專利名稱：含有N,N－二乙基－m－甲苯甲酰胺的抗寄生蟲組合物的制作方法
本申請要求1997年2月10日遞交的美國臨時申請60/040251的優(yōu)先權(quán)。
通過(a)穿透皮膚或(b)經(jīng)其他載體(如蚊子、蜱，蠅等)“傳遞”進入人體和動物宿主中的寄生蟲和微生物引起了許多疾病。一種穿透皮膚的生物是血吸蟲，在世界的許多熱帶和亞熱帶地區(qū)，是一種威脅人和動物生命的感染。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的估計，目前有200萬人感染了這種寄生蟲，另有600萬人受到威脅。[WHO控制血吸蟲病的專家委員會血吸蟲病對公共健康的危害和世界衛(wèi)生組織的死亡率通報，71657-662，1993]。到所述地方病區(qū)域旅游的人有感染此病并進一步傳播此病的很大危險。皮膚是這種寄生蟲進入人體和動物的唯一已知途徑，這種寄生蟲的感染階段(尾蚴)具有在水接觸后大約數(shù)分鐘穿透完整皮膚的能力。因此，干擾尾蚴進入皮膚的任何藥物基本都可以防止血吸蟲病。另一種稱為“夏令癢疹”或“尾蚴性皮炎”的疾病是由于動物血吸蟲(如鴨毛畢吸蟲)不小心進入人皮膚導致嚴重皮炎而引起的。這種疾病在美國、亞洲和新西蘭的許多活水湖及亞洲稻田中很普遍。同樣，鉤蟲寄生蟲，特別是美洲鉤蟲通過穿透完整的皮膚直接感染人和動物。成熟的蠕蟲生活在胃中，每天食血為生，并使宿主營養(yǎng)不良。此外，這種寄生蟲的感染常常伴有其他疾病。保守地估計可能約10億人感染鉤蟲。
節(jié)肢動物和有關(guān)的種在叮咬宿主后通過皮膚“傳遞”寄生蟲和產(chǎn)生微生物疾病的生物。最熟知和最大的問題是瘧疾，在世界的熱帶和亞熱帶地區(qū)，這種病會影響數(shù)百萬人。根據(jù)WHO的估計，瘧疾是世界上導致死亡的前5種病之一。在過去20年，由于藥物抗性株的出現(xiàn)，瘧疾問題更加嚴重。已知蚊子也是非寄生蟲性疾病如登革熱、黃熱病和其他疾病的傳播者。許多蜱會引起萊姆病、落磯山斑點熱、Ehrlichiosis，Coloradw Tick Fever，土拉菌病、回歸熱、PowassanEncephalitis和蜱麻痹。
白蛉也叮咬人宿主，由此將導入引起人利什曼病的生物體。還有許多可通過叮咬皮膚引起疾病的節(jié)肢動物(蚋、蚋蚊、恙螨、鹿蠅、蚤、蛇蠅、獵蝽等)。
與這些節(jié)肢動物和有關(guān)種引起的疾病無關(guān)，它們的叮咬是熱帶氣候和高溫夏季氣候時使人煩惱和不安的原因。所有這些疾病和不舒服造成的經(jīng)濟損失是顯著的。
本發(fā)明涉及用于預防寄生蟲病的物質(zhì)和方法。具體地說，本發(fā)明涉及預防由穿透皮膚的寄生蟲或經(jīng)節(jié)肢動物載體進入宿主動物的寄生蟲引起的寄生蟲病。本發(fā)明還涉及用于抗昆蟲的物質(zhì)和方法。
舉證性的寄生蟲病包括血吸蟲病夏令癢疹和由鉤口線蟲屬、板口線蟲屬、類圓線蟲屬和其他種類引起的疾病。舉證性的叮咬昆蟲包括蜱、白蛉、墨蚊、錐獵蝽、獵蝽、蚤、蚊和在人和動物中傳播傳染性疾病的其他節(jié)肢動物種。
在實施本發(fā)明中有用的物質(zhì)包括N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(DEET)和延長DEET效力并低于其通常所用濃度劑量的DEET制劑。所述制劑包括包封在脂質(zhì)體中的或與其他聚合物和多羥基化合物預聚物聯(lián)用的DEET。本發(fā)明的脂質(zhì)體/DEET制劑不需要為達到其效力而附著于皮膚的其他化學物質(zhì)部分。上述制劑還用于驅(qū)逐叮咬的昆蟲。
脂質(zhì)體可以是陰離子、陽離子或中性的。優(yōu)選的脂質(zhì)體是含L-α-磷酸酰膽堿、硬脂酰胺和膽甾醇的陽離子脂質(zhì)體。DEET的優(yōu)選濃度為約1％至約50％w/v。更優(yōu)選的濃度是7％至約10％。最佳濃度為約7.5％DEET。本發(fā)明的優(yōu)選多羥基化合物預聚物包括多羥基化合物預聚物2和多羥基化合物預聚物15。


圖1說明DEET對曼氏裂體吸蟲尾蚴的體外作用。DEET對曼氏裂體吸蟲的體外作用。將尾蚴放在預先用系列二倍稀釋的30％-0.24％DEET包被的96孔滴定板中。與DEET接觸不同的時間后，用中性紅排除法評估尾蚴的生存力百分比。每個試驗用189-440的“n”重復17次。
圖2說明脂質(zhì)體DEET(lipodeet)對曼氏裂體吸蟲尾蚴的體外作用。如果是10％的陽性脂質(zhì)體DEET制劑，將100μl應(yīng)用到刮過的小鼠腹部皮膚上，然后干燥15分鐘。在將脂質(zhì)體DEET在皮膚上已干燥的不同時間(4小時、24小時和48小時)，用連續(xù)的蒸餾水流將所述皮膚洗滌1分鐘，然后用30035S-標記的曼氏裂體吸蟲的尾蚴感染。感染后7天，壓縮的器官(compressed organ)放射自顯影確定皮膚和肺上的寄生蟲數(shù)。
在過去30-40年之間，不同的實驗室篩選了數(shù)種化學化合物賦予抗尾蚴穿透保護作用的能力。其中，在組織培養(yǎng)中，發(fā)現(xiàn)一些化合物如氯硝柳胺、Cederol、蒿甲醚，六氯酚、鄰苯二甲酸二酯、苯甲酸芐酯和來自本國植物的許多粗制品有顯著的殺尾蚴作用。但是，除氯硝柳胺(Naples，J.M.等，J.of Tropical Med.and Hygiene 95390-396 1992；Grenan，M.M.等，Rev.Inst.Med.Trop.SaoPaolo 27190-196(1985)；Ghandour，A.M.等，J.ofHelminthology，49，245-250(1975)；Fripp，P.J.等，South african MedicalJournal 47526-527(1974)；AbuElyazeed，R.R.等，Am.J.of Trop.Med.andHygiene 49403-409(1993))，在人中沒有一種化合物有臨床應(yīng)用。
N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(BEET)在許多昆蟲驅(qū)蟲藥中是活性成份。其相對的安全性和驅(qū)蟲的廣譜性(即大部分蚊株、蜱、白蛉等)使其成為幾乎理想的產(chǎn)品。另外，化學研究以及生產(chǎn)了許多美國政府確定的對不同種昆蟲有不同程度驅(qū)性DEET類似物和其它相關(guān)化合物，用于改變時間長度，同時改變安全線或其它缺陷。但沒有一種象DEET使用得這樣廣泛，盡管許多化合物(N-苯甲酰哌啶，N-甲苯甲酰哌啶，2-乙氧基苯甲酰胺，N-丁基N-乙酰苯胺，N-乙基-N-乙酰苯胺，N，N-二乙基-3-甲基苯甲酰胺，二乙基苯基乙酰胺，二甲基鄰苯二甲酸酯，N，N-二乙基-2，5-二甲基苯甲酰胺或DEET異構(gòu)體如N，N-二乙基-對甲苯甲酰胺和2-乙基-1，3-己二醇)作為昆蟲驅(qū)蟲藥對叮咬人和動物的昆蟲有相對的活性。
到目前為止，幾乎所有對DEET的研究都多次證實謹慎使用時，DEET是一種救生化學物質(zhì)。一旦應(yīng)用于皮膚，DEET有30分鐘至2小時的昆蟲驅(qū)蟲藥活性。但是，為了使活性超過60分鐘，需要經(jīng)常重復應(yīng)用高濃度DEET(70％這樣高)。令人遺憾的是，由于DEET通過皮膚大量吸收，這樣會在敏感個體和兒童中引起偶然的神經(jīng)毒性癥狀。(Abou-Donia，M.B.等，J of Toxicol and Clinical Toxicol321-16(1996)；Veltri J.C.，等J of Toxicol and Clinical Toxicol 321-16(1994)；Verschoyle R.D.等，F(xiàn)undamentals of Applied Toxicol 1879-88(1992)，Dorman D.C.，Verterinary Clinics of North America Small AnimalPractice 20387-391(1990))。因此，延緩DEET透皮吸收的任何試劑均可降低與高濃度DEET有關(guān)的毒性，并延長其在皮膚淺層上的驅(qū)蟲藥活性。此外，還有其它優(yōu)點，即如果DEET在皮膚上能夠保留較長的時間，則甚至較低濃度的DEET也可有效使用，由此降低與吸收有關(guān)的任何可能的毒性。
如下文所述，本發(fā)明提供了DEET的新應(yīng)用，賦予抗皮膚穿透性寄生蟲的保護作用。如下文所說明的，在應(yīng)用于皮膚后，DEET能夠非常有效地防止這些寄生蟲透過皮膚，由此使宿主免于致命的和/或致虛弱的疾病。結(jié)果還說明DEET制劑的驅(qū)蟲藥活性是水抗性的。甚至在應(yīng)用4小時后，這些大部分水生寄生蟲仍不能穿透皮膚。穿透DEET應(yīng)用區(qū)的寄生蟲在皮膚內(nèi)數(shù)分鐘內(nèi)被殺死，可以幫助宿主建立起抗所述寄生蟲的免疫反應(yīng)。
細胞內(nèi)表皮類脂是一組賦予皮膚屏障功能并由此在調(diào)節(jié)皮膚通透性方面起主要作用的異源極性類脂(Elias P.M.，Archives of Derm.Res.27095-102(1981))。由于這些類脂屏障，許多應(yīng)用于皮膚表面的傳統(tǒng)藥物不能到達作為位點。由于這一原因，引入了許多用于局部治療皮膚疾病的穿透增強劑(Santus等，J.Control.Rel.Subst.，251-27(1993))。但是，大部分這些穿透增強劑都干擾細胞內(nèi)類脂雙層，因此，常常有明顯的毒性或刺激性副作用。就此而言，證明一些聚合物和脂質(zhì)體是用于將藥物轉(zhuǎn)移到皮膚淺層的優(yōu)秀載體。
根據(jù)本發(fā)明，開發(fā)了兩種所述聚合物Pp2(多羥基化合物聚合物2)和Pp15(多羥基化合物聚合物15)和脂質(zhì)體制品用于傳遞DEET并延緩皮膚淺層DEET的吸收。因此，為了延長DEET在皮膚上的活性，制備了三種舉證性的10％DEET制劑(Pp2deet，Pp15deet和脂質(zhì)體DEET)。在應(yīng)用于皮膚時，在一次應(yīng)用后，這些制品就可賦予達48小時的抗皮膚穿透寄生蟲的保護作用。用14C-標記的DEET進行的藥理學和組織學研究表明在應(yīng)用后前24小時，這些制劑可使皮膚淺層保持＞90％涂敷的DEET。本發(fā)明制劑還可有效地抗某些叮咬昆蟲如蜱和蚊子。由于本發(fā)明制劑對皮膚穿透性寄生蟲和叮咬昆蟲有延長時間(即48小時以上)的強活性，所以本發(fā)明的長效DEET制劑對于野外控制通過皮膚獲得的感染性疾病有很大的潛力。
二十世紀六十年代中期，Alec Bagham提出磷脂在水的存在下可形成封閉的載體，這些載體的物理化學性質(zhì)與細胞膜相似。大部分磷脂是兩親的。兩親的類脂分子類似于一個垂滴(lollipop)，帶有一個磷脂形成的圓形親水頭和一個長疏水尾。這些兩親類脂中的一些分子平行排列并通過尾區(qū)連在一起，頭向外，形成類脂雙層。在水介質(zhì)中，所述雙層本身折疊形成內(nèi)部捕獲了水分子的閉合球?，F(xiàn)在將這些囊稱為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體是熱動力學穩(wěn)定的，而且在應(yīng)用于皮膚上時，將于角質(zhì)層中的類脂融合，由此不會穿透到很深的皮膚層。因此，這樣使脂質(zhì)體傳遞的藥物的全身性吸收降至最小。脂質(zhì)體的優(yōu)點是它們可能是無毒的，可降解的和非免疫原性的。此外，由于脂質(zhì)體的兩親性，它們可貯存水溶性和親脂物質(zhì)。重要的是如C.T.Wang(Vice-President of Research and Technology at theFormulation Technology Resource Center，Johson andJohnson ConsumerProducts Worldwide，Skillman NJ)強調(diào)的，沒有適合所有應(yīng)用的廣泛性脂質(zhì)體系統(tǒng)(參見“化妝品組分的傳遞系統(tǒng)技術(shù)趨勢和市場機會”，P.Bassett，Southborough，MA 1997)一種特殊類型和結(jié)構(gòu)設(shè)計的脂質(zhì)體系統(tǒng)通常需要一種選定的分子以便達到最大的脂質(zhì)體傳遞效果。
通常，脂質(zhì)體是用天然甘油磷脂如磷脂酰膽堿、膽固醇、硬脂酰胺、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油。在低切力調(diào)節(jié)下與水(或任何水溶性緩沖液)混合時，磷脂的每個分子將本身以相似的方向(頭向上，尾朝下)并排排列在一起形成片層。如果將DEET加到磷脂混合物中，類脂可溶性的DEET將均勻地分散在磷脂中間形成片層的一部分。然后這兩個所述片層尾-尾相連形成雙層膜，所述雙層膜在囊內(nèi)包裹了一小的水層。由于疏水特性，通常，許多這樣的囊由大到小套在一起，形成由水層分隔的多層同心圓磷脂球結(jié)構(gòu)。將這些球狀嚢稱為多層脂質(zhì)體膠團。由于可將DEET摻入所述膠團，我們杜撰了術(shù)語脂質(zhì)體DEET(lipodeet)用于稱呼含DEET的脂質(zhì)體。為了達到本發(fā)明目的，脂質(zhì)體DEET將指以任何濃度或形成摻入了DEET或其衍生物的任何脂質(zhì)體制品。由于脂質(zhì)體DEET使用水基緩沖液形成膠團，本發(fā)明開發(fā)了將抗寄生蟲藥物摻入到脂質(zhì)體DEET膠團的一系列可能的用途，所述膠團可有效防止通過皮膚引起的許多寄生蟲性感染。由于在我們的脂質(zhì)體DEET制品中所用了天然磷脂，因脂質(zhì)體而引起的對宿主的毒性作用是最小的。
在膠團磷脂分子中的靜電荷將最終決定脂質(zhì)體DEET制品的最后電荷。因此，帶有中性電荷的磷脂酰膽堿和膽固醇將產(chǎn)生中性脂質(zhì)體DEET。而將硬脂酰胺加到制品中將使脂質(zhì)體DEET帶正電荷。同樣，磷脂酰絲氨酸或磷脂酰甘油的加入將把總的負電荷賦予脂質(zhì)體DEET制品。在本發(fā)明中，我們使用了所有這三種不同電荷(正、負和中性)的脂質(zhì)體DEET，而且所有這些制品均得到相當近似的結(jié)果。
因此，本發(fā)明的制劑還具有額外的優(yōu)點，即包括抗蠕蟲藥、抗原生動物劑、疫苗等的許多水溶性藥物的組合均可被摻入到脂質(zhì)體DEET膠團中。此外，本發(fā)明還擴展了DEET和各種載體的應(yīng)用，所述載體包括，但不限于下列試劑如1-十二烷基氮雜環(huán)庚-2-酮(laurocparam，Azone)，Catzomes，六亞甲基月桂酰胺衍生物、氮雜環(huán)烷酮衍生物、吡咯烷酮、脂肪酸和萜烯，所述載體可將DEET保持了皮膚淺層。本發(fā)明還包活含DEET的微乳劑。所述微乳劑含有在油、水和兩親系統(tǒng)中的DEET，所述系統(tǒng)肉眼觀察時是單相的，光學觀察時是各向同性的，是熱動力學穩(wěn)定的，而且具有超低的界面張力值。當將DEET保持在皮膚淺層時，它對叮咬昆蟲有強驅(qū)避作用，對下文列出的皮膚穿透性寄生蟲有致死作用。DEET抗人和動物血吸蟲尾蚴階段的應(yīng)用如上所討論的，皮膚是血吸蟲寄生蟲進入人和動物體內(nèi)的唯一已知途徑。感染階段的寄生蟲(尾蚴)在水接觸后數(shù)分鐘內(nèi)穿透完整的皮膚。因此，任何干擾尾蚴進入皮膚的試劑均可有效防止血吸蟲病。下列實施例說明DEET對于曼氏裂體吸蟲的尾蚴是高度致死的，當將其應(yīng)用于皮膚時可防止進入以及感染的發(fā)生。在應(yīng)用一次后，長效作用的DEET制劑，特別是脂質(zhì)體DEET就可對宿主產(chǎn)生48小時的抗尾蚴穿透的保護作用，因此可抵御血吸蟲病。
用DEET可以防止或治療的另一種疾病，所述疾病是根據(jù)本發(fā)明可以用本文所述制劑防止由動物血吸蟲引起的在人類中稱為“夏令癢疹”或“尾蚴性皮炎”的疾病。在美國大湖區(qū)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多由下列血吸蟲引起的皮炎，所述血吸蟲包括鴨毛畢吸蟲、Trichobilharzia physellae、T.stagnicola、T.anatina、T.berghei，T.maegraithi，Giganthobilharzia huttoni，G.gyrauli，G.huronensis，G.sturniae，Austrobilharzia bariglandis，A.enneri，Ornithobiharzia canaliculata，O.pricei，Schistsosomatium douthitti。傳播這些疾病的蝸牛廣泛分布于在北美的許多湖泊中。所述疾病的特征是在與水接觸的皮膚上出現(xiàn)劇烈的搔癢，水腫和紅色的發(fā)炎區(qū)。一些感染還會導致失眠和發(fā)燒。在重復接觸后，反應(yīng)更強烈。由于我們的發(fā)明表明脂質(zhì)體DEET可非常有效地抗血吸蟲的尾蚴階段，因此將長效DEET應(yīng)用到皮膚上可防止尾蚴性皮炎?？蛊渌つw穿透性寄生蟲的應(yīng)用有一些利用皮膚作為進入身體之入口的人和動物線蟲寄生蟲，如美洲板口線蟲、鉤口屬和腸類圓線蟲。盡管這些寄生蟲僅在皮膚上停留很短的時間(數(shù)分鐘)，但DEET對這些皮膚穿透性寄生蟲有致死效果，由此，防止其通過皮膚遷移。因此，本發(fā)明還涉及宿主動物抗引起虛弱性疾病之許多皮膚穿透性線蟲寄生蟲的保護作用。用于控制蚊子傳播疾病的驅(qū)蚊應(yīng)用由于本發(fā)明DEET制劑的活性在皮膚上可保持48小時以上，因此可以比其它DEET制劑較低的濃度，將其用于驅(qū)避Anophilus和Culicine種蚊子?？跪绾万鐐骷膊〉膽?yīng)用蜱傳性感染是北美發(fā)展最快的一種感染性疾病。由蜱傳播的感染包括萊姆病、巴貝蟲病、艾希體病、落磯山斑點熱、克羅拉多蜱傳熱、土拉菌病、回歸熱、Powassan大腦炎和蜱麻痹。這些感染性因素在其進食過程中經(jīng)蜱唾液傳遞到宿主中。根據(jù)疾病控制和預防中心(CDC)的報道，在1994-1997年間在美國報告的蜱傳播的病例比麻疹、流行性腮腺炎、百日咳、風疹、白喉、霍亂、鉤端螺旋體病、麻風病、鼠疫、破傷風、旋毛蟲病、傷寒、賈第鞭毛蟲病和軍團病的總和還多。因此，任何可驅(qū)避或防止蜱叮咬皮膚的試劑均可有效防止所有蜱傳播的疾病。在實驗室條件下，已知DEET對蜱是有效的(Solberg，V.B.等，J.of Med.Entomology32870-875(1995)；Kumar，S.等，Med.Veterinary Entomology 647-50(1992)；Couch P.等，American Journal of Hosp.and Pharm.491164-1173(1992))。但是，在野外條件下，由于DEET從皮膚上快速清除而且活性時間短而使將DEET用于控制蜱叮咬受到限制。通過蜱侵染的植物，每隔30分鐘將DEET應(yīng)用于放牧動物或長途旅行的人是不現(xiàn)實的。如下所述，當將10％脂質(zhì)體DEET應(yīng)用于皮膚時，對蜱附著的抑制作用達72小時以上。確實叮咬應(yīng)用過脂質(zhì)體DEET之皮膚的蜱將在數(shù)分鐘內(nèi)被殺死。因此，本發(fā)明的長效DEET制劑(脂質(zhì)體DEET，Pp2deet，Pp15deet)在野外條件下對于控制蜱叮咬是非常有效的，并由此可防止蜱傳播的疾病?？蛊渌ＲЮハx如白蛉、淮獵蝽、蚤和墨蚊的應(yīng)用本發(fā)明的長效DEET制劑也可用于控制其它叮咬昆蟲如傳播利什曼病的白蛉，傳播錐蟲病的淮獵蝽和傳播盤尾絲蟲病的墨蚊。由于脂質(zhì)體DEET可在較長的時間內(nèi)保持在皮膚淺層上，應(yīng)用一次后就可在較長的時間內(nèi)驅(qū)避所述叮咬性昆蟲。在昆蟲易叮咬區(qū)，這還會降低于重復應(yīng)用DEET有關(guān)的偶發(fā)毒性?？顾魏推渌つw叮咬性生物如虱的應(yīng)用由于已經(jīng)表明DEET可有效地抗水蛭和虱(Mehr Z.A.等，J.of MedEntomology 21665-669(1984)；Bar-Zeev M.等，J.of Med Entomology9215-218(1972))，因此，本發(fā)明制劑也可用于控制水蛭叮咬和虱侵染的方法。
提供下列實施例僅僅是為了說明的目的，而不對所附權(quán)利要求的本發(fā)明范圍構(gòu)成限制。
實施例1描述了放射性標記尾蚴的制備和收集。
實施例2描述了用尾蚴感染動物。
實施例3描述了整個器官的放射自顯影圖。
實施例4描述了篩選作為抗穿透試劑的化合物。
實施例5描述了DEET對曼氏裂體吸蟲尾蚴的體外作用。
實施例6描述了DEET對尾蚴形態(tài)學的影響。
實施例7描述了體內(nèi)作用。
實施例8描述了不同DEET濃度對尾蚴穿透和尾蚴穿透和蠕蟲定居的影響。
實施例9描述了于曼氏裂體吸蟲接觸后，DEET的作用。
實施例10描述了在單次皮膚應(yīng)用后，DEET的活性時間。
實施例11描述了延長DEET作用之制劑的制備。
實施例12描述了有關(guān)DEET制劑在皮膚上定位的研究。
實施例13描述了DEET制劑對叮咬性昆蟲的作用。
實施例14描述了長效DEET制劑對蜱附著于皮膚的影響。
實施例1放射性標記的尾蚴的制備和收集從馬薩諸塞州大學(Lowell，MA)的Fred Lewis博士處得到用曼氏裂體吸蟲感染的Biomphalaria glabrata種蝸牛，作為國家過敏和感染性疾病研究所之轉(zhuǎn)包合同的一部分(AI #052590)。在85-87°F恒定溫度的黑暗室內(nèi)，將被感染的蝸牛保持于連續(xù)通氣的無氯水中。蝸牛箱中的水一星期換3次，用高壓鍋消毒的萵苣和一片白堊喂養(yǎng)蝸牛。感染后約30天，作為于暴露于亮光源1小時的結(jié)果，通過觀察尾蚴的出現(xiàn)，逐個檢查蝸牛中是否存在寄生蟲。確定了釋放尾蚴的蝸牛后，按以前Li等(Parasitology International，4655-65(1997))所述，用35S-甲硫氨酸放射性標記蝸牛。簡而言之，在37℃黑暗中將懸浮在蒸餾水中的蝸牛(0.5ml/蝸牛)與20μCi/ml放射性標記的35S-甲硫氨酸(Tran35S-label，ICNPharmaceuticals，Inc.，Invine，CA；比活性1047Ci/mmol；目錄#51006)接觸。于放射性同位素接觸16小時后，漂洗蝸牛并移到新鮮的通氣水中，在誘導尾蚴釋放前3天保持在黑暗中。
通過將蝸牛懸浮在蒸餾水，然后將其與亮光源接觸1小時來收集尾蚴。收集出現(xiàn)的放射性標記的尾蚴并通過金屬篩(38μm；Newark Wire Cloth Co.，Newark，NJ)濃縮。收集后，將放射性標記的尾蚴懸浮在蒸餾水中，計數(shù)并用于感染。該方法可穩(wěn)定地產(chǎn)生＞99％的放射性標記的尾蚴。
實施例2用曼氏裂體吸蟲感染實驗室動物為了進行體內(nèi)動物實驗，使用從Charles River實驗室(Wilmington，MA)購買的重約18-20克的CD1雄性小鼠。在這些實驗中動物的使用符合動物福利法和其它聯(lián)邦法規(guī)以及如國家健康研究所出版物中說明的有關(guān)動物的條例實驗室動物的管理和使用指南。經(jīng)尾皮膚或刮過的腹部皮膚，用曼氏裂體吸蟲逐個感染小鼠。對于經(jīng)尾皮膚感染來說，將小鼠圈在籠中，室溫下，將尾在試管中浸60分鐘，所述試管含有懸浮在10ml蒸餾水中的250-30035S-標記的尾蚴。對于經(jīng)腹部皮膚感染來說，將小鼠仰面朝上綁附。刮過腹部皮膚后，將一滴蒸餾水中的150-20035S-標記的尾蚴應(yīng)用于皮膚，用蓋玻片覆蓋并暴露30分鐘。
實施例3整個器官的放射自顯影為了確定皮膚穿透和蠕蟲定居的情況，在感染后7天從各小鼠中取出按上述與尾蚴接觸的整個尾皮膚或腹部皮膚區(qū)和肺并按以前有關(guān)壓縮器官放射自顯影技術(shù)的描述(Li JW等，Parasitology International 4655-65(1997))加工所述器官。簡而言之，將皮膚和肺固定在紙板上，用塑料罩覆蓋并在室溫于組織壓力下保持48小時。然后在-70℃將壓縮和干燥的組織暴露于X射線膠片(Fuji RX，F(xiàn)isher Scientific，Pittsburgh，PA)7-9天。放射自顯影后，計數(shù)暗點(代表在膠片上的還原銀焦點)然后計算蠕蟲定居百分比(點數(shù)/用于感染的尾蚴總數(shù)×100)。這些研究的結(jié)果表明約28％以上有效劑量的尾蚴穿透了完整的皮膚。占進入皮膚的尾蚴總數(shù)的50％以上的尾蚴在7天后遷移到肺。
實施例4DEET作抗血吸蟲尾蚴的強抗穿透劑在過去30年中，篩選了多種化合物特別是在皮膚應(yīng)用后賦予抗尾蚴穿透之保護作用的能力。其中，發(fā)現(xiàn)一些化合物如N，N-二乙基月桂酰胺、氯硝柳胺、Cederol、六氯酚、二丁基鄰苯二甲酸酯和芐基苯甲酸酯有顯著的體外殺尾蚴作用(Naples，J.M.等，同上文，Greman，M.M.等，同上文；Ghandour，A.M.等，同上文；Fripp，P.J.等，同上文；Abu-Elyazeed RR等，同上文)。但是除氯硝柳胺外，在野外條件下，其它化學物質(zhì)中沒有一個有臨床應(yīng)用試驗。
在篩選用于Cederol的皮膚應(yīng)用的適宜載體的研究中，從杉木油中分離一種化學物質(zhì)，并表明在體外對尾蚴有一些殺尾蚴活性(Naples JM等，同上文)，發(fā)現(xiàn)含N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(BEET)的載體本身就可很有效地防止尾蚴的皮膚穿透。對載體中各組分的進一步分析表明該制品的抗穿透活性來自DEET。
實施例5對曼氏裂體吸蟲尾蚴的體外作用以前述的觀察結(jié)果為基礎(chǔ)，檢測DEET對曼氏裂體吸蟲尾蚴的作用。DEET是市售的，可從Fluka化學公司(Ronkonkoma，NY)購買。為了進行體外研究，用異丙醇(Sigma，St.Louis，MO)制備30％-0.24％的DEET系列二倍稀釋物，將各50μl每個稀釋物轉(zhuǎn)移到96孔平底微滴定板(Costar，Cambridge)的每個孔中。每個對照孔加入50μl異丙醇。然后將平板保持于通風櫥中，過夜蒸發(fā)液體。第二天，將懸浮在50μl RPMI-1640培養(yǎng)基(pH7.4；Gibco BRL)或磷酸緩沖的鹽(PBS，pH7.0)的約50個曼氏裂體吸蟲尾蚴放到各孔中，在30分鐘、60分鐘和4小時時檢測尾蚴的生存力。在任何一給定的實驗中，對每個稀釋度和每個時間點共完成17個復制物。為了確定尾蚴的生存力，在實驗末將10μl 0.05％中性紅(Sigma Chemical Co.)加到各孔中，然后按He等所述(Acta Zoologica sinica，31240-245(1985))確定活和死尾蚴的百分比。
這些體外研究表明在15％和15％以上的濃度，DEET對于曼氏裂體吸蟲尾蚴是高度致死的(見圖1)。當于所述濃度的DEET接觸時，尾蚴即刻不動。中性紅染色30分鐘后表明100％的尾蚴死亡。定時研究表明DEET濃度7.5％時，所有尾蚴在5分鐘內(nèi)不動，在4小時末100％尾蚴死亡。但是DEET濃度低于7.5％時，使曼氏裂體吸蟲尾蚴不動和殺死所述尾蚴的效果較差。
實施例6DEET對尾蚴形態(tài)學的的影響通過透射電鏡研究評估DEET對尾蚴的影響。在這些實驗中，將懸浮在100μlPBS中的300-500曼氏裂體吸蟲尾蚴放在96孔平板的各孔中，所述平板按上述用不同濃度的DEET(7.5％-40％)或異丙醇(對照)包被。與DEET接觸5、10、20、30和240分鐘后收集樣品并按Salafsky等所述進行透射電鏡加工(Exper.Parasitol.67116-127(1988))。簡而言之，將從各試管中收集的尾蚴轉(zhuǎn)移到含PBS加10％胎牛血清(Sigma Chemical Co.)的新鮮試管中，然后通過以500rpm(300g)離心5分鐘濃縮成顆粒。然后于4℃，在含3％戊二醛和1％甲醛的0.1M磷酸緩沖液(pH7.2)的固定劑中將顆粒固定過夜。用1％四氧化鋨固定后1小時，將顆粒通過分級的丙酮系列脫水，然后植入環(huán)氧類樹脂。在用乙酸雙氧鈾和檸檬酸鉛染色后，用Hitachi H-500透射電子顯微鏡檢測切片。
正常尾蚴的透射電子顯微鏡圖表明有完整的、有皺紋的帶外糖萼的皮層，單膜，沒有細胞體顆粒。肌肉層和較深的實質(zhì)是完整的，沒有水腫或退化的變化。
但是與7.5％DEET接觸后，觀察到兩種超結(jié)構(gòu)改變在其向童蟲轉(zhuǎn)化的過程中，模擬尾蚴皮層中正常變化的轉(zhuǎn)化變化及表明有嚴重細胞損傷的退化變化。這兩種變化早在接觸后5分鐘就出現(xiàn)了，但隨接觸過程逐漸嚴重。DEET接觸后5分鐘的典型變化包括細胞體顆粒遷移到皮層中(表明轉(zhuǎn)化變化)，糖萼量減少，以及早期退化變化如內(nèi)和外細胞膨脹，在實質(zhì)中擴散水腫變化及病灶(focal)溶解。在所有檢測的寄生蟲中均觀察到這些變化，只是程度不同。
在接觸10到30分鐘的過程中，這些變化有所發(fā)展。失去糖萼的轉(zhuǎn)化變化和細胞體顆粒遷移更加明顯，但是通常因退化變化而變得不顯著。細胞外液體的大量積累是常見的，引起皮層變平，觀察到完整皮層的病灶裂口。在肌肉層中肌絲的液泡化、凝集和破壞的細胞內(nèi)退化變化，核腫脹以及染色質(zhì)濃縮和細胞溶解隨時間而發(fā)展。在與DEET接觸后240分鐘觀察尾蚴的Frank溶解。
實施例7DEET對尾蚴通過皮膚的體內(nèi)穿透作用和小鼠感染的定居的影響鑒于前述結(jié)果，通過實驗以確定DEET對尾蚴體內(nèi)穿透作用的影響。
為了將DEET應(yīng)用于尾皮膚，將小鼠逐個單獨放在籠中，將其尾浸在7.5％DEET溶液(用異丙醇制備的)中5分鐘。應(yīng)用后，將皮膚空氣干燥30分鐘，按實施例3所述，與放射性標記的曼氏裂體吸蟲尾蚴接觸前，用蒸餾水漂洗1分鐘。
為了將DEET應(yīng)用于腹部皮膚，將小鼠腹部朝上固定，然后刮其腹部。將200μl適宜濃度的DEET異丙醇溶液滴在腹部上，然后使其干燥15分鐘。干燥后，用蒸餾水將皮膚洗滌1分鐘，然后于放射性標記的尾蚴接觸30分鐘。
體內(nèi)研究的結(jié)果表明在僅用異丙醇處理的對照動物中，顯著比例(28％以上)的感染量穿透了完整的皮膚。在7天末，占進入皮膚50％以上的尾蚴遷移到肺。在感染前將7.5％DEET應(yīng)用于皮膚會顯著降低寄生蟲穿透完整皮膚的能力。這些結(jié)果表明，在總感染量中僅0.13％設(shè)法穿透了7.5％DEET涂覆的皮膚(表1)。但是，在用7.5％DEET處理后，其遷移到肺的能力完全喪失(表1)。這表明7.5％DEET對于裂體吸蟲尾蚴的強抗穿透劑。
表1組 定居蠕蟲的百分比皮膚 肺 總量對照 9.918.6 28.5±1.2％±4.1％±6.4％7.5％DEET0.13 0 0.13±0.01％ ±0.01％N＝10DEET對尾蚴進入小鼠皮膚和感染定居的影響實施例8不同濃度DEET對尾蚴穿透作用和蠕蟲定居的影響用不同濃度DEET(5％、10％、20％、40％)重復實施例7中的實驗。在5％時，保護作用僅為72％，這表明該濃度DEET不完全有效，而當將10、20或40％的DEET應(yīng)用到皮膚上時，對于抑制尾蚴進入小鼠皮膚是100％有效。因此這些研究證實了上述結(jié)果并表明DEET可成功地用于抑制曼氏裂體吸蟲的感染。
實施例9曼氏裂體吸蟲感染后DEET的作用為了確定DEET是否對尾蚴的穿透作用和與尾蚴接觸后的遷移有任何影響，我們在感染后的不同時期將40％DEET應(yīng)用到皮膚上。非常確定的是，進入后，寄生蟲在遷移到肺前，在皮膚上保持24-72小時。因此，通過實驗以確定在感染后將DEET應(yīng)用到皮膚上是否能夠殺死寄生蟲。如果有效，用DEET可以治療潛在的偶然感染。用放射性標記的尾蚴經(jīng)腹部皮膚(如實施例2所述)感染小鼠，然后在感染后30分鐘、4小時、24小時或48小時，將40％DEET應(yīng)用于皮膚。通過壓縮器官放射自顯影(如實施例7所述)確定蠕蟲定居。這些研究表明在與尾蚴接觸30分鐘后，將DEET應(yīng)用于皮膚可100％抑制感染。但是在感染后4小時或更長的時間，應(yīng)用DEET則沒有保護作用。這些研究表明可以用DEET甚至在感染后30分鐘也可有效地控制血吸蟲病。
實施例10單次皮膚應(yīng)用后DEET的活性期再進行實驗以觀察單次應(yīng)用后，DEET在皮膚上的殺尾蚴活性能保持多長時間。在這些實驗中，將10％DEET應(yīng)用于刮過的小鼠腹部皮膚，然后使其干燥。DEET應(yīng)用后30分鐘，用流動的蒸餾水將皮膚區(qū)連續(xù)洗滌1分鐘。在DEET應(yīng)用后的不同時間點(30分鐘、1小時，4小時和24小時)，用放射性標記的尾蚴感染小鼠(如實施例2所述)，然后，通過壓縮器官放射自顯影(如實施例3所述)確定蠕蟲定居情況。這些研究表明感染后應(yīng)用DEET 30分鐘，1小時和4小時抗血吸蟲病的保護作用分別為100％、98±1％和85±1％。但是，感染后24小時應(yīng)用則沒有任何保護作用。因此，這些結(jié)果表明DEET在皮膚上的效果持續(xù)的時間較短，僅30分鐘到1小時。
實施例11延長DEET在皮膚上作用的制劑為了鑒定在皮膚上層，特別是角質(zhì)層上能夠?qū)EET活性保持較長時間的適宜載體，我們分析了多羥基化合物預聚物2(Penederm Incorporated，F(xiàn)oster City，CA；Barnet Products Corp.Englewood Cliffs，NJ供應(yīng))，多羥基化合物聚合物15(Barnet Products Corp.)和帶正電荷脂質(zhì)體試劑盒(L-α-磷脂酰膽堿63μmol，硬脂酰胺18μmol，膽固醇9μmol，編號47H8350，Sigma目錄號L-4395)的能力。通過將1ml 100％DEET溶液加到9ml 10％多羥基化合物預聚物2的異丙醇溶液中，然后在室溫劇烈攪拌10分鐘來制備Pp2deet(含10％DEET加10％多羥基預聚物2異丙醇溶液的制品)。按照與Pp2deet相似的方法制備Pp15deet(10％DEET加10％多羥基化合物預聚物15的異丙醇溶液)。
其它濃度的多羥基化合物預聚物和DEET也可用于本發(fā)明實踐。例如多羥基化合物預聚物濃度可以為約1％(w/v)至70％(w/v)，而約10％(w/v)是優(yōu)選的。
通過將1.0ml 100％DEET加到63μmol L-α-磷脂酰膽堿，18μmol硬脂酰胺和9μmol膽固醇中制備帶正電荷的多層脂質(zhì)體DEET。將混合物徹底混合直到形成均勻的溶液。然后通過將9.0ml磷酸緩沖鹽水(PBS)加到所述混合物中并在室溫劇烈攪拌10分鐘來制備10％的多層脂質(zhì)體DEET膠團溶液。然后將脂質(zhì)體DEET混合物在室溫放置10分鐘。在顯微鏡(x100)下觀察膠團的大小和結(jié)構(gòu)以證實達到均勻。本發(fā)明的脂質(zhì)體不需要象5173303專利(引入本文作為參考)所要求的那樣要求存在錨分子如吡啶硫酮。
為了確定所述制劑對尾蚴穿透作用和遷移的影響，將載體，Pp2deet、Pp15deet或脂質(zhì)體DEET應(yīng)用到實施例7中詳述的腹部皮膚上。在皮膚應(yīng)用后的不同時間點(4小時，24小時或48小時)，用放射性標記的尾蚴感染小鼠，然后通過壓縮器官放射自顯影確定蠕蟲定居。這些研究表明于單獨的DEET相比，所檢測的所有3種載體均將DEET在皮膚上的作用延長至48小時。圖2說明了這些結(jié)果。在所檢測的3種載體中，脂質(zhì)體DEET似乎在延長DEET在皮膚上的活性方面比多羥基化合物預聚物更有效，盡管所用的3種化合物都是有效的。這些數(shù)據(jù)證明本發(fā)明的制劑，長效DEET制品可將DEET在皮膚上的活性延長較長的時間，因此將其吸收和分解代謝以及毒性降至最小。
可以用電荷不同(指這些脂質(zhì)體為正、負或中性的)或親水分子組成不同(水溶性廣譜驅(qū)蟲藥如哌喹酮或嗪苯達唑代替PBS)的其它脂質(zhì)體制品提供含或不含DEET的聯(lián)合治療/預防制劑。
實施例12DEET制劑量在皮膚上的定量和定位用14C-標記的脂質(zhì)體DEET制品(14C-DEET加上述帶正電荷的脂質(zhì)體)定量分析并評估用脂質(zhì)體DEET制劑給藥時在皮膚上保持的DEET量并鑒定DEET定位的皮膚層。通過閃爍計數(shù)和放射自顯影測量DEET在不同皮膚層上的沉積(用組織染色確定)。將所述制劑涂于皮膚，然后在應(yīng)用后的不同時間(30分鐘、4小時、8小時、24小時、48小時和72小時)取皮膚片并進行評估。這些研究表明在應(yīng)用后30分鐘、4小時和8小時，100％14C-脂質(zhì)體DEET存在于皮膚淺層。24小時后的閃爍計數(shù)表明仍有84±2％的14C-脂質(zhì)體DEET存在于皮膚上。在48和72小時的分析表明在皮膚上的14C-脂質(zhì)體DEET量逐漸減少(分別為52±12％和36±17％)。Artmann等，藥物研究，4012-28(1965)所述的皮膚帶(strip)技術(shù)證實了這些結(jié)果。這些研究表明在單次應(yīng)用后前24小時，91％以上的14C-脂質(zhì)體DEET保持在角質(zhì)層中。
實施例13DEET對蜱的作用為了確定DEET對蜱附著和進食的影響，我們使用從Oklahoma大學購買的兩種蜱Amblyoma americanum和Dermacetor variabilis。使蜱以從Charles River購買的雄性新西蘭白兔的耳為食。為了喂養(yǎng)，將5只蜱放入用指甲膠附著于兔耳的60μm篩胞孔(Fisher Scientific)中。前8小時每隔30分鐘觀察蜱以評估皮膚附著和進食行為。將蜱附著定義為5只蜱中的3只附著于耳所需的最短時間。如果甚至在24小時后蜱仍不附著，則將其取出，將5只新蜱放入相同的孔中并按前述觀察。對這兩種蜱連續(xù)觀察72小時。每個種和每次處理均使用不同的兔。結(jié)果表明Dermacetor和Amblyoma與正常兔耳的附著時間分別為4.5小時和20小時。但是，在放入蜱前用10％DEET處理耳會導致Dermacetor在開始7.0小時沒有蜱附著，Amblyoma在開始22.0小時沒有蜱附著。這表明DEET在相應(yīng)基線上的數(shù)小時內(nèi)都是有效的。在此項研究中的所有蜱直到附著都是有活性的。這些結(jié)果證實了前面的研究，DEET是抗蜱叮咬的有效驅(qū)蟲藥，盡管作用期較短。
實施例14脂質(zhì)體DEET對蜱的作用為了確定長效脂質(zhì)體DEET對蜱附著和進食行為的影響，將上述100μl 10％脂質(zhì)體DEET制劑應(yīng)用于兔耳的背面皮膚，然后按實施例13所述將5只蜱放入每個篩杯中。前8小時每隔30分鐘，然后每隔24小時監(jiān)測蜱。連續(xù)72小時每隔24小時放入5只新蜱。在這些實驗中，使用與實施例13相同的兩種蜱。結(jié)果表明在脂質(zhì)體DEET應(yīng)用后甚至72小時內(nèi)，蜱都不能附著于皮膚上。在前48小時內(nèi)放入的蜱在放入后5小時內(nèi)全部死亡，這表明10％脂質(zhì)體DEET對蜱是致死的。在48小時后放入的蜱中，3/5在5小時內(nèi)死亡，其余的甚至到72小時也未能附著。這些結(jié)果表明脂質(zhì)體DEET在單次應(yīng)用后72小時內(nèi)對于抵御蜱叮咬100％有效。
實施例15脂質(zhì)體DEET對其它叮咬昆蟲的影響也可將本發(fā)明制劑用作驅(qū)蟲藥抵御其它在人和動物中傳播死亡性感染的叮咬性節(jié)肢動物媒介如白蛉、蚊子和臭蟲。實驗宿主如小鼠(用于臭蟲)、狗(用于白蛉)和人(蚊子)是本領(lǐng)域熟知的。用本發(fā)明制劑處理所述宿主動物，然后評估所述節(jié)肢動物媒介以所述宿主為食的能力。通過本領(lǐng)域熟知的方法很容易確定所述制劑的適宜劑量。
前述實施例是為了說明而不是象所附權(quán)利要求一樣以任何方式限制方面的范圍。引用的文獻將引用的文獻引入本文作為參考Artman，C，Roding J，Ghyczy M，來自大豆磷脂的脂質(zhì)體作為經(jīng)皮藥物的載體。通過帶放射性標記的大分子和鹽—負載的脂質(zhì)體進行體內(nèi)性能研究。藥物研究4012-28，1965。Abou-Donia MB，wilmarth KR，Jensen KF，Oehme FW，Kurt TL，因同時接觸吡哆斯的明溴化物、N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺和除蟲精而產(chǎn)生的神經(jīng)毒性海灣戰(zhàn)爭化學接觸的本質(zhì)。毒物學和臨床毒物學雜志321-16，1996。Abu-Elyazeed RR，Podgore JK，Mansour NS，Kilpatric ME，1％氯硝柳胺作為曼氏裂體吸蟲尾蚴的熱帶抗?jié)B透劑(antipenetrant)。美國熱帶醫(yī)學和衛(wèi)生雜志49403-409，1993。Bar-Zeev M，Gothilf，S，蚤驅(qū)蟲藥的實驗室評估。醫(yī)學昆蟲學雜志9215-218，1972。Couch P，Johnson CE，萊姆病的預防。American Journal of Hosp.andPharm.491164-1173，1992。Dorman DC，N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(DEET)昆蟲驅(qū)蟲藥中毒。北美小動物實踐的獸醫(yī)門診20387-391，1990。Elias PM，類脂和表皮通透性屏障。皮膚病學研究檔案，27095-102，1981。Fripp PJ，Armstrong FL，六氯雙酚皮膚清潔劑作為尾蚴驅(qū)蟲藥的效力。南非醫(yī)學雜志47526-527，1974。Ghandour AM，Webbe G.，殺軟體動物劑氯硝柳胺的亞致死濃度對曼氏裂體吸蟲尾蚴感染性的影響。蠕蟲學雜志49245-25-，1975。Grenan MM，Greene LK，Davidson，DE Jr.，Jones DH，六氯雙酚作為局部施用的化學物質(zhì)用于預防小鼠的曼氏裂體吸蟲感染。Rev.Inst.Med.Trop.SaoPaolo27190-196，1985He YX，Mao CS，Hu YQ比較尾蚴和新轉(zhuǎn)化的日本裂體吸蟲血吸蟲童蟲之間的一些生理學特征。Acta Zoologica 31240-245，1985。Kumar S，Prakash S，Kaushik MP，Rao KM，3種抗蜱血紅扇頭蜱和波斯銳緣蜱驅(qū)蟲藥的活性比較。醫(yī)學獸醫(yī)昆蟲學647-50，1992。Li JW，Ramaswamy K，Salafsky B，He YX，Shibuya T曼氏裂體吸蟲尾蚴的反式35S一標記用于小鼠體內(nèi)示蹤血吸蟲童蟲遷移的一種不太昂貴的工具。國際寄生蟲學4655-65，1997。Mehr ZA，Rutledge LC，Inase，JL，抗開皇客蚤(SiphonoapteraPulicidae)之市售和實驗驅(qū)蟲藥的評估。醫(yī)學昆蟲學雜志21665-669，1984。Monika-Hildegard S，Korting HC，脂質(zhì)體作為穿透增強劑和控釋單位?！巴钙ご龠M劑”，E.W.Smith and H.I.Maibach編，CRC出版社，紐約，1995。Naples JM，Schiff CJ，Rosler KH，曼氏裂體吸蟲雪松油和其不同組分的殺尾蚴作用。熱帶醫(yī)學和衛(wèi)生學雜志95390-396，1992。Salafsky B，Ramaswamy K，He YX，Anderson GL，Nowicki DK，Shibuya T評估N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(DEET)作為局部試劑用于預防因曼氏裂體吸蟲尾蚴引起的皮膚穿透。熱帶醫(yī)學和衛(wèi)生學雜志(在印刷)，1998。Salafsky B，F(xiàn)usco AC，Whitely K，Nowicki D，Ellenberger B曼氏裂體吸蟲尾蚴轉(zhuǎn)化方法的分析。實驗寄生蟲學67116-127，1988。Santus GC，Baker RW，透皮促進劑專利文獻?？刂漆尫盼镔|(zhì)雜志，251-27，1993。Solberg VB，Klein，TA，McPherson KR，Bradford BA，N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺和哌啶驅(qū)蟲藥(A13-37220)抗美洲鈍眼蜱(AcriIxodidae)的野外評估。醫(yī)學昆蟲學雜志32870-875，1995。Veltri JC，Osimitz TG，Bradford DC，Page BC，自1985-1989因接觸昆蟲驅(qū)蟲藥N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(DEET)而對毒素控制中心的要求的回顧。毒物學和臨床毒物學321-16，1994。Verschoyle RD，Brown AW，Nolan C，Ray DE，Lister T，N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺和N，N-二甲基-2，2-二苯基乙酰胺在大鼠中的急性毒性、神經(jīng)病理學和電生理學比較。應(yīng)用毒物學基礎(chǔ)1879-88，1992。Wang，J.C.T.，化妝品成分的傳遞系統(tǒng)技術(shù)、趨勢和市場機遇。藥物和市場開發(fā)8166，1997。有關(guān)血吸蟲病控制的WHO專家委員會血吸蟲病對公共健康的影響疾病和死亡率。世界衛(wèi)生組織通報71657-662，1993。
權(quán)利要求
1一種含脂質(zhì)體和N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(DEET)的抗寄生蟲組合物。
2權(quán)利要求1的組合物，其中所述脂質(zhì)體選擇陽離子、陰離子和中性脂質(zhì)體。
3權(quán)利要求1的組合物，其中還含有抗蠕蟲藥。
4權(quán)利要求1的組合物，其中所述脂質(zhì)體包括L-α-磷脂酰膽堿、硬脂酰胺和膽固醇。
5權(quán)利要求1-4的任一組合物，其中所述DEET的含量是約1％至約50％。
6權(quán)利要求1-4的任一組合物，其中所述DEET的含量是約7％至約10％。
7權(quán)利要求1-4的任一組合物，其中所述DEET的含量是約7.5％。
8一種含有脂質(zhì)體和N，N-二乙基-m-甲苯甲酰胺(DEET)的昆蟲驅(qū)蟲藥組合物。
9權(quán)利要求8的組合物，其中所述脂質(zhì)體選擇陽離子、陰離子和中性脂質(zhì)體。
10權(quán)利要求9的組合物，其中所述脂質(zhì)體包括L-α-磷脂酰膽堿、硬脂酰胺和膽固醇。
11權(quán)利要求8-10中任一權(quán)利要求的組合物，其中所述DEET含量是約1％至約50％。
12權(quán)利要求8-10中任一權(quán)利要求的組合物，其中所述DEET含量是約7％至約10％。
13權(quán)利要求8-10中任一權(quán)利要求的組合物，其中所述DEET含量是約7.5％。
全文摘要
提供了含脂質(zhì)體和其它載體的新的DEET制劑。還提供了用于防止血吸蟲病和其它寄生蟲和微生物基本的方法和物質(zhì)。還提供了用于驅(qū)避叮咬昆蟲的改進的物質(zhì)和方法。
文檔編號A61K9/127GK1253774SQ9812037
公開日2000年5月24日 申請日期1998年8月9日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月9日
發(fā)明者伯納德·薩拉夫斯基, 拉馬斯瓦米·卡里安納桑達拉姆, 澀谷武 申請人:伯納德·薩拉夫斯基, 拉馬斯瓦米·卡里安納桑達拉姆, 澀谷武