專利名稱：含透明質(zhì)酸配合物的藥物組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及去質(zhì)子化的透明質(zhì)酸與周期表第四周期的3d金屬離子的新配合物以及含這些配合物作為活性成分的組合物。
本發(fā)明還涉及這些新配合物和含這些配合物作為活性成分的組合物的制備方法。
按照本發(fā)明方法的一種具體優(yōu)選的實施方案，含有去質(zhì)子化的透明質(zhì)酸與周期表第四周期3d金屬離子的新配合物的水溶液，直接由透明質(zhì)酸鈉水溶液制備。
本發(fā)明的新配合物主要包括透明質(zhì)酸鋅和鈷。含有透明質(zhì)酸鋅和鈷的組合物可以是藥物(醫(yī)療)組合物、美容組合物和任意的其它組合物。含有本發(fā)明新配合物的組合物適于，例如加速上皮缺損體表面的上皮形成、治療腳潰瘍和褥瘡(床潰瘍)以及治療基本上不愈合的傷口、燒傷、輻射創(chuàng)傷或熱致創(chuàng)傷和治療尋常座瘡及聚會性座瘡，此外還可以由于其它領(lǐng)域之中。
透明質(zhì)酸是五十多年前已為人們所知的一種大分子物質(zhì)，最初由Meyer等人報導(dǎo)在<J.Biol.Chem.>，107，629(1954)和<J.Biol.Chem.>，114，689(1936)上。結(jié)構(gòu)測定是由Weissman等人完成的[J.Am.Chem.Soc.76，1753(1954)]。透明質(zhì)酸是高粘度的天然葡糖胺聚糖(glucosaminoglycan)，其中含有交替存在的β1-3葡糖酸和β1-4葡糖胺部分，其分子量介于50000和兒(8-13)百萬之間?；厥胀该髻|(zhì)酸是一項年代久遠(yuǎn)的工作，超純透明質(zhì)酸的分離和應(yīng)用載于例如4，141，973和4，303，676號美國專利說明書中和0，144，019號歐洲專利說明書中。直到近年，透明質(zhì)酸以鈉鹽形式用于醫(yī)療之中，主要用于眼科、外科和美容之中。透明質(zhì)酸與堿金屬、堿土金屬、鎂、鋁、銨或取代的銨離子形成的鹽，可以用作促進(jìn)藥物吸收用的載體(見904，547號比利時專利)。透明質(zhì)酸的重金屬(其中重金屬是指周期表第5、6和7周期的元素以及鑭系和錒系元素)鹽和其中的銀鹽被用作殺真菌劑，而金鹽用來治療關(guān)節(jié)炎(見WO87/05517)。
經(jīng)各種結(jié)構(gòu)分析法證實，鍵合金屬離子改變二級結(jié)構(gòu)(即透明質(zhì)酸的構(gòu)象)[W.T.Winter和A.SrutherJ.Mol.Biol.517，761(1977);J.K.Sheehau和E.D.T.AtkinsInt.J.Biol.Macromol.5，215(1983);以及N.Figueroa和B.ChakrabartiBiopolymers17，2415(1978)]。正如透明質(zhì)酸的鉀鹽和鈉鹽的X射線對比研究所表明的那樣，甚至于某些類似性質(zhì)的金屬離子都能對分子結(jié)構(gòu)的變化施加顯著影響[A.K.Mitra等;J.Macromol.，Sci.Phys.824，1和21(1985)]。對于透明質(zhì)酸與帶各種電荷的各類金屬離子形成的化合物來說，這種影響更顯著。
在文獻(xiàn)中未能找到與由透明質(zhì)酸和周期表第四周期的3d金屬離子所形成的配合物有關(guān)的文章;實際上按照對透明質(zhì)酸的硅膠柱色譜研究表明，與肝素相反，透明質(zhì)酸結(jié)合鋅離子不穩(wěn)定[R.F.Parish和W.R.FairBiochem.J.193，407-410(1981)]。
盡管根據(jù)文獻(xiàn)記載知透明質(zhì)酸(或其鈉鹽)結(jié)合鋅離子不穩(wěn)定，但是本發(fā)明人等卻著手研究了透明質(zhì)酸與周期表第四周期的3d金屬離子(其中，主要是鋅和鈷離子)之間反應(yīng)的配位化學(xué)。既然透明質(zhì)酸幾乎均以鈉鹽形式出售，因此透明質(zhì)酸鈉是所有含透明質(zhì)酸鹽體系的基礎(chǔ)物質(zhì)，所以我們從鈉離子與透明質(zhì)酸鹽之間的反應(yīng)開始研究。為此，用鈉選擇性玻璃電極測量透明質(zhì)酸鈉水溶液的游離鈉離子活性。這些測量結(jié)果清楚地表明，與透明質(zhì)酸鹽的羧酸鹽基團(tuán)一起等當(dāng)量引入的60%以下的鈉離子以游離離子形式存在于水溶液中，而其余40%的鈉離子與所說的透明質(zhì)酸鹽鍵合。
根據(jù)我們的測量結(jié)果，被鍵合的鈉離子量隨鈉離子濃度的增加而提高，可以達(dá)到各種可得羧酸鹽基計算值的50-55%。由此證實，透明質(zhì)酸鈉與鹽的一般性質(zhì)不同，在水溶液中它不完全解離。
在我們的第二步研究之中，使用氯化鋅溶液和上面提到的鈉離子選擇電極滴定透明質(zhì)酸鈉水溶液，以便查明該體系中游離鈉離子的活度變化。反映此過程的特性曲線示于

圖1。從中可以看出，在鋅離子作用下原來與透明質(zhì)酸鹽鍵合的鈉離子釋出。根據(jù)這些測量結(jié)果，即，全部鈉離子被等當(dāng)量鋅所釋放，此事實明確證明與鈉離子相比，鋅離子與透明質(zhì)酸鹽的結(jié)合能力更強。因此，關(guān)于透明質(zhì)酸與鋅離子不能結(jié)合的這種在先看法[R.F.Parrish和W.R.FariBiochem.J.193，407(1981)]，被實驗所駁倒。
因而，本領(lǐng)域中普通技術(shù)人員迄今所持的看法，證明是不正確的。
由我們研究的上述討論說明，通過等當(dāng)量透明質(zhì)酸鈉和鋅離子(氯化鋅)在水溶液中相互反應(yīng)，形成具有化學(xué)計算組成的透明質(zhì)酸鋅配合物。經(jīng)過適當(dāng)?shù)葷B作用之后，得到的溶液可以直接用于治療目的，而且所說的鋅化合物不一定在單獨工序中制成固態(tài)。利用鈷離子和其它3d金屬離子所進(jìn)行的初步試驗，得到的結(jié)果類似。
然而，為了作特性鑒定制備了固態(tài)下的所說配合物，并且利用“擴展X射線吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)”(EXAFS)法測定了鋅離子的正向環(huán)境。據(jù)認(rèn)為在一級配位球中鋅被四個氧原子包圍。Zn-O鍵長為199微微米(pm)，而距鋅原子較長距離(241pm)內(nèi)存在兩個碳原子。
根據(jù)我們的實驗，透明質(zhì)酸鋅顯著不同于類似的銅配合物，后者包含四個平伏的Cu-O鍵和2個直立的Cu-O鍵，鍵長分別為194和234pm。銅原子和靠近的兩個碳原子之間的距離為258pm。所說的鈷配合物的結(jié)構(gòu)與所說的鋅配合物的相似，但與銅配合物不同。
因此，本發(fā)明涉及去質(zhì)子化的透明質(zhì)酸與周期表第四周期3d金屬離子形成的配合物。
本發(fā)明還涉及含有透明質(zhì)酸與周期表第四周期3d金屬離子形成的配合物作為活性成分或載體的組合物，其中還選擇性含有其它活性成分和/或添加劑。
另一方面，本發(fā)明提供制備本發(fā)明新配合物的方法，其中包括
a)向透明質(zhì)酸鈉或其它透明質(zhì)酸鹽(堿金屬鹽、堿土金屬鹽或任選的銀鹽)水溶液中，加入含有等當(dāng)量鹽(優(yōu)選周期表第四周期3d金屬離子之一的氯化物)的水溶液;或者
b)將透明質(zhì)酸與季銨鹽形成的配合物水懸浮液溶解在一種復(fù)合溶劑中，所說復(fù)合溶劑含有周期表第四周期3d金屬離子的水溶液和與水部分混溶的溶劑(優(yōu)選正丙醇);然后
-按已知方法，用鏈烷醇或鏈烷酮沉淀由透明質(zhì)酸和周期表第四周期3d金屬離子形成的所說配合物，或者
-從所說的溶液中分離所說的沉淀物，然后在必要時，
-在溫和條件下干燥該沉淀物。
基于上述內(nèi)容，提出了一種制備分別含有透明質(zhì)酸鋅配合物或者周期表第四周期3d金屬離子的類似配合物作為活性成分之水溶液的方法。這些溶液都是由所說金屬離子和所說透明質(zhì)酸鹽成分直接反應(yīng)制備的。這種制備方法不必事先將上面提到的活性成分以固態(tài)形式分離出來。在用本發(fā)明方法制成的溶液中，甚至于在等當(dāng)量鋅存在下，游離的(未鍵合的)透明質(zhì)酸鹽量都可忽略不計。在過量鋅離子作用下，按化學(xué)計算量形成透明質(zhì)酸鋅配合物。
按上述方式制備所說金屬締合物期間，PH依然保持在5左右。當(dāng)透明質(zhì)酸鹽溶液濃度為0.2(Wt./Vol.)%時，PH為5.4;而當(dāng)濃度為0.5(Wt./Vol.)%時，PH為5。必要時，可以加入幾滴乙酸鈉等滲溶液來將后一體系的PH調(diào)節(jié)為5.5-5.6。
采用上面討論的方法制備了含有透明質(zhì)酸鋅作為活性成分的兩種溶液。
1.用過量氯化鋅制成等滲的透明質(zhì)酸鋅溶液。
鑒于游離的氯化鋅也可以單獨用于皮膚病學(xué)之中，因而利用過量的氯化鋅將透明質(zhì)酸鋅溶液的滲透壓調(diào)節(jié)到等滲值。這樣得到的溶液根本不含游離的(鋅未鍵合的)透明質(zhì)酸鹽，但是此體系中過量的氯化鋅與透明質(zhì)酸鋅一起存在。
2.用單糖或糖醇制成等滲的透明質(zhì)酸鋅溶液。
對于其中未指出透明質(zhì)酸鹽未鍵合的鋅離子存在的醫(yī)療用途來說，用多元醇(糖醇，優(yōu)選山梨糖醇)或者單糖或雙糖(優(yōu)選葡萄糖)將含有當(dāng)量數(shù)與所說透明質(zhì)酸鹽相等的鋅離子的溶液制成等滲的。后面的這些體系中游離鋅離子和游離透明質(zhì)酸鹽含量，分別未達(dá)到總鋅量和總透明質(zhì)酸鹽含量的5%。
使用本發(fā)明的配合物時，甚至可能需要無離子的混合物。也就是說，按照本發(fā)明上述方法制備的配合物，通常含有氯化鈉或者由原始的透明質(zhì)酸鹽陽離子和3d金屬鹽陰離子形成的其它鹽。
可以使用兩種不同的具體方法制備由3d金屬離子形成的無鹽透明質(zhì)酸配合物，這兩種具體方法如下。
a)將季銨鹽溶液分批加入已知透明質(zhì)酸鹽(優(yōu)選透明質(zhì)酸鈉)溶液中。經(jīng)過充分純化后，將沉淀的透明質(zhì)酸季銨新締合物在快速攪拌下溶解在復(fù)合溶劑中，所說的復(fù)合溶劑由周期表第四周期3d金屬離子的水溶液和與水部分混溶的溶劑(優(yōu)選正丁醇)組成。待兩相分離后，用向水相中加入鏈烷醇或鏈烷酮的方法沉淀所說的透明質(zhì)酸鹽締合物，分出沉淀并且洗滌;或者
b)攪拌下，將2-3體積的C1-3鏈烷醇或C1-4鏈烷酮加到透明質(zhì)酸鋅溶液中，最好加到含有當(dāng)量數(shù)與所說透明質(zhì)酸鹽相等的含氯化鋅的未等滲化溶液中，然后將沉淀的透明質(zhì)酸鋅過濾和分別用沉淀用的鏈烷醇或鏈烷酮洗滌。必要時將透明質(zhì)酸鋅溶解在無離子水中并重復(fù)沉淀。
需要固態(tài)無離子透明質(zhì)酸鋅時，于溫和條件下減壓干燥所說沉淀。如果需要無離子的透明質(zhì)酸鋅溶液，最好將制備的無溶劑透明質(zhì)酸鋅溶解。使用這兩種具體方法中任何一種方法，均得到無離子的固態(tài)或溶解產(chǎn)物，其純度取決于原料透明質(zhì)酸鋅質(zhì)量。
根據(jù)用于加速上皮缺損表面上皮形成的腳潰瘍治療情況示出了含有本發(fā)明透明質(zhì)酸鋅作為活性成分的組合物(實施例13)的臨床藥理研究結(jié)果。用含有透明質(zhì)酸鈉的組合物作對照。
對患有腳潰瘍的8或12名病人的12或14個潰瘍分別進(jìn)行了此試驗。既按性別、年齡又按病情對此試驗患者進(jìn)行分組的，其分布如下。
所說治療是以這樣方式完成的，即在治療開始前，按潰瘍的實際臨床狀態(tài)進(jìn)行凈化治療。對幾乎凈化的或者觀察到吸收顯著減少的潰瘍分別用透明質(zhì)酸的鋅鹽或鈉鹽治療。所說的治療按下述方式每天進(jìn)行一次;將組合物滴在已凈化的潰瘍表面上，滴藥量應(yīng)保證有一薄層藥液濕潤傷口表面。
組合物使用四周。將開始治療日期和其后每周一次治療的日期記入日期表中，并且拍下當(dāng)日病人潰瘍照片作證明資料。取滲液樣品作細(xì)菌檢查。
上皮缺損的情況和程度用下列符號和評分標(biāo)記。
情況程度
面積(a)
00
小于10cm21
10cm2～25cm22
大于25cm23
感染(b)
臨床凈化0
感染50%1
感染100%2
壞死(c)
(僅在動脈潰瘍病例中)
陰性0
小于10%1
10%～15%2
100%3
無壞死4
評定
為了進(jìn)行評定，測定了每種情況的數(shù)值，并且用下式算出一般嚴(yán)重程度評分值
在圖2中給出了所說的臨床藥理試驗結(jié)果。用透明質(zhì)酸鋅治療的結(jié)果由用“×”標(biāo)記的曲線說明，而用透明質(zhì)酸鈉治療的結(jié)果由用“口”標(biāo)記的曲線說明，這些曲線表示治療效果與治療周數(shù)的關(guān)系。縱坐標(biāo)上的評分值，表示用上式算出的一般嚴(yán)重程度的分?jǐn)?shù)(lndex)。
圖3說明以初始評分值為100%的相對評分值，以對透明質(zhì)酸鋅和用作對照的透明質(zhì)酸鈉作更準(zhǔn)確的對比。
用統(tǒng)計方法評價了相對評分值隨周數(shù)(1-4)的變化。對于用鋅
和鈉的透明質(zhì)酸鹽治療經(jīng)過1、2、3和4周后，發(fā)現(xiàn)潰瘍減小的數(shù)目按相對評分值計分別小于90、80、70和60%。試驗結(jié)果匯于表1之中。
由表1的結(jié)果可以說明，與用透明質(zhì)酸鈉(作為對照)得到的結(jié)果相比，透明質(zhì)酸鋅每周治療都較好。
對在所說前提下得到的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析證明，與透明質(zhì)酸鈉相比，透明質(zhì)酸鋅組合物的優(yōu)點是十分顯著的(P99%)。
在進(jìn)一步統(tǒng)計處理時，研究了相對評分值與治療時間之間的進(jìn)一步關(guān)系。得到的結(jié)果列于表2之中。
表2的數(shù)據(jù)同樣證明了透明質(zhì)酸鋅的優(yōu)點。更詳細(xì)的統(tǒng)計分析說明，顯著性隨治療時間的延長而減小。
總之，基于臨床藥理試驗結(jié)果的評定可以證明，即使在小數(shù)目潰瘍的試驗下均證明透明質(zhì)酸鋅的使用效果較好。這種優(yōu)點特別在治療初期得到證實。
本發(fā)明將由下列非限制性實施例得到更詳細(xì)說明。
透明質(zhì)酸(HA)中蛋白質(zhì)含量用O.H.Lowry法[J.Biol.Chem.193，(1951)]測定，透明質(zhì)酸鹽粘度用Ostwald粘度計在生理鹽溶液中于25℃下測定。外推至“O”濃度下的特性粘度值([η]C-0%25℃)將在下面給出。用Bitter法[Anal.Biochem.4，330(1962)]測定HA含量。
實施例1
透明質(zhì)酸鋅溶液的制備
將40.18mg透明質(zhì)酸鈉溶解在20.0ml二次蒸餾水中。因此透明質(zhì)酸的初始濃度為2.009mg/ml，此溶液的摩爾濃度為4.24×10-3mol/升(Na或透明質(zhì)酸二聚物單元)。測量期間，將濃度為0.05154mol/升的氯化鋅溶液用微量滴定管加到反應(yīng)混合物中。先分?jǐn)?shù)次每次加入少量(0.05ml)所說溶液，然后分?jǐn)?shù)次每次加入較多量(0.1-0.2ml)溶液。用帶數(shù)字顯示的精密電位計以及鈉離子選擇電極和Ag-AgCl電極測量所說溶液的電位變化。滴定持續(xù)到再加入滴定溶液后測出的電位值不變?yōu)橹?滴定溶液是在與實際測量類似的條件下標(biāo)定的)。
鈉離子選擇電極的選擇性在Zn+離子存在下也被觀察到，存在Zn+是為了控制實際測量時由于向溶液中釋出Na+離子和不引入Zn+引起的電位變化。在與上述條件相似的諸條件下，用氯化鋅滴定溶液滴定2.00×10-3M氯化鈉溶液。當(dāng)Zn濃度從0增加到4×10-3mol/升時，觀察到電位大約增加2mV，而實際測量證明在類似條件下變化約20mV。因此評價未遇到干擾。測量期間，由測量數(shù)據(jù)算出鈉離子活度的增加，證實所說的鋅締合物定量形成。
氯化鋅溶液的制備
由于含有準(zhǔn)確濃度氯化鋅的溶液不能用稱量法直接制備，所以首先制備接近所需濃度的溶液。制備此溶液時，不應(yīng)當(dāng)用酸，這樣可能出現(xiàn)稱量的氯化鋅溶解不完全的現(xiàn)象。不溶殘渣沉降后(大約30分鐘)，將容量瓶充滿至刻度，用濾紙過濾。
用緩沖溶液10和埃鉻黑T作指示劑，鉻合滴定濾液確定準(zhǔn)確濃度。準(zhǔn)確稀釋此溶液，以制備準(zhǔn)確濃度為0.100mol/升的氯化鋅溶液。
制備溶液用的透明酸鈉的特性如下
分子量1850000道爾頓
蛋白質(zhì)含量0.07wt%
紫外吸收A1%2510.133
A1%2800.075
粘度[η]C-025℃13.7dl/g
HA＊含量98.12wt%
＊HA＝透明質(zhì)酸(本文中用縮寫詞)
實施例2
治療皮膚病用和美容用溶液的制備
將用無離子水制備的濃度為0.100mol/升的12.5ml氯化鋅溶液，加在100ml容量瓶中稱好的0.50克透明質(zhì)酸鈉中(也可以使用其它濃度的氯化鋅溶液，但是氯化鋅量應(yīng)當(dāng)相同)。讓透明質(zhì)酸鋅溶脹12小時，用無離子水稀釋此溶液至刻度，得到濃度為0.5(wt/vol)%的透明質(zhì)酸鋅溶液。
用于制備上述溶液的透明質(zhì)酸鈉的特性如下
粘度[η]C-0%25℃16.5分升/克，
蛋白質(zhì)含量0.8wt%。
實施例3
注射液用透明質(zhì)酸鋅溶液的制備
在無菌條件下進(jìn)行本實施例所述的各操作。
將用二次蒸餾水(注射用水，無熱原，無菌)制備的濃度為0.100mol/升的5.0ml氯化鋅溶液加入稱在100ml容量瓶內(nèi)的0.20克透明質(zhì)酸鈉(粉末狀純品)中，然后用二次蒸餾水將容積充滿到50ml。使透明質(zhì)酸鈉溶脹過夜，然后振蕩溶解，并用二次蒸餾水將溶液稀釋到刻度。用膜濾器(0.45μ孔徑)過濾得到的溶液，制得濃度為0.2(wt/vol)%的透明質(zhì)酸鋅溶液。
用于制備上述溶液的透明質(zhì)酸鈉的特性如下
質(zhì)量無熱原的滅菌粉末狀純品，
分子量1850000，
蛋白質(zhì)含量0.07wt%，
紫外吸收A10%251＝0.133，
A10%280＝0.075，
HA含量98.12wt%，
粘度[η]C-0%25℃＝13.7分升/克
實施例4
無離子透明質(zhì)酸鋅溶液的制備
攪拌下將600ml分析純乙醇加到按實施例2制得的200ml透明質(zhì)酸鋅(濃度為0.5wt/vol%)溶液中，沉淀的透明質(zhì)酸鋅用玻璃過濾器過濾后，用相同純度的乙醇洗滌兩次，每次用50ml乙醇，然后減壓干燥。這樣制出0.88克透明質(zhì)酸鋅，以它為原料按實施例2所述方式制備0.50(wt/vol)%的透明質(zhì)酸鋅溶液，制得的這種透明質(zhì)酸鋅溶液不含因透明質(zhì)酸鈉和氯化鋅反應(yīng)生成的氯化鈉，因此它實際上是無離子的。
實施例5
無離子透明質(zhì)酸鋅或其醫(yī)療用溶液的制備
在無菌條件下進(jìn)行本實施例所述的操作。
攪拌下，向按實施例3制備的500ml透明質(zhì)酸鋅溶液中，分批加入1500ml最純的乙醇。加畢，攪拌此體系30分鐘，透明質(zhì)酸鋅沉淀用玻璃過濾器過濾后，用最純的乙醇洗滌三次，每次用100ml乙醇，在溫和及無菌條件下減壓干燥。
實施例6
無離子的透明質(zhì)酸鋅的制備
攪拌下，向400ml二次蒸餾水中含1克透明質(zhì)酸鈉的溶液內(nèi)加入200ml 10wt%的HyamineR1622(Puriss)[芐基二甲基/-2-/2-對(1，1，3，3-四甲基丁基)苯氧基/乙氧基/乙基/氯化銨]。離心分離形成的沉淀(即透明質(zhì)酸季銨締合物)，用二次蒸餾水洗滌兩次，每次用100ml水，然后再次離心分離。將洗過的沉淀溶解在由400ml 2wt/vol%氯化鋅水溶液(PH5.0-5.4)和400ml正丁醇組成的復(fù)合溶劑中。待兩相分離后，用膜濾器(孔徑0.45μ)過濾含溶解的透明質(zhì)酸鋅的水層，然后加入3體積乙醇沉淀透明質(zhì)酸鋅，用玻璃過濾器過濾，乙醇洗滌，于溫和條件下在氮氣氛中干燥，得到0.82克透明質(zhì)酸鋅。
必要時，用制得的透明質(zhì)酸鋅作原料，按實施例4所述方法進(jìn)一步提純后制成0.50(wt/vol)%的溶液。作原料用的透明質(zhì)酸鈉的特性如下
粘度[η]C-0%25℃16.5分升/克
蛋白質(zhì)含量0.18(wt/vol)%
也可以用由其它季銨鹽生成的締合物按上述方式制備透明質(zhì)酸鋅?？梢杂糜诖四康牡募句@鹽有例如
a)碳化四癸氧甲基-三甲基銨氯化物(carbotetradecyloxy-methyl-trimethylammonium)(參見匈牙利專利說明書No.188，537)，
b)N-十六碳烷基吡啶氯鹽(hexadecylpyridiniumchloride)，
c)N-十六碳烷基吡啶氯鹽(cetylpyridiniumchloride)，
d)三甲基銨氯化物等等。
實施例7
透明質(zhì)酸鈷的制備
除了將透明質(zhì)酸的季銨締合物溶解在由2wt/vol%CoCl2·6H2O水溶液和正丁醇組成的復(fù)合溶劑中之外，按實施例6所述的方法操作。
實施例8
制備含有0.50(wt./vol.)%透明質(zhì)酸鋅的水溶液并用氯化鋅使其具有等滲性
將大約50ml濃度為0.110mol/升氯化鋅溶液加在100ml容量瓶中的0.50克透明質(zhì)酸鈉中，然后使之溶脹過夜。振蕩溶解透明質(zhì)酸鈉，容量瓶用濃度為0.110mol/升的氯化鋅溶液充滿至刻度。
所得溶液的滲透壓，用相當(dāng)?shù)穆然c濃度表示為0.1491mol/升，PH值為5.0。必要時，加入濃度為0.150mol/升的乙酸鈉溶液2.00ml將PH值調(diào)到5.5-5.6。調(diào)節(jié)PH后，溶液的滲透壓用相當(dāng)?shù)穆然c濃度表示為0.1489。
以實施例3所述的特純透明質(zhì)酸鈉作原料，用二次蒸餾水在無菌條件下制備透明質(zhì)酸鋅溶液，然后用膜濾器(孔徑0.45μ)過濾此溶液。
所得到的溶液也可以用在注射組合物中。
實施例9
制備含有0.2wt/vol%透明質(zhì)酸鋅的水溶液并用氯化鋅使其具有等滲性
對于最終容積為100ml來說，稱量0.20克透明質(zhì)酸鈉，并將其溶解在濃度為0.120mol/升的氯化鋅溶液中。
按照實施例1溶解和制備準(zhǔn)確濃度為0.120mol/升的氯化鋅溶液(根據(jù)估計改變氯化鋅用量)。
此溶液的滲透壓，用相當(dāng)?shù)穆然c濃度表示為0.154mol/升，PH值為5.3-5.4。
HA含量1.96mg/ml
粘度15.9分升/克
蛋白質(zhì)含量0.015mg/ml
溶液的純度＊A1cm660＝0.015
＊根據(jù)用1cm液槽在660nm下測得的吸收。
采用實施例2所述特性的透明質(zhì)酸鈉制備此溶液，并且首先用此溶液制備治療皮膚病用和美容用組合物。
實施例10
制備含有0.50wt/vol%透明質(zhì)酸鋅的水溶液并用葡萄糖使其具有等滲性
本實施例的溶液含有透明質(zhì)酸鈉和計算等當(dāng)量的氯化鋅。
將濃度為0.100mol/升的12.50ml氯化鋅溶液加入稱有0.50克透明質(zhì)酸鈉的100ml容量瓶中。(也可以用其它濃度的氯化鋅，但是氯化鋅量應(yīng)相同)。使透明質(zhì)酸鈉在用無離子水稀釋至50ml的氯化鋅溶液中溶脹12小時，然后振蕩溶解。接著加入24.50ml1.00mol/升的葡萄糖溶液，并用無離子水稀釋到刻度。
此溶液的滲透壓，用相當(dāng)?shù)穆然c濃度表示為0.1495mol/升，PH值為5.4，總鋅濃度為1.25×10-2mol/升。
此溶液用實施例2所述特性的透明質(zhì)酸鈉制備，并且首先用于制備治療皮膚病組合物和美容組合物。
實施例11
制備含有0.2wt/vol%透明質(zhì)酸鋅的水溶液并用葡萄糖使其具有等滲性
本實施例的溶液含有透明質(zhì)酸鈉和計算等當(dāng)量的氯化鋅。
將5.0ml濃度為0.100mol/升的氯化鋅溶液加入稱有0.20克透明質(zhì)酸鈉的100ml容量瓶中，然后用去離子水稀釋到50ml。溶脹過夜后，振蕩溶解透明質(zhì)酸鈉，加入27.0ml1.00mol/升濃度的葡萄糖溶液，用無離子水充滿容量瓶至刻度。
此溶液的滲透壓用相當(dāng)?shù)穆然c濃度表示為0.151mol/升，PH值為5.6-5.7，總鋅濃度為5×10-3mol/升。
實施例12
制備含有0.5wt/vol%透明質(zhì)酸鋅的水溶液并用山梨糖醇使其具有等滲性
以下所述的透明質(zhì)酸鋅溶液，在無菌條件下用蒸餾水和實施例3所述的特純透明質(zhì)酸鈉制備。此溶液含有與透明質(zhì)酸鈉計算等當(dāng)量的氯化鋅。
除了用23.50ml1.00mol/升濃度的山梨糖醇溶液(1升中含182.19克右旋山梨糖醇)代替葡萄糖溶液加到透明質(zhì)酸鋅溶液中之外，按實施例10所述的方法操作。
用膜濾器(孔徑0.45μ)過濾這樣制備的溶液，此溶液可以用于包括注射組合物在內(nèi)的各種場合。
此溶液的滲透壓按相當(dāng)?shù)穆然c濃度表示為0.1520mol/升，PH值為5.5，總鋅濃度為1.25×10-2mol/升。
實施例13
制備含有0.2wt/vol%透明質(zhì)酸鋅的水溶液并用山梨糖醇使其具有等滲性
本實施例所述的溶液含有與透明質(zhì)酸鈉計算等當(dāng)量的氯化鋅。
以下所述的透明質(zhì)酸鋅溶液，在無菌條件下用二次蒸餾水和實施例3所述的特純透明質(zhì)酸鈉制備。
按實施例12的方法操作，但是溶解0.2克透明質(zhì)酸鈉，然后順序加入5ml0.100mol/升濃度的氯化鋅溶液和26.50ml1mol/升濃度的山梨糖醇溶液，最后將此溶液充滿到100ml。用膜濾器(孔徑0.45μ)過濾如此制備的溶液。此溶液可以用于包括注射組合物在內(nèi)的任何用途。
此溶液的滲透壓按相當(dāng)?shù)穆然c濃度表示為0.1501mol/升，PH值為5.6，總鋅濃度為5×10-3mol/升。
透明質(zhì)酸鹽含量2.03mg/ml，
粘度16.1分升/克，
蛋白質(zhì)含量0.016mg/ml，
溶液純度＊A1cm660＝0.010
＊根據(jù)用1cm液槽在660nm下測得的吸收。
實施例14-26
在下列實施例中，按照我們選擇的制劑類型給出各種組合物(藥物組合物和美容組合物)的諸成分。具有等滲性透明質(zhì)酸鋅溶液的制備載于前面的實施例之中。這里所述的“注射用蒸餾水”是指在無菌條件下制備的二次蒸餾水。
Ⅰ.注射溶液
實施例14-17的組合物用于經(jīng)皮給藥，而實施例18的組合物用于經(jīng)眼給藥。在這些實施例中使用實施例3所述的活性成分。
實施例14
透明質(zhì)酸鋅活性成分2.0mg
山梨糖醇48.3mg
用注射用蒸餾水制備的水溶液
最終容積1.0ml
實施例15
透明質(zhì)酸鋅活性成分5.0mg
山梨糖醇42.8mg
用注射用蒸餾水制備的水
溶液最終容積1.0ml
實施例16
透明質(zhì)酸鋅活性成分2.0mg
對羥基苯甲酸丙酯0.05mg
對羥基苯甲酸甲酯0.5mg
葡萄糖48.6mg
用注射用蒸餾水制備的水溶液
最終容積1.0ml
實施例17
透明質(zhì)酸鋅活性成分5.0mg
對羥基苯甲酸丙酯0.05mg
對羥基苯甲酸甲酯0.5mg
葡萄糖44.1mg
用注射用蒸餾水制備的水溶液
最終容積1.8ml
實施例18
透明質(zhì)酸鋅活性成分10.0mg
山梨酸鉀1.0mg
山梨糖醇41.0mg
葡萄糖
用注射用蒸餾水制備的水溶液
最終容積1.0ml
實施例20-28中所述的組合物主要用于治療皮膚病用和美容用。在這些實施例中采用實施例2所述的活性成分。
Ⅱ.局部用溶液
實施例19
透明質(zhì)酸鋅活性成分5.0mg
山梨酸鉀1.0mg
乙酸鈉24.6mg
用蒸餾水制備的水溶液最終體積1.0ml
實施例20
透明質(zhì)酸鋅活性成分2.0mg
山梨酸鉀1.0mg
山梨糖醇48.3mg
用蒸餾水制備的水溶液最終體積1.0ml
Ⅲ.局部用凝膠體
實施例21
透明質(zhì)酸鋅活性成分20.0mg
丙烯酸聚合物200mg
30%的氫氧化鈉50mg
山梨酸鉀10mg
蒸餾水至10.0ml
實施例22
透明質(zhì)酸鋅活性成分20.0mg
丙烯酸聚合物50mg
30%的氫氧化鈉40mg
丙二醇1500mg
山梨酸鉀10mg
蒸餾水至10.0ml
Ⅳ.局部用霜劑和軟膏
實施例23
透明質(zhì)酸鋅活性成分50mg
山梨酸鉀10mg
軟白蜂蠟125mg
脫水山梨醇油酸酯150mg
十六烷基十八烷醇840mg
甘油單硬脂酸酯1100mg
丙二醇4750mg
蒸餾水至10克
實施例24
透明質(zhì)酸鈷活性成分50mg
山梨酸鉀10mg
軟白蜂蠟125mg
脫水山梨醇油酸酯150mg
十六烷基十八烷醇840mg
甘油單硬脂酸酯1100mg
丙二醇4750mg
蒸餾水至10克
實施例25
透明質(zhì)酸鋅活性成分50mg
2-苯氧基乙醇100mg
月桂基磺酸鈉100mg
十六烷基十六烷酸酯400mg
硬脂精400mg
十八烷醇450mg
十六烷醇450mg
白凡士林500mg
丙二醇550mg
甘油600mg
蒸餾水至10.0克
實施例26
透明質(zhì)酸鈷活性成分50mg
2-苯氧基乙醇100mg
月桂基磺酸鈉100mg
十六烷基十六烷酸酯400mg
硬脂精400mg
十八烷醇450mg
十六烷醇450mg
白凡士林500mg
丙二醇550mg
甘油600mg
蒸餾水至10克
實施例27
透明質(zhì)酸鋅活性成分50mg
微晶石蠟250mg
丙二醇500mg
山梨糖醇400mg
羊毛蠟(乙?；?500mg
白凡士林至10克
Ⅴ.治療膿性傷口和灼傷凈化和結(jié)瘢用組合物
實施例28
透明質(zhì)酸鋅活性成分10mg
山梨酸鉀1.0mg
親水膠體二氧化硅50mg
山梨糖醇至1克。
權(quán)利要求
1、一種制備藥物組合物的方法，該方法包括將作為活性成分的由去質(zhì)子化的透明質(zhì)酸和周期表四周期3d金屬離子組成的配合物，與一般使用的載體、稀釋劑和選擇性成分等滲化劑或其它添加劑加以混合或溶解，并且將其制成藥物組合物，其中，所述配合物是用下述方法制備的
a)向透明質(zhì)酸鈉或透明質(zhì)酸的其它堿金屬鹽、堿土金屬鹽或銀鹽的水溶液中，加入含有等當(dāng)量周期表第四周期3d金屬離子的鹵化物的水溶液，或者
b)將由透明質(zhì)酸和季銨鹽形成的處于水懸浮液中的配合物，溶解在一種復(fù)合溶劑中，所說復(fù)合溶劑含有周期表第四周期3d金屬離子的水溶液和與水部分混溶的溶劑，然后
--按已知方式用鏈烷醇或鏈烷酮沉淀由去質(zhì)子化的透明質(zhì)酸與周期表第四周期3d金屬離子形成的配合物，或者
--從所說溶液中分離所說沉淀物，然后必要時
--在溫和條件下干燥所說沉淀物。
2、權(quán)利要求1所述的方法，其中包括使用鋅的配合物作為由周期表第四周期3d金屬離子形成的配合物。
3、權(quán)利要求1所述的方法，其中包括使用鈷的配合物作為由周期表第四周期3d金屬離子形成的配合物。
4、一種直接制備含水藥物組合物的方法，該方法包括向透明質(zhì)酸鈉的水溶液加入含有為達(dá)到等滲狀態(tài)所需當(dāng)量數(shù)或過量的氯化鋅水溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及去質(zhì)子化透明質(zhì)酸和周期表第四周期3d金屬離子的一些新穎的配合物，以及包含這些配合物作為活性成分或載體的組合物；還涉及上述新穎的配合物、包含這些配合物作為活性成分的組合物(藥物組合物和美容組合物)的制備方法。在這些組合物中，最好使用透明質(zhì)酸鋅作為活性成分。
文檔編號A61K8/20GK1086422SQ93109689
公開日1994年5月11日 申請日期1990年2月23日 優(yōu)先權(quán)日1989年2月24日
發(fā)明者科姆·博格, 格澤苔卡斯納吉, 艾溫·瑞斯, 加諾斯·艾麗斯, 戴拉·斯特夫格, 艾瑟伯特·奈斯米利亞, 艾斯萬哥伯哈若特, 艾斯萬·瑞卡茨, 勇屋水·科若里, 威科托拉·娃科昂尼 申請人:格德昂·理查德化學(xué)工廠股份公司