專利名稱：組織保護(hù)和再生組合物的制作方法
對(duì)于受刺激、損傷和破損皮膚的治療，盡管開(kāi)發(fā)出了許多藥物，但仍然是一個(gè)重要的健康問(wèn)題。而且，在不發(fā)達(dá)國(guó)家對(duì)于護(hù)膚產(chǎn)品和藥劑的需求很大，特別是在熱帶國(guó)家，那里的一些狀況如缺乏醫(yī)療保健，廣泛傳播的皮膚真菌性疾病，和使用燃料如煤油做飯及類似情況會(huì)引起皮膚損傷的高發(fā)病率。對(duì)于這些國(guó)家來(lái)說(shuō)，非常需要以容易獲得的原料低造價(jià)地生產(chǎn)出有效的藥劑。目前已經(jīng)有許多使傷口愈合的方法，如通過(guò)重組DNA方法生產(chǎn)生長(zhǎng)因子蛋白，使用具有損傷愈合特性的藥物，和封閉包扎傷口，這些方法對(duì)于上述國(guó)家來(lái)說(shuō)在今后幾十年內(nèi)仍然超出了病人的經(jīng)濟(jì)支付能力。
在較發(fā)達(dá)的國(guó)家，由于醫(yī)療服務(wù)中支出費(fèi)用的壓力不斷增加，也需要研究低成本的護(hù)膚產(chǎn)品和傷口愈合藥物。有些治療方法如對(duì)靜脈曲張性潰瘍的住院治療，盡管治療上有效，目前很少能得到醫(yī)療保險(xiǎn)機(jī)構(gòu)的允許，而門診治療越來(lái)越普遍。盡管已開(kāi)發(fā)出了許多不同的治療方法，如使用生長(zhǎng)因子促進(jìn)皮膚修復(fù)，但這也必定是相當(dāng)高費(fèi)用的治療方法。
人和其他的動(dòng)物中的延遲愈合或不完全愈合會(huì)給病人帶來(lái)額外的疼痛和痛苦，并且會(huì)顯著地增加損傷并發(fā)癥和醫(yī)療費(fèi)用，而且常常是該損傷發(fā)展成慢性潰瘍，需要更多的照顧和醫(yī)療保護(hù)以控制感染和組織壞死。甚至當(dāng)這種損傷最終愈合后，該損傷區(qū)域經(jīng)常失去對(duì)觸覺(jué)刺激的反應(yīng)能力，而且經(jīng)常出現(xiàn)過(guò)量的不成熟膠原蛋白沉積，產(chǎn)生永久性斑痕。對(duì)于外科手術(shù)產(chǎn)生的傷口也急需改進(jìn)的傷口愈合組合物。手術(shù)后的完全和快速愈合對(duì)于外科手術(shù)的成功，尤其是在重病人或老年患者身上，通常起著重要的作用。
損壞正常愈合反應(yīng)的另一個(gè)因素是損傷或創(chuàng)傷皮膚的過(guò)度炎癥。雖然炎癥過(guò)程及其伴行的白細(xì)胞浸入損傷區(qū)是自然愈合過(guò)程中的一個(gè)組成部分，在某些情況下炎癥過(guò)程會(huì)變得過(guò)度，并延遲了愈合。損傷的組織在愈合過(guò)程的早期變?yōu)楣潭ǘ荒芾^續(xù)到完全修復(fù)。在這種情況下，要使用具有抗炎活性的化合物以維持該過(guò)程正常進(jìn)行。
一種對(duì)有關(guān)炎癥和傷口愈合受損的臨床問(wèn)題的可靠醫(yī)療處理措施是使用金屬離子與有機(jī)分子或氨基酸、氨基酸衍生物和肽類的配合物。這些配合物中有些具有抗炎活性，而另外一些兼有抗炎活性和愈合作用。而其他的一些配合物據(jù)報(bào)道除具有抗炎和/或愈合活性外還具有毛發(fā)生長(zhǎng)刺激作用。
使用銅鹽或配合物作為抗炎劑用于急性或慢性關(guān)節(jié)炎患者的治療過(guò)程中可使胃潰瘍愈合可追逆到40年代和50年代(見(jiàn)，如Sorenson的文章，Inflammation3∶317-331(1976);AgentsandActions8∶305-331(1981)，和ComprehensiveTherapy11∶49-64(1985))。對(duì)銅鹽和配合物，如銅-水楊酸配合物的使用似乎已被淘汰，這主要是因?yàn)轭惞檀碱惪寡讋?，如氫化可的松的早期療效被肯定之緣故。已?jīng)對(duì)銅與氨基酸(色氨酸、賴氨酸)，與非類固醇抗炎藥物(消炎痛、苯酮苯丙酸、乙酰水楊酸)或與脂肪酸(油酸、月桂酸和辛酸)這些配合物進(jìn)行了研究，但是，盡管它們療效確定，卻由于刺激性、毒性和功效不足的問(wèn)題，很少能研制到前期臨床階段。
在許多銅配合物被報(bào)道具有抗炎特性的同時(shí)，已報(bào)道有一組更為局限的此類物質(zhì)也具有愈合作用，Heintze(美國(guó)專利號(hào)No.4，123，511)報(bào)道銅-油酸配合物具有抗炎和皮膚愈合活性。Sorenson(美國(guó)專利號(hào)No.4，440，754)描述了使用銅(Ⅱ)鹽和氨基酸，如色氨酸或賴氨酸，或者和有機(jī)分子如3，5-二異丙基水楊酸，乙酰水楊酸或水楊酸的配合物來(lái)預(yù)防和愈合胃腸道潰瘍。利用傷口愈合模型，Townsend和Sorenson(Sorenson等，AgentsandActions8∶305-325(1981)發(fā)現(xiàn)水楊酸-銅可以加快鼠的外科誘導(dǎo)潰瘍的愈合速度和改善愈合質(zhì)量。而且，Sorenson寫到(出處同上，和Inflammation3∶317-331(1976)∶Townsend證明了銅(Ⅱ)-(色氨酸)2可增加外科誘導(dǎo)潰瘍模型中潰瘍愈合的速度。愈合的加速主要是由于傷口的較快上皮再生和膠原蛋白在數(shù)量和質(zhì)量方面的提高。在治療組動(dòng)物中，形成細(xì)的正常方位的膠原蛋白纖維，相對(duì)而言，在未治療組動(dòng)物中，新的膠原蛋白非常致密，并且由粗的，波浪不規(guī)則蛋白束組成，形成斑痕組織。
Federici和Bertolotto(EP450，398和IT9，019，948)報(bào)道硫酸軟骨素-銅(Ⅱ)配合物具有抗炎活性。歐洲專利號(hào)No.EP66，283公開(kāi)了“eustatic”組合物，它含有一種非毒性金屬離子(包括銅)和一種透明質(zhì)酸的氨基葡萄聚糖(glycosaminoglycan)或硫酸軟骨素，可用作一種結(jié)瘢劑(通過(guò)閉合愈合傷口)。
英國(guó)專利申請(qǐng)GB2044265描述了三磷酸腺苷的金屬配合物(包括銅)可有助于骨折以及骨質(zhì)疏松和骨囊腫情況下的骨組織恢復(fù)。
Konishi(美國(guó)專利號(hào)No，4，461，724)報(bào)道四肽G1y-Ser-His-Lys和相關(guān)結(jié)構(gòu)的肽與金屬，如離子態(tài)銅和鋅，配合后具有抗炎和愈合作用。
Yu(美國(guó)專利4，053，630)公開(kāi)了使用磺基丙氨酸及其衍生物亞磺酸半胱氨酸或高磺基丙氨酸與金屬離子如三價(jià)鐵、二價(jià)銅、鋅或鋁螯合形成組分，可減緩以角化缺陷為特征的疾病癥狀，并且達(dá)到緩解鱗癬、皮屑和痤瘡的目的。Bertelli(美國(guó)專利4，156，737)指出對(duì)-氨甲基-苯-磺酰胺的銅配合物對(duì)皮膚燒傷具有愈合和保護(hù)作用。VanScott(美國(guó)專利4，283，386)指出磺基丙氨酸、亞磺酸半胱氨酸和高磺基丙氨酸的金屬(銅、鋅或鋁)鹽形式具有緩解皮膚干燥和破損、角化病、和掌、跖角化過(guò)度癥的治療作用。
Niwa(Dermatologica179S1∶101-106(1989))和Bergren等(Am.Surg.54∶333-336(1988))發(fā)現(xiàn)抗炎性蛋白質(zhì)Cu、Zn-超氧化物歧化酶也具有加快愈合的作用。
Pickart(PCT公開(kāi)號(hào)WO91/14437，WO91/12267，WO91/05797，WO91/03488，WO89/12441，WO88/26448，WO88/08851，歐洲專利EP190，736，EP189，182;和美國(guó)專利號(hào)No.4，767，753)描述了Gly-L-His-L-Lys的金屬配合物的合成和作為抗炎和愈合劑的使用。
許多金屬配合物已被用于促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)。Yamashiki(日本專利70018997)使用一種銅-泛酸的配合物主要用于促進(jìn)毛發(fā)根部的生長(zhǎng)和促進(jìn)皮膚的功能。Morelle(英國(guó)專利GB2097256，德國(guó)專利32212448)使用氨基酸衍生物(N-丁酰氨基酸)與銅和其他金屬的配合物作為化妝品和治療劑，包括用作毛發(fā)和皮膚刺激劑。Banfi等人(美國(guó)專利號(hào)No.4，503，047)公開(kāi)了一種組合物，它主要含有一種或幾種含硫氨基酸和銅(Ⅱ)離子加上少量的異硫氰酸烯丙酯和硫氰酸鹽離子以發(fā)揮毛發(fā)生長(zhǎng)刺激作用。Pickart(WO90/07431，88/08695和EP288，278)發(fā)現(xiàn)Gly-L-His-L-Lys的衍生物的一些金屬配合物可以增加毛囊的大小和毛發(fā)生長(zhǎng)的速度。
盡管上述的金屬配合物具有肯定的治療作用，但許多金屬配合物有毒性和組織刺激性(見(jiàn)，如Johnson等人，Inorg.Chem.Acta67∶159-165(1982);Pickart等人，Biochem.Pharm.32∶3868-3871(1983);和Pickart等人，Lymphokines8∶425-446(1983))。例如，雖然銅-水楊酸配合物和一些銅-水楊酸類似物具有抗炎活性，但其他的水楊酸類似物如水楊醛苯甲酰腙的銅(Ⅱ)配合物對(duì)組織具有很高的毒性。同樣，銅(Ⅱ)-Gly-L-His-L-Lys可支持細(xì)胞的存活力并具有抗炎和愈合作用，但是其銅結(jié)合區(qū)的緊密合成的芳?；觐愃莆飳?duì)細(xì)胞和組織有高度的毒性。
與銅配合物治療應(yīng)用有關(guān)的另一個(gè)問(wèn)題是銅離子對(duì)配合分子的結(jié)合親合力問(wèn)題。盡管可以合成一個(gè)確定的銅配合物，但在其治療應(yīng)用中此配合物要處于一個(gè)事實(shí)上有上百個(gè)之多的化合物競(jìng)爭(zhēng)來(lái)與銅離子結(jié)合的組織生理環(huán)境中，這樣它可以形成針對(duì)六個(gè)獨(dú)立分了的靜電鍵。如果從配合物中去除銅，變成松散結(jié)合，那么就會(huì)出現(xiàn)組織刺激(見(jiàn).Raju等人，J.Natl.CancerInst.69∶1183-1188(1982))。
如果將這種金屬配合物加入到膏或油膏載體中制成制劑會(huì)出現(xiàn)進(jìn)一步復(fù)雜的情況。將各種化學(xué)物質(zhì)加入到制劑中以增加對(duì)皮膚和創(chuàng)傷表面的粘合力，并增加配合物向靶組織的滲透。但是，由于這些物質(zhì)中有許多也可以與金屬離子結(jié)合，因此所期望的治療效果會(huì)失去或明顯減弱。雖然可使用一些洗滌劑如十二烷基硫酸鈉來(lái)幫助乳化液的油水相混合，并穩(wěn)定該制劑，但是，這些洗滌劑本身就是組織刺激劑，從而延遲了愈合。
在將許多金屬配合物用于治療應(yīng)用時(shí)所遇到的另一個(gè)問(wèn)題是不能對(duì)它們進(jìn)行加熱消毒;因此，為了達(dá)到安全要求，在生產(chǎn)過(guò)程中必須加入高濃度的抗微生物化學(xué)藥品以抑制微生物的生長(zhǎng)和病毒傳播。這些抗微生物試劑也會(huì)抑制公宿主細(xì)胞如巨噬和成纖維細(xì)胞的存活能力和功能，而這些宿主細(xì)胞與皮膚和其他組織的維持和修復(fù)有關(guān)，因此這些試劑會(huì)使愈合反應(yīng)遲鈍。
本發(fā)明的目的在于提供本領(lǐng)域中所需求的可用于組織保護(hù)、組織愈合，和/或刺激毛發(fā)生長(zhǎng)的組合物，這種組合物可以方便簡(jiǎn)易地生產(chǎn)且成本低。優(yōu)選的是，這種組合物可以進(jìn)行消毒而不損失生物活性，并且在不使用洗滌劑或其他可能有刺激性的化合物情況下制成局部使用的藥劑。甚至更優(yōu)選的是，該組合物通常被管理機(jī)構(gòu)認(rèn)可安全的，因此，在使用過(guò)程中不會(huì)有安全方面的擔(dān)心和管理方面的障礙。十分令人驚奇地是，本發(fā)明滿足了這處和其他有關(guān)的需要。
本發(fā)明提供了用于溫血?jiǎng)游锛涌炱渚植繐p傷和皮膚刺激愈合，用于預(yù)防皮膚受氧化作用損傷，和用于增加毛囊大小及毛發(fā)生長(zhǎng)速度的組合物和方法。用于這些方法的組合物，包括藥物組合物，是由與一種離子態(tài)過(guò)渡金屬配合的蛋白胨制備的。
因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供了用于制備藥物組合物的方法，該藥物組合物用于加快溫血?jiǎng)游锏木植總谟匣蛟黾悠涿掖笮〖懊l(fā)生長(zhǎng)。使一種蛋白胨消化產(chǎn)物與一定量的過(guò)渡金屬鹽水溶液結(jié)合使之足以誘發(fā)沉淀。典型的是，該蛋白胨消化產(chǎn)物是從酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類、絲蛋白、大豆蛋白等制備的，而離子態(tài)過(guò)渡金屬選自銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)和錫(Ⅳ)。
所得到的沉淀物由來(lái)源于蛋白胨的疏水肽和金屬的配合物組成。然后分離胨-金屬配合物沉淀物，如通過(guò)離心分離，并且再按其應(yīng)用和給藥方式的要求配制成制劑。一般是將配合物與一種藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合形成一種乳膏或洗液，濃度為從大約5%至大約25%的蛋白胨-金屬配合物或更多。該制劑可以按需滅菌或巴氏消毒，而不會(huì)破壞該白胨-金屬配合物的愈合或毛發(fā)生長(zhǎng)刺激活性。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了加快溫血?jiǎng)游飶钠つw傷口，如外科手術(shù)切口，燒傷，氧化性損傷產(chǎn)生的炎癥或輕度刺激等中恢復(fù)的方法。該方法包括給皮膚損傷或刺激處施用一治療或在某些情況下施用一預(yù)防有效果的含有蛋白胨-過(guò)渡金屬離子配合物的組合物。由于本發(fā)明組合物的粘著性增加，與其他局部愈合劑和制劑相比，本組合物一般很少在皮膚上多次使用。
另外一種方案涉及到增加溫血?jiǎng)游?，如人的毛囊大小和毛發(fā)生長(zhǎng)速度的組合物和方法。該方法包括在需要毛發(fā)生長(zhǎng)的區(qū)域皮膚上施用一足夠量的蛋白胨-金屬配合物以增加所說(shuō)動(dòng)物的毛囊大小和毛發(fā)生長(zhǎng)的速度。典型的是，該組合物可以制成乳膏局部給藥，并且可以每天使用直至觀察到毛發(fā)生長(zhǎng)，而且還可以在此之后使用足夠的時(shí)間以維護(hù)所需量的毛發(fā)生長(zhǎng)。
本發(fā)明提供的組合物和方法可用于部皮膚治療以保護(hù)受損皮膚，從而使自然愈合過(guò)程繼續(xù)進(jìn)行，以加強(qiáng)溫血?jiǎng)游锲つw中的組織再生過(guò)程，并刺激溫血?jiǎng)游镏械拿l(fā)生長(zhǎng)。該組合物是由酶促蛋白消化產(chǎn)物和過(guò)度金屬如銅、錮或錫離子的配合而形成的。還提供了用于溫血?jiǎng)游镏懈纳茡p傷皮膚的恢復(fù)、加快燒傷或手術(shù)切口的愈合及刺激毛發(fā)生長(zhǎng)的方法。
本發(fā)明的蛋白胨-金屬配合物是由蛋白質(zhì)的酶消化產(chǎn)物制備的。蛋白胨一般是由在蛋白部分水解過(guò)程中形成的中間多肽產(chǎn)物和小肽混合物組成的?？捎糜诒景l(fā)明的一些類型的酶促蛋白消化產(chǎn)物是大豆蛋白、酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類(如PRIMATONE)，如牛肉、肝、絲蛋白和此類的消化產(chǎn)物。蛋白胨消化產(chǎn)物的含義是指根據(jù)公知方法使用酶，如木瓜蛋白酶，通過(guò)酶消化使蛋白降解的產(chǎn)物，如按Remington'sPharmaceuticalScience，MackPublishingCo.，Easton，PAPP.428-429(1975)中所述方法，本文引用該文獻(xiàn)作為參考。許多蛋白胨消化物可以廣泛地購(gòu)買到，如購(gòu)自SigmaChemicalCompany，St.Louis，Mo.
為了生產(chǎn)可用于本發(fā)明的配合物，將蛋白胨消化物與一種或幾種離子態(tài)過(guò)渡金屬，如銅、錮、錫、鋅或其鹽，如硫酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽等配合。在制備蛋白胨-金屬配合物的一種方法中，將一種胨溶于溫水中(約40℃)，濃度大約5至50%(重量/體積)，然后與一種金屬鹽(氯化銅(Ⅱ)，氯化錫(Ⅱ)，氯化錫(Ⅳ)，氯化錮(Ⅲ)或氯化鋅(Ⅱ)以鹽濃度約10至50%(w/v)，優(yōu)選為約20%(w/v)的水溶液混合。所加入的金屬鹽溶液的體積是在溶液中誘發(fā)大量沉淀所需(在大豆蛋白胨情況下約20至50%的起始體積)且在將pH調(diào)至pH6至7之間后可誘發(fā)最大量沉淀形成所需的體積。該沉淀物含有大量的疏水金屬鹽。所說(shuō)的配合是指肽與金屬離子形成靜電鍵，但這種配合機(jī)制只是一種可能的解釋，而不約束性的。
然后通過(guò)任何合適的分離或純化方法，如過(guò)濾、提取、離心、結(jié)晶或這些方法的結(jié)合來(lái)完成蛋白胨、金屬配合物的分離和純化。參考下面的實(shí)施例可以得到對(duì)合適分離步驟的具體解釋。但是，其他等同的分離步驟當(dāng)然也可以使用。
本發(fā)明的蛋白胨-金屬配合物可以根據(jù)治療、預(yù)防或化妝等不同應(yīng)用而施用，可以給人或在獸醫(yī)上給其他溫血?jiǎng)游锸┯谩Ｌ貏e適合本發(fā)明組合物治療的獸醫(yī)動(dòng)物是馬、牛、豬、綿羊、山羊、犬、鳥(niǎo)、貓等。
該組合物及其藥物制劑在預(yù)防和/或治療或化妝應(yīng)用時(shí)可以局部、表面、口服或非胃腸道(如，皮下注射)給藥。優(yōu)選的是，該藥物組合物可以局部，如在表面以糊劑、乳膏或軟膏給藥。
如果是給溫血?jiǎng)游锝o藥，該蛋白胨-金屬組合物典型的是要進(jìn)行滅菌，并配制成藥物或獸醫(yī)劑型?？梢酝ㄟ^(guò)慣用的、公知的滅菌技術(shù)，如蒸煮或巴氏滅菌對(duì)含有蛋白胨-金屬配合物的組合物進(jìn)行滅菌，而基本上不會(huì)對(duì)蛋白胨-金屬配合物的生物活性產(chǎn)生不利影響。為了接近生理狀況所需和制備方便給藥的組合物，該組合物可以含有藥學(xué)上可接受的輔料，如pH調(diào)節(jié)和緩沖劑，以及釋放載體。用于制備藥學(xué)上可給藥的化合物的實(shí)際方法對(duì)于本領(lǐng)域中的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是已知或顯而易見(jiàn)的，并且詳細(xì)地記載于，如Remington'sPharmaceuticalScience，如前所述。
根據(jù)所要使用的給藥方式和應(yīng)用，該組合物可以是固體、半固體、或液體劑量形式，如，粉劑、顆粒劑、結(jié)晶、液體、混懸液、脂質(zhì)體、糊劑、乳膏、軟膏等，并且可以是適合于相對(duì)精確劑量的給藥的單位劑量形式。該組合物可以包括一種慣用的藥物載體或賦形劑，另外，還可以包括其他藥物試劑，生長(zhǎng)因子，傷口愈合劑(sealant)，載體等等，如下面所進(jìn)一步描述的。
對(duì)于半固體組合物來(lái)說(shuō)，由于它適合于制成表面局部給藥的糊劑和乳膏，該蛋白胨-金屬配合物可以單獨(dú)提供或者與慣用的無(wú)毒性載體如，蘆薈膠、鯊?fù)?、硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、鯨蠟醇、硬脂酸，和1，2-丙二醇等一起混合。這種組合物可以含有大約5-100%活性成分，更優(yōu)選的是大約5-25%。這些制劑中蛋白胨-金屬配合物的濃度可以在很寬的范圍內(nèi)變化，并且可以根據(jù)所選擇的特定給藥方式因使用、粘度等不同而進(jìn)行選擇。制備這種劑量形式的實(shí)際方法對(duì)于本領(lǐng)域中的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是習(xí)慣性在或顯而易見(jiàn)的，例如，參見(jiàn)Remington'sPharmaceuticalScience，17thed.，MackPulbishingCompany，Easton，PA(1985)，本文引用了該文獻(xiàn)作為參考。所要給藥的組合物或制劑在任何情況下都含有足以達(dá)到對(duì)所治療客體的所需治療或預(yù)防作用的一定量的蛋白胨-金屬配合物。
本發(fā)明的組織愈合組合物在給已患有如上述的創(chuàng)傷、氧化的皮膚損傷、炎性皮膚損傷的溫血?jiǎng)游?，如人，給藥時(shí)，所使用的量要足以使愈合過(guò)程比未治療的宿主進(jìn)行的更快。對(duì)于患有毛囊減小和毛發(fā)生長(zhǎng)受損的動(dòng)物來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的組合物的給藥量要足以增加毛囊的大小和毛發(fā)生長(zhǎng)的速度。足以達(dá)到這些效果的量定義為“治療有效劑量”。這種使用的有效量對(duì)于傷口愈合來(lái)說(shuō)要取決于傷口、潰瘍等的嚴(yán)重程度，對(duì)于毛發(fā)生長(zhǎng)受損患者來(lái)說(shuō)要取決于毛囊減小的程度，而且還取決于所治療的患者的一般健康狀況，但一般范圍是每平方厘米創(chuàng)面每天使用大約1mg至大約50mg的蛋白胨-金屬配合物，更為普遍使用的劑量是每平方厘米創(chuàng)面每天大約10mg至大約25mg。可以根據(jù)需要來(lái)調(diào)節(jié)在一段持續(xù)時(shí)間內(nèi)的維持劑量。對(duì)于獸醫(yī)應(yīng)用，如果需要，可以施用更高的劑量。對(duì)于治療如上所述的特定創(chuàng)傷或狀況所必需的蛋白胨-金屬配合物實(shí)際用量要通過(guò)本領(lǐng)域中公知的標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)驗(yàn)方法確定。
在預(yù)防性使用時(shí)，可以給可能有或者說(shuō)有皮膚損傷或類似損傷危險(xiǎn)的宿主使用含有蛋白胨-金屬配合物的組合物，以增加宿主的自身創(chuàng)傷愈合或抗氧化能力。這種用量定義為“預(yù)防有效劑量”。在這種使用中，準(zhǔn)確的用量同樣取決于宿主的狀況和一般健康狀態(tài)，但一般范圍是每平方厘米皮膚每天大約0.1mg至大約10mg，更為普遍的是每天每cm2皮膚大約1mg至大約3mg。可能一次或多次給藥該組合物。
本發(fā)明的蛋白胨-金屬配合物可以相當(dāng)大的用量給藥而不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，不過(guò)不加選擇的使用可能會(huì)引起皮膚變色。在將該組合物用于皮膚以抑制氧化或生化損傷或者用于那些患有僅僅是輕度皮膚刺激或炎癥的皮膚時(shí)，該劑量要相應(yīng)地調(diào)節(jié)到較低的維持水平。
本發(fā)明的組合物，包括藥物組合物，可以是單獨(dú)給藥或者以輔助治療或預(yù)防性給藥。該蛋白胨-金屬組合物可以與其他的發(fā)現(xiàn)能改善其他方面愈合的因子結(jié)合使用。在這種情況下，可以獲得協(xié)同作用，產(chǎn)生比任何單獨(dú)給藥所帶來(lái)的更大的臨床有效率。而且，盡管本文所述的組合物可激發(fā)一系列愈合過(guò)程，但臨床創(chuàng)傷在其性質(zhì)和愈合方式方面有很大的不同，這使得醫(yī)生要使用本文所述的組合物與其他因子結(jié)合使用。例如，在許多燒傷病人中有神經(jīng)再生缺陷，因此醫(yī)生可以在該組合物中加入一種特定的神經(jīng)生長(zhǎng)因子以促進(jìn)燒傷區(qū)域的神經(jīng)再生。據(jù)報(bào)道具有其他愈合特性的因子舉例包括表皮生長(zhǎng)因子，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，血管生成生長(zhǎng)因子，纖維壞死素(fibronectin)、纖維蛋白、血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子，超氧化物歧化酶，血液提取物或來(lái)源于血液的因子，以及其他類似因子。
下面的實(shí)施例用于解釋本發(fā)明，但不具有約束作用。
實(shí)施例Ⅰ制備活性蛋白胨-金屬配合物本實(shí)施例描述了用于制備具有生物活性的蛋白胨-金屬配合物的方法，下面進(jìn)一步描述。
從SigmaChemicalCompany(St.Louis，MO)獲得大豆蛋白胨(Ⅳ型，No.P0521)，同樣從該公司獲得氯化銅水合物(no.C6641)。從AldrichChemicalCompany(Milwaukee，WI)獲得氯化錮(Ⅲ)，純度99%;氯化錫(Ⅱ)，純度99%;和氯化錫(Ⅳ)，純度99%。
將大豆蛋白胨(大豆蛋白的酶消化產(chǎn)物)溶于溫水(40℃)中，濃度為20%(重量/體積)，然后與一種金屬鹽(氯化銅(Ⅱ)，氯化錫(Ⅱ)，氯化錫(Ⅳ)，氯化錮(Ⅲ)，或氯化鋅(Ⅱ))且鹽濃度為20%(w/v)的水溶液混合。所加入的鹽溶液的體積用量是在該溶液中誘發(fā)大量沉淀所需的量，大約是大豆蛋白胨起始體積的20至50%，在加入所述鹽溶液之前用氫氧化鈉調(diào)pH(在6.0至7.0之間)以誘導(dǎo)最大量的沉淀形成。該沉淀物含有大量的疏水肽，加上少量(經(jīng)檢測(cè)為3.8-4.2%)的與肽配合的金屬鹽。
通過(guò)以10，000G離心20分鐘去除沉淀物，然后把濕的糊狀物加工成進(jìn)一步的產(chǎn)品?？梢詫⒊淼暮齽┲苯佑糜谄つw，或者制成皮膚乳膏劑和洗液，其濃度通常為5至20%(w/w)，當(dāng)然更高的濃度也是有效的。
可以將大豆蛋白胨-銅配合物用作皮膚保持劑，充當(dāng)受損或受刺激皮膚上的皮膚屏障。該疏水肽粘著在皮膚上，形成一層保護(hù)屏障，同時(shí)該配合的銅在混合物中發(fā)揮一種抗氧化活性。用這種組合物處理之后受損或受刺激的皮膚能更快地明顯愈合。
正如下面進(jìn)一步描述的，使用蛋白胨-銅、蛋白胨-錫和蛋白胨-錮配合物可促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)和毛囊的增大。在毛發(fā)生長(zhǎng)鼠模型中，將這些配合物應(yīng)用于皮膚上10至14天之后可產(chǎn)生明顯的毛發(fā)生長(zhǎng)刺激。
其他類型的酶促蛋白消化產(chǎn)物如酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類、絲蛋白等的消化產(chǎn)物，以及上述金屬的其他金屬鹽，如硫酸鹽，乙酸鹽，磷酸鹽等預(yù)期有類似的作用。
實(shí)施例Ⅱ用蛋白胨-銅配合物使外科創(chuàng)傷愈合本實(shí)施例描述了使用由蛋白胨-銅配合物制備的糊劑加快動(dòng)物外科手術(shù)切口創(chuàng)面的愈合。
在麻醉的35g重Swiss-Webster鼠背上進(jìn)行外科手術(shù)切口(1.25cm)。在手術(shù)后的即刻和24小時(shí)之后，用一層薄的含有上述實(shí)施例Ⅰ中的活性蛋白胨-銅配合物的糊膜覆蓋創(chuàng)面。對(duì)照組創(chuàng)面未治療。如表1中所示，用活性胨-銅配合物處理的創(chuàng)口比對(duì)照組創(chuàng)口愈合的要快。由于快速愈合的傷口傾向于收縮和變得更為圓滑，因此愈合活性與15天后傷口的長(zhǎng)度有相關(guān)性。每組由12只鼠組成。
表1蛋白胨-銅配合物對(duì)切口長(zhǎng)度的影響測(cè)試組15天后傷口的長(zhǎng)度(cm)對(duì)照組0.81±0.10胨-銅配合物0.20±0.13實(shí)施例Ⅲ外科皮膚缺損的愈合本實(shí)施例證明了通過(guò)表面給藥這種蛋白胨-銅配合物使動(dòng)物皮膚損傷愈合。
從麻醉鼠背部去除皮膚(圓狀，直徑1.25cm，面積＝1.22平方厘米)造成外科皮膚缺損。在手術(shù)后即刻和24小時(shí)之后，用含有上述實(shí)施例Ⅰ中活性蛋白胨-銅配合物的一層薄糊膜覆蓋創(chuàng)面。對(duì)照組創(chuàng)未處理。如表2所示，用活性胨銅配合物處理的創(chuàng)面比對(duì)照創(chuàng)面愈合的快。愈合活性與15天后剩余未愈合創(chuàng)面面積有相關(guān)性。每組由12只鼠組成。
表2蛋白胨-銅配合物對(duì)手術(shù)皮膚缺損愈合的影響測(cè)試組 15天后創(chuàng)面面積(cm2)對(duì)照組0.27±0.14胨-銅配合物0.02±0.01
實(shí)施例Ⅳ用蛋白胨-銅配合物使燒傷愈合本實(shí)施例證明了表面局部使用蛋白胨-銅配合物使動(dòng)物燒傷愈合的加快。
通過(guò)將一個(gè)圓(1.25cm直徑，創(chuàng)面面積＝1.2cm2)與麻醉鼠去毛背部的皮膚接觸7秒鐘誘導(dǎo)二度燒傷。在燒傷后即刻和之后24小時(shí)及48小時(shí)，用含有上述實(shí)施例Ⅰ的活性蛋白胨-銅配合物的一個(gè)薄糊膜覆蓋創(chuàng)面。對(duì)照組未治療。每間隔5天對(duì)創(chuàng)面拍照，并且通過(guò)測(cè)平儀由照片上計(jì)算創(chuàng)面面積。與未處理的對(duì)照創(chuàng)面相比較。用活性胨銅配合物處理的燒傷較少出現(xiàn)燒傷后炎癥，且愈合顯著加快。每組由12只鼠組成。
表3蛋白胨-銅配合物對(duì)燒傷的影響測(cè)試組 15天后創(chuàng)面面積(cm2)對(duì)照組0.84±0.10胨-銅配合物0.24±0.13實(shí)施例Ⅴ用以乳膏為基質(zhì)的蛋白胨-銅配合物使燒傷創(chuàng)面愈合本實(shí)施例證明用表面乳膏油膏中的活性胨-銅配合物處理的燒傷在愈合程度上的劑量反應(yīng)增加。
按實(shí)施例Ⅳ中方式誘發(fā)燒傷。制備一種可使用的乳膏，含有55%(重量)的蘆薈膠，12%鯊?fù)椋?2%硬脂酸、甘油酯，5%PEG-100和4%的鯨蠟醇。向這種基質(zhì)乳膏中加入不同濃度的銅-蛋白胨組合物(2.5%，5%，10%和20%)，并混合該混合物。在燒傷之后即刻，和之后的24和48小時(shí)，給動(dòng)物使用這種乳膏，用含有活性配合的一層薄乳膏膜覆蓋創(chuàng)面。只用基質(zhì)乳膏處理對(duì)照創(chuàng)面。每間隔5天給創(chuàng)面拍照通過(guò)測(cè)平儀從照片上計(jì)算創(chuàng)面面積。
結(jié)果表明用活性胨銅配合物處理的燒傷在愈合程度上有劑量反應(yīng)增加。在最低劑量時(shí)，即2.5%濃度，即使愈合沒(méi)有明顯加快，但創(chuàng)面仍表現(xiàn)出較少的發(fā)炎。每組由10只鼠組成。
表4蛋白胨-銅配合物對(duì)燒傷的作用測(cè)試組 15天后創(chuàng)面面積(cm2)對(duì)照組0.71±0.172.5%胨配合物0.74±0.195%胨配合物0.44±0.0510%胨配合物0.38±0.1420%胨配合物0.29±0.10
實(shí)施例Ⅵ燒傷后皮膚炎癥的減退本實(shí)施例證明了蛋白胨-銅配合物減少輕度皮膚燒傷相關(guān)性性炎癥的能力。
使用一種圓形(1.25cm直徑，刺激面積＝1.22cm2)黃銅棒(60℃)置于麻醉鼠(每組12只)背部去毛皮膚上接觸5秒鐘誘發(fā)非常輕度的熱損傷。如此產(chǎn)生的輕度皮膚刺激其特征是紅腫，但很少有皮膚組織損失。在誘發(fā)熱損傷之后即刻，用一含有上述實(shí)施例Ⅰ中活性配合物的薄糊膜覆蓋刺激區(qū)。對(duì)照組損傷仍未處理。隔天觀察損傷情況，在第3天，未處理組的熱損傷仍然紅腫，而治療的皮膚表現(xiàn)為將近正常外觀，僅僅有很少的紅腫。
實(shí)施例Ⅶ活性蛋白胨-銅組合物的巴氏消毒巴氏消毒包括將該溶液加熱至160度30分鐘，這樣除了耐受性最強(qiáng)的微生物之外可以殺死其他所有的微生物。為了進(jìn)行這種高度，按照實(shí)施例Ⅰ中的上述方法將10g的大豆蛋白胨水解物與氯化銅混合。向大豆蛋白胨水解物溶液中加入氯化銅溶液之后，使所得到的溶液充分混合，然后加熱至160°F(71℃)30分鐘。冷卻至室溫之后，按照上述方式制備活性組合物，然后以實(shí)施例Ⅱ所述的方式施用于鼠的手術(shù)切口創(chuàng)面。其愈合活性類似于用未經(jīng)巴氏消毒的活性組合物所觀察到的愈合活性。
表5巴氏消毒對(duì)活性配合物的影響測(cè)試組15天后傷口的長(zhǎng)度(cm)N=6對(duì)照組0.86±0.16未經(jīng)巴氏消毒的0.26±0.13活性配合物巴氏消毒的活性配合物0.24±0.15實(shí)施例Ⅷ活性組合物的煮沸消毒本實(shí)施例證明了可以通過(guò)煮沸使蛋白胨-銅配合物消毒，并且基本上保留了消毒制劑的所有活性。這種優(yōu)越性是避免了必須在該組合物中加入帶刺激性的抗菌劑。
煮沸消毒可以最終殺死全部的微生物。為了進(jìn)行這種測(cè)試，將10克的大豆蛋白胨水解物與氯化銅按照實(shí)施例Ⅰ中的上述方法進(jìn)行配合。將氯化銅溶液加至大豆胨水解物溶液中之后，使所得到的溶液充分混合，然后加熱至沸騰5分鐘。冷卻至室溫之后，按照實(shí)施例Ⅰ中的上述方法制備活性組合物，然后以上述實(shí)施例Ⅱ中的方式施用于鼠手術(shù)切口。用消毒過(guò)的蛋白胨-銅配合物觀察到的愈合活性類似于用未經(jīng)上述煮沸消毒過(guò)的活性組合物獲得的結(jié)果。
表6煮沸消毒對(duì)活性配合物的影響測(cè)試組15天后傷口的長(zhǎng)度(cm)N=6對(duì)照組0.90±0.22未經(jīng)煮沸消毒的活性配合物0.28±0.15煮沸消毒的活性配合物0.28±0.09實(shí)施例Ⅸ蛋白胨-銅乳膏對(duì)皮膚的粘著力本實(shí)施例描述了使用蛋白胨-銅活性配合物改善皮膚乳膏對(duì)皮膚表面的粘著力。因此可以使用蛋白胨-銅配合物乳膏作為一種有效的創(chuàng)傷愈合劑(sealant)，或者促進(jìn)其他生長(zhǎng)因子和化合物向創(chuàng)傷、損傷等傳遞。
制備第一種基質(zhì)乳膏，它含有55%(重量)蘆薈膠，12鯊?fù)椋?2%硬脂酸甘油酯，5%PEG-100和4%鯨蠟醇。將10克銅-胨組合物混合到第一種乳膏(50克)中制備第二種乳膏。在10個(gè)志愿者(人)的手(第一種乳膏涂于一只手，第二種乳膏涂于另一只手)背上，每個(gè)3cm直徑的圓內(nèi)平均涂上每種乳膏(0.5克)。使該樣品“停留”三分鐘，然后在恒定流速的自來(lái)水下沖洗掉。洗掉乳膏的時(shí)間是從至少90%的覆蓋表面去除掉乳膏所需的時(shí)間。一般情況下，對(duì)照乳膏在4至9秒(平均6秒)內(nèi)洗掉。而含有蛋白胨-金屬配合物的乳膏在22至65秒(平均34秒)之間洗掉。
如果將實(shí)際應(yīng)用的銅-胨乳膏(第二種乳膏)施用于皮膚，使之“停留”1小時(shí)，它似乎在某程度上粘結(jié)在皮膚表面，并且只有通過(guò)用肥皂用車擦洗皮膚才能去除掉特征性的藍(lán)綠色乳膏。相對(duì)而言，對(duì)照乳膏(第一種乳膏)在停留1小時(shí)之后仍然能容易地從皮膚上洗掉。
對(duì)于錫-胨組合物和錮-胨組合物來(lái)說(shuō)發(fā)現(xiàn)了類似的增加乳膏對(duì)皮膚粘著力的結(jié)果。
實(shí)施例Ⅹ通過(guò)注射刺激毛發(fā)生長(zhǎng)本實(shí)施例描述了使用含有蛋白胨-銅配合物的組合物刺激溫血?jiǎng)游锩业纳L(zhǎng)。
在本試驗(yàn)中所用的模型是一種鼠模型，已發(fā)現(xiàn)它能成功地預(yù)測(cè)出人體中的治療反應(yīng)(見(jiàn)，如美國(guó)專利5，118，665，本文引用作為參考)。哺乳動(dòng)物中的毛發(fā)生長(zhǎng)過(guò)程是經(jīng)過(guò)活動(dòng)生長(zhǎng)期(毛發(fā)生長(zhǎng)期)，接著是休止期(毛發(fā)生長(zhǎng)終期)。該測(cè)試方法一般包括將毛發(fā)生長(zhǎng)刺激劑施用毛發(fā)生長(zhǎng)終期鼠的皮膚上。雌性的Swiss-Webster鼠在大約45天齡時(shí)開(kāi)始毛發(fā)生長(zhǎng)終期，持續(xù)到90天齡。在使用活性物質(zhì)之后，在10至14天內(nèi)可觀察到加強(qiáng)的毛發(fā)生長(zhǎng)。在此試驗(yàn)中，使用了50天齡的鼠。
對(duì)含有銅(Ⅱ)，銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)和錫(Ⅳ)的蛋白質(zhì)組合物進(jìn)行了測(cè)試。為了進(jìn)行測(cè)試，將該組合物與鹽水混合(5%胨組合物和95%生理鹽水，重量百分比)。將鼠剃毛，然后通過(guò)注射將0.05毫升的混合物立即注射到皮下。對(duì)照鼠用一種等體積的鹽水注射。每組有10只鼠。14天之后，將各級(jí)進(jìn)行比較。確定在注射部位有毛發(fā)生長(zhǎng)的鼠的百分?jǐn)?shù)和毛發(fā)生長(zhǎng)反應(yīng)的相對(duì)強(qiáng)度(以1至5的級(jí)別評(píng)價(jià)，1代表幾乎觀察不到生長(zhǎng)，而5代表有非常強(qiáng)的毛發(fā)生長(zhǎng))。
如表7所示，結(jié)果表明所有的組合物都是活性毛生長(zhǎng)刺激，而蛋白胨-錫(Ⅱ)配合物是最有效的試劑。
表7用蛋白胨-金屬配合物刺激毛發(fā)生長(zhǎng)在注射部位有毛發(fā)毛發(fā)生長(zhǎng)的生長(zhǎng)的百分?jǐn)?shù)平均強(qiáng)度對(duì)照鼠00胨-銅(II)1002.5胨-銦(III)802.5胨-錫(II)1004.5胨-錫(IV)1004.0實(shí)施例Ⅺ通過(guò)局部使用刺激毛發(fā)生長(zhǎng)本試驗(yàn)中所用模型與實(shí)施例Ⅹ相同，不同的是在鼠皮膚表面使用該活性物質(zhì)。對(duì)含有銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)和錫(Ⅳ)的胨組合物進(jìn)行了測(cè)試。為了進(jìn)行測(cè)試，將該組合物與鹽水混合(25%胨組合物和75%生理鹽水，重量百分比)以形成漿液。將鼠剃毛，然后在剃區(qū)盡可能平坦地涂上0.20克該混合物。對(duì)照組用鹽水拭抹。每組有10只鼠。14天之后，對(duì)各組鼠進(jìn)行比較。確定在剃毛區(qū)中心有毛發(fā)生長(zhǎng)的鼠的百分率和毛發(fā)生長(zhǎng)反應(yīng)的相對(duì)強(qiáng)度(以1至5的等級(jí)評(píng)價(jià)，1代表幾乎觀察不到生長(zhǎng)，5代表非常強(qiáng)的毛發(fā)生長(zhǎng))。所有組合物都具有活性，而錫(Ⅱ)是最有效的試劑。
表8表面使用蛋白胨-金屬配合物以刺激毛發(fā)生長(zhǎng)在剃毛區(qū)中心有毛發(fā)生長(zhǎng)的生長(zhǎng)的百分?jǐn)?shù)平均強(qiáng)度對(duì)照鼠100.2胨-銅(II)902.0胨-銦(III)802.0胨-錫(II)1004.0胨-錫(IV)1003.0從上面的結(jié)果可以明顯看出本發(fā)明提供了用于表面皮膚、創(chuàng)傷和手術(shù)處理的蛋白胨-金屬配合物的組合物，以對(duì)溫血?jiǎng)游锉Ｗo(hù)其受損皮膚和促進(jìn)自然愈合過(guò)程，促進(jìn)其表面組織再生過(guò)程和刺激毛發(fā)生長(zhǎng)。本發(fā)明還提供了制備和配制適合表面的組合物制劑的經(jīng)濟(jì)方法。
本說(shuō)明書(shū)中所得到的所有出版物和專利文獻(xiàn)代表了本發(fā)明相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域中那些熟練技術(shù)人員的技術(shù)水平。本文所引用參考的所有出版物和專利文獻(xiàn)與明確指出的單獨(dú)和具體引用每篇獨(dú)立的出版物或?qū)＠墨I(xiàn)效力相同。
盡管前述的本發(fā)明通過(guò)解釋和實(shí)施例的方式進(jìn)行了詳細(xì)地描述，但目的是為了更清楚地理解本發(fā)明，顯然在所附帶的權(quán)利要求范圍內(nèi)可以進(jìn)行一定的變化和修改。
權(quán)利要求
1.一種加快溫血?jiǎng)游锉砻鎰?chuàng)傷愈合的方法，包括給創(chuàng)傷部位施用一治療有效量的組合物，該組合物含有一種與一種離子態(tài)過(guò)渡金屬配合的蛋白胨消化物。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)，銦(Ⅲ)，錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)，和其治療學(xué)上可接受的鹽。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中的蛋白離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中的蛋白胨消化物是從酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類、絲蛋白或大豆蛋白制得的。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其中的蛋白胨消化物是以大豆蛋白制得的。
6.按照權(quán)利要求5所述的方法，其中與大豆蛋白胨配合的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)。
7.一種加快溫血?jiǎng)游锲つw從刺激狀態(tài)恢復(fù)的方法，包括給刺激的皮膚施用一治療有效量的組合物，該組合物含有一種與一種離子態(tài)過(guò)渡金屬相配合的蛋白胨消化物。
8.一種保護(hù)溫血?jiǎng)游锲つw免受氧化損傷和輔助受傷皮膚恢復(fù)的方法，包括給皮膚或受傷部位施用一預(yù)防或治療有效量的組合物，該組合物含有一種與一種離子態(tài)過(guò)渡金屬相配合的蛋白胨消化物。
9.按照權(quán)利要求8所述的方法，其中離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)，銦(Ⅲ)，錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)，及其治療學(xué)上可接受的鹽。
10.按照權(quán)利要求8所述的方法，其中離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)。
11.按照權(quán)利要求8所述的方法，其中的蛋白胨消化物是由酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類、絲蛋白或大豆蛋白制得的。
12.按照權(quán)利要求8所述的方法，其中的蛋白胨消化物是從大豆蛋白制得的。
13.按照權(quán)利要求12所述的方法，其中與大豆蛋白胨配合的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)。
14.一種增加溫血?jiǎng)游锩掖笮『兔l(fā)生長(zhǎng)速度的方法，包括給所說(shuō)動(dòng)物的皮膚施用一種組合物，該組合物含有一種與一種離子態(tài)過(guò)渡金屬配合的蛋白胨消化物，該組合物的使用量要足以增加所說(shuō)動(dòng)物的毛囊大小和毛發(fā)生長(zhǎng)速度。
15.按照權(quán)利要求14所述的方法，其中的組合物是局部使用或者注射到皮膚下。
16.按照權(quán)利要求15所述的方法，其中的組合物是給需要增加毛發(fā)生長(zhǎng)的皮膚區(qū)每天局部使用。
17.按照權(quán)利要求14所述的方法，其中的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)，及其治療學(xué)上可接受的鹽。
18.按照權(quán)利要求14所述的方法，其中的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)。
19.按照權(quán)利要求14所述的方法，其中的離子態(tài)過(guò)渡金屬是錫(Ⅱ)。
20.按照權(quán)利要求14所述的方法，其中的蛋白胨消化物是由酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、絲蛋白或大豆蛋白制備的。
21.按照權(quán)利要求20所述的方法，其中的蛋白胨消化物是由大豆蛋白制得的。
22.按照權(quán)利要求21所述的方法，其中與大豆蛋白胨配合的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)。
23.一種制備用于加快溫血?jiǎng)游锏谋砻鎰?chuàng)傷愈合或增加其毛囊大小和毛發(fā)生長(zhǎng)速度的藥物組合物的方法包括使一種蛋白胨消化物與足以能誘發(fā)沉淀的一定量的過(guò)渡金屬鹽水溶液結(jié)合，該沉淀物含有與過(guò)渡金屬配合的蛋白胨;分離蛋白胨-金屬配合物的沉淀物。
24.按照權(quán)利要求23所述的方法，其中還進(jìn)一步包括使分離的蛋白胨-金屬配合物消毒或巴氏消毒的步驟。
25.按照權(quán)利要求23所述的方法，其中進(jìn)一步包括使分離的蛋白胨-金屬配合物與一種藥學(xué)上可接受載體結(jié)合物的步驟。
26.按照權(quán)利要求25的方法，其中藥學(xué)上可接受的載體是適合于給溫血?jiǎng)游锞植渴褂玫妮d體。
27.按照權(quán)利要求25所述的方法，其中分離的蛋白胨-金屬配合物是與一種藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合形成一種乳膏或洗液。
28.按照權(quán)利要求25所述的方法，其中分離的蛋白胨-金屬配合物在藥物組合物中的濃度是大約5%至25%。
29.按照權(quán)利要求23所述的方法，其中的蛋白胨消化物是由酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類、絲蛋白或大豆蛋白制得的。
30.按照權(quán)利要求23所述的方法，其中的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)。
31.按照權(quán)利要求23所述的方法，還進(jìn)一步包括將蛋白胨-過(guò)渡金屬鹽結(jié)合物的pH調(diào)至大約pH6.0至7.0的步驟。
32.按照權(quán)利要求23所述的方法，其中蛋白胨-金屬配合物的沉淀物是通過(guò)離心分離的。
33.一種用于加快溫血?jiǎng)游锏木植繐p傷愈合的藥物組合物，包含一種治療有效量的與一種離子態(tài)過(guò)渡金屬相配合的蛋白胨消化物和一種藥學(xué)上可接受的載體。
34.按照權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其中的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)，和其治療學(xué)上可接受的鹽。
35.按照權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其中的離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)。
36.按照權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其中的蛋白胨是酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類、絲蛋白或大豆。
37.按照權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其中的蛋白胨-金屬配合物存在于組合物中的濃度是5%至20%。
38.一種用于增加溫血?jiǎng)游锏拿掖笮『兔l(fā)生長(zhǎng)速度的藥物組合物，它包括一種毛發(fā)生長(zhǎng)刺激量的蛋白胨-離子態(tài)過(guò)渡金屬配合物和一種藥學(xué)上可接受的載體。
39.按照權(quán)利要求38所述的藥物組合物，其中的蛋白胨-金屬配合物存在于該組合物中的濃度是5%至25%。
40.按照權(quán)利要求39所述的藥物組合物，其中離子態(tài)過(guò)渡金屬是銅(Ⅱ)、銦(Ⅲ)、錫(Ⅱ)或錫(Ⅳ)，和其治療學(xué)上可接受的鹽。
41.按照權(quán)利要求39所述的藥物組合物，其中的蛋白胨是酪蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、肉類、絲蛋白或大豆。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于制備組合物的方法，該組合物適用于保護(hù)受刺激或損傷皮膚免受進(jìn)一步的氧化和生化損傷，從而使自然愈合過(guò)程進(jìn)行，還適用于加快燒傷和外科創(chuàng)傷的愈合速度，以及適用于增加毛囊的大小和毛發(fā)生長(zhǎng)的速度。該組合物一般含有由各種蛋白的蛋白胨消化產(chǎn)物與銅(Ⅱ)鹽、銦(Ⅲ)鹽、錫(Ⅱ)鹽和錫(Ⅳ)鹽配合形成的沉淀物。
文檔編號(hào)A61K38/39GK1107362SQ94102149
公開(kāi)日1995年8月30日 申請(qǐng)日期1994年2月26日 優(yōu)先權(quán)日1994年2月26日
發(fā)明者洛倫R·皮卡特 申請(qǐng)人:皮膚科學(xué)公司