專利名稱：表阿霉素脂質(zhì)體及其制備和儲存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥品給藥領(lǐng)域的微粒制劑，更具體是指一種表阿霉素與適當輔料制成的脂質(zhì)體，及其制備方法和儲存方法。
背景技術(shù)：
表阿霉素(Epirubicin，EPI)是意大利學者Arcamone等在1975年通過半合成途徑合成的一種蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，作用機理是直接嵌入DNA堿基對之間，干擾轉(zhuǎn)錄過程，阻止mRNA的形成，從而抑制DNA和RNA的合成，故對細胞周期各階段均有作用，為細胞周期非特異性藥物，主要作用于細胞核。目前，表阿霉素臨床主要用于急性白血病和惡性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、睪丸癌、胃癌、肝癌等多種實體瘤。表阿霉素存在較多不良反應(yīng)，除可能出現(xiàn)的抗腫瘤藥物的一般不良反應(yīng)外(包括骨髓抑制、胃腸反應(yīng)、神經(jīng)毒性)，還可引起嚴重的局部不良反應(yīng)，藥物外滲可導(dǎo)致局部疼痛、嚴重組織損害和害死，由于該藥的靜脈注射時可發(fā)生嚴重的蜂窩組織炎，故不宜直接靜脈推注，同時也要避免在小血管中注射或同一條靜脈中重復(fù)注射。這給臨床應(yīng)用帶來了較大的不方便，給患者帶來了很大的痛苦。目前，國內(nèi)外表阿霉素及其鹽已有不少產(chǎn)品上市，如法瑪西亞普強(中國)有限公司生產(chǎn)的“法瑪新”，浙江海正藥業(yè)生產(chǎn)的“艾達生”等，劑型一般為凍干粉針，由于藥物分子未被包裹，與皮膚和血管組織直接接觸，極易造成以上毒副作用。脂質(zhì)體是靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型，這種系統(tǒng)是目前藥劑學最新、最有前途的給藥系統(tǒng)。脂質(zhì)體作為這個系統(tǒng)的一員一直是藥劑學研究的熱點，它可以將藥物選擇性地運送到靶點部位，發(fā)揮治療作用，同時又不影響正常細胞、組織或器官的功能，從而達到提高療效、減少毒副作用的目的。本發(fā)明采用脂質(zhì)體包封表阿霉素，降低了毒副作用，提高了療效。同時，本發(fā)明所采用的制備方法適合產(chǎn)業(yè)化推廣。脂質(zhì)體的儲存穩(wěn)定性一直難以解決，現(xiàn)有的冷凍干燥方法在經(jīng)濟和工業(yè)效率方面有局限。冷凍干燥過程不僅高耗能、長耗時，其干燥過程會對脂質(zhì)體膜的生物、化學和物理性質(zhì)造成影響，導(dǎo)致儲存不穩(wěn)定性。最終對脂質(zhì)體所包封的活性成分帶來有害影響。本發(fā)明采用了加入冷凍保護劑的儲存方法，能夠高效、穩(wěn)定的保持脂質(zhì)體的性質(zhì)不受影響。有專利(公開號CN 15M354A)表阿霉素脂質(zhì)體及其制備方法。用有機溶劑注入法制備了表阿霉素脂質(zhì)體，但包封率較低，不能解決局部刺激性問題。有專利(公開號CN 10U64056A)鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體及其制備方法。該方法制備的脂質(zhì)體沒有解決中試生產(chǎn)問題和穩(wěn)定性問題。以上兩個專利在充分發(fā)揮表阿霉素的藥效、降低毒性及產(chǎn)業(yè)化方面還存在一定的不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供表阿霉素脂質(zhì)體的制備及儲存方法。本發(fā)明的特點是將表阿霉素制備成脂質(zhì)體，同時以冷凍儲存的方法解決脂質(zhì)體的化學和物理穩(wěn)定性問題，提高脂質(zhì)體的貨架期。
本發(fā)明中的表阿霉素脂質(zhì)體是由表阿霉素及至少一種磷脂、同時可含有至少一種表面活性劑或一種冷凍保護劑或膽固醇而形成。儲存方法包括常溫儲存、冷藏儲存、冷凍儲存及冷凍干燥儲存。表阿霉素脂質(zhì)體，其含以下組分及重量百分比表阿霉素 0. 0Ρ/Γ50. 0%
磷脂0. 1% 99. 9%
膽固醇09Γ60.0%
表面活性劑 09Γ60. 0%冷凍保護劑 0% 95%
表阿霉素脂質(zhì)體，可以含有以下組分及重量百分比
表阿霉素2. 0% 10. I磷脂40. 0%'、80.膽固醇5% 30..0%表面活性劑1% 30..0%冷凍保護劑0% 60..0%
所述至少一種磷脂選自磷脂酰膽堿類、磷脂酰甘油類、磷脂酰肌醇類、磷脂酰乙醇胺類、神經(jīng)鞘磷脂類、單鏈或雙鏈磷脂(二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二軟脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二軟脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰絲氨酸、二亞油酸磷脂酰肌醇、二棕櫚酸磷脂酰膽堿(DPPC)、二月桂酸磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、單肉蔻酸磷脂酰甘油、單月桂酸磷脂酰甘油、單軟脂酸磷脂酰甘油、單硬脂酸磷脂酰甘油、單肉蔻酸磷脂酸、單月桂酸磷脂酸、單軟脂酸磷脂酸、單硬脂酸磷脂酸、單油酸磷脂酰絲氨酸、單亞油酸磷脂酰肌醇、單棕櫚酸磷脂酰膽堿(MPPC)、單月桂酸磷脂酰膽堿(MLPC)、單肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(MMPC)、單硬脂酰磷脂酰膽堿(MSPC))及其混合物；
所述表面活性劑選自溶菌素、膽汁酸、肉豆蔻酰表面活性劑、棕櫚酰表面活性劑、硬脂酰表面活性劑、甘油單油酸酯、神經(jīng)酰胺、聚乙二醇酯類表面活性劑、PEG-神經(jīng)酰胺、C18-醚連接的溶血磷脂酰膽堿、聚乙二醇-聚乙烯共聚物、嵌段共聚物、脂肪酸及其混合物；
所述冷凍保護劑選自聚乙二醇、聚丙烯酰嗎啉、聚-2-乙基-2-噁唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、甲氧基聚乙二醇(mPEG)、各種糖類(包括海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸)及其混合物。 表阿霉素脂質(zhì)體的制備方法是采用一步法制備空白納米脂質(zhì)體，以PH梯度法或硫酸銨梯度法進行藥物裝載，包括以下步驟
別取處方量的磷脂、表面活性劑、膽固醇分散于PH2. 0-5. 0的緩沖液中，多次通過納米機高壓乳勻減低粒徑，加入PH9. 0-12. 0的堿性溶液，調(diào)節(jié)pH至6. 0-7. 5，將的空白脂質(zhì)體溶液與表阿霉素的冷凍保護劑溶液混合，30-70°C下孵育10-60分鐘，即得；或分別取處方量的磷脂、表面活性劑、膽固醇分散于100-300mM的硫酸銨溶液中，多次通過納米機高壓乳勻減低粒徑，得到空白脂質(zhì)體，將空白脂質(zhì)體通過超濾器置換濃縮外水相為冷凍保護劑溶液，將的空白脂質(zhì)體溶液與表阿霉素的冷凍保護劑溶液混合，30-70°C下孵育10-60分鐘，即得。本發(fā)明的優(yōu)點是脂質(zhì)體可以避免普通注射液的一些毒副作用，并對腫瘤具有一定的靶向性，可以更好地發(fā)揮藥效，降低毒性；本發(fā)明采用一步法制備脂質(zhì)體能夠產(chǎn)業(yè)化，適合工業(yè)化生產(chǎn)；采用的冷凍儲藏脂質(zhì)體的方法，能夠高效、穩(wěn)定的保持脂質(zhì)體的性質(zhì)不受影響。
具體實施例方式
本發(fā)明的具體實施方式
，由以下的實施實例說明，但本發(fā)明的保護范圍不局限于此。實施例1
將氫化大豆磷脂(HSPC)和N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-1, 2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE-mPEG2000)以摩爾比90:10分散于701的300mM pH4的檸檬酸緩沖溶液中。經(jīng)過IOOObar高壓乳勻后，獲得100mg/ml磷脂濃度，平均粒徑為50-300nm的空白脂質(zhì)體。將2. Oml表阿霉素(5. Omg/ml)的海藻糖(lg/ml)水溶液和1. 5ml的0. 4mM碳酸鈉溶液加入2. Oml的空白脂質(zhì)體中，于60°C下孵育30min。然后將載藥脂質(zhì)體及空白脂質(zhì)體于-20°C儲存。通過相同的方法制備沒有加入冷凍保護劑mPEG及海藻糖的脂質(zhì)體。_20°C儲存后，檢測粒度的變化，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，加入冷凍保護劑的空白及載藥脂質(zhì)體經(jīng)過冷凍/解凍后，粒徑?jīng)]有明顯變化；而未加入冷凍保護劑的脂質(zhì)體經(jīng)過冷凍/解凍后，粒徑明顯增大。表1冷凍/解凍過程對脂質(zhì)體粒度的影響
時間含職^mmmm勉_雔 99載■ 慮鉢 IOIm載舊腦儺 112塞個週103IiS339mi個月1_IMSS2412e個駕IMIif315131
實施例2
按實施例1方法制備表阿霉素脂質(zhì)體，將樣品于_20°C儲存6個月，分別于初始時刻，1個月、3個月、6個月時，測定樣品的含量、粒徑、包封率、突釋百分比及pH值，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，在6個月內(nèi)脂質(zhì)體各性質(zhì)沒有明顯變化，證明儲存方法合理可行。
表2冷凍/解凍過程對脂質(zhì)體性質(zhì)的影響
時間含量(表阿霉素)(mg/ml)粒徑(nm)包封率(1 )突釋百分(%)PH值初始2. 0110199. 987. 88ι個月1. 9910399. 877. 913個月1. 9710499. 787. 876個月1. 9810799. 897. 9權(quán)利要求
1.一種表阿霉素脂質(zhì)體，其特征通過表阿霉素脂質(zhì)體由表阿霉素及至少一種磷脂、同時可含有至少一種表面活性劑或一種冷凍保護劑或膽固醇而形成，儲存方法包括常溫儲存、冷藏儲存、冷凍儲存及冷凍干燥儲存。
2.權(quán)利要求1的方法，還包括冷藏儲存表阿霉素脂質(zhì)體；運輸所述冷凍的表阿霉素脂質(zhì)體和在另一位置解凍所述制劑；冷凍干燥儲存表阿霉素脂質(zhì)體。
3.權(quán)利要求1所述的表阿霉素脂質(zhì)體，其特征在于含以下組分及重量百分比 表阿霉素 0. 0Ρ/Γ50. 0%磷脂0. 1% 99. 9%膽固醇09Γ60.0%表面活性劑 09Γ60. 0% 冷凍保護劑 09Γ95. 0%。
4.權(quán)利要求1所述的表阿霉素脂質(zhì)體，可以含有以下組分及重量百分比 表阿霉素 2. 09Γ10. 0%磷脂40. 0% 80. 0%膽固醇59Γ30.0%表面活性劑 Ρ/Γ30. 0% 冷凍保護劑 09Γ60. 0%。
5.權(quán)利要求1、3、4的方法，其中A.所述至少一種磷脂選自磷脂酰膽堿類、磷脂酰甘油類、磷脂酰肌醇類、磷脂酰乙醇胺類、神經(jīng)鞘磷脂類、單鏈或雙鏈磷脂(二肉蔻酸磷脂酰甘油、二月桂酸磷脂酰甘油、二軟脂酸磷脂酰甘油、二硬脂酸磷脂酰甘油、二肉蔻酸磷脂酸、二月桂酸磷脂酸、二軟脂酸磷脂酸、二硬脂酸磷脂酸、二油酸磷脂酰絲氨酸、二亞油酸磷脂酰肌醇、二棕櫚酸磷脂酰膽堿 (DPPC)、二月桂酸磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、單肉蔻酸磷脂酰甘油、單月桂酸磷脂酰甘油、單軟脂酸磷脂酰甘油、單硬脂酸磷脂酰甘油、單肉蔻酸磷脂酸、單月桂酸磷脂酸、單軟脂酸磷脂酸、單硬脂酸磷脂酸、單油酸磷脂酰絲氨酸、單亞油酸磷脂酰肌醇、單棕櫚酸磷脂酰膽堿(MPPC)、單月桂酸磷脂酰膽堿 (MLPC)、單肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(MMPC)、單硬脂酰磷脂酰膽堿(MSPC))及其混合物；B.所述表面活性劑選自溶菌素、膽汁酸、肉豆蔻酰表面活性劑、棕櫚酰表面活性劑、 硬脂酰表面活性劑、甘油單油酸酯、神經(jīng)酰胺、聚乙二醇酯類表面活性劑、PEG-神經(jīng)酰胺、 C18-醚連接的溶血磷脂酰膽堿、聚乙二醇-聚乙烯共聚物、嵌段共聚物、脂肪酸及其混合物；C.所述冷凍保護劑選自聚乙二醇、聚丙烯酰嗎啉、聚-2-乙基-2-噁唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、甲氧基聚乙二醇(mPEG)、各種糖類(包括海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸)及其混合物。
6.權(quán)利要求5的方法，其中，所述冷凍保護劑可以通過水解的鍵與磷脂結(jié)合(例如N-(羰基-甲氧基聚乙二醇-2000)-1, 2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 (DSPE-mPEG2000))。
7.權(quán)利要求1、2、3、4所述的表阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，其特征是采用一步法制備空白納米脂質(zhì)體，以PH梯度法或硫酸銨梯度法進行藥物裝載，包括以下步驟分別取處方量的磷脂、表面活性劑、膽固醇分散于PH2. 0-5. 0的緩沖液中，多次通過納米機高壓乳勻減低粒徑，加入PH9. 0-12. 0的堿性溶液，調(diào)節(jié)pH至6. 0-7. 5，將的空白脂質(zhì)體溶液與表阿霉素的冷凍保護劑溶液混合，30-70°C下孵育10-60分鐘，即得；或分別取處方量的磷脂、表面活性劑、膽固醇分散于100-300mM的硫酸銨溶液中，多次通過納米機高壓乳勻減低粒徑，得到空白脂質(zhì)體，將空白脂質(zhì)體通過超濾器置換濃縮外水相為冷凍保護劑溶液，將的空白脂質(zhì)體溶液與表阿霉素的冷凍保護劑溶液混合，30-70°C下孵育10-60分鐘，即得。
8.權(quán)利要求1、2、3、4、7所述的表阿霉素脂質(zhì)體，其中的表阿霉素可以是表阿霉素、鹽酸表阿霉素、表阿霉素硫酸鹽、表阿霉素硝酸鹽、表阿霉素乳酸鹽及其任意組。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及表阿霉素脂質(zhì)體及其制備和儲存方法。本發(fā)明表阿霉素脂質(zhì)體由表阿霉素及至少一種磷脂、同時可含有至少一種表面活性劑或一種冷凍保護劑或膽固醇而形成。儲存方法包括常溫儲存、冷藏儲存、冷凍儲存及冷凍干燥儲存。
文檔編號A61K9/127GK102552146SQ201210030179
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月13日
發(fā)明者劉微, 李俊, 李翔, 楊世林, 羅曉健, 蘇丹, 陳蘭英, 雷景邦 申請人:江西本草天工科技有限責任公司