質子泵抑制劑的新應用的制作方法
【專利摘要】質子泵抑制劑諸如奧美拉唑本身能夠發(fā)揮對實體瘤的抗腫瘤作用，并且當被用作預處理時，能夠基本上完全恢復這些存在抗性的腫瘤的藥物敏感性。
【專利說明】質子泵抑制劑的新應用
[0001]本申請是申請日為2005年2月14日的中國專利申請200580012362.1的分案申請。
[0002]本發(fā)明提供質子泵抑制劑，諸如奧美拉唑，在抗腫瘤治療中的應用。
[0003]現有的抗腫瘤方法已經表現出低水平的抗實體瘤的功效，以及高的體內全身性毒性，并且存在對于具有低全身性毒性的新的抗腫瘤方法的需要。
[0004]我們最近的數據表明腫瘤的惡性和入侵性與兩種主要機制相關:(i)異常的吞噬活性(Lugini等,2003);和，(ii)釋放能夠通過Fas-介導的凋亡機制殺死淋巴細胞的外來體(Andreola等，2002)?？梢韵胂笠环N普通機制聯系這兩種機制，其可能包括強酸化小泡的運輸，屬于強大的溶酶體網絡。對肌動蛋白細胞骨架與溶酶體膜聯系的抑制可以消弱這些腫瘤功能。
[0005]在癌癥細胞內，已經研究pHi (細胞內pHi)對于細胞生長、細胞運動性、腫瘤發(fā)生、轉移和程序性細胞死亡的影響(Perona等，1988 ；Schlappack等，1991 ；Gottlieb等，1995 ；Helmlinger 等，1997 ;Martinez_Zaguilan 等.,1998)。
[0006]實體瘤的微環(huán)境包含低氧合和高酸性的區(qū)域。來自臨床和實驗研究的越來越多的證據指出酸性腫瘤微環(huán)境在轉移進展中的重要作用(Subarsky和Hill, 2003)。減少的p02,酸度和營養(yǎng)的缺乏改變基因表達。在血管發(fā)生，組織重塑和存活中起作用的基因是腫瘤細胞存活所必需的，并且，在轉移進展中起關鍵作用(Subarsky和Hill，2003)。
[0007]實體瘤的細胞外(間質的)pH比正常組織的pH顯著更酸(Izumi H等，2003)。盡管數據有限，在人體中的PH測定表明腫瘤和正常組織之間的差異(Tannock和Rotinl989)。并且，酸性的細胞內細胞器也可以參與對化學治療藥物的抗性(Altan等，1998 ；Hurwitz等，1997 ；Schindler 等，1996 ；Larsen 等，2000 ;Raghunand 等，1999 ；0uar 等，1999)，因此賦予腫瘤細胞累積的整體選擇優(yōu)勢。
[0008]已經提議將腫瘤所顯示的酸性作為區(qū)分腫瘤組織和健康組織的潛在有用的工具。可能的腫瘤功能，其中細胞外環(huán)境和溶酶體區(qū)室的酸化可以具有作用，包括:(i)通過酸性直接損傷淋巴細胞功能(Ratner和Heppner, 1985);和，(ii)提高能夠鈍化和/或螯合化學治療藥物的化學/物理屏障(Altan等.，1998)。
[0009]可以想到的是，腫瘤細胞的酸性的腫瘤微環(huán)境，以及高度有效的腫瘤溶酶體區(qū)室，合起來可以代表一種消化系統，其允許腫瘤細胞通過細胞外基質的方式以死亡細胞為食(Lugini等，2003)。因此，可能腫瘤微環(huán)境酸化表現出整體選擇優(yōu)勢。
[0010]在腫瘤細胞中，液泡型H+腺苷三磷酸酶(VH+ATP酶)，一類活性H+轉運蛋白的增強的表達和活性可以在腫瘤細胞外微環(huán)境和細胞內酸性區(qū)室的酸化中起關鍵作用。
[0011]癌癥細胞的酸性微環(huán)境還與多藥耐藥性相關。對化療藥物的抗性是癌癥患者中治療失敗的主要原因，并且可以由生化和/或生理機制引起。生化機制包括賦予抗性的蛋白，諸如例如，P-糖蛋白(P-gp)，一種質膜藥物流出轉運蛋白的過量表達。生理抗性包括腫瘤微環(huán)境，并且可以由胞內和/或胞外pH的改變引起。
[0012]在體外，低pH減少弱堿性化學治療藥物的吸收，并且因此，減少它們的細胞毒性(Raghunand等,1999)。已經假定該現象在體內有利于對弱堿性藥物的‘生理’抗性,并且在動物模型中獲得的數據顯示，碳酸氫鹽誘導的細胞外堿化作用導致包括多柔比星在內的一些化學治療藥物在體外和體內抗人腫瘤細胞的治療功效的顯著提高(Raghunand等，2003 ；Mahoney等，2003)。模型系統中的研究已經證明腫瘤pH會是治療反應的決定因素。
[0013]酸性細胞內細胞器還可以參與對化學治療藥物的抗性(Altan等，1998 ；Hurwitz等，1997 ；Schindler 等，1996 ；Larsen 等,2000 ；Raghunand 等，1999 ；0uar 等，1999)。酸性小泡的轉換可以代表藥物抗性中，特別是在不過量表達質膜結合藥物泵，諸如P-糖蛋白的細胞中的重要因子。實際上，一些數據表明，化學治療藥物通過藥物敏感細胞的細胞質和核質分配，但是被排斥在藥物抗性細胞的細胞核外(Altan等，1998 ；Hurwitz等，1997 ；Schindler 等，1996 ；Larsen 等，2000 ；Raghunand 等，1999 ；0uar 等，1999)。實際上，一些報道表明溶酶體型小泡的增加的酸化因此與藥物抗性相關，并且與下述假說一致，即在酸性細胞器中藥物的螯合以及隨后通過分泌途徑從細胞內排出有利于化學治療的抗性(Schindler 等，1996 ；Hurwitz 等，1997 ；Cleary 等，1997 ；Altan 等，1998 ；Raghunand 等，1999 ;0uar 等，1999 ;Bour_Dill 等，2000 ;Larsen 等，2000)。并且，一些最近的發(fā)現表明，在具有擴大的酸性溶酶體區(qū)室的MDR細胞中，消弱弱堿性化學治療藥物的酸性-pH-依賴型聚集的抗溶酶體劑可以逆轉蒽環(huán)霉素抗性(Ouar等，2003)。
[0014]液泡H+-ATP酶(V-H+-ATP酶)是一類在許多細胞區(qū)室中涉及pH控制的轉運蛋白。在真核生物中，該流出泵家族具有許多功能，并且在包括一些人腫瘤細胞在內的許多細胞類型中廣泛地表達(Beck, 1987 ;Vaananen等.，1990 ；Marquardt等，1991 ；Martinez-Zaguilan, 1993 ；Moriyama, 1996 ；Murakami 等.,2001)。這些 ATP 酶進行從細胞質區(qū)室到膜的對側的ATP-依賴型質子轉運，其又可以由細胞內細胞器的腔或細胞外空間所代表。
[0015]質子泵抑制劑(PPIs)，包括奧美拉唑及其類似物，諸如依美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑和雷貝拉唑，特異性地抑制負責從細胞質穿過質膜(到細胞外空間)或穿過液泡膜(到酸性小泡的腔)的H+離子的活性轉運的泵。這些分子是目前用于治療消化性疾病的癥狀的藥物。
[0016]JP2003277262公開用作消化道內抗癌劑的蘭索拉唑和酯類混合物的組合，其中所述酯類增加了蘭索拉唑的生物利用度。
[0017]JP2001286284公開V-ATP酶的一種肽亞單位以及具有PPI活性的針對其的抗體。由于V-ATP酶與腫瘤相關，所以推測這些抗體可能具有抗癌活性。
[0018]W002/080917公開在包括瘧疾和癌癥的病癥中，質子泵抑制劑用于治療誘導的多藥耐藥性(MDR)的應用。建議同時施用質子泵抑制劑和抗癌劑。誘導的MDR與特征性蛋白表達，諸如蛋白轉運蛋白，包括ABC蛋白轉運蛋白相關。沒有研究與這樣的表達不相關的固有抗性，并且所述固有抗性為癌癥治療中不可忽視地更加嚴重的問題。該作者報道使用PPI和藥物，諸如多柔比星或長春新堿，的同時治療明顯導致了腫瘤細胞藥物敏感性的稍微增加。
[0019]EP0567643公開許多新型抗?jié)儎?，并且作者推測這些藥劑可能還具有抗癌活性，盡管沒有支持這一推測的數據存在。
[0020]令人驚訝地，現在我們已經發(fā)現質子泵抑制劑本身能夠發(fā)揮對實體瘤的抗腫瘤作用，并且當被用作預治療時，它們能夠基本上完全地恢復對于這些腫瘤的藥物敏感性，在所述腫瘤中存在抗性。
[0021]因此，在第一方面，本發(fā)明提供PPI在制備用于治療癌癥病癥的藥物中的應用。
[0022]優(yōu)選要治療的癌癥，或腫瘤的病癥為腫瘤，并且還優(yōu)選所述腫瘤是轉移性的，或者存在所述腫瘤是或將要轉移的明顯的可能性，如例如，有經驗的醫(yī)師所診斷的那樣。
[0023]如上文所述，特別是轉移性腫瘤在細胞內和細胞外都與酸性條件相關，并且已經發(fā)現，令人驚訝地，奧美拉唑和其它PPIs能夠發(fā)揮對這些腫瘤的系統效應。
[0024]能夠在施用PPI之前和之后評估腫瘤的pH是有利的，因為這可以幫助有經驗的醫(yī)師確定最適于治療個體患者的PPI的量和類型。這樣的監(jiān)測還為體內測定PPI治療對腫瘤pH的直接作用作準備。
[0025]實際上，在隨附實施例中，我們提供使用衍生于各種組織學的腫瘤的人細胞系的體外實驗，和將同樣的腫瘤細胞移植到重度聯合免疫缺損(SCID)的小鼠中的體內實驗的結果(Lozupone等，2000 ；2003 ；2004印刷中)，并且顯示:(i)奧美拉唑以劑量依賴型方式對于在微酸性培養(yǎng)基中培養(yǎng)的腫瘤細胞具有細胞毒性；(ii)其對于在緩沖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的同樣的腫瘤細胞沒有毒性；(iii)使用奧美拉唑或其類似物對人-SCID的體內治療能夠顯著地減少腫瘤生長，和(iv)使用奧美拉唑預治療一般能夠逆轉，通常基本上完全地逆轉多藥耐藥性(MDR)。
[0026]PPIs表現出重要的化學特征，其中，作為弱堿，它們在酸性區(qū)室中聚集，并且通過質子化作用激活，發(fā)揮它們作為質子泵抑制劑的功能。因此，它們通常聚集在胃部。
[0027]質子泵抑制劑(PPIs)已經作為用于治療患有酸相關疾病的患者的選擇藥物種類而出現，其中所述酸相關疾病包括胃食管反流疾病、十二指腸和胃潰瘍。這些藥劑通過革巴向胃酸泵抑制胃酸分泌(Larsson等，1985 ;WalImark等，1985 ；Puscas等，1999 ；Horn2000)。PPIs (典型地奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑和雷貝拉唑)是共享相似核心結構的取代的2-卩比唳基甲基亞橫酸苯并咪唑(2-pyridyl methylsulphinyl benzimidazole)(Horn2000)。這些藥劑是可質子化的弱堿，具有?4的pKa值，并且因此，選擇性地在pH < 4的酸性空間中聚集。在這樣的酸性環(huán)境中，卩比唳和苯并咪唑氮(benzimidazole nitrogens)的質子化作用導致形成四環(huán)次磺酰胺，其代表所述藥物的活性形式(Horn2000)。
[0028]因此，優(yōu)選的PPI’s是2-吡啶基甲基亞磺酰苯并咪唑PPI’S，特別地是奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑和雷貝拉唑。
[0029]在一方面，優(yōu)選治療非消化道癌的癌癥疾病。在另一方面，優(yōu)選不使用蘭索拉唑，特別是在癌癥疾病與消化道相關的情形。
[0030]盡管腫瘤細胞能夠在中性、緩沖的培養(yǎng)基中存活，我們驚訝地發(fā)現，當在腫瘤細胞中使用PPIs阻斷由液泡型H+-ATP酶的表達和活性誘導的pH波動時(更低的細胞外、更低的液泡內PH和更高的細胞質pH)，可以控制甚至殺死這些腫瘤。
[0031]特別令人驚訝地，當攝食后在胃中，不管預計是結合還是螯合，PPIs能夠對腫瘤發(fā)揮系統效應。然而，例如，為了任何酸性胃條件不必減少任何口服施用的PPI的效力，優(yōu)選與解酸藥聯合施用PPI。因此，優(yōu)選給患者施用足夠的解酸藥，以促進PPI的吸收。這樣的劑量可以是由有經驗的醫(yī)師容易地確定的任何劑量，但是，作為指導，可以是例如，由制造商推薦的治療酸反流的量。應該理解在本文提及奧米拉唑，或者PPI的情形中，那么任一術語涉及有效用于本發(fā)明中的任何PPI，除非其它顯而易見的意思。同樣地，在涉及術語“腫瘤”的情形中，這同樣地應用于本發(fā)明應用的任何癌癥疾病，除非另外指出或者顯而易見，并且特別地是與酸性微環(huán)境相關的癌癥疾病。
[0032]PPI可以以任何有效發(fā)揮抗腫瘤作用的量施用。例如，一般地，這可以是與治療胃潰瘍所用的大致相同的量。對于奧美拉唑，可接受的劑量一般為20-40mg/天。對于其它類似物，該劑量可以增加一例如，泮托拉唑可以典型地以40-80mg/天進行施用。然而，即使560或2400mg/天的過量劑量也沒有表現出相當大的或者穩(wěn)定的副作用。
[0033]例如，應該理解，所用的PPI的量可以隨患者及其病癥而不同，如對有經驗的醫(yī)師顯而易見的那樣，并且可以典型地向上變化，例如，特別地如果患者患有沒有用解酸藥治療的消化性疾病。所述PPI可以以常規(guī)形式適當地施用，如制造商提供的那樣，這些形式特別包括適于口服施用的任何形式，其包括片劑、膠囊和錠劑，例如，以及延緩的和持續(xù)的釋放制劑。
[0034]為了抑制胃中的酸分泌，由此增加能夠到達腫瘤位點的PPI濃度，并且使殘留在胃中的濃度最小，一般地優(yōu)選使用另外的解酸藥或抗酸藥物預治療腫瘤患者，所述解酸藥諸如碳酸鈣，所述抗酸藥物諸如H2-受體拮抗劑，例如雷尼替丁或西咪替丁。因此，使用解酸藥治療有效地增加PPI向酸性腫瘤的遞送，因為基本上減少了體內僅有的酸性位點的數目，或者至少暫時性地中和或改善了最顯著的位點。
[0035]為了避免胃及其可能具有的稀釋作用，治療還可以通過其它途徑進行?？梢越邮苋魏纹渌m當的途徑，并且這可以包括吸入劑、滴眼劑、陰道栓劑、延遲釋放的片劑、貼片、栓劑、導管和注射劑，諸如腹膜內(1.P.)、肌內(1.m.)或靜脈內(1.v.)注射劑。任何這樣的制劑可以按需要制備，并且可以典型地含有任何對所述制劑適宜的成分，諸如賦形劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、調味劑、殺菌劑和抗菌劑。
[0036]一般地，在腫瘤治療中，所述PPI藥物似乎同樣有效。特別優(yōu)選的是奧美拉唑、依美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑和雷貝拉唑，其中奧美拉唑是更加優(yōu)選的。任何藥物可以含有一種或多種PPI作為活性成分。
[0037]在已經變得或者就是為其它藥物難以治療的腫瘤的治療中，已經發(fā)現PPIs令人驚訝地有效。特別地，我們已經發(fā)現，當使用PPI預治療時，具有MDR表型的腫瘤失去其藥物抗性，或者抗性被顯著地減少。這樣的預治療看來妨礙所述抗性腫瘤的酸化作用，使得腫瘤暴露于被選定用于其治療的藥物的作用中，所述酸化作用還看來可能提高藥物抗性。這一結果是完全出乎意料的。
[0038]特別令人驚訝的是，在所有測試的藥物中，所述作用似乎沒有局限在微堿性藥物，但是似乎提高穿過光譜的抗性，并且恢復功效，而不管藥物類型如何。也似乎是這種情形的是，不使用PPI預先治療的同時治療沒有效果或有非常小的有用功效，和所述腫瘤需要進行預治療以恢復敏感性。
[0039]當與另一種抗癌藥物諸如順鉬同時施用時，PPI缺乏功效的原因還不清楚，但是在隨附實施例中得以清楚地證明。預治療產生良好的結果，但是沒有預治療和只有同時進行PPI治療的結果與沒有PPI存在的對照相當。不被理論所局限，似乎可能的是，藥物諸如順鉬具有與PPI相反的作用，并且激活酸化ATP酶，由此中和PPI的作用，如果所述PPI尚沒有機會生效的話。還可能的是，假定絕大多數的抗癌藥物是弱堿，并且同PPI’s—樣需要質子化以被激活，那么在酸性腫瘤環(huán)境中，兩種藥物競爭螯合。
[0040]因此，在癌癥的聯合治療中，在PPI與第二種或其它抗癌藥物聯合使用的情形中，患者應該在施用第二種或其它抗癌藥物之前用PPI預治療，其可以是標準的癌癥治療。使用PPI的這種治療可以是一種或者一系列治療，或者連續(xù)治療，諸如通過導管或透皮貼片，在前一天左右的時間里(over the prev1us day or so),通過任何適當的方式,諸如口服、全身性或局部施用。時間的長度不是特別重要的，條件是PPI有機會作用，并且當施用其它抗癌藥物時，PPI的作用仍然存在，在這種情況下，在隨后治療時，仍然至少部分破壞了酸性環(huán)境。
[0041]因此，在另一方面，本發(fā)明提供質子泵抑制劑在制備用于聯合治療癌癥疾病的藥物中的應用，其中所述質子泵抑制劑藥物在聯合治療之前進行施用。
[0042]在這樣的應用中，特別優(yōu)選所述施用充分先于聯合治療之前，以便減少與所述疾病的位點相關的酸度。在聯合治療施用之前的周期優(yōu)選地為介于30分鐘和3天之間。優(yōu)選地，在施用聯合治療之前，一次或多次施用PPI，第一次施用在治療前至少一天，并且優(yōu)選地接著在聯合治療之前2到12小時進行另一次施用。
[0043]為了允許PPI的最大效果，大約24小時的預治療周期可以是合適的，但是優(yōu)選PPI在治療前至少I小時施用，并且優(yōu)選至少2或更多小時。由于已經發(fā)現PPI對腫瘤酸度的作用持續(xù)少數幾天，諸如2或3天，所以一旦開始，所述治療不需要必定是連續(xù)的。然而，由于PPI治療是安全的，一般只優(yōu)選連續(xù)進行治療。
[0044]在治療期間PPI可以與其它藥物一起連續(xù)地施用，但是優(yōu)選作為治療方案的一部分施用其，其中比方說在其它藥物之前6-24小時的期間給予使用PPI的治療，接著施用其它藥物，對于藥物適當地重復周期，否則腫瘤對所述藥物將產生抗性。在這種通常要基于每日施用的情形中，所述PPI可以在連續(xù)的基礎上，或者比方說在藥物之前6小時有效地施用。
[0045]其它藥物的實例，針對其的抗性可以被PPIs克服，包括:其中MDR似乎與流出泵蛋白相關的那些藥物，其包括；長春花生物堿，諸如長春堿、長春新堿、長春瑞濱和長春地辛；紫杉烷類，諸如紫杉醇和多西他賽；蒽環(huán)霉素類，諸如多柔比星、柔紅霉素、表柔比星和伊達比星；蒽類，諸如bisanthrene和米托蒽醌(mitoxanthrene);表鬼白毒素,諸如依托泊苷和替尼泊苷；喜樹堿，諸如托泊替康和伊立替康/sn38 ;重金屬氧負離子(oxyan1ns)，諸如亞砷酸鹽和三價銻；放線菌素d ;絲裂霉素c ;甲氨喋呤；三甲曲沙；安吖啶；imitinib ;和美法侖；以及其中MDR似乎與蛋白介導的流出泵不相關的那些藥物，其包括5-氟尿嘧啶(5-fu)和順鉬。
[0046]應該理解，盡管PPI’ s具有抗癌活性，但是當用作聯合治療的一部分時，一般地，重要的是其減少對另一種抗癌藥物的藥物抗性的能力，盡管任何累積的抗癌作用只會是有益的。
[0047]因此，在備選方面，本發(fā)明提供PPI在制備用于在患者中治療對一種或多種抗腫瘤藥物有抗性的癌癥疾病的藥物中的應用，其中所述患者具有藥物的亞有效(sub-effective)水平,所述疾病對于所述藥物具有抗性。在這樣的情形中，患者可以進行用于癌癥疾病的藥物的療程，并且PPI的施用是這樣安排時間的，以便當其它抗癌藥物水平充分下降足以允許PPI具有這樣的作用時，PPI具有對腫瘤酸性微環(huán)境的作用?？紤]到大多數抗癌藥物的毒性作用，常規(guī)地允許患者在施用之間恢復，以便本領域那些技術人員容易發(fā)現并且確定機會的窗口(windows)。在2或3天后PPI’s繼續(xù)具有需要的作用也是有幫助的，以致患者可以容易地在抗癌藥物的下一療程的前一天服用適量的PPI。
[0048]因此，在上下文中，"亞有效"是指，在施用時，或者在當足夠的PPI全身性有效的后續(xù)階段，藥物水平不足以阻止PPI減少MDR的作用。優(yōu)選地，應該允許疾病所抗的藥物水平至少在短期內下降到可以忽略的水平，在這段時間期間，優(yōu)選地施用PPI并且其可以作用。
[0049]例如，本發(fā)明還有效用于這樣的疾病諸如AIDS的治療，其可以變得對高度活性的抗逆轉錄病毒治療(HAART)敏感(refractive)。此外，優(yōu)選地在先前的HAART施用后足夠的時間施用PPI，以便每種治療對疾病病癥的作用不相抵觸。
[0050]因此，本發(fā)明還提供PPI在制備用于治療藥物抗性疾病病癥的藥物中的應用，特別當所述疾病病癥是AIDS的情形，并且特別當所述抗性是針對HAART的情形。
[0051]適于按照本發(fā)明的治療的其它潛在的藥物抗性疾病病癥及其治療包括例如，一些慢性疾病的抗炎治療，所述慢性疾病諸如類風濕性關節(jié)炎、潰瘍性結腸炎或局限性回腸炎。認為最適合的是在所述抗炎治療基于皮質留類的應用的情形中，已知皮質留類產生抗性。因此，PPI的作用還可以改善基于皮質留類治療的順應性，減少由于高劑量或者延長的治療方案引起的藥物相關的副作用。
[0052]本發(fā)明還有效用在長期治療和癌癥疾病的治療中，以及這些疾病的預防中。例如，他莫昔芬用于在被認為有高風險患乳腺癌的婦女中預防乳腺癌，以及用于在已經治愈了乳腺癌的個體中繼續(xù)進行治療，以防止復發(fā)。特別地，存在關于他莫昔芬增加細胞內PH的證據。
[0053]在經受正在進行的治療的個體中，發(fā)展抗性的風險被增加了，以致PPI的同時施用，例如，在不施用藥物諸如他莫昔芬的天數施用PPI，能夠幫助預防抗性發(fā)展，或者幫助阻止阻礙正在進行的治療的抗性。
[0054]盡管已經確定PPI’ s即使在過量劑量方案中也是無毒性的，但是他莫昔芬具有高水平的全身性毒性。因此，按照本發(fā)明，在預防癌癥復發(fā)時，PPI’S可以用作他莫昔芬的備選藥物，或者與他莫昔芬組合。
[0055]同樣地，在預防性基礎上治療的遺傳性癌癥的其它形式也對這樣的治療敏感。一個實例是結腸息肉病，以及環(huán)境因子可能激發(fā)的其它疾病。
[0056]因此，本發(fā)明還提供PPI在制備用于預防癌癥疾病的藥物中的應用。優(yōu)選這樣的預防與其它藥物組合，并且PPI和藥物的施用在時間上分開，優(yōu)選地至少30分鐘。就本發(fā)明來說，適當的間隔時間如本文其它部分所述。
[0057]用于治療或預防需要其的患者中的癌癥疾病的方法，包括向所述患者施用質子泵抑制劑，所述癌癥疾病具有與其相關的酸性微環(huán)境，并且其中所述質子泵抑制劑以足以提高所述微環(huán)境的PH的量進行施用。
[0058]因此，胃癌的預防將不同于潰瘍的治療，因為其必須不確定地繼續(xù)。另外，對于其它癌癥疾病，施用PPI的方案不必如對于治療胃潰瘍那樣高，因為對于腫瘤酸性微環(huán)境的作用持續(xù)高達3天，或者甚至更久，從而使得患者可以例如，只要每隔一天，或者甚至只要每隔2天服用類似于為胃潰瘍所開處方的PPI量。
[0059]本發(fā)明還提供用于治療或預防疾病病癥的組合治療，所述組合治療包括給需要其的患者施用
[0060]a)質子泵抑制劑,和
[0061]b)除了質子泵抑制劑外，用于所述疾病的治療的至少一種藥物，并且其中所述質子泵抑制劑在所述至少I種藥物之前施用給所述患者。
[0062]PPI的施用優(yōu)選地在第二種藥物之前足夠的時間進行，以允許PPI至少部分中和與所述疾病相關的任何酸性微環(huán)境。更加優(yōu)選地，在第二種藥物作為正在進行的方案的一部分施用的情形中，所述第二種藥物濃度應該低于認為對所述疾病有效的濃度。因此，優(yōu)選第二種藥物不通過貼片施用，或者，如果是這樣，那么應該移除貼片，以允許藥物水平降到有效之下。
[0063]應該理解，這樣的方案可以在連續(xù)的治療中進行，以預防疾病的復發(fā)，以及治療所述疾病，并且還可以應用在疾病預防中，特別是在高風險的個體中。
[0064]盡管尚未確定，但似乎可能的是，腫瘤中的pH改變表現出整體選擇優(yōu)勢，其使得腫瘤細胞能夠存活，阻斷免疫應答和擴散。能夠通過抑制質子泵而發(fā)揮作用，并且因此調節(jié)細胞PH的藥物似乎能夠妨礙pH改變所代表的優(yōu)勢。這種優(yōu)勢可以由V-H+ATP酶賦予，并且，實際上，我們已經發(fā)現這些酶的特異的抑制劑，包括奧美拉唑及其類似物蘭索拉唑、雷貝拉唑和泮托拉唑，具有有效的抗腫瘤活性。
[0065]附圖簡述
[0066]圖1:奧美拉唑在體外的細胞毒效應
[0067]該圖顯示劑量反應曲線，其在緩沖的(?，中性，pH7, 2)或未緩沖的(■，微酸性的)培養(yǎng)基中使用奧美拉唑的4次對數稀釋物(X軸:0 μ g/ml,0.01 μ g/ml,0.1 μ g/ml,I μ g/ml, 10 μ g/ml)處理人黑素瘤細胞獲得。所述結果清楚地表明，奧美拉唑以劑量依賴型方式只對于在微酸性培養(yǎng)基中生長的腫瘤細胞具有細胞毒性。圖顯示來自3次獨立實驗的中位值結果。誤差條等于標準偏差。
[0068]圖2:奧美拉唑在體內對人腫瘤生長的作用
[0069]該圖顯示對于CB.17scid/scid小鼠的3個代表性體內實驗的中位值結果，其中所述小鼠移植了來自原發(fā)病灶的人黑素瘤細胞系。將移植腫瘤細胞的小鼠通過管飼法用奧美拉唑處理((_)，4次，如箭頭所示)，或不處理(令)。將腫瘤重量(mg)表示為時間的函數。記錄奧美拉唑在抑制腫瘤生長中的直接作用。誤差條等于標準偏差。
[0070]圖3:奧美拉唑對順鉬抗性的作用
[0071]該圖顯示3種(A，B, C)代表性劑量反應曲線，其單獨使用順鉬的3次對數稀釋物(如在X軸上所示)(CTR線)或者在使用奧美拉唑預處理24小時后用順鉬的3次對數稀釋物(0M線)處理人黑素瘤細胞獲得。作為對照(DMS0線)，由于貯存液中溶解奧美拉唑的介質是DMS0，所以將細胞用順鉬加DMSO處理。DMSO的終濃度與用奧美拉唑處理細胞導致的濃度相同，即0.0008%。所述結果清楚地表明，奧美拉唑能夠幾乎完全恢復抗順鉬治療的人黑色瘤細胞(CTR線)對順鉬的細胞敏感性(0M線)。
[0072]圖4:奧美拉唑對5-氟尿嘧啶(5-FU)抗性的作用
[0073]該圖顯示3種代表性劑量反應曲線，其單獨使用5-氟尿嘧啶(5-FU)的5次對數稀釋物(如在X軸上所示)(CTR線)或者在使用奧美拉唑預處理24小時后用5-FU的5次對數稀釋物(OM線)處理人結腸腺癌㈧或黑素瘤(B，C)細胞獲得。作為對照(DMS0線)，由于貯存液中溶解奧美拉唑的介質是DMS0，所以將細胞用5-FU加DMSO處理。DMSO的終濃度與用奧美拉唑處理細胞導致的濃度相同，即0.0008%。所述結果清楚地表明，奧美拉唑能夠幾乎完全恢復抗順鉬治療的人腫瘤細胞系(CTR線)對5-FU的細胞敏感性(0M線)。
[0074]圖5:奧美拉唑對表達P-gp的多藥耐藥性細胞的作用
[0075]該圖顯示一種代表性的劑量反應曲線，其單獨使用硫酸長春堿(VBL)的5次對數稀釋物(如在X軸上所示)(CTR線)或者在使用奧美拉唑預處理24小時后用硫酸長春堿的5次對數稀釋物(0M線)處理CEM-VBL100細胞系獲得。作為對照(DMS0線)，由于貯存液中溶解奧美拉唑的介質是DMS0，所以將細胞用VBL加DMSO處理。DMSO的終濃度與用奧美拉唑處理細胞導致的濃度相同，即0.0008%。所述結果清楚地表明，奧美拉唑能夠幾乎完全恢復抗順鉬治療的人腫瘤細胞系(CTR線)對VBL的細胞敏感性(0M線)。
[0076]圖6:在人/SCID小鼠模型中，奧美拉唑對腫瘤生長的體內作用
[0077]將黑素瘤細胞系通過皮下(s.c.)注射到右脅來移植SCID小鼠。在腫瘤出現時，將小鼠不處理(CTR線)或者使用奧美拉唑(在第I天I次單獨的管飼法處理，深的向下的箭頭)和順鉬(在第2天I次單獨的腹膜內處理，更淡的向上的箭頭)(0M-CPL線)或者只用順鉬(CPL線)處理其。曲線圖代表以mg重量(參見材料與方法)作為時間的函數表示的腫瘤生長。所述結果清楚地表明，奧美拉唑強烈地提高了腫瘤對順鉬的敏感性(0M-CPL線)，如果單獨施用，其幾乎是無效的(CPL線)。
[0078]圖7:處理方法
[0079](A)同時(om/cpl)或者在用奧美拉唑處理來自原發(fā)病灶的代表性的人黑素瘤細胞系后(om+cpl)施用順鉬的3次對數稀釋物的劑量反應曲線。所述結果(3次獨立的實驗的平均值)表明，只有用奧美拉唑預處理黑素瘤細胞能夠逆轉順鉬抗性。所述曲線圖表示死亡細胞的百分數與藥物濃度的函數(X軸:0μΜ，0，5μΜ，5μΜ，50μΜ)。誤差條等于標準偏差。
[0080](B)該圖顯示對于CB.17scid/scid小鼠的3個代表性體內實驗的平均值結果，其中所述小鼠移植了來自原發(fā)病灶的人黑素瘤細胞系。將移植腫瘤細胞的小鼠只用順鉬處理(cpl)，在奧美拉唑預處理后用順鉬處理(om+cpl線)，在用奧美拉唑處理的同時用順鉬處理(om/cpl線)，或者不處理(ctr)。將腫瘤重量(mg)表示為時間的函數。盡管順鉬/奧美拉唑同時處理沒有誘導任何對藥物抗性的抑制，奧美拉唑預處理在逆轉SCID小鼠中移植的人黑素瘤細胞的順鉬抗性中的直接作用是顯著的。誤差條等于標準偏差。
[0081]現在將參考隨附的、非限制性的實施例進一步舉例說明本發(fā)明。
[0082]實施例1
_3] 使用奧美拉嗶的體外實驗
[0084]材料和方法
[0085]體外實驗
[0086]藥物:將奧美拉唑(Astra-Zeneca),依美拉唑(Astra-Zeneca),浮托拉唑(SigmaTau),蘭索拉唑(Pharmacia,瑞典)和雷貝拉唑(Janssen)鈉鹽以lmg/ml重新懸浮在PBSlX中，作為貯存液并存儲在_20°C。
[0087]腫瘤細胞:在潮濕的5% 0)2和95%空氣氛圍下，將獲得于原發(fā)腫瘤的人腫瘤細胞(24株黑素瘤細胞系，2株結腸腺癌細胞系和2株乳腺癌細胞系)在緩沖的(用碳酸氫鹽)或未緩沖的(不用碳酸氫鹽)RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基添加了 10%胎牛血清和抗生素。腫瘤細胞由意大利米蘭國立腫瘤研究所(Istituto Naz1nale per la cura dieTumori, Milan, Italy)友好提供。
[0088]劑量反應曲線:將生長在混懸液中的腫瘤細胞以1.5 XlOVml接種在24孔細胞培養(yǎng)板(Costar)中。將黏著生長的腫瘤細胞以3 X 14細胞/孔接種在24孔細胞培養(yǎng)板中。使用4次對數稀釋物測試每種藥物對每種細胞類型的細胞毒性，如圖所示。在每次實驗中，每種稀釋物測試至少3次重復。
[0089]細胞毒性測定:在用每種化學治療藥物處理后，使用錐蟲藍排除方法評估細胞毒性。簡要地，處理后，將在混懸液中生長的細胞收集下來，離心并重懸在PBSlX中。備選地，將黏著生長的細胞收集下來，合并胰蛋白酶消化后的黏著細胞(活的)和在混懸液中的細胞(假定是死的)。由此將細胞離心(10分鐘，1500rpm)并重懸在PBSlX中。將細胞混懸液的等分試樣用0.4%錐蟲藍1:1 (v/v)稀釋。5分鐘后，將細胞上樣到血細胞計數器(Neubauer)上，并且在光學顯微鏡下計數活細胞(未被染色)和死細胞(染成藍色)。使用下述公式計算死細胞的百分比來評估細胞的生存力:
[0090]%死細胞=(死細胞數/死細胞數+活細胞數)X 100。
[0091]活/死生存力/細胞毒性測定法?,.這種測定法(Molecular Probes, OR,USA)提供2色熒光細胞生存力測定，其基于使用2種探針(鈣熒光素AM和溴乙非啶(Ethidium)同型二聚體I)同時確定活細胞和死細胞，所述2種探針測量細胞生存力的2種識別參數一細胞內的酯酶活性和質膜完整性。通過遍在的細胞內酯酶活性的存在區(qū)分活細胞，所述酯酶活性通過完全沒有熒光的細胞滲透性鈣熒光素AM向強烈的熒光鈣熒光素(ex/em495nm/515nm)的酶促轉換確定,其保留在細胞內。相反地，溴乙非唳同型二聚體I (EthD-1)進入損壞的膜并且在與核酸結合時發(fā)生40倍的熒光增加，由此在死細胞中產生亮紅色熒光(eX/em495nm/595nm)。EthD-1被活細胞的完整的質膜排除在外。按照制造商的說明書，確定了對于本研究所用的細胞類型的最佳染色濃度，從而獲得死細胞和活細胞的清晰易辨的標記，因而允許細胞毒效應的精確定量。處理后，將生長在混懸液中的細胞收集下來，離心，并且重懸在PBSlX中。備選地，將黏著生長的細胞收集下來，合并胰蛋白酶消化后的黏著細胞(活的)和在混懸液中的細胞(假定是死的)。由此將細胞離心(10分鐘，1500rpm)并重懸在PBSlX中。由此將細胞分別用鈣熒光素AM和EthD-1處理，終濃度為0，I μ M和I μ Μ，并且在室溫放置30分鐘。這一溫育時間過后，將細胞用PBSlX洗滌一次，并且再一次重懸在PBSlX中。使用裝備488氬激光器的FACScan細胞計數器(BectonDickinson)分析樣品。獲得了至少20，000個結果。記錄數據并且通過使用CellQuest軟件的Macintosh計算機進行統計學分析。在將對數放大的信號以線性比例轉換成值后，進行突光的計算(表示為中位值)，并且通過使用參量的Kolmogorov-Smirnov (Κ/S)檢驗計算統計學顯著性。使用斯氏t-檢驗進行程序性細胞死亡數據的統計學分析。報告的全部數據都是至少4次單獨實驗的平均值土標準偏差(S.D.)。只有小于0.01的P值才被認為是顯著的。由此獲得的雙變數頻率分布表明在綠色熒光(530nm)活細胞群體和紅色熒光(585nm)死細胞群體之間的清楚的分離(無論何時存在)。
[0092]統計學分析:使用用于不成雙的雙尾(two-tailed)比較的斯氏t_檢驗進行統計學比較。認為小于0.05的P值是顯著的。
[0093]結果
[0094]在體外奧美拉唑對腫瘤細胞具有細胞毒性
[0095]實驗的首要目的是確定通過使用奧美拉唑及其它PPIs治療抑制VH+ATP酶是否將對腫瘤細胞具有細胞毒性。在來自原發(fā)病灶的24株人黑素瘤，2株人結腸腺癌和2株人乳腺癌細胞系中測試奧美拉唑的細胞毒效應。這些細胞都能夠在微酸性培養(yǎng)基中生長，而對細胞周期或生存力沒有任何影響，所述微酸性培養(yǎng)基由不補充碳酸氫鹽的RPMI1640培養(yǎng)基代表。由于通過與正常組織的比較，先前的數據已經表明腫瘤微環(huán)境是微酸性的，所以進行這種測試。
[0096]為了驗證腫瘤細胞對奧美拉唑敏感，我們使用由在微酸性培養(yǎng)基中生長的細胞所代表的實驗條件，其中我們完成了奧美拉唑劑量反應曲線。作為對照，在緩沖的培養(yǎng)基(pH7.2)中培養(yǎng)細胞進行了同樣的實驗。在圖1中，顯示關于一種代表性人黑素瘤細胞系的結果。在緩沖的中性或者未緩沖的酸性培養(yǎng)基中，使用所述藥物的5次對數稀釋物處理細胞，獲得奧美拉唑的劑量反應曲線(圖1)。所述結果表明:(i)在中性PH培養(yǎng)基中，單獨的奧美拉唑對于測試的細胞沒有表現出明顯的細胞毒效應，但是(ii)奧美拉唑存在于酸性培養(yǎng)基中對于腫瘤細胞顯著地表現出劑量依賴型方式的細胞毒效應。在其它腫瘤細胞系和使用其它PPIs進行的實驗給出類似的結果(數據沒有顯示)。所述結果由活/死生存力/細胞毒性測定法充分驗證。
[0097]實施例2
[0098]使用奧美拉嗶的體內實驗
[0099]材料和方法
[0100]體內
[0101]動物:使用4-5周齡的CB.17SCID/SCID雌性小鼠(Harlan，意大利)，并且在特殊的無病原體條件下飼養(yǎng)。將SCID小鼠安置在微隔離的籠子中，并且所有的食物，水和墊料都在使用前高壓滅菌。
[0102]腫瘤細胞:在潮濕的5% 0)2和95%空氣氛圍下，將獲自兩個原發(fā)病灶的人腫瘤細胞(黑素瘤，結腸腺癌)在補充了 10% FCS的RPMI1640中培養(yǎng)。
[0103]人腫瘤在SCID小鼠中的移植和生長:將每一只小鼠在右脅皮下(s.c.)注射重懸在0.2ml補充了 10% FCS的RPMI1640中的3X 16個細胞。移植后，使用測徑規(guī)測量每一個腫瘤的大小。按照Geran等.(1972)使用下述公式估計腫瘤的重量:
[0104]腫瘤重量(mg)=長度(mm) X寬度2(mm)/2。
[0105]小鼠處理:如先前的描述(Watson和Smith, 2001),通過管飼法以75mg/kg的劑量施用奧美拉唑(Astra-Zeneca,意大利)和泮托拉唑(Sigma Tau),其為在PBSlX中的混懸液。如先前的描述(Watson和Smith，2001)，通過管飼法以25mg/kg的劑量施用蘭索拉唑(Pharmacia,瑞典)和雷貝拉唑(Janssen),其為在PBSlX中的混懸液。
[0106]其它:除非另外說明，其它參數與在上述實施例1中提出的相同。
[0107]結果
[0108]在移植了人腫瘤細胞的SCID小鼠體內評估奧美拉唑對人腫瘤生長的作用
[0109]實施例1的體外實驗表明在微酸性條件下奧美拉唑對人腫瘤細胞系的直接的細胞毒效應。因此，接著在體內系統測試功效。
[0110]為了這一目的，我們測試了奧美拉唑及其類似物對人/小鼠模型系統的作用，所述人/小鼠模型系統由通過皮下(S.C.)注射移植了人黑素瘤細胞的CB.17scid/scid小鼠代表。使用局部的或全身的治療方法，已經證明這一模型有效用于在體內測試各種針對人腫瘤的抗腫瘤治療的功效(Lozupone等，2000，2003，2004印刷中)。將移植了人腫瘤細胞的小鼠通過管飼法用奧美拉唑處理。根據在不同時間點腫瘤的生長測量處理的作用。所述結果表明，重復的奧美拉唑處理顯著地減少腫瘤生長(圖2)。使用奧美拉唑類似物處理小鼠獲得的結果與使用奧美拉唑顯示的結果十分相似(未顯示)。顯著地，停止實驗后對人腫瘤的組織學檢驗顯示，在來自奧美拉唑處理的小鼠的腫瘤中，腫瘤塊被巨大的壞死區(qū)域占據，所述壞死區(qū)域是腫瘤的大小的主要原因(未顯示)，這表明所述細胞毒效應要比通過體內腫瘤大小測量所量化的作用大得多。
[0111]實施例3
[0112]體外藥物和PPIs
[0113]材料和方法
[0114]體外實驗
[0115]藥物:PPIs如在上述實施例1中一樣。將順鉬(Aventis，法國)以lmg/ml的存儲濃度重懸在PBSlX中，并在-20°C保存。在使用前將貯存液立即解凍并且不再冷凍。5-氟尿嘧啶(Teva Pharma，荷蘭)以濃度為50mg/ml的溶液形式提供，并且在室溫(r.t)保存，如提供者所示。將硫酸長春堿(Eli Lilly, Paris,法國)以O, lmg/ml的濃度重懸在EtOH/蒸餾水1:1000的溶液中，這樣獲得保存在4°C的貯存液，并且在重懸后3天內使用。
[0116]腫瘤細胞:人腫瘤細胞如在上述實施例1中一樣。
[0117]通過將母體藥物敏感的人T-成淋巴細胞瘤細胞系暴露于增加的亞致死性濃度直到100ng/mL的硫酸長春堿(VBL) (Eli Lilly,巴黎，法國)中，獲得CCRF-CEM(CEM)細胞的MDR變體(CEM-VBL100)。本研究中所用的所有細胞都在添加了 10%胎牛血清和抗生素的RPMI1640培養(yǎng)基(堿性培養(yǎng)基，BM)中在潮濕的5% CO2和95%空氣的氛圍下培養(yǎng)。
[0118]通過將母體藥物敏感的人T-成淋巴細胞瘤細胞系暴露于增加的亞致死性濃度直到 200ng/mL 的多柔比星(DX) (Pharmacia&Upjohn,意大利)，獲得 MCF7 的 MDR 變體(MCF7/DX)。
[0119]劑量反應曲線:將生長在混懸液中的腫瘤細胞以1.5 XlOVml接種在24孔細胞培養(yǎng)板(Costar)中。將黏著生長的腫瘤細胞以3 X 14細胞/孔接種在24孔細胞培養(yǎng)板中。使用3-5次對數稀釋物測試每種藥物對每種細胞類型的細胞毒性，如圖所示。在每次實驗中，每種稀釋物測試至少3次重復。
[0120]其它:除非另外說明，其它參數與在上述實施例1中提出的相同。
[0121]結果
[0122]奧美拉唑增強了人腫瘤細胞對順鉬的敏感性
[0123]實驗的首要目的是證實通過使用奧美拉唑及其它PPIs處理抑制VH+ATP酶能逆轉腫瘤細胞的多藥耐藥性。順鉬，由于在其分子中存在2個胺基而具有弱堿的化學特性，被選來測試奧美拉唑作為腫瘤細胞的弱堿性藥物抗性的回復劑的活性。先前已經表明順鉬抗性腫瘤細胞展示出更高的細胞PH(和更低的細胞外pH)，以及液泡質子泵基因的增強的表達(Murakami等，2002)。在來自原發(fā)病灶的24株人黑素瘤，2株人結腸腺癌和2株乳腺癌細胞系中測試奧美拉唑對細胞針對順鉬的抗性的作用，并且選擇其對順鉬的抗性。在圖3中，顯示關于3種代表性的黑素瘤細胞系的結果。通過只用所述藥物的3次對數稀釋物，或者在奧美拉唑存在下處理細胞獲得對于順鉬的劑量反應曲線。所述結果表明:(i)在這些條件下，單獨的奧美拉唑對于測試的細胞沒有表現出任何細胞毒效應，以及(ii)在所有測試的人黑素瘤細胞中，奧美拉唑在培養(yǎng)基中的存在顯著地增強了對順鉬的敏感性。在其它腫瘤細胞系和使用其它PPIs進行的實驗給出類似的結果(數據沒有顯示)。
[0124]奧美拉唑增強了人腫瘤細胞對5-氟尿嘧啶的敏感性
[0125]接著研究PPIs作用在生理屏障上的可能性，所述生理屏障由腫瘤細胞抵抗任何攻擊引起，改變細胞內和/或細胞外pH。在該實驗中，我們嘗試驗證，除了弱堿，這種機制在逆轉腫瘤對化學治療藥物的抗性中也是有效的。應用前文描述的相同的實驗設計，我們測試奧美拉唑在逆轉原發(fā)腫瘤細胞對5-氟尿嘧啶(5-FU)的抗性的功效。這一藥物是尿嘧啶的衍生物和葉酸的類似物，并且表現出弱酸特性。在來自原發(fā)病灶的24株人黑素瘤，2株人結腸腺癌和2株人乳腺癌細胞系中測試奧美拉唑對細胞針對5-FU的抗性的作用，并且選擇其對5FU的抗性。圖4顯示關于3種代表性實驗的結果。通過只用5-FU的5次不同的對數稀釋物，或者在奧美拉唑及其類似物存在下處理細胞獲得劑量反應曲線(未顯示)。所述結果清楚地表明，通過用奧美拉唑預處理細胞恢復了 5-氟尿嘧啶的敏感性。使用其它PPIs以及其它腫瘤細胞系獲得了相似的結果(未顯示)。
[0126]奧美拉唑對在體外選擇為MDR的人細胞系的作用
[0127]為了驗證細胞pH的改變是否能夠是負責作為基本生理屏障的多藥耐藥性的機制，我們測試了奧美拉唑在體外選擇為MDR表型并且表達P-糖蛋白的細胞中的作用，其中所述P-糖蛋白作為負責藥物流出的專有(sole)轉運蛋白。特別地，我們測試奧美拉唑對于CEM-VBL100細胞的作用(圖5)，所述CEM-VBL100細胞通過將親本人類淋巴母細胞⑶4+T細胞系CCRF-CEM在含有增加濃度直到100ng/ml的硫酸長春堿的培養(yǎng)基中選擇而獲得。CEM-VBL100細胞表達P-糖蛋白，并且表現出對100ng/ml的長春堿和對其它相關藥物的抗性。圖5顯示3種代表性實驗的結果。通過只用硫酸長春堿的5次不同的對數稀釋物或者在奧美拉唑及其類似物存在下處理CEM-VBL100細胞獲得劑量反應曲線(未顯示)。所述結果清楚地表明，用奧美拉唑預處理細胞恢復了硫酸長春堿的敏感性。使用其它PPIs(未顯示)，以及對通過選擇MCF7親本人乳腺癌細胞系獲得的MCF7-DX細胞系實行相同的實驗(未顯示)獲得了相似的結果。
[0128]實施例4
[0129]體內藥物和PPIs
[0130]材料和方法
[0131]體內實驗
[0132]將順鉬(Aventis,法國)以5mg/kg的劑量進行腹膜內(1.p.)施用(Son和Huangl994)。
[0133]其它:除非另外說明，其它參數與在上述實施例1和2中提出的相同。在移植了人腫瘤細胞的SCID小鼠體內評估奧美拉唑對于人腫瘤對化療藥物的敏感性的作用。
[0134]結果
[0135]體外實驗已經表明奧美拉唑處理在人腫瘤細胞系中恢復對細胞毒性藥物的敏感性的直接作用。然而，我們需要在體內系統測試功效。為了這一目的，我們在人/小鼠模型系統中測試了奧美拉唑及其類似物的作用，所述人/小鼠模型系統由通過皮下(s.c.)注射移植了人黑素瘤細胞的CB.17scid/scid小鼠代表。使用局部的或全身的治療方法，已經證明這一模型有效用于在體內測試各種針對人腫瘤的抗腫瘤治療的功效(LOZOpOne，2000，2002，印刷中)。將移植了人腫瘤細胞的小鼠用奧美拉唑預處理(通過管飼法)，并且用單一劑量的順鉬進行腹膜內注射。根據在不同時間點腫瘤的生長測量處理的作用。所述結果(圖6)表明，盡管順鉬本身沒有顯示出對腫瘤生長的顯著作用，但是奧美拉唑預處理顯著地增加腫瘤對順鉬的敏感性。使用奧美拉唑類似物預處理小鼠獲得的結果與使用奧美拉唑顯示的結果十分相似(未顯示)。此外，停止實驗后人腫瘤的組織學檢驗顯示，在來自奧美拉唑/順鉬處理的小鼠的腫瘤中，腫瘤塊被巨大的壞死區(qū)域占據，所述壞死區(qū)域是腫瘤的大小的主要原因(未顯示)，這表明所述細胞毒效應要比通過體內腫瘤大小測量所定量的作用大得多。
[0136]處理方法
[0137]用抗腫瘤藥物諸如順鉬的處理，可能提高V-H+-ATP酶的活性(Murakami T等2001)。因此，使用PPIs和順鉬同時處理，或者使用順鉬預處理，可能減小PPI的回復作用。因此，我們進行了實驗以評估導致PPI回復作用失敗的可能的無效組合處理。體外實驗清楚地表明順鉬預處理(未顯示)和奧美拉唑-順鉬共同處理都沒有引起對于人黑素瘤細胞的生存力的任何可測的作用(圖7A)。一致地，使用順鉬和奧美拉唑對攜帶黑素瘤的SCID小鼠的體內共同處理沒有表現出對腫瘤生長的任何顯著作用(圖7B)。
[0138]參考文獻
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【權利要求】
1.2-吡啶基甲基亞磺酰苯并咪唑質子泵抑制劑在制備通過口服施用而用于系統治療性處理與酸性微環(huán)境相關的實體瘤的藥物中的應用。
2.按照權利要求1的應用，其中所述腫瘤是轉移的。
3.按照權利要求1的應用，其中所述質子泵抑制劑選自奧美拉唑，蘭索拉唑，泮托拉唑，依美拉唑，雷貝拉唑，及其混合物。
4.按照權利要求1的應用，其中所述處理用于這樣的患者，所述患者已經使用解酸藥治療。
5.按照權利要求4的應用，其中所述解酸藥將在所述質子泵抑制劑之前施用。
6.按照權利要求4的應用，其中所述解酸藥是碳酸鈣。
7.按照權利要求4的應用，其中所述解酸藥是H2-受體拮抗劑。
8.按照權利要求1的應用，其中所述質子泵抑制劑在對抗所述腫瘤所需要的至少一種另外的藥物前施用。
9.按照權利要求8的應用，其中在所述另外的藥物施用之前的時期為介于30分鐘和3天之間。
10.按照權利要求8的應用，其中所述另外的藥物選自:長春花生物堿；紫杉烷類；蒽環(huán)霉素；蒽類；表鬼白毒素；喜樹堿；重金屬氧負離子；放線菌素d ;絲裂霉素c ；甲氨喋呤；三甲曲沙；安吖啶；imitinib ;和美法侖；5_氟尿嘧啶；以及順鉬。
11.按照權利要求8的應用，其中所述腫瘤對所述另外的藥物具有抗性。
12.按照權利要求1的應用，其中所述質子泵抑制劑是奧美拉唑。
【文檔編號】A61K33/10GK104161755SQ201410221860
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2005年2月14日 優(yōu)先權日:2004年2月12日
【發(fā)明者】S·法伊斯, F·盧恰尼 申請人:國家高等衛(wèi)生院