本發(fā)明涉及納米級(jí)藥物載體領(lǐng)域，特別是一種穿心蓮內(nèi)酯分子印跡隱性藥物載體及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide，adr)是爵床科植物穿心蓮中提取得到的二萜內(nèi)酯類化合物?，F(xiàn)代藥理研究表明，穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和保肝利膽等作用。但穿心蓮內(nèi)酯本身存在穩(wěn)定性差、水溶性低和生物利用度低等諸多不足，這極大限制了其臨床應(yīng)用。

2、分子印跡聚合物(molecular?imprinted?polymer,mip)是一種能夠與特定模板分子具有親和力的聚合物，目前，分子印跡聚合物已應(yīng)用于納米級(jí)藥物載體領(lǐng)域，特別是在藥物傳遞系統(tǒng)(drug?delivery?systems,dds)中顯示出控釋和大載藥量的潛力。然而，對(duì)于尺寸在納米級(jí)的mip藥物載體，在生物體內(nèi)常被免疫系統(tǒng)誤判為病原體或其它有害實(shí)體，隨后便被生物體內(nèi)的免疫細(xì)胞清除，這使得攜帶藥物的mip藥物載體在血液中的循環(huán)時(shí)間較短，部分藥物來不及釋放便被清除，降低了治療效果。

3、綜上所述，基于分子印跡技術(shù)開發(fā)一種具有免疫逃逸性能的穿心蓮內(nèi)酯mip藥物載體意義重大。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供一種穿心蓮內(nèi)酯分子印跡隱性藥物載體及其制備方法，它解決了穿心蓮內(nèi)酯目前的臨床應(yīng)用存在穩(wěn)定性差、水溶性低和生物利用度低的問題，還解決了mip藥物載體在生物體內(nèi)容易被免疫系統(tǒng)清除，導(dǎo)致治療效果降低的問題。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案是：穿心蓮內(nèi)酯分子印跡隱性藥物載體，其組成原材料及各原材料重量份數(shù)如下：2-乙基-2-惡唑啉2.5～4.3份；碘1.529～2.584份；乙酸酐2.28～4.573份；粗載體0.332～0.968份；粗載體為穿心蓮內(nèi)酯分子印跡材料。

3、本發(fā)明進(jìn)一步的技術(shù)方案是：其組成原材料及各原材料的重量份數(shù)如下：2-乙基-2-惡唑啉3.427份；碘2.03份；乙酸酐3.375份；粗載體0.578份。

4、本發(fā)明進(jìn)一步的技術(shù)方案是：其組成原材料及各原材料的重量份數(shù)如下：2-乙基-2-惡唑啉3.427份；碘1.529份；乙酸酐2.28份；粗載體0.332份。

5、本發(fā)明進(jìn)一步的技術(shù)方案是：其組成原材料及各原材料的重量份數(shù)如下：2-乙基-2-惡唑啉3.427份；碘2.584份；乙酸酐4.573份；粗載體0.968份。

6、本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種制備穿心蓮內(nèi)酯分子印跡隱性藥物載體的方法，步驟如下：

7、s01，制備粗載體：

8、a，制備涂有sio2薄層的fe3o4微球；

9、b，制備帶有多層sio2的空心磁性介孔sio2微球；

10、c，將丙烯?；?環(huán)糊精接枝到b分步驟制備所得物；

11、d，c分步驟制備所得物與穿心蓮內(nèi)酯反應(yīng)形成包合物；

12、e，d分步驟制備所得物中的穿心蓮內(nèi)酯與功能單體通過非共價(jià)鍵結(jié)合；

13、f，洗脫e分步驟制備所得物中的穿心蓮內(nèi)酯得到粗載體adr-mmip；

14、s02，制備藥物載體：

15、a，基于碘與粗載體的取代反應(yīng)制備adr/i-mmip；

16、b，將adr/i-mmip中的活性基團(tuán)乙酰化；

17、c，基于聚(2-乙基-2-惡唑啉)與活性基團(tuán)乙酰化的adr/i-mmip取代反應(yīng)制備藥物載體adr/peox-mmip。

18、本發(fā)明進(jìn)一步的技術(shù)方案是：s01步驟還包括前置ⅰ和前置ⅱ步驟，前置ⅰ步驟設(shè)在a分步驟之前，前置ⅱ步驟設(shè)在c分步驟之前；前置ⅰ與前置ⅱ步驟無先后次序；

19、前置?。褐苽鋐e3o4微球：將fecl3·6h2o、c6h5o7na3·h2o和尿素溶解于超純水中，充分?jǐn)嚢?，再加入聚丙烯酰胺繼續(xù)攪拌直至完全溶解，得到ⅰ號(hào)溶液；將ⅰ號(hào)溶液轉(zhuǎn)移至聚四氟乙烯襯里的高壓釜中，200℃下加熱12h，之后自然冷卻至室溫，用磁鐵收集所得產(chǎn)物，再反復(fù)洗滌，最后真空干燥，得到fe3o4微球；

20、前置ⅱ：制備丙烯酰化β-環(huán)糊精：將β-環(huán)糊精溶解于koh溶液中，得到ⅱ號(hào)溶液；將ⅱ號(hào)溶液置于0～5℃的冰浴中，逐滴加入丙烯酰氯，得到帶有絮狀物的ⅲ號(hào)溶液；將ⅲ號(hào)溶液在40℃下反應(yīng)6h，生成白色沉淀；分離沉淀物并置于乙醇中，將其置于0～12℃的冰箱中儲(chǔ)存12h，最后真空干燥，得丙烯?；?環(huán)糊精，記為aa-β-cd。

21、本發(fā)明再進(jìn)一步的技術(shù)方案是：s01步驟的各個(gè)分步驟詳細(xì)展開如下：

22、a，制備涂有sio2薄層的fe3o4微球：取0.204份fe3o4微球超聲分散于1號(hào)溶液中，得到fe3o4懸浮液；1號(hào)溶液由80.026份乙醇、20.627份超純水和2.452份質(zhì)量濃度為28％的氨水組成；將fe3o4懸浮液在攪拌條件下滴加正硅酸乙酯，滴加完成后繼續(xù)攪拌1h，之后用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再反復(fù)洗滌，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2；

23、b，制備帶有多層sio2的空心磁性介孔sio2微球：取0.204份fe3o4&sio2真空干燥的粉末超聲分散于120.364份乙醇中，再加入2.452份質(zhì)量濃度為28％的氨水，得到2號(hào)溶液；取0.623份制孔劑超聲分散并溶解于160份純凈水中，得到3號(hào)溶液；將2號(hào)溶液和3號(hào)溶液攪拌混合，得到1號(hào)混合液，將1號(hào)混合液保持?jǐn)嚢锠顟B(tài)下滴加正硅酸乙酯，滴加完成后繼續(xù)攪拌6h，之后用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再反復(fù)洗滌；然后將所得產(chǎn)物置于含有質(zhì)量濃度為0.6％的nh4no3無水乙醇溶液中，于70℃下冷凝回流反應(yīng)24h，以去除制孔劑，再用磁鐵分離所得產(chǎn)物，之后反復(fù)洗滌，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2&msio2；

24、c，將丙烯酰化β-環(huán)糊精接枝到b分步驟制備所得物：取0.328份aa-β-cd溶解于10.01份有機(jī)溶劑中，加入氫化鈉，在氮?dú)夥諊聰嚢?，再過濾掉未反應(yīng)的氫化鈉，得到4號(hào)溶液；將4號(hào)溶液置于90℃下，攪拌添加0.124份3-縮水甘油醚氧基丙基三甲氧基硅烷，添加完成后，在氮?dú)夥諊吕^續(xù)攪拌5h，再加入0.423份fe3o4&sio2&msio2，于120℃下冷凝回流反應(yīng)20h，之后用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再充分洗滌，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd；

25、d，c分步驟制備所得物與穿心蓮內(nèi)酯反應(yīng)形成包合物：取0.223份fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd超聲分散于30.267份超純水中，再加入35.112份穿心蓮內(nèi)酯，繼續(xù)超聲分散6h后置于0～12℃的冰箱中儲(chǔ)存12h，之后用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再反復(fù)洗滌，最后真空干燥，得到fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd/adr；

26、e，d分步驟制備所得物中的穿心蓮內(nèi)酯與功能單體通過非共價(jià)鍵結(jié)合：取0.08份fe3o4&sio2&msio2-aa-β-cd/adr超聲分散于17.235份甲醇中，再加入0.029份功能單體，功能單體為4-氨基-4'-甲基丙烯酰胺基偶氮苯，于室溫下反應(yīng)12h，使穿心蓮內(nèi)酯與功能單體充分預(yù)聚合；再加入0.446份二醇二甲基丙烯酸酯、0.13份n,n’-雙(丙烯酰)胱胺、0.062份偶氮二異丁腈、0.0012份溴化銅和0.002份五甲基二乙烯三胺，在氮?dú)夥諊兄糜?0℃下反應(yīng)24h，之后用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再充分洗滌，最后真空干燥，

27、得到未洗脫穿心蓮內(nèi)酯的adr-mmip；

28、f，洗脫e分步驟制備所得物中的穿心蓮內(nèi)酯得到粗載體adr-mmip：將未洗脫穿心蓮內(nèi)酯的adr-mmip用甲醇多次沖洗后，置于索氏提取器中，然后以體積分?jǐn)?shù)為70％的甲醇和體積分?jǐn)?shù)為30％的乙酸配置成的洗脫液反復(fù)洗脫穿心蓮內(nèi)酯，直至洗脫液中檢測(cè)不到穿心蓮內(nèi)酯為止，再以甲醇反復(fù)洗滌，

29、最后真空干燥，即得到粗載體，記為adr-mmip。

30、本發(fā)明更進(jìn)一步的技術(shù)方案是：s02步驟的各個(gè)分步驟詳細(xì)展開如下：

31、a，基于碘與粗載體的取代反應(yīng)制備adr/i-mmip；在燒瓶中加入4.732～6.874份二甲基甲酰胺、0.510～1.852份三苯基膦和1.529～2.584份碘，加熱到70℃時(shí)加入0.332～0.968份粗載體，在氮?dú)夥諊路磻?yīng)20h，然后加入1.5-4.6份的3mol/l的甲醇鈉溶液，得到2號(hào)混合液，將2號(hào)混合液置于0～5℃的冰浴中反應(yīng)20min，用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再反復(fù)洗滌，最后真空干燥，得到adr/i-mmip；

32、b，將adr/i-mmip中的活性基團(tuán)乙?；涸跓恐屑尤?.279～0.849份經(jīng)真空干燥的adr/i-mmip、2.28～4.573份乙酸酐、0.003～0.005份4-二甲氨基吡啶及3.590～4.734份吡啶，在氮?dú)夥諊?，室溫冷凝回流反?yīng)48h，得到5號(hào)溶液；將5號(hào)溶液倒入125.75～180.632份0～5℃的冰水中，之后用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再反復(fù)洗滌，最后真空干燥，得到活性基團(tuán)乙?；腶dr/i-mmip；

33、c，基于聚(2-乙基-2-惡唑啉)與活性基團(tuán)乙?；痑dr/i-mmip取代反應(yīng)制備藥物載體adr/peox-mmip：在燒瓶中加入0.052～0.194份活性基團(tuán)乙?；痑dr/i-mmip、2.5～4.2份2-乙基-2-惡唑啉和14.209～16.305份乙腈，在氮?dú)夥諊拢?0℃冷凝回流反應(yīng)72h，之后用磁鐵分離所得產(chǎn)物，再反復(fù)洗滌，最后真空干燥，得到穿心蓮內(nèi)酯分子印跡隱性藥物載體：adr/peox-mmip；反應(yīng)過程中，2-乙基-2-惡唑啉通過陽離子開環(huán)聚合得到親水性長鏈聚合物：聚(2-乙基-2-惡唑啉)。

34、本發(fā)明進(jìn)一步的技術(shù)方案是：s01和s02步驟中涉及的物料份數(shù)均為重量份。

35、本發(fā)明再進(jìn)一步的技術(shù)方案是：s01步驟b分步驟中的制孔劑為十六烷基三甲基溴化銨，s01步驟c分步驟中兩次提及的有機(jī)溶劑均為n,n-二甲基甲酰胺。

36、s02步驟中，涉及的物料份數(shù)均為重量份。

37、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：

38、1.其選用具有光/ph雙響應(yīng)特性的功能單體“4-氨基-4'-甲基丙烯酰胺基偶氮苯”和具有氧化還原響應(yīng)特性的交聯(lián)劑“n,n’-雙(丙烯酰)胱胺”，并運(yùn)用分子印跡技術(shù)及反向原子轉(zhuǎn)移自由基聚合法，制備具有ph/氧化還原/光響應(yīng)的粗載體；粗載體上引入聚(2-乙基-2-惡唑啉)，制備得到隱性穿心蓮內(nèi)酯印跡的聚(2-乙基-2-惡唑啉)藥物載體adr/peox-mmip。

39、2.隱性穿心蓮內(nèi)酯印跡的聚(2-乙基-2-惡唑啉)藥物載體adr/peox-mmip相比傳統(tǒng)的穿心蓮內(nèi)酯藥物制劑具有穩(wěn)定性好、載藥量大、精準(zhǔn)釋放及毒性低等特點(diǎn)。

40、3.藥物載體(adr/peox-mmip)中引入的隱性材料聚(2-乙基-2-惡唑啉)，使藥物載體能抑制巨噬細(xì)胞攝取，從而增加穿心蓮內(nèi)酯在血液中的循環(huán)時(shí)間，提升了治療效果。

41、以下結(jié)合圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。