土茯苓提取物的制備方法及其在皮膚美白中的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及土茯苓提取物的制備方法，粗粉加入有機溶劑-水溶液回流提取，靜置、過濾、濃縮，得到土茯苓粗提物浸膏；浸膏用水分散后，大孔吸附樹脂柱進行分離純化，依次用水洗脫、40-80%的有機溶劑水溶液洗脫、85-95%的有機溶劑水溶液洗脫，各部位洗脫液濃縮、干燥，得到各部位的提取物；其中，土茯苓提取物為由水洗脫的部位或由40-80%的有機溶劑-水溶液洗脫的部位經(jīng)濃縮、干燥得到。土茯苓提取物用于抑制酪氨酸酶活性和黑色素合成，組合物中用量0.01-15%。優(yōu)點是：經(jīng)各種美白功效測試表明土茯苓提取物能夠有效抑制酪氨酸酶的活性及黑色素的合成，可作為美白活性原料用于皮膚外用品，安全性較高，能達到改善皮膚色素沉淀和美白肌膚的效果。
【專利說明】土茯苓提取物的制備方法及其在皮膚美白中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取物，尤其是一種土茯苓提取物的制備方法，以及該提取物作為活性成分在皮膚美白中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]黑色素是一種由黑色素細胞分泌的高分子量的生物色素，存在于皮膚基底層的細胞中間。當皮膚暴露于紫外線中時，會產(chǎn)生大量的黑色素，黑色素能夠吸收紫外線，從而起到保護皮膚的作用。黑色素的形成原因很多，紫外線的輻射只是其中的重要原因之一。人體膚色的差異主要取決于皮膚中黑素的含量以及成熟期的黑素小體，抑制黑色素的合成，就能有效地改善皮膚的顏色，起到美白的效果。
[0003]酪氨酸酶是黑色素合成過程中的關(guān)鍵酶，是黑色素合成中必不可少的物質(zhì)，它能夠催化L-酪氨酸生成L-多巴，接著催化L-多巴進一步氧化生成多巴醌，多巴醌經(jīng)過一系列的反應后，最終形成黑色素。抑制酪氨酸酶的活性，能夠有效減少黑色素的合成，從而到達美白肌膚的效果。
[0004]據(jù)《中國藥典(2010版)》記載，土茯苓，為百合科植物光葉菝葜StnilaxglabraRoxb.的干燥根莖。性平，味甘、淡，歸肝經(jīng)，腎經(jīng)。解毒，除濕，通利關(guān)節(jié)，用于梅毒及汞中毒所致的肢體拘攣，筋骨疼痛；濕熱淋濁，帶下，癰腫，瘰疬，疥癬。據(jù)文獻報道，土茯苓具有預防動脈粥樣硬化，抗血栓，抗心肌缺血，抗腦缺血，保護肝損傷，免疫抑制，抗炎鎮(zhèn)痛，利尿，抗胃潰瘍，抗菌抑菌，抗腫瘤，抑制酪氨酸酶活性和清除自由基的作用。在化妝品中，土茯苓粗提取物可以被于美白組合物中；但是根據(jù)本發(fā)明中所述的方法將土茯苓粗提物分離純化得到的黃酮部位 以及水部位具有比原粗提物具有更好的美白功效，其優(yōu)越的美白活性以及皮膚美白方面的應用未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種土茯苓提取物的制備方法。
[0006]本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述土茯苓提取物在皮膚美白中的用途。
[0007]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是提供一種土茯苓提取物的制備方法，包括如下步驟:
步驟1:取土茯苓藥材粗粉(過2號篩，能過4號篩的不超過40%)，加入重量5~30倍的體積分數(shù)為60~95%的有機溶劑-水溶液，在50~100°C下回流提取I~10個小時，提取液經(jīng)過靜置、過濾、濃縮，真空干燥或冷凍干燥至溶劑完全揮發(fā)，得到土茯苓粗提物浸膏；步驟2:浸膏用水分散后調(diào)整pH值至5.8-6.2，用DlOl大孔吸附樹脂柱進行分離純化，依次用2~7倍樹脂柱體積的水洗脫、2~7倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為40%~80%的有機溶劑-水溶液洗脫、2~7倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為85%~95%的有機溶劑-水溶液洗脫，得各部位的洗脫液，洗脫液濃縮、真空干燥或冷凍干燥至溶劑完全揮發(fā)，得到各部位的土茯茶提取物；
其中，所述的土茯苓提取物為由水洗脫部位得到的土茯苓提取物，以及由40%~80%的有機溶劑-水溶液洗脫部位得到的土茯苓提取物，40%~80%的有機溶劑-水溶液的pH值為 7.8 ~8.5。
[0008]換句話說，土茯苓粗提物浸膏標為粗提物A，由2~7倍樹脂柱體積的水洗脫得到的洗脫液獲得的產(chǎn)物標為土茯苓提取物B，由40%~80%的有機溶劑-水溶液(pH=7.8~
8.5)洗脫得到的洗脫液獲得的產(chǎn)物標為土茯苓提取物C，由85%~95%的有機溶劑-水溶液洗脫得到的洗脫液獲得產(chǎn)物標為土茯苓提取物D，本發(fā)明所要求保護的是土茯苓提取物為B和C。
[0009]步驟I中，有機溶劑-水溶液的加入量優(yōu)選土茯苓藥材粉末重量的8~20倍。
[0010]步驟I中，有機溶劑-水溶液中，有機溶劑的體積分數(shù)優(yōu)選65~85%。
[0011 ] 步驟I中，回流溫度優(yōu)選80~95°C。
[0012]步驟I中，回流時間優(yōu)選3~7小時。
[0013]步驟2中，用水洗脫時水的用量優(yōu)選為樹脂柱體積的2~5倍。
[0014]步驟2中，用40%~80%的有機溶劑-水溶液洗脫時有機溶劑-水溶液的用量優(yōu)選為樹脂柱體積的2~5倍。
[0015]步驟2中，用40%~80%的有機溶劑-水溶液洗脫時有機溶劑-水溶液的體積分數(shù)優(yōu)選為50%~70%。
[0016]在上述方案的基礎上，所述的有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或者多種的混合溶劑。但不限于這些溶劑。
[0017]在上述方案的基礎上，所述的土茯苓為百合科植物光葉WMiSmilaxglabraRoxb )的干燥根莖。
[0018]在上述方案的基礎上，所述土茯苓在用有機溶劑浸泡提取之前除去須根，洗凈，干燥；或趁鮮切成薄片，干燥。
[0019]在上述方案的基礎上，所述的土茯苓提取物為用2~7倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為40%~80%的有機溶劑-水溶液(pH=7.8~8.5)洗脫的部分，其總黃酮含量占該部分干燥提取物質(zhì)量百分比的60%~99%。該提取物的效果最佳。
[0020]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采取的另一技術(shù)方案是提供上述土茯苓提取物的用途，用于抑制酪氨酸酶活性和黑色素合成，制備皮膚美白的外用組合物，所述的土茯苓提取物在外用組合物中的用量按質(zhì)量百分比計為0.01~15%。
[0021]這里所述的“皮膚”不僅包括覆蓋動物的臉或身體表面的組織，而且還包括頭皮和毛發(fā)。
[0022]在上述方案的基礎上，所述的土茯苓提取物在外用組合物中的用量按質(zhì)量百分比計優(yōu)選為0.01~5%。
[0023]在上述方案的基礎上，所述外用組合物為外用化妝品組合物或藥品組合物。
[0024]對于外用化妝品組合物而言，可以為適于局部涂抹的任何劑型。例如，所述化妝品組合物可以為固體、溶液、乳液(水包油型乳液、油包水型乳液)、懸浮液、霜、凝膠、漿糊、泡沫或噴霧形式的組合物。這些劑型可以通過本領(lǐng)域所熟知的任何常用方法來制備。
[0025]在上述方案的基礎上，所述化妝品組合物可以包含其他能夠提高所述組合物主要效果且不影響主要效果的成分。具體的，所述的外用化妝品組合物中還包括除土茯苓提取物之外的美白劑、抗衰老成分、抗氧化劑、維生素、多肽、多糖、鞘脂中的一種或多種。
[0026]此外，化妝品組合物還可以包含保濕劑、潤膚劑、表面活性劑、紫外吸收劑、防腐劑、消毒劑、抗氧化劑、PH調(diào)節(jié)劑、有機和/或無機顏料、調(diào)味劑、冷卻劑、止汗劑等。在不影響本發(fā)明的目的及效果的前提下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易地選擇所述化妝品組合物中的上述組合物的含量。
[0027]對于外用藥物組合物而言，亦可以為適于局部涂抹的任何劑型。例如，所述藥物組合物可以為固體、溶液、乳液(水包油型乳液、油包水型乳液)、懸浮液、霜、凝膠、漿糊或噴霧形式的組合物，但不限于這些劑型。根據(jù)本領(lǐng)域所熟知的任何常用方法，可以通過使用表面活性劑、賦形劑、保濕劑、乳化劑、懸浮劑、用于滲透壓的鹽或緩沖劑、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、防腐劑或其他常用的添加劑來制備所述藥物組合物的劑型。
[0028]本發(fā)明的有益效果是:
經(jīng)各種美白功效測試表明本發(fā)明的土茯苓提取物能夠有效抑制酪氨酸酶的活性及黑色素的合成，可作為美白活性原料用于皮膚外用化妝品和外用醫(yī)藥品中，具有較高的安全性，并能達到改善皮膚色素沉淀和美白肌膚的效果。
[0029]相比于傳統(tǒng)方法所得到的土茯苓粗提物，以及最后一次洗脫得到的土茯苓提取物，用水洗脫的部分，以及用40%~80%的有機溶劑-水溶液(pH=7.8-8.5)洗脫得到的兩部分土茯苓提取物具有相對更好的美白效果。
【具體實施方式】
[0030]通過下述實施例將有助于進一步理解本發(fā)明的權(quán)利要求書，但并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。
[0031]實施例1
取土茯苓清洗、干燥，備用。
[0032]步驟1:稱取25g的土茯苓，粉碎成粗粉后(過2號篩，能過4號篩的不超過40%)，用10倍量的80%的乙醇進行提取，90°C下提取5小時，提取液經(jīng)過靜置、過濾、濃縮、真空干燥或冷凍干燥至溶劑完全揮發(fā)，得到土茯苓粗提物浸膏(粗提物A)；
步驟2:浸膏用水分散后，調(diào)整pH值至6.0，采用DlOl大孔吸附樹脂柱進行分離純化:依次用3倍樹脂柱體積的水、3倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為50%、pH為8.0的乙醇水溶液、3倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為85%的乙醇水溶液洗脫，分別收集各部位的洗脫液，得到各部位的洗脫液，洗脫液濃縮、真空干燥或冷凍干燥至溶劑完全揮發(fā)，得到各部位的土茯苓提取物。
[0033]其中，由水洗脫得到的洗脫液獲得的產(chǎn)物標為土茯苓提取物B，由50%的乙醇水溶液洗脫得到的洗脫液獲得的產(chǎn)物標為土茯苓提取物C，由85%的乙醇水溶液洗脫得到的洗脫液獲得產(chǎn)物標為土茯苓提取物D。
[0034]1、土茯苓粗提物A和土茯苓提取物C中總黃酮的測定
精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品10mg，置于IOmL的容量瓶中，加適量的的60%乙醇溶液使之溶解，并稀釋至刻度，搖勻，蘆丁的濃度為lmg/mL。吸取該標準溶液0、0.2,0.4、
0.8、1.0和1.2mL分別至IOmL容量瓶中，各加0.lmol/L硝酸鋁溶液2mL，lmol/L的醋酸鉀溶液3mL，用60%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30min，用紫外-可見光分光光度計在507nm波長出測定吸光度，求得回歸方程。然后分別準確量取濃度為lmg/mL 土茯苓粗提物A及l(fā)mg/mL 土茯苓提取物C溶液各2mL置于IOmL容量瓶中，之后操作與蘆丁測定相同，最終通過蘆丁標準曲線求得土茯苓粗提物A及其土茯苓提取物C中總黃酮的含量，結(jié)果見表
1
【權(quán)利要求】
1.一種土茯苓提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟: 步驟1:取土茯苓藥材粗粉，加入重量5~30倍的體積分數(shù)為60~95%的有機溶劑-水溶液，在50~100°C下回流提取I~10個小時，提取液經(jīng)過靜置、過濾、濃縮、真空干燥或冷凍干燥至溶劑完全揮發(fā)，得到土茯苓粗提物浸膏； 步驟2:浸膏用水分散后調(diào)整pH值至5.8-6.2，用DlOl大孔吸附樹脂柱進行分離純化，依次用2~7倍樹脂柱體積的水洗脫、2~7倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為40%~80%的有機溶劑-水溶液洗脫、2~7倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為85%~95%的有機溶劑-水溶液洗脫，得各部位的洗脫液，洗脫液濃縮、真空干燥或冷凍干燥至溶劑完全揮發(fā)，得到各部位的土茯茶提取物； 其中，所述的土茯苓提取物為由水洗脫部位得到的土茯苓提取物，以及由40%~80%的有機溶劑-水溶液洗脫部位得到的土茯苓提取物，40%~80%的有機溶劑-水溶液的pH值為 7.8 ~8.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的土茯苓提取物的制備方法，其特征在于其中，所述的有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的一種或者多種的混合溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的土茯苓提取物的制備方法，其特征在于:所述的土茯苓為百合科植物光葉菝葜的干燥根莖。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的土茯苓提取物的制備方法，其特征在于:所述的土茯苓在用有機溶劑浸泡提取之前除去須根，洗凈，干燥；或趁鮮切成薄片，干燥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的土茯苓提取物的制備方法，其特征在于:所述的土茯苓提取物為用2~7倍樹脂柱體積的體積分數(shù)為40%~80%的有機溶劑-水溶液洗脫的部分，其總黃酮含量占該部分干燥提取物質(zhì)量百分比的60%~99%。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求1至5之一的制備方法得到的土茯苓提取物的用途，用于制備皮膚美白外用組合物，所述的土茯苓提取物在外用組合物中的用量按質(zhì)量百分比計為0.01 ~15%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的土茯苓提取物的用途，其特征在于:所述的土茯苓提取物在外用組合物中的用量按質(zhì)量百分比計為0.01~5%。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的土茯苓提取物的用途，其特征在于:所述外用組合物為外用化妝品組合物或藥品組合物，劑型為溶液、乳液、懸浮液、霜、凝膠、泡沫或噴霧。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的土茯苓提取物的用途，其特征在于:所述的外用化妝品組合物中還包括除土茯苓提取物之外的美白劑、抗衰老成分、抗氧化劑、維生素、多肽、多糖、鞘脂中的一種或多種。
【文檔編號】A61P17/00GK103610615SQ201310641644
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月4日
【發(fā)明者】雷楊, 符移才, 張彬鋒, 王鞠駿, 白曉云, 胡國勝 申請人:上海相宜本草化妝品股份有限公司