專利名稱：丹參酮ⅱa和靛玉紅聯(lián)用在降低機(jī)體血中砷含量中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及丹參酮IIA和靛玉紅聯(lián)合用藥在降低機(jī)體血中砷含量中的作用。
背景技術(shù)：
砷廣泛地存在于自然界，在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用頗廣，是一種對(duì)機(jī)體有嚴(yán)重危害的毒性物質(zhì)。砷為原生質(zhì)毒物，其易與組織細(xì)胞內(nèi)酶系中巰基結(jié)合，從而抑制酶的活性，引起細(xì)胞代謝障礙，形成對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、胃腸系統(tǒng)的毒性，導(dǎo)致口腔、食道、胃粘膜糜爛、腫脹出血、中毒性肝炎、亞急性黃色肝萎縮、心臟脂肪浸潤(rùn)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺氧、腎小球損傷等。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外地方性砷中毒比較嚴(yán)重，在我國(guó)畜牧業(yè)仍在廣泛使用有機(jī)砷作 為飼料添加劑(促生長(zhǎng)劑)，導(dǎo)致常見(jiàn)的食物(動(dòng)物性和植物性)均可檢測(cè)出砷，尤其以海產(chǎn)品為最高，作為食物鏈終端的人類更是不可避免在體內(nèi)具有一定的砷蓄積。目前，關(guān)于砷中毒的治療方法主要有補(bǔ)硒治療、用巰基驅(qū)砷治療和利用中藥治療等，但是迄今為止，沒(méi)有任何藥物、任何療法取得滿意的排砷療效。因此，尋找有效的排砷的藥物或療法是一項(xiàng)迫切的任務(wù)。

發(fā)明內(nèi)容
丹參為唇形科鼠尾草屬植物的根，丹參酮是中藥丹參根的乙醚提取物中的成分，為丹參主要有效作用部位。丹參酮IIA為丹參酮中主要有效成分之一，為脂溶性櫻紅色針狀結(jié)晶。丹參酮IIA分子式為C19H18O3，相對(duì)分子質(zhì)量為294. 33，其含有醌型結(jié)構(gòu)，易被氧化還原，可參與機(jī)體的多種生化反應(yīng)而有多種生物活性。丹參酮IIA具有多種藥理作用，能對(duì)抗心肌急性缺氧損傷、抗心律失常、改善血管平滑肌功能，對(duì)缺血再灌注引起的組織損傷具有保護(hù)作用。丹參酮IIA通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷、誘導(dǎo)分化和凋亡、抑制侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用。丹參酮IIA還具有神經(jīng)保護(hù)作用，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病防治有重要意義。靛玉紅是青黛中所含的主成份，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是一個(gè)雙吲哚類化合物。分子式為c16h1(in2o2。靛玉紅對(duì)多種移植性動(dòng)物腫瘤有抑制作用，能破壞白血病細(xì)胞；靛玉紅還能增強(qiáng)動(dòng)物的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬能力。但是之前靛玉紅在醫(yī)學(xué)研究中僅作為抗癌藥物，并在過(guò)去文獻(xiàn)顯示靛玉紅對(duì)慢性粒白血病療效顯著。本發(fā)明中將為丹參酮和靛玉紅聯(lián)合用藥提供一個(gè)新的用途，即兩藥聯(lián)合使用時(shí)有明顯的降低機(jī)體血砷含量作用。


圖I是空白組和丹參酮IIA+靛玉紅混懸液灌胃組大鼠平均全血砷濃度-時(shí)間曲線圖(η = 12)
具體實(shí)施例方式
一材料與方法I. I實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用雄性Sprague-Dawley大鼠,雄性,體重320g 370g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK (滬)2007-0005。飼養(yǎng)環(huán)境為普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，溫度22°C 23°C，相對(duì)濕度40% 70%，使用許可證號(hào)為 SCXK (滬)2006-0003。I. 2藥品與試劑 (I) As 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液 Ig · L—1 (As standard stock solution, Ig · L-1) :Merck 公司提供，批號(hào)HC 961324 ；(2)硝酸(Nitric acid) HPLC 級(jí)，Merck 公司，批號(hào) K40748356004 ；(3)鹽酸(Hydrochloride acid) :HPLC 級(jí)，Merck 公司，批號(hào) K39343417841 ；(4)氫氟酸(Hydrofluoric acid):優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供,批號(hào) 20100520 ；(5)高純氦氣(99. 999% ):上海成功氣體有限公司提供；(6)丹參酮IIA原料純度98%，批號(hào)SR20100518，陜西信瑞生物科技有限公司提供；(7)靛玉紅原料純度95%，批號(hào)MRHGG 100313，陜西森弗生物技術(shù)有限公司提供；(8)竣甲基纖維素納(Carboxymethylcellulose sodium, CMC):國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供，批號(hào)20100520 ；(9)超純水(purified water) =Millipore AlO 超純水儀制備；I. 3試劑配制(I)砷系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制ICP-AES用砷標(biāo)準(zhǔn)溶液精密量取As標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(Ig · OO. 25mL,加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得5mg · L—1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取As標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0. 05mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得Img · L—1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取5mg · Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得0. 5mg · I/1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取Img ·Ι^的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得O. Img · L-1 (IOOyg · L-1)的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取上述100 μ g -Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得50 μ g -Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取50 μ g -Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液20mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得20 μ g · Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取20 μ g · Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得10 μ g · Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取10μ g · Γ1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液25mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得
5μ g · L—1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取5 μ g · L—1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL，加入50mL容量瓶中，用去離子水配至刻度，即得I μ g · L—1的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液。(2)0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液的配制準(zhǔn)確稱取5. OOg的羧甲基纖維素鈉粉末，置800ml燒杯中，加入500ml蒸餾水，60°C磁力攪拌4h，轉(zhuǎn)移至1000ml容量瓶中，定容至刻度。4°C儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br> (3)藥品混懸液的制備丹參酮II A混懸液精密稱取丹參酮II A 51. Omg,研磨成細(xì)粉,緩慢加入少量
O.5% CMC溶液，繼續(xù)研磨至均勻，轉(zhuǎn)移至25mL具塞刻度量筒中，多次轉(zhuǎn)移合并，加至25mL，配制成濃度為2g · L-I的混懸液。臨配現(xiàn)用。靛玉紅混懸液精密稱取靛玉紅52. 6mg,配制方法、濃度和保存方法同上。丹參酮II A和靛玉紅混懸液配制方法、濃度和保存方法同上。I. 4 儀器(I)美國(guó)Perkin Elmer公司0PTIMA-DV 5300型電感耦和等離子發(fā)射光譜儀(ICP-AES)； (2)美國(guó)Agilent公司7500Ce電感耦和等離子質(zhì)譜儀(ICP-MS)；(3)德國(guó)Saturious BT2202S百分之一分析天平(稱取血樣);(4)上海博迅實(shí)驗(yàn)有限公司SSW型電熱恒溫水槽；(5)瑞士 Mettler Toledo AL204-IC 精密天平(稱取原料);(6)瑞士 Mettler Toledo XP-205DU十萬(wàn)分之一精密天平(稱取對(duì)照品)I. 5儀器設(shè)置(I) ICP-AES儀器方法設(shè)置儀器工作參數(shù)RF功率1300 ，霧化器流量O. 8L .mirT1,輔助氣流量O. 2L .mirT1,等離子氣流量15L .mirT1,螺動(dòng)泵流速15mL .mirT1,積分時(shí)間I 20s,分析波長(zhǎng)118. 979nm。(2) ICP-MS儀器方法設(shè)置儀器工作參數(shù)射頻功率1500 ;采樣深度8. Omm ;載氣流量O. 7L · mirT1 ;輔助氣流量O. 2L .mirT1 ;等離子氣流量15L .mirT1 ;反應(yīng)氣氦氣；S/C溫度2°C;樣品提升速度O. 5rps ;霧化器:Babington高鹽型；采樣錐類型和直徑鎳錐,0. 8mm ;截取錐類型和直徑鎳錐,0. 4mm ；采集模式Spectrum ;點(diǎn)數(shù)/質(zhì)量3 ;重復(fù)次數(shù)3 ;檢測(cè)方式自動(dòng)；分析波長(zhǎng)118. 979nm。I. 6試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取12只大鼠，不禁食，體重為(332. 8± 14. 4) g，隨機(jī)分為2組，每組于給藥前和給藥后 O. 25,0. 5,0. 75、l、2、3、4、6、8、10、12、24、32、48、56、72、80、96、104、120、144h 大鼠眼眶靜脈叢采集抗凝全血O. 5mL，-40°C保存直至分析。表1-1不同組別的給藥安排
_SL另1J_丹參酮IIA劑量(mg · kg-1)_靛玉紅劑量(mg · kg-1)
1.空白對(duì)照組--
2.丹參酮IIA+館玉紅組_50_50_I. 7含砷樣品預(yù)處理精密稱取待測(cè)大鼠全血O. 5g于全新氣相頂空瓶中，加入4mL硝酸、ImL鹽酸和
O.5mL氫氟酸，加蓋密封。放置于50°C水浴中溫育過(guò)夜。第二天開(kāi)蓋將頂空瓶?jī)?nèi)樣品轉(zhuǎn)移至15mL全新Falcon管中，多次潤(rùn)洗,合并所有液體并加水至15g。4000rpm離心IOmin,取上清6mL進(jìn)樣ICP-AES或ICP-MS分析。I. 8數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)AUC0_t (0_144h血神-時(shí)間曲線下面積)米用統(tǒng)計(jì)矩計(jì)算。兩組間AUCQ_t、差異米用SNK檢驗(yàn)(q檢驗(yàn))，由SAS 9. I. 3實(shí)現(xiàn)。二結(jié)果I.砷標(biāo)準(zhǔn)曲線ICP-AES :標(biāo)準(zhǔn)曲線為過(guò)原點(diǎn)曲線，濃度分別為0、0. 1,0. 5、l、5mg · L—1，回歸方程為，線性范圍為O 5mg· L'ICP-MS :標(biāo)準(zhǔn)曲線為過(guò)原點(diǎn)曲線，濃度分別為0、1、2、5、10、20、50、100μg · L—1，回歸方程為 Y = 7. 035e-3*X-2. 813e_4，線性范圍為 O 100 μ g · L'2.大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)空白組大鼠全血砷濃度見(jiàn)表2-1，灌胃藥物混懸液后的全血砷濃度見(jiàn)表2-2，兩組 AUCVt值和組間比較結(jié)果見(jiàn)表2-3。丹參酮IIA和靛玉紅聯(lián)用可非常顯著的降低血砷AUCQ_t。表2-1空白組大鼠的全血總砷濃度(mg · L—1)

權(quán)利要求
1.本發(fā)明是丹參酮IIA聯(lián)合靛玉紅應(yīng)用的全新用途；本發(fā)明的特征在于丹參酮IIA聯(lián)合靛玉紅應(yīng)用于降低血液中的重金屬砷的含量。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了丹參酮ⅡA聯(lián)用靛玉紅的新用途。丹參酮ⅡA為丹參酮中主要有效成分之一，其含有醌型結(jié)構(gòu)，易被氧化還原，可參與機(jī)體的多種生化反應(yīng)而有多種生物活性。丹參酮ⅡA具有多種藥理作用，能對(duì)抗心肌急性缺氧損傷、抗心律失常、改善血管平滑肌功能，對(duì)缺血再灌注引起的組織損傷具有保護(hù)作用。靛玉紅是青黛中所含的主成份，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是一個(gè)雙吲哚類化合物。靛玉紅對(duì)多種移植性動(dòng)物腫瘤有抑制作用，能破壞白血病細(xì)胞；靛玉紅還能增強(qiáng)動(dòng)物的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬能力。砷是一種對(duì)機(jī)體有嚴(yán)重危害的毒性物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA和靛玉紅單獨(dú)應(yīng)用均可以有效的降低大鼠血液內(nèi)血砷的含量，我們發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA聯(lián)合靛玉紅也能有效的降低大鼠血中砷的濃度明顯降低。
文檔編號(hào)A61P39/02GK102784151SQ20111013243
公開(kāi)日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2011年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月20日
發(fā)明者何迎春, 劉紅霞, 呂映華, 李祿金, 楊娟, 王鯤, 盛玉成, 石勁敏, 許羚, 鄭青山, 陳君超 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué), 石勁敏, 鄭青山