一種杜仲葉總黃酮提取物的制備方法與質(zhì)量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)成分分離純化技術(shù)，具體屬于杜仲葉中總黃酮的制備工藝及其質(zhì)量檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]杜仲的別名絲棉樹、絲棉皮、玉絲皮。在植物分類學(xué)上屬杜仲科杜仲屬，其皮葉同為中藥品種，收載于中國(guó)藥典2010年版一部，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨的作用。由于杜仲皮一般需生長(zhǎng)多年，方可采收，周期長(zhǎng)，資源相對(duì)緊缺。而杜仲葉的資源相對(duì)豐富、易得，近代研究證實(shí)了杜仲葉與杜仲皮有相同的有效成分和藥理作用。杜仲葉中含有多種黃酮類物質(zhì)，國(guó)內(nèi)有關(guān)制藥企業(yè)常把杜仲葉制備成杜仲浸膏，因此，需要有一種能有效檢測(cè)杜仲浸膏質(zhì)量的檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是針對(duì)上面所述缺陷，提供一種工藝簡(jiǎn)單、能耗低且提取物中總黃酮含量高的杜仲葉總黃酮提取物的制備方法。
[0004]本發(fā)明的另一目的是提供一種杜仲葉總黃酮提取物的質(zhì)量檢測(cè)方法。
[0005]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的。
[0006]—種杜仲葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于:以杜仲葉為原料，粉碎成粗粉，用8~20倍40%~95%的乙醇超聲提取，提取1~3次，每次30min~60min ;收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；離心，得上清液；選用HPD-100、HPD-400、HPD600或D101大孔樹脂，上樣，上樣吸附0.5-2.0小時(shí)，依次用1~3倍水洗脫除雜，流速為每小時(shí)1~3倍水；再以2~4倍30%~95%的乙醇洗脫，洗脫速率為每小時(shí)1~4倍；收集所得洗脫液，洗脫液濃縮干燥，得杜仲總黃酮提取物。
[0007]—種杜仲葉總黃酮提取物的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，采用HPLC法測(cè)定槲皮素和蘆丁的含量:
a.色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以20~50:80~50的甲醇-0.1-1%乙酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm ;流速:0.8ml/min~l.0ml/min ;柱溫:25°C -35°C ;理論塔板數(shù)均不低于2000 ;
b.對(duì)照品溶液的制備:取在120°C干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品和槲皮素對(duì)照品適量，精密稱定，置于量瓶中，用流動(dòng)相超聲處理，使溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制成蘆丁和槲皮素的混合對(duì)照溶液，搖勻，即得；
c.供試品溶液制備:取上述制備得到的杜仲總黃酮提取物適量，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解；
d.測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液5~15ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0008]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):從資源豐富的杜仲葉中提取黃酮類物質(zhì)，在整個(gè)制備過(guò)程中，工藝簡(jiǎn)單，能耗低，所用溶劑為乙醇和水，可回收利用，無(wú)污染，具有較好的環(huán)境效益；得到提取物中總黃酮含量高，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。檢測(cè)相對(duì)方便，質(zhì)量易控制。
[0009]【具體實(shí)施方式】:
實(shí)施例1。
[0010]將杜仲葉粉碎成粗粉，置于超聲提取罐中用10倍量的50%乙醇超聲提取，提取1次，每次提取30min ;合并濃縮液，5000r/min離心lOmin，得上清液；上清液通過(guò)HPD600，吸附0.5小時(shí)，用1倍水，流速為每小時(shí)1倍水洗脫除雜；再以2倍50%的乙醇洗脫，洗脫速率為每小時(shí)一倍體積，收集洗脫液，洗脫液濃縮干燥，得杜仲葉總黃酮提取物。
[0011]HPLC法測(cè)定槲皮素和蘆丁的含量:
a.色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以20:80的甲醇-0.1%乙酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm ;流速:0.8ml/min ;柱溫:25°C ；
b.對(duì)照品溶液的制備:取在120°C干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20.5mg和槲皮素0.54mg，精密稱定，置于100ml量瓶中，用流動(dòng)相超聲處理，使溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制成1ml含0.205mg蘆丁和5.4ug槲皮素的溶液，搖勻，即得；
c.供試品溶液制備:取上述制備得到的杜仲總黃酮提取物0.5241g，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解；
d.測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液5ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0012]測(cè)得杜仲提取物含槲皮素0.18mg/g和2.54mg/g蘆丁。
[0013]實(shí)施例2。
[0014]將杜仲葉粉碎成粗粉，置于超聲提取罐中用10倍量的80%乙醇超聲提取，提取2次，每次提取60min ;合并濃縮液，5000r/min離心lOmin，得上清液；上清液通過(guò)D101大孔樹脂，吸附1小時(shí)，用2倍水，流速為每小時(shí)2倍水洗脫除雜；再以3倍80%的乙醇洗脫，洗脫速率為每小時(shí)2倍體積，收集洗脫液，洗脫液濃縮干燥，得杜仲葉總黃酮提取物。
[0015]HPLC法測(cè)定槲皮素和蘆丁的含量:
a.色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30:70的甲醇-1%乙酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm ;流速:lml/min ;柱溫:30°C ；
b.對(duì)照品溶液的制備:取在120°C干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品22mg和槲皮素0.48mg，精密稱定，置于100ml量瓶中，用流動(dòng)相超聲處理，使溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制成lml含0.22mg蘆丁和4.8ug槲皮素的溶液，搖勻，即得；
c.供試品溶液制備:取上述制備得到的杜仲總黃酮提取物0.5847g，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解；
d.測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液lOul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0016]測(cè)得杜仲提取物含槲皮素0.21mg/g和蘆丁 2.69mg/g。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種杜仲葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于:以杜仲葉為原料，粉碎成粗粉，用8~20倍40%~95%的乙醇超聲提取，每次30min~60min ;收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；離心，得上清液；用大孔樹脂上樣吸附0.5-2.0小時(shí)，依次用1~3倍水洗脫除雜，流速為每小時(shí)1~3倍水；再以2~4倍30%~95%的乙醇洗脫，洗脫速率為每小時(shí)1~4倍；收集所得洗脫液，洗脫液濃縮干燥，得杜仲總黃酮提取物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種杜仲葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于:所述超聲提取次數(shù)為1~3次。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種杜仲葉總黃酮提取物的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂選用 HPD-100、HPD-400、HPD600 或 D101 中的一種。4.一種杜仲葉總黃酮提取物的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，采用HPLC法測(cè)定槲皮素和蘆丁的含量: a.色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以20~50:80~50的甲醇-0.1-1%乙酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm ;流速:0.8ml/min~l.0ml/min ;柱溫:25°C -35°C ;理論塔板數(shù)均不低于2000 ; b.對(duì)照品溶液的制備:取在120°C干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品和槲皮素對(duì)照品適量，精密稱定，置于量瓶中，用流動(dòng)相超聲處理，使溶解，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，制成蘆丁和槲皮素的混合對(duì)照溶液，搖勻，即得； c.供試品溶液制備:取上述制備得到的杜仲總黃酮提取物適量，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相超聲溶解； d.測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液5~15ul，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
【專利摘要】一種杜仲葉總黃酮提取物的制備方法與質(zhì)量檢測(cè)方法，涉及天然藥物化學(xué)成分分離純化技術(shù)。以杜仲葉為原料，粉碎后超聲提取得上清液；后依次用水和乙醇洗脫除雜。采用HPLC法測(cè)定槲皮素和蘆丁的含量。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，能耗低，得到提取物中總黃酮含量高，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。檢測(cè)相對(duì)方便，質(zhì)量易控制。
【IPC分類】A61K36/46, G01N30/88
【公開號(hào)】CN105456333
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510382105
【發(fā)明人】周朝忠, 肖軍平, 吳永忠, 陳梁, 杜劍松
【申請(qǐng)人】普正藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2016年4月6日
【申請(qǐng)日】2015年7月3日