N-乙酰葡萄糖胺在制備用于誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的制劑中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及N-乙酰葡萄糖胺在制備用于誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的制劑中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]肺癌是當(dāng)今世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在中國(guó)，據(jù)預(yù)測(cè)到2025年肺癌患者將達(dá)到100萬(wàn)，居世界第I位。肺癌80 %以上為非小細(xì)胞肺癌(Non-small Cell LungCarcinoma，NSLC)，目前對(duì)其治療尚未取得實(shí)質(zhì)性突破，確診后5年生存率仍不足15%。肺癌除了早期對(duì)原發(fā)瘤的切除，主要以化療和放療為主，后者在殺傷癌細(xì)胞的同時(shí)也殺傷正常細(xì)胞。為避免對(duì)正常細(xì)胞的損傷，故選擇針對(duì)特異分子靶點(diǎn)的治療模式，越來(lái)越被醫(yī)學(xué)界所認(rèn)同。
[0003]TRAIL (腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體)，是腫瘤壞死因子TNF家族的新成員，因其對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷的高度特異性和對(duì)正常細(xì)胞無(wú)明顯毒性，而備受關(guān)注。
[0004]TRAIL通過(guò)特異性受體誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。TRAIL受體有5種:死亡受體DR4、DR5，誘騙受體DcRl、DcR2及可溶性受體0PG。其中，死亡受體通過(guò)其死亡結(jié)構(gòu)域與TRAIL結(jié)合誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。誘騙受體因其沒(méi)有死亡結(jié)構(gòu)域或死亡結(jié)構(gòu)域不完整，不能夠介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。正常組織中誘騙受體高表達(dá)，能與死亡受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合TRAIL，而逃逸TRAIL的殺傷作用。
[0005]死亡受體DR4和DR5中任意一個(gè)出現(xiàn)表達(dá)水平的降低都會(huì)引起TRAIL耐受。但是DR4和DR5即使是表達(dá)在細(xì)胞膜上，也可能是無(wú)功能的，所以死亡受體的功能狀態(tài)對(duì)TRAIL耐受至關(guān)重要。經(jīng)死亡受體介導(dǎo)的凋亡通路是=TRAIL與死亡受體聚集體結(jié)合后，激活細(xì)胞內(nèi)的Fas相關(guān)死亡域，募集Caspase-8前體形成死亡信號(hào)復(fù)合體DISC (Death-1nducingSignaling Complex)，激活Caspase8/3通路，引發(fā)細(xì)胞凋亡。
[0006]研究報(bào)道近50%的腫瘤細(xì)胞(如:非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞)對(duì)TRAIL的作用不敏感。腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生TRAIL耐受的機(jī)制是復(fù)雜多樣的，其中死亡受體與配體的結(jié)合是啟動(dòng)TRAIL誘導(dǎo)凋亡的起始環(huán)節(jié)，也是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此死亡受體的表達(dá)及活性在腫瘤細(xì)胞的TRAIL耐受機(jī)制中具有重要地位。
[0007]TRAIL能夠通過(guò)死亡受體特異殺傷癌細(xì)胞，但非小細(xì)胞肺癌(NSLC)常因死亡受體異常而對(duì)其產(chǎn)生耐藥，所以尋找增強(qiáng)TRAIL與死亡受體結(jié)合的“助效劑”已成為急需。
[0008]N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine，GlcNAc)是殼聚糖降解產(chǎn)物之一。低分子殼聚糖能夠抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有很強(qiáng)的抑瘤活性。
[0009]我國(guó)海洋遼闊，故源于蝦蟹殼的甲殼素的含量極其豐富，制備工藝成熟，生物相容性優(yōu)異，已廣泛應(yīng)用在生物醫(yī)藥的許多領(lǐng)域。殼聚糖降解產(chǎn)物GlcNAc不僅能有效激活免疫細(xì)胞、提高機(jī)體的免疫能力，而且GlcNAc可以與蛋白質(zhì)間作用，參與一系列的生理調(diào)控作用。因此被認(rèn)為是一種重要的生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑，非常有希望在腫瘤治療中發(fā)揮其重要作用。
[0010]而TRAIL本身就是公認(rèn)的抗腫瘤靶向生物制品，其強(qiáng)大的抗腫瘤活性及安全性已得到大量動(dòng)物或細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的證實(shí)，目前國(guó)際上已開(kāi)發(fā)了多個(gè)版本的TRAIL，均處于臨床前研究階段或即將進(jìn)入I期臨床。但是，TRAIL并非對(duì)所有的腫瘤細(xì)胞都具有明顯的抑制作用，所以研究N-乙酰葡萄糖胺在增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌凋亡中的用途意義重大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明提供了 N-乙酰葡萄糖胺在制備用于誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的制劑中的用途，本發(fā)明將GlcNAc與TRAIL —起作用于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，具體從細(xì)胞、動(dòng)物以及分子水平評(píng)價(jià)N-乙酰葡萄糖胺協(xié)同TRAIL抑制非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的作用效果，并進(jìn)一步闡釋其作用機(jī)制，為尋找更有效的TRAIL “助效劑”提供理論依據(jù)，為非小細(xì)胞肺癌的藥物靶向治療提供新的思路。
[0012]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
本發(fā)明提供了 N-乙酰葡萄糖胺在制備用于誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的制劑中的用途。
[0013]對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):所述N-乙酰葡萄糖胺與腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體協(xié)同制備用于誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌凋亡的制劑。
[0014]對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):50 μ M的所述N-乙酰葡萄糖胺與50ng/mL的所述腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體協(xié)同制備用于誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌凋亡的制劑。
[0015]對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):所述N-乙酰葡萄糖胺協(xié)同腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖和迀移都具有顯著抑制作用。
[0016]對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):所述N-乙酰葡萄糖胺能夠明顯誘導(dǎo)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體的死亡受體DR5的聚集，增強(qiáng)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的殺傷性。
[0017]對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):將用量為2mg/kg/d的所述腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體結(jié)合50mg/kg/d的所述N-乙酰葡萄糖胺共同作用于動(dòng)物。
[0018]對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn):所述非小細(xì)胞肺癌為A549肺癌細(xì)胞。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)效果是:
I)從細(xì)胞和移植瘤動(dòng)物模型兩方面，驗(yàn)證GlcNAc增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)凋亡的作用。明確GlcNAc能夠與TRAIL協(xié)同作用，增強(qiáng)TRAIL對(duì)非小細(xì)胞肺癌的抑瘤作用。
[0020]2)本發(fā)明從分子水平揭示二者協(xié)同作用后死亡受體活性的改變與其凋亡復(fù)合體形成間的關(guān)系，闡釋GlcNAc促進(jìn)TRAIL誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌凋亡的作用機(jī)制。
[0021]3)本發(fā)明探討GlcNAc協(xié)同TRAIL通過(guò)影響TRAIL誘導(dǎo)的死亡受體的活性來(lái)增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌對(duì)TRAIL的敏感性。
[0022]本發(fā)明首次將GlcNAc與TRAIL協(xié)同作用應(yīng)用于抗非小細(xì)胞肺癌的研究中，這對(duì)于提高腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL的敏感性，擴(kuò)大其應(yīng)用范圍意義重大。本發(fā)明通過(guò)GlcNAc介導(dǎo)的死亡受體聚集來(lái)促進(jìn)起始凋亡復(fù)合體的形成，進(jìn)而促進(jìn)TRAIL的誘導(dǎo)凋亡作用，是一種新的“助效劑”。
【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1表明本發(fā)明中TRAIL與GlcNAc對(duì)A549細(xì)胞增殖性的影響，其中1、對(duì)照組；
2、GlcNAc 組；3、TRAIL 組；4、TRAIL 與 GlcNAc 共同作用組；
圖2表明本發(fā)明中TRAIL和GlcNAc對(duì)細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡的流式檢測(cè)結(jié)果(A)及細(xì)胞凋亡率的比較(B)，其中a、A549對(duì)照組；b、TRAIL組；c、GlcNAc組；d、TRAIL與GlcNAc聯(lián)合作用組；
圖3表明本發(fā)明中通過(guò)16h時(shí)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果(A)及細(xì)胞迀移率的比較(B)來(lái)評(píng)價(jià)GlcNAc與TRAIL對(duì)A549細(xì)胞迀移能力的影響，其中a、A549對(duì)照組；b、TRAIL組；c、GlcNAc組；d、TRAIL與GlcNAc聯(lián)合作用組；
圖4是本發(fā)明中GlcNAc與TRAIL對(duì)荷瘤小鼠瘤重的比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
圖5是本發(fā)明中非還原Western blot分別檢測(cè)從左到右依次為A549對(duì)照組、GlcNAc組、TRAIL組、TRAIL與GlcNAc聯(lián)合作用組1.5h，4.5h，20h時(shí)DR5受體的聚集；
圖6是本發(fā)明中Western blot分別檢測(cè)從左到右依次為A549對(duì)照組、GlcNAc組、TRAIL組、TRAIL與GlcNAc聯(lián)合作用組1.5h，4.5h，20h時(shí)DR5受體的蛋白表達(dá)量。
【具體實(shí)施方式】
[0024]本發(fā)明結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
[0025]實(shí)施例1、GlcNAc協(xié)同TRAIL對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的抑制作用 1、