本發(fā)明涉及一種防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑及其制備方法。
背景技術：
車輪蟲是一種自由運動的寄生性纖毛蟲類原生動物，是淡水魚類最常見的寄生蟲病，近年來呈現(xiàn)發(fā)病時間長、寄主范圍廣、耐藥性強、復發(fā)率高、危害程度大等特點，由于養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中缺乏有效防治藥物，車輪蟲病成為養(yǎng)殖過程的一大頑疾。
硫酸銅硫酸亞鐵粉是目前國標漁藥(2010版)僅有的用于防治車輪蟲的藥物，但也存在很大的弊端和安全隱患。由于使用多年，車輪蟲已對硫酸銅硫酸亞鐵粉產(chǎn)生了較強的抗藥性，用藥劑量逐漸加大，而藥效卻越來越不理想；由于硫酸銅對藻類也有殺滅作用，施用該藥容易造成藻類死亡，水體缺氧，輕者出現(xiàn)魚類浮頭，重者會出現(xiàn)魚類中毒、泛塘等情況；另外，由于銅離子和鐵離子容易富集，對水產(chǎn)品安全和漁業(yè)生態(tài)系統(tǒng)構成威脅。
近些年應用較多的殺滅車輪蟲藥物是農(nóng)業(yè)部2005年廢止的代森銨。代森銨是防治蔬菜、瓜果類細菌性疾病的一種農(nóng)藥，其代謝產(chǎn)物乙撐硫脲是世界公認的致癌物，對動物和動物性食品安全構成威脅。雖然已將該藥作為水產(chǎn)藥物禁用，然而市場缺乏有效防治車輪蟲的藥物，導致該藥禁而不止。
因此，現(xiàn)在急需低毒高效的防治淡水魚類車輪蟲的藥物。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為了填補目前生產(chǎn)上缺乏低毒高效防治淡水魚類車輪蟲的藥物的空白，提供一種新的防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑及其制 備方法。
本發(fā)明的發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，含有二硫氰基甲烷和鹽酸洗必泰作為活性成分的藥物復方制劑能夠高效地防治淡水魚類車輪蟲，且毒性低。
因此，為了實現(xiàn)上述目的，一方面，本發(fā)明提供了一種防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑，所述制劑含有活性成分、分散劑、潤濕劑和載體，所述活性成分含有二硫氰基甲烷和鹽酸洗必泰，以所述藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為10-50重量％，鹽酸洗必泰的含量為5-40重量％，，分散劑的含量為1-20重量％，潤濕劑的含量為1-20重量％，余量為載體。
優(yōu)選地，以所述藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為20-40重量％，鹽酸洗必泰的含量為15-30重量％，分散劑的含量為5-10重量％，潤濕劑的含量為5-10重量％，余量為載體。
優(yōu)選地，所述藥物復方制劑的粒徑為200目以上，更優(yōu)選為300-400目。
另一方面，本發(fā)明還提供了一種防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑的制備方法，所述方法包括：將二硫氰基甲烷、鹽酸洗必泰、分散劑、潤濕劑和載體混合均勻，其中，以所述藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為10-50重量％，鹽酸洗必泰的含量為5-40重量％，分散劑的含量為1-20重量％，潤濕劑的含量為1-20重量％，余量為載體。
優(yōu)選地，以所述藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為20-40重量％，鹽酸洗必泰的含量為15-30重量％，分散劑的含量為5-10重量％，潤濕劑的含量為5-10重量％，余量為載體。
優(yōu)選地，所述方法還包括將混合所得的混合物粉碎至200目以上，更優(yōu)選粉碎至300-400目。
本發(fā)明的藥物復方制劑能夠低毒高效地防治淡水魚類車輪蟲。
本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。
具體實施方式
以下對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
一方面，本發(fā)明提供了一種防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑，制劑含有活性成分、分散劑、潤濕劑和載體，活性成分含有二硫氰基甲烷和鹽酸洗必泰，以藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為10-50重量％，鹽酸洗必泰的含量為5-40重量％，分散劑的含量為1-20重量％，潤濕劑的含量為1-20重量％，余量為載體。
本發(fā)明中，優(yōu)選地，以所述藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為20-40重量％，鹽酸洗必泰的含量為15-30重量％，分散劑的含量為5-10重量％，潤濕劑的含量為5-10重量％，余量為載體。在上述優(yōu)選情況下，能夠進一步提高藥物復方制劑對淡水魚類車輪蟲的殺蟲率。
本發(fā)明中，對于分散劑無特殊要求，可以采用本領域常用的分散劑，優(yōu)選為亞甲基雙萘磺酸鈉(NNO)和/或木質(zhì)素磺酸鈉。
本發(fā)明中，對于潤濕劑無特殊要求，可以采用本領域常用的潤濕劑，優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉和/或Morwet EFW。
本發(fā)明中，對于載體無特殊要求，可以采用本領域常用的載體，例如，可以為硅藻土、膨潤土、高嶺土等。
本發(fā)明的藥物復方制劑的粒徑優(yōu)選為200目以上；更優(yōu)選為300-400目。
第二方面，本發(fā)明提供了一種防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑的制備方法，該方法包括：將二硫氰基甲烷、鹽酸洗必泰、分散劑、潤濕劑和載體混合均勻，其中，以藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為10-50重量％，鹽酸洗必泰的含量為5-40重量％，分散劑的含量為1-20重量％，潤濕劑的含量為1-20重量％，余量為載體。
本發(fā)明中，優(yōu)選地，以所述藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲 烷的含量為20-40重量％，鹽酸洗必泰的含量為15-30重量％，分散劑的含量為5-10重量％，潤濕劑的含量為5-10重量％，余量為載體。在上述優(yōu)選情況下，能夠進一步提高藥物復方制劑對淡水魚類車輪蟲的殺蟲率。
本發(fā)明方法優(yōu)選還包括將混合所得的混合物粉碎至200目以上，更優(yōu)選粉碎至300-400目。
對于分散劑、潤濕劑和載體如前所述，在此不再贅述。
本發(fā)明的藥物復方制劑在實際使用時，使用濃度可以根據(jù)魚種不同進行適當調(diào)整，一般情況下，使用濃度為0.25-1.0mg/L。
實施例
以下的實施例將對本發(fā)明作進一步的說明，但并不因此限制本發(fā)明。
實施例1
本實施例用于說明本發(fā)明的防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑及其制備方法。
將30重量份的二硫氰基甲烷、20重量份的鹽酸洗必泰、8重量份的NNO、8重量份的十二烷基硫酸鈉和34重量份的硅藻土混合均勻，并將混合得到的混合物粉碎至300-400目，得到藥物復方制劑A1。
實施例2
本實施例用于說明本發(fā)明的防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑及其制備方法。
將20重量份的二硫氰基甲烷、15重量份的鹽酸洗必泰、5重量份的木質(zhì)素磺酸鈉、5重量份的Morwet EFW和55重量份的膨潤土混合均勻，并將混合得到的混合物粉碎至300-400目，得到藥物復方制劑A2。
實施例3
本實施例用于說明本發(fā)明的防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑及其制備方法。
將40重量份的二硫氰基甲烷、30重量份的鹽酸洗必泰、10重量份的NNO、10重量份的十二烷基硫酸鈉和10重量份的高嶺土混合均勻，并將混合得到的混合物粉碎至300-400目，得到藥物復方制劑A3。
實施例4
本實施例用于說明本發(fā)明的防治淡水魚類車輪蟲的藥物復方制劑及其制備方法。
按照實施例2的方法制備藥物復方制劑，不同的是，二硫氰基甲烷的用量為10重量份，鹽酸洗必泰的用量為5重量份，膨潤土的用量為75重量份。得到藥物復方制劑A4。
試驗例1
本試驗例于中國水產(chǎn)科學研究院無公害漁藥創(chuàng)制中心循環(huán)水系統(tǒng)中進行，試驗魚為草魚(購自北京房山區(qū)吉羊村某養(yǎng)殖廠，規(guī)格：35g-50g。10×10倍顯微鏡鏡檢魚鰓上的車輪蟲，10-15個/視野)，試驗養(yǎng)殖缸(100cm×60cm×50cm)。
將藥物復方制劑A1-A4各自分別設置3個梯度，0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L，每個梯度設置3個平行，每個平行20尾魚，設置1個對照組(不給藥)。共計740尾，37個養(yǎng)殖缸。加藥后循環(huán)水系統(tǒng)停止循環(huán)，全程充氣(溶解氧含量為7.0-9.5)，水溫18-22℃，分別于24h、48h、96h三個時間段取樣，每組隨機取5條魚，于10×10倍顯微鏡下觀察魚鰓計數(shù)車輪蟲，按照如下公式計算各給藥組殺蟲率，結(jié)果見表1。96h結(jié)束試驗。
殺蟲率％＝(對照組平均殘留存活車輪蟲數(shù)-給藥組平均殘留存活車輪蟲數(shù))/對照組平均殘留存活車輪蟲數(shù)×100％。
表1復方制劑對草魚鰓上車輪蟲的殺蟲率
在試驗例1中，在整個試驗階段，對照組草魚鰓車輪蟲最多，10×10倍顯微鏡觀察，10-20個/視野。
從表1可以看出，本發(fā)明的藥物復方制劑的殺蟲率均在80％以上，殺蟲率高。
將實施例2與實施例4進行比較可以看出，以所述藥物復方制劑的總重量為基準，二硫氰基甲烷的含量為20-40重量％，鹽酸洗必泰的含量為15-30重量％，分散劑的含量為5-10重量％，潤濕劑的含量為5-10重量％，余量為載體，能夠進一步提高殺蟲率。
試驗例2
試驗地點：天津?qū)氎纥S莊王姓養(yǎng)殖戶池塘。池塘面積10畝。
試驗時間：6月底-7月初。
養(yǎng)殖品種：鰱鳙魚、鯉魚、草魚混養(yǎng)池塘，草魚規(guī)格：7-18cm。
池塘水質(zhì)條件：pH 8.2，氨氮1.5mg/L，亞硝酸鹽0.25mg/L。
發(fā)病癥狀：草魚浮頭、游邊，每日死亡6-7尾草魚。撈取草魚檢查，鰓絲腫脹，粘液較多，4×10倍顯微鏡檢查，發(fā)現(xiàn)鰓上寄生大量車輪蟲，10×10倍下觀察，10-15個/視野。鰱鳙魚、鯉魚鰓上未檢測到車輪蟲。
將藥物復方制劑A1以0.35mg/L的濃度全池潑灑，第二天取草魚鰓鏡檢，發(fā)現(xiàn)鰓上車輪蟲明顯減少，2-3個/視野，第三天取草魚鰓鏡檢，車輪蟲數(shù)更少，平均殺滅率達到96％以上。草魚浮頭、游邊現(xiàn)象消失，無死亡。第五天取草魚檢查，鰓上未見車輪蟲，鰓顏色正常，鰓絲無腫脹掛臟現(xiàn)象。
試驗例3
試驗地點：廣東惠州博羅葉姓養(yǎng)殖戶池塘。4畝水面。
試驗時間：8月份。
養(yǎng)殖品種：鯪魚仔，規(guī)格2-6cm。
池塘水質(zhì)：pH 9.0-9.2，水質(zhì)較肥，水體氨氮0.6-0.9mg/L、亞硝酸鹽0.05-0.1mg/L。岸上為豬舍，豬糞直接排入池塘。
發(fā)病癥狀：吃料時出現(xiàn)炸群現(xiàn)象，每日死魚幾十尾。鏡檢發(fā)現(xiàn)，鰓上有大量車輪蟲寄生，鰓絲有大量粘液。10×10倍下觀察，30個以上/視野。
將藥物復方制劑A1以0.35mg/L的濃度全池潑灑，第三天取10尾鯪魚仔鏡檢，平均殺蟲率達到95％以上。死亡數(shù)明顯減少。第五天，檢查平均殺蟲率在99％以上，未出現(xiàn)死魚現(xiàn)象。
試驗例4
試驗地點：廣東惠州博羅王姓養(yǎng)殖戶池塘。8畝水面。
試驗時間：8月份。
養(yǎng)殖品種：鱖魚，規(guī)格6-15cm。
池塘水質(zhì)：水質(zhì)較渾，pH 8.5-9.0，水體氨氮0.4-0.6mg/L、亞硝酸鹽0.25-0.3mg/L。
發(fā)病癥狀：每日死魚4-8尾。取鰓檢查，鰓絲有大量粘液，顏色淺紅，4×10倍鏡檢發(fā)現(xiàn)，鰓上有大量車輪蟲寄生。10×10倍下觀察，20個以上/ 視野。
將藥物復方制劑A1以0.35mg/L的濃度全池潑灑，第三天取6尾鱖魚鏡檢，只有1尾魚鰓上有2個車輪蟲，另外4尾均未發(fā)現(xiàn)車輪蟲。第5天撈取6尾鱖魚檢查，僅有1尾魚鰓上有1個車輪蟲，殺蟲率明顯。無死魚現(xiàn)象。
通過實驗室循環(huán)水水質(zhì)以及養(yǎng)殖池塘水質(zhì)下，在0.25-0.35mg/L的濃度下，對車輪蟲的殺滅率達到90％以上。證明該復方制劑對魚類車輪蟲具有顯著的殺滅效果。
毒性試驗：
1.1試驗材料：草魚購自房山區(qū)吉羊村某養(yǎng)殖廠，規(guī)格：20-35g。斑點叉尾鮰從河南某養(yǎng)殖場購買，規(guī)格：15-30g。
1.2試驗方法：
試驗前將魚種暫養(yǎng)3天，試驗前2天及試驗期間不喂食，然后挑選體健無傷、行動敏捷、規(guī)格基本一致的個體作為試驗用魚。試驗在中國水產(chǎn)科學研究院無公害漁藥創(chuàng)制中心循環(huán)水系統(tǒng)中進行，水溫19-22℃，全程充氧(7-9mg/L)，試驗期間不循環(huán)。
采用靜態(tài)急性毒性試驗法。根據(jù)魚病防治的藥物常用劑量，選擇適當濃度比例進行預試驗，觀察魚苗活動及存活情況。根據(jù)預備試驗的結(jié)果，在使魚苗全部存活的最高質(zhì)量濃度和全部致死最低質(zhì)量濃度之間，根據(jù)等對比間距法r確定各試驗組濃度(具體方法：式中r為相鄰兩個劑量比值；b為最高劑量；a為最低劑量；n為劑量組數(shù))，見表2，濃度單位為mg/L。每個處理設三個平行。對照組不加藥，每個試驗組用魚20尾。
試驗過程中循環(huán)水系統(tǒng)停止循環(huán)，加藥后每隔2h觀察魚的狀態(tài)，記錄死亡情況。96h結(jié)束試驗。
1.3數(shù)據(jù)處理：
試驗結(jié)果取平均值，根據(jù)死亡魚數(shù)及死亡時間，利用半對數(shù)座標直線內(nèi)插法求出各種藥物作用于試驗魚24h、48h、96h的半致死濃度(LC50：median lethal concentration)值，48h安全生存的最高濃度(SC：Safe concentration)值。
半致死濃度：Log LC50＝Xm-d(Σp-0.5)；
其中，Xm為最大劑量對數(shù)；d為相鄰劑量比值的對數(shù)；p為各劑量組死亡率。
安全濃度：SC＝48hLC50×0.3/(24hLC50/48hLC50)2；
表2對草魚、斑點叉尾鮰的濃度梯度
1.4試驗結(jié)果：
整個試驗過程中，空白組未有死魚，即死亡率為0。草魚、斑點叉尾鮰在試驗不同時間的死亡率、半致死濃度LC50和48h安全濃度SC見表3。
草魚：藥物復方制劑在2mg/L濃度下，96h內(nèi)死亡2尾，8.0mg/L濃度下在72h內(nèi)全部死亡。48h安全濃度為0.96mg/L。
斑點叉尾鮰：選擇為無鱗魚的代表種類，對藥物較草魚等有鱗魚敏感，在1.41mg/L時就出現(xiàn)死亡，在48h內(nèi)死亡4尾。表現(xiàn)癥狀為游泳困難，身體彎曲，浮于水面，呈半休克狀態(tài)，靜止片刻后再次上下掙扎游動，魚體側(cè)翻，慢慢死亡。4mg/L時72h內(nèi)所有試驗魚死亡。48h安全濃度為0.50mg/L。
由表3可以看出，該復方制劑對草魚、斑點叉尾鮰的48h安全濃度分別為0.96mg/L、0.50mg/L，綜合有效濃度為0.25-0.35mg/L的使用量來分析，安全濃度高于草魚和斑點叉尾鮰的有效濃度，可見，本發(fā)明的藥物復方制劑 對淡水養(yǎng)殖魚類較為安全。
表3草魚、斑點叉尾鮰對藥物復方制劑的半致死濃度及安全濃度
綜上可見，本發(fā)明的藥物復方制劑能夠低毒高效地防治淡水魚類車輪蟲。
以上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實施方式中的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術構思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。
另外需要說明的是，在上述具體實施方式中所描述的各個具體技術特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重復，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。
此外，本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應當視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。