專利名稱：用血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(ace)抑制劑防治焦慮的方法、的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過(guò)單獨(dú)地服用ACE抑制劑，如甲巰丙脯酸，SQ 29852、zofenopril、fosinopril或enalapril;或與鈣(離子)通道阻滯劑，如硫氮
酮、硝苯吡啶或戊脈安一起服用，來(lái)預(yù)防或治療焦慮的方法。
根據(jù)本發(fā)明，一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物焦慮的方法被提供，該方法就是給哺乳動(dòng)物系統(tǒng)地經(jīng)口服或非腸道單獨(dú)服用有效抗焦慮量的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑;或與鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合使用。
本發(fā)明方法可用于治療和預(yù)防包括慢性和急性焦慮病癥(或焦慮性和恐慌性神經(jīng)機(jī)能病)的焦慮癥，它包括伴隨有或不伴隨有廣場(chǎng)恐怖的恐慌病癥、廣場(chǎng)恐怖癥、社交恐怖癥、原始恐怖癥(simplephobia)、強(qiáng)迫觀念與行為的病癥(或強(qiáng)迫觀念與行為的神經(jīng)機(jī)能病)、外傷后的緊張病癥、全身化焦慮病癥、非其它專一性的焦慮病癥以及混合的焦慮-抑郁癥。
此外，本發(fā)明的方法可用于治療或預(yù)防與戒除藥物依賴性和/或成癮性有關(guān)的焦慮癥。這樣，本發(fā)明的方法可用于減少焦慮，從而便于戒除酒精依賴性，尼古丁依賴性，可卡因依賴性和苯并二氮
依賴性以及戒除其它藥物依賴性。
當(dāng)ACE抑制劑和鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合使用時(shí)，所使用的ACE抑制劑與鈣(離子)通道阻滯劑的重量比約為0.1∶1～10∶1，最好約為0.4∶1～2.5∶1。
可用于本發(fā)明的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑包括取代的脯氨酸衍生物，如Ondetti等人在美國(guó)專利4，046，889或4，105，776中發(fā)表的一些，其中硫氮
酮即1-〔(2S)-3-巰基-2-甲基丙?；?L-脯氨酸最好;羧烷基二肽衍生物，如美國(guó)專利4，374，829中發(fā)表的一些，其中最好的是N-(1-乙氧羰基-3-苯基丙基)-L-丙氨酰-L-脯氨酸，即enalapril。
適用于本發(fā)明的ACE抑制劑的其它例子包括美國(guó)專利4，452，790中發(fā)表的一些膦酸鹽(或酯)取代的氨基或亞氨基酸或鹽，其中最好的是(S)-1-〔6-氨基-2-〔〔羥基-(4-苯基丁基)氧膦基〕氧〕-1-氧己基〕-L-脯氨酸(SQ29，852);美國(guó)專利4，168，267中發(fā)表的氧膦基鏈烷氧基脯氨酸，其中最好的為fosinopril;美國(guó)專利4，316，906中發(fā)表的取代的脯氨酸的巰基酰基衍生物，其中最好的為zofenopril;美國(guó)專利4，337，201中發(fā)表的一些氧膦基鏈烷氧取代的脯氨酸以及美國(guó)專利4，432，971中發(fā)表的膦酰胺化物(phosphonami-dates)。
可用于本發(fā)明的ACE抑制劑的其它例子包括歐洲專利80822和60668中發(fā)表的Beecham′sBRL36，378;CA.10272588v及Jap.J.Pharmacol.40371(1986)中發(fā)表的Chugai′sMC-838;英國(guó)專利2103614中發(fā)表的Ciba-Geigy′sCGS14824(3-(〔1-乙氧羰基-3-苯基-(1S)-丙基〕氨基)-2，3，4，5-四氫-2-氧-1-(3S)-苯并氮雜草-1-乙酸鹽酸鹽)以及美國(guó)專利4，473，575中發(fā)表的CGS 16，617(3(S)-〔〔(1S)-5-氨基-1-羧戊基〕氨基〕-2，3，4，5-四氫-2-氧-1H-苯并氮雜卓-1-乙酸);Eur.Therap Res.39671(1986)及40543(1986)上發(fā)表的cetapril(alacepril，Dainippon);歐洲專利79-022中發(fā)表的和Curr.Ther.Res.4074(1986)上發(fā)表的ramipril(Hoechst);Arzneimittelforschung 351254(1985)上發(fā)表的Ru 44570(Hoechst);J.Cardiovasc.Pharmacol.939(1987)上發(fā)表的cilazapril(Hoffman-La Roche);FEBS Lett.165201(1984)上發(fā)表的R031-2201(Hoffman.La Roche);Curr.Therap.Res.37342(1985)和歐洲專利申請(qǐng)12-401中發(fā)表的lisinopril(Merck);美國(guó)專利4，385，051中發(fā)表的indalapril(delapril);Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.10131(1983)上發(fā)表的rentiapril(fentiapril，Santen);J.Cardiovasc.Pharmacol.5643，655(1983)上發(fā)表的indolapril(Schering);Acta.Pharmacol.Toxicol.59(Supp.5)173(1986)上發(fā)表的Spirapril(Schering);Eur.J.Clin。Pharmacol.31519(1987)上發(fā)表的perindopril(Servier);美國(guó)專利4，344，949中發(fā)表的quinapril(Warner-Lambert)和Pharmacologist 26243，266(1984)上發(fā)表的CI 925(Warner-Lambert)(〔3S-〔2〔R(＊)R(＊)〕〕3R(＊)〕-2-〔2-〔〔1-(乙氧羰基)-3-苯基丙基〕氨基〔-1-氧代丙基〕-1，2，3，4-四氫-6，7-二甲氧基-3-異喹啉羧酸鹽酸鹽);J.Med.Chem.26394(1983)上發(fā)表的WY-44221(Wyeth)。
較好的ACE抑制劑為脯氨酸或取代的脯氨酸衍生物。
上述收編的專利和文獻(xiàn)出處作為本發(fā)明的參考文獻(xiàn)。
用于本發(fā)明的鈣拮抗劑可以是美國(guó)專利3，562，257中公開(kāi)的硫氮卓酮，其化學(xué)名稱為3(乙酰氧基)-5-〔2-(二甲基胺基)乙基-2，3-二氫-2-(4-甲氧苯基)-1，5-苯并硫氮雜草-4(5H)-酮，其結(jié)構(gòu)為
具有下式結(jié)構(gòu)的4-苯基-1，4-二氫吡啶類鈣拮抗劑可以使用
其中R1和R2可為相同或不同的，它們?yōu)榈图?jí)烷基或低級(jí)烷氧基(低級(jí)烷基)，所述低級(jí)烷基和低級(jí)烷氧基含有1～4個(gè)碳原子。
美國(guó)專利3，644，627;3，485，847;3，488，359;3，574，843;3，799，934;3，932，645及4，154，839中公開(kāi)了上述化合物及其制備方法，這些專利作為參考文獻(xiàn)引入本發(fā)明。
本發(fā)明的復(fù)方中的二氫吡啶類鈣拮抗劑最好為硝苯吡啶，即R1為CH3、R2為CH3和硝基在2位的式(C)化合物，也就是
美國(guó)專利3，644，627和3，485，847中公開(kāi)了該化合物。
適用于本發(fā)明的其它較好的4-苯基-1，4-二氫吡啶類鈣拮抗劑包括硝基吡雙酯，即R1為-(CH2)2OC3H7、R2為-(CH2)2OC3H7和硝基在3位的式(C)化合物(公開(kāi)在美國(guó)專利3，488，359和3，574，843中);硝基吡酯，即R1為-(CH2)2OCH3、R2為-CH(CH3)2和硝基在3位的式(C)化合物(公開(kāi)在美國(guó)專利3，799，934和3，932，645中);硝吡乙甲酯，即R1為-CH2CH3、R2為-CH3和硝基在3位的式(C)化合物(公開(kāi)在美國(guó)專利3，799，934和3，932，645中);以及硝基丁甲酯，即R1為-CH3、R2為-CH2CH(CH3)2和硝基在2位的式(C)化合物(公開(kāi)在美國(guó)專利3，799，934，3，932，645和4，154，839中)。
此外，也可以使用戊脈安。
已公開(kāi)的上述收編的專利和文獻(xiàn)出處作為本發(fā)明的參考文獻(xiàn)。
在進(jìn)行本發(fā)明的方法時(shí)，對(duì)于各種哺乳動(dòng)物如猴子、狗、貓、大鼠和人，可將ACE抑制劑單獨(dú)給藥，也可將其與鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合起來(lái)給藥，這樣，可以把它們摻入常規(guī)系統(tǒng)的劑型中，例如片劑、膠囊、酏劑或可注射劑型。上述劑型中也可以包括必要的載體物質(zhì)、賦形劑、潤(rùn)滑劑、緩沖劑、抗細(xì)菌劑、膨脹劑(如甘露醇)、抗氧劑(重亞硫酸鈉的抗壞血酸)等。最好使用口服給藥劑型，雖然非腸道給藥劑型，如肌內(nèi)的、腹膜內(nèi)的或靜脈給藥劑型也是十分滿意的。
給藥劑量必須根據(jù)病人的年齡、體重和狀況，以及給┩揪丁⒓列禿橢瘟品槳負(fù)退諭慕峁兇邢傅髡 這樣，對(duì)于口服給藥，為了獲得滿意結(jié)果，可以單獨(dú)地使用ACE抑制劑，其用量約為0.01-100mg/Kg，最好約為0.1～25mg/Kg，或與鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合起來(lái)用，其用量約為0.01～100mg/Kg，最好約為0.1～25mg/Kg，ACE抑制劑和鈣(離子)通道阻滯劑可以在同一口服劑型中一起使用，也可以做成分開(kāi)的口服劑型同時(shí)服用。
較好的口服劑型如片劑或膠囊，可以只含有ACE抑制劑，其含量約為0.1～500mg，最好約為5～200mg，約25～150mg則更好;或者兼含鈣(離子)通道阻滯劑，其含量約為1～350mg，最好約為2～200mg，約為30～150mg則更好。
對(duì)于非腸道給藥，可以單獨(dú)地使用ACE抑制劑，其用量約為0.005～10mg/Kg，最好約為0.01～1mg/Kg;或者與鈣(離子)通道阻滯劑一起，用其量約為0.005～20mg/Kg，最好約為0.01～2mg/Kg。
可將上述復(fù)方，以上述劑型，按每日1～4次的單次量或均分量給藥?？扇〉霓k法是在開(kāi)始時(shí)讓病人服用低劑量復(fù)方，然后逐漸地達(dá)到高劑量復(fù)方。
可將藥物做成各種大小，如總重量約為50-700mg的片劑，根據(jù)藥物學(xué)上的慣例，這些片劑可以含有一種或兩種上述范圍內(nèi)的活性物質(zhì)，剩余成分為生理學(xué)上可接受的其它載體物質(zhì)。當(dāng)然，可以將這些片劑劃痕，以分成幾份劑量。明膠膠囊可以按相似方法配制。
也可以將一種活性物質(zhì)或多種活性物質(zhì)通過(guò)溶解或懸浮于常規(guī)的，服藥時(shí)可接受的液體賦形劑制成液體配方，以提供1～4茶匙的所需劑量。
這些劑型可按每日1～4次量的方案使病人服用。
按其他改良方法，為了更好地調(diào)整劑量表，可以將活性物質(zhì)以個(gè)別的劑量單位在相同時(shí)間或仔細(xì)協(xié)調(diào)過(guò)的時(shí)間內(nèi)單獨(dú)給藥。因?yàn)橛谜{(diào)整過(guò)的給藥方案可以建立并維持血藥濃度，所以兩種物質(zhì)同時(shí)存在可達(dá)到同樣的結(jié)果。按照與上述相似的方式，可以將各個(gè)物質(zhì)分別配制成獨(dú)立的單位劑型。
ACE抑制劑和鈣(離子)通道阻滯劑的固定復(fù)方是更方便和優(yōu)先的，特別是做成供口服用的片劑或膠囊形式。
配制復(fù)方時(shí)，可將上述用量范圍內(nèi)的活性物質(zhì)，按照藥物學(xué)上的可接受的慣例與生理學(xué)上可接受的賦形劑，載體，粘合劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、調(diào)味香料等組合，制成特殊類型的單位劑型。
可以組合到片劑中的輔藥的例子有粘合劑如西黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠;賦形劑如磷酸二鈣或纖維素;崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等;潤(rùn)滑劑如硬脂酸或硬脂酸鎂;甜味劑如蔗糖、乳糖或糖精;調(diào)味劑如橙、歐薄荷、冬青油或櫻桃。當(dāng)劑型單位為膠囊時(shí)，除了上述類型物質(zhì)外，它可以含有液體載體如脂肪油。各種其它物質(zhì)可以作為包衣而存在，要不然就是用于修飾劑型單位的物理形態(tài)。例如，可以用蟲(chóng)膠、糖或兩者一起對(duì)片劑或膠囊包衣。酏劑糖漿可以含有活性化合物，水、醇等作為載體，甘油作為增溶劑，蔗糖作為甜味劑，蔗糖作為甜味劑，對(duì)羥苯甲酸甲酯和丙酯作為防腐劑，染料以及調(diào)味劑如櫻桃或橙。
上述許多活性物質(zhì)通常形成已知的藥學(xué)上可接受的鹽如堿金屬鹽和其它普通的堿性鹽類或酸加成鹽等。對(duì)堿性物質(zhì)的參考材料打算包括那些已知與母體化合物實(shí)際上相當(dāng)?shù)钠胀}類。
上述各種制劑應(yīng)長(zhǎng)期服用，也就是說(shuō)，只要焦慮發(fā)作的可能性存在或焦慮癥狀繼續(xù)存在，就應(yīng)服用。可以使用這些配方的緩釋劑型，可以提供這樣的量，即每?jī)芍芤淮巍⒚恐芤淮?，每月一次等。為了獲得最低限度的益處，需要有至少1-2周的劑量周期。
所有附圖都是從下述實(shí)施例中獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)標(biāo)繪圖。
圖1表示在黑白試驗(yàn)箱中，安定對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。S.E.M.s＜12.1%。＊p＜0.001。0＝鎮(zhèn)靜;
圖2表示在黑白試驗(yàn)箱中，captopril對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。S.E.M.s＜12.6%。＊p＜0.001;
圖3表示在黑白試驗(yàn)箱中，SQ 29，852對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。S.E.M.s＜12.5。＊p＜0.001;
圖4表示在黑白試驗(yàn)箱中，fosinopril對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。S.E.M.s＜12.9%?！玻硃＜0.05;＊p＜0.01-P＜0.001;
圖5表示在黑白試驗(yàn)箱中，zofenopril對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。S.E.M.s＜13.1%?！玻硃＜0.05，＊p＜0.01-p＜0.001;
圖6和圖7表示口服給藥后captopril，zofenopril，SQ 29，852和fosinopril對(duì)小鼠的抗焦慮強(qiáng)度。圖6中S.E.M.s＜11.3%，而圖7中S.E.M.s＜12.2%。在圖6和7中，n＝5。＊p＜0.01-P＜0.001;
圖8表示在黑白試驗(yàn)箱中，epicaptopril對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。S.E.M.s＜12.2%;
圖9和圖10表示在黑白試驗(yàn)箱中enalapril對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。對(duì)于圖9，S.E.M.s＜11.6%。＊p＜0.001對(duì)于圖10，S.E.M.s＜10.3%。＊p＜0.001;
圖11和12表示在黑白試驗(yàn)箱中，lisinopril對(duì)小鼠行為的作用。n＝5。對(duì)于圖11，S.E.M.s＜10.9%。＊p＜0.001。對(duì)于圖12，S.E.M.s＜11.2%。＊p＜0.001;
圖13和14表示在小鼠黑白試驗(yàn)箱中，評(píng)價(jià)ACE抑制劑在亞慢性治療時(shí)的抗焦慮強(qiáng)度。n＝5。〔＊〕p＜0.05。＊p＜0.01-p＜0.001。圖13中S.E.M.s＜12.0%而在圖14中S.E.M.s＜11.6%。0＝鎮(zhèn)靜;
圖15和16表示在小鼠黑白試驗(yàn)箱中，評(píng)價(jià)ACE抑制劑在亞慢性治療時(shí)的抗焦慮強(qiáng)度和突然停藥時(shí)的影響，經(jīng)過(guò)每天兩次共6天處理后停藥24小時(shí)。在圖15中S.E.M.s＜12.0%而在圖16中S.E.M.s＜12.7%。在圖15和16中，n＝5。＊p＜0.05-p＜0.001(抗焦慮)。+p＜0.05-p＜0.001(焦慮產(chǎn)生);
圖17、18、19、20和21表示攝入尼古丁期間的抗焦慮作用，停藥后的焦慮產(chǎn)生以及安定對(duì)停藥后焦慮產(chǎn)生的對(duì)抗作用。n＝5。S.E.M.s＜12.9%?！玻硃＜0.05，＊p＜0.01-p＜0.001(與C相比)+p＜0.001(逆轉(zhuǎn)停藥后焦慮產(chǎn)生);圖17、18、19、20和21分別對(duì)應(yīng)安定、Captopril，SQ 29，852，fosinopril和zofenopril。
圖22和23表示攝入乙醇期間的抗焦慮作用、停藥后的焦慮產(chǎn)生以及SQ29，852，zofenopril和安定對(duì)停止攝入乙醇后焦慮產(chǎn)生的對(duì)抗作用。
圖24和25表示亞慢性情況下給安定時(shí)的抗焦慮作用，停止給藥后的焦慮產(chǎn)生以及ACE抑制劑對(duì)焦慮產(chǎn)生的對(duì)抗作用。
圖26、27和28表示在小鼠黑白試驗(yàn)箱中，ACE抑制劑對(duì)抗由FG7142引起的焦慮產(chǎn)生的能力。
圖29表示進(jìn)行大鼠群居相互作用試驗(yàn)觀察到的，ACE抑制劑的抗焦慮作用;以及圖30、31和32表示在人對(duì)絨猴的恐嚇試驗(yàn)(marmosethumanthreattest)中檢測(cè)到的抗焦慮強(qiáng)度。
下述實(shí)施例代表本發(fā)明較好的實(shí)施方案。
實(shí)施例1下面給出了適用于口服給藥來(lái)抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮的captopril制劑。
從下述成分生產(chǎn)出1000片藥物，每片含有100mg1-〔(2s)-3-巰基-2-甲基丙?；?L-脯氨酸。
1-〔(2s)-3-巰基-2-甲基丙?；?L-脯氨酸(captopril)100g玉米淀粉50g明膠7.5g微晶纖維素(Avicel)25g硬脂酸鎂2.5g將captopril和玉米淀粉與明膠水溶液混合。混合物經(jīng)干燥并研磨后得到細(xì)粉。將其先后與微晶纖維素和硬脂酸鎂混合成粒。然后壓片，得到1000片藥片，每片含有100mg活性成分，該藥片用來(lái)抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮。
實(shí)施例2用100g1-(3-巰基-2-D-甲基丙酰氧基)-L-脯氨酸代替實(shí)施例1中captopril生產(chǎn)1000片藥片，每片含有100mg1-(3-巰基-2-D-甲基丙酰氧基)-L-脯氨酸，將其用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮。
實(shí)施例3用下列成分生產(chǎn)1000片藥片，每片含有200mgcaptopril
captopril200g乳糖100g微晶纖維素150g玉米淀粉50g硬脂酸鎂5g將captopril、乳糖和微晶纖維素混合，再與玉米淀粉混和。加入硬脂酸鎂。將干燥混合物壓片后，得到1000片藥片，每片505mg，內(nèi)含200mg活性成分。將藥片用含有作為色料
，含黃色＃6的色淀的Methocel E 15(甲基纖維素)溶液進(jìn)行包衣。所得藥片使用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮。
實(shí)施例4用下述成分填充雙套管＃1明膠膠囊，每個(gè)膠囊含250mgcaptoprilcaptopril250mg硬脂酸鎂7mgUSP乳糖193mg所得膠囊使用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮。
實(shí)施例5如下制備用來(lái)抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮用的注射液captopril500mg對(duì)羥苯甲酸甲酯5mg對(duì)羥苯甲酸丙酯1mg氯化鈉25g適量注射用水51.
將captopril、防腐劑和氯化鈉溶解于3升注射用水中，然后稀釋至5升。用無(wú)菌濾器過(guò)濾溶液，再在無(wú)菌條件下裝入預(yù)先滅菌過(guò)的藥瓶中，用預(yù)先滅菌過(guò)的橡皮塞密封。每個(gè)藥瓶裝有5ml溶液，其濃度為每ml注射液含100mg活性成分。
實(shí)施例6用N-(1-乙氧基羰基-3-苯基丙基)-L-丙氨酰-L-脯氨酸(enalapril)代替captopril、按實(shí)施例1的方法制備供抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮用的藥片。
實(shí)施例7用N-(1-乙氧羰基-3-苯基丙基)-L-丙氨酰-L-脯氨酸(enalapril)代替captopril、按實(shí)施例5的方法制備供抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮用的注射液。
實(shí)施例8適于口服的，供抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮使用的zofenopril制劑處方列出于下。
用下列成分生產(chǎn)1000片藥片，每片含100mgzofenopril。
〔1(s)，4(s)〕-1-〔3-(苯甲酰硫基)-2-甲基-1-氧丙基-4-(苯硫基)-L-脯氨酸(zofenopril)100g玉米淀粉50g明膠7.5g微晶纖維素25g硬脂酸鎂2.5g將zofenopril和玉米淀粉與明膠水溶液混合，混合物經(jīng)干燥和研磨后得到細(xì)粉。將細(xì)粉先后與微晶纖維素和硬脂酸鎂混合后進(jìn)行?；Ｈ缓髩浩?，得到1000片藥片，每片含100mg活性成分，這種藥物使用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮。
實(shí)施例9用100gfosinopril代替實(shí)施例8中的zofenopril，制備1000片藥片，每片含100mgfosinopril，這些藥物使用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮。
實(shí)施例10用下列成分生產(chǎn)1000片藥片，每片含200mgfosinoprilFosinopril200g乳糖100g微晶纖維素150g玉米淀粉50g硬脂酸鎂5g將fosinopril、乳糖和微晶纖維素混合，再與玉米淀粉混和。加入硬脂酸鎂。將干燥混合物壓片，得到1000片藥片，每片重505mg，內(nèi)含200mg活性成分。將這些藥片用含有作為色料的含黃色＃6的色淀的MethocelE15(甲基纖維素)溶液進(jìn)行包衣。所得藥片使用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮。
實(shí)施例11用1-〔N-〔羥基(4-苯基丁基)氧膦基〕-L-丙氨?！?L-脯氨酸的二鈉鹽(按美國(guó)專利4，432，971中所述方法制備)代替captopril，按實(shí)施例1制備用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮的片劑。
實(shí)施例12用1-〔N-〔羥基(4-苯基丁基)氧膦基〕-L-丙氨酰〕-L-脯氨酸的二鈉鹽(按美國(guó)專利4，432，971中所述方法制備)代替captopril，按實(shí)施例5的方法制備用于抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮的注射液。
實(shí)施例13適于口服的、供治療焦慮使用的captopril-硫氮 酮制劑處方列出于下。
用下列成分生產(chǎn)1000片藥片，每片含100mg 1-〔(2s)-3-巰基-2-甲基丙?；?L-脯氨酸和100mg硫氮 酮1-(2s)-3-巰基-2-甲基丙?；?L-脯氨酸(captopril)100g硫氮 酮 100g玉米淀粉50g明膠7.5g微晶纖維素25g硬脂酸鎂2.5g將captopril、硫氮卓酮和玉米淀粉與明膠水溶液混合?；旌衔锝?jīng)干燥和研磨后得到細(xì)粉。將其先后與微晶纖維素和硬脂酸鎂混合后進(jìn)行粒化。再經(jīng)壓片，得到1000片藥片，每片含200mg活性成分，這些藥片使用于預(yù)防或治療焦慮。
實(shí)施例14用100g1-(3-巰基-2-D-甲基丙氧基)-L-脯氨酸代替實(shí)施例13中的captopril，生產(chǎn)1000片藥片，使每片中含有100mg1-(3-巰基-2-D-甲基丙氧基)-L-脯氨酸。這些藥物使用于預(yù)防或治療焦慮。
實(shí)施例15用下列成分生產(chǎn)1000片藥片，使每片含有200mgcaptopril和200mg硝苯吡啶captopril200g硝苯吡啶200g乳糖100g微晶纖維素150g玉米淀粉50g硬脂酸鎂5g將captopril、硝苯吡啶、乳糖和微晶纖維素混合后，再與玉米淀粉混和。加入硬脂酸鎂。將干燥的混合物壓成片，得到1000片藥片，每片505mg，含有每種活性成分各200mg。將藥片用含有作為色料的，含黃色＃6的色淀的Methocel E 15(甲基纖維素)溶液進(jìn)行包衣。所得片劑使用于預(yù)防或治療焦慮。
實(shí)施例16用下述各成分的混合物填充雙套管＃1膠囊，使每個(gè)膠囊含有250mg enalapril和150mg硝吡乙甲酯Enalapril250mg硝吡乙甲酯150mg硬脂酸鎂7mgUSP乳糖193mg將得到的膠囊用于預(yù)防或治療焦慮。
實(shí)施例17制備用于治療或預(yù)防焦慮的注射液如下captopril500mg硫氮
酮 300mg對(duì)羥苯甲酸甲酯5g對(duì)羥苯甲酸丙酯1g氯化鈉25g適量注射用水51。
將captopril、硫氮
酮、防腐劑和氯化鈉溶解于3l。注射用水中，然后稀釋至5l.。將溶液用無(wú)菌濾器過(guò)濾后，在無(wú)菌條件下裝入預(yù)先滅菌過(guò)的藥瓶中，再用預(yù)先滅菌過(guò)的橡皮塞密封。每個(gè)藥瓶裝有5ml溶液，其濃度為每ml注射液含100mg活性成分。
實(shí)施例18用N-(1-乙氧羰基-3-苯基丙基)-L-丙氨?；?L-脯氨酸(enalapril)代替captopril、用硝苯吡啶代替硫氮
酮，按實(shí)施例13所述方法制備供預(yù)防治療焦慮用的藥片。
實(shí)施例19用zofenopril代替captopril、用硝吡丁甲酯代替硫氮
酮，按實(shí)施例13的方法制備供治療或預(yù)防焦慮用的藥片。
實(shí)施例20用fosinopril代替captopril，按實(shí)施例13的方法制備供治療或預(yù)防焦慮用的藥片。
實(shí)施例21
用alacepril代替captopril，按實(shí)施例13的方法，制備供治療或預(yù)防焦慮用的藥片。
實(shí)施例22用(s)-1-〔6-氨基-2-〔〔羥基-(4-苯基丁基)氧磷基〕氧〕-1-氧己基〕-L-脯氨酸或lisinopril代替captopril，按實(shí)施例13的方法制備供治療或預(yù)防焦慮用的藥片。
實(shí)施例23按下述試驗(yàn)步驟，在小鼠黑白試驗(yàn)箱中對(duì)captopril，SQ29，852，fosinopril及zofenopril、和安定(作為陽(yáng)性對(duì)照)進(jìn)行抗焦慮效果試驗(yàn)。
小鼠黑白試驗(yàn)箱(用小鼠對(duì)光亮、白色環(huán)境的厭惡，進(jìn)行的抗焦慮能力試驗(yàn))用首次用來(lái)試驗(yàn)的BKW小白鼠作為研究對(duì)象，小白鼠重量為25-30g。通常，將10只小鼠裝在每一個(gè)能夠隨意地得到食物和水的籠子中。使小鼠保持在12小時(shí)的明暗循環(huán)中，在1000點(diǎn)時(shí)停止光照。
為了評(píng)價(jià)焦慮反應(yīng)，將動(dòng)物置于黑暗的容器中，從暗室轉(zhuǎn)移到光線暗淡的試驗(yàn)室中，在1300-1800點(diǎn)之間進(jìn)行試驗(yàn)。用于檢測(cè)焦慮變化的設(shè)備包括頂部開(kāi)口的箱子(45×27×27cm高)，它的一小部分被涂成黑色(占40%區(qū)域)并用暗紅色燈(1×60W)照射，與箱子的剩余部分分隔，剩余部分涂成白色，并用位于箱子上方17cm處的60W白色光源照射。將箱底部劃分成9cm2的方塊。通過(guò)位于底平面的在分隔中心的7.5×7.5cm的開(kāi)口，可以實(shí)現(xiàn)在這些區(qū)域之間進(jìn)出。將已經(jīng)接受藥物或賦形劑注射的動(dòng)物，分別置于白色區(qū)域的中心，并通過(guò)遙控錄象，記錄觀察其行為5分鐘。當(dāng)黑暗環(huán)境可同時(shí)利用時(shí)，用在光照環(huán)境中動(dòng)物探測(cè)性活動(dòng)的增加(用后腳站起(rearing)，越線活動(dòng)(linecrossing))作為抗焦慮作用的指數(shù)?？菇箲]活性也與從白色到黑色環(huán)境的延遲潛伏狀態(tài)，在黑色環(huán)境中耗費(fèi)時(shí)間的減少百分率有關(guān)。因此，每分鐘得記錄四個(gè)行為參數(shù)在白色和黑色區(qū)域中探測(cè)性后腳站起次數(shù)、在白色和黑色區(qū)域中越線次數(shù)、從白色移動(dòng)到黑色區(qū)域的潛伏狀態(tài)，以及在黑色區(qū)域耗費(fèi)的時(shí)間百分?jǐn)?shù)。試驗(yàn)者對(duì)藥物治療自始至終不知道，當(dāng)分析完成后才公開(kāi)代碼。
在5個(gè)試驗(yàn)組(n＝5)中，動(dòng)物僅使用一次。每天試驗(yàn)中都進(jìn)行賦形劑治療對(duì)照。試驗(yàn)是在腹膜內(nèi)(i.p.)和口服(p.o.)給藥后進(jìn)行的。估計(jì)藥物作用的時(shí)間進(jìn)程時(shí)，每次試驗(yàn)都使用新的動(dòng)物組。為了測(cè)定在亞慢性治療時(shí)藥物作用是否保持，將小鼠按每日二次，給藥6天，并在最后一次給藥后45或60分鐘時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)(見(jiàn)下)。為了測(cè)定亞慢性治療停藥后是否出現(xiàn)焦慮或產(chǎn)生其它有害影響，可用藥物按一日兩次治療6天，然后在停藥后24小時(shí)時(shí)，在黑色箱中進(jìn)行評(píng)價(jià)(戒除效應(yīng)是否存在通過(guò)在停藥后48小時(shí)和96小時(shí)，試驗(yàn)其它各組小鼠來(lái)確證)。
整個(gè)研究都是以安定(Roche)作為陽(yáng)性對(duì)照。制備方法是溶于最少量聚乙二醇(PEG)中，再用蒸餾水稀釋到一定體積(i.p.途徑，預(yù)先給藥60分鐘)。captopril(i.p.途徑，預(yù)先給藥45分鐘)、fosinopril(i.p.途徑，預(yù)先給藥60分鐘)，SQ29，852(i.p.途徑，預(yù)先給藥60分鐘)、enalapril(p.o.途徑，預(yù)先給藥2小時(shí))、lisinopril(p.o.途徑，預(yù)先給藥2小時(shí))及epicaptopril(p.o.途徑，預(yù)先給藥2小時(shí))是用蒸餾水制備的，zofenopril(i.p.途徑，預(yù)先給藥60分鐘)是用磷酸鹽緩沖液(pH6.0)制備的。氫化麥角堿(商業(yè)制劑，p.o.途徑，預(yù)先給藥60分鐘)被制成0.1%羧甲基纖維素懸浮液。
結(jié)果安定在小鼠反應(yīng)方面引起的變化與按0.125-1mg劑量i.p.給藥時(shí)的抗焦慮強(qiáng)度一致。在10mg/Kg時(shí)出現(xiàn)鎮(zhèn)靜作用?？菇箲]作用的特征是在試驗(yàn)箱白色區(qū)域內(nèi)探測(cè)性后腳站起次數(shù)增加和越線次數(shù)增加(與在白色區(qū)域中的減少相當(dāng));耗費(fèi)在黑色區(qū)域內(nèi)的時(shí)間減少的百分率以及從白色區(qū)域移動(dòng)到黑色區(qū)域時(shí)的遲延潛伏狀態(tài)(圖1)。
Captopril引起與安定相似的行為改變，但或多或少需要較大一些劑量(1-50mg/Kgi.p.)，并且在最大劑量時(shí)沒(méi)有鎮(zhèn)靜作用(圖2)。相似地，用SQ29，852治療后，導(dǎo)致在白色的通常不愉快的環(huán)境中后腳站起次數(shù)和越線次數(shù)的增加(與在黑色環(huán)境中的減少相當(dāng));耗費(fèi)在黑色環(huán)境中的時(shí)間減少的百分率以及移動(dòng)到黑色環(huán)境中的遲延潛伏狀態(tài)。后一個(gè)參數(shù)在1和10mg/Kg劑量時(shí)變化很大，而其它參數(shù)在0.01-10mg/Kg劑量范圍時(shí)變化很大(圖3)。當(dāng)fosinopril以0.01-1mg/Kg劑量給藥時(shí)，可以得到探測(cè)性的后腳站起和越線活動(dòng)的特征化的重新分布。這些抗焦慮強(qiáng)度的特征也反應(yīng)在耗費(fèi)在黑色環(huán)境中的時(shí)間減少百分率上，盡管驚奇地發(fā)現(xiàn)，用fosinopril治療時(shí)從黑色環(huán)境移動(dòng)到白色環(huán)境時(shí)的潛伏狀態(tài)從來(lái)發(fā)生變化(圖4)。并且，當(dāng)增加fosinopril劑量時(shí)，抗焦慮強(qiáng)度降低(圖4)。
Zofenopril在0.1-1.0mg/Kg劑量范圍以抗焦慮劑特有的方式，改變探測(cè)性的后腳站起和越線活動(dòng)的次數(shù)(因藥物制劑問(wèn)題，限制使用較大劑量)，但是不能改變?cè)诤谏珔^(qū)域內(nèi)的耗費(fèi)時(shí)間減少的百分率，并且只有在最高劑量1mg/Kg(i.p.給藥)時(shí)才遲延從白色區(qū)域移動(dòng)到黑色區(qū)域時(shí)的潛伏狀態(tài)(圖5)。
口服處理時(shí)，可以保持captopril、zofenopril、SQ29，852和fosinopril的抑焦慮作用。這樣，通過(guò)將captopril(1-100mg/Kg)、zofenopril(0.01-1mg/Kg)、SQ29，852(0.1-10mg/Kg)和fosinopril(0.1-10mg/Kg)口服給藥，能夠降低動(dòng)物對(duì)白色光照環(huán)境的厭惡情緒(圖6和7)。當(dāng)口服給藥時(shí)，又一次看到zofenopril不能影響在系統(tǒng)注射時(shí)所見(jiàn)到的，從白色區(qū)域向黑色區(qū)域移動(dòng)時(shí)的潛伏狀態(tài)(圖7)。
與captopril、SQ29，852、zofenopril及fosinopril相比，epicaptopril在黑白試驗(yàn)箱中不能改變小鼠行為。因此，在這種試驗(yàn)中對(duì)于這種動(dòng)物，epicaptopril可以認(rèn)為沒(méi)有抗焦慮能力(圖8)。
將enalapril口服給藥并在治療后1小時(shí)和2小時(shí)時(shí)對(duì)不同組小鼠進(jìn)行評(píng)價(jià)。最大抗焦慮強(qiáng)度在兩個(gè)時(shí)間里都是明顯的(圖9)，因此enalapril在1小時(shí)之內(nèi)就起作用了，并且在2小時(shí)時(shí)維持有最大活性，所以enalapril的劑量-反應(yīng)曲線在2小時(shí)時(shí)完全實(shí)現(xiàn)。enalapril的劑量-反應(yīng)曲線是陡斜的，enalapril在0.01-1mg/Kgp.o劑量范圍內(nèi)具有最大抗焦慮作用(從在白色區(qū)域內(nèi)后腳站起次數(shù)的增加以及越線活動(dòng)次數(shù)的增加;在黑色區(qū)域內(nèi)耗費(fèi)時(shí)間的減少百分率及從白色區(qū)域移出時(shí)的潛伏狀態(tài)的顯著遲延看出)(圖10)。enalapril閾量約為0.005mg/Kg，在成癮試驗(yàn)中將這一劑量按每日二次給藥(見(jiàn)后)。用這種治療方案經(jīng)過(guò)7天后，只在1-2只動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)有抗焦慮能力。
與enalapril相比，lisinopril開(kāi)始作用時(shí)間晚2小時(shí)此時(shí)抗焦慮作用達(dá)到最大。預(yù)先給藥2小時(shí)后進(jìn)行的劑量-反應(yīng)分析表明，lisinopril與enalapril幾乎是等效的。在隨后的成癮試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其閾量也為0.005mg/Kg，而且按0.005mg/Kg(口服每日二次)治療5-7天后，在1-2只動(dòng)物中出現(xiàn)了一些蓄積效應(yīng)，表現(xiàn)出抗焦慮能力。
在隨后的研究中，將captopril、SQ29，852、fosinopril和zofenopril按每日二次給藥，共治療6天，并且用安定進(jìn)行抗焦慮強(qiáng)度對(duì)照。captopril和SQ29，852在亞慢性治療時(shí)保持了抗焦慮作用，而fosinopril和zofenopril的作用變?nèi)趿?圖13和14)。試驗(yàn)是在給完最后一次劑量后45分鐘(captopril)或60分鐘(其它ACE抑制劑及安定)進(jìn)行的。當(dāng)用安定進(jìn)行的亞慢性治療(10mg/Kg腹腔注射，每日二次，共6天)停止后，出現(xiàn)有焦慮(特征表現(xiàn)為在黑色區(qū)域內(nèi)的探測(cè)性的后腳站起次數(shù)增加;在黑色區(qū)域內(nèi)的越線活動(dòng)次數(shù)增加;在黑色區(qū)域內(nèi)停留時(shí)間的增加百分率以及從白色區(qū)域到黑色區(qū)域移動(dòng)的潛伏狀態(tài)縮短，圖15和16)。相反，captopril停藥后的小鼠恢復(fù)了正常的對(duì)照反應(yīng)(難以與賦形劑對(duì)照組動(dòng)物的反應(yīng)區(qū)別開(kāi)來(lái))，并且在24小時(shí)時(shí)，SQ29，852仍有抗焦慮活性。SQ29，852的這種活性在48小時(shí)時(shí)，與正常對(duì)照值相比變得低了，隨后的測(cè)定沒(méi)有表示出有反跳焦慮產(chǎn)生。對(duì)于長(zhǎng)期治療，fosinopril失去其抗焦慮活性，動(dòng)物行為保持在對(duì)照水平，甚至停藥時(shí)的水平。相反，在亞慢性治療時(shí)，消失了的zofenopril抗焦慮活性在停藥后可重新獲得。這種抗焦慮活性在停藥96小時(shí)之后減弱，并且不再能觀察到焦慮產(chǎn)生(停藥10天以后，對(duì)動(dòng)物行為的觀察)(圖15和16)。
上述試驗(yàn)結(jié)果清楚地表明ACE抑制劑具有抗焦慮活性，它們可用于減少焦慮。
實(shí)施例24對(duì)用尼古丁進(jìn)行亞慢性治療停藥后引起的焦慮的拮抗作用。
將實(shí)施例23中所述同樣的試驗(yàn)方法，應(yīng)用于依賴性研究，其中給試驗(yàn)動(dòng)物服從ACE抑制劑以減少焦慮，并由此促進(jìn)戒除對(duì)尼古丁的依賴性。
方法以小鼠為研究對(duì)象，通過(guò)實(shí)施例23所述的黑白試驗(yàn)箱系統(tǒng)進(jìn)行。把抗焦慮作為對(duì)白色光照區(qū)域的厭惡減少來(lái)測(cè)定(在白色區(qū)域中后腳站起次數(shù)和越線活動(dòng)次數(shù)增加(與在黑色區(qū)域內(nèi)的減少相當(dāng));從白色區(qū)域移出時(shí)的遲延潛伏狀態(tài)以及在黑色區(qū)域耗費(fèi)時(shí)間的減少百分率);而焦慮產(chǎn)生是作為對(duì)白色光照區(qū)域的厭惡增加來(lái)測(cè)定的(在白色區(qū)域內(nèi)后腳站起和越線活動(dòng)次數(shù)減少，而在黑色區(qū)域內(nèi)顯著增加。從白色環(huán)境中快速移出，以及在黑色環(huán)境中停留時(shí)間增加)。
將尼古丁按0.1mg/Kg腹腔注射，每日二次(i.p.b.d.)方案給藥7天(從廣泛的初步研究中仔細(xì)挑選的一個(gè)劑量)(治療5天時(shí)進(jìn)行試驗(yàn))，停藥24小時(shí)(最大焦慮產(chǎn)生的時(shí)間，重新從廣泛的初步研究中建立)。在圖17中將安定按1.0mg/Kgi.p.b.d.給藥(3個(gè)劑量)后作為陽(yáng)性對(duì)照。在圖18中，將captopril按10mg/Kgi.p.b.d.給藥(3個(gè)劑量)后作為陽(yáng)性對(duì)照。在圖19中，將SQ29，852按1mg/Kgi.p.b.d.給藥(3個(gè)劑量)后作為陽(yáng)性對(duì)照。在圖20中，將fosinopril按0.5mg/Kgi.p.b.d.給藥(3個(gè)劑量)后作為陽(yáng)性對(duì)照。在圖21中，將zofenopril按1.0mg/Kgi.p.b.d給藥(3個(gè)劑量)后作為陽(yáng)性對(duì)照。
結(jié)果小鼠在用尼古丁治療期間表現(xiàn)出抗焦慮，而當(dāng)尼古丁戒除后則出現(xiàn)焦慮。將安定按1.0mg/Kgi.p.在尼古丁戒除時(shí)給藥，然后再按b.d.給藥，可以拮抗戒除尼古丁后引起的焦慮(3個(gè)劑量，最后一個(gè)劑量是在試驗(yàn)前45分鐘時(shí)給的)(圖17)。同樣的行為改變圖可從使用下述藥物的試驗(yàn)中得到captopril(先按10mg/Kg量在尼古丁戒除時(shí)給藥，然后按b.d.給藥(共3個(gè)劑量，最后一劑量是在試驗(yàn)前60分鐘時(shí)給的))、SQ29，852(先按1mg/Kg量在尼古丁戒除時(shí)給藥，然后按b.d.給藥(3個(gè)劑量，最后一劑是在試驗(yàn)前60分鐘給的))、fosinopril(先按0.5mg/Kg在尼古丁戒除時(shí)給藥，然后再按b.d.給藥(3個(gè)劑量，最后一次在試驗(yàn)前60分鐘時(shí)給))以及zofenopril(先按1mg/Kg量在尼古丁戒除時(shí)給藥，然后按b.d.給藥(3個(gè)劑量，最后一劑在試驗(yàn)前60分鐘時(shí)給))。這樣，在每個(gè)試驗(yàn)中，用尼古丁治療期間出現(xiàn)有抗焦慮作用，用尼古丁進(jìn)行亞慢性治療被停止后出現(xiàn)焦慮，而停止尼古丁治療后產(chǎn)生的焦慮被下述藥物拮抗captopril(10mg/Kgb.d.)、SQ29，852(1.0mg/Kgb.d.)fosinopril(0.5mg/Kgb.d.)以及zofenopril(1.0mg/Kgb.d.)。在每一種情況下，都把焦慮產(chǎn)生轉(zhuǎn)化成了抗焦慮。這種在反應(yīng)方面的顯著變化(從焦慮產(chǎn)生到抗焦慮)對(duì)安定也可以看出(參見(jiàn)圖17、18、19、20和21)。在所有圖中n＝5。
在圖17中，S.E.M.′s＜12.9%?！玻硃＜0.05＊p＜0.01-p＜0.001(與C(對(duì)照)比較)+p＜0.001(逆轉(zhuǎn)停止治療后的焦慮產(chǎn)生)。
在圖18中，S.E.M.′s＜12.3%。＊p＜0.001(與C比較)+p＜0.001(逆轉(zhuǎn)停止治療后的焦慮產(chǎn)生)。
在圖19中，S.E.M.′s＜11.7%。＊p＜0.001(與C比較)+p＜0.001(逆轉(zhuǎn)停止治療后的焦慮產(chǎn)生)。
在圖20中，S.E.M.′s＜12.6%。＊p＜0.01-p＜0.001(與C比較)+p＜0.001(逆轉(zhuǎn)停止治療后的焦慮產(chǎn)生)。
在圖21中，S.E.M.′s＜12.2%。＊p＜0.001(與C比較)＊p＜0.001(逆轉(zhuǎn)停止治療后的焦慮產(chǎn)生)。
實(shí)施例25對(duì)用酒精進(jìn)行亞慢性治療停藥后引起的焦慮的拮抗作用將在實(shí)施例23中描述的同樣試驗(yàn)方法，用于依賴性研究，其中給試驗(yàn)動(dòng)物服以ACE抑制劑以減少焦慮，并由此促進(jìn)酒精依賴性的戒除。
以小鼠作為研究對(duì)象，通過(guò)在實(shí)施例23中描述的黑白試驗(yàn)箱系統(tǒng)進(jìn)行研究，抗焦慮作用是作為對(duì)白色光照區(qū)域的厭惡情緒降低(在白色區(qū)域內(nèi)后腳站起次數(shù)和越線活動(dòng)次數(shù)增加(與在黑色區(qū)域內(nèi)的減少相當(dāng))，移出白色區(qū)域的遲延潛伏狀態(tài)以及黑色區(qū)域內(nèi)耗費(fèi)時(shí)間的減少百分率)被測(cè)定的;而焦慮產(chǎn)生是作為對(duì)白色光照區(qū)域的厭惡情緒增加(在白色區(qū)域內(nèi)的后腳站起次數(shù)和越線活動(dòng)次數(shù)減少，(與在黑色區(qū)域內(nèi)顯著增加相當(dāng))，快速移出白色環(huán)境以及在黑色區(qū)域停留時(shí)間增加)被測(cè)定的。
酒精以8%重量/體積的濃度存在于飲用水中(無(wú)選擇地)7天(試驗(yàn)在治療的第5天和停藥后24小時(shí)進(jìn)行)。大量研究表明這種方法是可接受的(自由選擇，小鼠接受2%重量/體積的酒精)，能在治療期間引起抗焦慮作用，而在停藥后24小時(shí)內(nèi)引起焦慮。將拮抗劑先在停藥時(shí)給予，然后再按b.d.給藥(3個(gè)劑量)。以captopril(10mg/Kgi.p.b.d.)、SQ29，852(1.0mg/Kgi.p.b.d.)、fosinopril(0.5mg/Kgi.p.b.d.)、zofenopril(1.0mg/Kgi.p.b.d)和安定(1.0mg/Kgi.p.b.d.)作為陽(yáng)性對(duì)照。
結(jié)果小鼠在攝入酒精期間顯示出抗焦慮作用(在第5天測(cè)定)，在7天酒精治療停藥后24小時(shí)內(nèi)顯示出明顯的焦慮產(chǎn)生。captopril(10mg/Kg i.p.b.d)或fosinopril(0.5mg/Kg i.p.b.d)不能拮抗停藥后的焦慮產(chǎn)生，而SQ 29，852(1.0mg/Kg i.p.b.d.)、zofenopril(1.0mg/Kg i.p.b.d.)以及安定(1.0mg/Kg i.p.b.d.)具有拮抗作用(圖22和23)。在圖22和23中n＝5。在圖22中，S.E.M.′s＜11.6%。＊p＜0.05-p＜0.001(與C比較)+p＜0.01-p＜0.001(逆轉(zhuǎn)戒除)。在圖23中，S.E.M.′s＜12%。＊p＜0.05-p＜0.001(與C比較)+p＜0.01-p＜0.001(逆轉(zhuǎn)戒除)。
實(shí)施例26對(duì)用安定進(jìn)行亞慢性治療停藥后引起的焦慮的拮抗作用方法將在實(shí)施例23中描述的同樣的試驗(yàn)方法用于依賴性的研究，其中給試驗(yàn)動(dòng)物服以ACE抑制劑以減少焦慮，并由此促進(jìn)安定依賴性的戒除。
以小鼠為研究對(duì)象，通過(guò)在實(shí)施例23中描述的黑白試驗(yàn)箱系統(tǒng)進(jìn)行研究?？菇箲]作用是作為對(duì)白色光照區(qū)域的厭惡情緒降低(在白色區(qū)域內(nèi)的后腳站起次數(shù)和越線活動(dòng)次數(shù)增加(與在黑色區(qū)域內(nèi)的減少相當(dāng))，移出白色區(qū)域的潛伏狀態(tài)遲延以及黑色區(qū)域內(nèi)耗費(fèi)時(shí)間的減少百分率)被測(cè)定的;而焦慮產(chǎn)生是作為對(duì)白色光照區(qū)域的厭惡情緒增加(在白色區(qū)域內(nèi)的后腳站起次數(shù)和越線活動(dòng)次數(shù)減少(與在黑色區(qū)域內(nèi)顯著增加相當(dāng))、快速移出白色環(huán)境以及在黑色區(qū)域停留時(shí)間增加)被測(cè)定的。
將安定按10mg/Kgi.p.b.d.給藥7天。3天內(nèi)出現(xiàn)了對(duì)鎮(zhèn)靜作用耐受性，5天時(shí)測(cè)定完全的抗焦慮反應(yīng)(圖24和25)。在停止安定治療后，8小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)了焦慮，并且在停藥后24小時(shí)內(nèi)焦慮產(chǎn)生變得明顯(圖24和25)。在安定治療中止后24小時(shí)評(píng)價(jià)潛在的拮抗劑的效能。將拮抗劑先在停藥時(shí)給予，然后再按b.d.給藥(3個(gè)劑量)。以captopril(10mg/Kgi.p.b.d.)SQ29，852(1mg/Kgi.p.b.d.)、fosinopril(0.5mg/Kgi.p.b.d.)、zofenopril(1mg/Kgi.p.b.d.)和安ǎ 0mg/Kgi.p.b.d.)作為陽(yáng)性對(duì)照。
結(jié)果captopril(10mg/Kg i.p.b.d.)、SQ 29，852(1.0mg/Kg i.p.b.d)、fosinopril(0.5mg/Kg i.p.b.d.)和zofenopril(1.0mg/Kg i.p.b.d.)能夠拮抗戒除安定而引起的焦慮。確實(shí)，在每一種情況下，都把焦慮產(chǎn)生變成了完全的抗焦慮作用(圖24和25)。在圖24和25中，n＝5。S.E.M.′s＜9.6%(圖24)和＜10.1%(圖25)，＊p＜0.001(與C比較)，+p＜0.001(逆轉(zhuǎn)戒除)。
實(shí)施例27將在實(shí)施例23中描述的同樣的試驗(yàn)步驟用于依賴性研究，其中給試驗(yàn)動(dòng)物服ACE抑制劑以減少焦慮，并由此促進(jìn)β-卡波林依賴性的戒除。
在每一天的試驗(yàn)中都進(jìn)行賦形劑治療對(duì)照。所有試劑用如在


中所限定的30～60分鐘預(yù)先給藥時(shí)間，通過(guò)i.p.途徑。用β-卡波林FG7142(1mg/Kgi.p.30分鐘)來(lái)誘導(dǎo)焦慮產(chǎn)生。給予下述藥劑作為陽(yáng)性對(duì)照，并測(cè)定其拮抗由FG7142引起的焦慮的強(qiáng)度安定captopril、epicaptoprilSQ29，852.fosinopril和zofenopril。
結(jié)果用FG7142按1mg/Kgi.p.30分鐘處理后，引起焦慮，其特征為在黑白試驗(yàn)箱中，在白色區(qū)域內(nèi)后腳站起次數(shù)減少，而在黑色區(qū)域內(nèi)增加(圖26);在白色區(qū)域內(nèi)越線活動(dòng)次數(shù)減少，而在黑色區(qū)域內(nèi)相應(yīng)增加(圖27)，在黑色區(qū)域內(nèi)耗費(fèi)時(shí)間的減少百分率(圖28)以及從試驗(yàn)箱中的白色區(qū)域到黑色區(qū)域移動(dòng)的潛伏狀態(tài)縮短(圖28)。
下列藥劑可以抗FG7142的焦慮產(chǎn)生效應(yīng)安定(1mg/Kgi.p.30分鐘)captoril(10mg/Kgi.p.45分鐘)、SQ29，852(1mg/Kgi.p.60分鐘)、fosinopril(0.5mg/Kgi.p.60分鐘)、enalapril(0.1mg/Kgi.p.60分鐘)、lisinopril(0.1mg/Kgi.p.60分鐘)和zofenopril(1mg/Kgi.p.60分鐘)(圖26、27和28)。而epicaptopril(10mg/Kgi.p.60分鐘)和對(duì)照(賦形劑1ml/100gi.p.30分鐘)不能影響FG7142引起的焦慮產(chǎn)生(圖26、27和28)。圖26，27和28所示的試驗(yàn)是在三種不同情況下進(jìn)行的，所以給出了三組比較對(duì)照(賦形劑)的數(shù)據(jù)和FG7142的數(shù)據(jù)。
結(jié)論ACE抑制劑如安定一樣能夠拮抗β-卡波林FG7142引起的焦慮。epicaptopril沒(méi)有作用，證實(shí)了ACF抑制劑反應(yīng)的特異性。在圖26、27和28每一個(gè)中，n＝5。S.E.M.′s＜7.6～11.8%(圖26)、＜10.3～12.1%(圖27)以及＜9.4-12.7%(圖28)。0p＜0.1-p＜0.001(焦慮產(chǎn)生)，＊p＜0.001(抗焦慮作用)，+p＜0.001(對(duì)FG7142的拮抗作用)。
實(shí)施例28用大鼠群居相互干擾試驗(yàn)測(cè)試的抗焦慮強(qiáng)度通常將雄性Sprague-Dawley大鼠(重225-227g)5個(gè)一組分成數(shù)組，并保持在12小時(shí)的亮/暗循環(huán)中(800開(kāi)燈)。試驗(yàn)是在光照的箱子里于1300-1800之間進(jìn)行的。用于檢測(cè)大鼠群居相互干擾作用的變化和探測(cè)行為的設(shè)備，包括一個(gè)不透光白色有機(jī)玻璃制成的頂部開(kāi)口箱子(45×32cm，20cm高)，其底面上有15×16cm的面積被做上標(biāo)記。將來(lái)自不同籠子中的兩只首次用于試驗(yàn)的大鼠裝入箱子中(在箱子上方17cm處裝有一個(gè)100W明亮的白色照明燈)，并通過(guò)遙控錄象記錄觀察其行為10分鐘。兩種行為被記錄(a)通過(guò)記錄同伴的嗅聞、從同伴上下爬過(guò)、同伴的生殖器觀察、跟隨同伴的時(shí)間(秒)來(lái)測(cè)量動(dòng)物之間群居相互干擾作用，(b)將探測(cè)性行進(jìn)力通過(guò)越過(guò)試驗(yàn)箱底面上標(biāo)記線條的次數(shù)進(jìn)行測(cè)定。對(duì)個(gè)體動(dòng)物，測(cè)定其群居相互干擾作用中耗費(fèi)的時(shí)間以及圍繞觀察籠移動(dòng)的數(shù)值。首次用于試驗(yàn)的動(dòng)物以6個(gè)為一組，分組進(jìn)行藥物治療后，配對(duì)進(jìn)行試驗(yàn)。如同對(duì)小鼠進(jìn)行的研究一樣，用變異的單因素分析法分析獲得的數(shù)據(jù)，接著進(jìn)行Dunnettt-試驗(yàn)。藥物配制的方法如同小鼠試驗(yàn)中所描述的那樣。預(yù)先給藥時(shí)間為45～60分鐘。
結(jié)果安定對(duì)大鼠的抗焦慮作用可被看作為群居相互干擾作用的增加。(0.125-1mg/Kg i.p.)。在高于1mg/Kg劑量(2，5和10mg/Kg i.p.)時(shí)，行進(jìn)活性被抑制。經(jīng)安定治療后，所看到的大鼠群居相互干擾作用的顯著增加，也可以在服用captopril(1-50mg/Kg i.p.)和SQ 29，852(0.01-10mg/Kg i.p.)后看到。口服給藥(1-50mg/Kg p.o.captopril，0.1-10mg/Kg p.o.SQ 29，852)時(shí)，可以保持這兩種化合物的活性。群居相互干擾作用的增加也可以在用fosinopril(0.01mg/Kg，但在1mg/Kg時(shí)失去作用)或zofenopril(0.1mg/Kg)進(jìn)行治療后看到，雖然反應(yīng)強(qiáng)度沒(méi)有象安定、captopril或SQ 29，852的反應(yīng)強(qiáng)度那樣顯著(圖29)。n＝5。S.E.M.′s＜13.6%，〔＊〕p＜0.05，＊p＜0.01-p＜0.001。
實(shí)施例29用人恐嚇絨猴試驗(yàn)進(jìn)行抗焦慮強(qiáng)度評(píng)價(jià)將重量為350～400g的雄性和雌性實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的普通絨猴(Callithrixjacchus)按單一性別對(duì)安置。使試驗(yàn)箱的溫度保持在25±1℃，濕度保持在55%，并將試驗(yàn)箱保持在700開(kāi)燈的12小時(shí)的明/暗循環(huán)中(在黎明和黃昏時(shí)用紅色燈照明)。試驗(yàn)于1330-1530在通常裝動(dòng)物的箱子中進(jìn)行(以避免移動(dòng)到新的箱子或籠子中時(shí)不希望出現(xiàn)的行為間斷)。裝動(dòng)物的籠子大小為75cm高、50cm寬和60cm厚。由緊靠著籠子前面站著的觀察者引發(fā)一種行為變化，這種變化被對(duì)人恐嚇后的退卻和采取某種姿勢(shì)特征化。觀察者記錄行為變化2分鐘。選自本研究的行為測(cè)量是(a)直接面對(duì)人的恐嚇時(shí)，在籠子前面停留的時(shí)間百分率，(b)身體姿態(tài)的數(shù)目，主要表現(xiàn)為隨著體毛豎立的程度變化而尾巴抬起，暴露出生殖器區(qū)域，肛臭顯著以及帶有扁平耳叢的裂隙凝視。
在整個(gè)研究中，將12只絨猴以7天間隔使用，并使之經(jīng)受隨機(jī)交叉處理。按照它們的基礎(chǔ)焦慮反應(yīng)將它們分開(kāi)。用變異的單因素分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，接著進(jìn)行Dunnettt-試驗(yàn)。按照對(duì)小鼠研究所描述的方法配制供絨猴研究需用的藥物(除了用普通鹽水代替蒸餾水)。對(duì)絨猴總是采用皮下(s.c.)途徑給藥。
結(jié)果絨猴顯示出的焦慮減少，表現(xiàn)為其在固定時(shí)間內(nèi)姿態(tài)數(shù)目減少和直接面對(duì)人的恐嚇時(shí)，在籠子前面停留的時(shí)間增加，對(duì)安定來(lái)說(shuō)，這種作用可以明顯看出(圖30)，在10-25mg/Kgs.c.時(shí)存在著劑量-依賴效應(yīng)。用于評(píng)價(jià)ACE抑制劑的潛在抗焦慮作用的第一組絨猴，具有相對(duì)低的基準(zhǔn)焦慮反應(yīng)。然而，安定(0.25mg/Kgs.c.)、captopril(1.0mg/Kgs.c.)和SQ29，852(0.1mg/Kgs.c.)的抗焦慮作用明顯的表現(xiàn)為姿態(tài)減少，并且對(duì)于安定和captopril，表現(xiàn)為在籠子前面停留的時(shí)間增加(圖31)。
在第二組絨猴中，基本焦慮反應(yīng)較高(圖32)。在這些動(dòng)物中安定(0.1mg/Kgs.c.)、captopril(1.0mg/Kgs.c.)和zofenopril(0.1mg/Kgs.c.)都被顯示出發(fā)揮顯著的抗焦慮作用，表現(xiàn)為姿態(tài)減少和在籠子前面停留的時(shí)間增加(zofenopril除外)。在所有這些化合物中，zofenopril是活性最低的抗焦慮劑。然而，與安定和所試驗(yàn)的ACE抑制劑相比，象對(duì)小鼠那樣，epicaptopril被證明對(duì)絨猴沒(méi)有抗焦慮能力(圖32)。
在圖30、31和32中，n＝4。S.E.M.′s＜10.9%＊p＜0.01-p＜0.001(圖30)、S.E.M.′s＜11.7%＊p＜0.001(圖31)及S.E.M.′s＜10.3%＊p＜0.05，＊＊p＜0.001(圖32)。
權(quán)利要求
1.單獨(dú)的或與鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑的應(yīng)用，其特征在于用來(lái)制備一種治療焦慮的藥物。
2.單獨(dú)的或與鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑在治療焦慮中用作為抗焦慮劑。
3.一種治療焦慮的組合物，其特征在于含有單獨(dú)的或與鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑。
4.一種制備用于治療焦慮的藥物組合物的方法，其特征在于將單獨(dú)的或與鈣(離子)通道阻滯劑結(jié)合的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑與其藥學(xué)上可接受的載體混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4的發(fā)明，其特征在于其中的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑為磷酸酯(或鹽)取代的氨基或亞氨基酸或其鹽、脯氨酸衍生物、取代的脯氨酸衍生物、羧烷基二肽衍生物、氧膦基烷氧基脯氨酸衍生物或膦酰胺化物的衍生物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4的發(fā)明，其特征在于所述血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑為脯氨酸衍生物或取代的脯氨酸衍生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4的發(fā)明，其特征在于所述的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑為captopril、enalapril、lisinopril、zofenopril、fosinopril或(s)-1-〔6-氨基-2-〔羥基(4-苯基丁基)氧膦基〕氧〕-1-氧己基〕-L-脯氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4的發(fā)明，其特征在于所述的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑按每天約0.1～500mg/1～4次的單次量或均分量給藥，而其中的鈣(離子)通道阻滯劑按每天約1～300mg/1～4次的單次量或均分量給藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4的發(fā)明，其特征在于血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑與鈣(離子)通道阻滯劑一起給藥。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的發(fā)明，其特征在于其中的鈣(離子)通道阻滯劑為硫氮卓酮、4-苯基-1，4-二氫吡啶或戊脈安。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的發(fā)明，其特征在于其中的4-苯基-1，4-二氫吡啶為硝苯吡啶或硝吡乙甲酯。
12.根據(jù)權(quán)利要求9的發(fā)明，其特征在于血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑與鈣(離子)通道阻滯劑按藥0.1∶1～10∶1的重量比使用。
13.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4的發(fā)明，其特征在于焦慮與戒除藥物依賴性和/或成癮性有聯(lián)系。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的發(fā)明，其特征在于焦慮與尼古丁戒除、酒精戒除、安定戒除或可卡因戒除有聯(lián)系。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的發(fā)明，其特征在于焦慮與尼古丁戒除有聯(lián)系，其中所給的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑為captopril、SQ 29，852、fosinopril、zofenopril、enalapril或lisinopril。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的發(fā)明，其特征在于焦慮與酒精戒除有聯(lián)系，其中所給的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑為SQ 29，852、zofenopril、enalapril或lisinopril。
17.根據(jù)權(quán)利要求14的發(fā)明，其特征在于焦慮與安定戒除有聯(lián)系，其中所給的血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶抑制劑為captopril、SQ 29，852、fosinopril、zofenopril、enalapril或lisinopril。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抑制焦慮發(fā)作或治療焦慮的方法，通過(guò)單獨(dú)服用ACE抑制劑，如甲巰丙脯酸，fosinopril，zofenopril或SQ29852；或與鈣(離子)通道阻滯劑，如硫氮酮或硝苯吡啶一起服用，經(jīng)延長(zhǎng)周期達(dá)到治療目的。
文檔編號(hào)A61K31/40GK1034312SQ8810857
公開(kāi)日1989年8月2日 申請(qǐng)日期1988年12月14日 優(yōu)先權(quán)日1987年12月14日
發(fā)明者阿伯拉罕·蘇迪洛夫斯基, 佐拉·菲利普·霍羅威茨 申請(qǐng)人:E.R斯奎布父子公司