專利名稱：一種土茯苓總苷元口服藥物制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥土茯苓提取物，尤其是一種土茯苓總苷元的提取物，以及該提取物 的藥物用途。屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
土茯苓為百合科植物土茯苓Smilax glabraRoxb.的根莖.亦名土萆蘇(《本草會(huì)編》)。味甘、淡，性平。入肝、胃經(jīng)。功能解毒、除濕、利關(guān)節(jié)。主治梅毒、淋濁、筋骨攣痛、腳氣、疔瘡、癰腫、瘰疬。有關(guān)于土茯苳報(bào)道有很多，劉圣、沈愛宗等在"土茯苓研究進(jìn)展"(《中醫(yī)藥學(xué)報(bào)》，1997年，第5期)、李伊慶、易楊華、湯海峰、肖凱等在"土茯苓化學(xué)成分研究"(《中草 藥》，1996年第12期)、邱光清、許連好、林潔娜、張敏等在"土茯苓總皂甙的抗腫瘤作 用研究"(《中藥藥理與臨床》，2001年，第5期)研究中表明，土茯苓中含有皂苷、黃酮苷 類成分，具有清熱解毒，除濕散結(jié)，抗病毒，抗腫瘤等功效，在臨床上有著廣泛的應(yīng)用；而 在CN1772170公開了一種土茯苓總苷提取物及其制備方法和用途?？梢娫谥兴幖夹g(shù)領(lǐng)域中， 土茯苓中苷類成分一直是被研究的熱點(diǎn)。但是，現(xiàn)有的技術(shù)都忽視了對(duì)土茯苓總苷元的研究，其效果與應(yīng)用情況一直處于空白狀態(tài)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一目的在于提供一種以土茯苓總苷元為活性成分的口服藥物。 第二目的是提供該藥物的制劑形式，特別是一種高效制劑； 第三目的是提供該藥物高效制劑的制備方法。最后是提供該藥物在治療梅毒、婦科炎癥、牛皮癬、腳氣、疔瘡、癰腫、瘰疬、肝癌、 抑郁藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明目的第一 目的是這樣實(shí)現(xiàn)的-發(fā)明人提供一種口服的藥物，該藥物以土茯苓總苷元為活性成分。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，苷類物質(zhì)其實(shí)是在植物體內(nèi)產(chǎn)生的生物活性較低的化合物，如在化合物上 添加極性基團(tuán)，把具有生物活性的苷元和糖結(jié)合起來形成生理活性較低的苷類而加以儲(chǔ)存， 使之更易排出體外。同樣，這些苷類化合物在人體內(nèi)的生物利用度也較低，口服的苷類化合物在腸道內(nèi)難以吸收、生物利用度低，多數(shù)在體內(nèi)代謝并不完全，有的甚至完全以原型(苷 類形式)排除體外，只有少量的苷類化合物經(jīng)腸道細(xì)菌、酶分解為苷元后才發(fā)揮出療效；非 口服的苷類化合物，被人體吸收的苷還需經(jīng)血液轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟，再通過肝腸循環(huán)，將苷水解為 苷元再吸收入血而發(fā)揮療效，但因?yàn)椴襟E較多，故也不能迅速發(fā)揮療效。
因而，針對(duì)土茯苓的藥用價(jià)值，發(fā)明人提出一種新的藥用物質(zhì)，即土茯苓總苷元。它是 按現(xiàn)有技術(shù)從土茯苓藥材中提取得到土茯苳總苷，對(duì)該有效部位進(jìn)行水解，使其中的苷類物 質(zhì)脫去糖基，生成更具生物活性的苷元，即成為本發(fā)明所提供的土茯苓總苷元。發(fā)明人經(jīng)研 究證實(shí)，苷類物質(zhì)經(jīng)水解后所得苷元沒有了糖基，其親脂性大大增強(qiáng)，因而苷元較苷更易透 過腸粘膜被吸收；同時(shí)，藥物的分子越小也越容易被吸收，苷水解掉所帶的糖分子變成苷元 后，分子變得更小，也會(huì)更易吸收。另外，以苷元直接作為藥用物質(zhì)，克服了以往苷類物質(zhì) 在體內(nèi)運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)、轉(zhuǎn)化效率低、轉(zhuǎn)化結(jié)果不確定等因素，大大提高了藥物的生物利用率， 節(jié)約了藥物資源。
在本發(fā)明提供的藥物中，土茯苓總苷元可以單獨(dú)使用，也可以與其他藥物成分聯(lián)合使用， 即在藥物活性成分中，可以只有土茯苳總苷元純品，也可以是土茯荅總苷元粗品，還可以 是土茯苓總苷元與其他藥物的混合物。本發(fā)明優(yōu)選使用土茯苳總苷元粗品，即從藥材中提取 土茯苓總苷，再以適當(dāng)方式水解，并根據(jù)需要進(jìn)行精制，得到所需純度。
上述的水解方法包括了酸水解、酶水解或微生物水解，發(fā)明人經(jīng)過篩選，分別提供如下 幾種具體的水解方法酸水解可以用1 10mol/L的鹽酸、硫酸、醋酸及甲酸等進(jìn)行水解；酶 水解可以用苦杏仁酶、麥芽糖酶、轉(zhuǎn)化糖酶、橙皮苷酶等進(jìn)行水解；微生物可以用大腸桿菌、 腸球菌、乳酸桿菌、梭狀芽孢桿菌、畸形菌體、雙岐桿菌及人體腸道正常菌群等進(jìn)行水解。
本發(fā)明的第二目的是提供上述土茯苓總苷元的藥物制劑，尤其是一種高效制劑。由于本 發(fā)明的第一目的中已解決了藥物的吸收問題，所以本領(lǐng)域技術(shù)人員可以方便地將本發(fā)明的土 茯苓總苷元配合適當(dāng)?shù)妮o料，制備成各種常規(guī)制劑。但是發(fā)明人還注意到另一個(gè)問題，即由 于苷元的脂溶性相對(duì)較強(qiáng)，因而其制劑應(yīng)用于人體后，其中的苷元成分不易被潤(rùn)濕和溶出， 如果不能解決這一問題，也會(huì)影響苷元的吸收。所以，針對(duì)這一問題，發(fā)明人提供了一種新 技術(shù)方案，可以保證將土茯苓總苷元制成高效制劑，該技術(shù)方案是
方案一 一種以本發(fā)明所述土茯苓總苷元為活性成分的高效藥物制劑，其輔料中中含有 生物黏附劑和潤(rùn)濕劑，還可以含有分散劑及其他藥劑學(xué)上的常規(guī)輔料，并被制成的片、膠囊、 顆粒、散劑、丸等口服制劑。
該技術(shù)方案的核心在于將土茯苓總苷元用于藥物制劑，并通過特殊輔料保證土茯苓總苷 元的高效利用。因而，體現(xiàn)到具體的藥物制劑中，其藥物活性成分中可以只有本發(fā)明的土茯苓總苷元，也可以與其他藥用或非藥用物質(zhì)配合使用，只要其目的是將所含的土茯苓總苷元 利用生物黏附劑和潤(rùn)濕劑，還可以利用分散劑，進(jìn)行潤(rùn)濕、分散，以制成口服高效制劑，均 應(yīng)在本發(fā)明申請(qǐng)保護(hù)的范圍內(nèi)。同理，本發(fā)明技術(shù)方案選用生物黏附劑和潤(rùn)濕劑，還可以用 分散劑作為主要輔料，目的在于使土茯苓總苷元得以充分、均勻的分散，利于吸收；在實(shí)際 應(yīng)用中，還可以根據(jù)需要加入其他常規(guī)輔料及成型輔料，如淀粉、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、 擰檬酸、碳酸氫鈉、低取代羥丙甲纖維素、乳糖、甘露醇、枸櫞酸、阿斯帕坦、糊精、硬脂 酸鎂等，這些均應(yīng)視為在本發(fā)明技術(shù)的基礎(chǔ)上完成的工作，也應(yīng)受本發(fā)明申請(qǐng)的保護(hù)。
在該技術(shù)方案中，生物黏附劑優(yōu)選為殼聚糖、卡波姆、聚乙烯吡咯垸酮或它們之間的混 合物；潤(rùn)濕劑優(yōu)選為卵磷脂、泊洛沙姆或其混合物；分散劑優(yōu)選為微粉硅膠、環(huán)糊精或其混 合物。
其中，殼聚糖、卡波姆作為生物黏附劑，具有生物黏附性能，可延長(zhǎng)藥物在胃腸道的滯 留時(shí)間，顯著提高藥物的生物利用度。卵磷脂、泊洛沙姆等表面活性劑對(duì)土茯苓總苷元有表 面潤(rùn)濕的作用，降低表面張力，增加脂溶性的土茯苓總苷元的溶解度，促進(jìn)其迅速吸收利用， 利于迅速發(fā)揮療效。微粉硅膠、環(huán)糊精作為分散劑，其本身具有親水性，利于苷元的潤(rùn)濕、 分散，增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性。將本發(fā)明的土茯零總苷元與上述輔料配合使用，充分混合均勻， 可以增強(qiáng)其中土茯茶總苷元的分散性、潤(rùn)濕性，提高其生物利用度。
在優(yōu)選的情況下，本發(fā)明藥物中各成分所占比例優(yōu)選為活性成分20 60%，生物黏附劑 1 10%，潤(rùn)濕劑5 20%，分散劑0 30%，其他輔料0 50%。其中的其他輔料是指制劑 在成型過程中的一些其他輔料，如淀粉、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、檸檬酸、碳酸氫鈉、 低取代羥丙甲纖維素、乳糖、甘露醇、枸櫞酸、阿斯帕坦、糊精、硬脂酸鎂等。
上述技術(shù)方案主要應(yīng)用于口服制劑，最適宜的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑和丸劑。
方案二 一種以本發(fā)明所述土茯苓總苷元為活性成分的高效藥物制劑，其輔料中中含有 分散劑和潤(rùn)濕劑，還可以含有生物黏附劑及其他藥劑學(xué)上的常規(guī)輔料，并被制成的軟膠囊、 液體硬膠囊、滴丸等口服制劑。
該技術(shù)方案的核心在于將土茯苓總苷元用于藥物制劑，并通過特殊輔料保證土茯苓總苷
元的高效利用。因而，體現(xiàn)到具體的藥物制劑中，其藥物活性成分中可以只有本發(fā)明的土茯
茶總苷元，也可以與其他藥用或非藥用物質(zhì)配合使用，只要其目的是將所含的土茯苓總苷元
利用分散劑和潤(rùn)濕劑，還可以利用生物黏附劑，進(jìn)行潤(rùn)濕、分散，以制成口服高效制劑，均
應(yīng)在本發(fā)明申請(qǐng)保護(hù)的范圍內(nèi)。同理，本發(fā)明技術(shù)方案選用分散劑和潤(rùn)濕劑，還可以用生物
黏附劑作為主要輔料，目的在于使土茯苓總苷元得以充分、均勻的分散，利于吸收；在實(shí)際應(yīng)用中，還可以根據(jù)需要加入其他常規(guī)輔料及成型輔料，如甘油、甘氨酸、檸檬酸、尼泊金 乙酯、蜂蠟等，這些均應(yīng)視為在本發(fā)明技術(shù)的基礎(chǔ)上完成的工作，也應(yīng)受本發(fā)明申請(qǐng)的保護(hù)。
在該技術(shù)方案中，分散劑優(yōu)選為植物油或聚乙二醇；潤(rùn)濕劑優(yōu)選為卵磷脂、泊洛沙姆、 丙二醇或它們之間的混合物；生物黏附劑優(yōu)選為殼聚糖、卡波姆或其混合物。
其中，卵磷脂、泊洛沙姆、丙二醇等表面活性劑對(duì)土茯苓總苷元有表面潤(rùn)濕的作用，降 低表面張力，增加脂溶性的土茯苓總苷元的溶解度，促進(jìn)其迅速吸收利用，利于迅速發(fā)揮療 效。植物油、聚乙二醇作為分散劑，可以將土茯苓總苷元分散均勻。殼聚糖、卡波姆作為生 物黏附劑，具有生物黏附性能，可延長(zhǎng)藥物在胃腸道的滯留時(shí)間，顯著提高藥物的生物利用 度。將本發(fā)明的土茯苓總苷元與上述輔料配合使用，充分混合均勻，可以增強(qiáng)其中土茯苓總 苷元的分散性、潤(rùn)濕性，提高其生物利用度。
在優(yōu)選的情況下，本發(fā)明藥物中各成分所占比例優(yōu)選為活性成分10 40%，生物黏附劑 0 10%，潤(rùn)濕劑5 20%，分散劑50 80%，其他輔料0 20%。其中的其他輔料是指制劑 在成型過程中的一些其他輔料，如甘油、甘氨酸、檸檬酸、尼泊金乙酯、蜂蠟等。
上述技術(shù)方案主要應(yīng)用于口服制劑，最適宜的劑型為液體硬膠囊、軟膠囊劑和滴丸劑。
本發(fā)明的第三目的是提供上述高效制劑的制備方法，其中的核心技術(shù)是將土茯苓總苷元 與所需輔料通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻后，再加 入所需常規(guī)制劑輔料，按常規(guī)工藝制成制劑。而這里的混合方法優(yōu)選振動(dòng)磨超微粉碎混合的 方法。
只有通過有效的混合方式，才能保證提取物中所含土茯苓總苷元與特殊輔料充分分散均 勻，應(yīng)用于人體時(shí)才能夠迅速潤(rùn)濕、溶出、吸收，發(fā)揮高效的作用。經(jīng)發(fā)明人驗(yàn)證，熔融、 溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合等方式，都能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明目的，而其中的超微粉碎方式 效果最為突出。
雖然超微粉碎技術(shù)早已出現(xiàn)，但在中藥技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用， 一直停留于"粉碎"的概念上， 始終沒有突破，因而其范圍很局限。發(fā)明人在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，超微粉碎技術(shù)己不僅僅是粉碎技 術(shù)，更是一種高效混合技術(shù)，它可使苷元與輔料一起受到強(qiáng)烈的正向擠壓力和切向剪切力的 作用，運(yùn)用高速、高能量進(jìn)行粉碎、混合，所得到的粉末中心粒徑由原來的75nm減小到10 um以下，粒度細(xì)膩、均勻，表面積增加，孔隙率增大，使藥物粒子與輔料粒子充分接觸、 混合，既提高了藥物粒子的分散度，又保證了其迅速潤(rùn)濕并溶出，大大提高了藥物的吸收率 和生物利用度，其優(yōu)勢(shì)是目前常規(guī)混合方法不可比擬的。在這其中，振動(dòng)磨超微粉碎方式是 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的最佳方法。有益效果
本發(fā)明的土茯苓總苷元，具有清熱解毒，除濕散結(jié)，抗病毒，抗腫瘤的功效，可用于治療梅 毒、婦科炎癥、牛皮癬、腳氣、疔瘡、癰腫、瘰疬、肝癌、抑郁等病癥。配合本發(fā)明的高效 制劑手段，更可以充分發(fā)揮其功效。發(fā)明人通過以下動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，來說明本發(fā)明的突出效果。 實(shí)驗(yàn)l:對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響
l材料
1. 1動(dòng)物
動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重22-24g，鼠齡10-11周。由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 提供。
1.2供試樣品
供試樣品的制備取土茯苓6kg，粗粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾 過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、20%乙醇、70% 乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取1/3的回收乙醇的水液，減壓干燥，干 燥物制備土茯苓總苷制劑；其余2/3的回收乙醇的水液以2mol/L硫酸水解4小時(shí)，水解液加 氧化鈣適量，濾過，并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇， 減壓干燥，1/2干燥物制備土茯苓總苷元一般制劑，另1/2干燥物制備土茯苓總苷元高效制劑。
土茯苓總苷組供試品取土茯苓總苷干燥物，加殼聚糖5g、卵磷脂5g、微粉硅膠25g， 并加微晶纖維素至200g，超微粉碎混合50分鐘，取其中60g以水混懸至100ml;
土茯苓總苷元一般組供試品取l/2土茯苓總苷元干燥物，加淀粉至200g，混勻，取其 中60g以水混懸至100ml;
土茯苳總苷元高效組供試品取l/2土茯苓總苷元干燥物，加殼聚糖10g、卵磷脂10g、 微粉硅膠50g，并加微晶纖維素至400g，超微粉碎混合50分鐘。取其中60g以水混懸至100ml 作為苷元高效組。
1. 3陽性對(duì)照藥
醋酸地塞米松片，天津藥業(yè)有限公司出品 2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
選取50只昆明種小鼠，雄性，體重22-24g,鼠齡10-11周，按體重隨機(jī)分為5組，每組
10只。按表3所列藥物和劑量，分別灌胃給藥l次/日，連續(xù)4日。末次給藥后60min，各組
動(dòng)物用二甲苯50ul涂于小鼠左耳廓兩面致炎，致炎30min后剪下雙耳，錘取雙耳相同部位耳
片，稱重，按下式計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率。結(jié)果見表l。
腫脹度=致炎側(cè)耳片重一非致炎側(cè)耳片重腫脹抑制率=(對(duì)照組腫脹度一給藥組腫脹度)/對(duì)照組腫脹度
表l 對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響
組別動(dòng)物數(shù)(只)劑量(g/kg)腫脹度(mg)腫脹抑制率(％)
土茯苓總苷元高劑量組103.07. 6 ±2. 3**38. 21
土茯苓總苷元一般組103.08. 4 ±3. 4**31. 71
土茯苓總苷組103. 09. 9±4, 2*17. 89
地塞米松片組100. 037. 5±2. 1**39. 02
空白對(duì)照組10—12. 3±5, 0—
注:各給藥組與對(duì)照組比較。*P<0. 05， **P<0. 01。
以上試驗(yàn)結(jié)果表明，土茯苳總苷元高效組、土茯苓總苷元一般組、土茯苓總苷可明顯降 低二甲苯所致小鼠耳腫脹程，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異，土茯苓總苷元高效組、土 茯苓總苷元一般組的效果明顯好于土茯苓總苷組，土茯苓總苷元高效組比土茯苓總苷元一般 組效果好。
實(shí)驗(yàn)2、對(duì)小鼠移植性腫瘤S，的抑制作用 1實(shí)驗(yàn)材料 1. 1動(dòng)物
昆明種小鼠，雌雄各半，體重(20土2)g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 1.2供試樣品
供試樣品的制備取土茯苓4kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)， 濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液以水飽和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸干，取1/2的 干燥物制備苷制劑；其余1/2的干燥物加水溶解，115"C滅菌20min，以乳酸菌菌種發(fā)酵水解 72小時(shí)，水解液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、80%乙醇洗脫，收集 80%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，減壓干燥，干燥物備用。
土茯苓總苷組供試品取苷干燥物，加卡波姆4g、丙二醇10g、泊洛沙姆5g，并加聚乙 二醇400至200g，超微粉碎混合80分鐘，取其中30g以水混懸至100ml;
土茯苓總苷元組供試品取苷元干燥物，加卡波姆8g、丙二醇20g、泊洛沙姆10g，并 加聚乙二醇400至400g，超微粉碎混合80分鐘，取其中30g以水混懸至100ral作為苷元組。
2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1試驗(yàn)方法小鼠30只，在無菌條件下取生長(zhǎng)7 9d的小鼠腹水型移植性腫瘤S咖，
以1:3生理鹽水稀釋，接種于小鼠腋窩皮下0.2ral每只，接種次日按體重隨機(jī)分成3組，分
別為空白組、土茯苓總苷元組、土茯苓總苷組。灌胃給藥每天1次，給藥劑量分別為10ml/kg，空白對(duì)照組灌胃給予同體積生理鹽水，連續(xù)10天；接種后第ll天，脫椎，處死小鼠，稱重， 剝離其瘤塊并稱瘤重，計(jì)算抑瘤率(IR)。試驗(yàn)結(jié)果見表2。
IR=(對(duì)照組平均瘤重一給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重X10(F。 (當(dāng)11030%和P<0. 05時(shí)，評(píng)定藥物有一定療效。)
表2 土茯苓總苷元對(duì)小鼠S18。的抑制作用 分組 N (只) 體重變化(g) 平均瘤重(g) 抑瘤率(％)
空白組 10 9.3 5.24±0. 78 —-
土茯苓總苷組 10 8.5 3.87±0.57 26.2
土茯苓總苷元組 10 7.6 2.25±0.43 57.1
土茯苓總苷元組、土茯苓總苷組均能顯著抑制小鼠移植性腫瘤S，的生長(zhǎng)。土茯苓總苷元 組比土茯苓總苷組的效果好，差異明顯。 實(shí)驗(yàn)3:抗CVB3病毒試驗(yàn)的研究 1實(shí)驗(yàn)材料 1. 1動(dòng)物
昆明種小鼠，雄性，體重(18土2)g，由北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 1.2供試樣品(同實(shí)驗(yàn)2)
1.3病毒CVB:,Nancy標(biāo)準(zhǔn)株北京大學(xué)病毒室提供。在Hela細(xì)胞上傳代，凍融3次， 井測(cè)得半數(shù)組織感染率(TCID5。)為107ml。
1.3藥物干擾素:賽若金，300萬U/支，深圳科興生物制品有限公司 2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
取60只小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，包括A組(正常對(duì)照組)、B組(病毒對(duì)照 組)、C組(干擾素治療組)、D組(土茯苳總苷組)、E組(土茯苓總苷元組)。A組小鼠腹腔 接種不含病毒的生理鹽水0. lml， B-E組每只小鼠均腹腔接CVB3Nancy株病毒液0. lml。 A、 B組腹腔注射生理鹽水0. lml， qd x 5d; C組接種病毒后24 h始腹腔注射干擾素1萬U/ (g*d)， qdx5d; D-E組接種病毒后24h起，每組分別灌服相應(yīng)實(shí)驗(yàn)樣品液10ml/kg， qd x 5d。接種病毒后第7， 14天每組分別處死5只小鼠，摘眼球取血，離心后取血清， 采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定TNF- a 。無菌條件下取心臟，置4%多聚甲醛固定，做冊(cè)染 色，用光鏡觀察心肌的病理改變，并參考Rezkalla方法計(jì)算心肌病理組織學(xué)積分。結(jié)果 見表3。
表3 抗CVB3病毒試驗(yàn)的研究(X土SD)
拍則
7d
10病理積分 TNF-a 病理積分 TNF-a
A組019. 16 土 6. 64016. 42 土 5. 14
B組1.87土0. 34154. 58 土 65. 251. 79±0. 3587. 32 土 26. 63
C組0. 35 土 0, 21林25. 42 土 11. 84林0. 16±0. 09林20. 42 土 10. 32林
D組0. 99 土 0. 30*106. 24 土 34. 35*0. 68±0. 25**63. 21 土 18. 51*
E組0. 67 土 0. 26**54. 21 土 15. 43**0. 50±0. 22**38. 43 土 12. 37**
與病毒對(duì)照組相比，* P<0.05,林P<0,01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CVB3感染小鼠第7天時(shí)，應(yīng)用干擾素治療的小鼠心肌炎性病變明顯減少， 僅見少數(shù)以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎性病灶。D、 E組治療的小鼠心肌炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和壞死程度 比病毒對(duì)照組輕，但重于干擾素治療組，其中土茯苓總苷元組比土茯苓總苷組的效果好。CVB3 感染第14天，病毒對(duì)照組心肌病變進(jìn)行性加重，而干擾素治療組和土茯苓治療組心肌病變?cè)?病毒感染后第7， 14天時(shí)均明顯減輕，干擾素治療組恢復(fù)快于土茯苓治療組，其中土茯苓總苷 元組比土茯苓總苷組的效果好。 實(shí)驗(yàn)4:對(duì)抑郁小鼠的影響
l材料
1. 1動(dòng)物
動(dòng)物昆明種小鼠，(20土2)g，雌雄各半，飼養(yǎng)在25'C條件下，實(shí)驗(yàn)前穩(wěn)定3d,自由進(jìn) 食飲水。由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 1.2供試樣品
供試樣品的制備取人參皂苷4kg，粗粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)， 濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，水液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別以水、30%乙醇、 70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，取l/2的回收乙醇的水液，減壓干燥， 干燥物制備土茯苓總皂苷制劑；其余回收乙醇的水液以2mol/L硫酸水解5小時(shí)，水解液加氧 化鈣適量，濾過，并以適量乙醇洗滌沉淀，濾過，合并水液與乙醇洗液，減壓回收乙醇，減 壓干燥，干燥物備用。
土茯苓總皂苷組供試品取苷干燥物，加殼聚糖2.5g、卵磷脂10g、檸檬酸lg，并加聚 乙二醇400至200g，超微粉碎混合30分鐘，取其中50g以水混懸至100ml;
土茯苓總皂苷元組供試品取苷元干燥物，加殼聚糖5g、卵磷脂20g、檸檬酸2g，并加 聚乙二醇400至400g，超微粉碎混合30分鐘，取其中50g以水混懸至100ml。
陽性對(duì)照藥為氟西汀(加水制成3g/100ml的溶液)；空白組為生理鹽水。
2. 1試驗(yàn)方法小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。取小鼠40只，雌雄各半，體重(20士2)g，隨機(jī)分為4組，每組10只空白組、陽性藥 組、土茯苓總皂苷元組、土茯苓總皂苷組。各給藥組分別給予相應(yīng)藥物均為10ml/kg，空白 組灌胃給予同體積的生理鹽水，各組動(dòng)物每日灌胃給藥l次，連續(xù)給藥7d。末次給藥30min 后，將小鼠放入高20cm,直徑14cm的圓柱形玻璃缸中，每缸一只，缸中水深10cm，水溫(25 ±1)°C。小鼠游泳2min后，立即開始觀察，觀察持續(xù)5min，累計(jì)此5min內(nèi)的不動(dòng)(小鼠在 水中停止掙扎，或動(dòng)物呈漂浮狀態(tài)，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng))時(shí)間。 2.2試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表4。
表4對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(^土S， n-10)
組別 不動(dòng)時(shí)間(秒) 相對(duì)強(qiáng)度(%)
土茯苓總皂苷元組 135.7±42.2** 32.32
土茯冬總皂苷組 162.8±62. 7* 18.80
陽性藥組 114.2±73.3** 43.04
空白組 200. 5± 16.6 0 注與對(duì)照組比較，*P<0. 05， **P〈0. 01。
以上試驗(yàn)結(jié)果表明，土茯苓總皂苷元組、陽性藥組均可明顯縮短小鼠不動(dòng)時(shí)間，與空白 對(duì)照組比較具有極顯著性差異，均較土茯苓總皂苷組效果好。
具體實(shí)施例方式
下面列舉實(shí)施例，進(jìn)一步說明本發(fā)明，各實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明 實(shí)施例1
取土茯苓總苷元100g，加入殼聚糖20g、聚乙烯吡咯烷酮20g、卡波姆10g、泊洛沙姆 50g、卵磷脂50g、微粉硅膠50g、倍他環(huán)糊精100g、淀粉100g，振動(dòng)磨超微粉碎混合30分 鐘，分裝，制成散劑。 實(shí)施例2
取土茯苓總苷元70g、葛根總黃酮苷元10g，加入殼聚糖5g、卡波姆5g、泊洛沙姆14g、 卵磷脂10g、微粉硅膠10g、倍他環(huán)糊精20g、羧甲淀粉鈉6g，微晶纖維素50g，重壓式研磨 超微機(jī)超微粉碎30分鐘，加70%乙醇合坨10分鐘，制丸條、分粒與搓圓，干燥，打光，分 裝，制成丸劑。 實(shí)施例3
取土茯苓總苷元80g、 土茯苓多糖40g，加入殼聚糖2g、卵磷脂10g，再加糊精66g、阿
斯帕坦2g，攪拌均勻，干壓制粒，分裝，制成顆粒劑。實(shí)施例4
取土茯苓總苷元60g，加入殼聚糖10g、聚乙烯吡咯烷酮2g、泊洛沙姆8g、倍他環(huán)糊精 20g、淀粉100g，過篩混合均勻，制粒，裝腸溶膠囊，制成膠囊劑。 實(shí)施例5
取土茯苓總苷元80g、赤芍總苷20g，加入聚乙烯吡咯垸酮10g、泊洛沙姆20g、卵磷脂 10g、微粉硅膠10g、倍他環(huán)糊精50g，振動(dòng)磨超微粉碎混合50分鐘，制粒，壓片，包衣，制 成片劑。 實(shí)施例6
取土茯苓總苷元20g，加入丙二醇10g、泊洛沙姆10g、卵磷脂20g、殼聚糖10g、卡波 姆10g、加入120g聚乙二醇400，振動(dòng)磨超微粉碎20分鐘，使混合均勻，制成液體硬膠囊， 即得。 實(shí)施例7
取土茯苓總苷元30g，加入卵磷脂10g、甘氨酸10g，甘油30g，再加入120g聚乙二醇 600，振動(dòng)磨超微30分鐘，使混合均勻，壓制成軟膠囊，即得。 實(shí)施例8
取土茯苓總苷元50g，加入殼聚糖10g、卵磷脂20g、泊洛沙姆4g、尼泊金乙酯lg，蜂 蠟5g，并加入大豆油110g，攪拌，過篩混勻，壓制成軟膠囊，即得。 實(shí)施例9
取50g聚乙二醇6000和50g聚乙二醇4000，加入土茯苓總苷元80g、丙二醇10g、甘油 10g，振動(dòng)磨超微50分鐘，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。 實(shí)施例10
取土茯苓總苷元100g、卵磷脂25g、尼泊金乙酯2.5g，蜂蠟47.5g，并加入大豆油325g， 振動(dòng)磨超微40分鐘，使混合均勻，壓制成軟膠囊，制成1000粒，即得。 實(shí)施例11
取土茯苓6kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相 對(duì)密度為1.10 1.15 (60°C)的清膏，加入乙醇，使含醇量達(dá)70%，靜置12小時(shí)，濾過，濾 液減壓回收乙醇，水液加于DIOI大孔吸附樹脂柱上，分別以水、20%乙醇、70%乙醇洗脫， 收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，余水液加硫酸使含酸量達(dá)2mol/L，加熱水解3小時(shí)， 放冷，濾過，殘?jiān)运礈熘两行?，減壓干燥，得到土茯苓總苷元125g (含土茯苓總苷元 30%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入卡波姆15g、殼聚 糖5g、卵磷脂10g、泊洛沙姆10g、丙二醇30g，并加入450g聚乙二醇600，振動(dòng)磨超微80分鐘，使混合均勻，制成液體硬膠囊，制成1000粒，即得。 實(shí)施例12
取土茯苓8kg，粉碎，加60%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇， 余水液加于D101大孔吸附樹脂柱上，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收 乙醇，余水液加鹽酸使含酸量達(dá)2mol/L，加熱水解4小時(shí)，加氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至中性，加 于D101大孔吸附樹脂柱上，分別用水、20%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液，回 收乙醇，減壓干燥，得到土茯苓總苷元85g (含土茯苓總苷元60%以上，其余為未水解的苷和 未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入丙二醇30g、甘油10g、尼泊金乙酯lg，并加入200g 聚乙二醇400，攪拌混勻，壓制成軟膠囊，即得。 實(shí)施例13
取土茯苓6kg，粗粉碎，加水煎煮三次，每次2小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相 對(duì)密度為1.10 1.15 (6(TC)的清膏，加入乙醇，使含醇量達(dá)60%，靜置12小時(shí)，濾過，濾 液減壓回收乙醇，水液以水飽和正丁醇提取三次，正丁醇液蒸干，干燥物加水溶解，115。C滅 菌20min，以雙岐桿菌菌種發(fā)酵水解72小時(shí)，減壓濃縮，減壓干燥，得到土茯苓總苷元103g (含土茯苓總苷元40%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入 100g聚乙二醇6000、 250g聚乙二醇4000、 土茯苓多糖20g，卡波姆5g、丙二醇40g、卵磷 脂5g、泊洛沙姆5g，振動(dòng)磨超微35分鐘，加熱熔融，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。 實(shí)施例14
取土茯苓藥材8kg，粉碎，加10倍量水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，濃縮， 70%乙醇沉淀，回收乙醇，水液用正丁醇萃取3次，回收正丁醇液，余水液115t:滅菌15-20min， 大腸桿菌菌種用無菌水配制成每毫升含108個(gè)分生孢子的懸浮液，以孢子懸液的形式按V/W 為3-10%的比例接入培養(yǎng)基，于26-3CTC，搖床轉(zhuǎn)速140-220rpm的條件下震蕩，培養(yǎng)時(shí)間 72-96h;終止發(fā)酵后，過濾，濾餅用5倍量80%乙醇回流提取2次，每次30分鐘，合并濾液， 減壓回收乙醇，剩余水液過D101大孔樹脂柱，分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫 液，回收乙醇，濃縮，干燥，得到土茯苓總苷元92g (含土茯苓總苷元55%以上，其余為未水 解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入燈盞細(xì)辛總黃酮苷元10g、卡波姆5g、 卵磷脂25g、倍他環(huán)糊精25g、淀粉105g，振動(dòng)磨超微粉碎混合20分鐘，制粒，裝膠囊，制 成膠囊劑。 實(shí)施例15
取土茯苓藥材10kg，粗粉碎，加70%乙醇回流提取三次，每次1.5小時(shí)，濾過，合并濾 液，減壓回收乙醇，剩余水液以正丁醇萃取三次，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)运芙?，加于D101大孔吸附樹脂柱上，先以水、30%乙醇洗脫，棄去洗脫液，再以70%乙醇洗脫， 洗脫液回收乙醇，余液加入鹽酸使含酸量達(dá)lraol/L,水解3小時(shí)，放冷，以氫氧化鈉中和剩 余的酸，干燥，干燥物用乙醇回流提取，所得乙醇液回收乙醇，干燥，得到土茯苓總苷元88g (含土茯苓總苷元65%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加 入土茯苓多糖22g、殼聚糖25g、泊洛沙姆45g、微粉硅膠30g、倍他環(huán)糊精30g、羧甲淀粉 鈉10g，振動(dòng)磨超微粉碎混合80分鐘，制粒，壓片，包衣，制成1000片，即得。 實(shí)施例16
取土茯苓藥材3kg，粉碎，加60%乙醇回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，回 收乙醇，余水液過D101大孔樹脂柱，分別用水、65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，回收 乙醇，水液加鹽酸300ml，加熱水解4小時(shí)，水解液加氫氧化鈉中和，過AB-8大孔樹脂柱， 分別用水、65%乙醇洗脫，收集65%乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，得到土茯苓總苷元70g (含土茯苓總苷元70%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加 入葛根總黃酮苷元20g、殼聚糖5g、卡波姆5g、泊洛沙姆5g、卵磷脂15g、淀粉50g，振動(dòng) 磨超微粉碎混合40分鐘，制粒，裝膠囊，制成膠囊劑。 實(shí)施例17
取土茯苓藥材10kg，粉碎，加70%乙醇滲濾提取，滲濾液，回收乙醇，水液加0.5%活性 炭脫色，濾過，濾液過D101大孔樹脂柱，分別用水、20%乙醇、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇 洗脫液，回收乙醇，用麥芽糖苷酶、苦杏仁苷酶水解24小時(shí)，水解液過DIOI大孔樹脂柱， 分別用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，回收乙醇，干燥，得到土茯苓總苷元91g (含 土茯苓總苷元60%以上，其余為未水解的苷和未水解完全的次生苷及其他副產(chǎn)物)，加入殼 聚糖5g、聚乙烯吡咯垸酮10g、卡波姆5g、泊洛沙姆15g、卵磷脂15g、淀粉150g、羧甲淀 粉鈉5g，振動(dòng)磨超微粉碎混合40分鐘，制粒，壓片，包腸溶衣，制成片劑。
權(quán)利要求
1、一種以土茯苓總苷元為活性成分的口服藥物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于所述土茯苓總苷元可以單獨(dú)使用，也可以與其他 藥物成分聯(lián)合使用。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于所述土茯苓總苷元是通過水解土茯苓總苷而得到 的。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于水解方法為酸水解、酶水解或微生物水解。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的藥物，其特征在于藥物活性成分與藥劑學(xué)上可接受的 輔料配合使用。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于輔料中含有生物黏附劑和潤(rùn)濕劑。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物，其特征在于輔料中還可含有分散劑。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物，其特征在于輔料中的生物黏附劑是指殼聚糖、卡波姆、聚乙 烯吡咯烷酮中的任一種或二種以上的組合物；潤(rùn)濕劑是指卵磷脂和/或泊洛沙姆；分散劑是指 微粉硅膠和/或環(huán)糊精。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于藥物活性成分及輔料的組成比例為-活性成分 20 60%，生物黏附劑 1 10。％， 潤(rùn)濕劑 5 20%， 分散劑 0 30%， 其他輔料 0 50%。
10、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物，其特征在于被制成片劑、膠囊劑、顆粒劑或丸劑。
11、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于輔料中含有潤(rùn)濕劑和分散劑。
12、 根據(jù)權(quán)利要求ll所述的藥物，其特征在于輔料中還可含有生物黏附劑。
13、 根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物，其特征在于輔料中的潤(rùn)濕劑是指丙二醇、卵磷脂、泊洛沙 姆中的任一種或二種以上的組合物；分散劑是指聚乙二醇或植物油；生物黏附劑是指殼聚糖 和/或卡波姆。
14、 根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物，其特征在于藥物活性成分及輔料的組成比例為 活性成分 10 40%，生物黏附劑 0 10%， 潤(rùn)濕劑 5 20%， 分散劑 50 80%， 其他輔料 0 20%。
15、 根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物，其特征在于被制成軟膠囊劑、液體硬膠囊劑或滴丸劑。
16、 制備權(quán)利要求6至15中任一項(xiàng)所述藥物的方法，其特征在于將藥物活性成分與所需輔料 通過熔融、溶解、攪拌、研磨或超微粉碎混合中的任一種方法混合均勻后，再加入所需常規(guī) 制劑輔料，按常規(guī)工藝制成制劑。
17、 根據(jù)權(quán)利要求16所述的制備方法，其特征在于將藥物活性成分與所需輔料通過振動(dòng)磨超 微粉碎方法混合。
18、 權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述藥物在制備用于治療梅毒、婦科炎癥、牛皮癬、腳氣、疔 瘡、癰腫、瘰疬、肝癌、抑郁藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種土茯苓總苷元口服制劑及其制備方法和用途，屬中藥領(lǐng)域。該發(fā)明是將從土茯苓中提取的總苷進(jìn)行水解，得到土茯苓總苷元，并將土茯苓總苷元配合特殊的輔料制成高效制劑，可以大大提高土茯苓總苷元的生物利用度。該制劑在治療梅毒、婦科炎癥、牛皮癬、腳氣、疔瘡、癰腫、瘰疬、肝癌、抑郁方面有明顯的療效。
文檔編號(hào)A61K9/16GK101543570SQ20081010259
公開日2009年9月30日 申請(qǐng)日期2008年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月24日
發(fā)明者劉國(guó)飛, 峰 張 申請(qǐng)人:北京凱瑞創(chuàng)新醫(yī)藥科技有限公司