一種聚乙二醇干擾素偶聯物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種聚乙二醇干擾素偶聯物，其制備方法，以及含有治療有效量的該干擾素偶聯物的藥物組合物，及其在制備抗病毒、抗腫瘤、免疫調節(jié)藥物中的用途。
【專利說明】一種聚乙二醇干擾素偶聯物
[0001] 本申請是申請?zhí)枮?01280002760. 5,申請日為2012年5月23日，發(fā)明名稱為"一 種聚乙二醇干擾素偶聯物"的中國專利申請的分案申請。

【技術領域】
[0002] 本發(fā)明涉及一種聚乙二醇干擾素偶聯物，該偶聯物通過一種新穎的生物蛋白分子 的聚乙二醇修飾技術合成，具有抗病毒感染、抗腫瘤、免疫調節(jié)等生物學活性，本發(fā)明的應 用領域涉及生物化學、藥物化學以及人類疾病的治療。

【背景技術】
[0003] 干擾素（Interferon)是一組具有多種功能的活性蛋白質，是一類重要的家族性 細胞因子，具有廣譜的抗病毒、抗細胞增殖、和免疫調節(jié)作用。哺乳動物的干擾素可以分為 α、β、Υ、ω等幾種類型，其中α干擾素又可分十余種亞型，經大量臨床研究證明α型干 擾素是一種重要的抗病毒和抗腫瘤治療藥物。目前我國在臨床使用最廣泛的主要是重組人 干擾素 a lb、a 2b和a 2a。另外，美國Amgen公司根據13種α型干擾素的基因序列同源 性，設計出的一種全新的蛋白質工程藥物干復津（INFERGEN?，IFN-Con-1)于1997年 經FDA批準上市用于治療丙型肝炎，其病毒活性是a 2b干擾素的5?10倍。
[0004] 但是，一般來說，許多有生物技術（如基因重組）表達所得的產品，包括干擾素，都 是通過非腸道給藥途徑而進入生物體內發(fā)揮其藥效作用。此類由非腸道給藥的生物大分子 藥物產品通常存在下面的一些問題：（1)生物大分子藥物往往具有致敏性反應，生物體內 產生的抗體會對生物體造成嚴重的傷害并影響治療的進行；(2)生物大分子藥物本身因受 到抗體的影響或因蛋白分解酶而引起的代謝作用，致使其生物半衰期大為縮短；（3)生物 大分子的穩(wěn)定性差，保存困難。所以，無論是干擾素 alb、a 2b和a 2a還是干復津，作為蛋 白質藥物，由于穩(wěn)定性差，血漿清除率高，體內半衰期短，易產生抗原抗體反應等，在臨床治 療中受到很大的限制，這些缺點造成的結果是：需頻繁注射干擾素才能達到有效的血漿治 療濃度；而且，每次注射后均會導致血液濃度的較大波動，形成藥物濃度的峰值與谷值。這 樣就可能增加了治療費用以及給藥不便和不良反應的風險。因此，人們試圖采用各種藥物 傳遞技術（Drug Delivery Technology),來提高蛋白質藥物的療效。而目前在藥物傳遞技 術中研究最為廣泛的是聚乙二醇修飾技術（PEGN0L0GY)。
[0005] 1980年，Davis等人在美國專利4, 179, 337中公開了利用單一分子不同聚合度 的聚乙二醇對蛋白藥物進行的化學修飾，在保持藥物的生物活性同時，藥物的抗原性降低， Verones等人在Applied Biochem and Biotech 11，142(1985)上公開發(fā)表了用氯甲酸苯酯 活化的聚乙二醇修飾核糖核酸酶和超氧化物歧化酶，增加了蛋白的生物半衰期。上述現有 技術文獻報導已表明聚乙二醇修飾技術的確可以解決非腸道給藥生物大分子藥物存在的 一些問題。
[0006] 目前，市場上已經有兩種聚乙二醇化干擾素產品，分別是Schering Plough公司的 PEG-IFNa 2b(PEG-INTR0N)與 Hoffman-la Roche 公司的 PEG-IFNa 2a(PEGASYS)，提高了干 擾素在體內的半衰期，達到每周注射一次，使得干擾素的生物利用度得到了一定程度的提 升。這兩個產品已占有國外干擾素市場60 %，獲得了巨大的經濟效益。


【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種生物學活性更好、生物利用度更高的的聚乙二醇修飾 的干擾素偶聯物，其結構如式（I )所示：
[0008] p-nh-ch2-x-s-y-q
[0009] ( I )
[0010] 其中，P是干擾素，包括所有類型的干擾素，以及這些類型所有的亞類，以及不同類 型和/或亞類干擾素組成的復合干擾素；P可以是任何來源的，包括天然來源、組織培養(yǎng)或 由基因重組技術得到的干擾素；P優(yōu)選天然的或人工重組的干擾素蛋白，更優(yōu)選重組人干 擾素，更優(yōu)選重組人干擾素 α、β、Y或ω，最優(yōu)選a 2b ;P既可通過本領域公開的技術制 得，也可在市場上購得；
[0011] X是-(CH2)k-或-CH2(0CH2CH 2)k-，k選自2?10的整數，優(yōu)選1?4,進一步優(yōu)選 為2 ;
[0012] Q為甲氧基聚乙二醇，其平均分子量優(yōu)選5, 000?40, 000道爾頓，更優(yōu)選20, 000 道爾頓；
[0013] Y選自Y1?Y12,其中，m、n各自獨立地選自2?10的整數，優(yōu)選為2，
[0014]
[0015]

【權利要求】
1. 一種結構如式（I)所示的干擾素偶聯物， p-nh-ch2-x-s-y-q (I) 其中，P是干擾素；X是-(CH2)k-或-CH2(OCH2CH 2)k-，k選自1?10的整數；Q是甲氧基 聚乙二醇；Y選自Y1?Y12 :

其中m、n各自獨立地選自2?10之間的整數。
2.根據權利要求1所述的干擾素偶聯物，其特征在于，所述偶聯物選自式（II )? (XIII)所示化合物：

其中，P是干擾素，X是_(CH2)k-或-CH2(OCH2CH 2)k-，k選自1?10，m、n各自獨立地選 自2?10之間的整數，1?選自100?2000之間的整數。
3. 根據權利要求1或2所述的干擾素偶聯物，其特征在于，所述干擾素選自所有類型的 干擾素及其亞類中的任意一種，或者不同類型和/或亞類干擾素組成的復合干擾素。
4. 根據權利要求3所述的干擾素偶聯物，其特征在于，所述干擾素是重組人干擾素 α、 β、Υ或ω，優(yōu)選重組人干擾素 α，更優(yōu)選重組人干擾素 a 2b。
5. 根據權利要求4所述的干擾素偶聯物，其特征在于，m = 2, η = 2。
6. 根據權利要求5所述的干擾素偶聯物，其特征在于，X是- (CH2)k-，k為1?4之間 的整數，優(yōu)選k = 2。
7. 根據權利要求6所述的干擾素偶聯物，其特征在于，mi選自450-600之間的整數。
8. 根據權利要求7所述的干擾素偶聯物，其特征在于，每個甲氧基聚乙二醇基團的平 均分子量為5, 000-40, 000道爾頓，優(yōu)選為20, 000道爾頓。
9. 一種制備權利要求1-8任意一項所述干擾素偶聯物的方法，其包括以下步驟： 1) 干擾素和含有已保護巰基的醛類物質反應，形成通過-nh-ch2-鍵連接的活化干擾素 蛋白； 2) 所述活化的干擾素蛋白脫保護，與活性甲氧基聚乙二醇衍生物偶聯。
10. 根據權利要求9所述的方法，其特征在于所述醛類物質是式（XIV)的小分子醛化 合物，
其中k的數目選自2?10之間的整數，優(yōu)選2。
11. 根據權利要求9或10所述的方法，其特征在于所述活性甲氧基聚乙二醇衍生物是 通式為（XVI)的活化甲氧基聚乙二醇， AG選自：

其中m、η的數目選自2?10之間的整數，優(yōu)選2。
12.根據權利要求9所述的方法，包括以下步驟： 1) 制備結構通式為（XIV)的小分子醛化合物，
其中k的數目選自2?10之間的整數，優(yōu)選2 ; 2) 將結構通式為（XIV)的小分子醛化合物與干擾素在緩沖液里反應，并加入還原劑 得到結構通式為（XV )的活化干擾素，
其中P是指干擾素，優(yōu)選重組人干擾素 a 2b ; 3) 在含有活化干擾素的緩沖液里加入脫保護劑脫去結構通式為（X V )的活化干擾素 的乙?；Ｗo基，隨后加入結構通式為（XVI)的活化甲氧基聚乙二醇進行聚乙二醇化反 應，得到聚乙二醇干擾素偶聯物，

其中m、η的數目選自2?10之間的整數，優(yōu)選2 ; 4)純化聚乙二醇干擾素偶聯物。
13. -種藥物組合物，其包含： 1) 如權利要求1-8任意一項所述的治療有效量的聚乙二醇化干擾素偶聯物； 2) 藥學可接受的藥物載體。
14. 權利要求1-8所述的聚乙二醇化干擾素偶聯物，權利要求10所述的藥物組合物，在 制備抗病毒、抗腫瘤、免疫調節(jié)藥物中的用途；優(yōu)選在制備治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎和 戊型肝炎、帶狀皰疹、扁平和尖銳濕疣、乳頭瘤病毒感染、流行性出血熱、小兒呼吸道合胞病 毒肺炎、毛細胞性白血病、慢性粒細胞白血病、黑色素瘤、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腎細胞癌、 卵巢癌、直腸癌、肝癌、肺癌的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P31/20GK104151421SQ201410394786
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2012年5月23日 優(yōu)先權日:2011年6月14日
【發(fā)明者】王亞里, 呂愛鋒, 孫長安, 王瑞軍, 李蘊波, 房雷, 徐剛 申請人:江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司