黃蜀葵花生物總堿提取物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及黃蜀葵花生物總堿提取物及其制備方法，以 及在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。 (二）
【背景技術(shù)】
[0002] 中成藥在我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)中有及其重要的地位。多數(shù)中藥產(chǎn)品有制劑藥效成分不清 楚、療效不確切、制取工藝原始、質(zhì)量難控制等問題。采用現(xiàn)代方法研宄，明確藥效部位或有 效成分，通過二次開發(fā)，達(dá)到去粗取精，質(zhì)量可控，安全有效，是中藥現(xiàn)代化的必由之路。
[0003] 疼痛是臨床疾病最常見的重要癥狀，給病人帶來身體痛苦和精神重負(fù)，需要鎮(zhèn)痛 藥治療。目前的化學(xué)鎮(zhèn)痛藥物主要由兩大類組成，即以阿司匹林為代表的解熱鎮(zhèn)痛藥和嗎 啡為代表的成癮性鎮(zhèn)痛藥，均有嚴(yán)重不足：解熱鎮(zhèn)痛藥對嚴(yán)重疼痛藥效差，而且有胃出血， 潰瘍嚴(yán)重胃腸道毒副反應(yīng)；成癮性鎮(zhèn)痛藥療效好但有成癮、呼吸抑制等嚴(yán)重不良反應(yīng)，因此 需要尋找、開發(fā)高效低毒新藥以滿足日益增長的臨床需求。
[0004] 黃蜀葵（AbelmoschlmanihotLmedic)花為錦葵科植物黃蜀葵的干燥花。性 味甘寒滑，無毒，具有清利濕熱，消炎解毒之功效，內(nèi)服主治五淋，水腫；外用治療癰疽腫 毒，燙傷，其花蕾在一些地方作為蔬菜食用，安全無毒。從黃蜀葵花中提取的總黃酮（范 麗，董六一.黃蜀葵花總黃酮鎮(zhèn)痛作用研宄[J].中藥藥理與臨床，2003, 19(1): 12-14.) 有良好的鎮(zhèn)痛作用。其中黃酮類化合物金絲桃甙對口腔潰瘍有良好鎮(zhèn)痛作用（司徒曼 麗，馬傳庚，宋必衛(wèi)，等.黃蜀葵結(jié)晶III對口腔潰瘍鎮(zhèn)痛作用的研宄[J].華西口腔 醫(yī)學(xué)雜志，1985, 3(3): 129-31.)，被認(rèn)為是其有效單體成分（宋必衛(wèi)，馬傳庚，徐叔 云.金絲桃甙對抗緩激肽，鉀離子和組織胺致痛作用的實(shí)驗(yàn)研宄[J].中國藥理學(xué)通 報(bào)，1986, 2 (2) : 14-14.)。然而分離提取的金絲桃甙得率很低，成本昂貴；國內(nèi)多個(gè)研宄單 位試圖合成金絲桃甙，均因技術(shù)困難失敗，故未能開發(fā)成藥。 (三）

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明在研宄黃蜀葵花乙醇提取物、金絲桃甙粗提物（含金絲桃甙50-60% )、高 純化的金絲桃甙（含金絲桃甙99% )的鎮(zhèn)痛作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，金絲桃甙粗提物鎮(zhèn)痛作用明顯比 高純化的金絲桃甙效果好，且易于溶解，因此認(rèn)為黃蜀葵花鎮(zhèn)痛作用有效成分/部位不僅 僅是金絲桃甙，而是有多種。
[0006] 通過進(jìn)一步的研宄，發(fā)現(xiàn)黃蜀葵花鎮(zhèn)痛作用新的有效部位生物總堿。黃蜀葵花生 物總堿比其它部位鎮(zhèn)痛作用更強(qiáng)，可以用于開發(fā)、生產(chǎn)高效低毒的新型鎮(zhèn)痛藥。
[0007]本發(fā)明的目的在于提供黃蜀葵花生物總堿提取物，及其制備方法，以及在制備鎮(zhèn) 痛藥物中的應(yīng)用。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0009] 一種黃蜀葵花生物總堿提取物，所述黃蜀葵花生物總堿提取物是按如下方法制備 得到的：
[0010] (a)超臨界C02萃?。簩ⅫS蜀葵花粉末和55?99. 7 %乙醇（夾帶劑）混合，在40? 70°C，10?30Mpa的條件下，進(jìn)行超臨界C02萃取1?2. 5h，所述0)2的流量為2?6kg/h， 萃取所得粗提液旋蒸除去乙醇，得到黃蜀葵花浸膏；
[0011] (b)有機(jī)溶劑萃?。簩⒉襟E（a)中所得黃蜀葵花浸膏先用水分散，再加入石油醚萃 取，分液得到石油醚層和水層，棄去石油醚層，取水層用乙醚萃取，分液得到乙醚萃取液；
[0012] (c)生物總堿分離：在步驟（b)所得乙醚萃取液中，加入0. 5 %?2 %HC1溶液萃 取，分液得到酸層和乙醚層，棄去乙醚層，所得酸層用5%?25%NaOH溶液滴定至中性，再 經(jīng)旋蒸除水，即得黃蜀葵花生物總堿。
[0013] 本發(fā)明黃蜀葵花生物總堿提取物，推薦步驟（a)中所述乙醇的體積用量以黃蜀葵 花粉末的質(zhì)量計(jì)為〇. 5?3.OmL/g。
[0014] 推薦步驟（b)中所述用于分散的水的體積用量以黃蜀葵花浸膏的質(zhì)量計(jì)為10? 20mL/g;所述石油醚的體積用量以黃蜀葵花浸膏的質(zhì)量計(jì)為60?100mL/g;所述水層與用 來萃取的乙醚的體積比為1 :4?8。
[0015] 推薦步驟（c)中所述乙醚萃取液與所述HC1溶液的體積比為1 :1?2。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物中含有本發(fā)明所述的黃蜀葵花 生物總堿提取物和藥用可接受的載體。
[0017] 所述藥物組合物可以為口服劑、外用劑、注射劑或復(fù)方制劑。
[0018] 本發(fā)明所述的黃蜀葵花生物總堿提取物可作為有效成分，用于制備治療臨床疼痛 (如頭痛、牙痛、關(guān)節(jié)痛，外傷疼痛等）的鎮(zhèn)痛藥物。
[0019] 本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)為：（1)首次提出并證明黃蜀葵花生物總堿提取物的鎮(zhèn)痛作用； (2)所述黃蜀葵花生物總堿提取物的制備方法簡單，成本低。
[0020] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明黃蜀葵花生物總堿與現(xiàn)有技術(shù)中的黃蜀葵花總黃 酮及其單體金絲桃甙相比，有以下優(yōu)勢：（1)高效：以最大鎮(zhèn)痛效果的劑量比較，黃蜀葵花 生物總堿的效價(jià)強(qiáng)度分別是總黃酮的100倍、金絲桃甙的20倍以上，其鎮(zhèn)痛活性與嗎啡類 藥物曲馬多相當(dāng)；（2)黃蜀葵花生物總堿的有效劑量很小，對小鼠口服的有效劑量胃lmg/ kg左右，相當(dāng)于成人口服劑量5?10mg，應(yīng)用方便；（3)黃蜀葵花生物總堿溶解性好，可水 溶，而總黃酮難溶于水，金絲桃甙更難溶于水，因此黃蜀葵花生物總堿更方便藥廠生產(chǎn)制成 不同的劑型；(4)黃酮類在腸道極難吸收，是藥學(xué)專業(yè)的基本知識，因此黃蜀葵花生物總堿 應(yīng)該有更好的生物利用度；（5)黃蜀葵花生物總堿制取過程工藝較簡單，C02超臨界萃取技 術(shù)基本無污染（以C02為溶劑），藥物廢渣可作為肥料使用，夾帶劑乙醇可回收循環(huán)使用，大 大降低成本，污染小，制得浸膏體積很小，后續(xù)過程只需乙醚和鹽酸，因?yàn)榱可俟饰廴拘?，?乙醚可回收循環(huán)使用；(6)藥典記載黃蜀葵花無毒，部分地區(qū)以黃蜀葵花蕾為菜食用，故黃 蜀葵花生物總堿相對安全，開發(fā)風(fēng)險(xiǎn)小。 (四）
【附圖說明】
[0021] 圖1是黃蜀葵花生物總堿提取物的制備流程圖；
[0022] 圖2是鹽酸納洛酮對黃蜀葵花生物總堿提取物鎮(zhèn)痛作用的影響。 (五）
【具體實(shí)施方式】
[0023] 實(shí)施例1黃蜀葵花生物總堿提取物的制備
[0024] (a)超臨界0)2萃?。簩ⅫS蜀葵花粉末（100g)和95%乙醇（250mL，夾帶劑）混合， 在50°C，20Mpa的條件下，進(jìn)行超臨界C02萃取2h，所述C0 2的流量為4kg/h，萃取所得粗提 液旋蒸除去乙醇，得到黃蜀葵花浸膏4. 2g;
[0025] (b)有機(jī)溶劑萃?。簩⒉襟E（a)中所得黃蜀葵花浸膏10g先用100mL水分散，再 加入石油醚萃?。?00mLX8)，分液得到石油醚層和水層，棄去石油醚層，取水層用乙醚萃取 (100mLX8)，分液得到乙醚萃取液；
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