專(zhuān)利名稱(chēng)：具有生長(zhǎng)激素釋放特性的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的肽衍生物，含有該衍生物的組合物及其用于治療因生長(zhǎng)激素缺乏所致的醫(yī)學(xué)疾病的用途。
生長(zhǎng)激素是一種能激發(fā)所有能生長(zhǎng)的組織生長(zhǎng)的激素。此外，還知道生長(zhǎng)激素對(duì)代謝過(guò)程有許多作用，例如激發(fā)蛋白質(zhì)合成和游離脂肪酸活動(dòng)，并引起從碳水化合物到脂肪酸代謝的能量代謝的轉(zhuǎn)換。生長(zhǎng)激素的缺乏會(huì)導(dǎo)致許多嚴(yán)重的醫(yī)學(xué)疾病，如侏儒。
生長(zhǎng)激素是從垂體中釋放出來(lái)的。而釋放過(guò)程受到多種激素和神經(jīng)遞質(zhì)直接或間接地嚴(yán)格控制。生長(zhǎng)激素的釋放可用生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)激發(fā)，并用生長(zhǎng)激素抑制素抑制。在兩種情況下該激素都是從下丘腦中釋放出的，但其作用主要是通過(guò)位于垂體中的特異受體進(jìn)行介導(dǎo)?？杉ぐl(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的其它化合物也已公開(kāi)。如精氨酸、L-3，4-二羥苯丙氨酸(L-Dopa)、胰高血糖素、加壓素、PACAP(垂體腺苷酰環(huán)化酶活化肽)、蕈毒受體激動(dòng)劑和一種合成的六肽，GHRP(生長(zhǎng)激素釋放肽)通過(guò)直接作用于垂體或通過(guò)影響下丘腦釋放GHRH和/或生長(zhǎng)激素抑制素而釋放內(nèi)源生長(zhǎng)激素。
對(duì)需要提高生長(zhǎng)激素的水平的疾病或癥狀來(lái)說(shuō)，由于生長(zhǎng)激素的蛋白質(zhì)性質(zhì)，使得除腸胃外使用的任何用法都沒(méi)有活性。另外，其它直接作用的天然促分泌素如GHRH和PACAP是較長(zhǎng)的多肽，因此，口服這類(lèi)化合物也是沒(méi)有活性的。
在本發(fā)明之前，已經(jīng)有人提出用較短的肽來(lái)提高哺乳動(dòng)物的生長(zhǎng)激素水平，例如以下的專(zhuān)利文件EP18072，EP83864，WO89/07110，WO89/01711，WO89/10933，WO88/9780，WO83/02272，WO91/18016，WO92/01711和WO93/04081。
生長(zhǎng)激素釋放肽或肽衍生物的組成，對(duì)于其生長(zhǎng)激素釋放能力及其生物利用率來(lái)說(shuō)是重要的。因此，本發(fā)明的目的是提供具有生長(zhǎng)激素釋放特性的肽，相對(duì)同一類(lèi)型的已知肽而言，它具有改善了的性能。
因此，本發(fā)明涉及一種如通式I所示的化合物A-B-C-D-(-E)P其中P為0或1；A為氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO，其中q為0或1-5之間的一個(gè)整數(shù)；r為0或1；S為0或1-5之間的一個(gè)整數(shù)；R1為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代或N(R2)-R3，其中，R2和R3各自獨(dú)立地為氫或有選擇地被一個(gè)或多個(gè)羥基、吡啶基或呋喃基取代過(guò)的低級(jí)烷基；而當(dāng)r為1時(shí)，X是-NH-，-CH2-，-CH＝CH- 或 其中，R16和R17各自獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基；B是(G)t-(H)u，其中t為0或1；u為0或1；G和H是從天然L-氨基酸或其相應(yīng)的D-異構(gòu)體或者非天然氨基酸中選擇的氨基酸殘基，如1，4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1，3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶丙氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、1，2，3，4-四氫norharman-3-羧酸、N-甲基氨茴酸、氨茴酸、N-芐基甘氨酸、3-氨基-3-甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸；其中，當(dāng)t和u都為1時(shí)，G和H之間的酰胺鍵可有選擇地被 取代，其中，Y是 或 ，而R18為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)芳烷基；C為式-NH-CH((CH2)w-R4)-CO-的D-氨基酸，其中w為0、1或2，而R4選自下列基團(tuán) 或
其中的每一個(gè)基團(tuán)有選擇地被鹵基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氨基、氨基或羥基取代；當(dāng)p為1時(shí)，D是式-NH-CH((CH2)k-R5)-CO-的D-氨基酸，或當(dāng)p為0時(shí)，D是-NH-CH-((CH2)l-R5)-CH2-R6或-NH-CH((CH2)m-R5)-CO-R6，其中R為0、1或2；l為0、1或2；m為0、1或2；R5選自下列基團(tuán) 或 其中每個(gè)基團(tuán)有選擇地被鹵基、烷基、烷氧氨基或羥基所取代；而R6為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R7)-R8，其中R7和R8各自獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基；當(dāng)p為1時(shí)，E是-NH-CH(R10)-(CH2)v-R9，其中r為0或1-8之間的一個(gè)整數(shù)；R9為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基， 其中n為0、1或2，而R19是氫或低級(jí)烷基， 或 其中o為1-3之間的整數(shù)，或N(R11)-R12，其中R11和R12各自獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基，或 或 每個(gè)基團(tuán)有選擇地被鹵基、烷基、烷氧基、氨基、烷氨基、羥基、或氨基與吡喃己糖或吡喃己糖基吡喃己糖的Amadori重排產(chǎn)物所取代和當(dāng)p為1時(shí)，R10是選自-H、-COOH、-CH2-R13、-CO-R13或-CH2-OH的基團(tuán)，其中R13為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R14)-R15，其中R14和R15各自獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基；B與C之間的酰胺鍵，或者當(dāng)t和u為0時(shí)A與C之間的酰胺鍵有選擇地被 ，其中Y為 或 而R18為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)芳烷基取代，或者，當(dāng)p為1時(shí)，D與E之間的酰胺鍵有選擇地被-Y- 所取代，其中Y和R18如上所述；或其可以藥用的鹽。
據(jù)認(rèn)為，式I的肽衍生物具有改善了的對(duì)由酶引起的蛋白酶解降解作用的抗性，由于該肽序列中相鄰D-氨基酸的存在，并有選擇地結(jié)合上述的用 取代酰胺鍵(-CO-NH-)，例如氨基亞甲基(-CO2-NH-)和/或?qū)υ撾牡腘-或C-末端進(jìn)行改性。對(duì)蛋白酶解降解作用抵抗能力的提高，并結(jié)合本發(fā)明肽衍生物大小的下降，可望改善其相對(duì)現(xiàn)有文獻(xiàn)中提出的肽的生物利用率。
在本文中，“低級(jí)烷基”一詞表示具有1-6個(gè)碳原子的烷基，具體有甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、戊基或己基?！胞u基”一詞包括Cl、F、Br和I。在術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷氧基”、“低級(jí)芳烷基”和“低級(jí)烷氨基”中，低級(jí)烷基部分具有上述含義。
在式I化合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，p為1。在式I化合物的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，A是氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO-，其中R1是3-咪唑基，q為2，r為0，s為0；或者，其中R1是NH2，q為1，r為1，X是二取代的苯，最好是在1和3位取代的苯，而且s為0；或者，其中R1是NH2，q為1，r為1，X是二取代的噻吩，最好是在3和2位上取代的噻吩，而且S為0。當(dāng)t為1時(shí)，式I化合物中的G最好是Ala、Gly、Aib、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸。當(dāng)u為1時(shí)，H最好是His、Phe、Tic、Phe(4-NH2)、3-Pyal、Gly、Ala、Sar、Pro、Tyr、Arg、Orn、3-氨甲基苯甲酸或D-Phe。式I化合物中的C最好是D-2-萘丙氨酸(D-2Nal)、D-1-萘丙氨酸(D-1Nal)、D-Phe或D-Trp。式I化合物中的D最好是D-Phe、D-1Nal、D-2Nal、D-Trp、3-Pyal、D-Phe(4F)、D-Tyr或Phe-NH2。
式I化合物中的E最好是Lys-NH2、NH-(2-(1-哌嗪基)乙基)、NH-(2-(1-嗎啉代)丙基)、NH-(2-氨乙基)、NH-(4-氨甲基芐基)、NH-(芐基)、Lys-OH、NH-(1-羥基-6-氨基-2S-己基)、NH-(2-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙基)，或
式I化合物中的R4最好是2-萘基。R5最好是苯基。v最好是2-6，而R9是NH2、嗎啉代乙基、嗎啉代丙基或(1-甲基吡咯烷基)乙基。R10最好是-COOH、-CH2-OH、-H、CONH2或-CON(CH3)2。
本發(fā)明具體化合物的例子有H-Ala-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(4-咪唑基)乙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基丁烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-哌啶子基-羧基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己胺5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)戊胺H-Ala-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙基)苯2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙胺4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)甲基)芐胺H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2H-Ala-His-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2(2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3苯丙胺H-Ala-N-Me-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-(氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH24-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丁胺3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丙胺(3-(二甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁?；?-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2(2S)-(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2S)((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2(2S)-(H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2(2-氨甲基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-NH2(5-氨甲基噻吩基)-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2(3-氨甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2(糠基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-吡啶甲基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)乙基)苯N，N-二(2R-羥丙基)-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2R-羥丙基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2N(Me))-Lys-NH23-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH23-((氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷
2-(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷3-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH22-((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-((3R)哌啶羰基-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷縮略語(yǔ)D-2Nal＝D-2萘丙氨酸5Apent＝5-氨基戊酸3Pyal＝3-吡啶基丙氨酸Aib＝H-氨基異丁酸Thial＝噻吩基丙氨酸hPhe＝高苯丙氨酸N-Bzl-Gly＝N-芐基甘氨酸4-F＝4-氟4-OMe＝4-甲氧基Orn＝鳥(niǎo)氨酸Dab＝2，4-二氨基丁酸Hyp＝羥脯氨酸
Tic＝1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸可用常規(guī)的液相或固相肽合成法制備式I的化合物。例如，固相合成可基本上按Steward和Young所公開(kāi)的方法(SolidPhase Peptide Synthesis，2nd Ed.Rockford，Illinois，USA，1976)進(jìn)行。液相合成則可大致按Bodansky等所公開(kāi)的方法(PeptideSynthesis，2nd Ed.，New York，USA，1976)進(jìn)行。
可按照Y.Sasaki和D.H.Coy所公開(kāi)的方法(Peptides8(1)，1987，pp.119-121)將氨基亞甲基作為酰胺鍵的取代基引入?？赏ㄟ^(guò)Amadori重排法制備含有由一或二-吡喃己糖衍生的氨基的肽衍生物，該方法基本上是R.Albert等所公開(kāi)的方法(LifeSciences 53，1993，pp.517-525)。一或二吡喃己糖的適當(dāng)例子有葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖和纖維二糖。用作上述合成的原料的衍生物可通過(guò)商業(yè)渠道獲得，而且，必要時(shí)提供適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基，或者，也可以通過(guò)已知方法制備用于制備通式I的“A”部分的原料，并用已知方法有選擇地加以保護(hù)。
式I化合物的可以藥用的酸加成鹽，包括將這種肽與無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)所生成的鹽，例如，可選用的酸有氫氯酸、氫溴酸、硫酸、乙酸、磷酸、乳酸、馬來(lái)酸、鄰苯二甲酸、檸檬酸、戊二酸、葡糖酸、甲磺酸、水楊酸、丁二酸、酒石酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、氨基磺酸和富馬酸。
另外，本發(fā)明涉及一種藥用組合物，它含有作為活性成分的通式I的化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或稀釋劑。
含有本發(fā)明化合物的藥用組合物可用常規(guī)技術(shù)制備，如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(1985)中所公開(kāi)的方法。可將該組合物制成常規(guī)劑型，如膠囊、片劑、煙霧劑、溶液、懸浮液或局部用藥。
所用的藥用載體或稀釋劑，可以是常規(guī)的固體或液體載體。固體載體的例子有乳糖、石膏粉、蔗糖、環(huán)糊精、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸或纖維素的低級(jí)烷基醚。液體載體的例子有糖漿、花生油、橄欖油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧乙烯和水。
同樣地，所述載體或稀釋劑可包括本領(lǐng)域任何已知緩釋材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油脂，單獨(dú)使用或與蠟混合后使用。
如果將固體載體用于口服，可將該制劑壓片、以粉狀或粒狀形式放在硬明膠囊中，或制成片劑或錠劑。固體載體的用量可以有較大的變化，但通常為約25mg-約1g。
用常規(guī)的壓片技術(shù)制成的典型片劑可包括芯部活性化合物(游離化合物或其鹽)100mg膠態(tài)SiO2(Aerosil) 1.5mg纖維素，微晶纖維素(Avicel) 70mg改性纖維素膠(Ac-Di-Sol) 7.5mg硬脂酸鎂涂層HPMC約9mg*Mywacett 9-40T 約0.9mg
*將?；膯嗡岣视椭米魍磕さ脑鏊軇?br> 如果采用的是液體載體，可將該制劑制成糖漿、乳劑、軟明膠囊或無(wú)菌注射液，如水成或非水成液體懸浮液或溶液。
為了鼻用，該制劑可含有溶于或懸浮于液體載體，尤其是水成載體中的式I化合物，用作煙霧劑。所述載體可含有諸如增溶劑，如丙二醇；表面活性劑，如膽汁酸鹽或聚氧乙烯高級(jí)醇醚；吸收增強(qiáng)劑，如卵磷脂(磷脂酰膽堿)或環(huán)糊精；或防腐劑，如對(duì)羥基苯甲酸酯之類(lèi)的添加劑。
通常，本發(fā)明的化合物被分成單位劑量形式，每單位劑量含有0.0001-100mg的活性成份和藥用載體。
本發(fā)明化合物的適用劑量為1-500mg/天，例如，當(dāng)作為藥物給患者，如病人使用時(shí)，每劑約100mg。
業(yè)已證實(shí)，通式I的化合物具有在體內(nèi)釋放內(nèi)源生長(zhǎng)激素的能力。因此，可將該化合物用于治療需要提高血漿生長(zhǎng)激素含量的疾病，如生長(zhǎng)激素缺乏的病人或老年患者或牲畜。
因此，一方面，本發(fā)明涉及一種用于激發(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的藥用組合物，該組合物包括作為活性成分的通式I的化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或釋釋劑。
另一方面，本發(fā)明涉及一種激發(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的方法，該方法包括給需要用藥的對(duì)象使用有效劑量的通式I化合物或其可以藥用的鹽。
再一方面，本發(fā)明涉及將通式I的化合物或其可以藥用的鹽用于制備用來(lái)激發(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的藥物的用途。
本領(lǐng)域技術(shù)人員都知道，生長(zhǎng)激素在人體上的現(xiàn)有和潛在的用途是變化的和多種多樣的。預(yù)計(jì)式I的化合物可用于激發(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的目的，而且還將具有與生長(zhǎng)激素本身類(lèi)似的作用或用途。生長(zhǎng)激素的用途可總結(jié)為如下幾方面激發(fā)老年人釋放生長(zhǎng)激素；預(yù)防糖皮質(zhì)激素的代謝副作用，治療骨質(zhì)疏松癥，激活免疫系統(tǒng)，加快傷口愈合，加快骨折的恢復(fù)，治療生長(zhǎng)停滯，治療因生長(zhǎng)停滯所致的腎衰竭或腎機(jī)能不全，治療生理性身材矮小，包括生長(zhǎng)激素缺乏的兒童和因慢性病造成的身材矮小，治療肥胖及與肥胖相關(guān)的生長(zhǎng)停滯，治療與Prader-Willi綜合癥和Turner’s綜合癥相關(guān)的生長(zhǎng)停滯；加速燒傷病人的恢復(fù)并縮短住院治療時(shí)間；治療子宮生長(zhǎng)停滯，骨骼發(fā)育異常，腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)和Cushing’s綜合癥；誘導(dǎo)脈沖式生長(zhǎng)激素釋放；恢復(fù)緊張病人的生長(zhǎng)激素，治療骨軟骨發(fā)育不良，Noonan’s綜合癥，精神分裂癥，壓抑，Alzheimer’s病，延遲的傷口愈合和精神失常，治療肺機(jī)能障礙和呼吸器依賴(lài)癥，減輕大手術(shù)之后的蛋白質(zhì)代謝反應(yīng)，減輕由慢性病如癌癥或AIDS引起的惡病質(zhì)和蛋白質(zhì)減少；治療胰島素過(guò)多癥，包括胰島素細(xì)胞增殖癥，用于排卵誘導(dǎo)的輔助治療；激發(fā)胸腺發(fā)育并防止與年齡相關(guān)的胸腺機(jī)能下降，治療免疫抑制患者，改善肌肉強(qiáng)度和肌肉活動(dòng)性，保持皮膚厚度，代謝的體內(nèi)平衡，虛弱老年人的腎內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，激活成骨細(xì)胞，骨重塑和軟骨生長(zhǎng)，激發(fā)伴生動(dòng)物的免疫系統(tǒng)并治療伴生動(dòng)物的衰老疾病，牲畜的生長(zhǎng)促進(jìn)和激發(fā)綿羊的羊毛生長(zhǎng)。
對(duì)于上述治療而言，劑量取決于所采用的式I化合物、使用方式和期望的治療。不過(guò)，給病人或動(dòng)物使用的一般劑量為每天0.0001-100mg/kg體重，以獲得內(nèi)源生長(zhǎng)激素的有效釋放。通常適于口服或鼻用的劑型包括與可以藥用的載體或稀釋劑混合的約0.0001mg-100mg，最好是約0.001-50mg的式I化合物。
式I化合物能以可以藥用的酸加成鹽形式或必要時(shí)堿金屬或堿土金屬或低級(jí)烷基銨鹽形式使用。據(jù)認(rèn)為，這種鹽形物具有與游離堿相近似的活性。
或者，本發(fā)明的藥用組合物也可含有與一種或多種具有不同活性的化合物，如抗菌素或其它藥理活性材料混合的式I化合物。它可以是另一種促分泌素，如GHRP(1或6)或GHRH或其類(lèi)似物，生長(zhǎng)激素或其類(lèi)似物或生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素，如IGF-1或IGF-2。
使用途徑可以是任何能把所述活性化合物有效地輸送到適當(dāng)?shù)幕蚱谕淖饔梦稽c(diǎn)的途徑，如經(jīng)口、鼻或腸胃外使用，口服最佳。
式I化合物除藥用之外，還可將其用作研究生長(zhǎng)激素釋放調(diào)節(jié)的體外工具。
式I化合物還可被用作評(píng)估垂體的生長(zhǎng)激素釋放能力的體內(nèi)工具。例如，在對(duì)人體使用這種化合物之前和之后提取血清樣品，可以分析生長(zhǎng)激素。通過(guò)比較各血清樣品中的生長(zhǎng)激素可直接測(cè)出患者垂體釋放生長(zhǎng)激素的能力。
可將式I化合物用于商業(yè)上重要的動(dòng)物，以提高其生長(zhǎng)速度和程度，并用于提高產(chǎn)乳量。
藥理方法可在體外評(píng)估式I化合物對(duì)初生大鼠親軀體細(xì)胞釋放生長(zhǎng)激素的效力和能力。
可基本上按照以前公開(kāi)的方法(Chen等，Endocrinology1991，129，3337-3342和Chen等，Endocrinology.1989，124，2791-2798)制備大鼠初生親軀體細(xì)胞。簡(jiǎn)言之，通過(guò)斷頭殺死大鼠。迅速取出垂體。所得到的垂體用溶于Hanks平衡鹽溶液中的0.2％的膠原酶和0.2％的透明質(zhì)酸酶消化。將細(xì)胞懸浮于含有0.37％NaHCO3、10％馬血清、2.5％胎牛血清、1％非必需氨基酸、1％谷氨酰胺和1％青霉素/鏈霉素的Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基中，并調(diào)整至1.5×105細(xì)胞/ml。將1ml的該懸浮液放入24眼淺盤(pán)的每個(gè)眼中，并在進(jìn)行釋放實(shí)驗(yàn)之前放置2-3天。
在該實(shí)驗(yàn)的第一天，用含有25mM HEPES，pH7.4的上述培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次。通過(guò)加入含有25mM HEPES和試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基引發(fā)生長(zhǎng)激素的釋放。在37℃培養(yǎng)15分鐘。培養(yǎng)之后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的RIA測(cè)定釋放到培養(yǎng)基里的生長(zhǎng)激素。
可按照以前公開(kāi)的方法(Bercu等，Endocrinology1991，129，2592-2598)，通過(guò)其對(duì)戊巴比妥麻醉的雌性大鼠生長(zhǎng)激素釋放的體內(nèi)影響評(píng)價(jià)式I化合物在體內(nèi)的作用。簡(jiǎn)而言之，以50mg/kg戊巴比妥的劑量ip麻醉成年雌性Sprague-Dawley大鼠。待大鼠完全麻醉之后，將氣管插管和導(dǎo)管植入其頸動(dòng)脈和頸靜脈中。經(jīng)過(guò)15分鐘的恢復(fù)之后，在0計(jì)時(shí)提取血樣。iv使用垂體促分泌素，并將動(dòng)脈血樣在冰上放置15分鐘，然后以12,000×g離心2分鐘。倒出血清并用標(biāo)準(zhǔn)RIA測(cè)定生長(zhǎng)激素的含量。
下面的實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但從任何意義上講都不是對(duì)要求保護(hù)的發(fā)明范圍的限定。
在本說(shuō)明書(shū)中和實(shí)施例中所采用的縮略語(yǔ)是指以下結(jié)構(gòu)用于非天然氨基酸殘基的縮略語(yǔ)Tic 3PyalPhe(4OMe) Phe(4-NH2)Phe(4-F) hPhe Hyp N-Bzl-GlyN-(苯乙基)-Gly 2Nal 1Nal Aib 5ApentThial Orn 用于肽鍵取代基的縮略語(yǔ)-N-Me- Ψ(CH2NH) Ψ(CH2N(Me)) 用于保護(hù)基的縮略語(yǔ) Trt- Dod-Bom 在以下實(shí)施例中所制備的化合物都是作為三氟乙酸(TFA)的鹽分離的。
例1H-Ala-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2按照Fmoc方法，采用生產(chǎn)商提供的FastMoc UV方案以0.22mmol的規(guī)模在Applied Biosystems 431A肽合成儀上合成標(biāo)題中的肽，使用的是在NMP(N-甲基吡咯烷酮)中由HBTU(2(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸)介導(dǎo)的偶聯(lián)，并用UV監(jiān)測(cè)Fmoc保護(hù)基的去保護(hù)。用于該合成的原始樹(shù)脂是取代能力為0.39mmol/g的559mg 4-((2’，4’-二甲氧基苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹(shù)脂(Novabio-Chem，Bad Soden，Germany.Cat.#01-64-0013)。所使用的保護(hù)氨基酸衍生物是Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp-OH，F(xiàn)moc-2Nal-OH、Fmoc-His(Trt)和Fmoc-Ala-OH。
通過(guò)在室溫下與由4ml TFA(三氟乙酸)、300mg苯酚、100μl乙二硫醇、200μl苯硫基甲烷和200μl H2O組成的混合物一起攪拌180分鐘，將肽從434mg的肽樹(shù)脂上切下來(lái)。過(guò)濾裂解混合物，并用氮?dú)饬鲗V液濃縮至1ml。用45ml乙醚將粗制肽從該油狀物中沉淀，并用50ml乙醚洗滌3次。
干燥粗制的肽，并通過(guò)在裝有7μc-18SiO2的20mm×250mm層析柱上進(jìn)行半制備HPLC提純。該柱用溶于0.05M(NH4)2SO4的、并用4MH2SO4調(diào)至pH2.5的15％CH3CN預(yù)平衡過(guò)。將粗制肽溶于2ml溶解在H2O中的70％CN3CN/0.1％TFA中，并用水稀釋至100ml。將該溶液分成相等的兩個(gè)部分，將每一部分在兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中加注到層析柱上。在40℃，在47分鐘內(nèi)以10ml/分的速度，用溶于0.05M(NH4)2SO4中的15-25％CH3CN(pH2.5)梯度溶液洗脫。收集含肽部分，用3倍體積的水稀釋并上用0.1％TFA平衡過(guò)的Sep-PakC18柱(Waters pait.#51910)。然后用含有0.1％TFA的70％CH3CN將肽從Sep-Pak柱上洗脫，用水稀釋后通過(guò)冷凍干燥法將肽從洗脫物中分離出來(lái)。產(chǎn)量為19.0mg。
通過(guò)分析RP-HPLC(保留時(shí)間)和等離子體解吸質(zhì)譜(分子量)鑒定所得到的最終產(chǎn)物。質(zhì)譜結(jié)果在該方法允許的誤差范圍內(nèi)(質(zhì)譜±0.9amu)與預(yù)期的結(jié)構(gòu)符合。
采用214nm的UV檢測(cè)并用一個(gè)Vydac 218TP54 4.6mm×250mm5μC-18SiO2柱(The Separation Group，Hesperia)進(jìn)行RP-HPLC分析，在42℃以1ml/分的速度洗脫。采用兩種不同的洗脫條件。
A1用溶于由0.1M(NH4)2SO4組成的緩沖液中、并用4MH2SO4調(diào)至pH2.5的5％CH3CN平衡層析柱，并在50分鐘之內(nèi)，用溶于同一緩沖液中的5％-60％的CH3CN梯度液洗脫。
B1用5％CH3CN/0.1％TFA/H2O平衡層析柱，并在50分鐘內(nèi)，用5％CH3CN/0.1％TFA/H2O～60％CH3CN/0.1％TFA/H2O梯度液洗脫。
采用洗脫條件A1和B1的保留時(shí)間分別為17.88分鐘和20.15分鐘。
例2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH采用與例1類(lèi)似的方法合成標(biāo)題中的肽，所不同的是，將取代能力為0.49mmol/g的450mg Fmoc-Lys(Boc)-Wang樹(shù)脂(Novabiochem.Bad Soden，Germany。cat.#04-12-2014)用作原料樹(shù)脂。當(dāng)采用例1所述方法將560mg肽樹(shù)脂裂解并對(duì)所得到的1/2的粗制肽進(jìn)行提純時(shí)，獲得了25.9mg的產(chǎn)量。
按照例1所述方法對(duì)最終產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。采用洗脫條件A1和B1的保留時(shí)間分別為18.30分鐘和20.15分鐘。
例35-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)氨基戊烷采用與例1類(lèi)似的方法合成肽樹(shù)脂H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹(shù)脂，所不同的是，采用的是取代能力為0.96mmol/g的262mg Sasrin樹(shù)脂(2-甲氨基-4-烷氧芐基醇樹(shù)脂)(Bachem，Bubendorf，Switzerland，cat.#D-1295)，而將第一個(gè)氨基酸殘基偶聯(lián)到該樹(shù)脂上的方案是由4-二甲氨基吡啶催化的預(yù)先制備的對(duì)稱(chēng)酐的偶聯(lián)，隨后用苯甲酸酐對(duì)樹(shù)脂上的殘余OH基進(jìn)行封端。
通過(guò)在室溫下與0.5ml 1，5-二氨基戊烷一起攪拌20小時(shí)，將被部分保護(hù)的肽5-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH)氨基戊烷從56mg的H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹(shù)脂上裂解下來(lái)。濾去廢樹(shù)脂，并用1ml DMF提取。在攪拌條件下將合并的濾液和提取物緩慢加入由2.5mlCH3CN和10ml 1M氫氯酸組成的混合物中，在用25％CH3CN稀釋至50ml后，將混合物在4℃下放置100小時(shí)(用于裂解組氨酸上的三苯甲基保護(hù))。然后用水將該混合物稀釋至200ml并過(guò)濾。
用與例1類(lèi)似的方法將1/2的濾液直接加注到層析柱上，通過(guò)半制備HPLC將粗制肽提純。所得產(chǎn)量為4.5mg。
按照例1所述方法對(duì)最終產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。采用洗脫條件A1和B1時(shí)的保留時(shí)間分別為18.43分鐘和20.75分鐘。
例4(2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇用與例3類(lèi)似的方法，由取代能力為0.96mmol/g的Sasrin樹(shù)脂合成肽樹(shù)脂H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin樹(shù)脂。
通過(guò)在室溫下與由1.2mlTHF(四氫呋喃)、0.2ml乙醇、23mg LiBr和10mg NaBH4組成的混合物一起將肽樹(shù)脂攪拌20小時(shí)，將被部分保護(hù)起來(lái)的肽(2S)-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇從200mg的H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin樹(shù)脂上裂解下來(lái)。然后加入200μl H2O、200μl乙酸和4ml乙醇。過(guò)濾除去樹(shù)脂珠，用50ml H2O稀釋濾液并冷凍干燥。將所得到的粉狀物進(jìn)行TFA裂解并按例1方法提純。為了獲得足夠純的產(chǎn)品，必須重復(fù)提純，獲得5.8mg的產(chǎn)量。
按照例1所述方法對(duì)最終產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。采用洗脫條件A1和B1的保留時(shí)間分別為17.82分鐘和20.02分鐘。
例5H-Ala-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2采用與例1類(lèi)似的方法，以取代能力為0.34mmol/g的556mg4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹(shù)脂(Novabiochem AG Switzerland，cat.#01-64-0013)為原料合成肽樹(shù)脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys-(Boc)Resin。采用以下的保護(hù)氨基酸衍生物Fmoc-Lys-(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH和Fmoc-2Nal-OH。
按照Sasaki，Y.和Coy，D.H.的方法(Peptides 8(1)，119-121，1987)引入-CH2NH-肽鍵等排物。
按照Fehrentz，J.-A.和Castro.B.的方法(Systhesis 676-678，1983)，由820mg相應(yīng)的N，O-異羥肟酸二甲酯制備Fmoc-His(Trt)-醛。將粗制的醛溶于8ml DMF中并分成兩份。在室溫下將第一部分加入溶于DMF中10ml 1％乙酸中的610mgH-D-2Nal-D-Phe-Lys-Resin的攪拌漿體中。然后加入溶于1mlDMF中的57mg NaCNBH3(純度85％)，并繼續(xù)攪拌60分鐘。此后，過(guò)濾分離肽樹(shù)脂，并用溶于DMF中的1％乙酸洗滌。將肽樹(shù)脂重新懸浮于10ml溶于DMF中的1％乙酸中，并加入另一部分Fmoc-His(Trt)-醛。在室溫下再次加入溶于1ml DMF中的57mg NaCNBH3(純度85％)，并攪拌混合物18小時(shí)。
在該還原性烷基化步驟之后，過(guò)濾分離肽樹(shù)脂并用溶于DMF的1％乙酸洗滌，按照上述方法，用保護(hù)的氨基酸衍生物Fmoc-Ala-OH、采用肽合成儀完成鏈延長(zhǎng)。
將肽從550mg的肽樹(shù)脂上裂解下來(lái)，并用與例1類(lèi)似的方法通過(guò)半制備HPLC提純粗制肽。獲得11.3mg的產(chǎn)量。
按照例1所述方法鑒定最終產(chǎn)物。采用洗脫條件A1和B1的保留時(shí)間分別為13.35分鐘和17.38分鐘。
例6
(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2和(正丙基)2His-D-2-Nal-D-Phe-Lys-NH2用與例1類(lèi)似的方法，以取代能力為0.34mmol/g的4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹(shù)脂(Novabiochem AG Switzerland，cat.#01-64-0013)為原料合成肽樹(shù)脂H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Resin。所用保護(hù)的氨基酸衍生物是Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-2Nal-OH和Fmoc-His(Trt)-OH。
在室溫下，將13μl正丙醇加入溶于3.3ml由DMF配制的1％乙酸中的150mg的H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys-Resin的攪拌漿體中。然后加入16.8mg溶于0.5ml DMF中的NaCNBH3(純度85％)，并繼續(xù)攪拌6小時(shí)。在該還原性烷基化步驟之后，分離肽樹(shù)脂，用DMF和CH2Cl2在過(guò)濾漏斗上洗滌并真空干燥。
將所得到的兩種肽樹(shù)脂混合，并將未烷基化的一正丙基和二正丙基肽從所得到的300mg肽樹(shù)脂上裂解下來(lái)。用與例1類(lèi)似的方法通過(guò)半制備HPLC分離并提純肽。得到6.54mg正丙基-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2和5.59mg(正丙基)2-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2。
按照例1所述方法對(duì)最終產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。對(duì)(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2而言，采用洗脫條件A1和B1的保留時(shí)間分別為16.45分鐘和19.92分鐘。
例7H-Ala-Tic-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用生產(chǎn)商提供的0.5mmol規(guī)模的單偶聯(lián)方案，以取代能力為0.72mmol/g的620mg4-甲基BHA樹(shù)脂(BissenderfBiochemicals，Hannover，Gernany，cat.#RMIS50)為原料，按照Boc方法在Applied Biosystems 430A肽合成儀上合成標(biāo)題中的肽，采用的是在DMF中與預(yù)先制備的對(duì)稱(chēng)酐的單偶聯(lián)。該方案調(diào)整到60分鐘聯(lián)偶時(shí)間。將2×60分鐘的雙偶聯(lián)時(shí)間用于N-末端Ala。用于該合成的保護(hù)的氨基酸衍生物是Boc-Lys(2-氯-Z)OH、Boc-D-Phe-OH，Boc-D-2Nal-OH，Boc-Tic-OH和Boc-Ala-OH。
通過(guò)在0℃與由4.5ml HF和500μl m-甲酚組成的混合物一起攪拌75分鐘，將肽從486mg肽樹(shù)脂上裂解下來(lái)。在0℃用氮?dú)饬鲗F蒸發(fā)掉。用50ml乙醚將肽從殘余的油狀物和廢樹(shù)脂中沉淀出來(lái)，并用50ml乙醚洗滌2次。干燥之后，用加有4滴乙酸的10ml H2O將肽提取沉淀。用水將提取物稀釋至100ml。
用與例1類(lèi)似的方法，通過(guò)兩套半制備HPLC從2×18ml的稀釋提取液中提純粗制肽。產(chǎn)量為17.3mg。
按照例1所述方法鑒定最終產(chǎn)物。
采用條件A1和B1進(jìn)行RP-HPLC分析所得到的保留時(shí)間分別為27.37分鐘和29.50分鐘。
例8(2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3-苯丙胺通過(guò)用溶于NMP中的20％哌啶處理20分鐘，除去580mg取代能力為0.43mmol/g的4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基(Novabiochem AG Switzerland cat.#01-64-0013)上的Fmoc基團(tuán)。用DMF和CH2Cl2洗滌樹(shù)脂，并用例5所述的烷基化方法用Fmoc-D-Phe-醛進(jìn)行烷基化。
此后，過(guò)濾分離肽樹(shù)脂，在過(guò)濾斗漏上用溶于DMF中的1％乙酸洗滌，并采用例1中的肽合成儀完成鏈延長(zhǎng)。所用保護(hù)的氨基酸衍生物是Fmoc-D-2Nal-OH、Fmoc-His(Trt)-OH和Fmoc-Ala-OH。
用與例1類(lèi)似的方法將肽從肽樹(shù)脂上裂解下來(lái)并通過(guò)半制備HPLC提純粗制肽。產(chǎn)量為23.92mg。
按照例1所述方法鑒定最終產(chǎn)物。采用洗脫條件A1和B1的保留時(shí)間分別為19.33分鐘和21.77分鐘。
例9-54
例55((丙?；?-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷用與例3類(lèi)似的方法，由取代能力為0.96mmol/g的Sasrin樹(shù)脂合成肽樹(shù)脂(丙?；?-D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹(shù)脂。
對(duì)所得到的105mg樹(shù)脂進(jìn)行氨解作用。
通過(guò)在室溫下與1ml正己胺一起攪拌20小時(shí)，將肽((丙酰基)-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷從105mg的丙?；?D-2Nal-D-Phe-Sasrin樹(shù)脂上裂解下來(lái)。濾去廢樹(shù)脂并用1ml DMF提取。將合并的濾液和提取液在攪拌條件下加入8ml 1M氫氯酸中。通過(guò)加入約70ml CH3CN將所得沉淀物重新溶解，然后加入20ml H2O進(jìn)行再沉淀。濾出沉淀物，用水洗滌并干燥。產(chǎn)量為12mg。
按照例1所述方法對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，所不同的是，用類(lèi)似于B1的條件僅進(jìn)行一個(gè)HPLC分析，與B1條件不同的是用0.1％TFA/H2O-90％CH3NH/0.1％TFA/H2O梯度液在50分鐘內(nèi)洗脫。保留時(shí)間為35.73分鐘。
例56(3-甲基氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類(lèi)似于例7的方法，由取代能力為0.72mmol/g的MBHA樹(shù)脂合成肽樹(shù)脂(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA。
按照Kaljuste，K.和Unden，A.的方法(Int.J.Peptide ProteinRes.42 118-124，1993)將所得到的肽樹(shù)脂甲基化。將300mg樹(shù)脂與由8ml DCM、150μl DIEA(二乙基異丙胺)和39mg 4，4’-二甲氧基二苯甲基氯(DOD-Cl)組成的混合物一起攪拌2小時(shí)，然后過(guò)濾分離并用DCM和DMF洗滌。將DOD保護(hù)的肽樹(shù)脂與18ml溶于DMF中的3.7％甲醛溶液一起攪拌，加入0.18ml乙酸和180mg Na CNBH3并繼續(xù)攪拌18小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離樹(shù)脂，并用DMF和DCM洗滌。通過(guò)用2×3ml DCM/TFA 1∶1分別處理5分鐘和30分鐘去除DOD保護(hù)，用DCM洗滌肽樹(shù)脂，然后在真空中干燥。
用類(lèi)似于例7的方法將所得N-甲基化的肽從370mg樹(shù)脂上裂解下來(lái)，并按照例1所述方法提純和鑒定。產(chǎn)量為17.3mg。
用條件A1和B1進(jìn)行RP-HPLC分析所得到的保留時(shí)間分別為22.83分鐘和24.60分鐘。
例57(3-二甲基氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類(lèi)似于例7的方法，由取代能力為0.72mmol/g的MBHA樹(shù)脂合成肽樹(shù)脂(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA樹(shù)脂。
將650mg所得肽樹(shù)脂與20ml溶于DMF中的1％乙酸和45μl溶于DMF中的3.7％甲醛溶液一起攪拌。然后加入55mgNaCNBH3(85％)，并繼續(xù)攪拌18小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾分離樹(shù)脂，并用DMF、DCM/MeOH 6∶4和DCM洗滌。
用類(lèi)似于例7的方法將所得到的N，N-二甲基化肽的混合物從631mg樹(shù)脂上裂解下來(lái)，并按照例1所述方法進(jìn)行提純和鑒定。產(chǎn)量為8.58mg。
用條件A1和B1進(jìn)行RP-HPLC分析所得到的保留時(shí)間分別為31.58分鐘和33.00分鐘。
例58(3-氨基-3-甲基丁酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類(lèi)似于例1的方法，由2g取代能力為0.39mmol/g的4-((2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹(shù)脂(Rink樹(shù)脂)(Novabiochem，Bad Soden，Germany，cat.#01-64-0013)合成肽樹(shù)脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink樹(shù)脂。
將所得到的500mg肽樹(shù)脂(0.15mmol)懸浮于4mlDCM/MeOH 1∶1中。加入42μl三乙胺(0.3mmol)，并在冷卻至0℃以后在攪拌條件下加入31mg(0.158mmol)2，2-二甲基-4-氧-氮雜環(huán)丁烷-1-磺酰氯。在0℃繼續(xù)攪拌20分鐘，并在室溫下攪拌90分鐘。在用DCM/MeOH 6∶4洗滌樹(shù)脂并真空干燥之后，用類(lèi)似于例1的方法將粗肽從樹(shù)脂上裂解下來(lái)并提純。產(chǎn)量為41.81mg。
用A1和B1條件進(jìn)行RP-HPLC分析所得保留時(shí)間分別為21.35分鐘和22.95分鐘。
例59(2S)-((3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇用類(lèi)似于例3的方法，由取代能力為0.87mmol/g的980mgSasrin樹(shù)脂合成肽樹(shù)脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin樹(shù)脂。
用Boc-3-氨甲基苯甲醛對(duì)1.4g上述樹(shù)脂進(jìn)行還原性烷基化，并將肽從1.0g所得樹(shù)脂上裂解下來(lái)，用類(lèi)似于例5的方法對(duì)一半粗制產(chǎn)物進(jìn)行提純。產(chǎn)量為18.46mg。
用A1和B1條件進(jìn)行RP-HPLC分析所得到的保留時(shí)間分別為14.78分鐘和17.40分鐘。
例60(2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類(lèi)似于例1的方法，由取代能力為0.39mmol/g的2g 4-(2’，4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基樹(shù)脂(Rink樹(shù)脂)(Novabiochem，Bad Soden，Germany，cat.#01-64-0013)合成肽樹(shù)脂H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink樹(shù)脂。
在10ml DMF中將300mg所得肽樹(shù)脂(0.096mmol)與54mg鄰苯二甲酰-2-氨甲基-苯甲酸(0.192mmol)、182mg HBTU(0.480mmol)和164μl DIEA(0.96mmol)一起攪拌18小時(shí)。
在用DMF、DCM/MeOH 6∶4和DCM洗滌樹(shù)脂，并真空干燥之后，通過(guò)在室溫下與由3ml TFA、225mg苯酚、75μl乙二硫醇、150μl苯硫基甲烷和150μl H2O組成的混合物一起攪拌180分鐘，將(鄰苯二甲酰-2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2從290mg肽樹(shù)脂裂解下來(lái)。過(guò)濾裂解混合物，用1mlTFA洗滌殘余的樹(shù)脂，并通過(guò)氮?dú)饬鲗V液濃縮至1ml。用50μl乙醚將粗制肽從上述油狀物中沉淀出來(lái)，并用50ml乙醚洗滌3遍。然后將沉淀物溶于50μl H2O中并冷凍干燥。在70℃溫度下，在5ml乙醇中將所得粉狀物與0.5ml水合肼一起攪拌6小時(shí)，然后用50ml H2O稀釋并冷凍干燥。
通過(guò)加入2ml乙酸、2ml乙醇和100ml H2O溶解冷凍干燥產(chǎn)物，并用類(lèi)似于例1的方法提純。產(chǎn)量9.43mg。
用條件A1和B1進(jìn)行RP-HPLC分析所得保留時(shí)間分別為23.22分鐘和25.05分鐘。
例61H-Aib-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-OH用類(lèi)似于例5的方法合成標(biāo)題中的肽，不同的是，將1050mg取代能力為0.87mmol/g的Sasrin樹(shù)脂(2-甲氧基-4-烷氧芐基醇樹(shù)脂)(Bachem，Bubendorf，Switzerland，cat.#D-1295)用于合成，而且用于將第一個(gè)氨基酸殘基與樹(shù)脂偶聯(lián)的方案是，由4-二甲基氨基吡啶催化的預(yù)先制備的對(duì)稱(chēng)酐的偶聯(lián)，隨后用苯甲酸酐對(duì)樹(shù)脂上的殘余-OH基進(jìn)行封端。在將752mg肽樹(shù)脂裂解并按例1所述方法將7/10所得的粗制產(chǎn)物提純之后，獲得36.76mg產(chǎn)物。
按例1所述方法對(duì)最終產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。采用洗脫條件A1和B1的保留時(shí)間分別為13.90分鐘和17.42分鐘。
例62H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類(lèi)似于例56的方法，由取代能力為0.72mmol/g的MBHA樹(shù)脂合成肽樹(shù)脂H-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA樹(shù)脂。
通過(guò)與Boc-His(Bom)-OH和Boc-Aib-OH偶聯(lián)，將458mg的上述樹(shù)脂用于合成H-Aib-His(Bom)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA。然后將N-甲基化的肽從469mg所得樹(shù)脂上裂解下來(lái)，并按例1所述方法對(duì)1/2粗制肽進(jìn)行提純和鑒定。產(chǎn)量為23.5mg。
用條件A1和B1進(jìn)行RP-HPLC所得到的保留時(shí)間分別為17.62分鐘和19.95分鐘。
例63(糠基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類(lèi)似于例1的方法，由取代能力為0.43mmol/g的4-((2’4’-二甲氧苯基)-(Fmoc-氨基)甲基)-苯氧基在樹(shù)脂(Rink樹(shù)脂)(Novabiochem，Bad Soden，Ger-many，cat.#01-64-0013)合成肽樹(shù)脂H-Aib-His(Trt)-D-Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink樹(shù)脂。
然后將所得300mg肽樹(shù)脂與5ml溶于DMF的1％乙酸和410μl呋喃-2-醛攪拌。在15分鐘和180分鐘之后加入231mgNaCNBH3(85％)。持續(xù)攪拌18小時(shí)。過(guò)濾分離樹(shù)脂，并用DMF、DCM/MeOH6∶4和DCM洗滌。
將N-烷基化的肽從所得319mg樹(shù)脂上裂解下來(lái)，按照例1所述方法提純和鑒定。產(chǎn)量為44.8mg。
采用條件A1和B1進(jìn)行RP-HPLC分析所得到的保留時(shí)間分別為19.45分鐘和22.23分鐘。
例64N，N-二-(2R-羥基-丙基)-3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2用類(lèi)似于例7的方法，由取代能力為0.72mmol/g的4-甲基二苯甲基胺(MBHA)樹(shù)脂(Biss-endorfBiochemicals，Hannover，Germany，cat.#RMIS50)合成肽樹(shù)脂(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA樹(shù)脂。
然后，將所得500mg肽樹(shù)脂與12.5ml溶于DMF中的1％乙酸和410μl 2(R)-(四氫吡喃-2(R，S)-基氧丙醛一起攪拌。5分鐘后加入213mg NaCNBH3(85％)。繼續(xù)攪拌18小時(shí)。過(guò)濾分離樹(shù)脂，并用DMF、DCM/MeOH 6∶4和DCM洗滌。
將N，N-二烷基化肽從所得到的490mg樹(shù)脂上裂解下來(lái)，并按照例7所述方法進(jìn)行提純和鑒定。產(chǎn)量為20.72mg。
用條件A1和B1進(jìn)行RP-HPLC分析所得到的保留時(shí)間分別為23.4分鐘和25.33分鐘。
例65-110
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<p>N，N-(2R-羥丙基)-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 3-(4-咪唑基)丙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (反-4-氨甲基環(huán)己酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-N-Me-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2S)-(H-Aib-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷 (5-氨甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-氨甲基-噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2
例116用大鼠垂體細(xì)胞建立一個(gè)體外分析，以研究不同的GH促分泌素的作用。從雌性大鼠的垂體前葉中分離混合的垂體細(xì)胞培養(yǎng)物，并培養(yǎng)3天。洗滌之后，刺激細(xì)胞15分鐘，并測(cè)定培養(yǎng)物上清液中所分泌的GH量。
大鼠垂體細(xì)胞的提取方法為Sartor，O.等人方法(Endocrinology 116，1985，pp.952-957)的改進(jìn)方法。斷頭之后，從250mg的雌性Sprague-Dawley大鼠體內(nèi)分離垂體。除去垂體中葉，將其余部分放入補(bǔ)充了0.25％葡萄糖、2×非必須氨基酸和1％BSA的Gey’s培養(yǎng)基(提取緩沖液)中。將腺體切成小片并轉(zhuǎn)移到盛3ml添加有11.5mg胰蛋白酶和1000μg DNase的提取緩沖液的三角瓶中，并在37℃，以95％O2和70rpm的轉(zhuǎn)速培養(yǎng)35分鐘。通過(guò)在提取緩沖液中沉淀將片段洗滌3次，并用巴氏吸管將其抽吸成單細(xì)胞。分散之后通過(guò)尼龍濾膜(160μm)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行過(guò)濾，以除去未消化的組織。用補(bǔ)充了胰蛋白酶抑制劑(0.75mg/ml)提取緩沖液將細(xì)胞洗滌3次，并再懸浮于培養(yǎng)基(補(bǔ)充了25mM HEPES、4mM谷氨酰胺、0.75％NaHCO3、2.5％FCS、3％馬血清、10％大鼠血清、InM T3和4μg/L地塞米松的DMEM)中，使密度為2×105細(xì)胞/ml。將細(xì)胞接種到微量滴定板上，200μl/眼，并在37℃，8％CO2條件下培養(yǎng)3天。
在上述培養(yǎng)階段之后，用激發(fā)緩沖液(補(bǔ)充了1％BSA、0.25％D-葡萄糖和25mM HEPES的HBSS)洗滌細(xì)胞2次，并預(yù)培養(yǎng)1小時(shí)。然后除去緩沖液，并加入含有本發(fā)明肽化合物的新激發(fā)緩沖液，在37℃和5％CO2條件下將上述滴定板溫育15分鐘。測(cè)定法收集緩沖液，并在以下的閃爍親近測(cè)定法(SPA)中分析大鼠生長(zhǎng)激素(rGH)的含量(SPA，基本上如以下文獻(xiàn)所公開(kāi)的方法US4，568，649，Hart和Greenwalt，Mol.Immunol.16，1979，pp.265-269，或Udenfriend等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82，1985，pp.8672-8676)。
rGH分析是在適于在Packards TopCount(β-閃爍計(jì)數(shù)器)上直接計(jì)數(shù)的Opti Plates(96眼板)上進(jìn)行。
分析方案40μl緩沖液10μl樣品(培養(yǎng)的激發(fā)緩沖液)50μl125I-rGH50μl兔抗-rGH50μlSPA試劑(抗兔抗體)將板密封，并放在板搖床上搖動(dòng)30分鐘，接著再培養(yǎng)10小時(shí)，在10-15℃沉降并計(jì)數(shù)。
在該SPA中，與抗-GH兔抗體(初級(jí)抗體)結(jié)合的rGH和與氟微球體(SPA Type II RIA，購(gòu)自Amersham)結(jié)合的次級(jí)抗體反應(yīng)。任何放射性標(biāo)記的與初級(jí)抗體結(jié)合的rGH都能固定在該氟微球體上，然后就能夠發(fā)光。在β-閃爍計(jì)數(shù)器上測(cè)量，可以計(jì)算出放射性標(biāo)記的rGH量。隨著樣品中rGH含量的增加，與氟微球體結(jié)合的放射性標(biāo)記的rGH量減少。
權(quán)利要求
1.一種通式I所述的化合物A-B-C-D-(-E)P其中P為0或1；A為氫或R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO，其中q為0或1-5之間的-個(gè)整數(shù)；r為0或1；S為0或1-5之間的一個(gè)整數(shù)；R1為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代或N(R2)-R3，其中，R2和R3各自獨(dú)立地為氫或有選擇地被一個(gè)或多個(gè)羥基、吡啶基或呋喃基取代過(guò)的低級(jí)烷基；而當(dāng)r為1時(shí)，X是-NH-，-CH2-，-CH＝CH- 或 其中，R16和R17各自獨(dú)立的地為氫或低級(jí)烷基；B是(G)t-(H)u，其中t為0或1；u為0或1；G和H是從天然L-氨基酸或其相應(yīng)的D-異構(gòu)體或者非天然氨基酸中選擇的氨基酸殘基，如1，4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1，3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶丙氨酸、1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸、1，2，3，4-四氫norharman-3-羧酸、N-甲基氨茴酸、氨茴酸、N-芐基甘氨酸、3-氨基-3-甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸；其中，當(dāng)t和u都為1時(shí)，G和H之間的酰胺鍵可有選擇地被 取代，其中，Y是 或 ，而R18為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)芳烷基；C為式-NH-CH((CH2)w-R4)-CO-的D-氨基酸，其中w為0、1或2，而R4選自下列基團(tuán) 或 其中的每一個(gè)基團(tuán)有選擇地被鹵基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷氨基、氨基或羥基取代；當(dāng)p為1時(shí)，D是式-NH-CH((CH2)k-R5)-CO-的D-氨基酸，或當(dāng)p為0時(shí)，D是-NH-CH-((CH2)-R5)-CH2-R6或-NH-CH((CH2)m-R5)-CO-R6，其中R為0、1或2；l為0、1或2；m為0、1或2；R5選自下列基團(tuán) 或 其中每個(gè)基團(tuán)有選擇地被鹵基、烷基、烷氧氨基或羥基所取代；而R6為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R7)-R8，其中R7和R8各自獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基；當(dāng)p為1時(shí)，E是-NH-CH(R10)-(CH2)v-R9，其中r為0或1-8之間的一個(gè)整數(shù)；R9為氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基， 其中n為0、1或2，而R19是氫或低級(jí)烷基， 或 其中0為1-3之間的整數(shù)，或N(R11)-R12，其中R11和R12各自獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基，或 或 每個(gè)基團(tuán)有選擇地被鹵基、烷基、烷氧基、氨基、烷氨基、羥基、或氨基與吡喃己糖或吡喃己糖基吡喃己糖的Amadori重排產(chǎn)物所取代和當(dāng)p為1時(shí)，R10是選自-H、-COOH、-CH2-R13、-CO-R13或-CH2-OH的基團(tuán)，其中R13為哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基、-OH或-N(R14)-R15，其中R14和R15各自獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基；B與C之間的酰胺鍵，或者當(dāng)t和u為0時(shí)A與C之間的酰胺鍵有選擇地被 ，其中Y為 或 而R18為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)芳烷基取代，或者，當(dāng)p為1時(shí)，D與E之間的酰胺鍵有選擇地被-Y- 所取代，其中Y和R18如上所述；或其可以藥用的鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于p為1。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于A為氫。
4.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于A是R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO，其中R1為3-咪唑基，q為2，r為0，s為0；或者R1為NH2，q為1，r為1，X是雙取代的、最好是在1和3位取代的苯，而s為0；或者R1為NH，q為1，r為1，X是雙取代的、最好是在3和2位取代的噻吩，而s為0。
5.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于當(dāng)t為1時(shí)，G是Ala、Gly、Aib、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異哌啶甲酸。
6.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，當(dāng)u為1時(shí)，H是His、Phe、Tic、3Pyal、Gly、Ala、Phe(4-NH2)、Sar、Pro、Tyr、Arg、Orn、3-氨甲基苯甲酸或D-Phe。
7.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R4是2-萘基。
8.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R5是苯基。
9.如權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于v是2-6，R9是-NH2、嗎啉代丙基、嗎啉代乙基或(1-甲基吡咯烷基)乙基。
10.如權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于R10是-COOH、CH2-OH、-H或CONH2。
11.如權(quán)利要求1所述的化合物，選自下列諸化合物H-Ala-HisΨ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(正丙基)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(4-咪唑基)乙?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(4-咪唑基)丙烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-氨基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基丁烯酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-哌啶子基-羧基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己烷6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)己胺5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)戊胺H-Ala-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙基)苯2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)乙胺4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)甲基)芐胺H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2H-Ala-His-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(麥芽糖基)-NH2(2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3苯丙胺H-Ala-N-Me-(2-氨基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-(甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(4-(氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH24-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丁胺3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)丙胺(3-(二甲基氨甲基)苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁?；?-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2(3-氨基-3-甲基丁?；?-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH2(2S)-(3-氨甲基苯甲酰)Ψ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(2S)((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2(2S)-(H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-氨基己醇(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2(2-氨甲基苯乙酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH22-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-吡啶基)乙烷H-Aib-HisΨ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Orn-NH25-氨甲基噻吩基)-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2(3-氨甲基噻吩基-2-羰基)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-1Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2(糠基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-吡啶甲基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3S)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3R)-哌啶羰基-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)乙基)苯N，N-二(2R-羥丙基)-(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(2R-羥丙基)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-PheΨ(CH2NH)Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2(3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(苯乙基)-Gly-Lys-NH2H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2H-Aib-His-D-2Nal-D-PheΨ(CH2N(Me))-Lys-NH23-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH23-((氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基2-吡咯烷基)乙烷2-(3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-(3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基2-吡咯烷基)乙烷3-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3R)-哌啶羰基-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷3-((3-氨甲基苯甲酰)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)嗎啉代丙烷H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH22-((3-氨甲基苯甲酰)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷2-((3R)哌啶羰基-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(1-甲基-2-吡咯烷基)乙烷
12.一種藥用組合物，包括作為活性成分的通式I化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或稀釋劑。
13.如權(quán)利要求12所述的單位劑量形式的組合物，含有約10-約200mg的通式I的化合物或其可藥用鹽。
14.一種用于激發(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的藥用組合物，該組合物含有作為活性成分的通式I的化合物或其可以藥用的鹽，以及可以藥用的載體或稀釋劑。
15.一種激發(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的方法，該方法包括給需要治療的對(duì)象使用有效劑量的通式I的化合物或其可以藥用的鹽。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于通式I的化合物或其可以藥用的鹽或酯的有效劑量范圍為每天0.0001-100mg/kg體重，最好為每天0.001-50mg/kg體重。
17.將通式I的化合物或其可以藥用的鹽用于制備用來(lái)激發(fā)垂體釋放生長(zhǎng)激素的藥物的用途。
全文摘要
通式A-B-C-D-(E)p的合成肽，其中p為0或1，由于具有相鄰氨基酸，并有選擇的結(jié)合以用(Y-N-R
文檔編號(hào)A61K38/00GK1138335SQ94194590
公開(kāi)日1996年12月18日 申請(qǐng)日期1994年12月22日 優(yōu)先權(quán)日1993年12月23日
發(fā)明者N·L·約翰森, J·勞, K·馬德森, B·F·朗特, H·索格森, B·S·翰森, B·皮奇克 申請(qǐng)人:諾沃挪第克公司