。參見(jiàn)T.E.Creighton，蛋白一結(jié)構(gòu)和分 子特性（Proteins-StructureandMolecularProperties),第二版（W.H.Freeman和 Company,NewYork(1993)) ;Wold,F.，蛋白質(zhì)的翻譯后共價(jià)修飾（Posttranslational CovalentModificationofProteins),B.C.Johnson,Ed.(AcademicPress,New Yorkl-I2Q983));Seifte等，Meth.Enzymol,l82:626_646(l99〇);和Rattan等，Ann. KY.Acad.Scl，663:48-62 (1992)。
[0091] 可在MUC-I核重復(fù)多肽的任何位置進(jìn)行修飾，包括在肽骨架、氨基酸側(cè)鏈和氨基 端或羧基端上。通過(guò)共價(jià)鍵修飾阻斷多肽中的氨基或羧基或兩者是自然發(fā)生中和合成肽中 常見(jiàn)的。
[0092] II.BLP25 劑量
[0093] 當(dāng)給予患者基于MUC-I的制劑時(shí)，包括MUC-I核肽、BLP25多肽或BLP25脂質(zhì)體疫 苗，本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚所述劑量可依據(jù)數(shù)種因素而變化，包括但不限于患者的體重、腫瘤 的體積或腫瘤的發(fā)展。一般地，本發(fā)明所用的接受基于MUC-I的制劑的患者是一種單個(gè)有 機(jī)體。在某些實(shí)施方案中，患者是哺乳動(dòng)物。尤其，患者可以是人，包括男性或女性。在許 多實(shí)施方案中，患者者是病人或者是等待或正處于醫(yī)療護(hù)理或治療的病人。
[0094] 在單次或累計(jì)應(yīng)用中，可給予患者BLP25脂質(zhì)體疫苗中BLP25MUC-1多肽的劑量 為約 50yg、約 100yg、約 200yg、約 300yg、約 400yg、約 500yg、約 600yg、約 700yg、 約 800yg、約 900yg、約 1，000yg、約 1，010yg、約 1，020yg、約 1，030yg、約 1，040yg、 約 1，050yg、約 1，060yg、約 1，070yg、約 1，080yg、約 1，090yg、約 1，100yg、1，200yg、 1，300yg、1，400yg、1，500yg、1，600yg、1，700yg、1，800yg、1，900yg或約 2, 000yg。 在各特定實(shí)施方案中，給予患者的劑量為每周約1，〇〇〇yg的基于MUC-I的制劑。
[0095] 患者可例如以每日多次、每日、隔日、每周一次或以任何其它適合的給藥方案接受 一定劑量的基于MUC-I的制劑。在一實(shí)施方案中，常規(guī)給藥包括在一定時(shí)期內(nèi)每周一次給 予一定劑量的BLP25脂質(zhì)體疫苗。當(dāng)然，所述給藥方案可包含MUC-I肽傳遞的其它更動(dòng)。 即，可將所述疫苗每周1次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次給予。在某些實(shí)施方案中， 可在一定時(shí)期內(nèi)給予患者用藥至少5次。在其它實(shí)施方案中，可給予患者多于或少于5次 的用藥。因此，患者每周可接受約1，〇〇〇yg劑量的MUC-I脂質(zhì)化多肽。另外，患者可每周 2次接受兩個(gè)500yg的劑量或者在5日內(nèi)每日接受100yg的劑量。
[0096] 這些劑量實(shí)例并非限定性的，且僅用于例證性說(shuō)明給予約1，000yg的MUC-I脂質(zhì) 化多肽的特定給藥方案。例如，如果特定給藥的適合劑量為每周1，〇〇〇yg，可將所述劑量分 為任何數(shù)目的排列。其也適用于如果特定給藥的適合劑量大于或小于1，〇〇〇yg的情況。
[0097] 給予患者基于MUC-I的制劑的給藥期可以是任何適合的時(shí)期。這種適合的時(shí)期的 實(shí)例包括但不限于至少約3個(gè)月、至少約4個(gè)月、至少約5個(gè)月、至少約6個(gè)月、至少約7個(gè) 月、至少約8個(gè)月、至少約9個(gè)月、至少約10個(gè)月、至少約11個(gè)月、至少約12個(gè)月、至少約 13個(gè)月、至少約14個(gè)月、至少約15個(gè)月、至少約16個(gè)月、至少約17個(gè)月、至少約18個(gè)月、 至少約19個(gè)月、至少約20個(gè)月、至少約21個(gè)月、至少約22個(gè)月、至少約23個(gè)月或至少約 24個(gè)月或更長(zhǎng)。如果需要，該治療期還可持續(xù)超過(guò)24個(gè)月，如30個(gè)月、31個(gè)月、32個(gè)月、33 個(gè)月、34個(gè)月、35個(gè)月、36個(gè)月或長(zhǎng)于36個(gè)月。
[0098] 在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，本文所述的任何方法的給藥時(shí)間段為至少約2周、 至少約4周、至少約8周、至少約16周、至少約17周、至少約18周、至少約19周、至少約20 周、至少約24周、至少約28周、至少約32周、至少約36周、至少約40周、至少約44周、至 少約48周、至少約52周、至少約60周、至少約68周、至