本發(fā)明涉及親水性聚合物阿片樣物質(zhì)結(jié)合物，尤其是具有低成癮作用的聚乙二醇化阿片樣物質(zhì)及其藥物組合物。
背景技術(shù)：
：阿片樣物質(zhì)(也稱阿片受體激動劑，如嗎啡、可待因等)具有極強的鎮(zhèn)痛作用，作為鎮(zhèn)痛藥已廣泛應(yīng)用于臨床中，其與阿片受體(包括μ受體、κ受體和δ受體，尤其是μ受體和κ受體)相互作用從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。然而，阿片樣物質(zhì)在神經(jīng)鎮(zhèn)痛的同時，重復(fù)用藥可能造成耐藥性和生理依賴性(即成癮性)，成癮性是用阿片樣物質(zhì)鎮(zhèn)痛時的主要問題。在用藥時產(chǎn)生欣快作用，停止用藥后造成的不適(例如厭食、體重減輕、焦慮、易怒、暈眩、腹痛、嘔吐、痙攣、流涕和心跳加速等)迫使患者尋求藥物，當劑量超過常規(guī)給藥范圍后可能產(chǎn)生的副作用，以及藥物可能從疼痛患者手中流至成癮者手中等，以上因素導(dǎo)致阿片樣物質(zhì)在應(yīng)用中具有潛在濫用性。目前，為防止阿片類藥物的成癮性，采取的一個方式是將阿片樣物質(zhì)與阿片樣拮抗劑聯(lián)合用藥，通過阿片樣拮抗劑來阻斷欣快作用。例如現(xiàn)有技術(shù)采用噴他佐辛與納洛酮的復(fù)合片劑(例如talwinnx，鹽酸噴他佐辛(50mg)和鹽酸納洛酮(50mg))來緩解疼痛，該復(fù)方中納洛酮的含量在口服時活性較低，幾乎不干擾噴他佐辛的藥學(xué)作用，但是腸胃外給予則會對鎮(zhèn)痛作用造成明顯的拮抗作用，當制劑為可溶或注射劑時限制了可能發(fā)生的噴他佐辛濫用；此外，還包括采用替利定(50mg)和納洛酮(50mg)的復(fù)方來治療重度疼痛，利用納洛酮對嗎啡受體的拮抗作用避免替利定成癮。盡管現(xiàn)有技術(shù)中采取阿片樣物質(zhì)與阿片樣拮抗劑聯(lián)合用藥，在壓碎或切碎片劑的情況下，阿片樣拮抗劑溶解度增加，對阿片受體產(chǎn)生拮抗作用，能夠防止藥物以非腸道的方式進行濫用，然而，如果小心溶解片劑可能無需粉碎(例如將片劑置于水中過夜)也可提取出不含拮抗劑的阿片樣物質(zhì)，從而導(dǎo)致濫用。此外，阿片樣拮抗劑血腦屏障透過率高，在減少慢性疼痛患者長期使用阿片類藥物產(chǎn)生的成癮性及引起的不適的同時，也抵消了阿片類藥物的止痛作用?，F(xiàn)有技術(shù)中也有采用將阿片樣物質(zhì)共價地結(jié)合在水溶性低聚物上，以改變阿片樣物質(zhì)的藥物代謝動力學(xué)曲線，該曲線將以一個恒定的低濃度將阿片樣物質(zhì)遞送到腦，從而避免傳統(tǒng)遞送方式的濃度峰值(該濃度峰值為成癮潛在性的基礎(chǔ))，以獲得降低的成癮特性，防止藥物的濫用和成癮。具體地，現(xiàn)有技術(shù)cn200980136089.1公開了mpegn-o-嗎啡、mpegn-o-氫可酮及mpegn-o-可待因偶聯(lián)物，通過將聚乙二醇與上述阿片樣物質(zhì)相連接，在保留藥物鎮(zhèn)痛作用的同時獲得了降低的藥物成癮性，在上述偶聯(lián)物中，聚乙二醇僅與一個活性組分相連。雖然上述阿片樣物質(zhì)-聚乙二醇的偶聯(lián)物具有降低的藥物成癮性，然而隨著聚合物分子量的增加，阿片樣物質(zhì)與阿片受體之間的親和性顯著降低。本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，實現(xiàn)聚乙二醇與多個阿片樣物質(zhì)的結(jié)合，篩選出幾種具有低成 癮性的聚乙二醇與阿片樣物質(zhì)結(jié)合物。與現(xiàn)有技術(shù)不同的是，在具備低成癮性和濫用潛在性的同時，本發(fā)明阿片樣物質(zhì)結(jié)合物與阿片受體之間的活性要優(yōu)于同等分子量的單阿片樣物質(zhì)結(jié)合物，具有更為改善的藥代動力學(xué)曲線，在臨床中可實現(xiàn)更小劑量的給藥。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種具有低成癮作用的聚乙二醇與雙阿片樣物質(zhì)結(jié)合物。本發(fā)明的另一個目的是提供包含本發(fā)明的結(jié)合物以及其與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。本發(fā)明的還一個目的是提供一種本發(fā)明的結(jié)合物及其藥物組合物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：本發(fā)明一方面提供了一種聚乙二醇與阿片樣物質(zhì)的結(jié)合物，具有式(i)的結(jié)構(gòu)：peg-(x-op)m(i)其中，peg為雙端、分支或多臂聚乙二醇殘基，分子量為45-1500da；x為連接基團，選自以下組中的一種：-o-，-oc(o)-，-o(ch2)inh-，-o(ch2)ic(o)o-，-o(ch2)ic(o)nh-，-o(ch2)inhc(o)nh-，i為0-5的整數(shù)，優(yōu)選為0，1，2；op為阿片樣物質(zhì)；m為2-6的整數(shù)，優(yōu)選為2，3或4。在本發(fā)明實施方式中，所述阿片樣物質(zhì)具有以下式(ii-1)或(ii-2)的結(jié)構(gòu)：其中：r1為-h、甲基、乙基或-c(o)ch3；r2為-h、甲基、乙基、異丙基、丙烯基、甲基環(huán)丙烷、甲基環(huán)丁烷；r3為-h或-oh；r4為r5為-h、甲基、乙基或-c(o)ch3；虛線為可選的雙鍵；y為o或s；r6為-h、甲基或甲氧基；r7為-h、甲基、乙基、環(huán)丙基、甲氧基、乙氧基或二甲基氨基；r8為-h、-ch2och3、-c(o)och3或-c(o)ch3；r9為-h或甲基；r10為-h或-oh；r11為苯基、羥基苯基、環(huán)己基、鹵代苯基、甲氧基苯基、或-c(o)och3。其中，鹵代苯基是指在苯環(huán)的一個或多個可用的位置被一個或多個鹵素基團所取代，鹵代是指溴代、氯代、碘代或氟代。在本發(fā)明實施方式中，所述阿片樣物質(zhì)具體可為：嗎啡、氫嗎啡酮、羥考酮、氫可酮、可待因、二氫可待因、納布啡、左嗎喃、羥甲左嗎喃、布托啡諾、羥嗎啡酮、丁丙諾啡、芬太尼及它們的藥學(xué)上可接受的鹽；優(yōu)選的，所述阿片樣物質(zhì)為嗎啡、羥可酮、可待因或芬太尼。在本發(fā)明實施方式中，所述“peg”或“聚乙二醇”是指包括任何水溶性的聚(氧化乙烯)；peg分子量為約45-1500da之間，例如45-450da之間(包括45-90da，45-135da，90-135da，90-180da，90-225da，90-270da，135-225da，135-270da，225-315da，315-360da，360-405da，405-450da)，450-900da之間(包括450-500da，500-550da，550-600da，600-650da，650-700da，700-750da，750-800da，800-850da，850-900da)，900-1500da之間(包括900-1500da，900-1350da，900-1200da，900-1050da)，優(yōu)選的，分子量小于450da；所述peg可為雙端、分支或多臂的聚乙二醇殘基。在本發(fā)明實施方式中，所述連接基團x以共價鍵形式連接peg和阿片樣物質(zhì)，該共價鍵的連接在水中基本穩(wěn)定，在普通生理條件下呈現(xiàn)出小于約2％/天的水解速率。本發(fā)明按照現(xiàn)有技術(shù)中已知的方式將聚乙二醇與阿片樣物質(zhì)通過連接基團相連。示意性的，對聚乙二醇的端基修飾親電基團，與阿片樣物質(zhì)上的親核基團(如羥基、氨基等)相互反應(yīng)，從而形成共價鍵連接。當所述阿片樣物質(zhì)本身不含有親核基團，可對需要進行連接的基團進行修飾改性，從而使反應(yīng)能夠進行(例如將酮基還原為羥基)。當所述阿片樣物質(zhì)含有不希望進行反應(yīng)的基團，可采用保護基團將其保護后(例如采用memcl保護不希望進行反應(yīng)的羥基)再進行偶聯(lián)反應(yīng)，在反應(yīng)完畢后脫保護即可。優(yōu)選的，連接基團x為-o-，具有式(i-0)的結(jié)構(gòu)：peg-(o-op)m(i-0)。在本發(fā)明一個具體實施方式中，peg為雙端聚乙二醇殘基，m為2，式(i)所述結(jié)合物為聚乙二醇與雙阿片樣物質(zhì)的結(jié)合物，具有如下式(iii)的結(jié)構(gòu)：op-x-peg-x-op(iii)其中，peg為下式所述的聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為1-30的整數(shù)；x為連接基團，選自以下組中的一種：-o-，-oc(o)-，-o(ch2)inh-，-o(ch2)ic(o)o-，-o(ch2)ic(o)nh-，-o(ch2)inhc(o)nh-，i為0-5的整數(shù)，優(yōu)選為0，1，2；op為阿片樣物質(zhì)。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)所述的聚乙二醇殘基可為：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，在某些實施方法中也可表述為-(ch2ch2o)n-，n優(yōu)選為2-20(具體為2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20)的整數(shù)，更優(yōu)選的，n為2-10(具體為2，3，4，5，6，7，8， 9，10)的整數(shù)，最優(yōu)選的，n為3-7(具體為3，4，5，6，7)的整數(shù)。在本發(fā)明一個具體實施方式中，x為-o-，式(iii)具有如下式(iii-0)的結(jié)構(gòu)：op-o-peg-o-op(iii-0)。具體的，式(iii)可為如下式(iii-1)、(iii-2)或(iii-3)所示的結(jié)構(gòu)：在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-1)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-2)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-3)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-4)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-5)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-6)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-7)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-8)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4，5，6，7。在本發(fā)明一個具體實施方式中，式(iii)具備如下式(iv-9)的結(jié)構(gòu)：其中，所述peg為雙端聚乙二醇殘基：-(ch2ch2o)n-1ch2ch2-，n為2-10的整數(shù)，優(yōu)選為3，4， 5，6，7。在本發(fā)明一個具體的實施方式中，peg為三臂聚乙二醇殘基，m為3，式(i)所述結(jié)合物為聚乙二醇與三阿片樣物質(zhì)的結(jié)合物，具有式(v)的結(jié)構(gòu)：其中，peg具有如下式所示的分支聚乙二醇殘基：其中，x、y或z可獨立地選自1-20的整數(shù)，優(yōu)選的，為1-10(具體為1，2，3，4，5，6，7，8，9，10)的整數(shù)，更優(yōu)選的為1-6(具體為1，2，3，4，5，6)的整數(shù)。優(yōu)選的，x、y、z之和為小于10的整數(shù)，更優(yōu)選的，為小于7的整數(shù)，最優(yōu)選的，為小于5的整數(shù)，例如x、y與z均為1；x為連接基團，選自以下組中的一種：-o-，-oc(o)-，-o(ch2)inh-，-o(ch2)ic(o)o-，-o(ch2)ic(o)nh-，-o(ch2)inhc(o)nh-，i為0-5的整數(shù)，優(yōu)選為0，1，2；op為阿片樣物質(zhì)。在本發(fā)明一個具體實施方式中，x為-o-，式(v)具有如下式(v-0)的結(jié)構(gòu)：具體的，式(v)可為如下式(v-1)、(v-2)或(v-3)所示的結(jié)構(gòu)：在本發(fā)明一個具體的實施方式中，peg為四臂聚乙二醇殘基，m為4，式(i)所述結(jié)合物為聚乙二醇與四阿片樣物質(zhì)的結(jié)合物，具有式(vi)的結(jié)構(gòu)：其中，peg具有如下式所示的分支聚乙二醇殘基：其中，a、b、c或d可獨立地選自1-20的整數(shù)，優(yōu)選的，為1-10(具體為1，2，3，4，5，6，7，8，9，10)的整數(shù)，更優(yōu)選的為1-6(具體為1，2，3，4，5，6)的整數(shù)。優(yōu)選的，a、b、c和d之和為小于10的整數(shù)，更優(yōu)選的，為小于7的整數(shù)，最優(yōu)選的，為小于5的整數(shù)，例如a、b、c和d均為1；x為連接基團，選自以下組中的一種：-o-，-oc(o)-，-o(ch2)inh-，-o(ch2)ic(o)o-，-o(ch2)ic(o)nh-，-o(ch2)inhc(o)nh-，i為0-5的整數(shù)，優(yōu)選為0，1，2；op為阿片樣物質(zhì)。在本發(fā)明一個具體實施方式中，x為-o-，式(vi)具有如下式(vi-0)的結(jié)構(gòu)：具體的，式(vi)可為如下式(vi-1)、(vi-2)或(vi-3)所示的結(jié)構(gòu)：本發(fā)明還一個方面提供一種如式(i)的結(jié)合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。上述藥學(xué)上可接受的鹽，可為鈉鹽、鉀鹽、銫鹽、鈣鹽、鎂鹽、三乙胺鹽、吡啶鹽、甲基吡啶鹽、乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、二環(huán)己基胺鹽、n，n-二芐基乙二胺鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、精氨酸鹽、天冬氨酸鹽、谷氨酸鹽、泛酸鹽、抗壞血酸鹽等，或上述鹽的組合。優(yōu)選的，藥學(xué)上可接受的鹽可以是鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、枸櫞酸鹽、酒 石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、苯磺酸鹽、泛酸鹽、抗壞血酸鹽等，或上述鹽的組合。本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的結(jié)合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。在一些實施方式中，根據(jù)所需給藥方式，藥學(xué)上可接受的組合物將包含約1至約99重量％的本發(fā)明結(jié)合物、以及99至1重量％的適宜的載體或藥用賦形劑。優(yōu)選組合物包含約5至75重量％的本發(fā)明結(jié)合物，其余為適宜的載體或藥用賦形劑。更優(yōu)選組合物包含約10至50重量％的本發(fā)明結(jié)合物，其余為適宜的載體或藥用賦形劑。在一些實施方式中，本發(fā)明的藥物組合物還可包含少量的輔助物質(zhì)，如潤濕劑或乳化劑、ph緩沖劑、抗氧化劑等，例如：檸檬酸、脫水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羥基甲苯等。在一些實施方案中，所述的藥物組合物為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、散劑、栓劑、注射劑、溶液劑、混懸劑、膏劑、貼劑、洗劑、滴劑、擦劑、噴霧劑等劑型。在一些實施方式中，本發(fā)明的結(jié)合物可以純化合物形式或適宜的藥物組合物形式進行給藥，可采用任何可接受的給藥方式或用于類似的用途的試劑進行。因此，采用的給藥方式可選擇通過口、鼻內(nèi)、非腸道、局部、透皮或直腸方式，其形式為固體、半固體或液體藥劑形式給藥，例如，片劑、栓劑、丸劑、軟和硬明膠膠囊劑、散劑、溶液劑、混懸劑和注射劑等，優(yōu)選采用適用于精確劑量的簡單給藥的單元劑量形式。可采用液體形式給藥的藥物組合物例如可通過溶解、分散等手段將本發(fā)明的結(jié)合物(約0.5至約20％)和選擇性存在的藥用輔劑溶解、分散于載體中，載體的實例為水、鹽水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，從而形成溶液劑或混懸劑。本發(fā)明的結(jié)合物、其藥學(xué)上可接的鹽或藥物組合物在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用，所述藥物具有降低的成癮性以及濫用性。本發(fā)明聚乙二醇與多阿片樣物質(zhì)結(jié)合物在具備低成癮性和濫用潛在性的同時，與阿片受體之間的活性要優(yōu)于同等分子量的單阿片樣物質(zhì)結(jié)合物，具有更為改善的藥代動力學(xué)曲線，在臨床中可實現(xiàn)更小劑量的給藥。具體實施方式以下實施例用來說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明。實施例中所用的嗎啡、可待因購自青海制藥廠有限公司；羥考酮購自北京華素制藥股份有限公司，甲氧基乙氧基甲基氯(memcl)從alfaaesar公司購得，對甲苯磺酰氯從山東億龍實業(yè)有限公司購得，氫化鈉從梯希愛(上海)化成工業(yè)發(fā)展有限公司購得，h(och2ch2)2-oh、h(och2ch2)3-oh、h(och2ch2)4-oh、h(och2ch2)5-oh、h(och2ch2)6-oh、h(och2ch2)7-oh、h(och2ch2)8-oh以及h(och2ch2)9-oh從嘉興博美生物技術(shù)有限公司購得。本發(fā)明實施例中所用的其他試劑均為商業(yè)化學(xué)純試劑。實施例1：制備pegn-(oms)2向250ml三口瓶中加入二甘醇(10.0g，94.3mmol)和二氯甲烷(100ml)，攪拌冷卻至0℃。滴入三乙胺(19.1g，188.6mmol)，反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。向反應(yīng)混合物中經(jīng)5-10分鐘加入甲基磺酰氯(21.6g， 188.6mmol)，室溫攪拌12小時，用tlc監(jiān)控反應(yīng)進程。待反應(yīng)完全后，向反應(yīng)混合物中加入蒸餾水，然后用二氯甲烷(3×100ml)萃取。合并有機層，用蒸餾水(3×100ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至干，得到棕色油狀物21.8g，收率88.2％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ4.10(t,4h),3.86(t,4h),3.19(s,6h)。以同樣的方法制備其它的mso-pegn-oms(n＝1、3、4、5、6、7、8、9)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例2：制備pegn-(嗎啡)2偶聯(lián)物步驟1:制備3-o-mem-嗎啡(2)在室溫下，將硫酸嗎啡(1.00g，2.64mmol)溶于丙酮/甲苯(70ml/35ml)中，攪拌混合物均勻。向混合物中加入k2co3(1.35g，9.77mmol)，攪拌25分鐘，然后加入memcl(0.66g，5.28mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時，然后加入無水甲醇(1.2ml)終止反應(yīng)。將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干，向殘余物中加入蒸餾水(15ml)和飽和食鹽水(45ml)，用乙酸乙酯(3×50ml)萃取?；旌嫌袡C溶液用飽和食鹽水(3×50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得淡黃色油狀物0.52g，收率52.7％。1hnmr(400mhz，cdcl3):δ6.46(d,1h),6.33(d,1h),6.02(s,2h),5.59(t,2h),4.30(d,1h),4.19(t,1h),3.54(t,4h),3.32(s,1h),3.24(s,3h),2.91(d,2h),2.76(m,1h),2.49(m,1h),2.27(s,3h),2.24(m,2h),1.75(m,2h)。步驟2:制備6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)2(3)向甲苯/dmf(8倍/4倍體積)的混合溶液中加入3-o-mem-嗎啡(2.4-2.8倍當量)，隨后加入nah(8-12倍當量)，然后加入pegn-(oms)2。將反應(yīng)混合物加熱到55-75℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-40小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在15至30％之間。用此方法制備6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)2(n＝1、2、3、4、5、6、7、8、9)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟3:制備6-o-pegn-(嗎啡)2鹽酸鹽(4)將6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)2溶于二氯甲烷(16倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(12倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(16倍體積)中，過濾。將濾 液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(嗎啡)2；α-6-o-peg2-(嗎啡)2；α-6-o-peg3-(嗎啡)2；α-6-o-peg4-(嗎啡)2；α-6-o-peg5-(嗎啡)2；α-6-o-peg6-(嗎啡)2；α-6-o-peg7-(嗎啡)2；α-6-o-peg8-(嗎啡)2和α-6-o-peg9-(嗎啡)2。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例3：制備pegn-(可待因)2偶聯(lián)物步驟1:制備6-o-pegn-(可待因)2游離堿(6)向甲苯/dmf(24倍/1倍體積)的混合溶液中加入可待因(2.4-2.8倍當量)，隨后加入nah(8-12倍當量)，然后加入pegn-(oms)2。將反應(yīng)混合物加熱到45-65℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-48小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在12至25％之間。用此方法制備6-o-pegn-(可待因)2游離堿(n＝1、2、3、4、5、6、7、8、9)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟2:制備6-o-pegn-(可待因)2鹽酸鹽將6-o-pegn-(可待因)2游離堿溶于二氯甲烷(16倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(12倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(16倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(可待因)2；α-6-o-peg2-(可待因)2；α-6-o-peg3-(可待因)2；α-6-o-peg4-(可待因)2；α-6-o-peg5-(可待因)2；α-6-o-peg6-(可待因)2；α-6-o-peg7-(可待因)2；α-6-o-peg8-(可待因)2和α-6-o-peg9-(可待因)2。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例4：制備pegn-(羥考醇)2偶聯(lián)物步驟1:羥考酮選擇性還原制備羥考醇(8)在15℃攪拌下，向羥考酮(3.79g，12.03mmol)的無水甲醇(150ml)溶液中加入nabh(oac)3(7.65g，36.09mmol)和acoh(2.17g，36.09mmol)。反應(yīng)混合物在15～20℃下攪拌24h，用tlc監(jiān)測反應(yīng)進度。減壓蒸除溶劑，向殘余物中加入二氯甲烷(100ml)，用飽和nahco3水溶液將溶液ph值調(diào)至10。向混合溶液中加入蒸餾水(100ml)，用二氯甲烷(2×100ml)萃取?；旌嫌袡C相用飽和食鹽水(100ml)洗滌，無 水硫酸鈉干燥。減壓蒸除溶劑得到無色色油狀物3.72g，收率97.4％。1hnmr(400mhz，cdcl3):6.46(d,1h),6.35(d,1h),4.10(d,1h),3.84(s,3h),3.67(m,2h),3.59(s,1h),3.07(m,1h),2.79(m,2h),2.49(m,2h),2.27(s,3h),δ1.45-1.92(m,6h)。步驟2:制備6-o-pegn-(羥考醇)2游離堿(9)向甲苯/dmf(8倍/4倍體積)的混合溶液中加入羥考醇(2.4-2.8倍當量)，隨后加入nah(8-12倍當量)，然后加入pegn-(oms)2。將反應(yīng)混合物加熱到60-80℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-40小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在15至30％之間。用此方法制備6-o-pegn-(羥考醇)2游離堿(n＝1,2,3,4,5,6,7,8,9)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟3:制備6-o-pegn-(羥考醇)2鹽酸鹽將6-o-pegn-(羥考醇)2游離堿溶于二氯甲烷(16倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(12倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(16倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(羥考醇)2；α-6-o-peg2-(羥考醇)2；α-6-o-peg3-(羥考醇)2；α-6-o-peg4-(羥考醇)2；α-6-o-peg5-(羥考醇)2；α-6-o-peg6-(羥考醇)2；α-6-o-peg7-(羥考醇)2；α-6-o-peg8-(羥考醇)2和α-6-o-peg9-(羥考醇)2。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例5：制備pegn-(芬太尼)2偶聯(lián)物第一種方案是將peg寡聚物共價附接在苯乙胺的苯基上，具體制備方法如下：步驟1:制備n，n-二(3-甲氧羰基丙基)-2-(甲氧基取代的苯基)乙胺(11)向反應(yīng)瓶中加入(5.16g，60mmol)丙烯酸甲酯、2-(甲氧基取代的苯基)乙胺(25mmol)和溶有硼酸(0.15g，2.5mmol)的水溶液(25ml)，室溫攪拌7h。分出有機層，用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除多余的丙烯酸甲酯，得淡黃色油狀物，收率在80至95％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟2:制備n-[2-(甲氧基取代的苯基)乙基]哌啶酮(12)向反應(yīng)瓶中加入氫化鈉(5.20g，60％，130mmol)和無水四氫呋喃(72ml)，加熱至回流。滴加中間體11(50mmol)的無水四氫呋喃(18ml)溶液，控制滴加速度，以氣泡平穩(wěn)溢出為宜。加料完畢后，繼續(xù)攪拌回流2h。冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，向反應(yīng)瓶中慢慢加入濃鹽酸(60ml)，有大量黃色固體析出。加熱攪拌使固體完全溶解，并繼續(xù)加熱至回流反應(yīng)1.5h。冷卻至室溫，用碳酸鈉溶液將反應(yīng)液ph調(diào)至9～10，有大量淡黃色固體析出。過濾，得黃色粗品，用正己烷重結(jié)晶，得亮黃色固體，收率在74至87％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟3:制備4-苯胺基-n-[2-(甲氧基取代的苯基)乙基]哌啶(13)在冰水浴攪拌下，將苯胺(8.24g，88.5mmol)溶于二氯甲烷(240ml)中，滴加冰醋酸(5.0ml，88.5mmol)。向混合物中加入中間體12(88.5mmol)的二氯甲烷(60ml)溶液，然后緩慢加入三乙酰氧基硼氫化鈉(28.1g，132.8mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14h，然后加入甲醇(100ml)，最后加入飽和nahco3(300ml)進行分液。有機相用飽和食鹽水(3×100ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得淺褐色固體，經(jīng)快速柱色譜純化得到淡黃色固體，收率在85至93％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟4:制備n-{1-[2-(甲氧基取代的苯基)乙基]-4-哌啶基}-n-苯基丙酰胺(14)將中間體13(4.8mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，加入二異丙基乙胺(1.68ml，9.6mmol)。溶液用冰水浴冷卻，滴入丙酰氯(0.83ml，9.6mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2h，然后加入蒸餾水(40ml)進行分液。有機相依次用飽和食鹽水(50ml)和飽和nahco3(50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得黃色固體，經(jīng)快速柱色譜純化得到淡黃色固體，收率在90至96％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟5:制備n-{1-[2-(羥基取代的苯基)乙基]-4-哌啶基}-n-苯基丙酰胺(15)在-78℃下向中間體14(4.9mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入三溴化硼(2.45g，9.8mmol)，混合物攪拌2h，加入蒸餾水(25ml)，分液，水層用二氯甲烷(2×25ml)提取，混合有機層用飽和食鹽水(50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在87至94％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟6:制備pegn-(芬太尼)2-a偶聯(lián)物(16)將中間體15(2.7mmol)和pegn-(oms)2(0.9mmol)溶于無水乙腈(40ml)中，加入無水k2co3(0.5g，3.6mmol)，升溫至回流后攪拌反應(yīng)16h。減壓蒸除溶劑后，將殘留物用二氯甲烷(100ml)溶解，有機層用蒸餾水(3×50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在75至83％之間。通過第一種方案制備的化合物包括：間位取代物peg1-(芬太尼)2-am、peg2-(芬太尼)2-am、peg3-(芬太尼)2-am、peg4-(芬太尼)2-am、peg5-(芬太尼)2-am、peg6-(芬太尼)2-am、peg7-(芬太尼)2-am、peg8-(芬太尼)2-am、peg9-(芬太尼)2-am；對位取代物peg1-(芬太尼)2-ap、peg2-(芬太尼)2-ap、peg3-(芬太尼)2-ap、peg4-(芬太尼)2-ap、peg5-(芬太尼)2-ap、peg6-(芬太尼)2-ap、peg7-(芬太尼)2-ap、peg8-(芬太尼)2-ap、peg9-(芬太尼)2-ap；以及鄰位取代物peg1-(芬太尼)2-ao、peg2-(芬太尼)2-ao、peg3-(芬太尼)2-ao、peg4-(芬太尼)2-ao、peg5-(芬太尼)2-ao、peg6-(芬太尼)2-ao、peg7-(芬太尼)2-ao、peg8-(芬太尼)2-ao、peg9-(芬太尼)2-ao。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。第二種方案是將peg寡聚物共價附接在苯胺的苯基上，具體制備方法如下：步驟1:制備n，n-二(3-甲氧羰基丙基)-2-苯乙胺(18)向反應(yīng)瓶中加入丙烯酸甲酯(5.16g，60mmol)、苯乙胺(3.03g，25mmol)和溶有硼酸(0.15g，2.5mmol)的水溶液(25ml)，室溫攪拌7h。分出有機層，用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除多余的丙烯酸甲酯，得淡黃色油狀物6.7g，收率92％。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.31(t,2h)，7.22(d,2h),7.08(t,1h),3.67(s,6h),2.75(t,4h),2.69(t,2h),2.65(t,2h),2.35(t,4h)。步驟2:制備n-(2-苯基乙基)哌啶酮(19)向反應(yīng)瓶中加入氫化鈉(5.20g，60％，130mmol)和無水四氫呋喃(72ml)，加熱至回流。滴加中間體18(14.7g，50mmol)的無水四氫呋喃(18ml)溶液，控制滴加速度，以氣泡平穩(wěn)溢出為宜。加料完畢后，繼續(xù)攪拌回流2h。冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，向反應(yīng)瓶中慢慢加入濃鹽酸(60ml)，有大量黃色固體析出。加熱攪拌使固體完全溶解，并繼續(xù)加熱至回流反應(yīng)1.5h。冷卻至室溫，用碳酸鈉溶液將反應(yīng)液ph調(diào)至9～10，有大量淡黃色固體析出。過濾，得黃色粗品，用正己烷重結(jié)晶，得亮黃色固體8.6g，收率85％。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ7.32(m，2h)，7.21(m，3h)，2.83(m，2h)，2.72(t，4h)，2.74(m，2h)，2.47(t，4h)。步驟3:制備4-(甲氧基取代的苯胺基)-n-(2-苯基乙基)哌啶(20)在冰水浴攪拌下，將甲氧基取代的苯胺(88.5mmol)溶于二氯甲烷(240ml)中，滴加冰醋酸(5.0ml， 88.5mmol)。向混合物中加入中間體19(18.0g，88.5mmol)的二氯甲烷(60ml)溶液，然后緩慢加入三乙酰氧基硼氫化鈉(28.1g，132.8mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌14h，然后加入甲醇(100ml)，最后加入飽和nahco3(300ml)進行分液。有機相用飽和食鹽水(3×100ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得淺褐色固體，經(jīng)快速柱色譜純化得到淡黃色固體，收率在85至93％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟4:制備n-[1-(2-苯基乙基)-4-哌啶基]-n-(甲氧基取代的苯基)丙酰胺(21)將中間體20(4.8mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，加入二異丙基乙胺(1.68ml，9.6mmol)。溶液用冰水浴冷卻，滴入丙酰氯(0.83ml，9.6mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2h，然后加入蒸餾水(40ml)進行分液。有機相依次用飽和食鹽水(50ml)和飽和nahco3(50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得黃色固體，經(jīng)快速柱色譜純化得到淡黃色固體，收率在90至96％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟5:制備n-[1-(2-苯基乙基)-4-哌啶基]-n-(羥基取代的苯基)丙酰胺(22)在-78℃下向中間體21(4.9mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入三溴化硼(2.45g，9.8mmol)，混合物攪拌2h，加入蒸餾水(25ml)，分液，水層用二氯甲烷(2×25ml)提取，混合有機層用飽和食鹽水(50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在87至94％之間。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr確證。步驟6:制備pegn-(芬太尼b)2-b偶聯(lián)物(23)將中間體22(2.7mmol)和pegn-(oms)2(0.9mmol)溶于無水乙腈(40ml)中，加入無水k2co3(0.5g，3.6mmol)，升溫至回流后攪拌反應(yīng)16h。減壓蒸除溶劑后，將殘留物用二氯甲烷(100ml)溶解，有機層用蒸餾水(3×50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在75至83％之間。使用第二種方案制備的化合物包括：間位取代物peg1-(芬太尼)2-bm、peg2-(芬太尼)2-bm、peg3-(芬太尼)2-bm、peg4-(芬太尼)2-bm、peg5-(芬太尼)2-bm、peg6-(芬太尼)2-bm、peg7-(芬太尼)2-bm、peg8-(芬太尼)2-bm、peg9-(芬太尼)2-bm；對位取代物peg1-(芬太尼)2-bp、peg2-(芬太尼)2-bp、peg3-(芬太尼)2-bp、peg4-(芬太尼)2-bp、peg5-(芬太尼)2-bp、peg6-(芬太尼)2-bp、peg7-(芬太尼)2-bp、peg8-(芬太尼)2-bp、peg9-(芬太尼)2-bp；以及鄰位取代物peg1-(芬太尼)2-bo、peg2-(芬太尼)2-bo、peg3-(芬太尼)2-bo、peg4-(芬太尼)2-bo、peg5-(芬太尼)2-bo、peg6-(芬太尼)2-bo、peg7-(芬太尼)2-bo、peg8-(芬太尼)2-bo、peg9-(芬太尼)2-bo。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例6：制備pegn-(oms)3向250ml三口瓶中加入底物peg1-(oh)3(10.0g，42mmol)和二氯甲烷(100ml)，攪拌冷卻至0℃。滴入三乙胺(13.9g，168mmol)，反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。向反應(yīng)混合物中經(jīng)5-10分鐘加入甲基磺酰氯(19.2g，168mmol)，室溫攪拌12小時，用tlc監(jiān)控反應(yīng)進程。待反應(yīng)完全后，向反應(yīng)混合物中加入蒸餾水，然后用二氯甲烷(3×100ml)萃取。合并有機層，用蒸餾水(3×100ml)洗滌，用無水硫酸鈉干 燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至干，得到棕色油狀物16.3g，收率87.9％。1hnmr(400mhz，cdcl3):δ4.46(t，6h)，4.07(t，6h)，3.92(t，6h)，3.76(t，9h)，2.69(s，6h)。以同樣的方法制備其它的pegn-(oms)3(n＝2,3,4,5,6,7)，并用質(zhì)譜和1hnmr譜進行結(jié)構(gòu)確證。實施例7：制備pegn-(嗎啡)3偶聯(lián)物步驟1:制備6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)3(26)向甲苯/dmf(8倍/4倍體積)的混合溶液中加入3-o-mem-嗎啡(3.6-4.5倍當量)，隨后加入nah(12-18倍當量)，然后加入pegn-(oms)3。將反應(yīng)混合物加熱到55-75℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-40小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在15至30％之間。用此方法制備6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)3(n＝1,2,3,4,5,6,7)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟2:制備6-o-pegn-(嗎啡)3鹽酸鹽(27)將6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)3溶于二氯甲烷(20倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(18倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(20倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(嗎啡)3；α-6-o-peg2-(嗎啡)3；α-6-o-peg3-(嗎啡)3；α-6-o-peg4-(嗎啡)3；α-6-o-peg5-(嗎啡)3；α-6-o-peg6-(嗎啡)3；和α-6-o-peg7-(嗎啡)3。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例8：制備pegn-(可待因)3偶聯(lián)物步驟1:制備6-o-pegn-(可待因)3游離堿(28)向甲苯/dmf(24倍/1倍體積)的混合溶液中加入可待因(3.6-4.5倍當量)，隨后加入nah(12-18倍當量)，然后加入pegn-(oms)3。將反應(yīng)混合物加熱到45-65℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-48小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在12至25％之間。用此方法制備6-o-pegn-(可待因)3游離堿(n＝1,2,3,4,5,6,7)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟2:制備6-o-pegn-(可待因)3鹽酸鹽將6-o-pegn-(可待因)3游離堿溶于二氯甲烷(16倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(12倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(16倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(可待因)3；α-6-o-peg2-(可待因)3；α-6-o-peg3-(可待因)3；α-6-o-peg4-(可待因)3；α-6-o-peg5-(可待因)3；α-6-o-peg6-(可待因)3和α-6-o-peg7-(可待因)3。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例9：制備pegn-(羥考醇)3偶聯(lián)物步驟1:制備6-o-pegn-(羥考醇)3游離堿(29)向甲苯/dmf(8倍/4倍體積)的混合溶液中加入羥考醇(3.6-4.5倍當量)，隨后加入nah(12-18倍當量)，然后加入pegn-(oms)3。將反應(yīng)混合物加熱到60-80℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-40小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘 余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在15至30％之間。用此方法制備6-o-pegn-(羥考醇)3游離堿(n＝1,2,3,4,5,6,7)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟2:制備6-o-pegn-(羥考醇)3鹽酸鹽將6-o-pegn-(羥考醇)3游離堿溶于二氯甲烷(20倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(18倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(20倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(羥考醇)3；α-6-o-peg2-(羥考醇)3；α-6-o-peg3-(羥考醇)3；α-6-o-peg4-(羥考醇)3；α-6-o-peg5-(羥考醇)3；α-6-o-peg6-(羥考醇)3和α-6-o-peg7-(羥考醇)3。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例10：制備pegn-(芬太尼)3偶聯(lián)物第一種方案是將peg寡聚物共價附接在苯乙胺的苯基上，pegn-(芬太尼)3-a偶聯(lián)物(30)具體制備方法如下：將中間體15(2.7mmol)和pegn-(oms)3(0.9mmol)溶于無水乙腈(40ml)中，加入無水k2co3(0.75g，5.4mmol)，升溫至回流后攪拌反應(yīng)16h。減壓蒸除溶劑后，將殘留物用二氯甲烷(100ml)溶解，有機層用蒸餾水(3×50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在75至83％之間。用第一種方案方法制備pegn-(芬太尼)3-a偶聯(lián)物(n＝1,2,3,4,5,6,7)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。第二種方案是將peg寡聚物共價附接在苯胺的苯基上，pegn-(芬太尼)3-b偶聯(lián)物(31)具體制備方法如下：將中間體22(2.7mmol)和pegn-(oms)3(0.9mmol)溶于無水乙腈(40ml)中，加入無水k2co3(0.75g，5.4mmol)，升溫至回流后攪拌反應(yīng)16h。減壓蒸除溶劑后，將殘留物用二氯甲烷(100ml)溶解，有機層用蒸餾水(3×50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在75至83％之間。用第二種方案方法制備類似結(jié)構(gòu)的pegn-(芬太尼)3-b偶聯(lián)物(n＝1,2,3,4,5,6,7)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例11：制備pegn-(oms)4向250ml三口瓶中加入底物peg1-(oh)4(10.0g，32mmol)和二氯甲烷(100ml)，攪拌冷卻至0℃。 滴入三乙胺(15.5g，153.6mmol)，反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。向反應(yīng)混合物中經(jīng)5-10分鐘加入甲基磺酰氯(22.2g，153.6mmol)，室溫攪拌12小時，用tlc監(jiān)控反應(yīng)進程。待反應(yīng)完全后，向反應(yīng)混合物中加入蒸餾水，然后用二氯甲烷(3×100ml)萃取。合并有機層，用蒸餾水(3×100ml)洗滌，用無水硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至干，得到棕色油狀物17.6g，收率87.3％。1hnmr(400mhz，cdcl3):δ4.48(t，8h)，4.42(t，8h)，4.17(t，8h)，3.78(t，8h)。以同樣的方法制備其它的pegn-(oms)4(n＝2,3,4,5)，并用質(zhì)譜和1hnmr譜進行結(jié)構(gòu)確證。實施例12：制備pegn-(嗎啡)4偶聯(lián)物步驟1:制備6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)4(32)向甲苯/dmf(8倍/4倍體積1)的混合溶液中加入3-o-mem-嗎啡(4.8-6倍當量)，隨后加入nah(16-24倍當量)，然后加入pegn-(oms)4。將反應(yīng)混合物加熱到55-75℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-40小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在15至30％之間。用此方法制備6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)4(n＝1,2,3,4,5)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟2:制備6-o-pegn-(嗎啡)4鹽酸鹽將6-o-pegn-(3-o-mem-嗎啡)4(32)溶于二氯甲烷(20倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(16倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(20倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(嗎啡)4；α-6-o-peg2-(嗎啡)4；α-6-o-peg3-(嗎啡)4；α-6-o-peg4-(嗎啡)4和α-6-o-peg5-(嗎啡)4。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例13：制備pegn-(可待因)4偶聯(lián)物步驟1:制備6-o-pegn-(可待因)4游離堿(34)向甲苯/dmf(24倍/1倍體積)的混合溶液中加入可待因(4.8-6倍當量)，隨后加入nah(16-24倍當量)，然后加入pegn-(oms)4。將反應(yīng)混合物加熱到45-65℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-48小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在12至25％之間。用此方法制備制備6-o-pegn-(可待因)4游離堿(n＝1,2,3,4,5)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟2:制備6-o-pegn-(可待因)4鹽酸鹽將6-o-pegn-(可待因)4游離堿溶于二氯甲烷(20倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(16倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(20倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(可待因)4；α-6-o-peg2-(可待因)4；α-6-o-peg3-(可待因)4；α-6-o-peg4-(可待因)4和α-6-o-peg5-(可待因)4。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例14：制備pegn-(羥考醇)4偶聯(lián)物(35)步驟1:制備6-o-pegn-(羥考醇)4游離堿(35)向甲苯/dmf(8倍/4倍體積)的混合溶液中加入羥考醇(4.8-6倍當量)，隨后加入nah(16-24倍當量)，然后加入pegn-(oms)4。將反應(yīng)混合物加熱到60-80℃并保溫攪拌至通過lc-ms分析(取決于peg鏈長，12-40小時)證實反應(yīng)完成為止。用無水甲醇(10倍體積)終止反應(yīng)，將反應(yīng)混合物減壓濃縮至干。將殘余物用biotage快速純化制備液相色譜進行純化得黃色至橙色油狀物，收率在15至30％之間。用此方法制備6-o-pegn-(羥考醇)4游離堿(n＝1,2,3,4,5)，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。步驟2:制備6-o-pegn-(羥考醇)4鹽酸鹽將6-o-pegn-(羥考醇)4游離堿溶于二氯甲烷(20倍體積)中，加入2mhcl的乙醚溶液(16倍體積)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時，減壓蒸除溶劑。將殘余物溶于無水甲醇(20倍體積)中，過濾。將濾液減壓濃縮至干得黃色至橙色油狀物，收率在95至100％之間，hplc純度(uv254)在95至98％之間。通過這種方法制備的化合物包括：α-6-o-peg1-(羥考醇)4；α-6-o-peg2-(羥考醇)4；α-6-o-peg3-(羥考醇)4；α-6-o-peg4-(羥考醇)4和α-6-o-peg5-(羥考醇)4。產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例15：制備pegn-(芬太尼)4偶聯(lián)物第一種方案是將peg寡聚物共價附接在苯乙胺的苯基上，pegn-(芬太尼)4-a偶聯(lián)物(36)具體制備方法如下：將中間體15(3.6mmol)和pegn-(oms)4(0.9mmol)溶于無水乙腈(40ml)中，加入無水k2co3(1.0g，7.2mmol)，升溫至回流后攪拌反應(yīng)16h。減壓蒸除溶劑后，將殘留物用二氯甲烷(100ml)溶解，有機層用蒸餾水(3×50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在75至83％之間。使用第一種方案方法制備pegn-(芬太尼)4-a偶聯(lián)物，n分別為1、2、3、4、5，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。第二種方案是將peg寡聚物共價附接在苯胺的苯基上，pegn-(芬太尼)4-b偶聯(lián)物(37)具體制備方法如下：將中間體22(3.6mmol)和pegn-(oms)4(0.9mmol)溶于無水乙腈(40ml)中，加入無水k2co3(1.0g，7.2mmol)，升溫至回流后攪拌反應(yīng)16h。減壓蒸除溶劑后，將殘留物用二氯甲烷(100ml)溶解，有機層用蒸餾水(3×50ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，殘留物用快速柱色譜純化得淡黃色固體，收率在75至83％之間。使用第二種方案方法制備pegn-(芬太尼)4-b偶聯(lián)物，n分別為1、2、3、4、5，產(chǎn)品經(jīng)1hnmr和lc-ms確證。實施例16：藥代動力學(xué)實驗16.1聚乙二醇阿片類藥物的血腦通透性實驗實驗方法：雌sd大鼠靜脈給藥后(各樣品劑量均為5mg/kg)10min，60min及180min(每時間點3只動物)時進行心臟采血4-5ml(肝素抗凝)，離心分離血漿，4℃保存?zhèn)溆?。采血后立即斷頭處死，取出整個腦組織，剝離腦膜、血管，用少量生理鹽水沖洗，用濾紙吸干，稱重。將腦組織按腦重量1.5倍加入生理鹽水，冰浴中勻漿后置于試管，加蓋，置4℃保存至分析。根據(jù)檢測結(jié)果計算各樣品的腦：血漿比率，實驗結(jié)果參見表1。表1實驗結(jié)果表明，聚乙二醇化后，嗎啡、芬太尼等阿片類藥物進入腦組織的數(shù)量不同程度減少。而且由于分子量增大，其從腦內(nèi)消除的速度也相應(yīng)減慢，在所測的3個時間點，腦內(nèi)的藥物濃度較平緩。至藥后180分鐘時，腦內(nèi)的聚乙二醇藥物濃度都高于血內(nèi)濃度?，F(xiàn)在普遍認為，阿片類藥物的成癮性形成與其快速進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)。因此，peg化后的阿片類藥物以上的血腦通透性特點，利于阿片類藥物發(fā)揮長效的鎮(zhèn)痛作用，并降低藥物的成癮風險。16.2各聚乙二醇阿片類藥物的口服生物利用度評價實驗方法：sd大鼠經(jīng)腹腔注射40mg/kg的1％戊巴比妥鈉麻醉后，頸后、頸前部備皮，碘伏消毒。于頸部正中偏右剪開皮膚，暴露頸靜脈。將靜脈導(dǎo)管插入血管后，結(jié)扎，并縫合開口處皮膚。手術(shù)結(jié)束后，在導(dǎo)管內(nèi)注射肝素鈉溶液約0.2ml，封閉液0.1ml，此后每天進行更換，持續(xù)一周。一周后大鼠手術(shù)傷口全部愈合，導(dǎo)管固定確切，反復(fù)取血通暢，可用于本項目的藥代動力學(xué)研究。將手術(shù)成功的大鼠，按 體重隨機分組，每組3只動物，實驗前禁食12小時。各受試物均通過口服及靜脈兩種途徑給藥，劑量分別為50mg/kg及10mg/kg?？诜o藥組動物分別在藥前及藥后10min,30min,1hr,2hr,4hr,6hr,8hr及24hr經(jīng)插管取血；靜脈給藥組分別在藥前及藥后5min,10min,30min,1hr,2hr,4hr,8hr及24hr經(jīng)插管取血。離心取血漿，lc-ms/ms檢測各樣本藥物濃度，實驗結(jié)果參見表2～3。表2：各受試藥物靜脈給藥藥代參數(shù)表3：各受試藥物口服給藥藥代參數(shù)由上述實驗結(jié)果可知，peg化后的藥物口服生物利用度相對于原形藥物有不同程度升高。但不同數(shù)量peg的化合物的口服生物利用度存在較大的差異。總體而言，4-6個peg的化合物的口服生物利用度較好。其它過長或過短peg鏈的化合物，都顯示出明顯的吸收損失現(xiàn)象。此外，隨著peg長度的 增加，各peg形式的化合物顯示出更低的清除率、在穩(wěn)態(tài)下更高的分布容積及更長的消除半衰期。16.3單端、三端和四端化合物的藥代動力學(xué)實驗為了觀察其它連接方式的聚乙二醇嗎啡的藥代動力學(xué)特性，按照上述實驗方法，對2,4,6單元peg的單端、三端及四端化合物的腦通透性、口服生物利用度及血液藥代特性進行了評價。結(jié)果顯示，與雙端化合相比，三端及四端化合物的口服利用度明顯降低，分別在2.1％-7.6％及1.9％-5.3％之間；腦通透性的趨勢與之相同，也較雙端化合物明顯降低，分別相當于相同單元peg雙端化合物的10％-30％。而單端化合物的口服利用度和腦通透性則明顯好于相同單元peg的雙端化合物，兩指標都可達雙端化合物的約1.5倍。實施例17：鎮(zhèn)痛實驗17.1扭體實驗實驗方法：icr小鼠按體重隨機分組，每組10只，分別靜脈給予各受試品10mg/kg，對照組小鼠給予等量蒸餾水。給藥半小時后小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸(0.2ml/只)。記錄小鼠在20min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)(腹部收縮成“s”形、身體扭曲、后肢伸展及蠕行等)的次數(shù)，實驗結(jié)果參見表4。表4受試藥物n劑量(mg/kg)扭體次數(shù)ns10-42.5±7.2嗎啡10510.2±2.1芬太尼100.0758.8±1.2可待因103013.4±3.1羥考酮1059.9±3.2α-6-o-mpeg4-嗎啡*101012.1±2.3α-6-o-mpeg6-嗎啡*101015.3±3.4α-6-o-peg4-(嗎啡)2101020.1±2.3α-6-o-peg6-(嗎啡)2101024.3±3.4α-6-o-peg4-(嗎啡)3101028.8±1.9α-6-o-peg6-(嗎啡)3101034.2±2.2α-6-o-peg3-(嗎啡)4101034.6±5.3α-6-o-peg5-(嗎啡)4101032.3±6.3peg4-(芬太尼)2-am10117.8±3.8peg6-(芬太尼)2-am10119.7±1.8α-6-o-peg4-(可待因)2103031.3±4.1α-6-o-peg6-(可待因)2103034.1±3.3α-6-o-peg4-(羥考醇)2101018.8±2.8α-6-o-peg6-(羥考醇)2101020.1±2.1*按文獻(cn102159249a)方法制備。實驗結(jié)果表明，peg化后各阿片類鎮(zhèn)痛藥物的鎮(zhèn)痛活性都有所減弱。整體而言，受試藥物的鎮(zhèn)痛效果整體上的趨勢為隨peg單元的增加而減弱。單端和雙端的樣品鎮(zhèn)痛效果較明顯，三端及四端的樣品的鎮(zhèn)痛效果則相對而言較差。17.2甩尾實驗實驗方法：icr小鼠根據(jù)體重隨機分組，每組10只動物。尾靜脈注射各對照藥及受試品，嗎啡對照藥的劑量為5mg/kg，其它受試品的劑量與扭體實驗相同。熱痛測試是采用熱輻射痛覺測試儀，將熱輻射值調(diào)為恒定的50單位。檢測時，小鼠安靜后開始計時，直到小鼠出現(xiàn)甩尾時自動停止計時，記錄熱痛儀顯示的時間，單位以“秒”表示。共檢測給藥前(基礎(chǔ)值)、給藥后15分鐘、給藥后1小時、2小時、6小時及24小時的熱痛值，試驗結(jié)果參加表5。表5實驗結(jié)果表明，peg化阿片類藥物的鎮(zhèn)痛強度的峰值相對于原形藥物而言，均有不同程度的下降。但同時可觀察到，peg化藥物鎮(zhèn)痛時間相對原形藥物明顯延長，尤其雙端的受試品，至藥后24小時時，仍具有一定程度的鎮(zhèn)痛作用。單端化合物的鎮(zhèn)痛時間相較于原形藥物也有一定程度的延長，在藥后6小時仍具有一定程度的鎮(zhèn)痛作用。原形藥物在藥后兩小時還有較明顯的藥效，但在6小時普遍已觀察不到鎮(zhèn)痛作用。17.3大鼠自身給藥實驗實驗方法：大鼠隨機分為對照組和模型組，每組8只。大鼠全部行右側(cè)頸靜脈長期置管術(shù)，術(shù)后第6天起進 行每天2小時的自身給藥訓(xùn)練，訓(xùn)練程序為固定比率的fr1程序(即大鼠觸碰鼻觸一次可獲得藥物注射一次)，模型組(給予嗎啡、羥考酮及可待因)注射藥物為濃度為15mg/ml的溶液(50μl/次，即0.75mg/劑/注射)，對照組為生理鹽水(50μl/次)。每個受試品測試三個劑量，即0.75mg/劑/注射，7.5mg/劑/注射及75mg/劑/注射。以實驗第11天時大鼠觸鼻次數(shù)為指標，評價各藥物的成癮風險，試驗結(jié)果參見表6。表6實驗結(jié)果證實，peg化后，嗎啡和芬太尼兩個藥物的成癮風險均明顯降低，在所測試的劑量范圍內(nèi)，大鼠的自身給藥次數(shù)較原形藥物明顯減少。原形藥物自身給藥次數(shù)遠遠多于100倍劑量的peg化形式的藥物。單端與雙端的化合物比較而言，雙端peg嗎啡的成癮性降低更為明顯，在所測試的劑量范圍內(nèi)，自身給藥次數(shù)均與生理鹽水組相近。當前第1頁12