本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種人面果提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

人面子(學(xué)名：dracontomelonduperreanumpierre)，別名：人面樹，銀蓮果，為漆樹科。人面子屬常綠大喬木植物，高達(dá)20余米。喜陽光充足及高溫多濕環(huán)境，適深厚肥沃的酸性土生長。該種樹冠寬廣濃綠，甚為美觀，是“四旁”和庭園綠化的優(yōu)良樹種，也適合作行道樹。成熟的鮮果呈黃色，可以生食，酸甜可口，有健胃、生津止渴和促進(jìn)食欲之功能，制作高級飲料、高級晶品和保健食品的上乘原料。人面果還是藥用植物，其果實、根皮、葉均可入藥，有清熱解毒，消腫止痛，活血散淤之效，常用于跌打損歷，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等癥。

現(xiàn)有研究表明人面果富含黃酮類、三萜類和口山酮類(xanthone)等多種抗氧化及抗糖尿病活性成分。然而相關(guān)的研究資料還很少，分離純化的技術(shù)也大都依賴于反相硅膠柱層析以及半制備或制備液相等特別昂貴的設(shè)備來完成，不僅造成無法負(fù)擔(dān)的成本，而且所處理的樣品量極小，僅適合于研究水平，無法進(jìn)行實際的生產(chǎn)開發(fā)應(yīng)用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：為克服現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明提供了一種人面果提取物及其制備方法和應(yīng)用，通過不同的溶劑處理人面果提取液，再分別通過大孔吸附樹脂以及聚酰胺技術(shù)對不同組份的提取液進(jìn)行純化處理，從而得到含量高的人面果總黃酮成分、人面果總萜類以及人面果總口山酮類成分。

技術(shù)方案：一種人面果提取物的制備方法，包括：

(1)將人面果置于醇中進(jìn)行提取，提取結(jié)束后，過濾提取液，濾液濃縮后得人面果醇提物；

(2)用水溶解所述的人面果醇提物，然后用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，將乙酸乙酯層濃縮至浸膏，將水層用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，正丁醇層濃縮至浸膏；

(3)取乙酸乙酯層的浸膏，溶解后用型號為ab-8、hp-20、hpd-826或lx-2000的大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，然后依次用水、15～30％乙醇以及40～60％乙醇進(jìn)行洗脫，收集40～60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，得到人面果總萜類粉；

取正丁醇層的浸膏，溶解后用型號為ab-8、hp-20、hpd-826或lx-2000的大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，然后依次用10～30％乙醇、40～60％乙醇及70～80％乙醇進(jìn)行洗脫，收集40～60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，得人面果總黃酮類粉；收集70～80％乙醇部分洗脫液，濃縮至稀醇味，加入到裝有聚酰胺的層析柱內(nèi)，依次用10-30％及40-60％乙醇進(jìn)行洗脫，得到40-60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，得到人面果總口山酮類粉。

步驟(1)中，所述的醇為乙醇，濃度為90～100％，優(yōu)選為90～95％。

所述提取的溫度為60～80℃，提取的次數(shù)為2～4次，每次提取的時間為1～2h。優(yōu)選的，所述提取的溫度為70～80℃，提取的次數(shù)為2～3次。

所述提取的液料比為5～10:1，優(yōu)選為8～10：1。

步驟(2)中，用水溶解所述的人面果醇提物時，人面果醇提物與水的質(zhì)量體積比為1:30～50。

所述乙酸乙酯萃取的次數(shù)為2～4次，每次用量為0.1～1倍量體積比。優(yōu)選的，所述乙酸乙酯萃取的次數(shù)為2～3次，每次用量為0.2～0.3倍量體積比。

所述水飽和正丁醇萃取的次數(shù)為2～4次，每次用量為0.1～1倍量體積比。優(yōu)選的，所述水飽和正丁醇萃取的次數(shù)為2～3次，每次用量為0.2～0.3倍量體積比。

步驟(3)中，乙酸乙酯層的浸膏溶解時，可加入20～50倍量水溶解，再補(bǔ)加少量乙醇以使溶液澄清。

用樹脂對所述乙酸乙酯層吸附后，較好的依次用水、20～30％乙醇以及50～60％乙醇進(jìn)行洗脫，收集50～60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，得到人面果總萜類粗粉。

正丁醇層的浸膏溶解時，可入20～50倍體積量5～20％乙醇使其解。

用樹脂對正丁醇層吸附后，較好的用20～30％乙醇、50～60％乙醇及70～80％乙醇進(jìn)行洗脫，收集50～60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，得人面果總黃酮類粗粉。

所述聚酰胺的細(xì)度為100-200目。

取正丁醇浸膏用大孔吸附樹脂吸附后洗脫所得70～80％乙醇部分洗脫液，過層析柱后，較好的用20～30％及50～60％乙醇進(jìn)行洗脫，得到50～60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，得到人面果總口山酮類粗粉。

本發(fā)明還提供了所述制備方法制備得到的人面果提取物。所述的人面果提取物共三種，分別為人面果總萜類粉(總萜含量為75～85％)、人面果總黃酮類粉(總黃酮含量為80～90％)、人面果總口山酮類粉(總口山酮類含量為90～95％)。

本發(fā)明還提供了所述人面果提取物在制備藥物中的應(yīng)用。

現(xiàn)有技術(shù)研究表明，人面果中的萜類、黃酮類、口山酮類物質(zhì)均具有較好的抗菌抗病毒、抗氧化作用以及降糖作用，可用于心腦血管疾病以及糖尿病等相關(guān)疾病的防治，也可用于化妝品用于美白祛斑，因此，可利用本發(fā)明所述的人面果提取物制備相關(guān)藥物。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

①本發(fā)明所述的制備方法，工藝簡單，效果顯著，適合于工藝化生產(chǎn)要求。

②本發(fā)明所述的制備方法，所用溶劑毒性小，均為正常生產(chǎn)中所涉及溶劑，對人體安全性好，而且易于回收再利用，經(jīng)濟(jì)效益高。

③本發(fā)明所述的制備方法，提取后，通過各不同萃取溶劑將各主要部分按特定順序分別萃取出來，再通過不同填料以層析方式進(jìn)行分別洗脫和純化，可以同時制備得到三種含量高的人面果提取物成分，效率極高，對于人面果的開發(fā)和應(yīng)用打下了堅實的基礎(chǔ)。本發(fā)明實施后，藥材利用率大大提高，其相關(guān)產(chǎn)品上市后會因其確切的療效、可控的質(zhì)量、低位的價格為消費者帶來福音。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實施例中總萜、總黃酮、總口山酮含量的測定方法：

測定方法：紫外分光光度法；

標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別以齊墩果酸和蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，在波長550nm和512nm處檢測吸收度值，以濃度為縱坐標(biāo)、以吸收度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，依次來測定供試品中相應(yīng)的總萜、總黃酮、總口山酮含量。

總萜、總黃酮、總口山酮的鑒定確認(rèn)采用常規(guī)方法，具體的，各部分所制備的樣品主要經(jīng)紫外吸收光譜及薄層色譜顯色以及參考相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行綜合鑒定：其中人面果總帖類部分在215-230nm波長范圍內(nèi)有最大吸收帶，總黃酮類、總口山酮部分在245-365nm波長范圍內(nèi)有兩個主要吸收帶，加入診斷試劑后導(dǎo)致光譜發(fā)生改變；薄層色譜法在特定展開劑及顯色劑體系下，總萜、總黃酮、總口山酮樣品tlc得到的rf值與標(biāo)準(zhǔn)品相對應(yīng)。

實施例1：

稱取人面果10kg，以95％乙醇80l為提取溶劑，70℃回流提取3次，每次1h，合并提取液，過濾，減壓濃縮，得到人面果醇提物。取上述人面果醇提物，按1:50的質(zhì)量體積比，加入飲用水使溶解，用乙酸乙酯充分萃取3次，每次乙酸乙酯用量為0.2倍量體積比，合并乙酸乙酯層并濃縮至浸膏；水層加入水飽和正丁醇萃取3次，每次水飽和正丁醇用量為0.2倍量體積比，合并正丁醇層并濃縮至浸膏。取上述乙酸乙酯部分浸膏，加入20倍質(zhì)量飲用水低溫(室溫)使溶解，補(bǔ)加少量乙醇以使溶液澄清，放冷(室溫)后逐漸加入到處理好的裝有型號為ab-8大孔吸附樹脂的樹脂柱內(nèi)，待吸附完全后開始洗脫，依次用水、20％乙醇以及50％乙醇開始洗脫，收集50％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總萜類粗粉，以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總萜含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為83.6％。

取所得正丁醇部分浸膏，加入20倍體積量5％乙醇使溶解，逐漸加入到處理好的裝有型號為hpd-826大孔吸附樹脂的樹脂柱內(nèi)，待吸附完全后開始洗脫，依次用20％乙醇、50％乙醇及70％乙醇開始洗脫，收集50％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總黃酮類粗粉，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總黃酮含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為86.2％。

取正丁醇浸膏用大孔吸附樹脂吸附后所洗脫得到的70％乙醇部分洗脫液，濃縮至稀醇味，放冷后加入到裝有聚酰胺(100-200目)的層析柱內(nèi)，依次用20％及50％乙醇進(jìn)行洗脫，得到50％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總口山酮類粗粉，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總口山酮類含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為90.2％。

實施例2

稱取人面果10kg，以90％乙醇100l為提取溶劑，70℃回流提取3次，每次1h，合并提取液，過濾，減壓濃縮，得到人面果醇提物。取上述人面果醇提物，按1:50的質(zhì)量體積比，加入飲用水使溶解，用乙酸乙酯充分萃取3次，每次乙酸乙酯用量為0.2倍量體積比，合并乙酸乙酯層并濃縮至浸膏；水層加入水飽和正丁醇萃取3次，每次水飽和正丁醇用量為0.2倍量體積比，合并正丁醇層并濃縮至浸膏。取上述乙酸乙酯部分浸膏，加入20倍質(zhì)量飲用水室溫下使溶解，補(bǔ)加少量乙醇以使溶液澄清，放冷至室溫后逐漸加入到處理好的裝有型號為hp-20大孔吸附樹脂的樹脂柱內(nèi)，待吸附完全后開始洗脫，依次用水、15％乙醇以及60％乙醇開始洗脫，收集60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總萜類粗粉，以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總萜含量為78.2％。

取所得正丁醇部分浸膏，加入20倍體積量5％乙醇使溶解，逐漸加入到處理好的裝有型號為hpd-20大孔吸附樹脂的樹脂柱內(nèi)，待吸附完全后開始洗脫，依次用20％乙醇、60％乙醇及80％乙醇開始洗脫，收集60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總黃酮類粗粉，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總黃酮含量為84.1％。

取正丁醇浸膏用大孔吸附樹脂吸附后所洗脫得到的80％乙醇部分洗脫液，濃縮至稀醇味，放冷后加入到裝有聚酰胺(100-200目)的層析柱內(nèi)，依次用20％及50％乙醇進(jìn)行洗脫，得到50％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總口山酮類粗粉，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總口山酮類含量為92.4％。

實施例3

稱取人面果10kg，以90％乙醇100l為提取溶劑，80℃回流提取3次，每次1h，合并提取液，過濾，減壓濃縮，得到人面果醇提物。取上述人面果醇提物，按1:50的質(zhì)量體積比，加入飲用水使溶解，用乙酸乙酯充分萃取3次，每次乙酸乙酯用量為0.3倍量體積比，合并乙酸乙酯層并濃縮至浸膏；水層加入水飽和正丁醇萃取3次，每次水飽和正丁醇用量為0.3倍量體積比，合并正丁醇層并濃縮至浸膏。取上述乙酸乙酯部分浸膏，加入20倍質(zhì)量飲用水室溫下使溶解，補(bǔ)加少量乙醇以使溶液澄清，放冷至室溫后逐漸加入到處理好的裝有型號為hp-826大孔吸附樹脂的樹脂柱內(nèi)，待吸附完全后開始洗脫，依次用水、30％乙醇以及50％乙醇開始洗脫，收集50％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總萜類粗粉，以齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總萜含量為83.3％。

取所得正丁醇部分浸膏，加入20倍體積量5％乙醇使溶解，逐漸加入到處理好的裝有型號為hpd-20大孔吸附樹脂的樹脂柱內(nèi)，待吸附完全后開始洗脫，依次用10％乙醇、60％乙醇及70％乙醇開始洗脫，收集60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總黃酮類粗粉，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總黃酮含量為82.7％。

取正丁醇浸膏用大孔吸附樹脂吸附后所洗脫得到的70％乙醇部分洗脫液，濃縮至稀醇味，放冷后加入到裝有聚酰胺(100-200目)的層析柱內(nèi)，依次用20％及60％乙醇進(jìn)行洗脫，得到60％乙醇部分洗脫液，濃縮至干，粉碎，即得到淡黃色人面果總口山酮類粗粉，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測得總口山酮類含量為91.1％。