本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及茜草活性成分及其組合物、應用。

背景技術(shù)：

目前，臨床上的解熱藥物主要包括非甾體類抗炎藥和類固醇解熱藥。前者包括如水楊酸類、苯胺類、P比哩酮類以及其他抗炎有機酸類，這些藥物共同的作用機制是通過抑制環(huán)氧化酶，減少前列腺素(prostaglandin,PG)合成，使體溫調(diào)節(jié)中樞的SP恢復正常而產(chǎn)生解熱作用，但是這些藥物同時抑制了胃粘膜PG的合成，增加了胃酸分泌，削弱了屏障作用，導致胃腸道的不良反應，甚至引起胃粘膜損傷嚴重出現(xiàn)胃、十二指腸出血和潰病。傳統(tǒng)中藥由于其成分多，可能涉及多作用靶點發(fā)揮解熱作用，且研究表明其降溫作用穩(wěn)定而持久。臨床上，中藥的解熱抗炎藥物大多為復方，由于其成分復雜，很難闡明其物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制，所以，從具有解熱藥效的單一藥材入手，闡明其發(fā)揮作用的部位，進而尋找有效的成分，為開發(fā)成分明確、質(zhì)量可控、安全有效的解熱抗炎藥物具有重要的意義，為臨床用藥提供更廣泛的選擇。

茜草為茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)的干燥根和根莖。茜草多年生攀援草本，根數(shù)條至數(shù)十條叢生，外皮紫紅色或橙紅色，葉四片輪生，具長柄，葉片形狀變化較大，卵形、三角狀卵形、寬卵形至窄卵形，漿果球形，紅色后轉(zhuǎn)為黑色，花期6-9月，果期8-10月。生于山坡路旁、溝沿、田邊、灌叢及林緣，春、秋季采挖。茜草主產(chǎn)于安徽、江蘇、山東、河南、山西等地。具有行血、止血、通經(jīng)活絡(luò)、止咳祛痰、抗風濕作用。

茜草的化學成分以蒽醌及其苷類化合物為主，包括羥基茜草素、大葉茜草素、茜草素、異茜草素等。此外還含有萘醌類、萜類、己肽類、多糖類等其他化學成分。

已有文獻報道茜草的醇提取物具有較強的解熱鎮(zhèn)痛作用及抗炎作用活性(劉成立，許蘭芝，陳維寧，高爾，張薇.茜草醇提物的解熱鎮(zhèn)痛作用[J].濰坊醫(yī)學院學報，2002,24(1):4-5.)，同時也有文獻報道茜草總蒽醌具有抗炎抗風濕作用及抗炎免疫作用(馮秀香，許蘭芝，高爾，陳維寧.茜草總蒽醌的解熱鎮(zhèn)痛作用[J].濰坊醫(yī)學院學報，2002,24(1):6-7.)，但是沒有確定發(fā)揮作用的活性成分。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供茜草活性成分及其組合物、應用。該茜草活性成分組合物成分明確、質(zhì)量可控、療效確切。該茜草活性成分及組合物具有解熱抗炎活性，可以制備制備治療發(fā)熱、炎癥的藥物。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了羥基茜草素和/或大葉茜草素在制備前列腺素E2(PGE2)的抑制劑中的應用。

本發(fā)明還提供了羥基茜草素和/或大葉茜草素在制備預防和/或治療抗炎的藥物中的應用。

本發(fā)明還提供了羥基茜草素和/或大葉茜草素在制備預防和/或治療解熱的藥物中的應用。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述羥基茜草素和/或大葉茜草素的有效劑量為3.094～12.375μg/(0.4×10⁵個cell/mL)。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述羥基茜草素和/或大葉茜草素的有效劑量為20～80mg/kg。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述羥基茜草素與所述大葉茜草素的質(zhì)量比為1:(0.5～5)。

本發(fā)明還提供了一種茜草活性成分組合物，該組合物含有羥基茜草素和大葉茜草素，且兩個活性成分質(zhì)量總和＞90％，該組合物中羥基茜草素和大葉茜草素的重量比值為1:(0.5～5)。

本發(fā)明還提供了所述的茜草活性成分組合物的制備方法，包括如下步驟：

步驟1：取茜草經(jīng)乙醇提取獲得稀浸膏；

步驟2：將步驟1制得的所述稀浸膏經(jīng)有機溶劑萃取，收集萃取液，減壓回收有機溶劑、干燥，獲得浸膏；

步驟3：將步驟2制得的所述浸膏經(jīng)柱色譜分離，以二氯甲烷和甲醇的混合溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，經(jīng)HPLC檢測，分別收集羥基茜草素和大葉茜草素流份，分別獲得羥基茜草素和大葉茜草素；

步驟4：將步驟3制得的羥基茜草素和大葉茜草素混合，得茜草活性成分組合物。

作為優(yōu)選，步驟1中乙醇的體積濃度為60％～95％。

作為優(yōu)選，步驟2中所述有機溶劑為乙酸乙酯。

作為優(yōu)選，步驟3中所述二氯甲烷和甲醇的混合溶劑中二氯甲烷和甲醇的體積比為1:(0.5～2)。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述HPLC檢測色譜條件為：Zorbax Eclipse plus C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動相為0.2％的磷酸水(A)-乙腈(B)，梯度洗脫：0-30min，55％-85％乙腈；30-32min，85％-100％乙腈；32-35min，100％乙腈；流速1.0ml·min^-1；進樣量10ul，檢測波長276nm；柱溫30℃。

本發(fā)明還提供了一種中藥制劑，由所述的茜草活性成分組合物或所述的制備方法制得的茜草活性成分組合物與藥學上可接受的載體制成。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述中藥制劑的劑型包括注射劑、片劑、栓劑、軟膏劑、凝膠劑、丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑和合劑。

本發(fā)明通過體外抗炎實驗表明，該茜草活性成分組合物在25.00μg/ml時，對小鼠巨噬細胞的抑制率分別為96.38％，顯著抑制前列腺素(prostaglandin,PGE2)的活性，顯示出較強的抗炎作用。

通過體內(nèi)解熱實驗研究表明，茜草活性成分組合物在40mg/kg時，對內(nèi)毒素致發(fā)熱家兔有一定的解熱作用，茜草活性成分組合物可以顯著降低內(nèi)毒素致發(fā)熱家兔生物體溫，顯示出較強的解熱作用。

該茜草活性成分組合物成分明確、質(zhì)量可控、療效確切。該茜草活性成分及組合物具有解熱抗炎活性，可以制備治療發(fā)熱、炎癥的藥物。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

圖1示本發(fā)明實施例5中羥基茜草素標準品HPLC檢測圖譜；

圖2示本發(fā)明實施例5中羥基茜草素含量測定的的HPLC檢測圖譜；

圖3示本發(fā)明實施例5中大葉茜草素標準品HPLC檢測圖譜；

圖4示本發(fā)明實施例5中大葉茜草素含量測定的HPLC檢測圖譜；

圖5示本發(fā)明實施例6中羥基茜草素含量測定的的HPLC檢測圖譜；

圖6示為本發(fā)明實施例6中大葉茜草素含量測定的HPLC檢測圖譜；

圖7示本發(fā)明實施例7中羥基茜草素含量測定的的HPLC檢測圖譜；

圖8示本發(fā)明實施例7中大葉茜草素含量測定的HPLC檢測圖譜；

具體實施方式

本發(fā)明公開了茜草活性成分及其組合物、應用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術(shù)。

本發(fā)明提供一種茜草活性成分組合物，該組合物含有羥基茜草素和大葉茜草素，且兩個活性成分重量總含大于90％，該組合物中羥基茜草素和大葉茜草素的重量比值為1:0.5-5。

本發(fā)明還提供上述茜草活性成分組合物的制備方法，包括下列步驟：

步驟a：將茜草用乙醇提取得稀浸膏。

步驟b：將步驟a得到的稀浸膏用第一有機溶劑萃取，合并萃取液，減壓回收有機溶劑，干燥，即得浸膏；

步驟c：步驟b中得到的浸膏進行柱色譜分離，以二氯甲烷、甲醇混合溶劑進行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，經(jīng)HPLC檢測，合并流份得羥基茜草素和大葉茜草素；

步驟d：將步驟c制得的羥基茜草素和大葉茜草素按照一定重量比混合，得茜草活性成分組合物。本發(fā)明還提供了茜草活性成分組合物在制備治療抗炎解熱的藥物中的應用。

本發(fā)明還提供了茜草活性成分組合物在制備治療抗炎解熱的藥物中的應用。

本發(fā)明還提供了一種中藥制劑，由所述茜草活性成分組合物與藥學上可接受的輔料制成。

本發(fā)明以茜草藥材為原料，所述茜草藥材可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的茜草藥材，本發(fā)明對其來源并無特殊限制。

本發(fā)明首先用乙醇對茜草藥材進行加熱回流提取，過濾后濾液濃縮回收乙醇得稀浸膏。本發(fā)明中，所述乙醇優(yōu)選為60％-90％乙醇(體積分數(shù))，更優(yōu)選為70％-85％乙醇；所述茜草藥材重量與乙醇體積的比例，以g/mL計，優(yōu)選為1:(5-10)，更優(yōu)選為1:(7-9)所述回流提取優(yōu)選進行2～3次。

本發(fā)明對上述濃縮的方法并無特殊限定，可以為本領(lǐng)域公知的濃縮方法，本發(fā)明優(yōu)選采用減壓的方法進行濃縮，除去溶劑得到稀浸膏。

得到稀浸膏后，然后用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得浸膏；本發(fā)明中，所述稀浸膏重量與乙酸乙酯的體積比，以g/mL計，優(yōu)選為1：(5-15)，所述萃取的次數(shù)優(yōu)選為3～4次。

然后，將得到的浸膏進行柱色譜分離，本發(fā)明優(yōu)選采用硅膠柱，以二氯甲烷、甲醇混合溶劑進行洗脫，所述二氯甲烷、甲醇的體積比為1：(0.5-2)，收集洗脫液。

優(yōu)選的，所述步驟d中所述重量比為1:0.5～5。

通過本發(fā)明實施例可知，本發(fā)明所述的組合物具有抗炎解熱活性。

本發(fā)明還提供了一種中藥制劑，由所述茜草活性成分組合物與藥學上可接受的載體制成。

優(yōu)選的，所述中藥制劑的劑型包括注射劑、片劑、栓劑、軟膏劑、凝膠劑、丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑和合劑。

在本發(fā)明中，所述藥學上可接受的載體可根據(jù)藥劑學領(lǐng)域的常用輔料，根據(jù)劑型和實際情況進行恰當選擇，例如常用的輔料有淀粉、低取代羥丙基纖維素、微粉硅膠、硬脂酸鎂、淀粉漿、蔗糖、糊精、羧甲基淀粉鈉、滑石粉、聚山梨酯、聚乙二醇、注射用大豆磷脂和注射用甘油等。

本發(fā)明通過體外抗炎實驗表明，該茜草活性成分組合物在25.00μg/ml時，對小鼠巨噬細胞的抑制率分別為96.38％，顯著抑制前列腺素(prostaglandin,PGE2)的活性，顯示出較強的抗炎作用。

通過體內(nèi)解熱實驗研究表明，茜草活性成分組合物在40mg/kg時，對內(nèi)毒素致發(fā)熱家兔有一定的解熱作用，茜草活性成分組合物可以顯著降低內(nèi)毒素致發(fā)熱家兔生物體溫，顯示出較強的解熱作用。

本發(fā)明提供的茜草活性成分及其組合物、應用中所用原料及試劑均可由市場購得。

下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明：

實施例1提取物浸膏的制備

取茜草科植物茜草的干燥根或根莖5kg，加5倍量的85％乙醇加熱回流提取3次，每次2h。合并乙醇回流提取液，過濾后濾液濃縮回收乙醇得到浸膏625.3g。

實施例2提取物浸膏的制備

取茜草科植物茜草的干燥根或根莖5kg，加7倍量的70％乙醇加熱回流提取2次，每次2h。合并乙醇回流提取液，過濾后濾液濃縮回收乙醇得到浸膏611.4g。

實施例3提取物浸膏的制備

取茜草科植物茜草的干燥根或根莖5kg，加9倍量的90％乙醇加熱回流提取3次，每次2h。合并乙醇回流提取液，過濾后濾液濃縮回收乙醇得到浸膏619.7g。

實施例4提取物浸膏的制備

取茜草科植物茜草的干燥根或根莖5kg，加10倍量的60％乙醇加熱回流提取3次，每次2h。合并乙醇回流提取液，過濾后濾液濃縮回收乙醇得到浸膏613.3g。

實施例5羥基茜草素和大葉茜草素的制備

稱取實施例1浸膏100g，加10倍量的乙酸乙酯振搖萃取4次，合并萃取液，回收乙酸乙酯得浸膏28.91g，上硅膠柱(50g)以二氯甲烷-甲醇(1:1)洗脫，100ml為一個流份，以HPLC檢測，收集第45～96號流份，減壓回收洗脫劑，得紅色粉末1.217g，鑒定為羥基茜草素，純度為95.18％(圖1-2)；以HPLC檢測，收集第108-164號流份，減壓回收洗脫劑，得淡黃色結(jié)晶0.941g，鑒定為大葉茜草素，純度為98.26％(圖3-4)。

實施例6羥基茜草素和大葉茜草素的制備

稱取實施例2浸膏100g，加5倍量的乙酸乙酯振搖萃取3次，合并萃取液，回收乙酸乙酯得浸膏29.54g，上硅膠柱(50g)以二氯甲烷-甲醇(1:2)洗脫，100ml為一個流份，以HPLC檢測，收集第34～75號流份，減壓回收洗脫劑，得紅色粉末1.185g，按照下述純度測定方法，鑒定為羥基茜草素，純度為95.72％(圖5，標準品譜圖見圖1)；以HPLC檢測，收集第94～149號流份，減壓回收洗脫劑，得淡黃色結(jié)晶1.045g，按照下述純度測定方法，鑒定為大葉茜草素，純度為98.30％(圖6，標準品譜圖見圖2)。

實施例7大葉茜草素和羥基茜草素的制備

稱取實施例2浸膏100g，加15倍量的乙酸乙酯振搖萃取3次，合并萃取液，回收乙酸乙酯得浸膏29.54g，上硅膠柱(50g)以二氯甲烷-甲醇(1:0.5)洗脫，100ml為一個流份，以HPLC檢測，收集第58～97號流份，減壓回收洗脫劑，得紅色粉末1.247g，按照下述純度測定方法，鑒定為羥基茜草素，純度為96.81％(圖7，標準品譜圖見圖1)；以HPLC檢測，收集第94～149號流份，減壓回收洗脫劑，得淡黃色結(jié)晶1.124g，按照下述純度測定方法，鑒定為大葉茜草素，純度為98.18％(圖8，標準品譜圖見圖2)。

實施例8茜草活性成分組合物制備

將實施例5制得的獲得的大葉茜草素和羥基茜草素按照1:1混合，得到茜草提取組合物，大葉茜草素和羥基茜草素質(zhì)量總和為96.31％。

實施例9茜草活性成分組合物制備

將實施例5制得的獲得的大葉茜草素和羥基茜草素按照1:0.5混合，得到茜草提取組合物，大葉茜草素和羥基茜草素質(zhì)量總和為96.61％。

實施例10茜草活性成分組合物制備

將實施例6制得的獲得的大葉茜草素和羥基茜草素按照1:3混合，得到茜草提取組合物，大葉茜草素和羥基茜草素質(zhì)量總和為95.87％。。

實施例11茜草活性成分組合物制備

將實施例7制得的獲得的大葉茜草素和羥基茜草素按照1:5混合，得到茜草提取組合物，大葉茜草素和羥基茜草素質(zhì)量總和為96.83％。。

實施例12本發(fā)明的純度測定研究方法

1.儀器與試劑

Agilent1100HPLC，美國安捷倫公司，包括在線脫氣機，四元泵，高性能自動進樣器，柱溫箱，二極管陣列檢測器；METTLER XS205微量分析天平(南京皓海科學儀器儀表有限公司)；甲醇，磷酸均為色譜純，重蒸水自制。

2.色譜條件

Zorbax Eclipse plus C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動相為0.2％的磷酸水(A)-乙腈(B)，梯度洗脫：0-30min，55％-85％乙腈；30-32min，85％-100％乙腈；32-35min，100％乙腈；流速1.0ml·min^-1；進樣量10ul，檢測波長276nm；柱溫30℃。

3.供試品溶液的制備

取待測成分適量，精密稱定，加甲醇制成每ml含2mg的溶液。

4.純度測定方法

采用HPLC面積歸一化法測定待測成分的純度：在上述測定條件下，精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測量待測成分色譜峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算待測成分色譜峰面積占總峰面積的百分率。

實施例13片劑

取實施例5制備的茜草活性成分組合物12.2g，研成細粉，加入10％淀粉糊約8g，藥用淀粉7g，微粉硅膠0.8g，混合，14目篩制粒，于80℃干燥，整粒，加入硬脂酸鎂0.05g，混勻，壓制成100片，即得。每片重0.2g，口服，每次1片，一日三次。

實施例14硬膠囊

取實施例6制備的茜草活性成分組合物16g，研成細粉，藥用淀粉3.5g，硬脂酸鎂0.01g，混合均勻，過篩，裝入膠囊，制成100粒，即得。每粒內(nèi)容物重0.2g，口服，每次1粒，一日兩次。

實施例15軟膠囊

取實施例7制備的茜草活性成分組合物12.2g，加入丙二醇0.2g，卵磷脂0.9g，大豆油18g，振動磨超微20分鐘，使混勻，制成軟膠囊100粒，即得。每粒內(nèi)容物重0.3g，口服，每次1粒，一日三次。

實施例16顆粒劑

取實施例8制備的茜草活性成分組合物13.8g，研成細粉，加入糊精25g，乳糖458g，混合均勻，制粒，于80℃干燥，整粒，分裝，制100包，即得。每包重5g，口服，每次1包，一日兩次。

實施例17緩釋片

取實施例5制備的茜草活性成分組合物24.4g，研成細粉，過100目篩，HPMC10.3g，乳糖16g，十二烷基硫酸鈉1g，過100目篩，混合均勻，加入2％聚維酮(95％乙醇)黏合劑制軟材，過20目篩制粒，于50℃干燥，過18目篩整粒，干顆粒采用外加法加入2％硬脂酸鎂，混勻，壓片，制成緩釋片100片，即得。每片重0.5g?？诜?，每次1片，一日一次。

實施例18滴丸

取實施例6制備的茜草活性成分組合物12.2g，研成細粉，另取24.8g聚乙二醇4000加熱熔融，加入水翁花提取物，振動磨超微20分鐘，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。每丸重0.35g，口服，每次1粒，一日三次。

實施例19注射劑

取實施例7制備的茜草活性成分組合物12.2g，研成細粉，加入β環(huán)糊精4.5g，蔗糖500g，純水適量(約390g)攪拌加熱溶解，煮沸10分鐘，稍冷后加入10％(W/V)尼泊金乙酯乙醇溶液攪勻，用水調(diào)整至100ml，過濾，分裝，滅菌，即得。每支10ml?？诜?，每次1支，一日三次。

實施例20藥效實驗部分

實驗一：茜草活性成分組合物體外抗炎活性

1.實驗材料

羥基茜草素和大葉茜草素(根據(jù)實施例5的方法制備)

茜草活性成分組合物(根據(jù)實施例8的方法制備)

細胞株：小鼠巨噬細胞系RAW 264.7，來源于中醫(yī)科學院，由委托方江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司提供。

DMEM/HIGH GLUCOSE細胞培養(yǎng)基，HyClone，批號：NAH1441

胎牛血清，GEMINI,批號：A79E00G

二甲基亞砜，阿拉丁，批號：40399

胰酶細胞消化液(0.25％Trypsin-EDTA)，Gibco，批號：1697785

前列腺素E2(PGE2)ELISA檢測試劑盒,Enzo Life Sciences,批號：06241415D

2、實驗儀器：

Thermo Scientific BB15型CO2細胞培養(yǎng)箱，美國熱電

Nikon TS100型倒置顯微鏡

超凈工作臺，AIRTECH，型號：A10051560

ZW—A型微量振蕩器，常州國華儀器有限公司

Therom VarioSkan Flash多功能讀數(shù)儀

移液器，Therom公司

離心機，湘儀，型號：L530

3、試驗方法

用Hank’s液將實施例5制備的羥基茜草素、大葉茜草素；實施例8制備的茜草活性成分組合物配制成濃度分別為25.00ug/ml的藥液。將細胞以0.25％胰酶(含0.02％EDTA)消化，含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度為1×10⁵個/ml，均勻接種至24孔板，每孔400μl，種板后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。在96孔細胞培養(yǎng)板的小鼠巨噬細胞系RAW 264.7單層細胞中，分別加入不同質(zhì)量濃度的復方金蓮花提取物，置37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96h，觀察細胞病變。培養(yǎng)24小時后，取出24孔板，吸去上清液，加入無血清的DMEM培養(yǎng)基配制的含藥培養(yǎng)基，分為以下幾組：

1組：空白對照組：每孔加入495μl無血清的DMEM培養(yǎng)基；

2組：溶媒組：每孔加入495μl含千分之一DMSO的無血清DMEM培養(yǎng)基；

3組：模型組：每孔加入495μl無血清的DMEM培養(yǎng)基；

4組:羥基茜草素組：每孔加495μl含6.25ug/ml、12.50ug/ml、25ug/ml羥基茜草素的培養(yǎng)基；

5組:大葉茜草素組：每孔加495μl含6.25ug/ml、12.50ug/ml、25ug/ml大葉茜草素的培養(yǎng)基；

6組:茜草活性成分組合物：每孔加495μl含6.25ug/ml、12.50ug/ml、25ug/ml組合物的培養(yǎng)基；

同時設(shè)6個復孔，加藥完畢后將24孔板放入CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)1小時。1小時后，除空白對照和溶劑對照組外，其余每孔加入5μl的100μg/ml的LPS(終濃度為1μg/ml)，溶劑對照組每孔加入5μl的無血清的DMEM培養(yǎng)基，加藥完畢后將24孔板放入CO₂細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)18小時。18小時后收集細胞培養(yǎng)液，按試劑盒說明，用ELISA法檢測細胞上清中PGE2的含量。

3、實驗結(jié)果

所有計量資料采用x±s表示，采用下列公式計算抑制率：

表1茜草活性成分及組合物對小鼠巨噬細胞系RAW 264.7細胞上清PGE2的影響(x±s，n＝6)

各組細胞病變?nèi)绫?所示，結(jié)果表明，實施例5制備的羥基茜草素、大葉茜草素以及實施例8制備的茜草活性成分組合物分別在25.00μg/ml時，對小鼠巨噬細胞的抑制率分別為82.33％、74.81％及96.38％，茜草活性成分組合物的作用強于單個化合物，茜草活性成分組合物可以顯著抑制PGE2的活性，顯示出較強的抗炎作用。

取實施例6至7制備的羥基茜草素、大葉茜草素進行上述實驗，實驗結(jié)果與實施例5制備的羥基茜草素、大葉茜草素的結(jié)果相近，與實施例5制備的羥基茜草素、大葉茜草素的結(jié)果無顯著差異(P＞0.05)。

取實施例9～11制備的茜草活性成分組合物進行上述實驗，實驗結(jié)果分別與以及實施例8制備的茜草活性成分組合物的結(jié)果相近，與實施例8制備的茜草活性成分組合物的結(jié)果無顯著差異(P＞0.05)。

實驗二 茜草活性成分組合物體內(nèi)解熱實驗研究

1、實驗材料

羥基茜草素和大葉茜草素(根據(jù)實施例5的方法制備)

茜草活性組合物(根據(jù)實施例8的方法制備)

對乙酰氨基酚片，由昆明振業(yè)制藥廠有限公司提供，批號：20140901

內(nèi)毒素：10mg/瓶，由sigma公司提供，批號：044M4004V。

健康新西蘭白兔，50只，雄性，體重2.0±0.2kg，清潔級，江蘇省南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供，合格證號：201511853。

2、實驗儀器

智能熱原儀，ZRY-2D，天津市天大天發(fā)科技有限公司。

3、實驗方法

取健康新西蘭家兔50只，每日適應性測肛溫1次，連續(xù)2天，于第3天進行實驗，先進行預選兔，持續(xù)監(jiān)測每只家兔體溫變化，15min測一次，連續(xù)測四次，取平均體溫作為基礎(chǔ)體溫，選取體溫在38.0-39.5℃之間的家兔，且體溫波動在0.4℃之內(nèi)的家兔進行正式試驗，選取體溫合格的家兔，耳緣靜脈注射0.25ug/ml的內(nèi)毒素生理鹽水溶液，注射體積1ml/kg；注射后持續(xù)監(jiān)測家兔體溫，注射內(nèi)毒素90min內(nèi)，體溫上升超過基礎(chǔ)體溫1.0℃的家兔，即為造模成功。

所有家兔均按上述方法造模，將成模家兔按體溫變化隨機分成5組，即模型組(1組)、對乙酰氨基酚組(2組，70mg/kg)、羥基茜草素組(3組)低、中、高劑量組(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg)、大葉茜草素組(4組)低、中、高劑量組(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg)，茜草活性成分組合物(5組)低、中、高劑量組(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg)，每組8只。分組后立即灌胃給藥，模型組給予等容積的蒸餾水，2組給予70mg/kg對乙酰氨基酚混懸液，3組、4組、5組的低、中、高劑量組分別給予藥物20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg。。各組給藥容積為10ml/kg。給藥后測定30min、60min、120min、180min、240min、300min、360min時間點的家兔體溫。

4、實驗結(jié)果

表2茜草活性成分及組合物對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型體溫的影響(x±s，n＝8)

與模型組比較P*＜0.05，P**＜0.01.

家兔體溫變化如表2所示，結(jié)果表明，羥基茜草素、大葉茜草素、茜草活性成分組合物分別在40mg/kg時,對內(nèi)毒素致發(fā)熱家兔有一定的解熱作用，茜草活性成分組合物的作用強于單個化合物，茜草活性成分組合物可以顯著降低內(nèi)毒素致發(fā)熱家兔生物體溫，顯示出較強的解熱作用。

取實施例6至7制備的羥基茜草素、大葉茜草素進行上述實驗，實驗結(jié)果與實施例5制備的羥基茜草素、大葉茜草素的結(jié)果相近，與實施例5制備的羥基茜草素、大葉茜草素的結(jié)果無顯著差異(P＞0.05)。

取實施例9～11制備的茜草活性成分組合物進行上述實驗，實驗結(jié)果分別與以及實施例8制備的茜草活性成分組合物的結(jié)果相近，與實施例8制備的茜草活性成分組合物的結(jié)果無顯著差異(P＞0.05)。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。