miR-148b的用途及其相關(guān)藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及miR-148b的用途及其相關(guān)藥物。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，現(xiàn)公認(rèn)為miRNAs的異常表達(dá)在腫瘤中起到重要的作用。miRNAs，是一類(lèi)高度保守的非編碼單鏈RNA，通過(guò)結(jié)合目的基因mRNA的3’ UTR特定區(qū)域，可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。腎癌的發(fā)展進(jìn)程與異常的miRNAs密切相關(guān)也已經(jīng)被廣泛報(bào)道。腎細(xì)胞癌以每年3%的平均增長(zhǎng)速度成為成人腎癌最多的致病種類(lèi)，而腎癌細(xì)胞是起源于腎小管上皮細(xì)胞的演變。臨床上腎細(xì)胞癌的病人卻一直都是診斷率低，治療方法局限，預(yù)后差。因此現(xiàn)在探索出一些具有應(yīng)用前景的針對(duì)腎癌的診斷和預(yù)后指標(biāo)顯得尤為重要和迫切，更重要的是可以幫助優(yōu)化某些特定的診斷治療方法，以免產(chǎn)生不必要的創(chuàng)傷或延誤診斷治療的最佳時(shí)期。然而，大量報(bào)道指出miRNAs是有潛力的腫瘤標(biāo)志物。在腎癌細(xì)胞中miRNAs與多種不同的信號(hào)通路密切相關(guān)，例如VHL/HIF、PI3K/Akt/mTor、Wnt/Frizzled、Hippo、MAPK 以及 NF-K B 信號(hào)通路。其中，mitogen-activated proteinkinases (MAPKs)在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和多種生物進(jìn)程中起著重要作用，例如在細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞存活過(guò)程中。MAPKs可分為三個(gè)部分組成，S卩Extracellular Signal-regulated Kinase1/2(ERK1/2)、Stress Activated Protein Kinase (SAPK)/c-Jun N-terminal Kinase (JNK)和P38MAPK。有趣的是，SAPK/JNK信號(hào)通路有著促進(jìn)凋亡和抑制凋亡的雙面作用，以不同的細(xì)胞類(lèi)型，激活的承受力，死亡信號(hào)的傳導(dǎo)以及不同的信號(hào)通路的激活都會(huì)產(chǎn)生不同的作用。
[0003]然而目前為止，miR-148b在腎細(xì)胞癌中的作用和分子機(jī)理還不清楚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明提供了 miR_148b基因在腫瘤細(xì)胞的存活和凋亡過(guò)程中的作用。
[0005]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的miR-148b基因在制備或篩選抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑中的用途。
[0007]所述將分離的miR-148b基因用于制備或篩選抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑包括兩方面的內(nèi)容:其一，將miR-148b基因作為藥物或制劑的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑；其二，將miR-148b基因作為藥物或制劑的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑。
[0008]所述將miR-148b基因作為藥物或制劑的作用靶標(biāo)應(yīng)用于制備抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑具體是指:將miR-148b基因作為藥物或制劑作用的靶標(biāo)，來(lái)研制能夠過(guò)表達(dá)miR-148b的藥物或制劑，從而抑制MAPK/JNK信號(hào)通路。
[0009]所述將miR-148b基因作為所述藥物或制劑的作用靶標(biāo)應(yīng)用于篩選抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑具體是指:將miR-148b基因作為作用對(duì)象，對(duì)藥物或制劑進(jìn)行篩選，以找到可以過(guò)表達(dá)miR-148b的藥物作為抑制MAPK/JNK信號(hào)通路備選藥物。諸如基因、抗體藥物，小分子藥物等可將miR-148b基因及其蛋白作為作用對(duì)象。例如，本發(fā)明通過(guò)在腫瘤細(xì)胞中轉(zhuǎn)hsa-miR-148b_3p mimics來(lái)過(guò)表達(dá)miR_148b。
[0010]進(jìn)一步地，所述MAPK/JNK信號(hào)通路是腎癌細(xì)胞或腎癌組織中的MAPK/JNK信號(hào)通路。
[0011]進(jìn)一步地，所述藥物或制劑通過(guò)過(guò)表達(dá)miR-148b而起到抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的作用。
[0012]更進(jìn)一步地，所述miR-148b通過(guò)靶向作用于MAP3K9而起到抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的作用。
[0013]優(yōu)選地，所述miR-148b通過(guò)與MAP3K93’ UTR結(jié)合而靶向作用于MAP3K9。
[0014]優(yōu)選地，所述miR-148b通過(guò)下調(diào)MAP3K9蛋白表達(dá)水平而起到抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的作用。
[0015]優(yōu)選地，所述藥物或制劑通過(guò)下調(diào)磷酸化JNK(pJNK)表達(dá)水平而起到抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的作用。
[0016]本發(fā)明的第二方面，提供了一種抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑，通過(guò)分離的miR-148b基因制備或篩選獲得，所述藥物或制劑含有有效量的過(guò)表達(dá)miR-148b的藥效成分。
[0017]所述抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的藥物或制劑包括但不限于:核酸分子、碳水化合物、脂類(lèi)、小分子化學(xué)藥、抗體藥、多肽、蛋白或干擾慢病毒。
[0018]所述核酸包括但不限于:反義寡核苷酸、雙鏈RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸內(nèi)切酶III制備的小干擾RNA(esiRNA)或者短發(fā)夾RNA(shRNA)。
[0019]本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，所述藥物或制劑為能夠過(guò)表達(dá)miR_148b的hsa-miR-148b_3p mimics0
[0020]所述藥物或制劑的施用量為足夠提高miR_148b基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯，或者足夠提高miR-148b蛋白的表達(dá)或活性的劑量。以使miR-148b基因的表達(dá)維持在能夠抑制MAPK/JNK信號(hào)通路的水平。
[0021]本發(fā)明的第三方面提供了一種抑制腎癌組織或腎癌細(xì)胞中MAPK/JNK信號(hào)通路的方法，為向腎癌組織或腎癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-148b。
[0022]本發(fā)明的第四方面提供了前述方法在腎癌治療藥物研宄中的用途。
[0023]本發(fā)明的有益效果在于:
[0024]本發(fā)明首次揭示了 miR_148b在腎細(xì)胞癌中低表達(dá)，在腎癌組織或腎癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-148b能夠通過(guò)抑制MAP3K9而有效下調(diào)MAPK/JNK信號(hào)通路，為進(jìn)一步研宄腎癌的發(fā)病機(jī)制以及miR-148b基因的功能提供了新的手段。
【附圖說(shuō)明】
[0025]圖1:miR-148b在腎癌組織中的表達(dá)情況。
[0026]圖2:miR-148b在腎癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。
[0027]圖3:雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)miR_148b與信號(hào)通路的調(diào)控作用。
[0028]圖4:MAP3K93’ UTR與miR_148b的靶位點(diǎn)在物種間的保守性。
[0029]圖5:雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)miR-148b與MAP3K9的調(diào)控作用。
[0030]圖6:在腎癌細(xì)胞中miR-148b在mRNA水平并沒(méi)有影響MAP3K9的轉(zhuǎn)錄。
[0031]圖7:在腎癌細(xì)胞中miR-148b下調(diào)了 MAP3K9在蛋白水平的表達(dá)。
[0032]圖8:在腎癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染mimics后磷酸化JNK的表達(dá)變化。
[0033]圖9:MAP3K9和pJNK在腎癌組織中的表達(dá)情況。
【具體實(shí)施方式】
[0034]本發(fā)明經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研宄，發(fā)現(xiàn)miR_148b在人腎癌組織和腎癌細(xì)胞株中均呈現(xiàn)低表達(dá)。接著，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)miR-148b在轉(zhuǎn)錄后水平上抑制了 MAP3K9的表達(dá)，而MAP3K9是一個(gè)已知的MKK/JNK信號(hào)通路的上游激活因子。而后，研宄發(fā)現(xiàn)在腎癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-148b可下調(diào)MAPK/JNK信號(hào)通路。
[0035]在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
[0036]以下通過(guò)特定的具體實(shí)例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說(shuō)明書(shū)所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可以通過(guò)另外不同的【具體實(shí)施方式】加以實(shí)施或應(yīng)用，本說(shuō)明書(shū)中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒(méi)有背離本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。
[0037]在進(jìn)一步描述本發(fā)明【具體實(shí)施方式】之前，應(yīng)理解，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于下述特定的具體實(shí)施方案；還應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)