專利名稱：一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬化學(xué)制藥領(lǐng)域，是以一種反義寡核苷酸藥物癌泰得(其序列為5’ -ACT CAC TCAGGC CTC AGA CT-3’ )為活性成分的注射制劑，用于肝癌治療及其化療聯(lián)合用藥的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前肝癌的主要治療方法是較小沒有轉(zhuǎn)移的單個(gè)肝癌以手術(shù)切除為主，不能手術(shù)的中晚期肝癌可以考慮介入治療和中醫(yī)治療?；煂Ω伟┑男Ч^差據(jù)統(tǒng)計(jì)有效率在 11%左右，但嚴(yán)重的副作用幾乎都是化療藥物引起，所以肝癌原則上不化療。反義寡核苷酸是一種基因靶向新型藥物，能夠在基因水平上干擾致病蛋白的產(chǎn)生，從而達(dá)到生物治療腫瘤的作用。端粒酶活性與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，其活性抑制劑已成為抗腫瘤藥物研究的熱
點(diǎn)ο端粒酶是由一個(gè)RNA組分和若干蛋白質(zhì)組成的逆轉(zhuǎn)錄酶，它能利用自身RNA為模板合成端粒DNA，彌補(bǔ)隨細(xì)胞有絲分裂逐漸縮短的端粒。其中端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR)含有與端粒重復(fù)序列互補(bǔ)的序列，在端粒延長時(shí)作為模板，其在大多數(shù)細(xì)胞中都表達(dá)；而含有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的蛋白，即人端粒酶催化亞基(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)是端粒酶的限速成分，僅在端粒酶陽性的細(xì)胞中表達(dá)，與端粒酶活性相關(guān)，它是正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤細(xì)胞的關(guān)鍵性因素，因此抑制hTERT活性就有可能抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移，達(dá)到抗腫瘤的目的?！鞍┨┑谩本褪轻槍θ硕肆Ｃ复呋瘉喕鵫TERT基因篩選獲得的、可特異抑制腫瘤細(xì)胞生長的反義寡核苷酸藥物，與傳統(tǒng)小分子藥物相比，作用效率高、毒性低，且不易產(chǎn)生耐藥，該藥物的研發(fā)將為幾乎無藥可用的中晚期肝癌患者提供一種治療選擇。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗肝癌的反義寡核苷酸藥物癌泰得(其序列為 5’ -ACT CACTCA GGC CTC AGA CT-3’ )為活性成分的注射制劑及其制備方法。采用的技術(shù)方案一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑，包括靜脈滴注前配成溶液的凍干粉針或濃溶液，是由單劑量活性癌泰得與藥劑學(xué)中有效的附加劑制成，PH為7 9。所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑中癌泰得含量規(guī)格為IOmg 500mg， 優(yōu)選含量規(guī)格為IOOmg 500mg。所述的藥劑學(xué)中有效的附加劑為抗氧劑、填充劑、穩(wěn)定劑、保護(hù)氣體、離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑、PH調(diào)節(jié)劑等。所述的抗氧劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、甲醛合次硫酸氫鈉、硫脲、抗壞血酸、硫代甘油、谷胱甘肽、丙氨酸、半胱氨酸、沒食子酸等；
所述的填充劑為乳糖、甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、右旋糖酐、木糖醇、山梨醇、 乳糖酸鈣、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖與甘露醇1 1混合物或水解明膠與甘露醇的混合物；所述的穩(wěn)定劑為肌酐、甘氨酸、辛酸鈉或煙酰胺；所述的保護(hù)氣體為氮?dú)?、氬氣、氖氣、氪氣或二氧化碳?xì)怏w；所述的離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑為硫酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉或醋酸鈉；所述的pH調(diào)節(jié)劑為甲磺酸、馬來酸、鹽酸、醋酸、枸櫞酸、氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸鈉。所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸凍干粉針，是由活性癌泰得加附加劑制成溶液，經(jīng)分裝，冷凍干燥而成，分裝前溶液中其中活性成分癌泰得溶液的濃度為4 200mg/ ml，填充劑為0 60%，抗氧劑為0 5%，穩(wěn)定劑為0 10%，pH調(diào)節(jié)劑為0 10%，離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑為0 10%，上述百分比為該成分總質(zhì)量占溶液體積的百分比。所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸濃溶液，是由活性癌泰得加附加劑制備而成的溶液，其中活性成分癌泰得溶液的濃度為1 100mg/ml，抗氧劑為O 5%，穩(wěn)定劑為O 10%, pH調(diào)節(jié)劑為O 10%，離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑為O 10%，上述百分比為該成分總質(zhì)量占溶液體積的百分比。一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑的制備方法(1) 一種治療肝癌的反義寡核苷酸凍干粉針的制備方法藥液的配制稱取處方量的癌泰得及附加劑，加入注射用水適量，攪拌使之充分溶解后加注射用水至全量；將上述藥液按無菌操作法采用0. 22 μ m微孔濾膜進(jìn)行除菌過濾；濾液進(jìn)行含量、澄明度及pH值檢查合格后備用；藥液灌裝、冷凍干燥、軋蓋即得成品。(2) 一種治療肝癌的反義寡核苷酸濃溶液的制備方法藥液的配制稱取處方量的癌泰得及附加劑，加入注射用水適量，攪拌使之充分溶解。將上述藥液用0. 45 μ m微孔濾膜粗濾；測定粗濾液的pH值及含量，合格后用0. 22 μ m微孔濾膜精濾除菌；藥液灌裝、封口、燈檢、包裝即得成品。本發(fā)明所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑檢測指標(biāo)和方法如下有關(guān)物質(zhì)在硫代寡核苷酸合成中主要產(chǎn)生兩類雜質(zhì)一類雜質(zhì)是比全長序列少若干個(gè)核苷酸的n-x序列，另一類雜質(zhì)是在合成中硫代不充分造成的(P = 0)x雜質(zhì)?？s短寡核苷酸的檢測取本品適量，加水制成適當(dāng)濃度的溶液，采用毛細(xì)管電泳法進(jìn)行測定，按峰面積歸一化法計(jì)算，除溶劑峰外，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于總峰面積的5%。其他寡核苷酸的檢測將本品配成供試品溶液及5%濃度的自身對照溶液，采用高效液相色譜法，按不加校正因子的主成分自身對照法計(jì)算，除溶劑峰外，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積。含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用陰離子交換色譜柱，以乙二胺四醋酸二鈉-三羥基氨基甲烷_乙腈為流動(dòng)相A ；乙二胺四醋酸二鈉-三羥基氨基甲烷_氯化銨_乙腈為流動(dòng)相B ；檢測波長為260nm ；柱溫為50°C。理論板數(shù)按癌泰得峰計(jì)算不低于2000。測定法取本品適量，加純水制成適當(dāng)濃度的溶液，采用高效液相色譜法，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算癌泰得含量。檢測結(jié)果見表1。表1癌泰得實(shí)施例樣品檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑，其特征在于以單劑量活性癌泰得與藥劑學(xué)中有效的附加劑，制成用于供臨床靜脈滴注前配成溶液的凍干粉針或濃溶液，PH為7 9。
2.根據(jù)權(quán)力要求1所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑，其特征在于所述的癌泰得含量規(guī)格為IOmg 500mg。
3.根據(jù)權(quán)力要求2所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑，其特征在于所述的癌泰得含量規(guī)格為IOOmg 500mg。
4.根據(jù)權(quán)力要求1所述的一種治療肝癌反義寡核苷酸的注射劑，其特征在于所述的藥劑學(xué)中有效的附加劑為抗氧劑、填充劑、穩(wěn)定劑、保護(hù)氣體、離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑、PH調(diào)節(jié)劑等。所述的抗氧劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、甲醛合次硫酸氫鈉、 硫脲、抗壞血酸、硫代甘油、谷胱甘肽、丙氨酸、半胱氨酸、沒食子酸等；所述的填充劑為乳糖、甘氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、右旋糖酐、木糖醇、山梨醇、乳糖酸鈣、牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖與甘露醇1 1混合物或水解明膠與甘露醇的混合物；所述的穩(wěn)定劑為肌酐、甘氨酸、辛酸鈉或煙酰胺； 所述的保護(hù)氣體為氮?dú)?、氬氣、氖氣、氪氣或二氧化碳?xì)怏w；所述的離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑為硫酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉或醋酸鈉；所述的PH調(diào)節(jié)劑為甲磺酸、馬來酸、鹽酸、醋酸、枸櫞酸、氫氧化鈉、碳酸氫鈉或磷酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)力要求1所述，其特征在于所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸凍干粉針， 是由活性癌泰得加附加劑制成溶液，經(jīng)分裝、冷凍干燥而成，分裝前溶液中活性成分癌泰得溶液的濃度為4 200mg/ml，填充劑為0 60 %，抗氧劑為0 5 %，穩(wěn)定劑為0 10 %， PH調(diào)節(jié)劑為0 10%，離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑為0 10%，上述百分比為該成分總質(zhì)量占溶液體積的百分比。
6.根據(jù)權(quán)力要求1所述，其特征在于所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸濃溶液是由活性癌泰得加附加劑制備而成的溶液，其中活性成分癌泰得溶液的濃度為1 IOOmg/ ml，抗氧劑為0 5 %，穩(wěn)定劑為0 10 %，pH調(diào)節(jié)劑為0 10 %，離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑為0 10%，上述百分比為該成分總質(zhì)量占溶液體積的百分比。
7.根據(jù)權(quán)力要求1或5所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸凍干粉針的制備方法 藥液的配制稱取處方量的癌泰得及附加劑，加入注射用水適量，攪拌使之充分溶解后加注射用水至全量；將上述藥液按無菌操作法采用0. 22 μ m微孔濾膜進(jìn)行除菌過濾； 濾液進(jìn)行含量、澄明度及PH值檢查合格后備用； 藥液灌裝、冷凍干燥、軋蓋即得成品。
8.根據(jù)權(quán)力要求1或6所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸濃溶液的制備方法 藥液的配制稱取處方量的癌泰得及附加劑，加入注射用水適量，攪拌使之充分溶解。 將上述藥液用0. 45 μ m微孔濾膜粗濾；測定粗濾液的PH值及含量，合格后用0. 22 μ m微孔濾膜精濾除菌；藥液灌裝、封口、燈檢、包裝即得成品。
9.根據(jù)權(quán)力要求1或2或3所述的一種治療肝癌的反義寡核苷酸注射劑用于肝癌治療及化療聯(lián)合用藥的藥劑學(xué)的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供一種抗肝癌的反義寡核苷酸藥物癌泰得(其序列為5’-ACT CAC TCA GGC CTC AGA CT-3’)為活性成分的注射制劑及其制備方法。該癌泰得注射劑，包括用于供臨床靜脈滴注前配成溶液的凍干粉針或濃溶液，是由單劑量活性成分癌泰得與藥劑學(xué)中有效的附加劑制備而成，pH為7～9，含量規(guī)格為10mg～500mg，所述的藥劑學(xué)中有效的附加劑為抗氧劑0～5％、填充劑0～60％、穩(wěn)定劑0～10％、pH調(diào)節(jié)劑0～10％、離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑0～10％等，上述百分比為該成分總質(zhì)量占溶液體積的百分比。本發(fā)明的癌泰得注射劑，對肝癌細(xì)胞具有良好的抑制作用，質(zhì)量可控、穩(wěn)定性好。
文檔編號(hào)A61K9/08GK102218028SQ201110071978
公開日2011年10月19日 申請日期2011年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月24日
發(fā)明者仲婕, 周喆, 張玉林, 張金鐘, 朱德領(lǐng), 李劍波, 王升啟, 郭錳, 高嬋, 魯?shù)さ?申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所, 杭州天龍藥業(yè)有限公司