抗gcc抗體分子及其相關(guān)組合物和方法
【專利摘要】本發(fā)明揭示結(jié)合GCC的抗體和抗體的抗原結(jié)合片段。所述抗體結(jié)合GCC的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域且可內(nèi)在化。在一些實施例中,所述抗體為人源化、嵌合或人類抗體。也揭示編碼所述抗體或其部分的核酸和載體、含有所述核酸的重組細(xì)胞以及包含所述抗體或抗原結(jié)合片段的組合物。本發(fā)明還提供利用本文所提供的抗體和抗原結(jié)合片段的治療方法和診斷方法。
PTA-8132
20070110
【專利說明】抗GCC抗體分子及其相關(guān)組合物和方法
[0001] 本申請是申請日為2010年10月22日、申請?zhí)枮?01080043591.0、發(fā)明名稱為"抗 GCC抗體分子及其相關(guān)組合物和方法"的發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002] 相關(guān)申請案
[0003] 本申請案主張2009年10月23日申請的美國臨時申請案第61/254, 474號的權(quán)益。 美國臨時申請案第61/254, 474號的全部內(nèi)容W引用的方式并入本文中。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0004] 本發(fā)明涉及結(jié)合GCC的抗體分子,W及相關(guān)分子(例如編碼所述抗體分子的核 酸)、組合物和相關(guān)方法(例如治療和診斷方法)。
【背景技術(shù)】
[0005] 鳥巧酸環(huán)化酶C (Guan^^ cyclase C,GCC)是一種跨膜細(xì)胞表面受體, 其功能在于維持腸液、電解質(zhì)體內(nèi)平衡和細(xì)胞增殖,參見例如凱里瑟(Carrithers) 等人,美國國家科學(xué)院院刊(Proc.化 tl. Acad. Sci. USA) 100:3018-3020 (2003)。 GCC于襯在小腸、大腸和直腸內(nèi)的粘膜細(xì)胞上表達(dá)(凱里瑟等人,結(jié)腸與直腸疾 病值is Colon Rectum) 39:171-181 (1996))。GCC的表達(dá)在腸上皮細(xì)胞發(fā)生致瘤 性轉(zhuǎn)化時被維持,并且在所有原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸腫瘤中都有表達(dá)(凱里 瑟等人,結(jié)腸與直腸疾病,39:171-181 (1996);布克炬UC)等人,歐洲癌癥雜志 巧 ur J Cancer) 41:1618-1627 (2005);凱里瑟等人,胃腸病學(xué)(Gastroenterolo gy)107:1653-1661(1994))。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本
【發(fā)明者】已經(jīng)發(fā)現(xiàn)眾多抗GCC抗體,包括人類與鼠類抗體。因此,在一個方面中, 本發(fā)明的特征在于一種抗GCC抗體分子,如本文所掲示??笹CC抗體分子適用作裸抗體分 子且適用作免疫偶聯(lián)物的組分。因此,在另一個方面中,本發(fā)明的特征在于免疫偶聯(lián)物,其 包含抗GCC抗體分子和治療劑或標(biāo)記。本發(fā)明的特征也在于醫(yī)藥組合物,其包含本文所述 的抗GCC抗體分子和免疫偶聯(lián)物。本發(fā)明的特征還在于使用本文所述的抗GCC抗體分子和 免疫偶聯(lián)物用于W下的方法;檢測GCC和表達(dá)GCC的細(xì)胞或組織;對GCC介導(dǎo)的疾病進(jìn)行診 斷、預(yù)后、成像或分期;調(diào)節(jié)GCC蛋白的活性或功能;和治療GCC介導(dǎo)的疾病,如本文所述。 在另一個方面中,本發(fā)明的特征也在于編碼抗GCC抗體分子氨基酸序列的經(jīng)分離和/或重 組核酸,W及包含所述核酸的載體和宿主細(xì)胞,和用于制備抗GCC抗體分子的方法。
[0007] 本文提到的所有出版物、專利申請案、專利和其它參考文獻(xiàn)都W全文引用的方式 并入本文中。
[000引本文所掲示的本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)勢將由實施方式和圖式W及權(quán)利要求 書而顯而易知。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0009] 圖1描繪用5F9VC-MMAF、-DM1和-DM4 W ql4d時間表處理的帶有293-GCC#2的 SCID小鼠中的腫瘤生長。
[0010] 圖2描繪用0. 9%化C1 ;40mg/kg的209抗體;或10或40mg/kg的5F9抗體處理 的小鼠在接種后第41天的肺重量。
[0011] 圖3描繪用5F9抗體處理的帶有CT26-hGCC腫瘤的小鼠的存活曲線。
[0012] 圖4描繪測試GCC直系同源物的抗體交叉反應(yīng)性的ELISA結(jié)合分析。
【具體實施方式】
[001引 鳥巧酸環(huán)化酶C
[0014] 鳥巧酸環(huán)化酶"GCC)(又稱STAR、ST受體、GUC2C和GUCY2C)是一種跨膜細(xì)胞 表面受體,其功能在于維持腸液、電解質(zhì)體內(nèi)平衡和細(xì)胞增殖(凱里瑟等人,美國國家科 學(xué)院院刊,100:3018-3020(2003);曼恩(Mann)等人,生物化學(xué)與生物物理學(xué)研究通訊 炬 iochem Bio 地 ys Res Commun) 239:463-466(1997);皮培雷(Pitari)等人,美國國家科 學(xué)院院刊,100:2695-2699(2003));基因庫(GenBank)寄存編號NM_004963,其各自均W引 用的方式并入本文中)。此功能是經(jīng)由結(jié)合鳥巧素(guanylin)介導(dǎo)(維嘉德(Wiegand) 等人,歐洲生物學(xué)化學(xué)會聯(lián)盟快報(陽BS Lett.)311:150-154(1992))。GCC也為熱穩(wěn)定腸 毒素(ST,例如氨基酸序列為NTFYCCELCCNPACAGCY,SEQ ID N0:316)的受體,熱穩(wěn)定腸毒素 是由大腸桿菌巧.coli) W及其它感染性生物體產(chǎn)生的膚(饒M.C. (Rao,M.C.),諾華基金 會研討會文集(Ciba Found. Symp.) 112:74-93(1985);克努普 F.C. (Knoop F.C.)和歐文斯 M. (Owens, M.),藥理與毒理方法雜志(J.Wiarmacol. Toxicol. Methods) 28:67-72 (1992))。 ST結(jié)合于GCC活化導(dǎo)致腸道疾?。ɡ绺篂a)的信號級聯(lián)。
[001引人類GCC的核巧酸序列(基因庫寄存編號NM_004963):
[0016]
【權(quán)利要求】
1. 一種抗GCC抗體分子,其中所述抗GCC抗體分子的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)選自: 表2中所揭示任一以下抗體的輕鏈和重鏈序列: 5F9 ; Ab229 ;或 3G1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗GCC抗體分子,其中所述抗GCC抗體分子為IgGl抗體。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗GCC抗體分子,其中所述抗GCC抗體分子未偶聯(lián)到治療劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗GCC抗體分子,其中所述抗GCC抗體分子偶聯(lián)到治療劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗GCC抗體分子,其中所述抗GCC抗體分子偶聯(lián)到可檢測標(biāo) 記。
6. -種抗GCC抗體分子,其包含表5中所揭示任一以下抗體的輕鏈⑶RlXDR2和⑶R3 以及重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3 : 5F9 ; Ab229 ;或 3G1。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗GCC抗體分子,其進(jìn)一步包含人類或人類來源的輕鏈和重 鏈可變區(qū)框架。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗GCC抗體分子,其中所述抗GCC抗體分子為IgGl抗體。
9. 一種式(I)的免疫偶聯(lián)物,
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽,其中: Ab為根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗GCC抗體分子; X為連接Ab與Z的連接子部分; Z為治療劑或標(biāo)記;且m為1到15的整數(shù)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的免疫偶聯(lián)物,其中Z為可檢測標(biāo)記。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的免疫偶聯(lián)物,其中-Z為美登素(maytansine)或奧瑞他汀 (auristatin)〇
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的免疫偶聯(lián)物,其中-Z為DMl或DM4。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的免疫偶聯(lián)物,其中-Z為MMAE或MMAF。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的免疫偶聯(lián)物,其中所述連接子-X-具有式-Aa-Ww-Yy-,且所 述免疫偶聯(lián)物的特征為式(II):
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽,其中: -A-為延伸子單元; a為O或I; 各-W-獨(dú)立地為氨基酸單元;w為在O到12范圍內(nèi)的整數(shù); -Y-為自我分解型(self-immolative)間隔子單元;y為0、1或2 ; Z為治療劑或標(biāo)記;且m在約1到約15的范圍內(nèi)。
15. -種式(1-4)的免疫偶聯(lián)物,
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽,其中: Ab為5F9 ;且m為1到8的整數(shù)。
16. -種式(1-5)的免疫偶聯(lián)物,
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽,其中: Ab為5F9 ;且m為1到8的整數(shù)。
17. -種式(1-7)的免疫偶聯(lián)物,
或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽,其中: Ab為5F9 ;且m為1到8的整數(shù)。
18. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的免疫偶聯(lián)物,其中m為1到3。
19. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的免疫偶聯(lián)物,其中m為3到5。
20. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的免疫偶聯(lián)物,其中m為3到5。
21. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的免疫偶聯(lián)物,其中m為3到5。
22. -種治療患有結(jié)腸癌的個體的方法,其包含投予所述個體治療有效量的根據(jù)權(quán)利 要求1或6所述的抗體分子,由此治療所述個體。
23. -種治療患有結(jié)腸癌的個體的方法,其包含投予所述個體治療有效量的根據(jù)權(quán)利 要求9到17中任一權(quán)利要求所述的免疫偶聯(lián)物。
24. -種分離的核酸序列,其編碼根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的抗體分子。
25. -種細(xì)胞,其包含根據(jù)權(quán)利要求24所述的分離的核酸序列。
26. -種制備根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的抗體分子的方法,其包含在允許產(chǎn)生抗體分 子的條件下培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求25所述的細(xì)胞,由此產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的抗體分 子。
27. -種載體,其包含根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的抗體分子的所述輕鏈和重鏈中的一者 或兩者。
28. -種檢測GCC分子的方法,其包含使所述分子與根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的抗體分 子接觸,和確定所述抗體分子是否結(jié)合到所述GCC分子。
【文檔編號】A61P35/00GK104447996SQ201410653631
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2010年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2009年10月23日
【發(fā)明者】塞繆爾·S·納姆, 愛德華·A·格林菲爾德, 約翰·巴布庫克, 特雷莎·奧基夫, 秦士新 申請人:米倫紐姆醫(yī)藥公司, 安美基卑斯公司