專利名稱：抗Axl抗體及使用方法
抗Ax I抗體及使用方法相關(guān)申請本申請依據(jù)35USC§ 119要求2010年6月18日提交的美國臨時申請?zhí)?1/356，508的優(yōu)先權(quán)，通過述及完整收錄其內(nèi)容。序列表本申請含有序列表，已經(jīng)以ASCII格式經(jīng)EFS-Web提交且通過述及完整收入本文。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及抗Axl抗體及其使用方法。
背景技術(shù)：
Axl是TAM (Tyro3,Axl,和Mer)受體酪氨酸激酶家族的一個成員(O’Bryan等人，1991 ；Lai等人，1991)。它最初鑒定為血液學(xué)惡性腫瘤中的一種轉(zhuǎn)化因子(O’ Bryan等人，1991 ;Janssen等人，1991)。Axl或其配體Gas6的失調(diào)涉及多種人癌癥的發(fā)病機(jī)理。已經(jīng)報(bào)告了 Axl在極其多種人癌癥中過表達(dá)(Berclaz等人,2001 ;Craven等人，1995 ;Shieh等人，2005 ；Sun 等人,2004 ；Ito 等人，1999)且與肺癌(Shieh 等人,2005)、前列腺癌(Sainaghi等人，2005)、乳腺癌(Meric等人，2002 ；Zhang等人，2008)、胃癌(Wu等人，2002)、和胰腺癌(Koorstra等人,2009),腎細(xì)胞癌(Chung等人,2003),以及成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(Hutterer等人，2008)中的侵入和轉(zhuǎn)移有關(guān)。最近,通過磷酸酪氨酸信號傳導(dǎo)序型分析,在約5%的NSCLC原發(fā)性腫瘤中檢測到活化的Axl蛋白(Rikova等人，2007)。Axl表達(dá)受靶向和化療藥物誘導(dǎo)，而且藥物誘導(dǎo)的Axl表達(dá)在急性髓樣白血病中賦予對化療的抗性(Hong等人，2008)，以及在胃腸基質(zhì)腫瘤(Mehadevan，et al，2007)和乳腺癌(Liu等人，2009)中分別賦予對伊馬替尼(imatinib)和拉帕替尼(Lapatinib)/Herceptin的抗性。涉及Axl和抗Axl抗體的其它出版物包括W02004/039955 ；W02009/063965 ;2009年7月27日提交的共同擁有的美國申請 N0.61/228，915 ；W02009/062690 ；W02004/008147 ；5,468，634。清楚的是仍然需要具有最適于開發(fā)成治療劑的臨床屬性的藥劑。本文所述發(fā)明滿足了此需求并提供了其它好處。通過述及而完整收錄本文中引用的所有參考文獻(xiàn)(包括專利申請和出版物)。發(fā)明概述本發(fā)明提供抗Axl抗體及其使用方法。一方面，本發(fā)明提供了與人Axl結(jié)合的分離的抗體，其中該抗體以彡600pM的親和力結(jié)合人Axl，其中該抗體以彡InM的親和力結(jié)合小鼠Axl。在一些實(shí)施方案中，該抗體促進(jìn)Axl受體下調(diào)。在一些實(shí)施方案中，該抗體抑制組成性Axl激活。在一些實(shí)施方案中，該抗體結(jié)合包含下述氨基酸序列、基本上由下述氨基酸序列組成或由下述氨基酸序列組成的多肽:MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFVGNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILELADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCLVFLGHQTFVSQPGYVG (SEQ ID NO:111)。

在又一些實(shí)施方案中，該抗體為單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，該抗體為人抗體、人源化抗體、或嵌合抗體。在一些實(shí)施方案中，該抗體為結(jié)合Axl的抗體片段。在一些實(shí)施方案中，該抗體為人抗體。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其中該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含 GFX1X2X3X4X5X6X7H,其中 X1 為 S 或 T ;X2 為 L，F(xiàn) 或 V ;X3 為 S，T，或 R ;X4 為 G 或 S ;X5 為 S，H，T 或 I ;X6 為 W 或 G ;X7 為 I 或 L (SEQ ID NO: 112)，(b)HVR-H2,其包含X1X2Ix3Px4X5X6X7X8X9X10Yyadsvkg,其中 X1 為 G 或 a ;x2 為 w 或 g ;x3 為 N，s，A 或 P ;x4 為 Y，A或 V ;X5 為 R，G，或 S ;X6 為 G，R 或 S ;X7 為 Y，S，H 或 Y ;X8 為 A，T，或 P (SEQ ID NO: 113)和/ 或 HVR-H2，其包含 X1X2Ix3Px4X5X6X7X8X9XiqYyADSVKG,其中 X1 為 G 或 A ;X2 為 W 或 G ;X3 為 N，S，A 或 P ;X4 為 Y，A 或 V ;X5 為 R，G，或 S ;X6 為 G，R 或 S ；X7 為 Y，S，H 或 Y ;X8 為 A，T，或 P ;X9為任何氨基酸或缺失；X1(I為任何氨基酸或缺失(SEQ ID NO: 166) ； (c)HVR-H3，其包含ARX1X2X3X4X5X6X7X8X9XltlX11X12X13MDY,其中 X1 為 E 或 W ;X2 為 Y 或 R ;X3 為 S，N 或 P ;X4 為 G，D，或L ;X5為W或S ;X6為G， R，A，或S ;X7為G或S ；X8為S或缺失；X9為S，Y或缺失；X1(I為V，I或缺失；X11S G或缺失；X12S Y或缺失;父13為A，E或缺失(SEQ ID NO: 114); (d)HVR-Ll，其包含 RASQX1X2X3X4X5X6A,其中 X1 為 D，I 或 S ;X2 為 V 或 I ;X3 為 S，G 或 R ;X4 為 T，I，N 或 R ;X5為 A 或 S;X6 為 V 或 L (SEQ ID NO: 115) ; (e)HVR_L2，其包含 X1ASX2LX3S,其中 X1 為 S，A，或
V;X2 為 F，N 或 S ;X3 為 Y 或 A (SEQ ID NO: 116);和(f)HVR-L3，其包含 QQX1X2X3X4X5X6T,其中 X1 為 S 或 A ;X2 為 Y，K 或 N ;X3 為 T，S，Y，M，R 或 A ；X4 為 T，N，S，或 F ;X5 為 P 或 R ；X6 為P，Y，S 或 L (SEQ ID NO:117)。另一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其中該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含GFX1X2X3GX4WIH,其中 X1S T 或 S，X2 SF 或 L，X3ST 或 S，X4 為 H，S 或 T (SEQ ID NO: 118);(b) HVR-H2，其包含 GwixiPyx2X3X4X5YyADSVKG,其中 X1 為 S，N 或 A ;X2 為 G，R 或 S ;X3 為 G 或 R ;X4為 S，Y或H ;X5為 T，A或P(SEQ ID NO: 119); (c)HVR_H3，其包含AreyxiX2WX3X4SX5X6GYX7MDY,其中X1為S，N或P ;X2為G或D ;X3為G，R，或A ;X4為G或S ;X5為S或Y ;X6為V或I ;X7為A 或 E (SEQ ID NO: 120);和(d)HVR-L3，其包含 QQSYX1X2X3X4T,其中 X1 為 T，S 或 Y ;X2 為 T，n，s*f;x3Sp*r;x4Sp，y*s (SEQ ID NO: 121)。另一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含(a)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQID N0:9, (b)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12,(c)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8。另一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQID N0:7，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8，和(c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQID N0:9。另一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQID N0:10 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。另一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQID N0:10 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。在一些實(shí)施方案中，該抗體進(jìn)一步包含圖3A_B，4，5或6中所示重鏈可變域或輕鏈可變域框架序列。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含(a)VH序列，其與氨基酸序列SEQ IDN0:103具有至少95%序列同一性；(b)VL序列，其與氨基酸序列SEQ ID N0:104具有至少95%序列同一'丨生；或(c) (a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些實(shí)施方案中，該抗體包含VH序列SEQ ID NO: 103。在一些實(shí)施方案中，該抗體包含VL序列SEQ ID NO: 104。在一些實(shí)施方案中，該抗體包含VH序列SEQ ID NO: 103和VL序列SEQ ID NO: 104。在一些實(shí)施方案中，該抗體為全長IgGl抗體。本發(fā)明還提供了分離的核酸，其編碼本發(fā)明的任何抗體。本發(fā)明還提供了宿主細(xì)胞，其包含本發(fā)明的核酸。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)抗體的方法包括培養(yǎng)本發(fā)明的宿主細(xì)胞使得生成該抗體。在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括自該宿主細(xì)胞回收該抗體。

本發(fā)明還提供了免疫偶聯(lián)物，其包含本發(fā)明的任何抗Axl抗體和細(xì)胞毒劑。本發(fā)明還提供了藥物配制劑，其包含本發(fā)明的任何抗Axl抗體和藥學(xué)可接受載體。在一些實(shí)施方案中，該藥物配制劑進(jìn)一步包含其它的治療劑。在一些實(shí)施方案中，該其它的治療劑選自VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑、和化療劑。本發(fā)明還提供了本文所述任何抗Axl抗體，其用作藥物。在一些實(shí)施方案中，用途為治療癌癥。在一些實(shí)施方案中，用途為治療免疫病癥、心血管病癥、血栓形成或糖尿病。在一些實(shí)施方案中，用途為抑制細(xì)胞增殖。在一些實(shí)施方案中，用途為促進(jìn)Axl下調(diào)。在一些實(shí)施方案中，用途為抑制血管發(fā)生。本發(fā)明還提供了本文所述任何抗Axl抗體，其用于制備藥物。在一些實(shí)施方案中，該藥物用于治療癌癥。在一些實(shí)施方案中，該藥物用于治療免疫病癥、心血管病癥、血栓形成或糖尿病。在一些實(shí)施方案中，該藥物用于抑制細(xì)胞增殖、抑制血管發(fā)生、促進(jìn)Axl下調(diào)、抑制轉(zhuǎn)移、抑制血管發(fā)生。本發(fā)明還提供了治療具有癌癥的個體的方法，包括對個體施用有效量的本文中公開的任何抗Axl抗體。在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括對個體施用其它的治療劑。在一些實(shí)施方案中，該其它的治療劑選自下組=VEGF拮抗劑，EGFR拮抗劑和化療劑。本發(fā)明還提供了治療具有免疫病癥、心血管病癥、血栓形成或糖尿病的個體的方法，包括對個體施用有效量的本文中公開的任何抗Axl抗體。本發(fā)明還提供了在個體在抑制血管發(fā)生、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)Axl受體下調(diào)或抑制轉(zhuǎn)移的方法，包括對個體施用有效量的本文中公開的任何抗Axl抗體以抑制血管發(fā)生、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)Axl受體下調(diào)或抑制轉(zhuǎn)移。本發(fā)明還提供了抑制組成性Axl激活的方法，包括對個體施用有效量的本文中公開的任何抗Axl抗體以抑制組成性Axl。一方面，本發(fā)明提供了用于治療患有與EGFR激活突變或EGFR基因擴(kuò)增有關(guān)的癌癥的受試者的方法，其中該受試者已經(jīng)對EGFR拮抗劑治療形成抗性，包括確定該受試者是否具有Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，并對那些具有Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增的受試者施用EGFR拮抗劑和本文所述任何抗Axl抗體。一方面，本發(fā)明提供了用于治療患有與EGFR激活突變或EGFR基因擴(kuò)增有關(guān)的癌癥的受試者的方法，包括:(i)監(jiān)測正在用EGFR拮抗劑治療的受試者以確定該受試者是否形成Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，并(ii)在該受試者已經(jīng)形成Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增的情況中，修改該受試者的治療方案以在該EGFR拮抗劑之外還包括本文所述任何抗Axl抗體。一方面，本發(fā)明提供了用于治療患有與EGFR激活突變或EGFR基因擴(kuò)增有關(guān)的癌癥的受試者的方法，包括:(i)監(jiān)測正在用EGFR拮抗劑治療的受試者以確定該受試者是否形成對該抑制劑的抗性，(ii)測試該受試者以確定該受試者是否具有Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，并(iii)在該受試者具有Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增的情況中，修改該受試者的治療方案以在該EGFR拮抗劑之外還包括本文所述任何抗Axl抗體。一方面，本發(fā)明提供了用于評估EGFR拮抗劑的方法，包括:(i)監(jiān)測正在用EGFR拮抗劑治療的受試者群體以鑒定那些對該治療劑形成抗性的受試者，(ii)測試抗性受試者以確定該受試者是否具有Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，并(iii)在該受試者具有Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增的情況中，修改該受試者的治療方案以在該EGFR拮抗劑之外還包括本文所述任何抗Axl抗體。—方面，本發(fā)明提供了用于降低癌細(xì)胞中EGFR磷酸化的方法，其中所述癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性，且其中所述細(xì)胞包含Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì)胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸的步驟。一方面，本發(fā)明提供了用于降低癌細(xì)胞中PI3K介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的方法，其中所述癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性，且其中所述細(xì)胞包含Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì)胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸的步驟。一方面，本發(fā)明提供了用于降低癌細(xì)胞中EGFR介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的方法，其中所述癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性，且其中所述細(xì)胞包含Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì)胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸。一方面，本發(fā)明提供了用于恢復(fù)癌細(xì)胞對EGFR拮抗劑的敏感性的方法，其中所述癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性，且其中所述細(xì)胞包含Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì) 胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸。一方面，本發(fā)明提供了用于降低癌細(xì)胞生長或增殖的方法，其中所述癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性，且其中所述細(xì)胞包含Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì)胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸的步驟。一方面，本發(fā)明提供了用于提高癌細(xì)胞凋亡的方法，其中所述癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性，且其中所述細(xì)胞包含Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì)胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸的步驟。一方面，本發(fā)明提供了用于降低癌細(xì)胞對EGFR拮抗劑的抗性的方法，其中所述癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性，且其中所述細(xì)胞包含Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì)胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸的步驟。—方面，本發(fā)明提供了用于治療癌細(xì)胞中獲得性EGFR拮抗劑的方法，其中所述細(xì)胞包含Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增，包括使該細(xì)胞與本文所述任何抗Axl抗體和EGFR拮抗劑接觸。在一些實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞為任何EGFR衍生癌癥。在一些實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞包含EGFR激活突變。在一些實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞包含EGFR基因擴(kuò)增。在一些實(shí)施方案中，該EGFR基因擴(kuò)增為至少2倍。在一些實(shí)施方案中，該Axl擴(kuò)增為至少2倍。在一些實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞包含與對EGFR拮抗劑的抗性升高有關(guān)的EGFR基因突變。在一些實(shí)施方案中，該與對EGFR拮抗劑的抗性升高有關(guān)的EGFR基因突變?yōu)镋GFR的T790M突變。在一些實(shí)施方案中，該EGFR拮抗劑為小分子治療劑、核酸治療劑、或蛋白質(zhì)治療劑。在一些實(shí)施方案中，該EGFR拮抗劑為抗體、反義分子、或小分子激酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，該EGFR拮抗劑為選自下組的EGFR激酶抑制劑:吉非替尼(gef itinib)，厄洛替尼，西妥昔單抗(cetuximab), pantinumumab。在一些實(shí)施方案中，該EGFR拮抗劑為選自下組的抗EGFR抗體:西妥昔單抗，panitumumab。在一些實(shí)施方案中，該核酸治療劑為siRNA分子。—方面，本發(fā)明提供了用于鑒定作為EGFR拮抗劑和本文所述任何抗Axl抗體治療候選者的受試者的方法，其中所述受試者已經(jīng)用EGFR拮抗劑治療過且患有已經(jīng)對所述EGFR拮抗劑獲得了抗性的癌癥,包括檢測來自所述受試者的癌細(xì)胞中的Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增。 一方面，本發(fā)明提供了用于鑒定正在用EGFR拮抗劑治療且有風(fēng)險(xiǎn)對所述EGFR拮抗劑獲得抗性的受試者的方法，包括檢測來自所述受試者的癌細(xì)胞中Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增的存在，其中所述Axl表達(dá)、Axl激活突變或Axl基因擴(kuò)增的存在指示獲得所述抗性的風(fēng)險(xiǎn)。一方面，本發(fā)明提供了用于治療患有對EGFR拮抗劑治療有抗性的癌癥的受試者的方法,包括對該受試者施用EGFR拮抗劑和本文所述任何抗Axl抗體。一方面，本發(fā)明提供了用于治療患有與EGFR激活突變或EGFR基因擴(kuò)增有關(guān)的癌癥的受試者的方法，其中該受試者已經(jīng)對EGFR拮抗劑治療形成抗性，包括確定該受試者是否具有Axl表達(dá)，諸如升高的Axl水平和/或活性，并對那些具有Axl表達(dá)，諸如升高的Axl活性的受試者施用EGFR拮抗劑和本文所述任何抗Axl抗體。一方面，本發(fā)明提供了用于治療患有與EGFR激活突變或EGFR基因擴(kuò)增有關(guān)的癌癥的受試者的方法，包括:(i)監(jiān)測正在用EGFR拮抗劑治療的受試者以確定該受試者是否形成Axl表達(dá),諸如升高的水平和/或Axl活性,并(ii)在該受試者已經(jīng)形成Axl表達(dá),諸如升高的Axl水平和/或活性的情況中，修改該受試者的治療方案以在該EGFR拮抗劑之外還包括本文所述任何抗Axl抗體。一方面，本發(fā)明提供了用于治療患有與EGFR激活突變或EGFR基因擴(kuò)增有關(guān)的癌癥的受試者的方法，包括:(i)監(jiān)測正在用EGFR拮抗劑治療的受試者以確定該受試者是否形成對該抑制劑的抗性，(ii)測試該受試者以確定該受試者是否具有Axl表達(dá)，諸如升高的Axl水平和/或活性，并(iii)在該受試者具有升高的Axl水平和/或活性的情況中，修改該受試者的治療方案以在該EGFR拮抗劑之外還包括本文所述任何抗Axl抗體。另一方面，本發(fā)明提供了用于(i)恢復(fù)癌細(xì)胞對EGFR拮抗劑的敏感性，(ii)降低癌細(xì)胞對EGFR拮抗劑的抗性，和/或(iii )治療癌細(xì)胞中獲得性EGFR拮抗劑的方法，其通過使該細(xì)胞與EGFR拮抗劑和本文所述任何抗Axl抗體接觸來進(jìn)行。在例示性實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性且包含升高的Axl活性和/或表達(dá)水平，例如與Axl基因中的激活突變、Axl基因擴(kuò)增、或Gas6介導(dǎo)的Axl激活有關(guān)的。本文中公開的方法可用于恢復(fù)癌細(xì)胞的敏感性、降低癌細(xì)胞的抗性、和/或治療癌細(xì)胞的獲得性抗性。另一方面，本發(fā)明提供了用于降低癌細(xì)胞生長和/或增殖或提高癌細(xì)胞凋亡的方法，其通過使該細(xì)胞與EGFR拮抗劑和本文所述任何抗Axl抗體接觸來進(jìn)行。在例示性實(shí)施方案中，該癌細(xì)胞已經(jīng)對EGFR拮抗劑獲得了抗性且包含升高的Axl活性和/或表達(dá)，例如與Axl基因中的激活突變、Axl基因擴(kuò)增、或Gas6介導(dǎo)的Axl激活有關(guān)的。附圖簡述

圖1A-F:抗FGFR3抗體的重鏈和輕鏈HVR環(huán)序列。該圖顯示重鏈HVR序列，Hl,H2，和H3，和輕鏈HVR序列，LI，L2，和L3。氨基酸位置依照Kabat編號系統(tǒng)來編號，如本文中描述的。圖2:描繪抗Axl抗體的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。圖3A-B和4:描繪在實(shí)施本發(fā)明中使用的例示性受體人共有框架序列，序列標(biāo)示符如下:可變重(VH)共有框架(圖3A-B)人VH亞組I共有框架減去Kabat CDR (以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 131-133和 125)人VH亞組I共有框架減去延伸的高變區(qū)(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ IDNO:134-135，133，125，134-136，125，134-135，137 和 125)人VH亞組II共有框架減去Kabat CDR(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 138-140和 125) 人VH亞組II共有框架減去延伸的高變區(qū)(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ IDNO:141-142，140，125，141-143，125，141-142，144 和 125)人VH亞組II共有框架減去延伸的人VH亞組III共有框架減去Kabat⑶R(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 145-147和125)人VH亞組III共有框架減去延伸的高變區(qū)(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ IDNO:122-123，147，125，122-123，148，125 和 122-125)人VH受體框架減去Kabat CDR(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 149，146，150和125)人VH受體框架減去延伸的高變區(qū)(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 122-123，150，125，122-123，151和 125)人VH受體2框架減去Kabat CDR (以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 149，146，152和 125)人VH受體2框架減去延伸的高變區(qū)(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 122-123,152，125，122-123，153，125，122-123，154 和 125)可變輕(VL)共有框架s (圖4)人VL卡帕亞組I共有框架(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 126-129)人VL卡帕亞組II共有框架(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 155-157和129)人VL卡帕亞組III共有框架(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 158-160和129)人VL卡帕亞組IV共有框架(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 161-163 129)圖5:描繪huMAb4D5-8輕鏈(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 126-127，164和129)和重鏈(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 122-123，154和125)的框架區(qū)序列。以上標(biāo)/粗體表示的數(shù)字指出依照Kabat的氨基酸位置。圖6:描繪huMAb4D5-8輕鏈(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 126-129)和重鏈(以出現(xiàn)的次序分別為SEQ ID NO: 122-125)的修飾的/變異的框架區(qū)序列。以上標(biāo)/粗體表示的數(shù)字指出依照Kabat的氨基酸位置。圖 7A-H:Axl 單抗 YW327.6S2 的表征。A-B。使用 BIAcore 進(jìn)行的 YW327.6S2 的親和力測量。使用一對一朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型來計(jì)算結(jié)合速率(km)和解離速率(koff)。以比率kjkf推導(dǎo)平衡解離常數(shù)(Kd)。C。YW327.6S2的交叉反應(yīng)性。YW327.6S2與鼠和稱猴Axl但不與Tyro3或Mer交叉反應(yīng)。將板用抗人IgG Fe包被,然后與人Axl、Mer、Tyro3FCS、小鼠或獼猴AxlFcs —起溫育。清洗后，添加同種型對照抗體或YW327.6S2，接著是HRP偶聯(lián)的抗人IgG。D-E。YW327.6S2阻斷Gas6結(jié)合Axl。圖7D:ELISA。將板用抗人IgG Fe包被，并與人Axl-Fc—起溫育。清洗后，在有或無抗體的情況中添加Gas6。通過生物素化抗Gas6抗體和鏈霉親合素-HRP偶聯(lián)物來檢測Gas6的結(jié)合。圖7E:FACS。收獲HUVEC,并用YW327.6S2或?qū)φ湛贵w處理，然后與Gas6 —起在冰上溫育30分鐘。通過生物素化抗Gas6抗體和鏈霉親合素-PE偶聯(lián)物來檢測Gas6對細(xì)胞表面的結(jié)合。F。YW327.6S2下調(diào)Axl表達(dá)。將A549細(xì)胞與I μ g/ml YW327.6S2 一起溫育所示時間，并通過FACS來測定細(xì)胞表面Axl表達(dá)(上部小圖),通過Western印跡分析來測定總蛋白質(zhì)表達(dá)(下部小圖)。G0 YW327.6S2抑制Gas6誘導(dǎo)的Axl磷酸化和信號傳導(dǎo)。將H1299細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜，與YW327.6S2 一起預(yù)溫育4小時，并用Gas6處理30分鐘。通過ELISA來測量磷酸化的Axl (上部小圖),并通過Western印跡分析來測量磷酸化的Akt (下部小圖)。H。YW327.6S2抑制Baf3Axl細(xì)胞生長。使Baf3Axl細(xì)胞在含有200ng/ml Gas6的培養(yǎng)基中生長，并以所示濃度用YW327.6S2處理72小時。通過CellTiter Glo測定法來測量細(xì)胞存活力。圖8A-F:YW327.6S2削弱A549異種移植物腫瘤生長且增強(qiáng)抗VEGF的效果。A。腫瘤生長曲線。在均值腫瘤尺寸達(dá)到IOOmm3時(第O天)開始,每周兩次，以10mg/kg(YW327.6S2和同種型對照抗體)或lmg/kg (抗VEGF)IP施用單抗。誤差棒代表均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的每個組 n=10)。p=0.0003 (YW327.6S2 對對照)，p=l(Tn (YW327.6S2 對組合)。B。各個處理組的Kaplan-Meier曲線。當(dāng)小鼠的腫瘤尺寸達(dá)到800mm3時，自研究移除小鼠，并對每組中剩余的動物(％剩余)繪圖。C。12A11增強(qiáng)抗VEGF的效果。在均值腫瘤尺寸達(dá)到IOOmm3時(第O天)開始,每周兩次,分別以30mg/kg和lmg/kg IP施用12A11和抗VEGF。誤差棒代表均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的每個組n=10)。p=0.006C12A11對對照);p=0.0001(12A11對組合)。D0 YW327.6S2下調(diào)Axl表達(dá)。以10mg/kg用YW327.6S2處理小鼠，并在所示時間點(diǎn)取出腫瘤。通過Western印跡對來自腫瘤的細(xì)胞裂解物分析Axl表達(dá)。E。YW327.6S2誘導(dǎo)凋亡。取出用對照或YW327.6S2處理2周的腫瘤，并實(shí)施CC3IHC以測量凋亡。F。YW327.6S2增強(qiáng)抗VEGF在降低腫瘤內(nèi)血管密度方面的效果。在給藥后O和72小時自如上文D中所述處理的小鼠取出腫瘤，并且腫瘤血管系統(tǒng)通過MECA32免疫組織化學(xué)染色來顯現(xiàn)并通過圖像分析來定量(表述成平方微米)。對每一對實(shí)施Student’ s t檢驗(yàn)(對照對組合為P〈0.05)。圖9A-B:YW327.6S2在A549異種移植物模型中增強(qiáng)厄洛替尼和化療的抗腫瘤效果。A。YW327.6S2增強(qiáng)厄洛替尼的效果?？贵w施用與圖2中的相同。通過口腔管飼法以 100mg/kg/d 施用厄洛替尼。每組 n=10。p=l.7X1 O^9 (YW327.6S2 對對照)，p=2.3X10,(YW327.6S2對組合)。B。YW327. 6S2增強(qiáng)化療?？贵w施用與圖2中的相同。分別以持續(xù)5天6.25mg/kg/d及處理開始時(第O天)單劑100mg/kg皮下施用帕利他賽和卡鉬。每組η=10。ρ=3Χ1(Γ5 (YW327.6S2對對照)，ρ=1(Γ9 (化療對對照)，ρ=1(Γ5 (組合對單獨(dú)的化療)。圖10A-G:YW327.6S2通過調(diào)控腫瘤基質(zhì)功能來削弱MDA-MB-231異種移植物腫瘤生長。A和B。YW327.6S2而非12A11降低MDA-MB-231腫瘤生長且增強(qiáng)抗VEGF的效果。在均值腫瘤尺寸達(dá)到IOOmm3時(第O天)開始,每周兩次，以20mg/kg (YW327.6S2和同種型對照抗體)、30mg/kg (12A11)和2mg/kg (抗VEGF) IP施用單抗。誤差棒代表均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的每個組 η=10)。ρ=8.5X1(T6 (YW327.6S2 對對照)，ρ=2.8X1(T8 (YW327.6S2 對組合)，Ρ=0.05 (12Α11 對對照)，ρ=0.145 (抗 VEGF 對組合)。C 和 D。YW327.6S2 下調(diào) Axl 表達(dá)。以20mg/kg用單抗處理攜帶MDA-MB231異種移植物腫瘤(平均尺寸500mm3)的小鼠，并在所示時間點(diǎn)取出腫瘤。在Axl表達(dá)的Western印跡分析中使用來自腫瘤的細(xì)胞裂解物。E。YW327.6S2降低腫瘤相關(guān)血管系統(tǒng)的密度。在給藥后O小時和I周取出如上文C中所述處理的小鼠的腫瘤，并且腫瘤血管系統(tǒng)通過MECA32免疫組織化學(xué)染色顯現(xiàn)并通過圖像分析來定量(表述成平方微米)。對每一對實(shí)施Student’s t檢驗(yàn)(YW327.6S2對對照、抗VEGF對對照、和抗VEGF對組合為p〈0.05)。F。Axl在原發(fā)性人乳腺癌的浸潤巨噬細(xì)胞中高表達(dá)。使用免疫組織化學(xué)來檢查79份原發(fā)性腫瘤。這些腫瘤中21%在浸潤巨噬細(xì)胞中表達(dá)高水平的Axl。通過抗⑶68染色來鑒定巨噬細(xì)胞，并通過抗Axl/⑶68雙重IHC來測定巨噬細(xì)胞上的Axl表達(dá)。使用連續(xù)切片。G。YW327.6S2抑制來自腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的炎性細(xì)胞因子/趨化因子分泌。以20mg/kg用對照抗體、YW327.6S2或12A11處理攜帶MDA-MB231異種移植物腫瘤(平均尺寸500mm3)的小鼠，并在I周處理后取出腫瘤。通過分選F4/80陽性細(xì)胞來分離腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，并培養(yǎng)過夜。使用Bio-Plex小鼠細(xì)胞因子測定試劑盒來測量分泌入培養(yǎng)基中的細(xì)胞因子和趨化因子。圖1lA-B:YW327.6S2降低MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞對骨的轉(zhuǎn)移。A。尾靜脈注射腫瘤細(xì)胞后4周的生物發(fā)光成像。給小鼠腹膜內(nèi)(1.p.)注射200 μ L含25mg/ml D-螢光素(Invitrogen)的PBS，并在成像期間使用異氟烷經(jīng)鼻錐麻醉。在具有加強(qiáng)式電荷耦合器件照相機(jī)的Photon Imager (Biospace Lab, Paris, France)上捕捉生物發(fā)光圖像。B。胚骨切片的H&E染色。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時收集組織，在4%甲醛中固定，切片并用H&E染色。上部小圖中的圓圈顯示侵入骨的腫瘤細(xì)胞。下部小圖顯示骨髓中贅生性細(xì)胞的詳情。圖12:一種例示性人 Axl 序列，RefSeq NM_001699 (SEQ ID NO: 165)。發(fā)明詳述1.定義出于本文中的目的，“受體人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定義的人共有框架衍生的輕鏈可變域(VL)框架或重鏈可變域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受體人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列變化。在一些實(shí)施方案中，氨基酸變化的數(shù)目是10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。在一些實(shí)施方案中，VL受體人框架與VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同?！坝H和力”指分子(例如抗體)的單一結(jié)合位點(diǎn)與其結(jié)合配偶體(例如抗原)之間全部非共價相互作用總和的強(qiáng) 度。除非另有指示，如本文中使用的，“結(jié)合親和力”指反映結(jié)合對的成員(例如抗體和抗原)之間1:1相互作用的內(nèi)在結(jié)合親和力。分子X對其配偶體Y的親和力通?？梢杂媒怆x常數(shù)(Kd)來表述。親和力可以通過本領(lǐng)域知道的常用方法來測量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于測量結(jié)合親和力的具體的說明性和例示性的實(shí)施方案。“親和力成熟的”抗體指在一個或多個高變區(qū)(HVR)中具有一處或多處改變的抗體，與不擁有此類改變的親本抗體相比，此類改變導(dǎo)致該抗體對抗原的親和力改善。“血管發(fā)生病癥”指血管發(fā)生的任何失調(diào)，包括非新生物的和新生物的疾患。新生物疾患包括但不限于下文所描述的那些(見例如“癌癥”)。非新生物病癥包括但不限于不想要的或異常的肥大、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、銀屑病、銀屑病斑塊、結(jié)節(jié)病、動脈粥樣硬化、動脈粥樣硬化斑塊、糖尿病性和其它增殖性視網(wǎng)膜病包括早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、晶狀體后纖維組織增生、新血管性青光眼(neovascular glaucoma)、年齡相關(guān)黃斑變性、糖尿病性黃斑水腫、角膜新血管形成、角膜移植片新血管形成、角膜移植片排斥、視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成、眼角的新血管形成(發(fā)紅)、眼新血管疾病、血管再狹窄、動靜脈畸形(AVM)、腦脊膜瘤、血管瘤、血管纖維瘤、甲狀腺增生(包括格雷夫斯氏(Graves)病)、角膜和其它組織移植、慢性炎癥、肺炎、急性肺損傷/ARDS、敗血癥、原發(fā)性肺動脈高壓、惡性肺積液(malignantpulmonary effusion)、腦水腫(例如與急性中風(fēng)/閉合性頭部外傷/創(chuàng)傷有關(guān)的)、滑膜炎癥(synovial inflammation)、RA中的血管醫(yī)形成、骨化性肌炎、肥大性骨形成、骨關(guān)節(jié)炎(OA)、頑固性腹水、多囊卵巢病、子宮內(nèi)膜異位癥、第三空間流體病(3rd spacing of fluiddiseases)(胰腺炎、間隔綜合征、燒傷、腸病)、子宮纖維瘤(uterine fibroids)、早產(chǎn)、慢性炎癥諸如IBD (克羅恩氏(Crohn)病和潰瘍性結(jié)腸炎)、腎同種異體移植物排斥、炎性腸病、腎病綜合征、不想要的或異常的組織塊生長(非癌性的)、血友病性關(guān)節(jié)、肥厚性瘢痕、毛發(fā)生長的抑制、奧-韋二氏(Osler-Weber)綜合征、膿性肉芽腫晶狀體后纖維組織增生、硬皮病、沙眼、血管粘連、滑膜炎、皮炎、先兆子癇、腹水、心包積液(諸如與心包炎有關(guān)的)和胸腔積液?！翱寡馨l(fā)生劑”指阻斷或在某種程度上干擾血管發(fā)育的化合物?？寡馨l(fā)生因子可以是例如結(jié)合涉及促進(jìn)血管發(fā)生的生長因子或生長因子受體的小分子或抗體。在一個實(shí)施方案中，抗血管發(fā)生劑是結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的抗體，諸如貝伐單抗(AV^STIN )。 術(shù)語“抗Axl抗體”和“結(jié)合Axl的抗體”指能夠以足夠親和力結(jié)合Axl，使得該抗體可作為診斷劑和/或治療劑用于靶向Axl的抗體。在一個實(shí)施方案中，根據(jù)例如通過放射免疫測定法(RIA)的測量，抗Axl抗體結(jié)合無關(guān)的、非Axl的蛋白質(zhì)的程度小于該抗體對Axl的結(jié)合的約10%。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合Axl的抗體具有彡ΙμΜ、彡ΙΟΟηΜ、彡IOnM,(InM、彡 0.1nM、彡 0.0lnM、或彡 0.0OlnM(例如 10_8M或更少，例如 I(T8M 至Ij 10_13M，例如 KT9M到I(T13M)的解離常數(shù)(Kd)。在某些實(shí)施方案中，抗Axl抗體結(jié)合在來自不同物種的Axl中保守的Axl表位。本文中的術(shù)語“抗體”以最廣義使用，并且涵蓋各種抗體結(jié)構(gòu)，包括但不限于單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、和抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的抗原結(jié)合活性?！翱贵w片段”指與完整抗體不同的分子，其包含完整抗體中結(jié)合完整抗體結(jié)合的抗原的部分?？贵w片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’ _SH、F(ab’ )2 ;雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv);和由抗體片段形成的多特異性抗體。
與參照抗體“結(jié)合相同表位的抗體”指在競爭測定法中將參照抗體對其抗原的結(jié)合阻斷50%或更多的抗體，且相反，參照抗體在競爭測定法中將該抗體對其抗原的結(jié)合阻斷50%或更多。本文中提供了例示性的競爭測定法。在用于本文時，術(shù)語“Axl”指來自任何脊椎動物來源，包括哺乳動物諸如靈長類(例如人)和嚙齒類(例如小鼠和大鼠)的任何天然Axl，除非另有說明。該術(shù)語涵蓋“全長”，未加工的Axl以及Axl因細(xì)胞中的加工所致的任何形式。該術(shù)語還涵蓋Axl的天然存在變體，例如剪接變體或等位變體。一種例示性人Axl的氨基酸序列顯示于圖12?！癆xl活化”指Axl受體的活化或磷酸化。一般而言，Axl活化導(dǎo)致信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(例如由Axl受體的細(xì)胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域引起的，磷酸化Axl或底物多肽中的酪氨酸殘基)。Axl活化可以由Axl配體(Gas6)結(jié)合感興趣Axl受體來介導(dǎo)。Gas6對Axl的結(jié)合可活化Axl的激酶結(jié)構(gòu)域并由此導(dǎo)致Axl中酪氨酸殘基的磷酸化和/或其它的底物多肽中酪氨酸殘基的磷酸化。術(shù)語“癌癥”和“癌性”指向或描述哺乳動物中典型特征為細(xì)胞生長/增殖不受調(diào)控的生理疾患。此類癌癥的更具體例子包括鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺的腺癌、肺的鱗癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃腸癌、胰腺癌、膠質(zhì)瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝肉瘤(hepatoma)、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌(liver cancer)、前列腺癌、夕卜陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、白血病和其它淋巴增殖性病癥、及各種類型的頭和頸癌。術(shù)語“細(xì)胞增殖性病癥”和“增殖性病癥”指與一定程度的異常細(xì)胞增殖有關(guān)的病癥。在一個實(shí)施方案中，細(xì)胞增殖性病癥指癌癥。“化療劑”指可用于治療癌癥的化學(xué)化合物。化療劑的實(shí)例包括燒化劑類(alkylating agents),諸如塞替派(thiotepa)和環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide) (CYTOXAN );橫酸焼基酯類(alkyl sulfonates)，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙卩定類(aziridines)，諸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和烏瑞替派(uredepa)；乙撐亞胺類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemeIamine)、三乙撐憐酉先胺(triethylenephosphoramide)、三乙撐硫代憐酉先胺(triethylenethiophosphoramide)和三輕甲蜜胺(trimethylolomelamine);番蒸枝內(nèi)酯類(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));δ-9-四氫大麻酌.(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酌.(dronabinol), MAR1NOL );β -拉帕醌(Iapachone)；拉帕醇(Iapachol);秋水仙素類(colchicines)；白樺脂酸(betulinic acid) ；喜樹堿(camptothecin)(包括合成類似物托泊替康(topotecan) ( HYCAMT1N )、CPT-1l (伊立替康(irinotecan)，CAMPIOSAR )、乙酰喜樹堿、東莨菪亭(scopoletin)和9_氨基喜樹堿)；苔蘚抑素(bryostatin)；callystatin ;CC_1065 (包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinicacid);替尼泊苷(teniposide);隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素I和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin) ；duocarmycin (包括合成類似物，KW-2189和CBl-TMl);艾植塞洛素(eleutherobin) ；pancratistatin ；sarcodictyin ;海綿抑素(spongistatin);氮芥類(nitrogen mustards)，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽憐酸胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)憐酉先胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxide hydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽留醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺(trofosfamide)、尿啼 P定氮芥(uracil mustard)；亞硝脲類(nitrosoureas)，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(1mustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(如加利車霉素(calicheamicin)，尤其是加利車霉素YlI和加利車霉素ω (參見例如 Nicolaou 等人.，Angew.Chem Intl.Ed.Engl., 33:183-186(1994) ) ；CDP323, 一種口服α -4整聯(lián)蛋白抑制劑；蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A ;埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白烯二炔類抗生素發(fā)色團(tuán))、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素 D (dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_ 二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN 、嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射劑(DOXIL )、脂質(zhì)體多柔比星TLC D-99 (MYOCET )、PEG化脂質(zhì)體多柔比星(CAELYX )、和脫氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin )、伊達(dá)比星(idarubicin)、麻西羅霉素(marcel1mycin)、絲裂霉素類(mitomycins)諸如絲裂霉素 C、霉酷酸(mycophenolic acid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代謝物類，諸如甲氨蝶呤、吉西他濱(gemcitabine) ( GEMZAR )、替加氟(tegafur) ( UFTORAL )、卡培他濱(capecitabine) ( XELODA )、埃坡霉素(epothilone)和 5_ 氟尿啼P定(5-FU);葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate) ; 票呤類似物，諸如氟達(dá)拉濱(fludarabine)、6-疏基票呤(mercaptopurine)、硫咪票呤(thiamiprine)、硫鳥 P票呤(thioguanine)；啼卩定類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifIuridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(f1xuridine);雄激素類，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睪內(nèi)酯(testolactone);抗腎上腺類，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);葉酸補(bǔ)充劑，諸如亞葉酸(folinic acid);醋葡醒內(nèi)酯(aceglatone);醒磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酉先丙酸(aminolevulinic acid);恩尿啼唳(eniluracil);安口丫P定(amsacrine) ；bestrabucil ;比生群(bisantrene);依達(dá)曲沙(edatraxate)；地憐酉先胺(defosfamide);地美可辛(demecolcine);地口丫酉昆(diaziquone) ；elfornithine ；依利醋銨(elliptinium acetate) ;epothilone ;依托格魯(etoglucid);硝酸鎵；輕脲(hydroxyurea);香燕多糖(Ientinan);氯尼達(dá)明(1nidamine);美登木素生物減類(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫哌達(dá)醇(mopidamol) ； 二胺硝口丫 P定(nitracrine);噴司他丁 (pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet)；卩比柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(1soxantrone) ;2_ 乙基酸月井(ethylhydrazide);丙卡巴餅(procarbazine) ； PSK 多糖復(fù)合物(JHS Natural Products, Eugene, OR);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西索菲蘭(sizofiran);螺方定錯(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid);三亞胺醌(triaziquone) '2,2，，2” -三氯三乙胺；單端孢菌素類(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、撫孢菌素(verrucarin)A、桿孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));烏拉坦(urethan);長春地辛(vindesine) (ELDISINE =, FILDESIN );達(dá)卡巴嗪(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine) ; 二溴甘露醇(mitobronitol) ; 二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);哌泊溴焼(pipobroman) ;gacytosine ;阿糖胞苷(arabinoside) (“Ara_C”)；塞替派(thiotepa)；類紫杉醇(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel) ( TAXOL )、清蛋白改造的納米 顆粒劑型帕利他塞(ABRAXANE )和多西他塞(doxetaxel) ( TAXOTERE );苯丁酸氮芥(chlorambucil) ;6_ 硫鳥 P票呤(thioguanine);疏基票呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate);鉬類似物，諸如順鉬(cisplatin)、奧沙利鉬(oxaliplatin)(例如ELOXAHN )和卡鉬(carboplatin);長春藥類(vincas),其阻止微管蛋白聚合形成微管，包括長春堿(vinblastine) (VELBAN )、長春新堿(vincristine) (ONCOVIN )、長春地辛(vindesine) (ELDISINE ，F(xiàn)ILDESIN )、和長春瑞濱(vinorelbinu) (NAVELBINE(Jii)；依托泊音(etoposide) (VP-16)；異環(huán)磷酰胺(ifosfamide);米托蒽酉昆(mitoxantrone);亞葉酸(Ieucovorin)；能滅瘤(novantrone);依達(dá)曲沙(edatrexate);道諾霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);伊本勝酸鹽(ibandronate);拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS2000 ； 二氟甲基鳥氨酸(DMFO);類維A酸(retinoids)，諸如維A酸(retinoic acid)，包括貝沙羅汀(bexarotene) (!ARGRETINΦ)；.:勝酸鹽類(bisphosphonates),諸如氯膦酸鹽(clodronate)(例如BONEFOS 或OSTAC )、依替膦酸鈉(etidronate) ( D丨DROCAL )、NE-58095、唑來膦酸 / 唑來膦酸鹽(zoledronicacid/zoledronate) ( ZOMETA )、阿倫膦酸鹽(alendronate) ( FO S AM ΑΧ )>帕米膦酸鹽(pamidronate) ( AREDIA )、替魯膦酸鹽(tiludronate) ( SKELID )或利塞膦酸鹽(risedronate) ( ACTONEL );以及曲沙他濱(troxacitabine)(1，3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制牽涉異常細(xì)胞增殖的信號途經(jīng)中的基因表達(dá)的反義寡核苷酸，諸如例如PKC- a、Raf、H-Ras和表皮生長因子受體(EGF-R);疫苗，諸如THERATOPE 疫苗和基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和VAXID 疫苗;拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑(例如 L.URTOTECAN ) ;rmRH (例如 ABARELIX ) ;BAY439006(SOTafenib; BayeiO ;SU-11248 (sunitinib, SUTENT ，Pfizer);哌立福辛(perifosine)，C0X-2 抑制劑(如塞來考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))，蛋白體抑制劑(例如PS341);bortezomib (VELCADE ); CC1-779 ；tipifarnib (R11577) ；orafenib, ABT510 ；Bcl-2 抑制劑，諸如 oblimersen sodium ( GENASENSE )； pixantrone ；EGFR 抑制齊U(見下文定義)；酪氨酸激酶抑制劑(見下文定義)；絲氨酸-蘇氨酸激酶抑制劑，諸如雷帕霉素(rapamycin) (sirolimus, RAPAMUNE );法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，諸如lonafarnib (SCH6636, SARASARTM);及任何上述各項(xiàng)的藥學(xué)可接受鹽、酸或衍生物；以及兩種或更多種上述各項(xiàng)的組合，諸如CHOP (環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿和潑尼松龍聯(lián)合療法的縮寫)和FOLFOX (奧沙利鉬(EL0XATIN )聯(lián)合5-FU和亞葉酸的治療方案的縮寫)。如本文中定義的化療劑包括起調(diào)節(jié)、降低、阻斷或抑制可促進(jìn)癌生長的激素效果作用的“抗激素劑”或“內(nèi)分泌治療劑”類。它們自身可以是激素，包括但不限于:具有混合的激動劑/拮抗劑特性的抗雌激素類，包括他莫昔芬(tamoxifen) (NOLVADEX)、
4-輕基他莫昔芬、托瑞米芬(toremifene) (FARES I ON )、艾多昔芬(idoxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、雷洛昔芬(raloxifene) (EVISTA )、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)，和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑類(SERM)，諸如SERM3 ;沒有激動劑特性的純的抗雌激素類，諸如氟維司群(fulvestrant) (FASLODEX' )和EM800 (此類藥劑可阻斷雌激素受體(ER) 二聚化、抑制DNA結(jié)合、提高ER周轉(zhuǎn)、和/或遏制ER水平)；芳香酶抑制劑類，包括類固醇芳香酶抑制劑類，諸如福美坦(formestane)和依西美坦(exemestane) (AROMASIN )，和非類固醇芳香酶抑制劑類，諸如阿那曲唑(anastrozole) (ARIMIDEX )、來曲唑(Ietrozole) (FEMARA )和氨魯米特(aminoglutethimide),和其它芳香酶抑制劑類，包括伏氯唑(vorozole) (RIVISOR )、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate) (ME.GASE )、法倔唑(fadrozole)和 4(5)-咪唑；促黃體生成激素釋放激素激動劑類，包括亮丙瑞林(Ieuprolide) (LUPRON 和ELIGARD )、戈舍瑞林(goserelin)、布舍瑞林(buserelin)和曲普瑞林(triptorelin);性類固醇類(sex steroids),包括妊娠素類(progestine),諸如醋酸甲地孕酮和醋酸甲輕孕酮(medroxyprogesterone acetate),雌激素類,諸如二乙基己烯雌酹(diethylstiIbestrol)和普雷馬林(premarin),和雄激素類/類視黃酸類,諸如氟甲睪酮(fluoxymesterone)、所有反式視黃酸(transretionic acid)和芬維 A 胺(fenretinide)；奧那司酮(onapristone);抗孕酮類；雌激素受體下調(diào)劑類(ERD);抗雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide);及任何上述物質(zhì)的藥劑學(xué)可接受的鹽、酸或衍生物；以及兩種或多種上述物質(zhì)的組合。術(shù)語“嵌合”抗體指其中的重和/或輕鏈的一部分自特定的來源或物種衍生，而重和/或輕鏈的剩余部分自不同來源或物種衍生的抗體?？贵w的“類”指其重鏈擁有的恒定域或恒定區(qū)的類型?？贵w有5大類:IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，并且這些中的幾種可以進(jìn)一步分成亞類(同種型)，例如，IgG1, IgG2, IgG3、IgG4 JgA1、和IgA2。與不同類免疫球蛋白對應(yīng)的重鏈恒定域分別稱作α、δ、ε、Y、和μ。
如本文中所使用的，如例如應(yīng)用于受體激酶活性，術(shù)語“組成性”指受體不依賴配體或其它活化性分子的存在的持續(xù)信號傳導(dǎo)活性。根據(jù)受體的性質(zhì)，所有活性可以是組成性的，或者受體的活性可以通過其它分子(例如配體)的結(jié)合而進(jìn)一步活化。導(dǎo)致受體活化的細(xì)胞事件是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的。例如，活化可包括寡聚化(例如二聚化，三聚化，等)成高級受體復(fù)合物。復(fù)合物可包含單一種類的蛋白質(zhì)，即同聚復(fù)合物。或者，復(fù)合物可包含至少兩種不同蛋白質(zhì)種類，即異聚復(fù)合物。可以通過例如受體的正?；蛲蛔凅w形式在細(xì)胞表面上的過表達(dá)來引起復(fù)合物形成。也可以通過受體中的一處或多處特定突變來引起復(fù)合物形成。術(shù)語“細(xì)胞抑制劑”指在體外或在體內(nèi)阻滯細(xì)胞生長的化合物或組合物。如此，細(xì)胞抑制劑可以是顯著降低處于S期的細(xì)胞百分比的藥劑。細(xì)胞抑制劑的其它的例子包括通過誘導(dǎo)G0/G1停滯或M期停滯來阻斷細(xì)胞周期行進(jìn)的藥劑。人源化抗Her2抗體曲妥單抗(HERCEPT丨N )是誘導(dǎo)G0/G1阻滯的細(xì)胞抑制劑的一個例子。經(jīng)典的M期阻斷劑包括長春藥類(vincas)(長春新堿(vincristine)和長春堿(vinblastine))、紫杉燒類(taxanes)、和拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑諸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博來霉素(bleomycin)。某些阻滯Gl的藥劑也溢出進(jìn)入S期停滯，例如DNA烷化劑類諸如他莫昔芬(tamoxifen)、潑尼松(prednisone)、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、順鉬(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5_ 氟尿 U密唳(5-fIuorouracil)和 ara_C。更多信息可參見 Mendelsohn 和 Israel 編，《TheMolecular Basis of Cancer〉〉，第 I 章，題為 “Cell cycle regulation, oncogenes, andantieioplastic drugs，，，Murakaini 等，ff.B.Saunders, Philadelphia, 1995,例如第 13頁。紫杉燒類(帕利他塞(paclitaxel)和多西他賽(docetaxel))是衍生自紫杉樹的抗癌藥。衍生自歐洲紫杉的多西他賽(TAXOTERE , Rhone-Poulenc Rorer)是帕利他塞(TAX0L1 , Bristol-Myers Squibb)的半合成類似物。帕利他塞和多西他賽促進(jìn)由微管蛋白二聚體裝配成微管并通過防止解聚使微管穩(wěn)定，導(dǎo)致對細(xì)胞中有絲分裂的抑制。在用于本文時，術(shù)語“細(xì)胞毒劑”指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。細(xì)胞毒劑包括但不限于:放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y9°、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素);化學(xué)治療劑或藥物(例如甲氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、長春花生物堿類(vinca alkaloids)(長春新堿(vincristine)、長春堿(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔紅霉素(daunorubicin)或其它嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，諸如溶核酶；抗生素；毒素，諸如小分子毒素或者細(xì)菌、真菌、植物或動物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或變體 '及下文公開的各種抗腫瘤或抗癌劑。“效應(yīng)器功能”指那些可 歸于抗體Fe區(qū)且隨抗體同種型而變化的生物學(xué)活性。抗體效應(yīng)器功能的例子包括:Clq結(jié)合和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC) ；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC);吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體)下調(diào)；和B細(xì)胞活化。藥劑(例如藥物配制劑)的“有效量”指在必需的劑量和時段上有效實(shí)現(xiàn)期望的治療或預(yù)防結(jié)果的量。本文中的術(shù)語“Fe區(qū)”用于定義免疫球蛋白重鏈中至少含有恒定區(qū)一部分的C端區(qū)。該術(shù)語包括天然序列Fe區(qū)和變體Fe區(qū)。在一個實(shí)施方案中，人IgG重鏈Fe區(qū)自Cys226，或自Pro230延伸至重鏈的羧基端。然而，F(xiàn)e區(qū)的C端賴氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有規(guī)定，F(xiàn)e區(qū)或恒定區(qū)中的氨基酸殘基的編號方式依照EU編號系統(tǒng)，又稱作EU 索弓 I,如記載于 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991。“框架”或“FR”指除高變區(qū)(HVR)殘基外的可變域殘基。一般地，可變域的FR由4個？1 域組成疋1 1、？1 2、？1 3、和？1 4。因而，HVR和FR序列在VH (或VL)中一般以如下的順序出現(xiàn):FR1-H1 (LI) -FR2-H2 (L2) -FR3-H3 (L3) -FR4。術(shù)語“全長抗體”、“完整抗體”、和“全抗體”在本文中可互換使用，指與天然抗體結(jié)構(gòu)具有基本上類似的結(jié)構(gòu)或者具有含有如本文中所限定的Fe區(qū)的重鏈的抗體。術(shù)語“宿主細(xì)胞”、“宿主細(xì)胞系”、和“宿主細(xì)胞培養(yǎng)物”可互換使用，并且指已經(jīng)導(dǎo)入外源核酸的細(xì)胞，包括此類細(xì)胞的后代。宿主細(xì)胞包括“轉(zhuǎn)化體”和“經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞”，其包括原代的經(jīng)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞及自其衍生的后代而不考慮傳代的次數(shù)。后代在核酸內(nèi)容物上可以與親本細(xì)胞不完全相同，而是可以含有突變。本文中包括具有與在初始轉(zhuǎn)化細(xì)胞中篩選或選擇的相同功能或生物學(xué)活性的突變體后代?！叭丝贵w”指擁有與由人或人細(xì)胞生成的或利用人抗體全集或其它人抗體編碼序列自非人來源衍生的抗體的氨基酸序列對應(yīng)的氨基酸序列的抗體。人抗體的此定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。“人共有框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列選集中最常存在的氨基酸殘基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列選集來自可變域序列亞組。通常，序列亞組是如 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，NIHPublication91-3242, Bethesda MD (1991),第1-3卷中的亞組。在一個實(shí)施方案中，對于VL，亞組是如Kabat等，見上文中的亞組k I。在一個實(shí)施方案中，對于VH，亞組是如Kabat等，見上文中的亞組III?！叭嗽椿笨贵w指包含來自非人HVR的氨基酸殘基和來自人FR的氨基酸殘基的嵌合抗體。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體會包含至少一個，通常兩個基本上整個可變域，其中所有或基本上所有HVR (例如，CDR)對應(yīng)于非人抗體的那些，且所有或基本上所有FR對應(yīng)于人抗體的那些。任選地，人源化抗體可以至少包含自人抗體衍生的抗體恒定區(qū)的一部分?？贵w，例如非人抗體的“人源化形式”指已經(jīng)經(jīng)歷人源化的抗體。在用于本文時，術(shù)語“高變區(qū)”或“HVR”指抗體可變域中在序列上高變的和/或形成結(jié)構(gòu)上限定的環(huán)(“高變環(huán)”)的每個區(qū)。一般地，天然的4鏈抗體包含6個HVR;三個在VH中(H1、H2、H3)，且三個在VL中(L1、L2、L3)。HVR 一般包含來自高變環(huán)和/或來自“互補(bǔ)決定區(qū)”(CDR)的氨 基酸殘基，后一種是最高序列變異性的和/或牽涉抗原識另U。例示性的高變環(huán)存在于氨基酸殘基26-32 (LI)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (Hl)、53-55 (H2)、和 96-101 (H3)。(Chothia和 Lesk, J.Mol.Biol.196:901-917 (1987))。例示性的CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-Hl、CDR-H2、和 CDR-H3)存在于 LI 的氨基酸殘基 24-34、L2 的 50-56,L3 的 89-97,Hl 的 31_35B、H2 的 50-65、和 H3 的 95-102 (Kabat 等，Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版 Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, MD(1991))。除了 VH 中的 CDRl 外，CDR—般包含形成高變環(huán)的氨基酸殘基。⑶R還包含“特異性決定殘基”，或“SDR”，其是接觸抗原的殘基。SDR包含在稱作縮短的-⑶R，或a-⑶R的⑶R區(qū)內(nèi)。例示性的a-⑶R (a_⑶R-Ll、a_⑶R-L2、a-CDR-L3、a-CDR-Hl、a-CDR-H2、和 a_CDR_H3)存在于 LI 的氨基酸殘基 31_34、L2 的 50-55、L3 的 89-96、Hl 的 31-35B、H2 的 50-58、和 H3 的 95-102 (見 Almagro 和 Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633(2008))。除非另有指示，可變域中的HVR殘基和其它殘基(例如，F(xiàn)R殘基)在本文中依照Kabat等，見上文編號。“免疫綴合物”指與一種或多種異源分子，包括但不限于細(xì)胞毒劑綴合的抗體?！皞€體”或“受試者”是哺乳動物。哺乳動物包括但不限于馴養(yǎng)的動物(例如，牛、綿羊、貓、犬、和馬)、靈長類(例如，人和非人靈長類諸如猴)、家兔、和嚙齒類(例如，小鼠和大鼠)。在某些實(shí)施方案中，個體或受試者是人?！耙种萍?xì)胞生長或增殖”意味著將細(xì)胞的生長或增殖降低至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或100%，而且包括誘導(dǎo)細(xì)胞死亡?！胺蛛x的”抗體指已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分開的抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體純化至大于95%或99%的純度，如通過例如電泳(例如，SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細(xì)管電泳)或?qū)游?例如，離子交換或反相HPLC)測定的。關(guān)于用于評估抗體純度的方法的綜述，見例如 Flatman 等,J.Chromatogr.B848:79-87 (2007)?！胺蛛x的”核酸指已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分開的核酸分子。分離的核酸包括通常含有核酸分子的細(xì)胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色體外或在與其天然染色體位置不同的染色體位置處存在?！熬幋a抗Axl抗體的分離的核酸”指編碼抗體重和輕鏈(或其片段)的一種或多種核酸分子，包括單一載體或不同載體中的此類核酸分子，和存在于宿主細(xì)胞中的一個或多個位置的此類核酸分子。如本文中所使用的，如例如應(yīng)用于受體信號傳導(dǎo)活性，術(shù)語“不依賴配體的”指不依賴配體的存在的信號傳導(dǎo)活性。具有不依賴配體的激酶活性的受體不會必然排除配體結(jié)合該受體以產(chǎn)生額外的激酶活性活化。在用于本文時，術(shù)語“單克隆抗體”指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個抗體是相同的和/或結(jié)合相同表位，除了例如含有天然存在的突變或在單克隆抗體制備物的生成期間發(fā)生的可能的變體抗體外，此類變體一般以極小量存在。與通常包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，單克隆抗體制備物的每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。如此，修飾語“單克隆”指示抗體自一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的特性，而不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，可以通過多種技術(shù)來生成要依照本發(fā)明使用的單克隆抗體，包括但不限于雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法、和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的轉(zhuǎn)基因動物的方法，本文中描述了用于生成單克隆抗體的此類方法和其它例示性方法。

“裸抗體”指未與異源模塊(例如細(xì)胞毒性模塊)或放射性標(biāo)記物綴合的抗體。裸抗體可以存在于藥物配制劑中?！疤烊豢贵w”指具有不同結(jié)構(gòu)的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150，000道爾頓的異四聚糖蛋白，由二硫化物鍵合的兩條相同輕鏈和兩條相同重鏈構(gòu)成。從N至C端，每條重鏈具有一個可變區(qū)(VH)，又稱作可變重域或重鏈可變域，接著是三個恒定域(CH1、CH2、和CH3)。類似地，從N至C端，每條輕鏈具有一個可變區(qū)(VL)，又稱作可變輕域或輕鏈可變域，接著是一個恒定輕(CL)域。根據(jù)其恒定域氨基酸序列，抗體輕鏈可歸入兩種類型中的一種，稱作卡帕(K)和拉姆達(dá)(入)。術(shù)語“包裝插頁”用于指治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝中通常包含的用法說明書，其含有關(guān)于涉及此類治療產(chǎn)品應(yīng)用的適應(yīng)癥、用法、劑量、施用、聯(lián)合療法、禁忌癥和/或警告的信肩、O關(guān)于參照多肽序列的“百分比(%)氨基酸序列同一性”定義為比對序列并在必要時引入缺口以獲取最大百分比序列同一性后，且不將任何保守替代視為序列同一性的一部分時，候選序列中與參照多肽序列中的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的百分率。為測定百分比氨基酸序列同一性目的的對比可以以本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的多種方式進(jìn)行，例如使用公眾可得到的計(jì)算機(jī)軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以決定用于比對序列的合適參數(shù)，包括對所比較序列全長獲得最大對比所需的任何算法。然而，為了本發(fā)明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比較計(jì)算機(jī)程序ALIGN-2產(chǎn)生的。ALIGN-2序列比較計(jì)算機(jī)程序由Genentech, Inc.編寫，并且源代碼已經(jīng)連同用戶文檔一起提交給美國版權(quán)局(US Copyright Office, WashingtonD.C.，20559)，其中其以美國版權(quán)注冊號TXU510087注冊。公眾自Genentech, Inc.，SouthSan Francisco, California可獲得ALIGN-2程序,或者可以從源代碼編譯。ALIGN2程序應(yīng)當(dāng)編譯成在UNIX操作系統(tǒng)，包括數(shù)碼UNIX V4.0D上使用。所有序列比較參數(shù)由ALIGN-2程序設(shè)定且不變。在采用ALIGN-2來比較氨基酸序列的情況中，給定氨基酸序列A相對于(to)、與(with)、或針對(against)給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述為具有或包含相對于、與、或針對給定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的給定氨基酸序列A)如下計(jì)算: 分?jǐn)?shù)X/Y乘100其中X是由序列比對程序ALIGN-2在該程序的A和B比對中評分為相同匹配的氨基酸殘基數(shù)，且其中Y是B中的氨基酸殘基總數(shù)。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會，若氨基酸序列A的長度與氨基酸序列B的長度不相等，則A相對于B的％氨基酸序列同一性將不等于B相對于A的％氨基酸序列同一性。除非另有明確說明，本文中所使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2計(jì)算機(jī)程序獲得的。術(shù)語“藥物配制劑”指處于如下的形式，使得容許其中含有的活性成分的生物學(xué)活性是有效的，且不含對會接受配制劑施用的受試者具有不可接受的毒性的其它的組分的制劑?！八帉W(xué)可接受載體”指藥物配制劑中與活性成分不同的，且對受試者無毒的成分。藥學(xué)可接受載體包括但不限于緩沖劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、或防腐劑。在用于本文時，“治療/處理”(及其語法變型)指試圖改變所治療個體的天然過程的臨床干預(yù)，并且可以為了預(yù)防或者在臨床病理學(xué)的過程期間實(shí)施。治療的期望效果包括但不限于預(yù)防疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)、減輕癥狀、減輕/減少疾病的任何直接或間接病理后果、預(yù)防轉(zhuǎn)移、降低疾病進(jìn)展速率、改善或減輕疾病狀態(tài)、和消退或改善的預(yù)后。在一些實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的抗體來延遲疾病的形成或減緩疾病的進(jìn)展。術(shù)語“腫瘤”指所有贅生性(neoplastic)細(xì)胞生長和增殖，無論是惡性的還是良性的，及所有癌前(pre-canceixms)和癌性細(xì)胞和組織。術(shù)語“癌癥”、“癌性”、“細(xì)胞增殖性病癥”、“增殖性病癥”和“腫瘤”在本文中提到時并不互相排斥。術(shù)語“可變區(qū)”或“可變域”指抗體重或輕鏈中牽涉抗體結(jié)合抗原的域。天然抗體的重鏈和輕鏈可變域(分別為VH和VL) —般具有類似的結(jié)構(gòu),其中每個域包含4個保守的框架區(qū)(FR)和3個高變區(qū)(HVR)。(見例如Kindt等Kuby Immunology,第6版，W.H.Freeman and C0.,第91頁(2007))。單個VH或VL域可以足以賦予抗原結(jié)合特異性。此外，可以分別使用來自結(jié)合抗原的抗體的VH或VL域篩選互補(bǔ)VL或VH域的文庫來分離結(jié)合特定抗原的抗體。見例如，Portolano 等,J.Tmmuno1.150:880-887 (1993) ; Clarkson等，Nature352:624-628 (1991)。在用于本文時，術(shù)語“載體”指能夠增殖與其連接的另一種核酸的核酸分子。該術(shù)語包括作為自身復(fù)制型核酸結(jié)構(gòu)的載體及整合入接受其導(dǎo)入的宿主細(xì)胞的基因組中的載體。某些載體能夠指導(dǎo)與其可操作連接的核酸的表達(dá)。此類載體在本文中稱為“表達(dá)載體”?！癡H亞組III共有框架”包含自Kabat等人的可變重亞組III中的氨基酸序列獲得的共有序列。在一個實(shí)施方案中，VH亞組III共有框架氨基酸序列包含下述序列每一項(xiàng)的至少部分或整個:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ IDNO:122)-Hl-WVRQAPGKGLEffV(SEQ ID NO:123)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQID NO: 124) -H3-WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 125)?！癡L 亞組 I 共有框架”包含自 Kabat 等人的可變輕卡帕亞組I中的氨基酸序列獲得的共有序列。在一個實(shí)施方案中，VL亞組I共有框架氨基酸序列包含下述序列每一項(xiàng)的至少部分或整個:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ IDNO:126)-Ll-WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:127)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:128)-L3-FGQGTKVEIK(SEQ ID NO:129)。

I1.組合物和方法一方面，本發(fā)明部分基于多種Axl結(jié)合劑(諸如抗體及其片段)的鑒定。Axl代表一種重要且有利的治療靶，而且本發(fā)明提供了基于藥劑對Axl的結(jié)合的組合物和方法。如本文中描述的，本發(fā)明的Axl結(jié)合劑提供重要的治療劑和診斷劑，用于靶向與Axl信號傳導(dǎo)途徑的表達(dá)和/或活性有關(guān)的病理狀況。在某些實(shí)施方案中，提供了與Axl結(jié)合的抗體。本發(fā)明的抗體可用于例如癌癥的診斷和治療。A.例示性抗Axl抗體一方面，本發(fā)明提供了與Axl結(jié)合的分離的抗體。在某些實(shí)施方案中，抗Axl抗體以彡550pM的親和力結(jié)合人Axl，而且在一些實(shí)施方案中，以彡InM的親和力結(jié)合小鼠Axl。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體結(jié)合人和小鼠Axl。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體誘導(dǎo)細(xì)胞表面(例如腫瘤細(xì)胞表面)上的Axl受體表達(dá)下調(diào)。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞表面Axl表達(dá)降低至Axl抗體處理缺失下Axl細(xì)胞表面表達(dá)的80%。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞表面表達(dá)降低至Axl抗體處理缺失下Axl細(xì)胞表面表達(dá)的少于70%、少于60%、少于50%或少于40%。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞)中的總Axl表達(dá)降低至少于Axl抗體處理缺失下總Axl表達(dá)的80%。在一些實(shí)施方案中，總Axl表達(dá)降低至Axl抗體處理缺失下總Axl表達(dá)的少于70%、少于60%、少于50%或少于40%。在一些實(shí)施方案中，Axl表達(dá)的下調(diào)快速發(fā)生且持續(xù)至少24小時。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體抑制組成性Axl活性。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體不與Sky或Mer發(fā)生顯著交叉反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體不與Sky或Mer發(fā)生顯著結(jié)合，而且結(jié)合人和小鼠Axl。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體抑制Axl活性。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體促進(jìn)細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞，諸如A549腫瘤細(xì)胞)的凋亡。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體抑制Axl配體(例如Gas6)與Axl結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體抑制Axl下游信號傳導(dǎo)。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體抑制Gas-6依賴性細(xì)胞增殖。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體抑制來自腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的炎性細(xì)胞因子表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體通過調(diào)控腫瘤基質(zhì)功能來抑制腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體結(jié)合包含下述氨基酸序列、基本上由下述氨基酸序列組成或由下述氨基酸序列組成的多肽:MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFVGNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILELADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCLVFLGHQTFVSQPGYVG(SEQ ID NO:111)。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體結(jié)合包含下述氨基酸序列、基本上由下述氨基酸序列組成或由下述氨基酸序列組成的多肽:ITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQAVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPHTPYHIRVACTSSQGPSSWTHWL(SEQ IDNO:130)。在一些實(shí)施方案中，該抗體結(jié)合包含成熟人Axl氨基酸序列氨基酸編號1-122、基本上由成熟人Axl氨基酸序列氨基酸編號1-122組成或由成熟人Axl氨基酸序列氨基酸編號1-122組成的多肽。在一些實(shí)施方案中，該抗體結(jié)合包含成熟人Axl氨基酸序列氨基酸編號221-234、基本上由成熟人Axl氨基酸序列氨基酸編號221-234組成或由成熟人Axl氨基酸序列氨基酸編號221-234組成的多肽。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體結(jié)合與序列MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFVGNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILELADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCLVFLGHQTFVSQPGYVG (SEQ ID NO: 111)具有至少 70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，抗Axl抗體結(jié)合與序列ITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQAVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPHTPYHIRVACTSSQGPSSWTHWL(SEQID NO: 130)具有至少70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的氨基酸序列。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 ； (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:2 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 5 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:6。 一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 7 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:10 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11 ;和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12?！矫?，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:14 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:16 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17;和(f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:20 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:21 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:22 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 23 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 25 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:26 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:28 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:29 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30。

一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 31 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:32 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:34 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 35 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 37 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:38 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:39 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:40 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:41 ;和(f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:42。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 43 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:44 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:45 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:46 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:47 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 49 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:50 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:51 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:52 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 53 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 55 ； (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 56 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 57 ; (d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:58 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 59 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:60。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 61 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:62 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:64 ; (e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:65 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:66o一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 67 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:68 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:70 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:71 ;和(f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 73 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:74 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:76 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 77 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 79 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:80 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:81 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:82 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:83 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:84。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 85 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:86 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:87 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:88 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:89 ;和(f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:90。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 91 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:92 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:93 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:94 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:95 -M (f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種、三種、四種、五種、或六種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 97 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:98 ;(c)HV R-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:99 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:100 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 101 ;和(f)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 102。
一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:2 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:3。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 7 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:9。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:15。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:20 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:21。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 25 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:27。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 31 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:33。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 37 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:38 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:39。一方面，本發(fā)明提 供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 43 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:44 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:45。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 49 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:51?！矫?，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 55 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:57。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 61 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:63?！矫妫景l(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 67 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:69。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 73 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:75。
一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 79 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:81。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 85 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:86 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:87。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 91 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:92 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:93。一方面，本發(fā)明提供了抗Axl抗體，其包含至少一種、兩種或所有三種選自下述的VH HVR序列:(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 97 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:98 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:99。在一個 實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:3。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:15。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 21。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQID NO: 33。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 39。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:45。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 51。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 57。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 63。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQID NO:69。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:81。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 87。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 93。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:99。在另一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID N0:3，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:6。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 9，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQID NO: 12。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:15，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO: 18。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 21，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:24。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:27，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO:30。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 33，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:36。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:39，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO:42。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 45，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:48o在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:51，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO: 54。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 57，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 60。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:63，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO:66。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 69，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 72。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:75，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO:78。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 81，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 84。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:87，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO:90。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 93，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 96。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3和HVR-L3，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:99，該爪^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO: 102。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:3，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO: 6，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 2。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID N0:9，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 8。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 21，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 24，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID勵:20。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含訊^-113、訊^-13和訊^-112，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO:27，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:30，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID N0:26。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 33，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID勵:36，該訊^-112包含氨基酸序列3￡0 ID N0:32o在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 39,該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:42，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 38。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 45，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID勵:48，該訊^-112包含氨基酸序列3￡0 ID NO: 44。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含 HVR-H3、HVR-L3 和 HVR-H2，該 HVR-H3 包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 51，該 HVR-L3 包含氨基酸序列SEQ ID勵:54，該訊^-112包含氨基酸序列3￡0 ID N0:50。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 57，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:60,該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 56。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 63，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID N0:66，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 62。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR -L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 69，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 72，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 68。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:75，該狀1 -13包含氨基酸序列5￡0 ID勵:78，該狀1 -112包含氨基酸序列5￡0 ID NO:74。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQID N0:81，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO:84，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ IDNO:80。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR-H3、HVR-L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO:87，該HVR-L3包含氨基酸序列SEQ ID NO: 90，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 86。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR_H3、HVR_L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:93，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO:96，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO: 92。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含HVR_H3、HVR_L3和HVR-H2，該HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID勵:99，該訊^-13包含氨基酸序列3￡0 ID NO: 102，該HVR-H2包含氨基酸序列SEQ ID NO:98。 在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1 ；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:2;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:3。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:7 ；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8 ;和(c)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:9。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13 ； (b)HVR-H2,其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:20;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:21。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 25 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:26;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 31 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:32;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:33。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:37 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:38;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:39。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:43 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:44;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:45。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR- Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:50;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:51。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 55 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:57。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 61 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:62;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:63。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 67 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:68;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:69。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 73 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:74;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:75。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:79 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:81。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 85 ; (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:86;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:87。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:91 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQID N0:92;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:93。在又一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:97 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:98 -M (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:99。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 4 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5 -M (c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 16 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 22 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:23 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 28 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:29 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 34 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:35 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:40 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:41 -M (c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:42。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:46 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:47 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 52 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 58 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:59 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:60。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR- Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:64 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:65 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:66。
另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 70 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71 -M (c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 76 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:77 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:82 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:83 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:84。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:88 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:89 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:90。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:94 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:95 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:101 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 102 在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5 -M (c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:6。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10 ； (b)HVR-L2,其包含氨基酸序列SEQ ID N0:11;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:12。在一個實(shí)施方案中，該抗體包 含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 16 ； (b) HVR-L2,其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 22 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:23;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:24。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 28 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:29;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:30。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 34 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:35;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:36。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 40 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:41;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:42。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 46 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:47;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:48。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 52 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:53;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:54。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 58 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:59;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:60。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 64 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:65;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:66。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 70 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:71;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 76 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:77;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:82 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:83;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:84。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 88 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:89;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:90。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 94 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQID NO:95;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含(a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100 ; (b) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:101 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 102 另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:1, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:2，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:5，和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:6。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:7, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 10, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:11，和(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 16, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 17,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 20, (iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 21 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:22, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:23,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24。另一方面，本發(fā)明的抗體包 含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:25, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:26,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:27 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:28, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:29,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:30。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:31, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:32,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:33 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:34, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:35,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:36。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:37, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:38,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:39 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:40, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:41，和(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:42。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:43, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:44,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:45 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:46, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:47,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:48。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a)VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:49, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:50,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:51 ;和(b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:52, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:53,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a)VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:55, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:56,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:57 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 58, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 59, (c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:60。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:61, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:62 ,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:63 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:64, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:65,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:66o另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a)VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:67, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:68,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:69 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 70, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:71，和(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:72。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:73, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:74,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:75 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所 有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:76, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:77,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:78。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a)VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:79, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:80,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:81 ;和(b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:82, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:83,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:84。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:85, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:86,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:87 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:88, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:89,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:90。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:91, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:92,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:93 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:94, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:95,(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:96。另一方面，本發(fā)明的抗體包含(a) VH域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:97, (ii)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:98,(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:99 -M (b)VL域，其包含至少一種、至少兩種、或所有三種選自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 100, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:101，和(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 102。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:1 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 2 ; (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 3 ;(d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4 ; (e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:5 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:6。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:7 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ; (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:9 ;(d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10 ; (e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 11 ;和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:12。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:13 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 15 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 16 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 17 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:18。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:19 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 20 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 21 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 22 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:23 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:24。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:25 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 27 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 28 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:29 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:30。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:31 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 32 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 33 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 34 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:35 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:36。另一方面，本發(fā) 明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:37 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 38 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 39 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 40 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:41 ;和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:42。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 43 ； (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 44 ； (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 45 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 46 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:47 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:48。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 49 ； (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 50 ； (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 51 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 52 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:53 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:54。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:55 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 56 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 57 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 58 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:59 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:60。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:61 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 62 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 63 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 64 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:65 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:66。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:67 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 68 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 69 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 70 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:71 ;和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:72。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:73 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 74 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 75 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 76 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:77 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:78。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 79 ； (b) HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 80 ； (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 81 ;(d) HVR-LI，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 82 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:83 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:84。 另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:85 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 86 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 87 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 88 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:89 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:90。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:91 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 92 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 93 ;(d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 94 ; (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:95 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:96。另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:97 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 98 ; (c) HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 99 ； (d) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100 ； (e) HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQID N0:101 ;和(f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 102 在某些實(shí)施方案中，上文提供的抗Axl抗體中下述HVR位置處的任何一個或多個氨基酸被替代或缺失:-在HVR-Hl (SEQ ID NO: 7)中:位置 2、3、4、5、6、7、8、9、和 10;-在HVR-H2(SEQ ID NO:8)中:位置 1、2、4、6、7、8、9、和 10 ；-在HVR-H3(SEQ ID NO:9)中:位置 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或 15 ;-在HVR-Ll (SEQ ID NO: 10)中:位置 5、6、7、8、9、和 10 ；-在HVR_L2(SEQ ID NO: 11)中:位置 1、4、和 6 ；-在HVR_L3(SEQ ID NO: 12)中:位置 3、4、5、6、7、和 8。在某些實(shí)施方案中，所述替代是保守替代，如本文中提供的。在某些實(shí)施方案中，任何一項(xiàng)或多項(xiàng)下述替代可以以任意組合進(jìn)行:-在HVR-Hl (SEQ ID NO: 7)中:S28T ；L29F 或 V ；S30T 或 R ；G31S ;S32H、T、或 I ;W33G ；I34L ；
-在HVR-H2(SEQID NO:8)中:G49A ；W50G ;N52S、A、或P ;Y53A或V ;R54G或S ；G55S或 R ;Y56S 或 H ;A57T 或 P ;-在HVR-H3(SEQ ID NO:9)中:E95W ;Y96R ;S97N 或 P ;G98D 或 L ;W99S ;G100R、A、或S ；G100aS ；S100b缺失；S100cY或缺失；V100dI或缺失；G100e或缺失；Y100f或缺失，AlOOgE或缺失；-在HVR-Ll (SEQ ID NO: 10)中:D28I 或 S ；V29I ；S30G 或 R ;T311、N 或 R ；A32S ；V33L ；-在HVR-L2 (SEQ ID NO: 11)中:S50A 或 V ；F53N 或 S ；Y55A ；-在HVR-L3(SEQ ID NO: 12)中:S91A ;Y92K 或 N ;T93S、Y、M、R、或 A ;T94N、F、或 S ;P95R;P96Y、S、*L。在某些實(shí)施方案中，任何一項(xiàng)或多項(xiàng)下述替代可以以任意組合進(jìn)行:-在HVR-Hl (SEQ ID NO: 7)中:S28T ;L29F 或 V ;S30T ;G31S ;S32H、T 或 I ;-在HVR-H2(SEQ ID NO:8)中:N52S 或 A ;R54G 或 S ;G55R ;Y56S 或 H ;A57T 或 P ;-在HVR-H3 (SEQ ID NO:9)中:S97N 或 P ；G98D ；G100S ；-在HVR-L3(SEQ ID NO: 12)中:T93S、或 Y ;T94N、F、或 S。下述共有序列涵蓋上述替代的所有可能組合:-在HVR- Hl (SEQ ID NO: 112)中=GFX1X2X3X4X5X6X7H,其中 Xl 為 S 或 T ;X2 為 L、F 或V ;X3 為 S、T、或 R ;X4 為 G 或 S ;X5 為 S、H、T 或 I ;X6 為 W 或 G ;X7 為 I 或 L ;-在HVR-H2 (SEQ ID NO: 113)中=X1X2Ix3Px4X5X6X7X8YyADSVKG,其中 X1 為 G 或 A ;X2為 W 或 G ;X3 為 N、S、A 或 P ；X4 為 Y、A 或 V ；X5 為 R、G、或 S ;X6 為 G R 或 S ;X7 為 Y、S、H 或 Y ;X8SA、T、或 P ;和/或(SEQ ID NO: 166)中=X1X2Ix3Px4X5X6X7X8X9XiqYyADSVKG,其中 X1 為 G 或A ;X2 為 W 或 G ;X3 為 N、S、A 或 P ;X4 為 Y、A 或 V ;X5 為 R、G、或 S ;X6 為 G R 或 S ；X7 為 Y、S、H或Y ;X8為A、T、或P ；X9為任何氨基酸或缺失；X1(I為任何氨基酸或缺失；-在HVR-H3 (SEQ ID NO: 114)中=ARX1X2X3X4X5X6X7X8X9XltlX11X12X13MDY,其中 X1 為 E 或W ;X2 為 Y 或 R ;X3 為 S、N 或 P ;X4 為 G、D、或 L ;X5 為 W 或 S ;X6 為 G、R、A、或 S ;X7 為 G 或 S ;X8為S或缺失；X9為S、Y或缺失；X1(I為V、I或缺失；Xn為G或缺失；X12為Y或缺失；X13為A、E或缺失；-在HVR-Ll (SEQ ID NO: 115)中 -RASQX1X2X3X4X5X6A,其中 X1 為 D、I 或 S ;X2 為 V 或I ;X3 為 S、G 或 R ;X4 為 T、1、N 或 R ;X5 為 A 或 S ;X6 為 V 或 L ;-在HVR-L2(SEQ ID NO: 116)中 -X1ASX2LX3S,其中 X1 為 S、A、或 V ;X2 為 F、N 或 S ;X3為Y或A ;-在HVR-L3(SEQ ID NO: 117)中=QQX1X2X3X4X5X6T,其中 X1 為 S 或 A ;X2 為 Y、K 或 N ;X3 為 T、S、Y、M、R 或 A ；X4 為 T、N、S、或 F ;X5 為 P 或 R ；X6 為 P、Y、S 或 L。在一些實(shí)施方案中，提供下述共有序列:-在HVR-Hl (SEQ ID NO: 118)中 -GFX1X2X3GX4WIH,其中 X1 為 T 或 S，X2 為 F 或 L，X3為T或S，X4為H、S或T ;-在HVR-H2 (SEQ ID NO: 119)中=GwixiPyx2X3X4X5YyADSVKG,其中 X1 為 S、N 或 A ；X2為G、R或S ;X3為G或R ;X4為S、Y或H ;X5為T、A或P ;-在HVR-H3 (SEQ ID NO: 120)中=AreyxiX2WX3X4SX5X6GYX7MDY,其中 X1 為 S、N 或 P ;X2為G或D ;X3為G、R、或A ;X4為G或S ;X5為S或Y ;X6為V或I ;X7為A或E ;-中HVR-L3 (SEQ ID NO: 121)中 -QQSYX1X2X3X4T，其中 X1 為 T、S 或 Y ;X2 為 T、N、S或 F5X3S P 或R;X4 為P、Y 或 S。另一方面，抗 Axl抗體包含重鏈可變域(VH)序列，其與氨基酸序列SEQ IDNO: 103、105、107 或 109 具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或 100%序列同一性。在某些實(shí)施方案中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的VH序列相對于參照序列含有替代(例如保守替代)、插入或刪除，但是包含該序列的抗Axl抗體保留與Axl結(jié)合的能力。在某些實(shí)施方案中，在SEQ ID NO: 103、105、107或109中替代、插入和/或刪除了總共I至10個氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域(即FR)。任選地，抗Axl抗體包含SEQ ID NO: 103、105、107或109中的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。在一個特其它的實(shí)施方案中，VH包含一種、兩種或三種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 1、7、13、19、25、31、37、43、49、55、61、67、73、79、85、91、或 97，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:2、8、14、20、26、32、38、44、50、56、62、68、74、80、86、92、或 98，和(c)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:3、9、15、21、27、33、39、45、51、57、63、69、75、81、87、93 或 99。在一個特其它的實(shí)施方案中，VH包含一種、兩種或三種選自下述的HVR: (a) HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:7，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8，和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:9。另一方面，提供了抗Axl抗體，其中該抗體包含輕鏈可變域(VL)，其與氨基酸序列SEQ ID NO: 104、106、108 或 110 具有至少 90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列同一性。在某些實(shí)施方案中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的VL序列相對于參照序列含有替代(例如保守替代)、插入或刪除，但是包含該序列的抗Axl抗體保留與Axl結(jié)合的能力。在某些實(shí)施方案中，在SEQ ID NO: 104,106,108或110中替代、插入和/或刪除了總共I至10個氨基酸。在某些實(shí)施方案中，替代、插入、或刪除發(fā)生在HVR以外的區(qū)域(即FR)。任選地，抗Axl抗體包含SEQ ID NO: 104,106,108或110中的VL序列，包括該序列的翻譯后修飾。在一個特其它的實(shí)施方案中，VL包含一種、兩種或三種選自下述的HVR: (a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 4、10、16、22、28、34、40、46、52、58、64、70、76、82、88、94、或 100 ； (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:5、11、17、23、29、35、41、47、53、59、65、77、83、89、95、或 101 ;和(c) HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:6、12、18、24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96 或 102。在一個特其它的實(shí)施方案中，VL包含一種、兩種或三種選自下述的HVR: (a) HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQID N0:10 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:12。另一方面，提供了抗Axl抗體，其中該抗體包含上文提供的任何實(shí)施方案中的VH。在一些實(shí)施方案中，該抗體進(jìn)一步包含VL。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ ID NO: 103中的VH序列。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ ID N0:105中的VH序列。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ ID N0:107中的VH序列。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ IDNO: 109中的VH序列。另一方面，提供了抗Axl抗體，其中該抗體包含上文提供的任何實(shí)施方案中的VL。在一些實(shí)施方案中，該抗體進(jìn)一步包含VH。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ ID NO: 104中的VL序列。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ ID N0:106中的VL序列。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ ID N0:108中的VL序列。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含SEQ IDNO: 110中的VL序列。另一方面，提供了抗Axl抗體，其中該抗體包含上文提供的任何實(shí)施方案中的VH和上文提供的任何實(shí)施方案中的VL。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含分別在SEQ ID NO: 103和SEQ ID NO:104中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含分別在SEQ ID NO: 105和SEQ ID NO: 106中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含分別在SEQ ID NO: 107和SEQ ID NO: 108中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。在一個實(shí)施方案中，該抗體包含分別在SEQ IDNO: 109和SEQ ID NO: 110中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。本發(fā)明的抗體可包含任何合適的框架可變域序列，前提條件是基本上保留了對Axl的結(jié)合活性。例如,在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含人亞組III重鏈框架共有序列。在這些抗體的一個實(shí)施方案中，框架共有序列包含在第71、73和/或78位的替代。在這些抗體的一些實(shí)施方案中，第71位是A、第73位是T和/或第78位是A。在一個實(shí)施方案中，這些抗體包含 huMAb4D5_8 ( HERCEPT丨N ，Genentech, Inc., South SanFrancisco, CA, USA)(也參見美國專利 N0.6，407，213 和 5，821，337，和 Lee 等，J.Mol.Biol.(2004),340(5):1073-1093)的重鏈可變域框架序列。在一個實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包含人K I輕鏈框架共有序列。在一個特其它的實(shí)施方案中，這些抗體包含如美國專利N0.6，407，213和5，821，337中所描述的huMAb4D5_8的輕鏈HVR序列。在一個實(shí)施方案中，這些抗體包含 huMAb4D5_8 ( HERCEPTIN , Genentech, Inc., South SanFrancisco, CA, USA)的輕鏈可變域序列(也參見美國專利N0.6，407，213和5，821，337，和Lee等，J.Mol.Biol.(2004)，340 (5): 1073-1093)。在一個實(shí)施方案中，抗Axl抗體包含任何上述實(shí)施方案中的HVR，且進(jìn)一步包含VH和/或VL，其包含圖2、3A-B、4、5或6中所示FR1、FR2、FR3 或 FR4 序列。又一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其與本文中提供的抗Axl抗體結(jié)合相同表位。例如，在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其與包含VH序列SEQ ID NO: 103和VL序列SEQID NO: 104的抗Axl抗體結(jié)合相同表位。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其與包含VH序列SEQ ID NO: 107和VL序列SEQ ID N0108的抗Axl抗體結(jié)合相同表位。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其結(jié)合由氨基酸 MAWRCPRMGRVPLAWCLALCGWACMAPRGTQAEESPFVGNPGNITGARGLTGTLRCQLQVQGEPPEVHWLRDGQILELADSTQTQVPLGEDEQDDWIVVSQLRITSLQLSDTGQYQCLVFLGHQTFVSQPGYVG(SEQ ID NO: 111)組成的Axl片段內(nèi)的表位。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其結(jié)合由氨基酸 ITVLPQQPRNLHLVSRQPTELEVAWTPGLSGIYPLTHCTLQAVLSDDGMGIQAGEPDPPEEPLTSQASVPPHQLRLGSLHPHTPYHIRVACTSSQGPSSWTHWL(SEQ ID NO: 130)組成的 Axl 片段內(nèi)的表位。又一方面，本發(fā)明提供了一種抗體，其與包含VH序列SEQ ID NO: 103和VL序列SEQ ID NO: 104的抗Axl抗體競爭對人Axl的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，提供了一種抗體，其與包含VH序列SEQ ID NO: 107和VL序列SEQ ID NO: 108的抗Axl抗體競爭對人Axl的結(jié)合。
在本發(fā)明的又一個方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗Axl抗體是單克隆抗體，包括嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一個實(shí)施方案中，抗Axl抗體是抗體片段，例如Fv、 &13、？&13’、8(^1雙抗體、或？(&13’)2片段。在另一個實(shí)施方案中，抗體是全長抗體，例如完整IgG抗體或其它抗體類或同種型，如本文中定義的。在又一個方面，依照任何上述實(shí)施方案的抗Axl抗體可單一地或組合地?fù)饺胂挛?-7節(jié)中描述的任何特征:1.抗體親和力在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體具有彡I PM、彡IOOnM, ^ IOnM, ^ InM,(0.1nM、彡 0.0lnM、或彡 0.0OlnM (例如 KT8M 或更少，例如 KT8M 至 10_13M，例如，10_9M 至I(T13M)的解離常數(shù)(Kd)。在一個實(shí)施方案中，Kd是通過如下述測定法所述用Fab型式的感興趣抗體及其抗原實(shí)施的放射性標(biāo)記抗原結(jié)合測定法(RIA)來測量的。通過在存在未標(biāo)記抗原的滴定系列的情況中用最小濃度的(125I)標(biāo)記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被板捕捉結(jié)合的抗原來測量Fab對抗原的溶液結(jié)合親和力(見例如Chen等，J.Mo1.Biol.293:865-881(1999))。為了建立測定法的條件，將M丨CROT丨TER 多孔板(ThermoScientific)用 50mM 碳酸鈉(pH9.6)中的 g/ml 捕捉用抗 Fab 抗體(Cappel Labs)包被過夜，隨后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白于室溫(約23° C)封閉2-5小時。在非吸附板(Nunc#269620)中，將IOOpM或26pM125I_抗原與連續(xù)稀釋的感興趣Fab (例如與Presta 等，Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗 VEGF 抗體，F(xiàn)ab-12 的評估一致)混合。然后將感興趣的Fab溫育過夜；然而，溫育可持續(xù)更長時間(例如約65小時)以確保達(dá)到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板，于室溫溫育(例如I小時)。然后除去溶液，并用PBS中的0.1%聚山梨酯20 (TWEEN-20 )洗板8次。平板干燥后，加入150 u I/孔閃爍液(MICR0SCINT-20 ; Packard)，然后在T0PC0UNT 伽馬計(jì)數(shù)器(Packard)上對平板計(jì)數(shù)10分鐘。選擇各Fab給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于競爭性結(jié)合測定法。依照另一個實(shí)施方案，Kd是使用表面等離振子共振測定法使用BIAcore -2000或 BI Acore -3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)于 25。C 使用固定化抗原 CM5 芯片在約10個響應(yīng)單位(RU)測量的。簡言之，依照供應(yīng)商的用法說明書用鹽酸N-乙基-N’ -(3-二甲氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5，BIAC0RE，Inc.)。將抗原用IOmM乙酸鈉pH4.8稀釋至5 ii g/ml (約0.2 PM)，然后以5 iii/分鐘的流速注射以獲得約10個響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。為了進(jìn)行動力學(xué)測量，于25° C以約25iU/分鐘的流速注入在含0.05%聚山梨酯20 (TWEEN-20 )表面活性劑的PBS(PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab (0.78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾結(jié)合模型(BIACORE Evaluation Software version3.2)通過同時擬合結(jié)合和解離傳感圖計(jì)算結(jié)合速率(kj和解離速率。 以比率kf/U計(jì)算平衡解離常數(shù)(Kd)。見例如Chen等，J.Mol.Biol.293:865-881 (1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測定法，結(jié)合速率超過IO6M-1S'那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來測定，即根據(jù)分光計(jì)諸如配備了斷流裝置的分光光度計(jì)(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINC0 分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測量,在存在濃度漸增的抗原的情況中，測量PBSpH7.2中20nM抗抗原抗體(Fab形式)于25°C的熒光發(fā)射強(qiáng)度(激發(fā)=295nm ;發(fā)射=340nm，16nm帶通)的升高或降低。2.抗體片段在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是抗體片段?？贵w片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’ _SH、F(ab，)2、Fv^P scFv片段，及下文所描述的其它片段。關(guān)于某些抗體片段的綜述，見Hudson等Nat.Med.9:129-134 (2003)。關(guān)于scFv片段的綜述，見例如Pluckthiin,于 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第 113卷，Rosenburg和Moore 編，(Springer-Verlag, New York),第 269-315 頁(1994);還可見 W093/16185;及美國專利N0.5，571，894和5，587，458。關(guān)于包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位殘基，并且具有延長的體內(nèi)半衰期的Fab和F(ab’)2片段的討論，見美國專利N0.5，869，046。雙抗體是具有兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段，其可以是二價的或雙特異性的。見例如 EP404, 097;W01993/01161;Hudson 等，Nat.Med.9:129-134(2003);及 Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448 (1993)。三抗體和四抗體也記載于 Hudson等，Nat.Med.9:129-134 (2003)。單域抗體是包含抗體的整個或部分重鏈可變域或整個或部分輕鏈可變域的抗體片段。在某些實(shí)施方案中，單域抗體是人單域抗體(Domantis, Inc., Waltham, MA ;見例如美國專利 N0.6，248，516B1)?？梢酝ㄟ^多種技術(shù)，包括但不限于對完整抗體的蛋白水解消化及重組宿主細(xì)胞(例如大腸桿菌或噬菌體)的生成來生成抗體片段，如本文中所描述的。3.嵌合的和人源化的抗體在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是嵌合抗體。某些嵌合抗體記載于例如美國專利 N0.4，816，567;及 Morrison 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 81:6851-6855 (1984))。在一個例子中，嵌合抗體包含非人可變區(qū)(例如，自小鼠、大鼠、倉鼠、家兔、或非人靈長類，諸如猴衍生的可變區(qū))和人恒定區(qū)。在又一個例子中，嵌合抗體是“類轉(zhuǎn)換的”抗體，其中類或亞類已經(jīng)自親本抗體的類或亞類改變。嵌合抗體包括其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。通常，將非人抗體人源化以降低對人的免疫原性，同時保留親本非人抗體的特異性和親和力。一般地，人源化抗體包含一個或多個可變域，其中HVR，例如⑶R (或其部分)自非人抗體衍生，而FR (或其部分)自人抗體序列衍生。任選地，人源化抗體還會至少包含人恒定區(qū)的一部分。在一些實(shí)施方案中，將人源化抗體中的一些FR殘基用來自非人抗體(例如衍生HVR殘基的抗體)的相應(yīng)殘基替代，例如以恢復(fù)或改善抗體特異性或親和力。人源化抗體及其生成方法綜述于例如Almagro和Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633 (2008),并且進(jìn)一步記載于例如 Riechmann等，Nature332:323_329(1988);Queen 等，Proc.Nat’ I Acad.Sc1.USA86:10029-10033(1989);美國專利 N0.5，821，337，7，527，791，6，982，321 和7, 087, 409; Kashmiri 等，Methods36:25-34 (2005)(描述了 SDR(a-CDR)嫁接);Padlan, Mol.1mmunol.28:489-498 (1991)(描述了“重修表面”);Dall ’Acqua 等，Methods36:43-60 (2005)(描述了 “FR 改組”)； 及 Osbourn 等,Methods36:61-68 (2005)和 Klimka 等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了 FR改組的“引導(dǎo)選擇”方法)。
可以用于人源化的人框架區(qū)包括但不限于:使用“最佳擬合(best-fit)”方法選擇的框架區(qū)(見例如Sims等J.1mmunol.151:2296 (1993))；自輕或重鏈可變區(qū)的特定亞組的人抗體的共有序列衍生的框架區(qū)(見例如Carter等Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,89:4285 (1992);及 Presta 等 J.1mmunol.，151:2623 (1993));人成熟的(體細(xì)胞突變的)框架區(qū)或人種系框架區(qū)(見例如Almagro和Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633 (2008));和通過篩選FR文庫衍生的框架區(qū)(見例如Baca等，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及 Rosok 等，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。4.人抗體在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是人抗體?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的多種技術(shù)來生成人抗體。一般地，人抗體記載于van Dijk和van de ffinkel, Curr.0pin.Pharmacol.5:368-74(2001)及 Lonberg, Curr.0pin.Tmmuno1.20:450-459(2008)?？梢酝ㄟ^對轉(zhuǎn)基因動物施用免疫·原來制備人抗體，所述轉(zhuǎn)基因動物已經(jīng)修飾為響應(yīng)抗原性攻擊而生成完整人抗體或具有人可變區(qū)的完整抗體。此類動物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替換內(nèi)源免疫球蛋白基因座，或者其在染色體外存在或隨機(jī)整合入動物的染色體中。在此類轉(zhuǎn)基因小鼠中，一般已經(jīng)將內(nèi)源免疫球蛋白基因座滅活。關(guān)于自轉(zhuǎn)基因動物獲得人抗體的方法的綜述，見Lonberg, Nat.Biotech.23:1117-1125 (2005)。還可見例如美國專利N0.6，075，181和6，150，584，其描述了 XEN0M0USE 技術(shù)；美國專利N0.5，770, 429，其描述了 HLLV丨AB 技術(shù)；美國專利N0.7，041, 870，其描述了 K-M MOUSE 技術(shù)，和美國專利申請公開文本N0.US2007/0061900,其描述了VELOCLMOUSE 技術(shù))?？梢岳缤ㄟ^與不同人恒定區(qū)組合進(jìn)一步修飾來自由此類動物生成的完整抗體的人可變區(qū)。也可以通過基于雜交瘤的方法生成人抗體。已經(jīng)描述了用于生成人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人異骨髓瘤細(xì)胞系(見例如Kozbor J.1mmunol.，133:3001 (1984) ;Brodeur 等,Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications,第 51-63 頁(Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及 Boerner 等,J.1mmunol., 147:86 (1991))。經(jīng)由人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生成的人抗體也記載于Li等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 103:3557-3562 (2006)。其它方法包括那些例如記載于美國專利N0.7，189，826 (其描述了自雜交瘤細(xì)胞系生成單克隆人IgM抗體)和Ni，XiandaiMianyixue, 26 (4): 265-268 (2006)(其描述了人-人雜交瘤)的。人雜交瘤技術(shù)(Trioma技術(shù))也記載于 Vollmers 和 Brandlein, Histology&Histopathology, 20 (3): 927-937 (2005)及 Vollmers和 Brandlein, Methods&Findings in Exp.&Clin.Pharmacology, 27(3):185-9I(2005)。也可以通過分離自人衍生的噬菌體展示文庫選擇的Fv克隆可變域序列生成人抗體。然后，可以將此類可變域序列與期望的人恒定域組合。下文描述了自抗體文庫選擇人抗體的技術(shù)。5.文庫衍生的抗體可以通過對組合文庫篩選具有期望的一種或多種活性的抗體來分離本發(fā)明的抗體。例如，用于生成噬菌體展示文庫并對此類文庫篩選擁有期望結(jié)合特征的抗體的多種方法是本領(lǐng)域中已知的。此類方法綜述于例如Hoogenboom等于Methods in MolecularBiologyl78:1-37 (O’ Brien 等編,Human Press, Totowa, NJ, 2001)，并且進(jìn)一步記載于例如 McCafferty 等，Nature348:552-554;Clackson 等，Nature352:624-628(1991);Marks等,J.Mo1.Biol.222:581-597(1992);Marks 和 Bradbury,于 Methods in MolecularBiology 2 48: 161-175 (Lo 編，Human Press, Totowa, NJ, 2003) ; Sidhu 等，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004) ;Lee 等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004) ;Fellouse, Proc.Natl.Acad.Sc1.USAlOl (34): 12467-12472 (2004);及 Lee 等,J.1mmunol.Methods284(1-2): 119-132(2004)。在某些噬菌體展示方法中，將VH和VL基因的全集分別通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)克隆，并在噬菌體文庫中隨機(jī)重組，然后可以對所述噬菌體文庫篩選抗原結(jié)合噬菌體，如記載于 Winter 等,Ann.Rev.1mmunol., 12:433-455 (1994)的。卩遼菌體通常以單鏈 Fv (scFv)片段或以Fab片段展示抗體片段。來自經(jīng)免疫的來源的文庫提供針對免疫原的高親和力抗體，而不需要構(gòu)建雜交瘤?；蛘撸梢?例如自人)克隆天然全集以在沒有任何免疫的情況中提供針對一大批非自身和還有自身抗原的抗體的單一來源，如由Griffiths等，EMBOJ, 12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通過自干細(xì)胞克隆未重排的V基因區(qū)段，并使用含有隨機(jī)序列的PCR引物編碼高度可變的CDR3區(qū)并在體外實(shí)現(xiàn)重排來合成生成未免疫文庫，如由 Hoogenboom 和 Winter, J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述的。描述人抗體噬菌體文庫的專利公開文本包括例如:美國專利N0.5，750, 373、和美國專利公開文本N0.2005/0079574，2005/0119455，2005/0266000，2007/0117126，2007/0160598，2007/0237764，2007/0292936 和 2009/0002360。認(rèn)為自人抗體文庫分離的抗體或抗體片段是本文中的人抗體或人抗體片段。6.多特異性抗體在某些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體是多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體是對至少兩個不同位點(diǎn)具有結(jié)合特異性的單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合特異性之一針對Axl，而另一種針對任何其它抗原。在某些實(shí)施方案中，雙特異性抗體可以結(jié)合Axl的兩個不同表位。也可以使用雙特異性抗體來將細(xì)胞毒劑定位于表達(dá)Axl的細(xì)胞。雙特異性抗體可以以全長抗體或抗體片段制備。用于生成多特異性抗體的技術(shù)包括但不限于具有不同特異性的兩對免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的重組共表達(dá)(見 Milstein 和 Cuello, Nature305:537 (1983))、W093/08829、和Traunecker等，EMBO J.10:3655(1991))、和“突起-入-空穴”工程化(見例如美國專利N0.5，731，168)。也可以通過用于生成抗體Fe-異二聚體分子的工程化靜電操縱效應(yīng)(W02009/089004A1);交聯(lián)兩個或更多個抗體或片段(見例如美國專利N0.4，676，980，及Brennan等，Science, 229:81 (1985));使用亮氨酸拉鏈來生成雙特異性抗體(見例如Kostelny等，J.1mmunol.，148 (5): 1547-1553 (1992));使用用于生成雙特異性抗體片段的“雙抗體”技術(shù)(見例如 Hollinger 等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 90:6444-6448 (1993));及使用單鏈Fv(sFv) 二聚體(見例如Gruber 等，J.1mmunol., 152:5368 (1994));及如例如Tutt等J.1mmunol.147:60(1991)中所描述的,制備三特異性抗體來生成多特異性抗體。本文中還包括具有三個或 更多個功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的工程化改造抗體，包括“章魚抗體”(見例如US2006/0025576A1)。本文中的抗體或片段還包括包含結(jié)合Axl及另一種不同抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的“雙重作用 FAb” 或“DAF”(見例如 US2008/0069820)。7.抗體變體在某些實(shí)施方案中，涵蓋本文中提供的抗體的氨基酸序列變體。例如，可以期望改善抗體的結(jié)合親和力和/或其它生物學(xué)特性?？梢酝ㄟ^將合適的修飾引入編碼抗體的核苷酸序列中，或者通過肽合成來制備抗體的氨基酸序列變體。此類修飾包括例如對抗體的氨基酸序列內(nèi)的殘基的刪除、和/或插入和/或替代?？梢赃M(jìn)行刪除、插入、和替代的任何組合以得到最終的構(gòu)建體，只要最終的構(gòu)建體擁有期望的特征，例如，抗原結(jié)合。a)替代、插入、和刪除變體在某些實(shí)施方案中，提供了具有一處或多處氨基酸替代的抗體變體。替代誘變感興趣的位點(diǎn)包括HVR和FR。保守替代在表I中在“保守替代”的標(biāo)題下顯示。更實(shí)質(zhì)的變化在表I中在“例示性替代”的標(biāo)題下提供，并且如下文參照氨基酸側(cè)鏈類別進(jìn)一步描述的?？梢詫被崽娲敫信d趣的抗體中，并且對產(chǎn)物篩選期望的活性，例如保留/改善的抗原結(jié)合、降低的免疫原性、或改善的ADCC或CDC。表I
權(quán)利要求
1.與人Axl結(jié)合的分離的抗體，其中該抗體以≤600pM的親和力結(jié)合人Axl，其中該抗體以≤InM的親和力結(jié)合小鼠Axl。
2.權(quán)利要求1的抗體，其中該抗體促進(jìn)Axl受體下調(diào)和/或抑制組成性Axl激活。
3.權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的抗體，其中該抗體結(jié)合包含氨基酸序列SEQID NO: 111、基本上由氨基酸序列SEQ ID NO: 111組成或由氨基酸序列SEQ ID NO: 111組成的多肽。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的抗體，其為單克隆抗體。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的抗體，其為全長IgGl抗體。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的抗體，其為人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、或結(jié)合Axl的抗體片段。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的抗體，其中該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含GFX1X2X3X4X5X6X7H,其中Xl為S或T ;X2為L，F(xiàn)或V ;X3為S，T，或R ;X4為G或S ;X5為S，H，T或I ;X6為W或G ;X7 為 I 或 L (SEQ ID NO: 112)，(b)HVR-H2，其包含 X1X2Ix3Px4X5X6X7X8YyADSVKG,其中 X1 為G 或 A ;X2 為 W 或 G ;X3 為 N，S，A 或 P ;X4 為 Y，A 或 V ;X5 為 R，G，或 S ;X6 為 G，R 或 S ；X7 為 Y，S，H 或 Y ;X8 為 A，T，或 P (SEQ ID NO: 113); (c)HVR_H3，其包含 ARX1X2X3X4X5X6X7X8X9XltlX11X12X13MDY，其中 X1 為 E 或 W ;X2 為 Y 或 R ;X3 為 S，N 或 P ;X4 為 G，D，或 L ;X5 為 W 或 S ;X6 為 G，R，A，或S ;X7為G或S ;X8為S或缺失；X9為S，Y或缺失；X1(I為V，I或缺失J11為G或缺失；X12為 Y 或缺失;X13SA，E 或缺失(SEQ ID NO:114);(d)HVR-Ll，其包含 RASQX1X2X3X4X5X6A,其中X1 為 D，I 或 S ;X2 為 V 或 I ;X3 為 S，G 或 R ;X4 為 T，I，N 或 R ;X5 為 A 或 S ;X6 為 V 或 L (SEQID NO: 115); (e) HVR-L2，其包含 X1ASX2LX3S,其中 X1 為 S，A，或 V ;X2 為 F，N 或 S ;X3 為 Y 或 A(SEQ ID NO: 116);和(f)HVR-L3，其包含 QQX1X2X3X4X5X6T,其中 X1 為 S 或 A ;X2 為 Y，K 或 N ;X3 為！\ S，Y，M，R 或 A;X4S T，N，S，或 F5X5SP 或 R ;X6 為 P，Y，S 或 L (SEQ ID NO: 117)。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的抗體，其中該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含GFX1X2X3GX4WIH,其中 X1S T 或 S，X2 SF 或 L，X3ST 或 S，X4 為 H，S 或 T (SEQ ID NO: 118) ; (b)HVR_H2，其包含 GwixiPyx2X3X4X5YyADSVKG,其中 X1 為 S，N 或 A ;X2 為 G，R 或 S ;X3 為 G 或 R ;X4 為 S，Y 或H ;X5 為 T，A 或 P (SEQ ID NO: 119) ； (c)HVR-H3，其包含 AreyxiX2WX3X4SX5X6GYX7MDY,其中 X1為S，N或P ;X2為G或D ;X3為G，R，或A ;X4為G或S ;X5為S或Y ;X6為V或I ;X7為A或E(SEQ ID NO: 120);和 HVR-L3，其包含 QQSYX1X2X3X4T，其中 X1 為 T，S 或 Y ;X2 為 T，N，S 或 F ;X3 為 P 或 R ;X4 為 P，Y 或 S (SEQ ID NO: 121)。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的抗體，其中該抗體包含(a)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQIDNO:9, (b)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12，和(c)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQID NO:8。
10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)的抗體，其中該抗體包含(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQID NO:7，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8，和(c)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQID NO:9。
11.權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)的抗體，進(jìn)一步包含(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:10 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQID NO:12。
12.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的抗體，進(jìn)一步包含圖3A-B、4、5或6中所示重鏈可變域框架序列或輕鏈可變域框架序列。
13.權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的抗體，包含(a)VH序列，其與氨基酸序列SEQ ID N0:103具有至少95%序列同一性；(b) VL序列，其與氨基酸序列SEQ ID NO: 104具有至少95%序列同一性；或(c) (a)中的VH序列和(b)中的VL序列。
14.權(quán)利要求13的抗體，包含VH序列SEQID NO: 103和/或VL序列SEQ ID NO: 104。
15.分離的核酸,其編碼權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體。
16.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求15的核酸。
17.生產(chǎn)抗體的方法,包括培養(yǎng)權(quán)利要求16的宿主細(xì)胞使得生成該抗體。
18.權(quán)利要求17的方法，進(jìn)一步包括自該宿主細(xì)胞回收該抗體。
19.免疫偶聯(lián)物，其包含權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體和細(xì)胞毒劑。
20.藥物配制劑，其包含權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體和藥學(xué)可接受載體。
21.權(quán)利要求20的藥物配制劑，進(jìn)一步包含其它的治療劑。
22.權(quán)利要求21的藥物配制劑，其中該其它的治療劑選自VEGF拮抗劑、EGFR拮抗劑，和化療劑。
23.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體，其用作藥物。
24.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體，其用于治療癌癥、免疫病癥、心血管病癥、血栓形成、或糖尿病。
25.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體，其用于抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)Axl下調(diào)、抑制轉(zhuǎn)移、和/或抑制血管發(fā)生。
26.權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體在制備藥物中的用途。
27.權(quán)利要求26的用途，其中該藥物用于治療癌癥、免疫病癥、心血管病癥、血栓形成、或糖尿病。
28.權(quán)利要求26的用途，其中該藥物用于抑制細(xì)胞增殖、抑制血管發(fā)生、促進(jìn)Axl下調(diào)、和/或抑制轉(zhuǎn)移。
29.治療具有癌癥的個體的方法，包括對該個體施用有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體。
30.權(quán)利要求29的方法，進(jìn)一步包括對該個體施用其它的治療劑。
31.權(quán)利要求30的方法，其中該其它的治療劑選自下組:VEGF拮抗劑，EGFR拮抗劑和化療劑。
32.治療具有免疫病癥、心血管病癥、血栓形成或糖尿病的個體的方法，包括對該個體施用有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體。
33.在個體中抑制血管發(fā)生、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)Axl受體下調(diào)或抑制轉(zhuǎn)移的方法，包括對該個體施用有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體以抑制血管發(fā)生、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)Axl受體下調(diào)或抑制轉(zhuǎn)移。
34.抑制組成性Axl激活的方法，包括對該個體施用有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的抗體以抑制組成性Axl。
全文摘要
本發(fā)明提供了抗Axl抗體及其使用方法。
文檔編號A61P37/00GK103080136SQ201180039943
公開日2013年5月1日 申請日期2011年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月18日
發(fā)明者L·裴, 吳雁, X·葉 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司