專利名稱：用于防治肝癌的草藥制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治肝癌的草藥制劑。更明確地說，本發(fā)明涉及一種草藥制劑，該藥劑包括特別是對乙型肝炎病毒具有良好防治作用并含4種主要天然藥物，即白花蛇舌草(Hedyotidis herba)，姜黃(Curcumaelongae rhizoma)，虎杖(Polygoni cuspidati radix)和山豆根(Sophorae tonkinesis radix)的可注射組合物；和對脂肪肝和肝硬變有防治作用并含十種天然藥物即白花蛇舌草，重樓(Paridisrhizoma)，虎杖，山豆根，龍膽草(Gentianae scabrae radix)，大黃(Rhei rhizoma)，連翹(Forsythiae fructus)，赤芍(Paeoniae radix rubra)，姜黃和石菖蒲(Acori graminei rhizoma)的口服組合物，通過兩種組合物的聯(lián)合給藥，能有效地阻止包括肝炎，脂肪肝和肝硬變的肝臟疾病發(fā)展成為肝癌并治療肝癌。
肝癌的病因?qū)W尚未明確建立。不過，統(tǒng)計(jì)學(xué)上肝癌具有特征事實(shí)，即其發(fā)生率在四十到六十歲的男性中遠(yuǎn)較女性為高，并它可以并發(fā)接近80％的肝硬變和10％的丙型肝炎。該特征與下述事實(shí)相一致，即在肝癌高發(fā)地區(qū)，例如遠(yuǎn)東和東南亞包括韓國，南歐，非洲等地也有乙型肝炎病毒帶菌者的高發(fā)頻數(shù)。在這些地區(qū)，可以發(fā)現(xiàn)肝癌侵害一個家庭的多數(shù)成員。進(jìn)一步地，包括肝硬變，慢性肝炎等的慢性肝病都有發(fā)展成肝癌的相對高的傾向，而不管是乙型肝炎和丙型肝炎。此外，已知由慢性肝炎和肝硬變發(fā)展成肝癌的頻數(shù)是飲酒或吸煙的6-8倍。
在許多病例中，肝癌只有在其惡化之后才顯示獨(dú)有的癥狀。肝癌顯示各種癥狀，包括普通的全身不適，厭食等，以及右上腹部肝腫大和肝中形成硬塊，肝硬變的進(jìn)一步全身惡化癥狀例如腹水，黃疸，脾肥大等。
迄今，手術(shù)切除肝癌變部位被認(rèn)為是治療肝癌的最有效的方法。不過，這種切除手術(shù)的應(yīng)用要取決于肝癌的狀況而受到限制。例如，切除手術(shù)不能用于患有過于嚴(yán)重的原發(fā)肝硬變的人，即使其肝癌很小并由早期診斷所發(fā)現(xiàn)。另外，當(dāng)肝癌的尺寸小于3cm，可以采用在超聲圖象觀察下，將酒精直接注射到癌變部位，以徹底殺死癌變的方法。盡管這一方法具有較好的效果并有與外科手術(shù)后的相同病程，但它對尺寸大于3cm的癌基本是無效的。
同時(shí)，對一個患肝癌的病人，手術(shù)操作會冒致死的危險(xiǎn)，因?yàn)樗€患有相當(dāng)嚴(yán)重的肝硬變，在此情況下，建議使用抗癌劑。對這種情況，通過口服抗癌劑或通常的注射不能提供實(shí)質(zhì)的效果，而主要使用的治療方法是通過肝臟動脈將抗癌劑直接注入癌變肝組織，或是抗癌劑給藥后將連接肝癌部位的血管閉合。
由于許多肝癌可以導(dǎo)致死亡，肝癌的預(yù)防必須優(yōu)先于已侵入的肝癌的治療。目前，肝癌預(yù)防的最佳方法是接種疫苗制劑。
在這種情況下，本發(fā)明人已深入研究，開發(fā)出藥品，該藥品可以有效地治療肝癌，并可通過抑制肝硬變發(fā)展成肝癌來防止肝癌的發(fā)展，該藥品特別地用已披露具有相對較小毒副作用的各種組合天然藥物生產(chǎn)的多種組合物阻止肝硬變發(fā)展成肝癌。結(jié)果，我們已認(rèn)定，通過每一種具有下述獨(dú)特組成的可注射組合物和口服組合物聯(lián)合給藥，可以有效地達(dá)到上述目的，這樣完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明涉及對防治肝癌有用的草藥制劑。
特別地，本發(fā)明涉及一種套裝形式的草藥制劑藥盒，它通過對乙型肝炎病毒具有良好防治效果的可注射組合物和對脂肪肝及肝硬變具有防治效果的口服組合物的聯(lián)合給藥，阻止肝炎或肝硬變發(fā)展成肝癌，有效地阻止肝癌的發(fā)展和用于治療肝癌。
更具體地，本發(fā)明涉及用于防治肝癌的草藥制劑，該藥劑包括一種對乙型肝炎病毒具有治療效果并含4種主要天然藥物，即白花蛇舌草，姜黃，虎杖和山豆根的可注射組合物(A)，和一種對脂肪肝和肝硬變有防治效果并含10種天然藥物，即白花蛇舌草，重樓，虎杖，山豆根，龍膽草，大黃，連翹，赤芍，姜黃和石菖蒲的口服組合物(B)。本發(fā)明的草藥制劑可以有效地治療肝癌，而不用手術(shù)操作或抗癌劑，并可以有效地阻止肝病例如肝硬變轉(zhuǎn)變成肝癌。
為了徹底了解本發(fā)明的性質(zhì)和目的，結(jié)合附圖作下列詳細(xì)描述，其中

圖1是根據(jù)實(shí)驗(yàn)6由DEN(二乙基亞硝胺)和AAF(乙酰氨基芴)誘發(fā)的慢性肝癌的鼠肝的照片[正常(正常組)只給生理鹽水的組；對照(對照組)只給DEN和AAF的組；UKG1(測試組1)經(jīng)口給以40mg/Kg口服組合物(B)和經(jīng)腹腔給以70μl/Kg的可注射組合物(A)的組，UKG2(測試組2)經(jīng)口給以200mg/Kg口服組合物(B)和經(jīng)腹腔給以350μl/Kg的可注射組合物(A)的組]；圖2是對照組鼠肝的照片，其中慢性肝癌是根據(jù)實(shí)驗(yàn)6(Masson-三色染色法；箭頭表示纖維化)由DEN和AAF誘發(fā)的；圖3是對照組鼠肝的照片，其中慢性肝癌是根據(jù)實(shí)驗(yàn)6(H&E(Hematoxylin和Eosin)染色法；箭頭表示大個的結(jié)節(jié))由DEN和AAF誘發(fā)的；圖4是測試組2的鼠肝的照片，其中慢性肝癌是根據(jù)實(shí)驗(yàn)6(Masson-三色染色法)由DEN和AAF誘發(fā)的，然后聯(lián)合給以200mg/Kg的口服組合物和350μl/Kg的可注射組合物；圖5是測試組2的鼠肝的照片，其中慢性肝癌是根據(jù)實(shí)驗(yàn)6(H&E染色法；箭頭表示小個的結(jié)節(jié))由DEN和AAF誘發(fā)的，然后聯(lián)合給以200mg/Kg的口服組合物和350μl/Kg的可注射組合物。
作為構(gòu)成本發(fā)明草藥制劑的一部分，由混合4種主要天然藥物，即白花蛇舌草，姜黃，虎杖和山豆根生產(chǎn)的可注射組合物(A)，由于主要天然藥物的各種藥理活性，通過提高免疫功能并顯示抗病毒活性，對病毒肝炎具有防治作用。作為本發(fā)明草藥制劑的另一部分，由混合10種主要天然藥物，即白花蛇舌草，重樓，虎杖，山豆根，龍膽草，大黃，連翹，赤芍，姜黃和石菖蒲生產(chǎn)的口服組合物(B)，基于主要天然藥物的各種藥理活性，對肝硬變具有防治作用。在本發(fā)明草藥制劑中，對易于從慢性乙型肝炎或肝硬變發(fā)展而成的肝癌，通過這兩種組合物的聯(lián)合給藥，被有效地防治。
在下文中，將對源自各個主要天然藥物的藥理活性，用于防治肝癌的本發(fā)明組合物的復(fù)合效應(yīng)作詳細(xì)的說明。
已知白花蛇舌草主要作用于心臟和肝臟以顯示其抗癌活性和抗菌和抗炎活性，并抑制HBsAg和降低SGPT。該藥也具有清潔血液和解毒作用，因此它可以被有效地用于黃疸和肝病例如病毒肝炎。它基本是無毒的天然藥物，作為毒性標(biāo)準(zhǔn)，LD50值為104g/Kg(老鼠，i.p.)。
姜黃提高膽汁的分泌并收縮膽囊，通過使膽汁含量正常化顯示利膽活性。也已知姜黃具有優(yōu)越的抗菌活性，因此延長了感染肝炎病毒的老鼠的存活期，并顯示抗病毒性肝炎及由化學(xué)物質(zhì)(四氯化碳)造成的肝病的優(yōu)越的治療效果。在"Hyundaesilyoungjoongyak"中，披露了姜黃作為健胃藥和芳香藥在膽管和肝臟中促進(jìn)解毒，因此可用于治療黃疸，心痛風(fēng)等。
虎杖具有抗菌和抗病毒活性并可在低血糖造成的休克狀況下用于靜脈注射。同時(shí)，"Yaksungron"披露虎杖是無毒的，但對懷孕婦女是禁忌的。
已認(rèn)識到，在試管內(nèi)對老鼠腹腔癌測試，山豆根的抗腫瘤活性是有效的。此外，"Gaeboboncho"披露，山豆根除去傷口位置各種藥和毒物的毒性，并具有止痛活性，并還可治療急性黃疸，咳嗽，發(fā)燒等。
重樓具有解毒活性以治療酒精造成的肝臟損害，并提高人體的免疫功能。也注意到，當(dāng)大量使用時(shí)，重樓可顯示抗癌活性。
已知，大黃具有抗菌，抗腫瘤和促瀉活性，并可治療甲狀腺瘤變，肝細(xì)胞退化，肝靜脈充血等。進(jìn)一步地，當(dāng)給人體服用大黃，它主要分布在肝和腎中以顯示其活性。最近還發(fā)現(xiàn)，大黃具有類似于干擾素所具有的藥理活性。
連翹具有有效的抗菌活性，主要作用于心臟，肝臟和膽囊，并且是無毒的。此外已發(fā)現(xiàn)，連翹連同山豆根，姜黃等，可補(bǔ)充人體中的微量元素并有使肝細(xì)胞再生的功能。
赤芍主要作用于肝臟，脾臟等，并顯示抗炎和抗?jié)兓钚?。它也有抗菌，退熱，止痛，?zhèn)靜及解痙活性。已有報(bào)導(dǎo)，作為用老鼠的抽取心臟在試管中測定的結(jié)果，赤芍作用于循環(huán)系統(tǒng)，提高冠狀動脈的血量。
龍膽草具有保肝和利膽活性，用于治療由四氯化碳造成的老鼠急性肝病，并降低肝組織損害。此外，龍膽草也具有健胃和抗菌及抗炎活性，影響神經(jīng)系統(tǒng)，降低血壓的活性等。根據(jù)老鼠毒性檢測結(jié)果，已經(jīng)披露，由于龍膽草的LD50值以經(jīng)口給藥為460-1250mg/Kg，靜脈注射為163.4mg/Kg，基本是無毒的。
石菖蒲作用于肝臟，脾臟和心臟，并具有力的抗菌活性。還對平滑肌具解痙活性，刺激消化液的分泌，在胃腸道中抑制異常的發(fā)酵和使腸道平滑肌膨脹。
在根據(jù)本發(fā)明草藥制劑的可注射組合物(A)中，以各天然藥的干重計(jì)，白花蛇舌草，虎杖，山豆根和姜黃按2-10∶2-10∶2-10∶0.1-5的比例，優(yōu)選比例4-6∶4-6∶4-6∶1-3混合在一起。
在特別優(yōu)選的可注射組合物(A)中，白花蛇舌草，虎杖，山豆根和姜黃按重量5∶5∶5∶2的比例混合在一起。
上述組合物比例是考慮到每種主要天然藥的有效量和副作用而確定的。如果組合物比例超出上述范圍，藥理作用就會迅速地降低或任何副作用都會發(fā)生。
為了得到治療乙型病毒肝炎的更有力的活性，如果要求，本發(fā)明可注射組合物A可以另外含有一種或多種選自包括大青葉(IsatidisFolium)，山豆根(Sophorae radix)，茵陳(Artemisiae capillaris herba)，柴胡(Bupleuri radix)，蒼術(shù)(Atractylodis rhizoma alba)，澤瀉(Alisma rhizoma)，冬蟲夏草(Cordyceps)，大黃，板蘭根(Isatidis Radix)，龍膽草，黃芩(Scutellariae radix)和重樓的補(bǔ)充天然藥物。
當(dāng)補(bǔ)充天然藥物按干重量被加入本發(fā)明可注射組合物中，基于干重，大青葉，山豆根，茵陳，柴胡，蒼術(shù)，澤瀉，板蘭根，龍膽草，黃芩和重樓中的每一種按2-10重量份數(shù)，優(yōu)選4-6重量份數(shù)的比例加入；且冬蟲夏草和大黃中的每一種按0.5-6重量份數(shù)，優(yōu)選2-4重量份數(shù)的比例加入。
本發(fā)明的可注射組合物(A)可以根據(jù)制藥領(lǐng)域中常用的方法使用制藥學(xué)可接受的賦形劑制備。例如，可注射組合物(A)可根據(jù)韓國藥典通則中描述的制備注射劑的方法制備，該方法包括a)用水提取姜黃，然后蒸餾姜黃的水提取液；b)分別用水提取白花蛇舌草，虎杖和山豆根，蒸餾并濃縮所得水提取液，用酒精提取殘余物三次，過濾提取液得到濾液；c)將步驟b)中得到的濾液與步驟a)中得到的姜黃的提取液混合；然后d)向其中加入通常用于制備注射劑的一種制藥賦形劑，例如類似吐溫80的乳化劑。
同時(shí)，構(gòu)成根據(jù)本發(fā)明草藥制劑的另一部分的口服組合物(B)包括十種主要天然藥物，即如上所述的白花蛇舌草，重樓，虎杖，山豆根，龍膽草，大黃，連翹，赤芍，姜黃和石菖蒲。
在本發(fā)明口服組合物(B)中，主要天然藥物以干重計(jì)，按白花蛇舌草占1-10，虎杖占1-10，山豆根占1-10，重樓占0.5-8，赤芍占0.5-8，姜黃占0.5-8，石菖蒲占0.5-8，龍膽草占0.1-5，大黃占0.1-5和連翹占0.1-5的比例結(jié)合在一起。優(yōu)選地，在本發(fā)明口服組合物(B)中，主要天然藥物以干重計(jì)，按白花蛇舌草占3-8，虎杖占3-8，山豆根占3-8，重樓占1-6，赤芍占1-6，姜黃占1-6，石菖蒲占1-6，龍膽草占0.5-4，大黃占0.5-4和連翹占0.5-4的比例結(jié)合在一起。
本發(fā)明特別優(yōu)選的口服組合物含主要天然藥物以干重計(jì)，按白花蛇舌草∶虎杖∶山豆根∶重樓∶赤芍∶姜黃∶石菖蒲∶龍膽草∶大黃∶連翹=3∶3∶3∶2∶2∶2∶2∶1∶1∶1的比例。
這種組成比例是考慮了每種主要天然藥物的有效量和副作用而確立的。如果組成比例超過上述范圍，藥理作用就會急速降低或任何副作用就會發(fā)生。
為了更有效地防治脂肪肝和肝硬變，如果需要，本發(fā)明口服組合物(B)可以另外含有選自包括冬蟲夏草，熊膽(bear′s gall-bladder)，羚羊角(antelope′s horn)，玄參(Scrophulariae radix)，丹參(Salviaeradix)，板蘭根，黃芪(Astragali radix)，山楂(Crataegi fructus)，白茅根(Imperatae rhizoma)，鱉甲(Amydae carapax),Cumarae longaerhizoma，當(dāng)歸(Angelicae gigantis radix)，人參(Ginseng radix alba)，枸杞(Lycii fructus)，五味子(Schizandrae fructus)，柴胡，三七(Notoinseng radix)，茵陳，大青葉和黃芩的一種或多種補(bǔ)充天然藥物。
當(dāng)天然藥物按干重被加入本發(fā)明口服組合物中時(shí)，板蘭根，黃芪，山楂，白茅根，Cumarae longae rhizoma，當(dāng)歸，枸杞，五味子，柴胡，三七，茵陳，大青葉和黃芩中的每一種按重量份數(shù)1-10，優(yōu)選3-8加入；而冬蟲夏草，羚羊角，玄參，丹參，鱉甲和人參中的每一種按重量份數(shù)0.5-8，優(yōu)選0.5-4的比例加入；熊膽按重量份數(shù)0.01-2，優(yōu)選0.1-1的比例加入。
本發(fā)明口服組合物(B)可以根據(jù)通常在制藥領(lǐng)域中常用的方法，用制藥可接受的賦形劑來制備。例如，口服組合物(B)可以根據(jù)包括a)粉碎姜黃和，石菖蒲；b)萃取白花蛇舌草，虎杖，山豆根，重樓，龍膽草，大黃，連翹和赤芍；和c)將在步驟a)中得到的粉和在步驟b)中得到的萃取物混合的方法來制備。
用于受體人的本發(fā)明草藥制劑的劑量和給藥方法可以根據(jù)患者的年齡，性別，健康狀況，待處置疾病的嚴(yán)重性，給藥的頻率等加以變化。通常，對成年人(體重約70Kg)用靜脈注射作為每1ml含以上述比例混合的6-35g天然藥物中得到的萃取物的注射劑的可注射組合物A)，日劑量為1-10ml，優(yōu)選3-6ml是適合的。與此同時(shí)，以上述比例混合的口服組合物B)，對成年人(體重約70Kg)以日劑量1-10g給藥也是合乎要求的。如果需要，可注射組合物A)和口服組合物B)可以同時(shí)給藥，也可將它們按一定的間隔給藥。為此目的，本發(fā)明草藥制劑可按下列形式包裝，其中可注射組合物A)和口服組合物B)可以裝在一個包裝盒內(nèi)，或以分開的包裝將兩個組合物分開包裝。
本發(fā)明由下列實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)加以更明確的解釋。不過，應(yīng)理解，本發(fā)明不以任何方式受這些實(shí)施例的限制。
實(shí)施例1可注射組合物的制備100g姜黃浸入水中，靜置3小時(shí)。向其中加入1L蒸餾水，混合物加熱提取得到約400-500ml提取液。所得提取液濃縮至約250ml，得到溶液A。
取白花蛇舌草，山豆根和虎杖每種250g并混合在一起，并向混合物加入7L蒸餾水。此混合物靜置24小時(shí)，然后加熱1小時(shí)作第一次提取并過濾。向殘余物中加入3L蒸餾水，然后加熱提取40分鐘。合并提取液并濃縮至600ml，得到溶液B。此溶液B根據(jù)下述方式用酒精提取三次純化，除去雜質(zhì)。
向溶液B中加入1400ml酒精以制備70％的酒精溶液，將其靜置24小時(shí)，然后過濾。通過蒸發(fā)從所得2000ml濾液中除去酒精，得到600ml溶液B1。
向B1溶液中加入2400ml的100％酒精，得到約80％的酒精溶液，該溶液靜置24小時(shí)，然后過濾得到3000ml濾液。該濾液用20％的氫氧化鈉調(diào)整pH為8-9，在冷卻的溫度(0-4℃)下靜置24-48小時(shí)，然后過濾得到3000ml濾液。從濾液中蒸發(fā)掉酒精，得到600ml溶液B2。
向溶液B2中加入3400ml酒精，得到85％酒精溶液，該溶液在冷卻的溫度(0-4℃)下靜置24小時(shí)，然后過濾。所得4000ml濾液被蒸發(fā)和濃縮至600ml，得到溶液B3。
所得溶液B3與250ml上述得到的溶液A及3g吐溫80混合，然后通過加入蒸餾水調(diào)整混合物總體積為約1L。所得溶液用2N NaOH調(diào)整pH為7.5-8.0，然后根據(jù)韓國藥典通則中描述的制備注射劑的方法，制備成可注射制劑形式。
實(shí)施例2口服組合物的制備(片劑)30g姜黃和30g石菖蒲被精細(xì)地研磨，得到粉末A。取白花蛇舌草，虎杖和山豆根每種45g，重樓和赤芍每種30g，和龍膽草，大黃及連翹每種15g，將它們混合。向混合物中加入2.4L水，并靜置24小時(shí)。加熱該混合物提取1.5小時(shí)，冷卻，然后過濾得到濾液B和殘余物。加熱下，殘余物用約1.6L的水提取1小時(shí)，冷卻，然后過濾得到濾液。該濾液與上述得到的濾液B合并。加熱將合并濾液濃縮，然后冷卻得到溶液C。將上述得到的粉末A加入溶液C中，并徹底混合。所得混合物在低于60℃溫度下干燥，冷卻，然后粉碎，得到74.4g的天然藥物的混合粉末(其中作為提取液的溶液C的收率是14.4g(約6％)，且天然藥物的總收率約24.8％)。根據(jù)韓國藥典通則中描述的制備片劑的方法，所得粉末被制備成片劑，得到每一藥片含800mg混合天然藥物粉末的片劑。
實(shí)施例3口服組合物的制備(膠囊)姜黃，人參，枸杞，五味子，石菖蒲，柴胡，茵陳，大青葉和黃芩各30克，和鱉甲，Cumarae longae rhizoma，當(dāng)歸每種15g被精細(xì)地研磨得到粉末A。取白花蛇舌草，虎杖和山豆根每種45g，重樓，黃芪，山楂，赤芍和白茅根每種30g，和龍膽草，大黃，連翹和三七每種15g混合。向此混合物中加約3.5L水并靜置24小時(shí)?；旌衔锛訜崽崛?.5小時(shí)，冷卻，然后過濾得到濾液B和殘余物。加熱，殘余物用2.5L水提取1小時(shí)，冷卻，然后過濾得到濾液。此濾液與上面所得濾液B合并。合并的濾液加熱濃縮，然后冷卻得到溶液C。上面所得粉末A加入溶液C中，并徹底混合所得混合物，并在低于60℃溫度下干燥，冷卻，然后研磨得到245.7g天然藥物混合物粉末(其中作為提取物的溶液C的收率為20.7g(約6％)，且天然藥物的總收率約為70％)。根據(jù)韓國藥典通則中描述的制備膠囊的方法，所得粉末被制備成硬膠質(zhì)膠囊，得到每一膠囊含500mg混合天然藥物粉末的硬明膠膠囊。
上述實(shí)施例1中制備的注射劑和實(shí)施例2或3中制備的口服制劑最后或以套裝的形式生產(chǎn)，其中兩種制劑包在一個包裝中，或以獨(dú)立包裝分別包裝，因此當(dāng)它們被用于臨床目的時(shí)可以同時(shí)使用。
為了確定根據(jù)本發(fā)明草藥制劑---其中可注射組合物(A)和口服組合物(B)組合在一起，對肝癌的防治效果，進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)。在下述實(shí)驗(yàn)中，可注射制劑(A)代表實(shí)施例1中制備的注射劑，而口服制劑(B)代表實(shí)施例2中制備的片劑，每種制劑所給量表示在它們被制成注射劑和片劑之前的天然藥物提取物和混合天然藥物的量。
實(shí)驗(yàn)例1對由半乳糖胺誘發(fā)的急性肝病的作用作為實(shí)驗(yàn)動物，重150-200g的雄性Sprague-Dawley鼠被隨機(jī)地分為下列8組，這樣每組包括10只動物①正常組只給生理鹽水。
②對照組腹腔給藥半乳糖胺500mg。
③測試組1經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg。
④測試組2經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg。
⑤測試組3腹腔給藥可注射制劑(A)70μl/kg。
⑥測試組4腹腔給藥可注射制劑(A)350μl/kg。
⑦測試組5分別經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)70μl/kg。
⑧測試組6分別經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)350μl/kg。
在此實(shí)驗(yàn)中，口服劑(B)是以生理鹽水懸浮液的形式給藥，而可注射制劑(A)是以稀釋在5％的葡萄糖溶液中給藥。除正常組外，對照組和所有測試組，都經(jīng)腹腔以500mg/kg的半乳糖胺給藥。其后連續(xù)7天的每天下午，測試組經(jīng)口和/或經(jīng)腹腔通過給予口服制劑B和/或可注射制劑(A)進(jìn)行治療。在此期間，每個正常組和對照組都經(jīng)口給以10ml生理鹽水。為作血液分析，在最后給予測試藥品8小時(shí)后，從眼瞼靜脈叢取血，然后以4000rpm離心10分鐘得到血清。用血液分析儀對血清進(jìn)行GOT(谷草轉(zhuǎn)氨酶)，GPT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)，ALP(堿性磷酸酯酶)和T-BIL(總膽紅素)濃度測定。所得結(jié)果在下列表1中描述。
表1
從上述表1結(jié)果可見，在半乳糖胺損害的肝臟中測得的GPT,GOT,ALP和T-BIL的增高，通過口服制劑B和可注射制劑(A)(測試組5和6)聯(lián)合給藥，與單獨(dú)口服給藥(測試組1和2)或可注射制劑(測試組3和4)給藥相比，已大大地減弱了。特別地，也應(yīng)注意到，與低劑量給藥(測試組5)相比，大劑量給藥(測試組6)給出的值更接近正常組中測得的值。由此結(jié)果可以認(rèn)為，以可注射組合物與口服組合物聯(lián)合給藥這樣設(shè)計(jì)的本發(fā)明草藥制劑，可有效地治療由半乳糖胺造成的肝病。
實(shí)驗(yàn)例2對由半乳糖胺誘發(fā)的亞急性肝病的作用作為實(shí)驗(yàn)動物，重150-200g的雄性Sprague-Dawley鼠被任意地分為下列6組，這樣每組包括10只動物①正常組只給生理鹽水。
②對照組經(jīng)腹腔給藥半乳糖胺500mg。
③測試組1經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg。
④測試組2經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg。
⑤測試組3分別經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)70μl/kg。
⑥測試組4分別經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)350μl/kg。
在此實(shí)驗(yàn)中，口服劑(B)是以生理鹽水懸浮液的形式給藥，而可注射制劑(A)是以稀釋在5％的葡萄糖溶液中給藥。在連續(xù)14天的每天早晨，每個測試組每次只經(jīng)口給口服劑(B)或同時(shí)每次經(jīng)腹腔給可注射制劑(A)進(jìn)行治療。在此期間，每個正常組和對照組都經(jīng)口給以10ml生理鹽水。其后，在從給予測試藥品開始的第7天到最后一天的期間內(nèi)，每天給予測試藥品4小時(shí)后，除正常組外，對照組和所有測試組，都經(jīng)腹腔給以500mg/kg的半乳糖胺。為作血液分析，在末次給藥半乳糖胺24小時(shí)后，從眼瞼靜脈叢取血，然后以4000rpm離心10分鐘得到血清。用血液分析儀對血清進(jìn)行GOT,GPT,ALP和T-BIL濃度測定。所得結(jié)果在下列表2中描述。
表2
從上述表2結(jié)果可見，與實(shí)驗(yàn)1中的誘發(fā)急性肝病的對照組相比，本實(shí)驗(yàn)的對照組中由半乳糖胺長時(shí)期給藥誘發(fā)的亞急性肝病，顯示所有GPT,GOT,ALP和T-BIL的值都有明顯增高，因此，在亞急性情況下，肝損害的程度比在急性肝病情況下要嚴(yán)重得多。此外，如同實(shí)驗(yàn)例1，口服劑(B)與可注射制劑(A)聯(lián)合給藥的測試組3和4中測得的所有GPT,GOT,ALP和T-BIL的值都低于只給口服劑(B)的測試組1和2所測得的值。特別地，也可注意到，大劑量給藥(測試組4)給出的值大大低于低劑量給藥(測試組3)的值。
實(shí)驗(yàn)例3對四氯化碳(CCl4)誘發(fā)的亞急性肝病的作用作為實(shí)驗(yàn)動物，重150-200g的雄性Sprague-Dawley鼠被任意地分為下列4組，這樣每組包括10只動物①正常組只給生理鹽水。
②對照組經(jīng)口給藥25％四氯化碳3ml/kg。
③測試組1分別經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)70μl/kg。
④測試組2分別經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)350μl/kg。
在此實(shí)驗(yàn)中，口服劑(B)是以生理鹽水懸浮液的形式給藥，和可注射制劑(A)是以稀釋在5％的葡萄糖溶液中給藥。在連續(xù)21天的每天早晨，每一測試組分別經(jīng)口和經(jīng)腹腔，并行地給予口服劑(B)和可注射制劑(A)治療。在此期間，每一正常組和對照組都經(jīng)口給予10ml生理鹽水。其后，在從給予測試藥品開始的第7天到最后一天的期間內(nèi)，每天給予測試藥品4小時(shí)后，除正常組外，對照組和所有測試組，都經(jīng)腹腔按3ml/kg的量給以溶解在橄欖油中的25％半乳糖胺。為作血液分析，在四氯化碳末次給藥24小時(shí)后，從眼瞼靜脈叢取血，然后以4000rpm離心10分鐘得到血清。用血液分析儀對血清進(jìn)行GOT,GPT,ALP和T-BIL濃度測定。所得結(jié)果在下列表3中描述。
表3
<p>從上述表3結(jié)果可見，甚至當(dāng)肝臟由比半乳糖胺具更強(qiáng)侵害力的四氯化碳誘發(fā)而損害時(shí)，與對照組比較，按口服劑(B)和可注射制劑(A)聯(lián)合給藥這樣設(shè)計(jì)的本發(fā)明草藥制劑，有意義地降低了所有GPT,GOT,ALP和T-BIL的值。
實(shí)驗(yàn)例4對酒精誘發(fā)的急性肝病的作用作為實(shí)驗(yàn)動物，重150-200g的雄性Sprague-Dawley鼠被任意地分為下列6組，這樣每組包括10只動物①正常組只給生理鹽水。
②對照組按6g/kg的量口服酒精。
③測試組1經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg。
④測試組2經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg。
⑤測試組3分別經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)70μl/kg。
⑥測試組4分別經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)350μl/kg。
在此實(shí)驗(yàn)中，口服劑(B)是以生理鹽水懸浮液的形式給藥，而可注射制劑(A)是以稀釋在5％的葡萄糖溶液中給藥。在連續(xù)14天的每天早晨，每一測試組每次只經(jīng)口給口服劑(B)或同時(shí)每次經(jīng)腹腔給可注射制劑(A)進(jìn)行治療。在此期間，每一正常組和對照組都經(jīng)口給予10ml生理鹽水。其后，在給予測試藥品的最后一天的下午，除正常組外，對照組和所有測試組，都按6g/kg的量口服酒精。為作血液分析，在酒精末次服用24小時(shí)后，從眼瞼靜脈叢取血，靜置30分鐘，然后離心得到血清。根據(jù)游離甘油比消光法，通過測定450nm處光密度，測定血清中甘油三酸酯(TG)的活性。所得結(jié)果在下列表4中描述。
表4
從上述表4結(jié)果可見，由酒精誘發(fā)急性肝病的情況下，與對照組比較，按口服劑(B)和可注射制劑(A)聯(lián)合給藥這樣設(shè)計(jì)的本發(fā)明草藥制劑，顯著地降低了甘油三酸酯的活性。因此，可以注意到，本發(fā)明草藥制劑對防止肝臟遭受酒精造成的急性肝損害是有效的。
實(shí)驗(yàn)例5對酒精誘發(fā)的亞急性肝病的作用作為實(shí)驗(yàn)動物，重150-200g的雄性Sprague-Dawley鼠被任意地分為下列6組，這樣每組包括10只動物①正常組只給生理鹽水。
②對照組按6g/kg的量口服酒精。
③測試組1經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg。
④測試組2經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg。
⑤測試組3分別經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)70μl/kg。
⑥測試組4分別經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)350μl/kg。
在此實(shí)驗(yàn)中，口服劑(B)是以生理鹽水懸浮液的形式給藥，而可注射制劑(A)是以稀釋在5％的葡萄糖溶液中給藥。在連續(xù)21天的每天早晨，每一測試組每次只經(jīng)口給口服劑(B)或同時(shí)每次經(jīng)腹腔給可注射制劑(A)進(jìn)行治療。在此期間，每一正常組和對照組都經(jīng)口給予10ml生理鹽水。其后，在從給予測試藥品開始的第7天到最后一天的期間內(nèi)，除正常組外，對照組和所有測試組，都按6g/kg的量口服酒精。為了血液分析，在酒精末次服用24小時(shí)后，從眼瞼靜脈叢取血，靜置30分鐘，然后離心得到血清。根據(jù)游離甘油比消光法，通過測定450nm處光密度來測定血清中甘油三酸酯(TG)的活性。所得結(jié)果在下列表5中描述。
表5
從上述表5結(jié)果可見，在由長期服用酒精誘發(fā)急性肝病的情況下，與對照組相比，按口服劑(B)和可注射制劑(A)聯(lián)合給藥這樣設(shè)計(jì)的本發(fā)明草藥制劑，顯著地降低了甘油三酸酯的活性。因此，可以注意到，本發(fā)明草藥制劑對防止肝臟遭受連續(xù)飲用酒精造成的肝損害是有效的。
實(shí)驗(yàn)例6對慢性肝癌的作用作為實(shí)驗(yàn)動物，重150-200g的雄性Fisher344鼠被任意地分為下列4組，這樣每組包括10只動物①正常組只給生理鹽水。
②對照組經(jīng)口給以DEN(二乙基亞硝胺)和0.03％AAF(乙酰氨基芴)。
③測試組1分別經(jīng)口給藥口服劑(B)40mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)70μl/kg。
④測試組2分別經(jīng)口給藥口服劑(B)200mg/kg和經(jīng)腹腔給藥可注射制劑(A)350μl/kg。
在這些測試動物中，肝癌是根據(jù)如下描述的Solt-Farber標(biāo)準(zhǔn)方法[見Solt D.和Farber E.(1976)，化學(xué)致癌作用分析新原理，自然263:706-708]誘發(fā)的。按200mg/kg的量經(jīng)腹腔給以DEN(二乙基亞硝胺)，且2周后，經(jīng)口給以0.03％AAF(乙酰氨基芴)10周。服用AAF10周后再過3周后，進(jìn)行50％的半肝切除以誘發(fā)肝癌。在服用致癌材料(DEN和AAF)的全部時(shí)間(即12周)內(nèi)，每一正常組和對照組都經(jīng)口給予10ml生理鹽水，而測試組1和2都按上述量給予根據(jù)本發(fā)明的草藥制劑。
為作血清分析，從活到實(shí)驗(yàn)結(jié)束的實(shí)驗(yàn)動物的腹腔靜脈取血，然后在微離心管內(nèi)以4000rpm離心10分鐘以分離血清。分離的血清用血液分析儀進(jìn)行GOT和GPT酶活性，ALP活性，和T-BIL的測定。此外，根據(jù)游離甘油比消光法，通過測定540nm處光密度來測定血清中甘油三酸酯(TG)活性。所得結(jié)果在下列表6中描述。
表6
從上述表6結(jié)果可見，與對照組相比，對誘發(fā)肝癌鼠，按口服劑(B)和可注射制劑(A)聯(lián)合給藥這樣設(shè)計(jì)的本發(fā)明草藥制劑，顯著地降低了所有GPT,GOT,ALP,T-BIL和TG的值。因此，可以注意到，本發(fā)明草藥制劑可以有效地阻止肝癌的發(fā)展。
此外，在實(shí)驗(yàn)完成后，從各個實(shí)驗(yàn)動物中提取肝臟，然后進(jìn)行肉眼觀察。結(jié)果顯示在圖1。圖1可見，與正常組相比，用肉眼觀察，在對照組中可以清楚地觀察到結(jié)節(jié)，但較小，而在服用本發(fā)明草藥制劑的測試組1和2中則結(jié)節(jié)不明顯。因此，已觀察到，通過服用本發(fā)明草藥制劑，肝癌的發(fā)展程度明顯不同于對照組中的情形。進(jìn)一步地，對照組和測試組2中的鼠的肝組織分別用Masson-Tricrome(圖2和4)或H&amp;E(蘇木精和曙紅)(圖3和5)染色。結(jié)果可以觀察到，對照組的肝臟(圖2和3)顯示纖維化和清晰的結(jié)節(jié)以及大多數(shù)細(xì)胞具有深紅色的細(xì)胞質(zhì)和清楚的核。與此相反，測試組2的肝臟中，類似在對照組中的纖維化和清晰的結(jié)節(jié)未被觀察到，但是觀察到許多細(xì)胞變成嗜酸細(xì)胞，透明細(xì)胞或空細(xì)胞，且核和細(xì)胞核的尺寸比對照組中的核要小。從這些結(jié)果可以認(rèn)為，本發(fā)明草藥制劑可以阻止肝臟的纖維化和肝細(xì)胞的過度增生。
實(shí)驗(yàn)例7與龍膽瀉肝湯(Yongdamsakantang)和虎杖的聯(lián)合給藥相比，本發(fā)明草藥制劑對慢性肝癌的作用為了比較根據(jù)本發(fā)明的草藥制劑與龍膽瀉肝湯(龍膽草，地黃，柴胡，山楂，黃芩，木通，車前，澤瀉，當(dāng)歸，甘草)--已知該藥對肝癌相對有效，和虎杖的提取物的聯(lián)合給藥對肝癌的作用，進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)。
作為實(shí)驗(yàn)動物，重150-200g的雄性SD鼠被任意地分為下列4組，這樣每組包括10只動物①正常組只給生理鹽水。
②對照組經(jīng)口給以DEN和0.03％AAF。
③測試組1分別經(jīng)口給口服劑(B)200mg/kg和經(jīng)腹腔給可注射制劑(A)350μl/kg。
④測試組2經(jīng)口同服200mg/kg的龍膽瀉肝湯和200mg/kg的虎杖的提取物。
在這些測試動物中，肝癌是根據(jù)下述Solt-Farber標(biāo)準(zhǔn)方法誘發(fā)的。按200mg/kg的量經(jīng)腹腔給以DEN，并在2周后，經(jīng)口給以0.03％AAF10周。服用AAF10周后再過3周后，進(jìn)行50％的半肝切除以誘發(fā)肝癌。在服用致癌物質(zhì)(DEN和AAF)的全部時(shí)間(即12周)內(nèi)，每一正常組和對照組都經(jīng)口給予10ml生理鹽水，而測試組1和2都按上述量給予測試制劑。
為作血清分析，從活到實(shí)驗(yàn)結(jié)束的實(shí)驗(yàn)動物的腹腔靜脈取血，然后在微離心管內(nèi)以4000rpm離心10分鐘以分離血清。分離的血清用血液分析儀進(jìn)行GOT和GPT酶活性，ALP活性，和T-BIL的測定。所得結(jié)果在下列表7中描述。
表7
從上述表7結(jié)果可見，與龍膽瀉肝湯和虎杖的提取物聯(lián)合給藥的測試組2相比，對測試組1的誘發(fā)致癌鼠，用按口服劑(B)和可注射制劑(A)聯(lián)合給藥這樣設(shè)計(jì)的本發(fā)明草藥制劑治療，顯著地降低了所有GPT,GOT,ALP,T-BIL和TG的值。因此，可以知道，與已知草藥制劑相比，本發(fā)明草藥制劑可以有效地阻止肝癌的發(fā)展。
權(quán)利要求
1．治療肝癌的草藥制劑，其包括含有白花蛇舌草，姜黃，虎杖和山豆根作為主要天然藥物的可注射組合物(A)，和含有白花蛇舌草，重樓，虎杖，山豆根，龍膽草，大黃，連翹，赤芍，姜黃和石菖蒲作為主要天然藥物的口服組合物(B)。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的治療肝癌的草藥制劑，其中可注射組合物(A)中含有白花蛇舌草，姜黃，虎杖和山豆根，以天然藥物的干基重量計(jì)，其比例為2-10∶2-10∶2-10∶0.1-5。
3．根據(jù)權(quán)利要求2的治療肝癌的草藥制劑，其中可注射組合物(A)中含有白花蛇舌草，姜黃，虎杖和山豆根，以天然藥物的干基重量計(jì)，其比例為5∶5∶5∶2。
4．根據(jù)權(quán)利要求1的治療肝癌的草藥制劑，其中可注射組合物(A)進(jìn)一步含有一種或多種選自包括大青葉，山豆根，茵陳，柴胡，蒼術(shù)，澤瀉，冬蟲夏草，大黃，板蘭根，龍膽草，黃芩和重樓的補(bǔ)充天然藥物。
5．根據(jù)權(quán)利要求1的治療肝癌的草藥制劑，其中口服組合物(B)含有白花蛇舌草，重樓，虎杖，山豆根，龍膽草，大黃，連翹，赤芍，Curcumae longae rhizoma和石菖蒲，以天然藥物的干基重量計(jì)，含有比例為1-10∶1-10∶1-10∶0.5-8∶0.5-8∶0.5-8∶0.5-8∶0.1-5∶0.1-5∶0.1-5。
6．根據(jù)權(quán)利要求5的治療肝癌的草藥制劑，其中口服組合物(B)白花蛇舌草，重樓，虎杖，山豆根，龍膽草，大黃，連翹，赤芍，姜黃和石菖蒲，以天然藥物的干基重量計(jì)，其比例為3∶3∶3∶2∶2∶2∶2∶1∶1∶1。
7．根據(jù)權(quán)利要求1的治療肝癌的草藥制劑，其中口服組合物(B)進(jìn)一步含有一種或多種選自包括冬蟲夏草，熊膽，羚羊角，玄參，丹參，板蘭根，黃芪，山楂，白茅根，鱉甲，Cumarae longae rhizoma，當(dāng)歸，人參，枸杞，五味子，柴胡，三七，茵陳，大青葉和黃芩的補(bǔ)充天然藥物。
8．根據(jù)權(quán)利要求1的治療肝癌的草藥制劑，其中可注射組合物(A)和口服組合物(B)以套裝形式包裝在一起。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治肝癌的草藥制劑。更明確地說,本發(fā)明涉及一種草藥制劑,該藥劑包括特別是對乙型肝炎病毒具有良好防治效果并含4種主要天然藥物,即白花蛇舌草,姜黃,虎杖和山豆根的可注射組合物;和對脂肪肝和肝硬變有防治效果并含十種天然藥物即白花蛇舌草,重樓,虎杖,山豆根,龍膽草,大黃,連翹,赤芍,姜黃和石菖蒲的口服組合物,通過兩種組合物的聯(lián)合給藥,能有效地阻止包括肝炎,脂肪肝和肝硬變的肝臟疾病發(fā)展成為肝癌,并治療肝癌。
文檔編號A61K36/00GK1216256SQ9812024
公開日1999年5月12日 申請日期1998年8月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年11月5日
發(fā)明者李正植 申請人:參天堂制藥株式會社