一種復(fù)合酶結(jié)合超聲自杜仲葉提取杜仲黃酮的生產(chǎn)工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種復(fù)合酶結(jié)合超聲自杜仲葉提取杜仲黃酮的生產(chǎn)工藝，屬于中藥制 藥或原料加工領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 杜仲是一種用途極廣的中藥材，黃酮類化合物是杜仲的主要有效成分之一，其含 量的高低是判斷杜仲生藥及其產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，杜仲中所含黃酮類化合物主要為山奈 酚、槲皮素、紫云英苷、陸地錦苷、蘆丁等。臨床及藥理研究表明杜仲黃酮具有抗癌、抗衰老、 降血壓、抗菌消炎、增強機體免疫等多種藥理作用，被廣泛用于藥品和療效食品的研究與開 發(fā)近年來還發(fā)現(xiàn)杜仲黃酮在食品、醫(yī)藥和化妝品工業(yè)中有廣泛的用途，因此對杜仲黃酮提 取分離的研究越來越引起世人的關(guān)注。
[0003] 目前采用的水提法、雙水相體系萃取、微波提取等方法，提取及精制的生產(chǎn)方法尚 比較落后。這些常規(guī)方法存在明顯的不足之處，如水提法由于操作溫度高，杜仲中的杜仲黃 酮易發(fā)生分解；超聲波提取、微波提取，設(shè)備成本高，新的工藝尚不成熟，不適合工業(yè)生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)合酶結(jié)合超聲自杜仲葉提取杜仲黃酮的生產(chǎn)工藝， 該工藝簡單易行、成本低廉、經(jīng)濟環(huán)保，且能最大程度的提取出杜仲中的有效物質(zhì)，并能用 于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0006] -種復(fù)合酶結(jié)合超聲自杜仲葉提取杜仲黃酮的生產(chǎn)工藝，包括以下步驟：
[0007] (1)將杜仲葉粉碎，過50目篩，向粉末中加入3~5倍質(zhì)量的水，浸泡半小時；向 其中加入纖維素酶和果膠酶；
[0008] ⑵用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為4.0~5.0,于45~55°C酶解2~3h，然后煮沸2~ 4min，使酶失活；
[0009] (3)向混合液中加入乙醇至乙醇的濃度為50wt%，超聲波浸提15~25min，溫度為 90~KKTC，功率為70~80 %，超聲產(chǎn)物過濾，濾液濃縮，調(diào)pH至6. 5得到提取液；
[0010] ⑷將提取液采用大孔吸附樹脂進行分離，依次選用水、濃度為l〇wt%的乙醇進 行洗脫，棄洗脫液，用濃度為90wt%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，濃縮。
[0011] 所述步驟⑷中濃度為90wt%的乙醇的用量為樹脂體積的3~4倍。
[0012] 所述大孔吸附樹脂為D-101、AB-8或X-5型樹脂。
[0013] 在天然產(chǎn)物的提取過程中，通過酶的前期處理，可以破除植物的細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi) 物質(zhì)充分溶解出來，不僅可以縮短提取時間，減少溶劑用量，而且也可以有效地提高有效成 分的提取率。在本發(fā)明的生產(chǎn)工藝中，所述杜仲葉粉末與纖維素酶、果膠酶的質(zhì)量比優(yōu)選為 100 :0. 12 ~0. 24 :0. 48 ~0. 96。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點在于：
[0015] 本發(fā)明與傳統(tǒng)提取法相比具有提取速度快，成本低，不用重結(jié)晶，省時、省力，提取 率高，雜質(zhì)含量少，易于純化，提取工藝不使用有毒溶劑，對環(huán)境友好等特點；本發(fā)明能最大 程度的提取出杜仲中的有效物質(zhì)，并能用于工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0016] 圖1為用于實施例1~9中杜仲葉黃酮的含量檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【具體實施方式】
[0017] 下面通過實施例對本發(fā)明作進一步說明，但不意味著對本發(fā)明保護范圍的限制。
[0018] 實施例1
[0019] 稱取杜仲干燥葉500g，粉碎，過50目，向粉末中加水浸泡半小時；向其中加入纖維 素酶I. 2g、果膠酶3. 9g ;用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為5. 0,于49°C酶解3h，然后煮沸4min，使酶失 活；向混合液中加入乙醇至乙醇的濃度為50wt%，料液比為I :42(體積比，下同），超聲波 浸提22min，溫度為95°C，功率為76%，超聲產(chǎn)物過濾，濾液濃縮，調(diào)pH至6. 5得到提取液。
[0020] 將上述提取液緩慢滴加到D-101型大孔吸附樹脂，加樣至柱體1/3處。依次選用 水、濃度為l〇wt%的乙醇進行洗脫，棄洗脫液。然后用濃度為90wt%的乙醇進行洗脫，收集 洗脫液，濃縮，制得的杜仲黃酮含量達(dá)87. 6 %。
[0021] 實施例2
[0022] 稱取杜仲干燥葉500g，粉碎，過50目，向粉末中加水浸泡半小時；向其中加入纖維 素酶〇. 6g、果膠酶2. 4g ;用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為4. 0,于45°C酶解2h，然后煮沸2min，使酶失 活；向混合液中加入乙醇至乙醇的濃度為50wt%，料液比為1 :40,超聲波浸提15min，溫度 為90°C，功率為70%，超聲產(chǎn)物過濾，濾液濃縮，調(diào)pH至6. 2得到提取液。
[0023] 將上述提取液緩慢滴加到D-IOl型大孔吸附樹脂，加樣至柱體1/3處。依次選用 水、濃度為l〇wt%的乙醇進行洗脫，棄洗脫液。然后用濃度為90wt%的乙醇進行洗脫，收集 洗脫液，濃縮，制得的杜仲黃酮含量達(dá)85. 8 %。
[0024] 實施例3
[0025] 稱取杜仲干燥葉500g，粉碎，過50目，向粉末中加水浸泡半小時；向其中加入纖維 素酶I. 2g、果膠酶4. 8g ;用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為5. 0,于55°C酶解3h，然后煮沸4min，使酶失 活；向混合液中加入乙醇至乙醇的濃度為50wt%，料液比為1 :45,超聲波浸提25min，溫度 為KKTC，功率為80%，超聲產(chǎn)物過濾，濾液濃縮，調(diào)pH至6. 5得到提取液。
[0026] 將上述提取液緩慢滴加到AB-8型大孔吸附樹脂，加樣至柱體1/3處。依次選用水、 濃度為l〇wt%的乙醇進行洗脫，棄洗脫液。然后用濃度為90wt%的乙醇進行洗脫，收集洗 脫液，濃縮，制得的杜仲黃酮含量達(dá)91. 3%。
[0027] 實施例4
[0028] 稱取杜仲干燥葉500g，粉碎，過50目，向粉末中加水浸泡半小時；向其中加入纖維 素酶〇. 6g、果膠酶4. 8g ;用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為4. 5,于50°C酶解2. 5h，然后煮沸3min，使酶 失活；向混合液中加入乙醇至乙醇的濃度為50wt%，料液比為1 :40,超聲波浸提20min，溫 度為93°C，功率為75%，超聲產(chǎn)物過濾，濾液濃縮，調(diào)pH至6. 2得到提取液。
[0029] 將上述提取液緩慢滴加到X-5型大孔吸附樹脂，加樣至柱體1/3處。依次選用水、 濃度為l〇wt%的乙醇進行洗脫，棄洗脫液。然后用濃度為90wt%的乙醇進行洗脫，收集洗 脫液，濃縮，制得的杜仲黃酮含量達(dá)88. 7 %。
[0030] 實施例5
[0031] 稱取杜仲干燥葉500g，粉碎，過50目，向粉末中加水浸泡半小時；向其中加入纖維 素酶I. 2g、果膠酶2. 4g ;用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH為4. 5,于52°C酶解3h，然后煮沸4min，使酶失 活；向混合液中加入乙醇至乙醇的濃度為50wt%，料液比為1 :42,超聲波浸提22min，溫度 為92°C，功率為77%，超聲產(chǎn)物過濾，濾液濃縮，調(diào)pH至6. 4得到提取液。
[0032] 將上述提取液緩慢滴加到AB-8型大孔吸附樹脂，加樣至柱體1/3處。依次選用水、 濃度為l〇wt%的乙醇進行洗