專利名稱：具有脂類動(dòng)員性質(zhì)的糖蛋白及其治療用途的制作方法
具有脂類動(dòng)員性質(zhì)的糖蛋白及其治療用途
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體地涉及醫(yī)學(xué)制劑和補(bǔ)充物，并且更具體地涉及用于改變受試者代謝以及改善病癥諸如惡病質(zhì)、肥胖癥、糖尿病和胰島素抗性的制劑和方法。背景信息成人、兒童和青少年中肥胖癥的患病率已經(jīng)在過(guò)去30年內(nèi)在美國(guó)快速增加并且在全球繼續(xù)上升。肥胖是經(jīng)典地基于身體脂肪百分比或更新地基于身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(也稱作 Quetlet 指數(shù))定義(National Task Force on the Prevention andTreatment of Obesity, Arch.1ntern. Med. , 160:898-904(2000) ；Khaodhiar, L.等，Clin.Cornerstone, 2:17-31 (1999)) 0將BMI定義為重量(kg)除以高度(以米為單位)平方的比例。過(guò)重和肥胖癥與美國(guó)所見(jiàn)到的許多老年慢性疾病形成風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。這類伴隨疾病(co-morbidities)包括2型糖尿病、高血壓、冠狀動(dòng)脈心臟病和血脂異常、膽結(jié)石和膽襄切除術(shù)、骨關(guān)節(jié)炎、癌癥(乳腺癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌和膽囊癌)和睡眠呼吸暫停。據(jù)估計(jì)每年存在可歸咎于肥胖癥 的約325，000例死亡。降低疾病嚴(yán)重性的關(guān)鍵是有效地減少重量。雖然約30%至40%要求盡力減少重量或維持減少的重量，但是目前的療法似乎不起作用。除了膳食調(diào)節(jié)、藥理學(xué)控制措施和在極端情況下手術(shù)之外，批準(zhǔn)了治療過(guò)重和肥胖患者的輔助療法(Expert Panel, National Institute of Health, Heart, Lung, andBlood Institute,1-42(1998 年 6 月)；Bray, G. A. , Contemporary Diagnosis andManagement of Obesity，246-273 (1998))。藥物具有副作用，并且雖然有效，但手術(shù)是激烈措施并且保留用于病態(tài)肥胖癥。惡病質(zhì)是由疾病引起脂肪和骨骼肌質(zhì)量的消耗。它在許多病況中出現(xiàn)并且是在緩解或控制失敗時(shí)伴隨許多癌癥常見(jiàn)的?；加型砥诎┌Y、AIDS和一些其他主要慢性進(jìn)行性疾病的患者可以顯現(xiàn)惡病質(zhì)。惡病質(zhì)可以在充分進(jìn)食但不能吸收養(yǎng)分的人中出現(xiàn)。盡管惡病質(zhì)可以由組織塊中的腫瘤細(xì)胞和宿主細(xì)胞產(chǎn)生的某些細(xì)胞因子、尤其腫瘤壞死因子IL-1b和IL-6介導(dǎo)，但目前不存在廣泛接受的惡病質(zhì)療法。糖尿病是發(fā)病率和死亡率的主要病因。逐漸升高的血糖導(dǎo)致衰竭性并發(fā)癥經(jīng)常有必要透析或腎移植的腎?。恢車窠?jīng)??；致盲的視網(wǎng)膜病變；導(dǎo)致截肢的腿和足部潰瘍；有時(shí)進(jìn)展至肝硬化的脂肪肝??；和易患冠狀動(dòng)脈病和心肌梗死。存在兩個(gè)主要類型的糖尿病。I型或胰島素依賴性糖尿病(IDDM)歸因于自身免疫破壞胰腺胰島中產(chǎn)生胰島素的P細(xì)胞。這種疾病的發(fā)作通常在兒童或青少年期。治療主要由每天多次注射胰島素組成，這與頻繁檢測(cè)血糖水平以指導(dǎo)胰島素劑量的調(diào)節(jié)組合，因?yàn)檫^(guò)多的胰島素可能造成低血糖癥和隨之而來(lái)的腦和其他功能損傷。漸增的注意力正在投向胰島素抗性對(duì)這種類型糖尿病的起源、進(jìn)展和治療性控制措施的作用。II型或非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM) —般在成人中形成。NIDDM與葡萄糖利用組織如脂肪組織、肌肉和肝臟對(duì)胰島素作用的抵抗相關(guān)。最初，胰腺胰島3細(xì)胞通過(guò)分泌過(guò)多的胰島素代償。最后的胰島失效導(dǎo)致失代償和慢性高血糖。相反，中度的胰島功能不足可以在外周胰島素抗性之前或與之同時(shí)出現(xiàn)。存在幾種類型用于治療NIDDM的藥物1)直接刺激胰島素釋放的胰島素釋放物，其存在低血糖癥風(fēng)險(xiǎn)；2)膳食性胰島素釋放物，其啟動(dòng)葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌并且必須每次就餐前服用；3)減弱肝臟糖原異生(這在糖尿病中相反地升高)的雙胍類，包括二甲雙胍；4)胰島素敏化物，例如噻唑烷二酮衍生物羅格列酮和吡格列酮，其改善胰島素的外周反應(yīng)性，但是具有副作用如增重、水腫和偶發(fā)肝臟毒性；5)胰島素注射劑，當(dāng)胰島于長(zhǎng)期過(guò)度刺激下已經(jīng)失效時(shí)，其經(jīng)常在NIDDM晚期階段是必需的。胰島素 抗性也可以在沒(méi)有明顯高血糖的情況下發(fā)生，并且通常與動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖、高脂血癥和原發(fā)性高血壓相關(guān)。這類異常構(gòu)成“代謝綜合征”或“胰島素抗性綜合征”。胰島素抗性也與脂肪肝相關(guān)，所述脂肪肝可以進(jìn)展成慢性炎癥(NASH ;“非酒精性脂肪性肝炎”)、纖維化和肝硬化。累積地，胰島素抗性綜合征(包括但不限于糖尿病)是超過(guò)40歲的人發(fā)病和死亡的許多主要病因的基礎(chǔ)。盡管存在這類藥物，但糖尿病仍是一項(xiàng)主要和日益增長(zhǎng)的公共衛(wèi)生問(wèn)題。糖尿病的晚期階段并發(fā)癥耗費(fèi)巨大比例的國(guó)家衛(wèi)生保健資源。需要新穎的口服有效治療藥，這些治療藥有效地解決胰島素抗性和胰島失效的主要缺陷，具有比現(xiàn)有藥物更小或更溫和的副作用。鋅-a2-糖蛋白(ZAG)已被鑒定為脂類動(dòng)員因子(LMF)，其具有引起癌癥惡病質(zhì)(cancer cacehxia)中脂肪喪失的潛能。顯示ZAG在白色脂肪細(xì)胞中通過(guò)與P 3_腎上腺素能受體相互作用而引起脂解作用，而在體內(nèi)它增加解偶聯(lián)蛋白-1(UCP-1)在棕色脂肪組織(BAT)中的表達(dá)，并引起身體脂肪的喪失。除了一些腫瘤，ZAG也由白脂肪組織(WAT)和BAT產(chǎn)生，其表達(dá)在惡病質(zhì)中上調(diào)。相反，在肥胖人的脂肪組織中ZAG表達(dá)只是非肥胖受試者中存在的ZAG表達(dá)的30%。這提示W(wǎng)AT中ZAG表達(dá)的喪失能解釋肥胖特征中的一些特征。當(dāng)然，小鼠中ZAG等位基因的失活導(dǎo)致體重的增加，向動(dòng)物飼喂高脂肪飲食時(shí)，這是更明顯的。對(duì)各種藥劑的脂肪分解反應(yīng)在來(lái)自ZAG缺陷型動(dòng)物的脂肪細(xì)胞中顯著降低。迄今，關(guān)于ZAG的脂類動(dòng)員作用的研究已經(jīng)使用人和鼠ZAG在小鼠和大鼠中實(shí)施。研究表明ZAG是進(jìn)化上保守的并且顯示出物種交叉活性，例如，鼠ZAG在人類中顯示基本上相同的活性并且反之亦然。仍缺少用于改變代謝性疾病(諸如肥胖癥、糖尿病和惡病質(zhì))的代謝和治療的有效和安全替代品。因此需要用于這類用途的新制劑。發(fā)明概述本發(fā)明部分地基于以下研究結(jié)果鋅-a2-糖蛋白在成年肥胖高血糖(ob/ob)小鼠和成熟Wistar大鼠中對(duì)體重和胰島素反應(yīng)性具有影響，并且抗ZAG抗體防止惡病質(zhì)情況下的體重減少。這種研究結(jié)果在改善調(diào)節(jié)體重、改善胰島素反應(yīng)性或緩解惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀或與肌肉消耗相關(guān)的疾病的方法中是有用的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種制劑，其包含鋅-a2-糖蛋白(ZAG)、ZAG變體、修飾的ZAG或其功能性片段。在一個(gè)方面，這種ZAG是哺乳動(dòng)物的，例如，是人類的，并且可以包含SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列。ZAG肽可以與非蛋白質(zhì)聚合物綴合。ZAG肽可以經(jīng)唾液酸化、PEG化或修飾以增加溶解度或穩(wěn)定性。ZAG肽可以是重組或合成的。在多個(gè)方面，ZAG肽可以是修飾的ZAG并且包含帶有一個(gè)或多個(gè)選自缺失、添加或保守性置換的氨基酸序列突變的野生型ZAG氨基酸序列。在多個(gè)方面，ZAG肽可以包含一個(gè)或多個(gè)前導(dǎo)序列和尾隨序列(trailing sequence)。ZAG肽也可以是糖基化的,例如，因翻譯后修飾所致。此外，在多種實(shí)施方案中，制劑還可以包含藥學(xué)上可接受的載體。制劑也可以包含一種或多種藥劑，所述藥劑包括P 3激動(dòng)劑和P -腎上腺素能受體(P -AR)拮抗劑，如P 2-腎上腺素能受體(P 2-AR)拮抗劑、^1-腎上腺素能受體(P 1-AR)拮抗劑和P 3-腎上腺素能受體(^ 3-AR)拮抗劑。在一些方面，權(quán)利要求1的制劑還可以包含胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)或其類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含如本文所述的本發(fā)明制劑的食料添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于將制劑遞送至哺乳動(dòng)物受試者的方法，所述方法包括向哺乳動(dòng)物受試者施用如本文所述的制劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于將鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)遞送至哺乳動(dòng)物受試者的方法，所述方法包括通過(guò)口服施用將如本文所述的制劑遞送至受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于將鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)以大劑量經(jīng)口遞送至哺乳動(dòng)物受試者的方法，所述的大劑量與大劑量給藥的口服胰島素的大劑量相似，所述口服胰島素需要如本文所述的所施用的ZAG的全身性吸收。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于將鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)以令人驚訝有效的低劑量和在下述制劑中經(jīng)口遞送至哺乳動(dòng)物受試者的方法，所述的低劑量與靜脈內(nèi)施用ZAG的低劑量相似，所述制劑令人驚訝地不需要如本文所述的所施用的ZAG的全身性吸收。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于增加受試者的鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)內(nèi)源水平的方法，所述方法包括向受試者施用如本文所述的制劑。本發(fā)明還提供一種改善受試者中惡病質(zhì)的癥狀的方法。這種方法包括向需要這樣治療的受試者施用治療有效劑量的抑制劑，從而在治療之后引起與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀改善，其中所述抑制劑針對(duì)具有如SEQ ID NO:1中所示序列的多肽的生物學(xué)活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種抑制劑是結(jié)合多肽的單克隆抗體，所述多肽包含與具有如SEQID NO:1中所示的序列的多肽同源至少80%的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療包括每天施用，持續(xù)10天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每天、每隔一天、每?jī)商旎蛎咳焓┯靡种苿?，直?0天或更長(zhǎng)時(shí)間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每天施用抗體兩次?？梢造o脈內(nèi)、皮下、舌下、鼻內(nèi)、經(jīng)口或通過(guò)吸入施用抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將抑制劑與一種或多種選自￠3-腎上腺素能受體(3 3-AR)拮抗劑的藥劑組合施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，P3-AR拮抗劑是SR59230A。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是糖基化的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抑制同源多肽的藥劑是非抗體劑，例如但不限于適體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種治療受試者以引起體重減少的方法。這種方法包括向需要這樣治療的受試者施用治療有效劑量的具有如SEQ ID NO:1中所示序列的多肽的抑制劑，聯(lián)合一種或多種選自P 3-腎上腺素能受體(0 3-AR)拮抗劑的藥劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，這種抑制劑是結(jié)合多肽的單克隆抗體，所述多肽包含與具有如SEQ IDNO:!中所示的序列的多肽同源至少80%的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，P3-AR拮抗劑是SR59230A。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是糖基化的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抑制同源多肽的藥劑是非抗體齊U，例如但不限于適體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含結(jié)合多肽的抗體或其功能性片段和選自￠3-腎上腺素能受體(P3-AR)拮抗劑和￠3拮抗劑的藥劑，其中所述多肽具有如SEQ ID N0:1中所示的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，P3-AR拮抗劑是SR59230A。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是糖基化的。本公開(kāi)提供用于補(bǔ)充人或動(dòng)物膳食的材料和方法。在一個(gè)方面，本公開(kāi)提供營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑。本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑可以包含鋅-a2-糖蛋白(ZAG)或其功能性片段。本公開(kāi)也提供材料，諸如包括一種或多種營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑(如包含ZAG或其功能性片段的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑)的試劑盒。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)提供一種遞送經(jīng)口施用的治療劑的方法，所述方法包括與經(jīng)口施用的治療劑組合施用￠3激動(dòng)劑。本文中的制劑、試劑盒和方法可以用于改善人健康和/或用來(lái)促進(jìn)體重減少或與體重減少無(wú)關(guān)地改善胰島素抗性和減少高血糖。這些制劑、試劑盒和方法可以因此用于治療與肥胖癥和/或聞血糖癥相關(guān)的疾病。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種食料，其包含與可消耗載體組合的本發(fā)明制劑。示例性可消耗載體包括但不限于餅干、巧克力蛋糕、薄脆餅、早餐棒、能量棒、禾谷植物、蛋糕、面包、飲料、肉產(chǎn)品和肉替代產(chǎn)品。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種補(bǔ)充人類膳食的方法。這種方法包括攝取包含鋅-a2-糖蛋白(ZAG)或其功能性片段的制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，ZAG是哺乳動(dòng)物的，如具有如SEQ ID NO:1中所示序列的人ZAG多肽或其片段。可以每天進(jìn)行該方法，持續(xù)10天。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每天、每隔一天、每?jī)商旎蛎咳鞌z取該制劑，直至10天或更長(zhǎng)時(shí)間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每天攝取制劑兩次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將制劑與一種或多種選自￠3-腎上腺素能受體(P3-AR)激動(dòng)劑和PAR激動(dòng)劑及P3-AR拮抗劑的藥劑組合攝取。在一個(gè)實(shí)施方案中，P3-AR拮抗劑是SR59230A。在另一個(gè)實(shí)施方案中，P 3-AR激動(dòng)劑是AMN1-BRL37344 (BRL37344)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，與一種或多種用來(lái)改善血糖控制的藥劑組合攝取或遞送這種制劑，無(wú)論以任何順序依次或平行地進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，血糖控制藥劑是胰島素或其任何衍生物或類似物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，血糖控制藥劑是胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)或其任何衍生物或類似物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種遞送經(jīng)口施用的治療劑的方法，其中將所述治療劑與￠3激動(dòng)劑組合遞送。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將￠3激動(dòng)劑和治療劑同時(shí)遞送。在又一個(gè)實(shí)施方案中，將￠3激動(dòng)劑在施用治療劑之前或之后施用。在某些實(shí)施方案中，治療劑是ZAG。在其他實(shí)施方案中，治療劑包括心鈉肽、腦鈉肽、血小板聚集抑制劑、鏈激酶、肝素、尿激酶、腎素抑制劑、胰島素、抗生素和睡眠誘導(dǎo)肽。在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供治療受試者以引起體重減少或肥胖減少的方法。該方法包括向需要這樣治療的受試者施用營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑，所述營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑包含治療有效劑量的具有如SEQ ID NO:1中所示 序列的多肽或其片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種監(jiān)測(cè)哺乳動(dòng)物受試者中鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)活性的方法。這種方法包括a)對(duì)受試者經(jīng)口施用本發(fā)明的制劑；和b)檢測(cè)ZAG活性的水平；從而監(jiān)測(cè)受試者中的ZAG活性。附圖簡(jiǎn)述

圖1A是顯示ZAG的表征和其對(duì)脂解作用和ob/ob小鼠體重的影響的示意圖。12%SDS-PAGE之后的考馬斯染色顯示293細(xì)胞培養(yǎng)基中的總蛋白和和如所描述那樣純化的ZAG。圖1B是顯不蛋白質(zhì)印跡結(jié)果的不意圖，該蛋白質(zhì)印跡顯不培養(yǎng)基中ZAG的表達(dá)和純化的ZAG。圖1C是顯示經(jīng)歷體重喪失的MAC16小鼠中脂肪組織和肝組織中ZAG mRNA水平的圖解。P < 0. 01。圖1D是顯示來(lái)自非肥胖(■)和ob/ob小鼠(口 )的附睪脂肪細(xì)胞響應(yīng)于異丙腎上腺素(Is0)和ZAG的脂解作用結(jié)果的圖解。將與非肥胖小鼠的差異顯示為*p < 0. 05、**p < 0. 01 和 ***p < 0. 001。圖1E是顯示來(lái)自肥胖(ob/ob)和非肥胖(non ob)小鼠附睪(印)、皮下(s. c.)和內(nèi)臟(Vis)沉積物的脂肪細(xì)胞中脂解作用結(jié)果的圖解，這些小鼠未經(jīng)處理(■)、用異丙腎上腺素(IOiiM)(O)或ZAG(0.46iiM)處理( )。將與附睪脂肪細(xì)胞的差異顯示為**p
<0. 01。圖1F是顯示與如方法中所描述的PBS( )相比，ZAG( ■)對(duì)ob/ob小鼠體重的影響的圖解。將與時(shí)間零點(diǎn)的重量和PBS對(duì)照的差異顯示為***p < 0. 001。圖1G是顯示與PBS對(duì)照(■)相比，ZAG(O)對(duì)小鼠體溫影響的圖解。將與對(duì)照的差異顯示為< 0. 001。圖2A是顯示用ZAG處理的ob/ob小鼠的葡萄糖耐量的圖解。在1. v.施用葡萄糖(2g/kg)之后用ZAG(_)或PBS(^)處理3天的飼養(yǎng)狀態(tài)下ob/ob小鼠中的血漿葡萄糖水平。與PBS相比，p <0.001。將血樣在葡萄糖施用之后按間隔從尾靜脈取出并且用于葡萄糖和胰島素的測(cè)量。圖2B是顯示口服施用葡萄糖(lg/kg)之后用ZAG處理的ob/ob小鼠中血漿胰島素水平的圖解。與PBS相比，p < 0.001。圖2C顯示葡萄糖攝取進(jìn)存在0 ( ■ )、I ( □)或IOnM胰島素(H)下用ZAG處理5天的ob/ob小鼠的附睪(ep)、內(nèi)臟(vis)和皮下(s. c)脂肪細(xì)胞的圖解。將存在ZAG時(shí)的差異表示為*林P < 0. 001。圖2D顯示2-脫氧-D-葡萄糖攝取進(jìn)存在或不存在胰島素(IOOnM)下用ZAG或PBS處理5天的ob/ob小鼠的腓腸肌的圖解。將存在胰島素時(shí)的差異顯示為*p < 0. 05或**p < 0. 01,而將存在ZAG時(shí)的差異顯示為< 0. 001。圖2E是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中GLUT4葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響的示意圖。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取出并針對(duì)GLUT4的表達(dá)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。圖3A是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的圖解。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取 出并且用于測(cè)量蛋白質(zhì)合成。將與PBS對(duì)照或非肥胖動(dòng)物的差異顯示為< 0. 001。圖3B是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的圖解。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取出并且用于測(cè)量蛋白質(zhì)降解。將與PBS對(duì)照或非肥胖動(dòng)物的差異顯示為< 0. 001。圖3C是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的圖解。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取出并用于糜蛋白酶樣酶活性的測(cè)量。將與PBS對(duì)照或非肥胖動(dòng)物的差異顯示為***P < 0. 001。圖3D是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的示意圖。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取出并針對(duì)20S蛋白酶體a -亞基的表達(dá)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。圖3E是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響的示意圖。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取出并針對(duì)p42的表達(dá)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。圖3F是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的示意圖。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取出并針對(duì)肌球蛋白的表達(dá)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。`圖3G是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的示意圖。處理ob/ob小鼠5天之后，將骨骼肌取出并針對(duì)作為對(duì)照的肌動(dòng)蛋白的表達(dá)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。圖4A是通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析用PBS或ZAG處理5天之后ob/ob小鼠腓腸肌中的磷酸PKR顯示ZAG對(duì)骨骼肌中分解代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響的示意圖。全部形式的蛋白質(zhì)充當(dāng)荷載對(duì)照。將與PBS對(duì)照的差異顯示為***p < 0. 001，而將與非肥胖小鼠的差異顯示為 #p < 0. 001。圖4B是通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析用PBS或ZAG處理5天之后ob/ob小鼠腓腸肌中的磷酸eIF2a顯示ZAG對(duì)骨骼肌中分解代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響的示意圖。全部形式的蛋白質(zhì)充當(dāng)荷載對(duì)照。將與PBS對(duì)照的差異顯示為***p < 0. 001，而將與非肥胖小鼠的差異顯示為#p < 0. 001。圖4C是通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析用PBS或ZAG處理5天之后ob/ob小鼠腓腸肌中的磷酸PLA2顯示ZAG對(duì)骨骼肌中分解代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響的示意圖。全部形式的蛋白質(zhì)充當(dāng)荷載對(duì)照。將與PBS對(duì)照的差異顯示為***p < 0. 001，而將與非肥胖小鼠的差異顯示為 #P < 0. 001。圖4D是通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析用PBS或ZAG處理5天之后ob/ob小鼠腓腸肌中的磷酸P38MAPK顯示ZAG對(duì)骨骼肌中分解代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響的示意圖。全部形式的蛋白質(zhì)充當(dāng)荷載對(duì)照。將與PBS對(duì)照的差異顯示為***p < 0. 001，而將與非肥胖小鼠的差異顯示為#p < 0. 001。圖4E是用PBS或ZAG處理5天之后ob/ob小鼠腓腸肌中的半胱天冬酶_3 ( ■)和半胱天冬酶_8( 口 )活性顯示ZAG對(duì)骨骼肌中分解代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響的圖解。圖5A是顯示響應(yīng)于ZAG的HSL表達(dá)的示意圖。蛋白質(zhì)印跡顯示在無(wú)處理(Con)、或單獨(dú)用異丙腎上腺素(IOiiM)或ZAG(0. 46 PM)處理之后3h、或用ZAG處理5天之后在存在TO98059 (25 ii M)時(shí)的非肥胖小鼠脂肪細(xì)胞中磷酸HSL的表達(dá)。圖5B是通過(guò)用ZAG處理5天之后附睪(印)脂肪細(xì)胞中的免疫印跡顯示HSL表達(dá)的示意圖。圖5C是通過(guò)用ZAG處理5天之后皮下(sc)脂肪細(xì)胞中的免疫印跡顯示HSL表達(dá)的示意圖。
圖是通過(guò)用ZAG處理5天之后內(nèi)臟(vis)脂肪細(xì)胞中的免疫印跡顯示HSL表達(dá)的示意圖。圖5E是顯不用ZAG處理5天之后附辜脂肪細(xì)胞中ATGL表達(dá)的不意圖。圖5F是顯示用ZAG處理5天之后皮下脂肪細(xì)胞中ATGL表達(dá)的示意圖。圖5G是顯示用ZAG處理5天之后內(nèi)臟脂肪細(xì)胞中ATGL表達(dá)的示意圖。圖5H是顯示用ZAG處理5天之后附睪脂肪細(xì)胞中pERK表達(dá)的示意圖。圖51是顯示用ZAG處理5天之后皮下脂肪細(xì)胞中pERK表達(dá)的示意圖。圖5J是顯示用ZAG處理5天之后內(nèi)臟脂肪細(xì)胞中pERK表達(dá)的示意圖。圖5K是顯不來(lái)自用PBS或ZAG處理5天的ob/ob小鼠的附睪(ep)、皮下(sc)和內(nèi)臟(vis)沉積物的脂肪細(xì)胞對(duì)BRL37344的脂肪分解作用反應(yīng)的圖解。將與PBS對(duì)照的差異表示為<0.01，而將存在H)98059時(shí)的差異表示為#p < 0. 001。圖6A是顯示用ZAG處理ob/ob小鼠5天對(duì)WAT中ZAG表達(dá)的影響的示意圖。蛋白質(zhì)印跡顯示ZAG在ep、SC和vis脂肪細(xì)胞中的表達(dá)。第0天代表從小鼠除去脂肪細(xì)胞的那天。 圖6B是顯示ZAG在如方法中所描述的懸浮于RMPI培養(yǎng)基中的附睪脂肪細(xì)胞中表達(dá)的示意圖。然后將樣品以每天的時(shí)間間隔取出并對(duì)ZAG表達(dá)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。第0天代表從小鼠除去脂肪細(xì)胞的那天。圖6C是顯示HSL在如方法中所描述的懸浮于RMPI培養(yǎng)基中的附睪脂肪細(xì)胞中表達(dá)的示意圖。然后將樣品以每天的時(shí)間間隔取出并對(duì)HSL表達(dá)進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。第0天代表從小鼠除去脂肪細(xì)胞的那天。圖6D是顯示UCPl在從小鼠取出的BAT中表達(dá)的示意圖。將與PBS處理的小鼠的差異顯示為***p < 0. 001。圖6E是顯示UCP3在從小鼠取出的BAT中表達(dá)的示意圖。將與PBS處理的小鼠的差異顯示為***p < 0. 001。圖6F是顯示UCP3在從小鼠取出的腓腸肌中表達(dá)的示意圖。將與PBS處理的小鼠的差異顯示為< 0. 001。圖7A是顯示21天研究期間ob/ob小鼠體重減少的圖解。在第1、4、5、8、13、16、18和19天注射ZAG ;在相同時(shí)間點(diǎn)注射PBS。圖7B是顯示用ZAG處理期間ob/ob小鼠(重量80_90g)體重變化(g)的圖解。圖7C是顯示21天研究期間ob/ob小鼠體溫升高的圖解。在第1、4、5、8、13、16、18和19天注射ZAG ;在相同時(shí)間點(diǎn)注射PBS。圖8A是顯示頭5天處理期間尿葡萄糖排泄?jié)u進(jìn)性降低的圖解。圖SB是顯示21天研究期間尿葡萄糖排泄?jié)u進(jìn)性降低的圖解。圖9是顯示受異丙腎上腺素(iso)分離的脂肪細(xì)胞刺激的甘油釋放的圖解，所述脂肪細(xì)胞來(lái)自用和未用ZAG處理的ob小鼠，已經(jīng)培養(yǎng)達(dá)5天。圖10是顯示人血漿Zn- a 2-糖蛋白的完整氨基酸序列(SEQ ID NO:1)的不意圖，如 T.Araki 等,(1988) “Complete amino acid sequence of human plasmaZn- a 2-glycoprotein and its homology to histocompatibility antigens.，，所公布。圖11是顯示缺少或存在SR59230A(10uM)或抗ZAG抗體(1:1000) (IgG)時(shí)，與異丙腎上腺素(IOuM)相比，人ZAG在分離的大鼠附睪脂肪細(xì)胞中的脂肪分解活性的圖解。每個(gè)值是5個(gè)獨(dú)立研究的平均值。將與對(duì)照的差異顯示為b，p < 0. 01或c，p < 0. 001，而將與單獨(dú)ZAG的差異表示為e，p < 0. 01或f，p < 0. 001。圖12A是顯示經(jīng)10天的時(shí)間，每天1.v.施用在100 ill PBS ( ■)或單獨(dú)PBS ( )中的2八6(5011§/10(^ b.w.)對(duì)雄性Wistar大鼠體重的影響的圖解。在方法部分中給出這個(gè)實(shí)驗(yàn)的方案。圖12B是顯示如圖12A所描述的施用ZAG( ■)或PBS( )的雄性Wistar大鼠的體溫的圖解。圖12C是顯示缺少或存在胰島素(60iiU/ml)時(shí)，如圖12A所示用ZAG(空心柱)或PBS (實(shí)心柱)處理10天之后，2-脫氧-D-葡萄糖進(jìn)入雄性Wistar大鼠附睪脂肪細(xì)胞的攝取量的圖解。圖12D是顯示缺少或存在胰島素(60iiU/ml)時(shí)，用ZAG或PBS處理10天之后，葡萄糖進(jìn)入雄性Wistar大鼠腓腸肌和BAT中的攝取量的圖解。將ZAG和PBS處理的動(dòng)物之間的差異顯示為a，p < 0. 05，b，p < 0.01或c，p < 0. 001，而將存在胰島素時(shí)的差異顯示為 f，P < 0. 001。圖12E是顯示施用ZAG的ob/ob小鼠中組織Rg的圖解。與PBS相比，c，p < 0. 001。圖13A-13C是蛋白質(zhì)印跡的示意圖，其顯示GLUT4在如圖12所示用PBS或ZAG處理10天的雄性Wistar大鼠的BAT (圖13A)和WAT(圖13B)和腓腸肌(圖13C)中表達(dá)。將ZAG和PBS處理的動(dòng)物之間的差異顯示為c，p < 0. 001。圖14A和14B是蛋白質(zhì)印跡的示意圖，其顯示UCPl和UCP3在如圖12所示用PBS或ZAG處理10天的雄性Wistar大鼠的BAT (圖14A)和WAT (圖14B)中表達(dá)。將ZAG和PBS處理的動(dòng)物之間的差異顯示為c，p < 0. 001。圖15A和15B是蛋白質(zhì)印跡的示意圖，其顯示ATGL(圖15A)和HSL(圖15B)在如圖12所示用PBS或ZAG處理10天的雄性Wistar大鼠的附睪脂肪組織中表達(dá)。將ZAG和PBS處理的動(dòng)物之間的差異顯示為c，p < 0. 001。圖16A-16C是顯示ZAG在腓腸肌(圖16A)、WAT (圖16B)和BAT (圖16C)中表達(dá)的蛋白質(zhì)印跡的示意圖。從如圖12所示用PBS或ZAG處理10天的雄性Wistar大鼠切除組織。將ZAG和PBS處理的動(dòng)物之間的差異顯示為c，p < 0. 001。圖17A和17B是蛋白質(zhì)印跡的示意圖，其顯示pPKR(圖17A)和peIF2 a (圖17B)的磷酸化形式和全體形式在如圖12所示用PBS或ZAG處理10天的雄性Wistar大鼠的腓腸肌中表達(dá)。密度分析是磷酸化形式對(duì)全體形式的比，表達(dá)為用PBS處理的大鼠的值的百分比。圖18A和18B是顯示在各種濃度的葡萄糖存在下，用和未用ZAG處理4h的C2C12肌管中苯丙氨酸釋放(圖18A)和蛋白質(zhì)合成(圖18B)的圖解。與對(duì)照相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的c，P < 0. 001，與單獨(dú)葡萄糖相比f(wàn), P < 0. 001。圖19是顯示在各種濃度的葡萄糖存在下，用和未用ZAG處理，以及用和未用SR59230A處理的C2C12肌管中苯丙氨酸釋放的圖解。與對(duì)照相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的b，P
<0. 01 和 c，P < 0. 001 ;與單獨(dú)葡萄糖相比 e, P < 0. 05 和 f，P < 0. 001。圖20是顯示在各種濃 度的葡萄糖存在下，用和未用ZAG處理，以及用和未用SR59230A處理的C2C12肌管中蛋白質(zhì)合成的圖解。與對(duì)照相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的b，P < 0. Ol和c，P < 0. 001 ;與單獨(dú)葡萄糖相比e，P <0.05和f，P < 0. 001 ;與葡萄糖+SR相比I，P〈0.001。圖21是顯示在用有和沒(méi)有ZAG的各種濃度的葡萄糖處理的C2C12肌管中ROS活性的圖解。與對(duì)照相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的c，P < 0. 001，與單獨(dú)葡萄糖相比f(wàn)，P < 0. 001。圖22A是顯示在用有和沒(méi)有ZAG的葡萄糖處理的C2C12肌管中pPKR的蛋白質(zhì)印跡的示意圖。與對(duì)照相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的c，P < 0. 001，與單獨(dú)葡萄糖相比f(wàn)，P < 0. 001。圖22B是顯示在用有和沒(méi)有ZAG的葡萄糖處理的C2C12肌管中peIF2 a的蛋白質(zhì)印跡的示意圖。與對(duì)照相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的c，P < 0. 001，與單獨(dú)葡萄糖相比f(wàn)，P < 0. 001。圖23A和23B是顯示用和未用ZAG處理的ob/ob小鼠中胰島素耐受性試驗(yàn)的結(jié)果的圖解。與用ZAG相比統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的b，P < 0.05和c，P < 0.001。圖24是顯示ob/ob小鼠中D-[U-14C葡萄糖]氧化成14CO2的圖解。圖25是顯示ob/ob小鼠中由[14C羧基]三油酸甘油酯產(chǎn)生14CO2的圖解。圖26是顯示與施用BRL37344的小鼠(惡病質(zhì)模型)相比，顯示施用抗ZAG的小鼠中體重減少降低的圖解。圖27是顯示在缺少和存在抗ZAG抗體時(shí)用P 3激動(dòng)劑BRL37344處理的ob/ob小鼠中葡萄糖耐量的圖解。圖28是顯示附睪鼠脂肪細(xì)胞中響應(yīng)于異丙腎上腺素(Iso)、ZAG和抗ZAG抗體的脂解作用結(jié)果的圖解。圖29是顯示在缺少或存在抗ZAG時(shí)用BRL處理的ob/ob小鼠的重量變化的圖解，其中在抗ZAG之前24h或同時(shí)添加BRL。圖30是顯示在ZAG處理的ob/ob小鼠中減少的蛋白水解和增加的肌肉合成的圖解。圖31是顯示用和未用ZAG處理的ob/ob小鼠中重量變化的圖解。圖32是顯示用和未用ZAG處理的ob/ob小鼠中體溫的圖解。圖33是顯示用和未用ZAG處理的ob/ob小鼠中尿葡萄糖水平的圖解。圖34是顯不口服施用后的ob/ob小鼠中ZAG的蛋白質(zhì)印跡的不意圖。用口服施用的rhZAG處理導(dǎo)致血漿中內(nèi)源表達(dá)的鼠ZAG增加。圖35是蛋白質(zhì)印跡的示意圖,其顯示來(lái)自用和不用人ZAG(p. o.)處理的ob/ob小鼠的WAT中的ZAG表達(dá)。用口服施用的rhZAG處理導(dǎo)致WAT中內(nèi)源表達(dá)的鼠ZAG增加。圖36是顯示在缺少或存在普萘洛爾(一種通用P -AR拮抗劑)時(shí)，用和未用ZAG處理(p.o.)的ob/ob小鼠中重量變化的圖解。普萘洛爾第3日從20mg/kg增加至40mg/kg，此后體重減少的變化從ZAG處理動(dòng)物的負(fù)斜率變成未處理動(dòng)物的正斜率。圖37是顯示在缺少或存在普萘洛爾時(shí)，用和未用ZAG處理(p. 0.)的ob/ob小鼠中體溫變化的圖解。普萘洛爾第3日從20mg/kg增加至40mg/kg，此后ZAG+Prop動(dòng)物的體溫與未處理動(dòng)物的體溫處于同一隊(duì)列。圖38是使用抗小鼠ZAG顯示小鼠血清中的ZAG的蛋白質(zhì)印跡的示意圖，所述小鼠血清來(lái)自缺少或存在普萘洛爾時(shí)用和未用ZAG處理的小鼠。內(nèi)源性鼠ZAG隨口服施用rhZAG的處理增加， 并且這種增加被普萘洛爾阻斷。
圖39是使用抗人ZAG針對(duì)小鼠血清顯示ZAG的蛋白質(zhì)印跡的示意圖,所述小鼠血清來(lái)自缺少或存在普萘洛爾時(shí)用和未用ZAG處理的小鼠。未在含有或沒(méi)有普萘洛爾的小鼠血清中檢測(cè)到人ZAG。圖40是顯示在ob/ob小鼠中葡萄糖耐量試驗(yàn)期間葡萄糖水平的圖解，其中所述小鼠在缺少或存在普萘洛爾時(shí)用和未用ZAG (p. 0.)處理。圖41是顯示 口服施用后的ob/ob小鼠中ZAG的蛋白質(zhì)印跡的示意圖。用口服施用的rhZAG處理導(dǎo)致血漿中內(nèi)源表達(dá)的鼠ZAG增加。圖42是蛋白質(zhì)印跡的示意圖，其顯示來(lái)自用人和不用人ZAG(p.o)處理的ob/ob小鼠的WAT中的ZAG表達(dá)。圖43是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的示意圖。圖44是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響的示意圖。圖45是顯示ZAG對(duì)ob/ob小鼠骨骼肌中蛋白質(zhì)合成和降解的影響的示意圖。圖46是14C ZAG放射自顯影的示意圖，其顯示來(lái)自p. o.處理的ob/ob小鼠的ZAG的胃水平和血漿水平，樣品在處理后24小時(shí)取得。圖47是顯示用和未用50ug ZAG (p. o. /管飼)處理的ob/ob小鼠中重量變化的圖解。圖48是顯示用和未用50ug ZAG(p. o. /管飼)處理的ob/ob小鼠中尿葡萄糖水平的圖解。圖49是蛋白質(zhì)印跡的示意圖?？筞AG削弱由BRL37344在體內(nèi)造成的影響ob/ob小鼠的BAT中UCP3的蛋白質(zhì)印跡，所述小鼠在缺少或存在抗ZAG時(shí)用和未用BRL處理。用BRL37344處理ob/ob小鼠引起B(yǎng)AT中UCP3的增加，一種通過(guò)施用抗ZAG抗體被阻斷的作用。圖50是蛋白質(zhì)印跡的示意圖。對(duì)ob/ob小鼠口服施用的ZAG引起血漿中和WAT中內(nèi)源性鼠ZAG的上調(diào)。在rhZAG p. o.給藥的血漿樣品(頂部)和WAT樣品(底部)中的小鼠ZAG的蛋白質(zhì)印跡。圖51是蛋白質(zhì)印跡的示意圖。普萘洛爾阻斷因用rhZAG p. o.處理所致的鼠血清ZAG增加，但是沒(méi)有在血漿中找到施用的人ZAG。使用小鼠血清中的抗小鼠ZAG的ZAG的蛋白質(zhì)印跡(頂部)，所述小鼠血清來(lái)自缺少或存在普萘洛爾時(shí)用和未用ZAG處理的小鼠。未在小鼠血清中檢測(cè)到人ZAG。使用小鼠血清中的抗人ZAG的ZAG的蛋白質(zhì)印跡(底部)，所述小鼠血清來(lái)自缺少或存在普萘洛爾時(shí)用和未用ZAG處理的小鼠。圖52A是顯示ZAG濃度對(duì)CHO細(xì)胞中環(huán)狀A(yù)MP生產(chǎn)的影響的圖解，所述CHO細(xì)胞用β 1-AR(_)、P2-AR(0)和P3-AR (加斜線)轉(zhuǎn)染。圖52B是顯示異丙腎上腺素(IOyM)對(duì)缺少或存在SR59230A(10 y M)時(shí)P1-( ■ )、P 2-( □)和P 3_AR(加斜線)轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞中環(huán)狀A(yù)MP生產(chǎn)的影響的圖解。將與環(huán)狀A(yù)MP基礎(chǔ)水平的差異顯示為a，p〈0. 05或C，p〈0. OOl圖52C是顯示mRNA水平的圖解。與相同樣品中GAPDH的表達(dá)相比(空心框)，3 1-、￠2-和P3-AR在用相應(yīng)人類基因轉(zhuǎn)染的CH0-K1細(xì)胞中的表達(dá)，由RT-實(shí)時(shí)PCR測(cè)量為P -AR mRNA分子絕對(duì)數(shù)/ U g總RNA (實(shí)心框)。圖52D是相對(duì)于基礎(chǔ)水平(空心框)顯示用人P1-、P 2-和P 3-AR轉(zhuǎn)染的CH0-K1細(xì)胞中響應(yīng)于毛喉素(20 u M)(實(shí)心框)的環(huán)狀A(yù)MP生產(chǎn)的圖解。圖52E、52F和52G是顯示ZAG與CHO-Kl細(xì)胞的特異性結(jié)合的圖解，其中所述CHO-Kl細(xì)胞在缺少(■)或存在(▲ ) IOOuM未標(biāo)記的ZAG時(shí)用人P 1_(圖52E)、P 2_(圖52F)和P 3-AR(圖52G)轉(zhuǎn)染。還指示了相似濃度的冷凍和融化(X)的ZAG的結(jié)合作用。圖52H是顯示與異丙腎上腺素(Iso ;10iiM)(實(shí)心)相比，在鼠附睪脂肪細(xì)胞中新鮮(空心)或冷凍與融化一次(虛線)的ZAG(0.58iiM)的脂肪分解活性的圖解。將與對(duì)照的差異顯示為c，p〈0. 001，而將新鮮ZAG和冷凍ZAG之間和存在SR59230A時(shí)的差異顯示為 f, p〈0.001。圖53A-53C是顯示普萘洛爾對(duì)用ZAG處理的ob/ob小鼠中體重(53A)、體溫(53B)和尿葡萄糖排泄(53C)的影響的圖解。將動(dòng)物分成4組(每組n=5)以接受每天ZAG施用(50mg，i v) ( ■ )、ZAG+普萘洛爾 GOmgkg—1，po) ( ▲)，同時(shí)對(duì)照接受 PBS ( )或 PBS 和普萘洛爾(X)。將與PBS的差異顯示為c，p〈0. 001，而將與單獨(dú)ZAG的差異表示為f，p〈0. 001。圖53D是在60天后比較對(duì)照處理和ZAG處理的實(shí)例切片時(shí)肝臟組織學(xué)的示意圖。圖54A是顯示與PBS(O)相比，在啟用ZAG(_)后3天的葡萄糖耐量試驗(yàn)期間任意單位的葡萄糖曲線下總 面積(AUC)和血漿葡萄糖水平的圖解。圖54B是顯示在(圖54A)中描述的葡萄糖耐量試驗(yàn)期間血漿胰島素水平的圖解。圖54C是顯示在缺少或存在胰島素(IOOnM)時(shí)進(jìn)入分離的ob/ob小鼠腓腸肌中的葡萄糖攝取量的圖解。在切下肌肉之前，ob/ob小鼠在存在或不存在普萘洛爾的情況下用ZAG處理7天。圖54D是顯示在缺少或存在胰島素(IOnM)時(shí)進(jìn)入ob/ob小鼠附睪脂肪細(xì)胞中的葡萄糖攝取量的圖解。動(dòng)物在切下WAT之前接收所示的處理7天。圖54E和54F是顯示在存在或不存在普萘洛爾的情況下用PBS或ZAG處理7天的ob/ob小鼠中TG(圖54E)和NEFA(圖54F)的水平的圖解。圖54G和54H是蛋白質(zhì)印跡的示意圖，其顯示在ZAG或胰島素或二者均存在的情況下在來(lái)自ob/ob小鼠的腓腸肌(54G)和WAT(54H)中的Glut4表達(dá)。將與對(duì)照的差異顯示為b，p < 0. 01或c，p < 0. 001，而將與單獨(dú)ZAG的差異表示為d，p〈0. 05或f，p〈0. 001。圖55A是蛋白質(zhì)印跡的不意圖。圖55A、55B 和 55C 是顯示用 ZAG(35iig;1.v.天 I 處理 ob/ob 小鼠 5 天后 P 3-AR的表達(dá)的示意圖。蛋白質(zhì)印跡顯示P3-AR在用PBS或ZAG處理的ob/ob小鼠的腓腸肌(54A)、BAT(54B)和WAT(54C)中表達(dá)。密度分析是3個(gè)獨(dú)立蛋白質(zhì)印跡物的平均值。將與控制的差異顯示為c，p〈0. 001。圖56A、56B和56C是顯示用2么6(351^;每天11.)處理ob/ob小鼠5天后^1-和3 2-AR在腓腸肌(56A)、WAT(56B)和心臟(56C)中表達(dá)的示意圖。將與PBS處理的動(dòng)物的差異顯示為a，p〈0. 05。圖57A、57B、57C和57D是ZAG對(duì)解偶聯(lián)蛋白表達(dá)的影響的示意圖。在用PBS或ZAG (35 V- g ;每天1. v.)處理5天后的ob/ob小鼠中，顯示UCPl表達(dá)的蛋白質(zhì)印跡顯示UCPl在BAT (57A)和WAT (57B)中表達(dá)，和UCP3在WAT (57C)中以及AMPK在腓腸肌(57D)中表達(dá)。密度分析是3個(gè)獨(dú)立印跡物的平均值。將與PBS處理的動(dòng)物的差異顯示為 c,p〈0.001。本發(fā)明的具體實(shí)施方式
本發(fā)明基于抗人鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)抗體在惡病質(zhì)模型中降低體重減少的觀察結(jié)果。就這一點(diǎn)而論，本發(fā)明提供用于防止受試者中惡病質(zhì)狀況下體重減少的方法。還提供在患有惡病質(zhì)的受試者中引起體重減少降低的聯(lián)合療法。本文中提供了用于治療哺乳動(dòng)物和/或補(bǔ)充人或動(dòng)物膳食的制劑和方法。所示方法可以包括持續(xù)某些時(shí)間和/或以某個(gè)順序攝取一種或多種所述制劑。也提供包含一種或多種制劑的試劑盒。就這一點(diǎn)而論，本發(fā)明基于觀察結(jié)果一重組人鋅-a 2_糖蛋白(ZAG)在受試者中降低體重和增加胰島素反應(yīng)性，對(duì)食物攝入沒(méi)有影響。在描述本發(fā)明的組合物和方法之前，將要理解的是該發(fā)明不限于描述的特定的組合物、方法和實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)檫@樣的組合物、方法和條件可變化。還將要理解的是本文使用的術(shù)語(yǔ)只是用于描述特定的實(shí)施方案的目的，而不是意欲受限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將只由所附的權(quán)利要求書限定。如本說(shuō)明書和所附的權(quán)利要求書所用，除非上下文清楚地指出，單數(shù)形式“一(a)”、“一(an)”、“所述(the) ”包括復(fù)數(shù)的指代物。因此，例如，對(duì)“所述方法”的稱謂包括本文中所述類型的一種或多種方法和/或步驟，在閱讀該公開(kāi)等之后，它們將對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員變得顯而易見(jiàn)。除非另外限定，本文中所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。盡管在實(shí)踐或測(cè)試本發(fā)明中能使用與本文描述的那些方法和材料相似或相等的任何方法和材料，但是現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料。

ZAG的完全氛基酸序列已在T. Araki等的名稱為“Complete amino acid sequenceof human plasma Zinc- a 2-glycoprotein and its homology to histocompatibilityantigens” (1988)Proc. Natl. Acad. Sc1. USA.，85，679-683 的論文中被報(bào)道，其中糖蛋白被顯示為由276個(gè)氨基酸殘基的單個(gè)多肽鏈組成，其具有三個(gè)不同的域結(jié)構(gòu)(A、B和C)并包括兩個(gè)二硫鍵連同三個(gè)糖基化位點(diǎn)處的N聯(lián)聚糖。在附圖的圖10中展示多肽組分的氨基酸序列。盡管一些隨后的出版物已指出當(dāng)從不同的體液或組織中分離出時(shí)，人ZAG的組成可能多少改變，但是這種物質(zhì)的所有制備物具有基本上相同的免疫學(xué)特性。如 H. Ueyama 等(1991) “Cloning and nucleotide sequence of a humanZinc- a 2-glycoprotein cDNA and chromosomal assignment of its gene，，，Biochem.Biophys. Res. Commun. 177, 696-703所報(bào)道，ZAG的cDNA已從人肝和前列腺文庫(kù)中分離出來(lái)，并且如 Ueyama等，(1993)‘“‘Molecular cloning and chromosomal assignment of thegene for human Zinc-a 2-glycoprotein”，Biochemistry32, 12968-12976 所報(bào)道，基因也已經(jīng)分離出來(lái)。H. Ueyama等也已經(jīng)在J. Biochem. (1994) 116,677-681中描述了對(duì)來(lái)自大鼠和小鼠肝臟的ZAG cDNA的研究，其與相應(yīng)的mRNA表達(dá)的糖蛋白一起已經(jīng)測(cè)序并與人類物質(zhì)比較。盡管如所期望，找到來(lái)自不同物種的細(xì)節(jié)差別，但是發(fā)現(xiàn)高度的氨基酸序列同源性與人對(duì)應(yīng)物(糖蛋白的B結(jié)構(gòu)域內(nèi)超過(guò)70%的同源性)具有超過(guò)50%的同源性。再次地，已經(jīng)觀察到人、大鼠和小鼠ZAG之間共同的免疫學(xué)性質(zhì)?；旧细鶕?jù)Ohkubo 等(Ohkubo 等(1988)“Purification and characterisationof human plasma Zn- a ^glycoproteinjTrep. Biochem. , 18, 413-430)所述的方法，從新鮮的人血漿中制備上面討論的純化的ZAG。應(yīng)當(dāng)理解，在一些情況下，可以在不喪失活性的情況下產(chǎn)生分離的脂類動(dòng)員因子的片段、ZAG的片段或抗ZAG抗體片段的片段，并且可進(jìn)行各種添加、缺失和置換，其也將基本上不影響這種活性。就這一點(diǎn)而論，本發(fā)明的方法還包括使用抗ZAG抗體的功能片段。用于這些治療應(yīng)用中的抗體或其片段還可以通過(guò)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生，重組DNA技術(shù)是本領(lǐng)域所熟知的，其可能基于Zn- a 2_糖蛋白的已知cDNA序列，該序列已被公開(kāi)例如在 H. Ueyama 等(1994)^Structure and Expression of Rat and MousemRNAs for Zn-a 2-glycoprotein，，J. Biochem.，116，677-681 中。此外，這用于這些治療應(yīng)用中的抗體或其片段可進(jìn)一步包括多肽的表達(dá)后修飾，例如糖基化、乙?；?、磷酸化等，以及本領(lǐng)域已知的其它修飾，天然存在和非天然存在的修飾。如本文所用，ZAG多肽或蛋白質(zhì)包括野生型蛋白質(zhì)的變體，所述變體保留其生物學(xué)功能。就這一點(diǎn)而論，可以改變ZAG蛋白的一個(gè)或多個(gè)殘基以產(chǎn)生變體或截短蛋白，只要變體保留其天然生物學(xué)活性。保守性氨基酸置換包括例如作為酸性氨基酸的天冬氨酸-谷氨酸；作為堿性氨基酸的賴氨酸/精氨酸/組氨酸；作為疏水性氨基酸的亮氨酸/異亮氨酸、甲硫氨酸/纈氨酸、丙氨酸/纈氨酸；作為親水性氨基酸的絲氨酸/甘氨酸/蘇氨酸。保守性氨基酸置換也包括基于側(cè)鏈的分組。例如，具有脂族側(cè)鏈的氨基酸組是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；具有脂族-羥基側(cè)鏈的氨基酸組是絲氨酸和蘇氨酸；具有含酰胺側(cè)鏈的氨基酸組是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳族側(cè)鏈的氨基酸組是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有堿性側(cè)鏈的氨基酸組是賴氨酸、精氨酸和組氨酸；和具有含硫側(cè)鏈的氨基酸組是半胱氨酸和甲硫氨酸。例如，合理的是希望用異亮氨酸或纈氨酸替換亮氨酸、用谷氨酸替換天冬氨酸、用絲氨酸替換蘇氨酸或用結(jié)構(gòu)上相關(guān)的氨基酸相似地替換氨基酸將對(duì)所得到的變體多肽的性能不產(chǎn)生重大影響。通常，通過(guò)選擇其對(duì)以下方面的影響方面沒(méi)有明顯差異的置換，完成屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的氨基酸置換維持(a)肽主鏈在置換區(qū)域內(nèi)的結(jié)構(gòu)、(b)分子在靶位點(diǎn)處的電荷或疏水性或(C)側(cè)鏈體積。然而，本發(fā)明也構(gòu)思具有非保守性置換的變體。除非另外區(qū)分，否則術(shù)語(yǔ)“肽”、“多肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中互換地用來(lái)指任意長(zhǎng)度的氨基酸聚合物。這些術(shù)語(yǔ)也包括通過(guò)包括糖基化、乙?；土姿峄姆磻?yīng)經(jīng)翻譯后修飾的蛋白質(zhì)。如上文討論，本發(fā)明包括ZAG多肽或蛋白的功能片段的用途。將功能性片段部分地表征為具有或影響與體重減少、降低血糖水平、增加體溫、改善葡萄糖組織攝入量、增加^ 3受體表達(dá)、增加ZAG的表達(dá)、增加Glut4表達(dá)和/或增加UCPl和UCP3表達(dá)相關(guān)的活性。因此，在本文所用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“功能性片段”指保留ZAG的一種或多種生物學(xué)功能的多肽。用于鑒定ZAG多肽的這種功能性片段的方法通常是本領(lǐng)域已知的。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗體”包括對(duì)以免疫方式反與特定抗原應(yīng)性的免疫球蛋白分子的稱謂，并且包括多克隆抗體和單克隆抗體。該術(shù)語(yǔ)也包括基因修飾形成，如嵌合抗體(例如，人源化鼠抗體)和異質(zhì)綴合抗體(例如，雙特異性抗體)。術(shù)語(yǔ)“抗體”還包括抗體的抗原結(jié)合形式，包括具有抗原結(jié)合能力的片段(例如，F(xiàn)ab’、F(ab’)2、Fab、Fv和rlgG。還見(jiàn)，Pierce Catalog and Handbook , 1994-1995 (Pierce Chemical Co.，Rockford, 111.)。也見(jiàn)例如，Kuby, J.，Immunology3. sup. rd Ed. , ff. H. Freeman&Co. , New York(1998) 該術(shù)語(yǔ)也指重組單鏈Fv片段(scFv)。術(shù)語(yǔ)“抗體”也包括雙價(jià)或雙特異性分子、雙體抗體、三體抗體和四體抗體。雙價(jià)和雙特異性分子在以下中描述例如，Kostelny等.(1992)JImmunol148:1547, Pack 和 Pluckthun(1992)Biochemistry31:1579, Hollinger 等,1993,上文，Gruber 等.(1994) J Immunol: 5368，Zhu 等.(1997) Protein Sci6:781，Hu 等.(1996)Cancer Res. 56:3055, Adams 等 (1993)Cancer Res. 53:4026 和 McCartney 等 (1995)Protein Eng.8:301。以免疫方式與特定抗原反應(yīng)性的抗體可以通過(guò)重組方法如選擇噬菌體或相似載體中的重組抗體文庫(kù)(見(jiàn)，例如，Huse等，Science 246:1275-1281 (1989) ；ffard等，Nature341:544-546 (1989);和 Vaughan 等，Nature Biotech. 14:309-314 (1996))或通過(guò)其中所述抗原或用編碼所述抗原的DNA免疫動(dòng)物來(lái)產(chǎn)生。一般而言，免疫球蛋白具有重鏈和輕鏈。每條重鏈和輕鏈含有恒定區(qū)和可變區(qū)(這些區(qū)域也稱作“結(jié)構(gòu)域”)。輕鏈和重鏈可變區(qū)含有4個(gè)被3個(gè)高變區(qū)間隔(也稱作“互補(bǔ)性決定區(qū)”或“⑶R”)的“框架區(qū)”。已經(jīng)限定框架區(qū)和⑶R的范圍。不同輕鏈或重鏈的框架區(qū)的序列在一個(gè)物種內(nèi)部是相對(duì)保守的。作為組成性輕鏈和重鏈的組合框架區(qū)的抗體框架區(qū)起到在三維空間中定位和對(duì)齊CDR的作用。⑶R主要負(fù)責(zé)與抗原的表位結(jié)合。每條鏈的⑶R —般稱作⑶R1、⑶R2和⑶R3，從N-端開(kāi)始依次編號(hào)，并且一般也由其中存在特定⑶R的鏈確定。因此，VhCDR3位于找到它的抗體的重鏈可變域內(nèi)，而'CDRl是來(lái)自找到它的抗體的輕鏈可變域中的CDRl。對(duì)“VH”或“VH”的稱謂指抗體的免疫球蛋白重鏈(包括Fv、scFv或Fab的重鏈)的可變區(qū)。對(duì)“Vl”或“Vl”的稱謂指免疫球蛋白輕鏈(包括FV、SCFV、dSFV或Fab的輕鏈)的可變區(qū)。

具有與天然存在的IgG類抗體的恒定區(qū)基本上相同的恒定區(qū)的抗體指這樣的抗體，其中存在的任何恒定區(qū)與天然存在的IgG類抗體的恒定區(qū)的氨基酸序列基本上相同，即，與之至少約85-90%并且優(yōu)選地至少95%相同。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”不限于通過(guò)雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的抗體。術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”指抗體，其源自單個(gè)克隆(包括任何真核、原核或噬菌體克隆)并且不源自產(chǎn)生它的方法?？梢杂帽绢I(lǐng)域已知的多種技術(shù)(包括使用雜交瘤技術(shù)、重組技術(shù)和噬菌體展示技術(shù)或其組合)制備用于本發(fā)明的單克隆抗體。例如，可以使用雜交瘤技術(shù)，包括本領(lǐng)域已知和例如在 Harlow 和 Lane, “Antibodies:A Laboratory Manual, ” Cold Spring HarborLaboratory Press, New York(1988) ；Hammerling 等,“Monoclonal Antibodies andT-Cell Hybridomas, Elsevier, N. Y. (1981),第 563-681 頁(yè)(所述兩份參考文獻(xiàn)均通過(guò)引用的方式完整并入)中教導(dǎo)的那些技術(shù)，產(chǎn)生單克隆抗體。因此，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體可以是嵌合抗體、靈長(zhǎng)類化抗體、人源化抗體或人抗體?！扒逗峡贵w”是免疫球蛋白分子，其中(a)將恒定區(qū)或其部分改變、替換或交換，從而抗原結(jié)合位點(diǎn)(可變區(qū))與不同或改變的類別、效應(yīng)子功能和/或物種的恒定區(qū)或向嵌合抗體賦予新性能的完全不同的分子(例如，酶、毒素、激素、生長(zhǎng)因子、藥物)等連接；或(b)將可變區(qū)或其部分用具有不同或改變的抗原特異性的可變區(qū)改變、替換或交換。用于產(chǎn)生嵌合抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。見(jiàn)，例如，Morrison, Science229:1202-1207(1985) ；0i 等，BioTechniques4:214-221 (1986) ；Gillies 等,J.1mmunol.Methodsl25:191-202 (1989);美國(guó)專利號(hào) 5，807，715 ；4, 816，567 ;和 4，816，397，所述文獻(xiàn)通過(guò)引用的方式完整并入本文。
術(shù)語(yǔ)“人源化抗體”或“人源化免疫球蛋白”指免疫球蛋白，其包含人框架、來(lái)自非人抗體的至少一個(gè)和優(yōu)選地全部互補(bǔ)性決定區(qū)(OTR)并且其中存在的任何恒定區(qū)與人免疫球蛋白恒定區(qū)基本上相同，即，至少約85-90%并且優(yōu)選地至少95%相同。因此，人源化免疫球蛋白的可能除CDR之外的全部部分與一個(gè)或多個(gè)天然人免疫球蛋白序列的相應(yīng)部份基本上相同。因此，此類人源化抗體是嵌合抗體(美國(guó)專利號(hào)4，816，567)，其中基本上小于完整人可變結(jié)構(gòu)域的區(qū)域已經(jīng)被來(lái)自非人物種的相應(yīng)序列置換。經(jīng)常地，人框架區(qū)中的框架殘基將用來(lái)自⑶R供體抗體的相應(yīng)殘基置換以改變、優(yōu)選地改善抗原結(jié)合。這些框架置換由本領(lǐng)域熟知的方法鑒定，例如，通過(guò)將CDR和框架殘基的相互作用建模以鑒定對(duì)抗原結(jié)合重要的框架殘基并且進(jìn)行序列比較以鑒定特定位置處的不尋?？蚣軞埢Ｒ?jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào)5，530，101 ；5, 585,089 ;5，693，761 ;5，693，762 ；6，180，370(所述每個(gè)專利通過(guò)引用的方式完整地并入)。抗體可以使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)人源化，所述多種技術(shù)包括例如CDR-接枝(EP239，400 ;PCT公開(kāi)W091/09967 ;美國(guó)專利號(hào) 5，225，539 ;5，530，101 和 5，585，089)、鑲飾或表面重塑(EP592, 106 ；EP519, 596 ；Padlan, Mol. Tmmuno1. , 28:489-498(1991) ；Studnicka 等,Prot.Eng. 7:805-814(1994)；Roguska 等，Proc. Natl. Acad. Sc1. 91:969-973 (1994)和鏈改組(美國(guó)專利號(hào) 5，565，332)，所述全部文獻(xiàn)因而通過(guò)引用的方式完整并入。

在某些實(shí)施方案中，完全“人的”抗體可以對(duì)于治療性治療人患者是合乎需要的?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的多種方法產(chǎn)生人抗體，所述方法包括上文所述的使用源自人免疫球蛋白序列的抗體文庫(kù)的噬菌體展示法。見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4，444，887和4，716，111 ；和 PCT 公開(kāi) TO98/46645 ；W098/50433 ；W098/24893 ；W098/16654 ；W096/34096 ；W096/33735和TO91/10741，所述的每篇文獻(xiàn)通過(guò)引用方式完整地并入本文。也可以使用轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生人抗體，其中所述轉(zhuǎn)基因小鼠不能表達(dá)功能性內(nèi)源免疫球蛋白，但是可以表達(dá)免疫球蛋白基因。對(duì)用于產(chǎn)生人抗體的這項(xiàng)技術(shù)的綜述，見(jiàn)Lonberg和Huszar, Int. Rev.1mmunol. 13:65-93(1995)。對(duì)用于產(chǎn)生人抗體和人單克隆抗體的這項(xiàng)技術(shù)及用于產(chǎn)生此類抗體的操作方案的詳細(xì)討論，見(jiàn)，例如，PCT公開(kāi)W098/24893 ；W092/01047 ；W096/34096 ；W096/33735 ；歐洲專利號(hào) 0 598 877 ;美國(guó)專利號(hào) 5，413，923 ;5，625，126 ;5，633，425 ；5，569，825 ;5，661，016 ;5，545，806 ;5，814，318 ;5，885，793 ;5，916，771 ；和 5，939，598，所述文獻(xiàn)通過(guò)引用的方式完整并入本文。此外，諸多公司如Abgenix, Inc. (Fremont, Calif.)和Medarex (Princeton, N. J.)可以簽約以使用與上述相似的技術(shù)提供針對(duì)所選擇抗原的人抗體?？梢允褂梅Q作“導(dǎo)向選擇”的技術(shù)產(chǎn)生識(shí)別所選擇表位的完全人類的抗體。在這種方法中，選擇的非人單克隆抗體(例如，小鼠抗體)用來(lái)指導(dǎo)識(shí)別相同表位的完全人類的抗體的選擇(Jespers 等,Biotechnologyl2:899-903 (1988)。術(shù)語(yǔ)“靈長(zhǎng)類化抗體”指包含猴可變區(qū)和人恒定區(qū)的抗體。用于產(chǎn)生靈長(zhǎng)類化抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。見(jiàn)例如美國(guó)專利號(hào)5，658，570,5, 681，722和5，693，780，所述文獻(xiàn)通過(guò)引用的方式完整并入本文。如本文所用，“表位”或“抗原決定簇”指抗原上與抗體結(jié)合的位點(diǎn)。表位可以從連續(xù)氨基酸或因蛋白質(zhì)的立體折疊而靠近的非連續(xù)氨基酸中形成。從連續(xù)氨基酸形成的表位一般在暴露于變性溶劑時(shí)保留，而因立體折疊形成的表位通一般在用變性溶劑處理時(shí)喪失。表位一般地包含至少3個(gè)和更多個(gè)、通常至少5個(gè)或8-10個(gè)處于獨(dú)特空間構(gòu)象的氨基酸。確定表位的空間構(gòu)象的方法包括例如X射線結(jié)晶學(xué)和二維核磁共振法。見(jiàn)，例如，Methods in Molecular Biology,第 66 卷，Glenn E. Morris 編著(1996)中的 EpitopeMapping Protocols。“ IgG類”的抗體指抗體IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。重鏈和輕鏈中氨基酸殘基的編號(hào)按照 EU index(Kabat 等，“Sequences ofProteins of Immunological Interest，，，第 5版，National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991);在此使用 EU 編號(hào)方案進(jìn)行)。制備多克隆抗體的方法是技術(shù)人員已知的。多克隆抗體可以在哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生，例如，通過(guò)一次或多次注射免疫劑和(如果需要)佐劑。一般地，將通過(guò)多次皮下或腹腔內(nèi)在哺乳動(dòng)物中注射免疫劑和/或佐劑。免疫劑可包括蛋白質(zhì)，如由核酸或其功能性片段編碼的SEQ IDN0:1中所示的多肽?？赡苡杏玫氖菍⒚庖邉┡c蛋白質(zhì)綴合，其中已知所述蛋白質(zhì)在正在免疫的哺乳動(dòng)物中具有免疫原性。這類免疫原性蛋白質(zhì)的實(shí)例包括但不限于匙孔槭血藍(lán)蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白和大豆胰蛋白酶抑制劑。可以使用的佐劑的實(shí)例包括弗氏完全佐劑和MPL-TDM佐劑(單磷酸酯類脂A,合成性海藻糖dicorynomycolate)?？梢杂杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員選擇免疫操作方案，無(wú)需過(guò)多實(shí)驗(yàn)?？贵w可以可選地是單克隆抗體。單克隆抗體可以使用雜交瘤方法(如Kohler和Milstein, Nature256:495(1975)描述的那些方法)制備。在雜交瘤方法中，將小鼠、倉(cāng)鼠或其他適宜的宿主動(dòng)物用免疫劑免疫以激發(fā)產(chǎn)生或能夠產(chǎn)生抗體的淋巴細(xì)胞，其中所述的抗體將與免疫劑特異性結(jié)合。備選地，淋巴細(xì)胞可以體外免疫。免疫劑一般將包括如SEQ IDNO:1中所示的多肽或其功能性片段?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的多種技術(shù)產(chǎn)生人抗體，所述技術(shù)包括噬菌體展示文庫(kù)法(Hoogenboom 和 Winter, J. Mol. Biol. 227: 381 (1991) ；Marks 等，J. Mol.Biol. 222:581 (1991))。Cole等和Boerner等的技術(shù)也可用于制備人單克隆抗體(Cole 等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,第 77 頁(yè)(1985)和Boemer等，J.1mmunol. 147 (I) : 86-95 (1991))。類似地，可以通過(guò)將人免疫球蛋白基因座導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如，其中已經(jīng)部分或完全地使內(nèi)源免疫球蛋白基因失活的小鼠)中產(chǎn)生人抗體。當(dāng)攻擊時(shí)，觀察到人抗體產(chǎn)生，這與人類中在全部方面所見(jiàn)到的情況十分相似，包括基因重排、裝配和抗體庫(kù)。這種方法例如在美國(guó)專利號(hào) 5，545，807 ;5，545，806 ;5，569，825 ;5，625，126 ;5，633，425 ;5，661，016 中并且在以下科學(xué)出版物Marks 等，Bio/Technology 10:779-783 (1992) ；Lonberg等,Nature368:856-859(1994) ；Morrison, Nature368:812-13(1994) ;Fishwild 等,NatureBiotechnologyl4:845-51 (1996) ；Neuberger, Nature Biotechnology14:826(1996)；Lonberg 和 Huszar, Intern. Rev.1mmunol. 13:65-93 (1995)中描述。在一些實(shí)施方案中，抗體是單鏈Fv(scFv)。scFv抗體的Vh和Vlj區(qū)包含單鏈，所述單鏈經(jīng)折疊以產(chǎn)生與雙鏈抗體中存在的抗原結(jié)合位點(diǎn)相似的抗原結(jié)合位點(diǎn)。一旦折疊，非共價(jià)的相互作用使單鏈抗體穩(wěn)定。盡管一些抗體實(shí)施方案的Vh和\區(qū)域可以直接連接在一起，然而技術(shù)人員將理解這些區(qū)域可以通過(guò)由一個(gè)或多個(gè)氨基酸組成的肽接頭分隔。肽接頭和它們的用途是本領(lǐng)域熟知的。見(jiàn)，例如，Huston等，Proc.Nat，I Acad. Sc1. USA8:5879(1988) ；Bird 等，Science242:4236(1988) ；Glockshuber等，Biochemistry29:1362 (1990);美國(guó)專利號(hào) 4，946，778、美國(guó)專利號(hào) 5，132，405 和Stemmer等，Biotechniques 14:256-265(1993)。通常，除連接所述區(qū)域或保持Vh和Vlj之間的一些最小距離或其他空間關(guān)系之外，肽接頭將具有非特異性生物學(xué)活性。然而，可以選擇肽接頭的組成氨基酸以影響分子的一些性能如折疊、凈電荷或疏水性。單鏈Fv(scFv)抗體任選地包括不多于50個(gè)氨基酸、通常不多于40個(gè)氨基酸、優(yōu)選地不多于30個(gè)氨基酸和更優(yōu)選地不多于20個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的肽接頭。在一些實(shí)施方案中，肽接頭是序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO: 7)的連環(huán)體，優(yōu)選地2、3、4、5或6個(gè)這類序列。然而，將理解的是可以在接頭內(nèi)部進(jìn)行一些氨基酸置換。例如，可以將纈氨酸置換為甘氨酸。已經(jīng)描述了制造scFv抗體的方法。見(jiàn)Huse等，上文；Ward等，上文；和Vaughan等，上文。簡(jiǎn)言之，從來(lái)自免疫動(dòng)物的B細(xì)胞中分離mRNA并且制備cDNA。使用對(duì)免疫球蛋白重鏈和輕鏈可變區(qū)特異的引物擴(kuò)增cDNA。純化PCR產(chǎn)物并且連接核酸序列。如果需要接頭肽，將編碼這種肽的核酸序列在重鏈和輕鏈核酸序列之間插入。將編碼scFv的核酸插入載體中并且在適宜的宿主細(xì)胞中表達(dá)。一般通過(guò)淘洗噬菌體展示文庫(kù)找到與所需抗原特異性結(jié)合的scFv?？梢酝ㄟ^(guò)幾種方法中的任一種進(jìn)行淘洗。可以使用在表面上表達(dá)所需抗原的細(xì)胞或使用以所需抗原包被的固體表面便利地進(jìn)行淘洗。便利地，所述表面可以是磁珠。從固體表面上洗下未結(jié)合的曬菌體并且洗脫結(jié)合的曬菌體。ZAG和/或其片段先前已經(jīng)顯示在哺乳動(dòng)物中弓丨起體重減少和肥胖減少，如美國(guó)專利號(hào)6，890, 899和7，550, 429中和美國(guó)公開(kāi)號(hào)2010/0173829中公開(kāi)，每篇文獻(xiàn)的完整內(nèi)容通過(guò)引用方式并入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明顯示抗ZAG抗體和/或其功能性片段在惡病質(zhì)模型中降低體重減少。因此考慮本發(fā)明的方法對(duì)與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀和/或與肌肉消耗性疾病相關(guān)的疾病提供可檢測(cè)的作用。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種改善受試者中惡病質(zhì)癥狀的方法。這種方法包括向需要這樣治療的受試者施用治療有效劑量的抑制劑，其中所述抑制劑針對(duì)具有如SEQID N0:1中所示序列的多肽的生物學(xué)活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，該治療方案可持續(xù)數(shù)月(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)月)、或數(shù)年。在另一個(gè)實(shí)施方案中，施用多肽持續(xù)達(dá)21天或更長(zhǎng)時(shí)間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，癥狀的改善在開(kāi)始治療的數(shù)天(例如，1、2、3、
4、5、6或7天)、數(shù)周(例如1、2、3或4周)、或數(shù)月(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)月)內(nèi)檢測(cè)到。在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療方案是約10天，其中治療之后存在與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀的改善。在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療方案是約21天，其中治療之后存在與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀的改善。此外，已觀察到具有ZAG和/或其片段的相似特性的脂類動(dòng)員藥劑也已用于在哺乳動(dòng)物中引起體重減少和肥胖減少，如美國(guó)公開(kāi)的申請(qǐng)?zhí)?006/0160723中所公開(kāi)，其通過(guò)引用以其全部被并入本文。最后，已經(jīng)顯示ZAG和/或其功能片段增加脂肪細(xì)胞和骨骼肌的胰島素反應(yīng)性，并通過(guò)蛋白質(zhì)合 成的增加加上蛋白質(zhì)降解的減少而引起肌肉質(zhì)量的增加，不論在治療期間是否觀察到體重減少或肥胖減少(見(jiàn)美國(guó)系列號(hào)12/614，289，所述文獻(xiàn)通過(guò)引用方式并入本文)。另外，￠3激動(dòng)劑是在嚙齒類中據(jù)報(bào)道有效的胰島素致敏劑，并且它們?cè)谌祟愔薪档脱撬降臐摿σ呀?jīng)成為研究的主題。P 3激動(dòng)劑腎上腺素能受體的活化刺激脂肪氧化，從而降低調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)的代謝物(包括脂肪?；鵆oA和二酰甘油)的胞內(nèi)濃度。另夕卜，本文中考慮，鑒于這些藥劑可獲得的一個(gè)類別的￠3受體位于消化系統(tǒng)中并且尤其位于口、咽、食道和胃中，從而導(dǎo)致所述激動(dòng)劑對(duì)這些受體暴露最小(如果有的話)，因而某些^3受體激動(dòng)劑可能在臨床試驗(yàn)中未取得成功。這種理論受到以下觀察結(jié)果支持發(fā)現(xiàn)幾種@ 3激動(dòng)劑治療藥是有效的，但是在血漿空間具有有限的生物利用率。本文中提供眾多的制劑。制劑可以處于任何形式，例如，液體劑、固體劑、凝膠劑、乳劑、粉劑、片劑、膠囊劑或凝膠膠囊劑(例如，軟質(zhì)或硬質(zhì)凝膠膠囊劑)。制劑一般將包含已經(jīng)被純化、分離或提取(例如，從植物中)或合成的一種或多種組合物，用來(lái)補(bǔ)充膳食中的食物時(shí)，將所述組合物組合以提供益處(例如，除營(yíng)養(yǎng)性益處之外的健康益處)。在某些實(shí)施方案中，可以在本文中描述制劑的或制劑中所提供成分的每天或每客推薦量。在某些情況下，如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，可以變動(dòng)制劑的形式，例如，通過(guò)用粉劑替換膠囊劑、用片劑替換膠囊劑、用凝膠膠囊劑替換片劑、用凝膠膠囊劑替換膠囊齊IJ、用粉劑替換凝膠膠囊劑或任何這類組合，以便提供制劑的每天或每客這類推薦量。可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員使用熟知的方法制備制劑的任一種，例如，通過(guò)以恰當(dāng)?shù)牧炕旌纤龀煞?。包含于制劑的成分通常是可商業(yè)獲得的。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含ZAG或其功能性片段的制劑。例如，這種ZAG可以是哺乳動(dòng)物ZAG(如SEQ ID NO:1中所示的人ZAG)或其片段。然而，應(yīng)當(dāng)理解ZAG可以源自任何來(lái)源，前提是這種ZAG保留野生型ZAG的活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，還包含藥學(xué)上可接受的載體，所述載體構(gòu)成一種或多種輔助成分。

如本文所用的術(shù)語(yǔ)“受試者”指對(duì)其進(jìn)行主題方法的任何個(gè)體或患者。一般地，受試者是人，盡管如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所將理解的，受試者可以是動(dòng)物。因此，在受試者的定義內(nèi)包括其它的動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物諸如嚙齒動(dòng)物(包括小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠和豚鼠)、貓、狗、兔子、家畜(包括奶牛、馬、山羊、綿羊、豬等)和靈長(zhǎng)類(包括猴、黑猩猩、猩猩和大猩猩)。惡病質(zhì)常見(jiàn)地與眾多疾病狀態(tài)相關(guān)，所述疾病狀態(tài)包括與危重疾病相關(guān)的急性炎癥過(guò)程和慢性炎性疾病、癌癥、AIDS、敗血病、C0PD、腎衰竭、關(guān)節(jié)炎、充血性心力衰竭、肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥、糖尿病、老年人少肌癥(sarcopenia of aging)、嚴(yán)重創(chuàng)傷(例如,肢體的矯形固定)、代謝性酸中毒、去神經(jīng)性萎縮和失重。術(shù)語(yǔ)“治療有效量”或“有效量”意指化合物或藥物組合物的量，其將激發(fā)研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它的臨床醫(yī)生正在尋求的組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑意在每天口服施用。然而，同等地構(gòu)思其他的施用形式。如本文所用，將術(shù)語(yǔ)“施用(administration) ”或“施用(administering) ”定義為包括提供給需要治療的受試者本發(fā)明的化合物或藥物組合物的行為。短語(yǔ)“胃腸外施用(parenteral administration) ” 和“經(jīng)胃腸外施用(administered parenteralIy) ”如本文所用指除腸內(nèi)和局部施用外的施用方式，通常是口服或通過(guò)注射，包括但不限于，靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)的和胸骨內(nèi)的注射和輸注。短語(yǔ)“全身施用(systemicadministration) ”、“經(jīng)全身施用(administered systemically) ”、“外周施用(peripheraladministration) ”和“經(jīng)外周施用(administered peripherally) ”如本文所用指除直接進(jìn)入到中樞神經(jīng)系統(tǒng)外的化合物、藥物或其它物質(zhì)的施用，這樣它進(jìn)入受試者的全身，并因此易遭受新陳代謝和其它相似的過(guò)程，例如皮下施用。就這一點(diǎn)而論，在一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明的抗ZAG抗體，其片段和/或制劑通過(guò)吸入、鼻內(nèi)、經(jīng)頰、舌下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和/或口服施用給受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將抗體或其組合物配制于速溶組合物、延長(zhǎng)釋放組合物等中。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“改善”或“治療”指與惡病質(zhì)相關(guān)的臨床體征和/或癥狀由所進(jìn)行的行為而減少。待監(jiān)測(cè)的體征或癥狀將是惡病質(zhì)特征性的并且對(duì)于熟練臨床醫(yī)生將是熟知的，并且對(duì)于具有并對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，用于監(jiān)測(cè)所述體征和狀況的方法也是熟知的。除脂肪/肌肉質(zhì)量丟失之外還，與正常受試者或未患有惡病質(zhì)的受試者相比，與惡病質(zhì)相關(guān)的示例性癥狀還包括但不限于發(fā)熱、頭痛、慢性疼痛、身體不適、昏厥、發(fā)作伴隨發(fā)熱、休克、心悸、心臟雜音、壞疽、鼻衄、咯血、咳嗽、呼吸困難、哮鳴、換氣過(guò)度和換氣不足、口呼吸、呃逆和胸痛、腹痛、惡心或嘔吐、胃灼熱、口臭和腸胃脹氣。就這一點(diǎn)而論，綜合征與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀的改善包括但不限于降低或減小受試者中的體重減少并且逆轉(zhuǎn)一個(gè)或多個(gè)上文所列的癥狀。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“減低”和“抑制”在一起使用，因?yàn)檎J(rèn)識(shí)到在一些情況下，降低可以是減小低于特定測(cè)定法的檢測(cè)水平。就這一點(diǎn)而論，表達(dá)水平或活性是否“減小”低于測(cè)定法的檢測(cè)水平或或完全“抑制”可能并不總是清楚的。盡管如此，將明顯可確定的是，根據(jù)本方法的治療之后，受試者中體重減少的量至少?gòu)闹委熤暗乃奖粶p低。已經(jīng)認(rèn)為ZAG具有許多生物學(xué)作用，但是其作為脂肪因子調(diào)節(jié)脂類動(dòng)員和利用的作用是在調(diào)節(jié)身體組成方面最重要的。先前的研究提示蛋白質(zhì)合成的增加是由于通過(guò)與
腎上腺素能受體的相互作用引起的環(huán)AMP的增加，而蛋白質(zhì)降解的降低是由于降低的泛素-蛋白酶體蛋白水解途徑的活性。db/db小鼠中的研究顯示胰島素抗性通過(guò)增加的泛素-蛋白酶體途徑的活性引起肌萎縮。增加的PKR和eIF2a的磷酸化將通過(guò)阻斷翻譯起始而降低蛋白質(zhì)合成，而PKR的活化將通過(guò)活化核因子-K B(NF_k B)、增加蛋白酶體亞基的表達(dá)而增加蛋白質(zhì)降解。在存在高的細(xì)胞外葡萄糖時(shí)使用肌管的體外研究顯示PKR的活化引起P38MAPK的活化和活性氧種類(ROS)的形成。p38MAPK可以在Ser_505處磷酸化并活化CPLA2，引起花生四烯酸一ROS來(lái)源一的釋放。在飲食誘發(fā)的肥胖模型中已觀察到骨骼肌中p38MAPK的超活化。此外已顯示半胱天冬酶-3活性在糖尿病動(dòng)物的骨骼肌中增加，這可以是信號(hào)級(jí)聯(lián)放大的一部分，因?yàn)樗梢郧懈頟KR，導(dǎo)致活化。不受理論束縛，ZAG減弱這些信號(hào)傳導(dǎo)途徑的能力提供關(guān)于它增加肌肉質(zhì)量的能力的解釋。就這一點(diǎn)而論，抗ZAG抗體顯示惡病質(zhì)狀況下降低肌肉質(zhì)量損失。因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種補(bǔ)充人類或動(dòng)物膳食的方法。該方法包括向受試者施用ZAG多肽或其片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括攝取包含ZAG多肽(如SEQ ID NO:1中所述的人ZAG多肽)的制劑。可以將制劑單獨(dú)攝取或以任何順序和持續(xù)不同的相對(duì)時(shí)間長(zhǎng)度，與任何其他已知的制劑組合攝取。在某些實(shí)施方案中，在其他制劑之前使用某些制劑，而同時(shí)攝取其他制劑。因此，將ZAG鑒定為能夠在小鼠白色脂肪細(xì)胞中以GTP依賴性過(guò)程誘導(dǎo)脂解作用的脂類動(dòng)員因子，類似于脂肪分解激素誘導(dǎo) 的脂類動(dòng)員因子。本文呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)通過(guò)顯示ZAG在大鼠脂肪細(xì)胞中具有相似的脂肪分解作用，而且，在成熟的雄性大鼠中引起身體重量和尸體脂肪降低而支持這些研究結(jié)果，盡管大鼠和人ZAG之間的序列同源性僅為59. 4%。ZAG還抵消包括血漿胰島素水平降低和改善的葡萄糖耐量試驗(yàn)反應(yīng)在內(nèi)的糖尿病狀態(tài)的代謝特征中的一些特征。因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供降低受試者中血漿胰島素水平的方法。該方法包括對(duì)受試者施用治療有效劑量的具有如SEQ ID NO:1中所示序列的多肽或其片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，血漿胰島素降低在開(kāi)始治療的3天內(nèi)發(fā)生。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將治療方案施用10天或更長(zhǎng)時(shí)間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將治療方案施用21天或更長(zhǎng)時(shí)間。此外，ZAG已顯示在成年雄性小鼠中增加葡萄糖氧化和增加組織葡萄糖代謝速率。這種增加的葡萄糖的利用將解釋在施用ZAG的ob/ob小鼠中血液葡萄糖和胰島素水平的下降。甘油三酯利用在施用ZAG的小鼠中也增加，這將解釋血漿非酯化脂肪酸(NEFA)和甘油三酯(TG)的下降，盡管血漿甘油增加，指示脂解作用增加。將從BAT中UCPl和UCP3及骨骼肌中UCP3的增加的表達(dá)預(yù)期增加的脂類利用，導(dǎo)致體溫增加。因此，將ZAG鑒定為能夠在小鼠白色脂肪細(xì)胞中以GTP依賴性過(guò)程誘導(dǎo)脂解作用的脂類動(dòng)員因子，類似于脂肪分解激素誘導(dǎo)的脂類動(dòng)員因子。就這一點(diǎn)而論，在一個(gè)實(shí)施方案中，與高血糖相關(guān)的癥狀的改善還包括治療期間體溫增加約0.5° C至約1° C。在一個(gè)實(shí)施方案中，體溫增加在開(kāi)始治療的4天內(nèi)發(fā)生。在另一個(gè)實(shí)施方案中，與高血糖相關(guān)的癥狀的改善還包括與治療之前胰腺胰島素水平相比，胰腺胰島素的增加，因?yàn)樽鳛閆AG存在的結(jié)果，需要較少的胰島素來(lái)控制血液葡萄糖。ZAG還顯示抵消糖尿病狀態(tài)的代謝特征中的一些，包括血漿胰島素水平降低和改善的葡萄糖耐量試驗(yàn)反 應(yīng)。此外，ZAG增加附睪脂肪細(xì)胞對(duì)3 3-腎上腺素能刺激物的脂肪分解的反應(yīng)性。ZAG還增加附睪脂肪組織中HSL和ATGL的表達(dá)，已發(fā)現(xiàn)這種表達(dá)在肥胖的胰島素抗性狀態(tài)下降低。調(diào)節(jié)HSL和ATGL表達(dá)的因子是未知的。然而，特異性ERK抑制劑(PD98059)響應(yīng)于ZAG而下調(diào)HSL表達(dá)，提示MAPK在該過(guò)程中的作用。缺少M(fèi)APK磷酸酶-1的小鼠在WAT中具有增加的ERK和p38MAPK活性，并且因增強(qiáng)的能量支出而抵抗膳食誘導(dǎo)的肥胖癥。先前的研究已提示MAPK在骨骼肌中ZAG誘導(dǎo)的UCP3表達(dá)中的作用。ERK活化可通過(guò)HSL的絲氨酸殘基，諸如Ser-600-由蛋白激酶A磷酸化的位點(diǎn)之一-的磷酸化而在脂肪細(xì)胞中調(diào)節(jié)脂解作用。本文呈現(xiàn)的結(jié)果顯示，對(duì)大鼠施用ZAG還增加大鼠中ATGL和HSL的表達(dá)。ATGL可能在肥胖癥中在過(guò)度脂肪儲(chǔ)存方面是重要的，因?yàn)锳TGL敲除小鼠具有響應(yīng)于異丙腎上腺素的大量脂肪沉積和來(lái)自WAT的NEFA釋放降低，盡管它們確實(shí)顯示正常的胰島素敏感性。相反，以正常飲食喂養(yǎng)時(shí)，無(wú)HSL小鼠具有與野生型動(dòng)物相似的體重。然而，與胰島素敏感狀態(tài)相比，肥胖的胰島素抗性狀態(tài)中ATGL和HSL的表達(dá)在人WAT中減少，重量減少也降低mRNA和蛋白水平。單獨(dú)脂解作用的刺激不會(huì)耗盡身體脂肪貯存，因?yàn)闆](méi)有能量池，釋放的NEFA在脂肪細(xì)胞中將被再合成甘油三酯。為了減少身體脂肪，ZAG不但增加脂解作用，如通過(guò)血漿甘油的增加所顯示的，而且還增加脂類利用，如通過(guò)甘油三酯和NEFA的血漿水平的降低所顯示。該能量形成(channel into)熱,如用ZAG處理的大鼠中體溫上升0. 4° C所證明。增加的能量利用最可能來(lái)自增加的UCPl表達(dá)，其已經(jīng)在施用ZAG之后BAT和WAT中顯示。增加的UCPl表達(dá)將期望降低NEFA的血漿水平，因?yàn)樵贐AT中它們是產(chǎn)熱的主要底物。BAT還具有高的葡萄糖利用能力，這將部分地解釋血液葡萄糖的降低。此外在骨骼肌和WAT中具有增加的GLUT4表達(dá)，這有助于介導(dǎo)存在胰島素時(shí)葡萄糖攝入量的增加。在用ZAG處理的小鼠中存在腦、心、BAT和腓腸肌的增加的葡萄糖利用/氧化，和14CO2從D-[U-14C]葡萄糖以及[14C羧基]三油酸甘油酯中的產(chǎn)生增加(圖24)。ZAG施用之后還存在ob/ob小鼠的BAT氧攝取三倍的增加。雖然ZAG增加附睪脂肪細(xì)胞中HSL的表達(dá)，但是在皮下或內(nèi)臟脂肪細(xì)胞中沒(méi)有增力口。對(duì)于脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)表達(dá)，觀察到相似的情形。HSL和ATGL的表達(dá)與ERK的活性(磷酸)形式的表達(dá)相關(guān)。附睪脂肪細(xì)胞中HSL和ATGL的表達(dá)與響應(yīng)于P 3激動(dòng)劑BRL37344的增加的脂肪分解相關(guān)。該結(jié)果提示，ZAG可以協(xié)同地與￠3激動(dòng)劑起作用，并且提示抗ZAG抗體可以協(xié)同地與￠3拮抗劑起作用。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“激動(dòng)劑”指能引起完全或部分藥理學(xué)反應(yīng)的藥劑或類似物。例如，激動(dòng)劑可有成果地與受體結(jié)合并在那里模擬生理反應(yīng)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”指與受體結(jié)合時(shí)不誘發(fā)生物學(xué)反應(yīng)本身，但是阻斷或減緩激動(dòng)劑介導(dǎo)的反應(yīng)的藥劑或類似物。本發(fā)明的方法和制劑可以包括與￠3拮抗劑(如但不限于BRL37344)或P 3激動(dòng)劑組合施用抗ZAG抗體或其功能性片段。可以在本發(fā)明中使用的￠3激動(dòng)劑的實(shí)例包括但不限于腎上腺素(腎上腺素(adrenaline))、去甲腎上腺素(去甲腎上腺素(noradrenaline))、異丙腎上腺素(isoprotenerol)、異丙腎上腺素、普萘洛爾、阿普洛爾、阿羅洛爾、布新洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、克侖特羅、地諾帕明、非諾特羅、納多洛爾、奧克巴胺、氧烯洛爾、吲哚洛爾、[(氰基)11引哚洛爾]、沙丁胺醇、沙美特羅、teratolol、tecradine、特美奎諾(trimetoquinolol)、3’ -碘特美奎諾、3’，5’ -碘特美奎諾、阿米貝隆、索拉貝隆、奈必洛爾、AD-9677、AJ-9677、AZ-002、CGP-12177, CL-316243, CL-317413, BRL-37344, BRL-35135,BRL-26830、BRL-28410, BRL-33725, BRL-37344, BRL-35113, BMS-194449, BMS-196085,BMS-201620、BMS-210285、BMS-187257, BMS-187413, BMS-187413 的 S03H 的 C0NH2 取代、BMS-181413 的消旋物、CGP-20712A、CGP-12177、CP-114271、CP-331679, CP-331684,CP-209129、FR-165914、FR-149175`、IC1-118551、IC1-201651、IC1-198157, IC1-D7114、LY-377604、LY-368842, KTO-7924, LY-362884, LY-750355, LY-749372, LY-79771,LY-104119、L-771047、L-755507, L-749372, L-750355, L-760087, L-766892, L-746646,L-757793、L-770644,L-760081、L-796568、L-748328,L-748337,Ro-16-8714,Ro-40-2148,(-)-R0-363, SB-215691、 SB-220648, SB-226552, SB-229432, SB-251023, SB-236923,SB-246982、SR-58894A、SR-58611、SR-58878、SR-59062、SM-11044, SM-350300, ZD-7114,ZD-2079、ZD-9969、ZM-215001 和 ZM-215967?？梢栽诒景l(fā)明中使用的P-AR拮抗劑的實(shí)例包括但不限于普萘洛爾、(-)_普萘洛爾、(+)_普萘洛爾、普拉洛爾、(-)_普拉洛爾、(+)_普拉洛爾、CGP-20712A、IC1-118551、(-)-布拉洛爾、醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、艾司洛爾、奈必洛爾、美托洛爾、醋丁洛爾、卡替洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、左布諾洛爾、美替洛爾、納多洛爾、索他洛爾和噻嗎洛爾。提示ZAG誘導(dǎo)的大鼠脂肪細(xì)胞中的脂解作用是通過(guò)P 3-AR介導(dǎo)的，ZAG對(duì)脂肪組織和瘦體重的作用還可由于它刺激P3-AR的能力。已經(jīng)顯示通過(guò)與P3-AR的相互作用介導(dǎo)ZAG誘導(dǎo)UCPl表達(dá)。WAT中增加的UCPl表達(dá)還可以是通過(guò)重塑棕色脂肪細(xì)胞前體的^ 3-AR效應(yīng)，如采用P 3-AR激動(dòng)劑CL316，243時(shí)發(fā)生那樣。使用敲除小鼠，^ 3-AR刺激的抗肥胖作用通過(guò)從WAT釋放的NEFA的UCPl依賴性降解已主要?dú)w因于BAT中的UCP1，較少地歸因于UCP2和UCP3。葡萄糖攝取進(jìn)動(dòng)物的外周組織受寒冷暴露一也是通過(guò)P3-AR介導(dǎo)的效應(yīng)一刺激。然而，靶向P3-AR在人類中較嚙齒動(dòng)物中更難，因?yàn)镻3-AR在控制人皮下腹部脂肪組織中的脂解作用和營(yíng)養(yǎng)性血流量中較P I和P2-AR亞型起到較不顯著的作用。然而，盡管這樣，P 3-AR激動(dòng)劑CL316，243已在健康的年輕男性志愿者中顯示增加脂肪氧化。這可能是由于￠-腎上腺素能激動(dòng)劑增加來(lái)自BAT的質(zhì)膜中P3-AR數(shù)目的能力。因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供治療受試者以引起體重減少降低的方法，其中所述體重減少歸因于惡病質(zhì)或與肌肉消耗相關(guān)的疾病。該方法包括向需要這樣治療的受試者施用治療有效劑量的P 3拮抗劑，聯(lián)合與多肽結(jié)合的抗體或其片段，其中所述多肽具有如SEQ IDN0:1中所顯示的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法包括向需要這樣治療的受試者施用治療有效劑量的P 3-AR拮抗劑，聯(lián)合與多肽結(jié)合的抗體或其片段，其中所述多肽具有如SEQ ID NO:1中所顯示的序列。最近的結(jié)果顯示，通過(guò)以旁分泌方式起作用，脂肪組織中的ZAG表達(dá)可能在局部比循環(huán)型ZAG更重要。因此在人類中，雖然內(nèi)臟和皮下脂肪中ZAG的mRNA水平與BM1、脂肪質(zhì)量和胰島素抗性負(fù)相關(guān)，但是通過(guò)ELISA測(cè)定的血清水平與肥胖參數(shù)(BMI和腰圍)和胰島素抗性正相關(guān)。因此ZAG誘導(dǎo)其自身在腓腸肌、WAT和BAT中表達(dá)的能力對(duì)它增加脂解作用和能量利用的能力可以是關(guān)鍵的。在本發(fā)明的多種實(shí)施方案中，組合ZAG、P-3AR激動(dòng)劑和P_AR拮抗劑目的取決于治療目的和受試者的狀態(tài)而變動(dòng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，涉及治 療肥胖癥或糖尿病，其中需要激活P -3AR機(jī)制以實(shí)現(xiàn)所需的脂解作用、葡萄糖消耗、胰島素敏化、蛋白質(zhì)合成、增加的能量支出等。在這種環(huán)境下對(duì)于一些受試者，可以觀察到，施用的ZAG或更有可能的是P -3AR激動(dòng)劑將在一個(gè)或多個(gè)^ -1AR或P -2AR處顯示一些不希望的活性，引起副作用或所需功效的削弱。這種環(huán)境將隨后要求額外施用P-AR拮抗劑(有時(shí)稱作“經(jīng)典P阻滯劑”)，從而在P-1AR或P-2AR處防止不希望的活性。將優(yōu)選地但不必然地選擇這些P-AR拮抗劑來(lái)阻斷與副作用或減輕功效相關(guān)的受體亞型(P -1AR、P -2AR之一)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，涉及治療惡病質(zhì)。在由不同疾病引起的惡病質(zhì)中和在患有給定疾病的受試者群體內(nèi)部，觀察到不同程度的惡病質(zhì)并伴有不同比例的肌肉丟失和脂肪丟失。在另一個(gè)方面，惡病質(zhì)受試者可能正患有肌肉質(zhì)量丟失，但是沒(méi)有脂肪丟失或某種程度的脂肪丟失。因?yàn)榧∪鈦G失一般地是臨床上更不想要的結(jié)局，所以可能需要使用ZAG以在ZAG處理的惡病質(zhì)動(dòng)物中引起一些肌肉積累，同時(shí)還引起某種程度的脂肪丟失。因此用ZAG、^ -3AR激動(dòng)劑和任選地如上文所述的P -AR拮抗劑治療這類受試者可以增加肌肉質(zhì)量。在另一個(gè)方面，惡病質(zhì)受試者可能正患有脂肪質(zhì)量丟失，沒(méi)有肌肉質(zhì)量丟失或伴有某種程度的肌肉質(zhì)量丟失。在這種情況下，從臨床觀點(diǎn)看可以需要阻斷脂肪丟失，并且因而將使用對(duì)ZAG特異性的抗體施用，以便阻斷由ZAG引起的作用并且因此減少P -3AR的下游作用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，涉及治療脂肪營(yíng)養(yǎng)不良，其中脂肪質(zhì)量與受試者內(nèi)部的正常分布不成比例和其中脂肪質(zhì)量的丟失是所需。在這種情況下，將需要施用ZAG、^ -3AR激動(dòng)劑和P -AR拮抗劑中的一種或多種,原因類似于第一種情況。所有的方法可以進(jìn)一步包括將活性成分(或多個(gè))與藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合的步驟，所述載體構(gòu)成一種或多種輔助成分。就這一點(diǎn)而論，本發(fā)明還提供用于治療具有與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀的受試者的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物包括治療有效劑量的如上文討論的抗ZAG抗體或其功能性片段作為活性成分，連同藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑的稀釋劑。對(duì)配制適用于對(duì)受試者施用的組合物的藥學(xué)上可接受的載體是本領(lǐng)域熟知的，并且包括例如水溶液諸如水或生理緩沖鹽水或其它溶劑或媒介物諸如二醇類、甘油、油類諸如橄欖油或可注射用有機(jī)酯。藥學(xué)上可接受的載體可含有生理學(xué)上可接受的化合物，該化合物起到，例如穩(wěn)定或增加結(jié)合物的吸收的作用。這類生理學(xué)上可接受的化合物包括，例如碳水化合物，諸如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或谷胱甘肽；螯合劑；低分子量蛋白質(zhì)或其它穩(wěn)定劑或賦形劑。此外，這類生理可接受的化合物還可以為鹽形式(即，用反離子諸如Ca2+、Mg2+、Na+、NH4+等平衡)，前提是載體與所需的施用途徑(例如，靜脈內(nèi)、皮下、口服等)相容。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將知道包括生理學(xué)上可接受的化合物在內(nèi)的藥學(xué)上可接受的載體的選擇依賴，例如治療劑的物理化學(xué)特性和組合物施用途徑，施用途徑可以是，例如，口服或胃腸外地諸如靜脈內(nèi)地，和通過(guò)注射、插管或本領(lǐng)域已知的其它這樣的方法。藥物組合物還能含有第二(或更多)化合物(或多種)諸如診斷試劑、額外的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、毒素或治療劑，例如癌癥化療藥和/或維生素(或多種)。發(fā)明的制劑也可以包含一種或多種賦形劑?？梢栽谥苿┲邪乃帉W(xué)上可接受的賦形劑是緩沖劑諸如檸檬酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑和重碳酸鹽緩沖劑、氨基酸、服、醇類、抗壞血酸、憐脂；蛋白質(zhì)，諸如血清白蛋白、13父原蛋白和明股；鹽諸如EDTA或EGTA和氯化鈉；脂質(zhì)體；聚乙烯吡咯烷酮；糖諸如葡聚糖、甘露醇、山梨醇和甘油；丙二醇和聚乙二醇(例如，PEG-4000、PEG-6000);甘油；和甘氨酸或其他氨基酸。隨制劑使用的緩沖劑體系包括檸檬酸鹽、乙酸鹽、重碳酸鹽和磷酸鹽緩沖劑。

適于口服施用的本發(fā)明的制劑可作為不連續(xù)的單位諸如膠囊、扁囊劑、片劑或錠劑而存在，每個(gè)單位含有以粉末或顆粒形式的預(yù)定量的活性化合物；或作為水成液或非水成液中的活性化合物的懸浮液而存在，諸如頓服的糖漿、酏劑、乳劑。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑可以進(jìn)一步包含任何數(shù)目的已知促進(jìn)健康和/或重量減輕的額外成分。示例性的額外成分包括但不限于降血糖成分如碳水化合物源、蛋白質(zhì)源和膳食纖維源。這類降血糖成分已經(jīng)顯示抑制食欲并且引起每天熱量攝入量降低。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的重要大分子養(yǎng)分是碳水化合物，因?yàn)樗鼘?duì)飽滿感和后續(xù)體重減少具有最大影響。如本文所用，飽滿感指在一餐和下一餐之間的脹滿感并且滿足指在就餐過(guò)程期間形成并且有助于就餐終止的脹滿感。具有低血糖指數(shù)的食物激發(fā)較小的血糖和胰島素升高和較高的胰高血糖素濃度，這促進(jìn)飽滿感和比具有較高血糖指數(shù)的那些含碳水化合物的食物更好地防止增重，因?yàn)樗鼈儽染哂懈哐侵笖?shù)的碳水化合物耗費(fèi)更長(zhǎng)時(shí)間來(lái)消化和吸收?！把侵笖?shù)”是預(yù)測(cè)攝取含碳水化合物的食物后血糖隨后升高的系統(tǒng)(Anderson, J. S.等，Modern Nutrition in Health and Disease,第70章1259-86(1994)；ffolever, T. M. S.等，Am. J. Clin. Nutr.，54:846-54 (1991) ；ffolever, T. M. S.等，Diab.Care，12:126-32(1990))。血糖指數(shù)表征餐后碳水化合物吸收的速率。將它定義為在消費(fèi)來(lái)自試驗(yàn)食物的50g碳水化合物后2小時(shí)時(shí)間期間血糖反應(yīng)曲線下面積除以標(biāo)準(zhǔn)物的曲線下面積，所述標(biāo)準(zhǔn)物是白面包或葡萄糖。血糖指數(shù)碳水化合物在攝取食物后2小時(shí)時(shí)間內(nèi)具有最高峰值循環(huán)型葡萄糖。相反，低血糖指數(shù)碳水化合物引起較低的峰值葡萄糖和較小的曲線下面積。許多因素決定食物的血糖指數(shù)。這些包括碳水化合物類型、纖維、蛋白質(zhì)和脂肪含量和制備方法(過(guò)度烹調(diào)的食物激發(fā)較高的反應(yīng))。通常，高血糖指數(shù)碳水化合物是高度地精制的，并且與乳糖、蔗糖或果糖相比，具有相對(duì)高的葡萄糖或淀粉量。另外，它們?cè)诳扇苄岳w維方面低。包含纖維是重要的，原因在于纖維通過(guò)在胃中與食物一起形成凝膠促進(jìn)體重減少。這種膠凝作用降低胃排空速率并且降低消化速率，這促進(jìn)飽滿感。影響飽滿感的其他因素是碳水化合物的量、碳水化合物的復(fù)雜性和隨碳水化合物同時(shí)食入的其他食物(例如，纖維、蛋白質(zhì)、脂肪)(Ludwig, D. S.，J Nutr. , 130:280S-3S (2000)；ffolever, T. M. S 等，Am. J. Clin. Nutr.，54: 846-54 (1991) ；ffolever, T. M. S 等，Diab.Care，12:126-32(1990))。面包和馬鈴薯比菜豆更升高血糖。與碳水化合物同時(shí)攝取的不含或無(wú)可消化碳水化合物的其他食物(例如，脂肪、纖維和蛋白質(zhì))減少餐后血糖和胰島素水平(ffolever, T. M. S.等，Am. J. Clin. Nutr.，54:846-54(1991))。低血糖指數(shù)碳水化合物源可以由單種碳水化合物或組合提供。碳水化合物源可以進(jìn)一步由纖維源提供并且可以是天然甜味劑、果糖、大麥、魔芋甘露聚糖、歐車前(psyllium)及其組合。蛋白質(zhì)源具有高生物學(xué)價(jià)值并且選自以下的至少一種乳清蛋濃縮物、酪蛋白、大豆、牛奶、蛋和這些的組合。額外地，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑可以含有微量營(yíng)養(yǎng)素、維生素、礦物質(zhì)、膳食補(bǔ)充劑(例如，草藥)、養(yǎng)分、乳化劑、調(diào)味劑和可食用化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑還可以包括用于營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑增甜的碳水化合物。用于營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑增甜的示例性碳水化合物包括但不限于果糖、蒸發(fā)的甘蔗汁、菊糖、龍舌蘭蜜(agave)、蜂蜜、槭糖漿、糙米糖漿、麥芽糖漿、椰棗糖、果汁濃縮物和混合的果汁濃縮物。可以適用于本發(fā)明中的膳食纖維包括但不限于纖維素、種子、半纖維素(例如，麩糠、全谷物)、多聚果糖(例如，菊糖和寡果聚糖)、多糖膠(例如，落葉松膠、阿拉伯半乳聚糖)、燕麥片、大麥、果膠、木質(zhì)素、抗酶解淀粉。合適的纖維源的實(shí)例包括但不限于麥麩、纖維素、燕麥麩、玉米麩、瓜爾豆、果膠和歐車前。蛋白質(zhì)源可以是營(yíng)養(yǎng)制劑中使用的任何適合的蛋白質(zhì)并且可以包括乳清蛋、乳清蛋白濃縮物、乳清粉、蛋、大豆蛋白、大豆蛋白分離物、酪蛋白酸鹽(例如，酪蛋白酸鈉、酪蛋白酸鈉鈣、酪蛋白酸鈣和酪蛋白酸鉀)、動(dòng)物和植物蛋白及其混合物。當(dāng)選擇蛋白質(zhì)源時(shí)，應(yīng)當(dāng)首先蛋白質(zhì)的生物學(xué)價(jià)值，其中最高的生物學(xué)價(jià)值存在于酪蛋白酸鹽、乳清、乳白蛋白、大豆、脫乳糖乳固形物、卵白蛋白和全卵蛋白。這些蛋白質(zhì)具有高生物學(xué)價(jià)值，即它們具有高比例的必需氨基酸。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑也可 以含有其他成分，如其他維生素、礦物質(zhì)、抗氧化劑、纖維(例如，銀杏(ginkgo biloba)、人參(ginseng))和其他營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑之一或組合。選擇這些成分中的一種或幾種是制劑設(shè)計(jì)、顧客和終端用戶偏好的問(wèn)題。添加至本發(fā)明營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的這些成分的量是技術(shù)人員輕易已知，并且可以由兒童和成人的RDA和DRI (膳食參考攝入量)量提供這類量的指導(dǎo)?？梢蕴砑拥木S生素和礦物質(zhì)包括但不限于磷酸或乙酸三鈣；磷酸二鉀；硫酸鎂或氧化鎂；鹽(氯化鈉)；氯化鉀或乙酸鉀；抗壞血酸；正磷酸鐵；煙酰胺；硫酸鋅或氧化鋅；泛酸鈣；葡糖酸銅；核黃素；P -胡蘿卜素；鹽酸吡多醇；單硝酸硫胺素；葉酸；生物素；氯化鉻或吡啶甲酸鉻；碘化鉀；硒；硒酸鈉；鑰酸鈉；葉綠醌；維生素D3 ;氰鈷胺；亞硒酸鈉；硫酸銅；維生素A ;維生素E ;維生素B6及其鹽酸鹽；維生素C ;肌醇；維生素B12 ;碘化鉀。其他成分的每單位份的量是設(shè)計(jì)問(wèn)題并且將取決于每天對(duì)患者施用的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的每單位份的總數(shù)。其他成分的總量還將部分地取決于患者的狀況。其他成分的量將優(yōu)選地是RDA或DRI的部分或倍數(shù)。例如，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑每單位劑量將包含50%RDI (參考每天攝入量)的維生素和礦物質(zhì)，并且患者每天將消費(fèi)兩個(gè)單位。可以將香料、著色劑、香辛料、堅(jiān)果等摻入產(chǎn)品中。調(diào)味劑形式可以為調(diào)香(flavored)提取物、揮發(fā)油、巧克力調(diào)味劑(例如，無(wú)咖啡因的可可或巧克力或巧克力代用品，如角豆)、花生醬調(diào)味劑、餅干屑、鍋巴、香草蘭或任何市售調(diào)味劑?？梢杂没旌系纳颖Ｗo(hù)調(diào)味劑。有用的調(diào)味劑的實(shí)例包括但不限于純八角提取物、仿香蕉提取物、仿櫻桃提取物、巧克力提取物、純的檸檬提取物、純的橙提取物、純薄荷提取物、仿菠蘿提取物、仿朗姆(rum)提取物、仿草莓提取物或純香草蘭提取物；或揮發(fā)油，如蜜蜂花油、月桂油、香檸檬油、柏木油、櫻桃油、胡桃油、桂皮油、丁香油或薄荷油；花生醬、巧克力調(diào)味劑、香草蘭餅干屑、牛油糖(butterscotch)或太妃糖。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑含有衆(zhòng)果或其他水果香料。如果作為棒施用，則食品組合物還可以例如用酸奶涂層涂覆。為了成品的穩(wěn)定性，可以添加乳化劑。合適的乳化劑的實(shí)例包括但不限于卵磷脂(例如，來(lái)自蛋或大豆)和/或單甘油酯和二甘油酯。其他乳化劑是技術(shù)人員輕易顯而易見(jiàn)的，并且選擇合適的乳化劑將部分地取決于制劑和成品。也可以將防腐劑添加至營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑以延長(zhǎng)產(chǎn)品貨架期。優(yōu)選地，使用防腐劑如山梨酸鉀、山梨酸鈉、苯甲酸鉀、苯甲酸鈉或EDTA 二鈉鈣。除上文描述的碳水化合物之外，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑可以含有人工甜味劑，例如，糖、甜蜜素、阿司帕坦(aspartamine)、阿斯巴甜、乙?；前匪徕浐?或山梨醇。如果營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑意圖針對(duì)超重或肥胖個(gè)體或易患高血糖的II型糖尿病個(gè)體，則這類人工甜味劑可以是合乎需要的。本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑可以使用任何藥學(xué)上可接受形式的上文討論的維生素、礦物質(zhì)和其他養(yǎng)分(包括它們的鹽)配制?？梢詫⑺鼈兣渲瞥赡z囊劑、片劑、粉劑、混懸劑、凝膠劑或液體劑，其任選地包含生理可接受的載體，如但不限于水、乳、果汁、蘇打、淀粉、植物油、鹽溶液、羥甲基纖維素、碳水化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以將營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑配制為粉末，例如，用于與可消耗液體(如 乳、果汁、蘇打、水)或用于混入其他營(yíng)養(yǎng)性液體或食物的可消耗凝膠劑或糖漿劑混合。粉末形式具有特定的顧客吸引力，易于施用和并入顧客的每天食譜(regimen)，因此增加患者依從性的機(jī)會(huì)。本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑可以用其他食物或液體配制以提供預(yù)計(jì)量的補(bǔ)充性食物，例如單客早餐棒、能量棒、面包、餅干、巧克力蛋糕、薄脆餅、谷物食品、蛋糕或飲料。因此，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充制劑可以作為膳食補(bǔ)充劑或作為可消耗載體如食料的添加劑施用。可以將組合物摻入稍后烹煮或焙烘的食料中。組合物的組分是結(jié)構(gòu)上穩(wěn)定的，以保持非氧化，并且在焙烘或烹煮所要求的溫度是熱穩(wěn)定的。為制造這種飲料，將成分干燥并且使之輕易地可溶于水或如上文所述的其他可消耗液體中。飲料是優(yōu)選的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑形式，原因在于如果在就餐之前至少一個(gè)半小時(shí)消費(fèi)，其有助于飽滿感的能力。為制造這種食物棒，將干成分隨液體成分一起添加于混合器中并且混合直至達(dá)到面團(tuán)階段；將面團(tuán)置于擠出機(jī)中并擠出；將擠出的面團(tuán)切成適宜的長(zhǎng)度；并且將產(chǎn)品冷卻。為制造其他食品或飲料，可以將包含本發(fā)明營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的成分添加至常規(guī)制劑或它們可以用來(lái)替換常規(guī)成分。出于考慮本發(fā)明的目的，食品配制領(lǐng)域的技術(shù)人員將能夠設(shè)計(jì)適宜的食品/飲料。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑可以按多種形式制成，如布丁、糖食(即，糖果)、營(yíng)養(yǎng)性飲料、冰淇淋、冷凍的糖食和新奇食品或焙烘或非焙烘、膨化食品如棒。在一個(gè)實(shí)施方案中，營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑處于飲料用粉末或非焙烘膨化營(yíng)養(yǎng)棒的形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，可消耗載體是肉產(chǎn)品，如天然或培養(yǎng)肉。體外肉，也稱作培養(yǎng)肉，是從未成為完整的活動(dòng)物的一部分的動(dòng)物肉。形成體外肉的方法包括取得肌肉細(xì)胞和施加幫助細(xì)胞生長(zhǎng)成大部分肉的蛋白質(zhì)。一旦已經(jīng)獲得初始細(xì)胞，將不需要額外的動(dòng)物-類似于酸奶培養(yǎng)物的產(chǎn)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，產(chǎn)生體外肉疏松的肌肉細(xì)胞和結(jié)構(gòu)化的肌肉，后者比前者富有更大的挑戰(zhàn)性。肌肉由肌肉纖維(具有多核的修長(zhǎng)細(xì)胞)組成。這類細(xì)胞不通過(guò)自身增殖，而是在前體細(xì)胞融合時(shí)形成。前體細(xì)胞可以是胚胎干細(xì)胞或衛(wèi)星細(xì)胞(肌肉組織中的特化干細(xì)胞)。理論上，在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)它們并且隨后使其融合是相對(duì)地簡(jiǎn)單的。然而，為長(zhǎng)出真實(shí)肌肉，細(xì)胞應(yīng)當(dāng)“現(xiàn)場(chǎng)”生長(zhǎng)，這需要灌注系統(tǒng)，其類似于靠近正在生長(zhǎng)的細(xì)胞輸送養(yǎng)分和氧以及移去廢物的血液供應(yīng)。此外，其他細(xì)胞類型(如脂肪細(xì)胞)需要培育，并且化學(xué)信使應(yīng)當(dāng)提供向正在生長(zhǎng)的組織關(guān)于結(jié)構(gòu)的提示。最后，肌肉組織需要物理地拉伸或“鍛煉以恰當(dāng)?shù)匕l(fā)育(見(jiàn)，例如，美國(guó)專利號(hào)6，835，390和公布的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朩099/31222，二者均通過(guò)引用方式并入本文)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括經(jīng)工程化以按足夠的量表達(dá)ZAG的培養(yǎng)肉，從而不需要添加重組ZAG。成分可以按單一制劑形式施用或它們可以是分別施用。例如，可以合乎需要的是將味道較苦的成分以掩蔽其味道的形式(例如，膠囊劑或丸劑形式)施用而非將其并入營(yíng)養(yǎng)組合物本身(例如，粉末或棒)。因此，本發(fā)明也提供了包含一個(gè)或多個(gè)容器藥學(xué)的包裝或試劑盒，所述容器填充有本發(fā)明營(yíng)養(yǎng)組合物的一種或多種成分。任選地，由管理藥物產(chǎn)品或膳食補(bǔ)充劑產(chǎn)品制造、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的公告可以與這類容器結(jié)合，所述公告反映該機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)制造、使用銷售物用于人類施用。包裝或試劑盒可以標(biāo)明關(guān)于施用模式、施用順序(例如，單獨(dú)、依次或同時(shí))等的信息。包裝或試劑盒也可以包括用于提醒患者服用治療劑的手段。包裝或試劑盒可以是聯(lián)合療法的單個(gè)單位劑量或它可以是多個(gè)單位劑量。具體而言，在制劑或片劑中時(shí)，藥劑可以是分離的，以任何組合混合在一起。優(yōu)選在泡罩包裝中組裝的藥劑或其他分配手段。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含約1. 0mg至1000mg ZAG0在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含約1. Omg至約500mg ZAG。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含約1. Omg至約IOOmg ZAG。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含約1. 0mg至約50mg ZAG。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含約1.Omg至約IOmg ZAG。在另一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含約5. Omg ZAG。因此，在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供如本文所定義的抗ZAG抗體或其功能性片段在制備藥物中的用途，所述藥物在人類醫(yī)學(xué)中用于治療與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀和/或病況或與肌肉消耗病癥相關(guān)的疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，口服施用本發(fā)明的制劑。在這類實(shí)施方案中，制劑是與任何其他施用途徑至少70、75、80、85、90、95或100%同樣有效的。在實(shí)踐本發(fā)明的方法中將要施用的制劑的總量能作為單一劑量或作為大丸劑或在相對(duì)短的時(shí)期里通過(guò)攝取而施用受試者，或能使用分次治療方案施用，其中在延長(zhǎng)的時(shí)期里施用多劑量(例如，每天一次、每天兩次等)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將知道制劑的量取決于許多因素，包括受試者的年齡和一般健康以及施用途徑和將要施用的治療的數(shù)目?？紤]到這些因素，必要時(shí)熟練的技術(shù)人員將調(diào)整特定的劑量。一般而言，使用I期和II期臨床試驗(yàn)最初確定藥物組合物的制劑和施用途徑和頻率。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括間隔的治療方案。觀察到在ob/ob小鼠中長(zhǎng)期每天施用ZAG導(dǎo)致連續(xù)的體重減輕。就這一點(diǎn)而論，在一個(gè)實(shí)施方案中，每隔一日施用單獨(dú)與一種或多種P -拮抗劑或P 3-AR激動(dòng)劑組合的ZAG或抗ZAG抗體治療。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每?jī)商焓┯弥委?。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每三天施用治療。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每四天施用治療。提供以下實(shí)施例以進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)，但是這些實(shí)施例不意在限制本發(fā)明的范圍。盡管這些實(shí)施例是可能使用的那些常見(jiàn)實(shí)施例，可以備選地使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他方法、方法學(xué)或技術(shù)。實(shí)施例1 鋅-Ct2-糖蛋白減弱高血糖為了評(píng)價(jià)鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)減弱肥胖和高血糖的能力，給ob/ob小鼠施用誘導(dǎo)體重減輕和體溫升高一提示增加的能力消耗-的ZAG。棕色脂肪組織中解偶聯(lián)蛋白-1和-3的表達(dá)增加，盡管甘油增加，而葡萄糖、甘油三酯和非酯化脂肪酸的血清水平降低，指示增加的脂解作用。存在血漿胰島素降低、對(duì)靜脈內(nèi)葡萄糖的改善的反應(yīng)加上增加的葡萄糖攝取進(jìn)脂肪細(xì)胞和骨骼肌。附睪脂肪細(xì)胞中激素敏感性脂肪酶的表達(dá)增加。存在骨骼肌質(zhì)量的增加，這是由于蛋白質(zhì)合成的增加和降解的減少。這提示ZAG在高血糖的治療中可以是有效的。Dulbeccos，Modified Eagle，s (DMEM)和 Freestyle 培養(yǎng)基購(gòu)自Invitrogen (Paisley, UK),而胎牛血清購(gòu)自 Biosera (Sussex, UK)。2-[1-14C]脫氧 _D_ 葡萄糖(sp. act.1. 85GBq mmol :)和 L-[2, 6」H]苯丙氛酸(sp. act. 37Bq mmol 0 來(lái)自 AmericanRadiolabeled Chemicals (Cardiff, UK)。對(duì)磷酸(Thr-202)和總 ERK1、總 p38MAPK、磷酸HSL(Ser-552)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)、脂肪甘油三酯脂肪酶、激素敏感性脂肪酶、和磷酸PLA2(Ser-505)和對(duì)人ATGL的兔多克隆抗體購(gòu)自Abeam (Cambridge，UK)。對(duì)全長(zhǎng)人ZAG的小鼠單克隆抗體來(lái)自Santa Cruz (California, USA),對(duì)肌球蛋白重鏈II型的小鼠單克隆抗體來(lái)自 Novacastra (via Leica Biosystems, Newcastle, UK)。對(duì) 20S 蛋白酶體 a-亞基和p42 的小鼠單克隆抗體來(lái)自 Aff initi Research Products (Exeter, UK)。對(duì)憐酸(Thr-180/Tyr-182)p38MAPK的小鼠單克隆抗體和對(duì)總和磷酸(Thr-451) PKR、磷酸(Ser-162)eIF2 a 和對(duì)總 eIF2a 的兔多克隆抗血清來(lái)自 New England Biosciences (Herts, UK)。對(duì)UCPl、UCP3和總PKR的多克隆兔抗體和PH0SPH0SAFE 提取試劑來(lái)自Calbiochem(viaMerk Chemicals, Nottingham, UK)。過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗兔和兔抗小鼠抗體購(gòu)自Dako (Cambridge, UK)。對(duì)小鼠P _肌動(dòng)蛋白的多克隆兔抗體和甘油三酯測(cè)定試劑盒購(gòu)自Sigma Aldrich (Dorset, UK) Hybond A硝酸纖維素膜和增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光(ECL)顯影試劑盒來(lái)自 Amersham Pharmacia Biotech (Bucks, UK)。針對(duì)NEFA 的 WAKO 比色測(cè)定試劑盒購(gòu)自 AlphaLaboratories (Hampshire, UK),小鼠膜島素 ELISA 試劑盒購(gòu)自 DRG (Marburg, Germany)。使用Boots (Nottingham, UK)血衆(zhòng)葡萄糖試劑盒進(jìn)行葡萄糖測(cè)量。重組ZAG的產(chǎn)生-將HEK293F細(xì)胞用表達(dá)載體pcDNA3.1中的全長(zhǎng)人ZAG cDNA轉(zhuǎn)染并且在37° C于空氣中5%C02的氣氛下于FreeStyle培養(yǎng)基中維持。ZAG被分泌到培養(yǎng)基中，將其收集，并且在14天培養(yǎng)之后獲得最高蛋白質(zhì)水平(leygmr1)。為了純化ZAG，使用具有IOkDa截?cái)嗟腁micon Ultra-15離心濾器，將培養(yǎng)基(200ml)以700g離心15min以去除細(xì)胞，并且濃縮到Iml體積的無(wú)菌PBS。將濃縮物(約2mg蛋白質(zhì))加入到懸浮于20mlIOmM Tris, pH8. 8中的2g DEAE纖維素中，并于4° C攪拌2h。DEAE纖維素結(jié)合ZAG并通過(guò)離心(1500g持續(xù)15min)沉淀，ZAG通過(guò)與含有0. 3M NaCl的20mlIOmM Tris，pH8. 8于4° C攪拌30min而洗脫。洗滌洗脫液并使用Amicon離心濾器將其在無(wú)菌PBS中濃縮到體積1ml。如用LAL Pyrogent單個(gè)測(cè)試試劑盒(Lonza, Bucks, UK)所測(cè)定,純化的ZAG無(wú)內(nèi)毒素。細(xì)胞培養(yǎng)和ZAG的純化。通過(guò)在含有1. Smgmr1膠原酶和4%牛血清白蛋白的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液中在如先前所描述的95%氧5%C02的氣氛下于37° C溫育2h而從切碎的脂肪沉積中制備白色脂肪細(xì)胞的單細(xì)胞懸液。為了時(shí)程研究，將脂肪細(xì)胞以IO5個(gè)細(xì)胞mr1的濃度懸浮在含有10%胎牛血清的DMEM中，并且于37° C保持在空氣中10%C02的氣氛下。將用含有人ZAG的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的人293細(xì)胞以IO5個(gè)細(xì)胞mr1的濃度接種到FreeStyle培養(yǎng)基中并且在37° C于空氣在5%C02的氣氛下維持。14天的培養(yǎng)之后獲得最高蛋白質(zhì)水平(Wiigmr1)。隨后使用具有IOkDa截?cái)嗟腁micon Ultra-15離心濾器,將培養(yǎng)基(200ml)以700g離心15min以去除細(xì)胞，并且濃縮到Iml體積的無(wú)菌PBS。測(cè)量樣品(約2mg)的蛋白質(zhì)濃度之后，將其加入到懸浮于20ml的IOmM Tris, pH8. 8的2g DEAE纖維素中，于4° C攪拌2h。帶有負(fù)電荷的ZAG結(jié)合到DEAE纖維素，將其通過(guò)離心(1500g持續(xù)15min)沉淀，并通過(guò)與含有0. 3M NaCl的20mlIOmM Tris, pH8. 8于4° C攪拌30min而洗脫。洗滌洗脫液并使用Amicon離心濾器將其在無(wú)菌PBS中濃縮到Iml的體積。動(dòng)物-小鼠。在本研究中使用來(lái)自在阿斯頓大學(xué)(Aston University)保持的群體的純合的肥胖(ob/ob)小鼠。先前已描述了 Aston ob/ob小鼠的出身和特性。將雄性小鼠(20-21周齡，重量90-100g)分組成每籠三只，處于22±2° C有空調(diào)的房間，具有12h_光照12h_黑暗循環(huán),并且飼喂大鼠和小鼠繁育飲食(Special Diet Services, ffitham, UK)和隨意飲用自來(lái)水。通過(guò)1.v.施用動(dòng)物PBS(100 yl)中的2八6(351^)，13.(1.，并且每天監(jiān)測(cè)體重、食物和水?dāng)z入量。對(duì)照小鼠只接受PBS。通過(guò)使用直腸溫度計(jì)(RS Components,Northants, UK)每天測(cè)量體溫。所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都依據(jù)U. K. Animals (ScientificProcedures) Actl986進(jìn)行。施用ZAG之后未觀察到不良作用。動(dòng)物-大鼠。將重540±82. 5g、 成熟的雄性Wistar大鼠(一歲大,來(lái)自我們自己的群體)單個(gè)居住并用PBS (100 yl)中的ZAG (50 u g/100g體重)或用PBS (100 U I)作為對(duì)照每天1.v處理一次。每天測(cè)量食物和水的攝入和體重。讓動(dòng)物自由飲食(Special DietServices, Essex, UK)和隨意飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在British Home Off ice強(qiáng)加的福利條件下進(jìn)行。10天處理之后，終止動(dòng)物并測(cè)定身體組成。將動(dòng)物加熱到80-90° C持續(xù)7天直到達(dá)到恒定的重量。然后根據(jù)濕重和干重的差異測(cè)定含水量。如Lundholm等(14)所描述的，使用氯仿甲醇(1:1)、乙醇/丙酮(1:1)和二乙醚(每次120ml)的順序從干的動(dòng)物尸體提取脂類。將溶劑蒸發(fā)并且將脂肪稱重。將無(wú)脂肪的尸體質(zhì)量計(jì)算為尸體的最初重量與水和脂肪的重量之間的差異。脂肪分解測(cè)定。將待測(cè)定樣品與IO5至2X105個(gè)脂肪細(xì)胞在Iml pH7. 2的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液中溫育2h。用Wieland的方法(Wieland, 0. GlycerolUV method.弓I 自 Methods of Enzymatic Analysis(Bergmeyer, H. U.編著)(AcademicPress, London, UK,第1404-1409，1974年))酶法測(cè)定釋放的甘油的濃度。分析只含有脂肪細(xì)胞的對(duì)照樣品以測(cè)定自然的甘油釋放。將活性表示為U mol釋放的甘油/IO5個(gè)脂肪細(xì)胞/2h。血清代謝物測(cè)定。使用Wako-ASC-ACOD 試劑盒(Wako Chemical GmbH, Neuss,Germany)測(cè)定非酯化的脂肪酸(NEFA)。使用甘油三酯試劑盒(Sigma ChemicalCo. , Poole, United Kingdom)測(cè)定甘油三酯，并且通過(guò)定量酶測(cè)定試劑盒(Sigma)測(cè)定3-輕基丁酸鹽。使用葡萄糖分析儀(Beckman, Irvine, Calif.)測(cè)量葡萄糖,并且使用如Academic Press, London (1974)出版的“Methods of Enzymatic Analysis，，(Bergmeyer, H.U.編著)第3卷，第1404-1409頁(yè)中描述的Wieland方法，以酶方式測(cè)定甘油。小鼠脂肪細(xì)胞質(zhì)膜的分離。在典型的操作中，除了在250mM蔗糖、2mM乙二醇雙(3 -氨基乙醚)-N，N，N’，N’ (EGTA)UOmM Tris-HCl (pH7. 4)中洗滌細(xì)胞之外，如上文所參考，從小鼠附睪脂肪墊分離白色脂肪細(xì)胞。將脂肪細(xì)胞再懸浮在20ml上述緩沖液中并通過(guò)用Swinny濾器抽吸至少10次而勻化。然后將細(xì)胞勻漿以300g離心5min，從表面去除脂肪餅并將剩余的沉淀物和下層漂浮物轉(zhuǎn)移至干凈的管中。將它們?cè)?° C以30，OOOg離心lh，并且將形成的膜 沉淀物再懸浮于蔗糖緩沖液(200至400 yl)中。將質(zhì)膜在PERC0LL 膠態(tài)二氧化硅顆粒的自形成梯度上與其它的細(xì)胞器膜分離。組分是250mM蔗糖、2mMEGTA、IOmM Tris-HCl, pH7. 4 ；PERC0LL ;和 2M 蔗糖、8mMEGTA、80mM Tris-HCl, pH7. 4，與膜懸液以32:7:1的比混合在一起(總體積8ml)。將該混合物于4° C以10，OOOg離心30min。將梯度分成0. 75ml的部分，測(cè)定每部分琥珀酸脫氫酶、NADH-細(xì)胞色素c還原酶、乳酸脫氫酶和5'-核苷酸酶的存在以定位質(zhì)膜部分。將膜部分再懸浮于150mM NaClUmM EGTAUOmMTris-HCl, pH7. 4中并于4° C以10，OOOg離心2min。將該過(guò)程重復(fù)兩次。然后將洗過(guò)的質(zhì)膜在IOmM Tris-HCl，pH7. 4、250mM蔗糖、2mM EGTA和4 y M苯甲基磺酰氟(PMSF)中以l-2mg/ml稀釋，在液氮中速凍并儲(chǔ)存在-70° C直到使用。大鼠脂肪細(xì)胞中的脂肪分解活性-如(Beck SA等，Production of lipolyticand proteolytic factors by a murine tumor-producing cachexia in the host. CancerRes47 :5919-5923, 1987)所描述，使用膠原酶消化從雄性Wistar大鼠(400g)精細(xì)切碎的附睪脂肪組織制備白色脂肪細(xì)胞。通過(guò)在Iml pH7. 2的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液中溫育105-2 X IO5脂肪細(xì)胞2h測(cè)定脂肪分解活性，通過(guò)測(cè)量釋放的甘油來(lái)測(cè)定脂解作用的程度(Wieland, 0. Glycerol UV method.弓I 自 Methods of Enzymatic Analysis(Bergmeyer, HU編著)(Academic Press, London, UK,第1404-1409頁(yè)，1974))。通過(guò)單獨(dú)溫育脂肪細(xì)胞測(cè)量自然的甘油釋放。將脂肪分解活性表示為U mol釋放的甘油/IO5脂肪細(xì)胞/2h。凝膠電泳。根據(jù)Laemml i的方法制備凝膠，該凝膠通常由5%濃縮膠和15%SDS_PAGE分離膠(變性或還原條件)或10%SDS-PAGE分離膠(非變性或非還原條件)組成。將樣品以1-5 u g/泳道加樣。通過(guò)用考馬斯亮藍(lán)R-250或銀染色使帶可視化。通過(guò)在0. 0625MTris-HCl,pH6. 8、10%甘油、1%SDS、0. 01%溴酚藍(lán)和5%2_巰基乙醇中于100° C加熱5min制備用于還原條件的樣品。葡萄糖攝取進(jìn)脂肪細(xì)胞。將分離的脂肪細(xì)胞(5xl04)在Iml pH7. 2的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液(KRBS)中洗滌兩次，并進(jìn)一步在含有18. 5MBq2_[1-14C]脫氧-D-葡萄糖和非放射的2-脫氧-D-葡萄糖的0. 5ml KRBS中在室溫溫育IOmin至0.1mM的終濃度。通過(guò)加入Iml冰冷的無(wú)葡萄糖的KRBS終止攝取，將細(xì)胞用Iml KRBS洗三次，通過(guò)加入0. 5mllM NaOH而裂解，在用液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定放射性之前將其放置于室溫至少lh。葡萄糖攝取進(jìn)腓腸肌-將腓腸肌在Krebs-Henseleit碳酸氫鹽緩沖液中于37° C溫育45min，然后在含有185M Bq2_[1-14C]脫氧-D-葡萄糖和非放射的2-脫氧-D-葡萄糖的5ml Krebs-Henseleit緩沖液中再溫育IOmin至0.1mM的終濃度。然后將肌肉取出并在0. 9%NaCl中洗5min，之后在0. 5mllM NaOH中溶解并用液體閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定放射性。葡萄糖攝取進(jìn)比目魚肌。將比目魚肌在Krebs-Henseleit碳酸氫鹽緩沖液中于37° C溫育45min，然后在含有185M Bq2_[1-14C]脫氧-D-葡萄糖和非放射的2-脫氧-D-葡萄糖的5ml Krebs-Henseleit緩沖液中再溫育IOmin至0.1mM的終濃度。然后將肌肉取出并在0. 9%NaCl中洗5min，之后在0. 5mllM NaOH中溶解并用液體閃爍計(jì)數(shù)法測(cè)定放射性。肌肉中蛋白質(zhì)合成和降解。先前已描述了測(cè)定肌肉中蛋白質(zhì)合成和降角軍的 方法(Smith, K. L.和 Tisdale, M. J.1ncreased protein degradation anddecreased protein synthesis in skeletal muscle during cancer cachexia.Br. J. Cancer67, 680-685 (1993))。使用結(jié)扎線切除腓腸肌并將其在缺少酚紅的RPMI1640培養(yǎng)基中于37° C溫育30min，并用02: CO2 (19:1)飽和，并且然后用PBS洗滌。用此時(shí)間通過(guò)將L-[2，6_3H]苯丙氨酸^40MBq)摻入酸不溶性物質(zhì)中測(cè)量蛋白質(zhì)合成，在所述時(shí)間中將肌肉在沒(méi)有酚紅的RPMI/640培養(yǎng)基中于37° C溫育并且用02: CO2 (19:1)飽和。將肌肉然后在非放射性培養(yǎng)基中漂洗、吸干并且在2%高氯酸中均化。通過(guò)用酸溶解的放射性的量除以蛋白質(zhì)結(jié)合的放射性的量來(lái)計(jì)算蛋白質(zhì)合成速度。蛋白質(zhì)降解通過(guò)2h時(shí)間內(nèi)在3mlpH7. 4、含有5mM葡萄糖和0. 5mM放線酮的氧合Krebs-Henseleit緩沖液中從腓腸肌釋放酪氨酸而測(cè)定。蛋白酶體和半胱天冬酶活性的測(cè)量。如先前針對(duì)肌管所描述，通過(guò)測(cè)量7-酰氨基-4-甲基香豆素(AMC)在360nm的激發(fā)波長(zhǎng)和460nm的發(fā)射波長(zhǎng)從突光底物N-琥珀酰Lys Lys Val Tyr. AMC(SEQ ID NO: 2)的釋放而經(jīng)熒光測(cè)量方法測(cè)定蛋白酶體的‘糜蛋白酶樣’活性(Whitehouse, A. S.和Tisdale, M. J。泛素-蛋白酶體途徑在鼠肌管中通過(guò)蛋白水解誘導(dǎo)因子(PIF)表達(dá)的增加與轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的活化有關(guān)。Br. J. Cancer89, 1116-1122 (2003 ))。將腓腸肌在 20mM Tris, pH7. 5，2mMATP、5mM MgCl2 和50mM DTT于4° C勻化、超聲處理并于4° C以18，OOOg離心IOmin以沉淀不溶解的物質(zhì)，將所得的上清液用于在存在或缺少蛋白酶體抑制劑乳胞素(IOuM)時(shí)測(cè)量‘糜蛋白酶樣’酶活性。只有乳胞素可抑制的活性被認(rèn)為是真正的蛋白酶體活性。存在或缺少半胱天冬酶-3 (AcAspGluValAsp-CHO) (SEQ ID NO: 5)或半胱天冬酶 _8 (lie Glu Phe Thr Asp-CHO)(SEQ ID NO:6)抑制劑(IOOuM)的情況下，使用來(lái)自上面的上清液(50y g蛋白質(zhì))和半胱天冬酶-3或半胱天冬酶-8底物(IOiiM)于37° C持續(xù)lh，通過(guò)AMC從AcAsp. Gly. Val.Asp. AMC(SEQ ID NO: 3)的釋放測(cè)定半胱天冬酶_3的活性，通過(guò)7-氨基-4-三氟甲基香豆素(AFC)從特異性底物Z-1le Glu Phe Thr Asp-AFC(SEQ ID NO:4)的釋放測(cè)定半胱天冬酶-8的活性。如上測(cè)定由于AFC的熒光的增加,而用400nm的激發(fā)波長(zhǎng)和505nm的發(fā)射波長(zhǎng)測(cè)量由于AFC的熒光的增加。缺少或存在半胱天冬酶抑制劑時(shí)值的差異是活性的量度。蛋白質(zhì)印跡分析。將新切除的腓腸肌在PBS中洗滌并在PH0SPH0SAFE 提取劑中于室溫裂解5min，之后于4° C聲處理。通過(guò)在4° C以18，OOOg離心5min使裂解液澄清，并且將胞質(zhì)蛋白(5ug)的樣品在12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳上于180V解析大約lh。之后是轉(zhuǎn)移至0. 45 y M硝酸纖維素膜，后者然后用pH7. 5,Tris-緩沖鹽水中的5%Marvel于4° C封閉過(guò)夜。第一抗體和第二抗體均以1:1000的稀釋度使用，除了抗肌球蛋白(1:250)之外。在室溫溫育lh，并且通過(guò)ECL顯影。用密度計(jì)掃描印跡以定量差別。將從用ZAG或PBS處理5天的大鼠上切除的附睪WAT、BAT和腓腸肌的樣品在0. 25M蔗糖、ImM HEPES, pH7. 0和0. 2M EDTA中勻化，并且然后以4，500rpm離心lOmin。將胞質(zhì)蛋白(IOug)的樣品在12%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳上解析，然后將其轉(zhuǎn)移至0. 45 U M硝酸纖維素膜，將該膜用pH7. 5,Tris-緩沖鹽水中的5%Marvel于4° C封閉過(guò)夜，以后的四個(gè)15min用PBS中0. l%Tween洗滌，與第二抗體在室溫溫育lh。通過(guò)ECL顯影。統(tǒng)計(jì)分析。將結(jié)果顯`示為至少三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的均數(shù)值土SEM。通過(guò)單向方差分析(ANOVA),隨后通過(guò)Tukey-Kramer多重比較檢驗(yàn)確定組間均數(shù)的差異。小于0. 05的P值認(rèn)為是顯著的。結(jié)果-小鼠。ZAG的純化導(dǎo)致大于95%純的產(chǎn)物(圖1A)，通過(guò)免疫印跡法證實(shí)為ZAG (圖1B)。ZAG在附睪脂肪細(xì)胞中刺激脂解作用(圖1D)但是在來(lái)自皮下和內(nèi)臟沉積物的脂肪細(xì)胞中脂肪分解作用降低很多，盡管它超過(guò)基礎(chǔ)水平顯著地升高(圖1E)。任何脂肪細(xì)胞組中，在異丙腎上腺素和ZAG之間，沒(méi)有顯著的脂解作用刺激程度差異，盡管在摩爾基礎(chǔ)上ZAG較異丙腎上腺素更有效地誘導(dǎo)脂解作用。在IF圖中顯示ZAG對(duì)5天時(shí)間范圍內(nèi)ob/ob小鼠體重的影響。雖然對(duì)照動(dòng)物保持重量穩(wěn)定，但是用ZAG處理的動(dòng)物顯示漸進(jìn)性體重減輕，從而在5天之后，組之間存在3. 5g重量差異，盡管實(shí)驗(yàn)過(guò)程中食物(PBS32±3.1g;ZAG30±2.5g)和水(PBS140±8. 2ml ;ZAG135±3. 2ml)攝入相等。ZAG 施用 4 天之后有0. 4° C的顯著體溫上升(圖1G)，表示基礎(chǔ)代謝率的增加。血漿代謝水平的測(cè)量提示ZAG處理的動(dòng)物中代謝底物利用增加(表I)。因此在ZAG處理的動(dòng)物中血漿葡萄糖、甘油三酯(TG)和非酯化脂肪酸(NEFA)顯著降低，盡管存在表示增加的脂解作用的增加的甘油濃度。存在血漿胰島素水平36%的降低，提示ZAG在減少糖尿病狀態(tài)方面是有效的。圖1C中顯示各種組織中的ZAGmRNA水平。表1-用ZAG處理120h的ob/ob小鼠中的血漿代謝物和胰島素水平PBSZAG
葡萄糖(mmol/L)24.5 + 0.420.3 + 0.8 P<0.01
TG (mmol/L)1.2 + 0.30.9 + 0.1 p<0.05
甘油(_ol/L)359 + 23429 + 36 p<0.001
ft 島素(ng/mL)41.2 + 0.626.3 + 0.52 p<0.001
BAT(g)0.35 士 0,090.73 ± 0.12 P<0.01
NEFA(mlq/L)0,6 + 0,120,23 + 0,05 p<0.001
比目魚肌 (g)0.52 ±0.130.80 ± 0.09 P <0.01
腓腸肌(g)0.85 ±0.12Li2±(U4P<0.01
胰島素(pg/g 跋酶)4.52 士 2.9116.3 ±3.1 p=0.0042為了研究這一點(diǎn)，在ZAG施用3天之后，對(duì)飼養(yǎng)的動(dòng)物進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn)(圖2A)。雖然PBS對(duì)照中血液葡萄糖水平顯著地升高，但是在ZAG處理的動(dòng)物中只有小的升高，在整個(gè)研究過(guò)程中其保持顯著地低于對(duì)照組。此外在研究開(kāi)始時(shí)ZAG處理的動(dòng)物中血漿胰島素水平顯著地較低，并在60min的觀察期間保持這樣(圖2B)。缺少胰島素時(shí)ZAG施用增加葡萄糖攝取進(jìn)附睪、內(nèi)臟和皮下的脂肪細(xì)胞，并且存在低(InM)胰島素時(shí)也增加葡萄糖攝取進(jìn)附睪和內(nèi)臟脂肪細(xì)胞(圖2C)。在ZAG處理的動(dòng)物中，缺少或存在胰島素(IOOnM)時(shí)葡萄糖攝取進(jìn)腓腸肌也顯著地增強(qiáng)(圖2D)。ZAG處理的小鼠的腓腸肌中的葡萄糖攝取大于未治療的動(dòng)物中對(duì)胰島素的反應(yīng)。ZAG施用還減弱高血糖對(duì)骨骼肌萎縮的影響。因此用ZAG處理的ob/ob小鼠顯示腓腸肌和比目魚肌濕重的顯著增加(表I)。這與足底肌肉中蛋白質(zhì)合成增加超過(guò)兩倍(圖3A)和蛋白質(zhì)降解減少60%(圖3B)相關(guān)。來(lái)自用ZAG處理的小鼠的腓腸肌顯示降低的蛋白酶體‘糜蛋白酶樣’酶活性(圖3C)—這與非肥胖小鼠中存在的情況并無(wú)顯著差異一和降低的20S蛋白酶體a-亞基(圖3D)和p42(19S調(diào)節(jié)子的ATP酶亞基)(圖3E)表達(dá)，這提示降低的泛素-蛋白酶體途徑活性。ZAG處理的小鼠中肌球蛋白水平增加(圖3F)，而肌動(dòng)蛋白水平不改變(圖3G)。此外，存在dsRNA-依賴性蛋白激酶(PKR)(圖4A)和真核起始因子2a (eIF2a)(圖4B)的磷酸化形式的水平降低，這已經(jīng)顯示引起由腫瘤分解代謝因子誘導(dǎo)的肌肉萎縮，和高水平的細(xì)胞外葡萄糖。該途徑中的其它的酶，包括磷脂酶A2 (PLA2)(圖4C)、p38促分裂原活化蛋白激酶(圖4D)和半胱天冬酶-3和-8 (圖4E)，也在用ZAG處理的ob/ob小鼠的腓腸肌中減弱。這些改變與響應(yīng)于ZAG的肌肉中分解代謝信號(hào)傳導(dǎo)降低相當(dāng)。ZAG而不是異丙腎上腺素，增加脂肪細(xì)胞中磷酸HSL的表達(dá)，這被細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)抑制劑TO9805914完全地減弱。雖然ZAG增加附睪脂肪細(xì)胞中HSL的表達(dá)，但是不存在皮下或內(nèi)臟脂肪細(xì)胞中的增加(圖5B-5D)。在脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)的表達(dá)中觀查到相似的情形(圖5E-5G)。HSL和ATGL的表達(dá)與ERK的活性(磷酸)形式的表達(dá)相關(guān)(圖5H-5J)。附睪脂肪細(xì)胞中HSL和ATGL的表達(dá)與響應(yīng)于P 3激動(dòng)劑，BRL37344的增加的脂肪分解相關(guān)(圖5K)。該結(jié)果提示，ZAG可以協(xié)同地與P 3激動(dòng)劑起作用。如先前所報(bào)道，ZAG施用增加其在脂肪組織中的表達(dá)(圖6A)。ZAG表達(dá)保持升高，在缺少ZAG時(shí)在組織培養(yǎng)中持續(xù)另外3天(圖6B)。缺少ZAG時(shí)在組織培養(yǎng)中脂肪細(xì)胞中的HSL表達(dá)也升高，持續(xù)3天(圖6C)。ZAG的施用增加BAT (圖6D)中的UCPl (圖6D)和UCP3(圖6E)以及骨骼肌(圖6F)中UCP3的表達(dá)。增加的解偶聯(lián)蛋白表達(dá)將期望如所觀察的引導(dǎo)代謝底物形成熱(圖1G)。21天之后，觀察ob/ob小鼠中血漿代謝水平(表2)，監(jiān)測(cè)的參數(shù)示于表3中。觀察到血液葡萄糖進(jìn)一步下降(從2. 03至15. 2mM)和甘油升高，這似乎較大，因?yàn)閷?duì)照較以前較低。與第5天相比，在第21天沒(méi)有觀察NEFA、TG或胰島素改變(表I)。注意的是，顯示血漿胰島素下降的ZAG處理的動(dòng)物的胰腺中有多很多的胰島素，這不是由于較低的胰島素產(chǎn)生(例如，對(duì)胰腺P細(xì)胞的毒素將發(fā)生)，而更是由于在ZAG處理的動(dòng)物中需要較少的胰島素來(lái)控制血液葡萄糖的事實(shí)。表2-在第21天用ZAG處理的ob/ob小鼠中的血漿代謝物和胰島素水平
權(quán)利要求
1.一種制劑，其包含鋅-a 2_糖蛋白(ZAG)、ZAG變體、修飾的ZAG或其功能性片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述ZAG是哺乳動(dòng)物的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中所述ZAG是人的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其中所述ZAG由SEQID NO:1中所述的氨基酸序列組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求所述的制劑4，其中所述ZAG與非蛋白質(zhì)聚合物綴合。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制劑，其中所述ZAG經(jīng)唾液酸化、PEG化或修飾以增加溶解度或穩(wěn)定性。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述ZAG是重組或合成的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述修飾的ZAG由帶有一個(gè)或多個(gè)選自缺失、添加或保守性置換的氨基酸序列突變的野生型ZAG氨基酸序列組成。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述ZAG還包含一個(gè)或多個(gè)前導(dǎo)序列和尾隨序列(trailing sequence)。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制劑，其中所述ZAG是糖基化的。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制劑，其中所述ZAG因翻譯后修飾而糖基化。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中通過(guò)蛋白水解化學(xué)降解作用或折疊結(jié)構(gòu)域保留片段化產(chǎn)生所述功能性片段。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑包含至少5、10、25、50、100mg的ZAG。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，還包含藥學(xué)上可接受的載體。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，還包含一種或多種選自￠3激動(dòng)劑和￠-腎上腺素能受體(P-AR)拮抗劑的藥劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的制劑，其中所述P-AR拮抗劑選自￠2-腎上腺素能受體(^ 2-AR)拮抗劑、^1-腎上腺素能受體(P 1-AR)拮抗劑和P 3-腎上腺素能受體(P 3-AR)拮抗劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的制劑，其中所述P3激動(dòng)劑選自腎上腺素(腎上腺素(adrenaline))、去甲腎上腺素(去甲腎上腺素(noradrenaline))、異丙腎上腺素(isoprotenerol)、異丙腎上腺素、普萘洛爾、阿普洛爾、阿羅洛爾、布新洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、克侖特羅、地諾帕明、非諾特羅、納多洛爾、奧克巴胺、氧烯洛爾、吲哚洛爾、[(氰基)11引哚洛爾]、沙丁胺醇、沙美特羅、teratolol、tecradine、特美奎諾(trimetoquinolol)、3’ -碘特美奎諾(3，-1odotrimetoquinolol)、3’，5’ -碘特美奎諾(3，, 5’ -1odotrimetoquinolol)、阿米貝隆、索拉貝隆、奈必洛爾、AD-9677、AJ-9677、AZ-002、CGP-12177、CL-316243、CL-317413、BRL-37344、BRL-35135、BRL-26830、BRL-28410、BRL-33725、BRL-37344、BRL-35113、BMS-194449、BMS-196085、BMS-201620、BMS-210285、BMS-187257、BMS-187413、BMS-187413 的 S03H 的 C0NH2 取代、BMS-181413 的消旋物、CGP-20712A、CGP-12177、CP-114271、CP-331679、CP-331684、CP-209129、FR-165914、FR-149175、 IC1-118551、 IC1-201651、 IC1-198157、 IC1-D7114、 LY-377604、 LY-368842、KTO-7924、LY-362884、LY-750355、LY-749372、LY-79771、LY-104119、L-771047、L-755507、L-749372、L-750355、L-760087、L-766892、L-746646、L-757793、L-770644、L-760081、L-796568、L-748328、L-748337、Ro-16-8714、Ro-40-2148、(-)-R0_363、SB-215691,SB-220648、 SB-226552, SB-229432, SB-251023, SB-236923, SB-246982, SR-58894A、SR-58611、SR-58878、SR-59062、SM-11044, SM-350300、ZD-7114, ZD-2079, ZD-9969,ZM-215001和 ZM-215967。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的制劑，其中所述P3-AR拮抗劑是SR59230A。
19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的制劑，其中所述P-AR拮抗劑選自普萘洛爾、(-)_普萘洛爾、(+)_普萘洛爾、普拉洛爾、(-)_普拉洛爾、(+)_普拉洛爾、CGP-20712A、IC1-118551、(-)-布拉洛爾、醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、艾司洛爾、奈必洛爾、美托洛爾、醋丁洛爾、卡替洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、左布諾洛爾、美替洛爾、納多洛爾、索他洛爾和噻嗎洛爾。
20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，還包含選自胰島素、胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)或其類似物的降血糖藥劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑處于液體劑、糊劑、粉劑、乳劑、混懸劑或固體劑形式。
22.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑處于適合作為噴霧劑、片劑、凍干粉劑、半固體凝膠劑、舌下劑、速溶劑、頰含劑、液體劑、糖錠劑、薄膜劑、咀嚼劑、掩味劑或泡騰劑口服施用的形式。
23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑處于適合鼻內(nèi)或肺部施用的形式，包括噴霧劑、液體劑、糊劑、乳劑、混懸劑、凍干粉劑或半固體凝膠劑形式。
24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑處于適合局部施用的形式，包括噴霧劑、液體劑、糊劑、乳劑、混懸劑、凍干粉劑、乳膏劑、油膏劑或半固體凝膠劑形式。
25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑適于通過(guò)自動(dòng)注射器、泵裝置、預(yù)填充注射器和無(wú)針技術(shù)注射。
26.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述制劑被擠出。
27.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，還包含膳食纖維源。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，還包含蛋白質(zhì)源。
29.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，還包含以下的一種或多種微量營(yíng)養(yǎng)素、膳食補(bǔ)充劑、養(yǎng)分、可食用化合物和調(diào)味劑。
30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，還包含一種或多種選自磷酸鹽、Tris、精氨酸、甘氨酸、TweenSO、蔗糖、海藻糖、甘露醇、酪蛋白和其衍生物的賦形劑。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的制劑，其中當(dāng)存在時(shí)，磷酸鹽、Tris、精氨酸和甘氨酸的濃度約 15mM 至 300mM。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的制劑，其中磷酸鹽、Tris、精氨酸和甘氨酸的濃度獨(dú)立地是20mM、150mM 或 250mM。
33.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中當(dāng)存在時(shí)，Tween80的濃度是約0.01%至0. 1%。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的制劑，其中Tween80的濃度是0.01%,0. 05%或0. 1%。
35.根據(jù)權(quán)利要求30所述的制劑，其中當(dāng)存在時(shí)，蔗糖、海藻糖和甘露醇的濃度是約0.1% 至 5%o
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的制劑，其中蔗糖、海藻糖和甘露醇的濃度獨(dú)立地是0.1%、·1.0% 或 5. 0%。
37.根據(jù)權(quán)利要求30所述的制劑，其中所述一種或多種賦形劑是酪蛋白。
38.根據(jù)權(quán)利要求30所述的制劑，其中所述膳食補(bǔ)充劑選自Al和A2P酪蛋白。
39.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述ZAG、ZAG變體、修飾的ZAG或其功能性片段作為聚合物存在。
40.食料添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑。
41.食料或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其包含與根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑組合的可消耗載體。
42.根據(jù)權(quán)利要求40所述的食料添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其中所述可消耗載體是餅干、巧克力蛋糕、薄脆餅、早餐棒、能量棒、谷類食品或蛋糕。
43.根據(jù)權(quán)利要求40所述的食料添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其中所述可消耗載體是飲料。
44.根據(jù)權(quán)利要求40所述的食料添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其中所述可消耗載體是肉產(chǎn)品。
45.根據(jù)權(quán)利要求40所述的食料添加劑或營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，其中所述肉產(chǎn)品是培養(yǎng)肉。
46.一種用于將制劑遞送至哺乳動(dòng)物受試者的方法，所述方法包括向哺乳動(dòng)物受試者施用根據(jù)權(quán)利要求1-39或1-45中任一項(xiàng)所述的制劑。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述受試者是人。
48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中將所述制劑按靜脈內(nèi)、經(jīng)口、經(jīng)頰、舌下、鼻內(nèi)、透皮、皮下、肌內(nèi)、局部方式或通過(guò)吸入施用。
49.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中每天施用所述制劑至少10天。
50.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中每天施用所述制劑至少21天。
51.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中每天施用所述制劑長(zhǎng)于一年。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中每天施用所述制劑長(zhǎng)于兩年。
53.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中每天施用所述制劑二次。
54.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中每三天施用所述制劑一次。
55.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中每周施用所述制劑。
56.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中每月施用所述制劑。
57.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中將所述制劑與一種或多種選自￠3激動(dòng)劑和 腎上腺素能受體(P-AR)拮抗劑的藥劑組合施用。
58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自￠2-腎上腺素能受體(^ 2-AR)拮抗劑、^1-腎上腺素能受體(P 1-AR)拮抗劑和P 3-腎上腺素能受體(P 3-AR)拮抗劑。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中所述￠3激動(dòng)劑選自腎上腺素(腎上腺素(adrenaline))、去甲腎上腺素(去甲腎上腺素(noradrenaline))、異丙腎上腺素(isoprotenerol)、異丙腎上腺素、普萘洛爾、阿普洛爾、阿羅洛爾、布新洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、克侖特羅、地諾帕明、非諾特羅、納多洛爾、奧克巴胺、氧烯洛爾、吲哚洛爾、[(氰基)11引哚洛爾]、沙丁胺醇、沙美特羅、teratolol> tecradine、特美奎諾(trimetoquinolol)、3’ -碘特美奎諾、3’，5’ -碘特美奎諾、阿米貝隆、索拉貝隆、奈必洛爾、AD-9677、AJ-9677、AZ-002、CGP-12177、CL-316243、CL-317413、BRL-37344、BRL-35135、BRL-26830、BRL-28410、BRL-33725、BRL-37344, BRL-35113, BMS-194449, BMS-196085,BMS-201620、BMS-210285、BMS-187257, BMS-187413, BMS-187413 的 S03H 的 C0NH2 取代、BMS-181413 的消旋物、CGP-20712A、CGP-12177、CP-114271、CP-331679、CP-331684、CP-209129、FR-165914、FR-149175、IC1-118551、IC1-201651、IC1-198157, IC1-D7114、LY-377604、 LY-368842, KTO-7924, LY-362884, LY-750355, LY-749372, LY-79771,LY-104119、L-771047、L-755507, L-749372, L-750355, L-760087, L-766892, L-746646,L-757793、L-770644,L-760081、L-796568、L-748328,L-748337,Ro-16-8714,Ro-40-2148,(-)-RO-363, SB-215691、 SB-220648, SB-226552, SB-229432, SB-251023, SB-236923,SB-246982、SR-58894A、SR-58611、SR-58878、SR-59062、SM-11044, SM-350300, ZD-7114,ZD-2079、ZD-9969、ZM-215001 和 ZM-215967。
60.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中所述P3-AR拮抗劑是SR59230A。
61.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自普萘洛爾、(-)_普萘洛爾、(+)_普萘洛爾、普拉洛爾、(-)_普拉洛爾、(+)_普拉洛爾、CGP-20712A、IC1-118551、(-)-布拉洛爾、醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、艾司洛爾、奈必洛爾、美托洛爾、醋丁洛爾、卡替洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、左布諾洛爾、美替洛爾、納多洛爾、索他洛爾和噻嗎洛爾。
62.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR激動(dòng)劑。
63.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR拮抗劑。
64.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中在施用￠3激動(dòng)劑之前或之后施用所述制劑。
65.根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中在施用P3-AR之前或之后施用所述制劑。
66.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中將所述制劑與選自胰島素、胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)或其類似物的降血糖藥劑組合以任何順序或同時(shí)施用。
67.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述受試者具有與肌肉消耗、少肌癥、糖尿病、惡病質(zhì)、肌肉丟失、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良或肥胖相關(guān)的一種或多種癥狀。
68.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述受試者具有與胰島素抗性、低血糖、升高的游離脂肪酸(NEFA)、甘油三酯或葡萄糖的血漿水平相關(guān)的一種或多種癥狀。
69.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述受試者的代謝被調(diào)節(jié)。
70.一種用于將鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)遞送至哺乳動(dòng)物受試者的方法，所述方法包括通過(guò)口服施用將根據(jù)權(quán)利要求1-39或1-45中任一項(xiàng)所述的制劑遞送至受試者。
71.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中所述受試者是人。
72.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中每天施用所述制劑至少10天。
73.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中每天施用所述制劑至少21天。
74.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中每天施用所述制劑長(zhǎng)于一年。
75.根據(jù)權(quán)利要求74所述的方法，其中每天施用所述制劑長(zhǎng)于兩年。
76.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中每天施用所述制劑二次。
77.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中每三天施用所述制劑一次。
78.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中每周施用所述制劑。
79.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中每月施用所述制劑。
80.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中將所述制劑與一種或多種選自￠3激動(dòng)劑和 -腎上腺素能受體(P-AR)拮抗劑的藥劑組合施用。
81.根據(jù)權(quán)利要求80所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自￠2-腎上腺素能受體(3 2-AR)拮抗劑、^1-腎上腺素能受體(P 1-AR)拮抗劑和P 3-腎上腺素能受體(P 3-AR)拮抗劑。
82.根據(jù)權(quán)利要求81所述的方法，其中所述￠3激動(dòng)劑選自腎上腺素(腎上腺素(adrenaline))、去甲腎上腺素(去甲腎上腺素(noradrenaline))、異丙腎上腺素(isoprotenerol)、異丙腎上腺素、普萘洛爾、阿普洛爾、阿羅洛爾、布新洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、克侖特羅、地諾帕明、非諾特羅、納多洛爾、奧克巴胺、氧烯洛爾、吲哚洛爾、[(氰基)11引哚洛爾]、沙丁胺醇、沙美特羅、teratolol、tecradine、特美奎諾(trimetoquinolol)、3’ -碘特美奎諾、3’，5’ -碘特美奎諾、阿米貝隆、索拉貝隆、奈必洛爾、AD-9677、AJ-9677、AZ-002、CGP-12177, CL-316243, CL-317413, BRL-37344, BRL-35135,BRL-26830、BRL-28410, BRL-33725, BRL-37344, BRL-35113, BMS-194449, BMS-196085,BMS-201620、BMS-210285、BMS-187257, BMS-187413, BMS-187413 的 S03H 的 C0NH2 取代、BMS-181413 的消旋物、CGP-20712A、CGP-12177、CP-114271、CP-331679, CP-331684,CP-209129、FR-165914、FR-149175、IC1-118551、IC1-201651、IC1-198157, IC1-D7114、LY-377604、 LY-368842, KTO-7924, LY-362884, LY-750355, LY-749372, LY-79771,LY-104119、L-771047、L-755507, L-749372, L-750355, L-760087, L-766892, L-746646,L-757793、L-770644,L-760081、L-796568、L-748328,L-748337,Ro-16-8714,Ro-40-2148,(-)-R0-363、 SB-215691、 SB-220648, SB-226552, SB-229432, SB-251023, SB-236923,SB-246982、SR-58894A、SR-58611、SR-58878、SR-59062、SM-11044, SM-350300, ZD-7114,ZD-2079、ZD-9969、ZM-215001 和 ZM-215967。
83.根據(jù)權(quán)利要求81所述的方法，其中所述P3-AR拮抗劑是SR59230A。
84.根據(jù)權(quán)利要求80所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自普萘洛爾、(-)_普萘洛爾、(+)_普萘洛爾、普拉洛爾、(-)_普拉洛爾、(+)_普拉洛爾、CGP-20712A、IC1-118551、(-)-布拉洛爾、醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、艾司洛爾、奈必洛爾、美托洛爾、醋丁洛爾、卡替洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、左布諾洛爾、美替洛爾、納多洛爾、索他洛爾和噻嗎洛爾。
85.根據(jù)權(quán)利要求81所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR激動(dòng)劑。
86.根據(jù)權(quán)利要求81所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR拮抗劑。
87.根據(jù)權(quán)利要求80所述的方法，其中在施用￠3激動(dòng)劑之前或之后施用所述制劑。
88.根據(jù)權(quán)利要求81所述的方法，其中在施用P3-AR之前或之后施用所述制劑。
89.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中將所述制劑與選自胰島素、胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)或其類似物的降血糖藥劑組合以任何順序或同時(shí)施用。
90.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中所述受試者具有與肌肉消耗、少肌癥、糖尿病、惡病質(zhì)、肌肉丟失、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良或肥胖相關(guān)的一種或多種癥狀。
91.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中所述受試者具有與胰島素抗性、低血糖、升高的游離脂肪酸(NEFA)、甘油三酯或葡萄糖的血漿水平相關(guān)的一種或多種癥狀。
92.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其中所述受試者的代謝被調(diào)節(jié)。
93.一種用于增加受試者的鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)內(nèi)源水平的方法，所述方法包括向受試者施用根據(jù)權(quán)利要求1-39或1-45中任一項(xiàng)所述的制劑。
94.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中所述受試者是人。
95.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中將所述制劑按靜脈內(nèi)、經(jīng)口、經(jīng)頰、舌下、鼻內(nèi)、透皮、皮下、肌內(nèi)、局部方式或通過(guò)吸入施用。
96.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中每天施用所述制劑至少10天。
97.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中每天施用所述制劑至少21天。
98.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中每天施用所述制劑長(zhǎng)于一年。
99.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中每天施用所述制劑長(zhǎng)于兩年。
100.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中每天施用所述制劑二次。
101.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中每三天施用所述制劑一次。
102.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中每周施用所述制劑。
103.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中每月施用所述制劑。
104.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中將所述制劑與一種或多種選自￠3激動(dòng)劑和 腎上腺素能受體(P-AR)拮抗劑的藥劑組合施用。
105.根據(jù)權(quán)利要求104所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自￠2-腎上腺素能受體(^ 2-AR)拮抗劑、^1-腎上腺素能受體(P 1-AR)拮抗劑和P 3-腎上腺素能受體(P 3-AR)拮抗劑。
106.根據(jù)權(quán)利要求104所述的方法，其中所述￠3激動(dòng)劑選自腎上腺素(腎上腺素(adrenal ine))、去甲腎上腺素(去甲腎上腺素(noradrenal ine))、異丙腎上腺素(isoprotenerol)、異丙腎上腺素、普萘洛爾、阿普洛爾、阿羅洛爾、布新洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、克侖特羅、地諾帕明、非諾特羅、納多洛爾、奧克巴胺、氧烯洛爾、吲哚洛爾、[(氰基)11引哚洛爾]、沙丁胺醇、沙美特羅、teratolol、tecradine、特美奎諾(trimetoquinolol)、3’ -碘特美奎諾、3’，5’ -碘特美奎諾、阿米貝隆、索拉貝隆、奈必洛爾、AD-9677、AJ-9677、AZ-002、CGP-12177, CL-316243, CL-317413, BRL-37344, BRL-35135,BRL-26830、BRL-28410, BRL-33725, BRL-37344, BRL-35113, BMS-194449, BMS-196085,BMS-201620、BMS-210285、BMS-187257, BMS-187413, BMS-187413 的 S03H 的 C0NH2 取代、BMS-181413 的消旋物、CGP-20712A、CGP-12177、CP-114271、CP-331679, CP-331684,CP-209129、FR-165914、FR-149175、IC1-118551、IC1-201651、IC1-198157, IC1-D7114、LY-377604、 LY-368842, KTO-7924, LY-362884, LY-750355, LY-749372, LY-79771,LY-104119、L-771047、L-755507, L-749372, L-750355, L-760087, L-766892, L-746646,L-757793、L-770644,L-760081、L-796568、L-748328,L-748337,Ro-16-8714, Ro-40-2148,(-)-R0-363, SB-215691、 SB-220648, SB-226552, SB-229432, SB-251023, SB-236923,SB-246982、SR-58894A、SR-58611、SR-58878、SR-59062、SM-11044, SM-350300, ZD-7114,ZD-2079、ZD-9969、ZM-215001 和 ZM-215967。
107.根據(jù)權(quán)利要求105所述的方法，其中所述β3-AR拮抗劑是SR59230A。
108.根據(jù)權(quán)利要求105所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自普萘洛爾、(-)_普萘洛爾、(+)_普萘洛爾、普拉洛爾、(-)_普拉洛爾、(+)_普拉洛爾、CGP-20712A、IC1-118551、(-)-布拉洛爾、醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、艾司洛爾、奈必洛爾、美托洛爾、醋丁洛爾、卡替洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、左布諾洛爾、美替洛爾、納多洛爾、索他洛爾和噻嗎洛爾。
109.根據(jù)權(quán)利要求104所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR激動(dòng)劑。
110.根據(jù)權(quán)利要求105所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR拮抗劑。
111.根據(jù)權(quán)利要求104所述的方法，其中在施用￠3激動(dòng)劑之前或之后施用所述制劑。
112.根據(jù)權(quán)利要求105所述的方法，其中在施用P3-AR之前或之后施用所述制劑。
113.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中將所述制劑與選自胰島素、胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)或其類似物的降血糖藥劑組合以任何順序或同時(shí)施用。
114.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中所述受試者具有與肌肉消耗、少肌癥、糖尿病、惡病質(zhì)、肌肉丟失、脂肪營(yíng)養(yǎng)不良或肥胖相關(guān)的一種或多種癥狀。
115.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中所述受試者具有與胰島素抗性、低血糖、升高的游離脂肪酸(NEFA)、甘油三酯或葡萄糖的血漿水平相關(guān)的一種或多種癥狀。
116.根據(jù)權(quán)利要求93所述的方法，其中所述受試者的代謝被調(diào)節(jié)。
117.一種改善受試者中惡病質(zhì)的癥狀的方法，包括向需要這樣治療的所述受試者施用治療有效劑量的具有如SEQ ID NO:1中所示序列的多肽的抑制劑，其中治療之后與惡病質(zhì)相關(guān)的癥狀改善。
118.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中所述癥狀改善包括與治療之前的體重減少相比，體重減少的下降或減輕。
119.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中每天施用所述抑制劑。
120.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中每天施用所述抑制劑二次。
121.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中每周施用所述抑制劑。
122.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中每月施用所述抑制劑。
123.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中將所述抑制劑按靜脈內(nèi)、皮下、舌下、鼻內(nèi)、經(jīng)口、經(jīng)頰方式或通過(guò)吸入施用。
124.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中將所述抑制劑與一種或多種選自￠3拮抗劑、β2拮抗劑、P I拮抗劑和P 3-腎上腺素能受體3-AR)拮抗劑的藥劑組合施用。
125.根據(jù)權(quán)利要求124所述的方法，其中所述P3-AR拮抗劑是SR59230A。
126.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中所述抗體是糖基化的。
127.根據(jù)權(quán)利要求117所述的方法，其中所述受試者患有癌癥、AIDS、敗血病、COPDJ^衰竭、關(guān)節(jié)炎、充血性心力衰竭、肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥、糖尿病或衰老的少肌癥。
128.—種治療受試者以引起體重減少降低的方法,包括向需要這樣治療的受試者施用治療有效劑量的單獨(dú)或與一種或多種藥劑組合的多肽的抑制劑，所述多肽具有如SEQ IDN0:1中所示的序列，所述藥劑選自P腎上腺素能受體(P-AR)拮抗劑和￠3-腎上腺素能受體(P3-AR)拮抗劑。
129.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述P3-AR拮抗劑是SR59230A。
130.根據(jù)權(quán)利要求128所述的方法，其中所述多肽是糖基化的。
131.一種改善哺乳動(dòng)物受試者中糖尿病或肥胖癥的癥狀的方法，包括向需要這樣治療的受試者以任何順序或同時(shí)施用治療有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1-39或1-45中任一項(xiàng)所述的制劑與降血糖藥劑組合，所述降血糖藥劑選自胰島素、胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)或其類似物。
132.根據(jù)權(quán)利要求131所述的方法，其中所述受試者是人。
133.根據(jù)權(quán)利要求131所述的方法，其中將所述制劑按靜脈內(nèi)、經(jīng)口、經(jīng)頰、舌下、鼻內(nèi)、透皮、皮下、肌內(nèi)、局部方式或通過(guò)吸入施用。
134.根據(jù)權(quán)利要求131所述的方法，其中將所述制劑與一種或多種選自￠3激動(dòng)劑和 腎上腺素能受體(P-AR)拮抗劑的藥劑組合施用。
135.根據(jù)權(quán)利要求134所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自￠2-腎上腺素能受體(^ 2-AR)拮抗劑、^1-腎上腺素能受體(P 1-AR)拮抗劑和P 3-腎上腺素能受體(P 3-AR)拮抗劑。
136.根據(jù)權(quán)利要求134所述的方法，其中所述￠3激動(dòng)劑選自腎上腺素(腎上腺素(adrenal ine))、去甲腎上腺素(去甲腎上腺素(noradrenal ine))、異丙腎上腺素(isoprotenerol)、異丙腎上腺素、普萘洛爾、阿普洛爾、阿羅洛爾、布新洛爾、卡拉洛爾、卡替洛爾、克侖特羅、地諾帕明、非諾特羅、納多洛爾、奧克巴胺、氧烯洛爾、吲哚洛爾、[(氰基)11引哚洛爾]、沙丁胺醇、沙美特羅、teratolol、tecradine、特美奎諾(trimetoquinolol)、3’ -碘特美奎諾、3’，5’ -碘特美奎諾、阿米貝隆、索拉貝隆、奈必洛爾、AD-9677、AJ-9677、AZ-002、CGP-12177, CL-316243, CL-317413, BRL-37344, BRL-35135,BRL-26830、BRL-28410, BRL-33725, BRL-37344, BRL-35113, BMS-194449, BMS-196085,BMS-201620、BMS-210285、BMS-187257, BMS-187413, BMS-187413 的 S03H 的 C0NH2 取代、BMS-181413 的消旋物、CGP-20712A、CGP-12177、CP-114271、CP-331679, CP-331684,CP-209129、FR-165914、FR-149175、IC1-118551、IC1-201651、IC1-198157, IC1-D7114、LY-377604、 LY-368842, KTO-7924, LY-362884, LY-750355, LY-749372, LY-79771,LY-104119、L-771047、L-755507, L-749372, L-750355, L-760087, L-766892, L-746646,L-757793、L-770644,L-760081、L-796568、L-748328,L-748337,Ro-16-8714,Ro-40-2148,(-)-R0-363、 SB-215691、 SB-220648, SB-226552, SB-229432, SB-251023, SB-236923,SB-246982、SR-58894A、SR-58611、SR-58878、SR-59062、SM-11044, SM-350300, ZD-7114,ZD-2079、ZD-9969、ZM-215001 和 ZM-215967。
137.根據(jù)權(quán)利要求135所述的方法，其中所述P3-AR拮抗劑是SR59230A。
138.根據(jù)權(quán)利要求135所述的方法，其中所述P-AR拮抗劑選自普萘洛爾、(-)_普萘洛爾、(+)_普萘洛爾、普拉洛爾、(-)_普拉洛爾、(+)_普拉洛爾、CGP-20712A、IC1-118551、(-)-布拉洛爾、醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、艾司洛爾、奈必洛爾、美托洛爾、醋丁洛爾、卡替洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、左布諾洛爾、美替洛爾、納多洛爾、索他洛爾和噻嗎洛爾。
139.根據(jù)權(quán)利要求134所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR激動(dòng)劑。
140.根據(jù)權(quán)利要求135所述的方法，其中同時(shí)施用所述制劑和P3-AR拮抗劑。
141.根據(jù)權(quán)利要求134所述的方法，其中在施用￠3激動(dòng)劑之前或之后施用所述制劑。
142.根據(jù)權(quán)利要求135所述的方法，其中在施用P3-AR之前或之后施用所述制劑。
143.—種監(jiān)測(cè)哺乳動(dòng)物受試者中鋅-Ci2-糖蛋白(ZAG)活性的方法，包括 a)對(duì)受試者經(jīng)口施用根據(jù)權(quán)利要求1-39或1-45中任一項(xiàng)所述的制劑；和 b)檢測(cè)ZAG活性的水平； 從而監(jiān)測(cè)受試者中的ZAG活性。
144.根據(jù)權(quán)利要求143所述的方法，其中所述受試者是人。
145.根據(jù)權(quán)利要求143所述的方法，其中通過(guò)測(cè)量一個(gè)或多個(gè)參數(shù)的變化或絕對(duì)值檢測(cè)ZAG活性，所述參數(shù)選自體溫、血液葡萄糖水平、尿葡萄糖水平和/或血漿ZAG水平或者ZA G活性的其他量值，包括甘油、脂類、甘油三酯的量值和/或其他血糖控制參數(shù)。
全文摘要
本發(fā)明提供通過(guò)單獨(dú)或與額外藥劑(如β腎上腺素能受體激動(dòng)劑、β腎上腺素能受體拮抗劑和/或血糖控制藥)組合施用Zn-α2-糖蛋白或其功能性片段的制劑和方法，用于改善與代謝紊亂(如惡病質(zhì)、低血糖、肥胖癥、糖尿病等)相關(guān)的癥狀。
文檔編號(hào)A61P3/04GK103068400SQ201180039908
公開(kāi)日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2011年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月25日
發(fā)明者M·J·提斯達(dá)勒, S·羅素 申請(qǐng)人:阿斯頓大學(xué)