專利名稱：一種注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，涉及一種注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉及其制備方法。
背景技術：
單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂是含唾液酸的神經鞘脂，可以加速受損神經細胞的修復，促進神經細胞的生長和再生，改善神經傳導等，主要用于中樞和周圍神經系統(tǒng)病癥的修復和治療，被認為是目前臨床上治療脊髓損傷(SCI)最有效的藥物之一，目前已經有進口注射水針上市，有效成分為單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉(GMl)。GMl在臨床上主要通過外周途徑長時間大劑量反復給藥治療SCI。外源性單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂雖然具有脂溶性可以穿過血腦屏障，但是藥代動力學研究證實，注射入體內后GMl主要通過肝臟攝取，中樞神經系統(tǒng)內含量很少，只有20%左右進入腦、脊髓等部位發(fā)揮作用，而且中樞神經系統(tǒng)中GMl含量要在給藥后8至16個小時才達高峰，臨床上常加大使用頻率以維持所需的藥物濃度，但隨之而來的是不良反應的增多與病人順應性的降低，限制了其臨床應用良好藥效的發(fā)揮。近年來的研究顯示，GMl通過蛛網膜下腔途徑少量給藥是治療SCI的一種有效方法。GMl普通制劑隨著代謝消耗，單次給藥不能長時間維持其在局部的有效濃度，而且GMl臨床用量大(20-100mg/60kg/日)，反復多次進行蛛網膜下腔穿刺給藥必然會增加感染機會，不值得推薦。因而，對GMl緩釋制劑的研究具有非常重要的意義。微球是指藥物分散或被吸附在高分子、聚合物基質中而形成的微粒分散體系，可以將藥物包裹在可生物降解的載體材料中，藥物隨著載體材料的溶蝕逐漸釋放，可以使體內藥物濃度長時間維持一定的水平，起到長效緩釋的作用，減少用藥次數(shù)，增加病人順應性。乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)具有良好的生物相容性和可降解性，是用于制備緩釋微球的生物可降解聚合物材料，目前已經被FDA批準用于皮下注射用微球。蔣濤等在《單唾液酸四η己糖神經節(jié)苷脂的PLGA微球的制備》(《醫(yī)藥導報》2006年4月第25卷第4期，第335 337頁)中公開的GM-I-PLGA微球的制備工藝，其形態(tài)規(guī)則，粒徑約(19. 3±8. 5) μ m，載藥量只有4. 7%。在姜慶斌《GM-1-PLGA微球的制備及其體外釋藥評價》(2010年4月17日，山東大學碩士學位論文)所公開的技術方案中，GMl微球的載藥量只有17%。從已公開的文獻中可以得知，現(xiàn)有技術制備的GM-I-PLGA微球的載藥量很低，要想達到有效治療窗，給藥時需要給與較大劑量，皮下注射時病人會有異物感，降低了依從性和舒適度
發(fā)明內容

本發(fā)明通過大量的試驗優(yōu)選了 GMl微球制劑的組分配比，優(yōu)化了制備工藝，提供了一種注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉，該制劑為皮下注射微球，由O. 05 O. 15重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉(GM-I)、0. I O. 5重量份的明膠和I 10重量份的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)組成。
本發(fā)明對單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉的含量進行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉含有O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉(GM-I)。本發(fā)明對明膠的含量進行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉含有O. 3重量份的明膠。本發(fā)明對聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)的含量進行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉含有5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)。本發(fā)明對聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)的分子量進行了優(yōu)選，優(yōu)選地，上述聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)的分子量為6000 35000，更優(yōu)選分子量為6000。本發(fā)明對聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)中丙交酯與乙交酯的比例進行了優(yōu)選，優(yōu)選 地，上述聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)中丙交酯與乙交酯的比例為50/50或65/35或75/25，更優(yōu)選丙交酯與乙交酯的比例為75/25。本發(fā)明還優(yōu)化了一種注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉的制備方法將處方量的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉和明膠溶于2 6體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將處方量的聚乳酸-羥基乙酸溶解于30 60體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5 10重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500 1000份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min，3000 6000r/min保持4h揮去二氯甲烷，10000r/min高速離心，使用注射用水洗滌3 7次后分裝，冷凍干燥即得。在微球制劑中有效成分的載藥量不應過低，否則對患者給藥時，注射微球的量過大，會給患者造成疼痛等不必要的副作用；相反如果載藥量過大，在對患者給藥時，藥物突釋較為嚴重，容易造成藥物過量。本發(fā)明人通過大量試驗研究得知，油相中聚乳酸羥基乙酸濃度的增加可以提高油相的黏度，減少單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉向外水相的流失，提高了載藥量和包封率，但當其濃度達到一定水平后，再提高濃度反而會降低載藥量，本發(fā)明在微球制備過程中對水相(包含內水相和外水相)與油相中的各組分配比以及水相與油相的體積比、初乳與聚乙烯醇溶液體積比進行了優(yōu)選，提高了微球的包封率，載藥量提高至60. 8 72. 6%。制備所得的微球粒徑若是過小，難以維持長時間的藥效，同時有可能阻塞毛細血管，影響微循環(huán)，而粒徑過大，初期釋放太慢，達不到治療有效血藥濃度，聚乙烯醇溶液濃度提高可以增加外水相的黏度，使微球更加容易形成球狀，明顯改善了該制劑的微球形態(tài)。通過本發(fā)明所制備得到的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉微球跨距I 5，平均粒徑5 50 μ m,優(yōu)選粒徑15 23 μ m,如此既可以使本微球達到緩釋的效果，又能保證注射入體內后不影響血液循環(huán)。本發(fā)明制備所得的制劑還需要使用注射用水洗滌3 7次，以便去除微球表面的聚乙烯醇，減少了聚乙烯醇對人體的危害；同時本發(fā)明的微球制劑使用注射用水洗滌后，不需要添加賦形劑，直接分裝凍干即得。本發(fā)明所公開的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉，是一種皮下注射微球，通過優(yōu)選處方中的組分配比，優(yōu)化制備方法，促使有效成分單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉隨著載體材料聚乳酸羥基乙酸的溶蝕降解逐漸釋放，可以長時間維持有效濃度，起到長效緩釋作用，增加了患者順應性。通過本發(fā)明所制備得到的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉微球跨距I 5，平均粒徑5 50 μ m，優(yōu)選粒徑15 23 μ m,包封率> 85. 7%,且最高達到93. 2% ;載藥量> 60.8%，最高達到72.6%，體外釋放度試驗表明在開始I小時內的釋放量低于30%，微球的體外釋放時間可持續(xù)14天，單次給藥量明顯減少，降低了異物感，改善了病人的生活質量，避免了每日給藥的缺陷。通過本發(fā)明制備的微球注射劑，重現(xiàn)性好，包封率及載藥量高、藥物釋放持續(xù)而穩(wěn)定，可以長時間維持有效血藥濃度，解決了常規(guī)制劑帶來的血藥濃度波動的問題。


圖I、GMl微球體外累積釋放曲線
具體實施例方式為了更好的說明本發(fā)明，通過實施例進一步闡述本發(fā)明，但是并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例中。實施例I、注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶于4體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量6000)溶解于40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次后分裝,冷凍干燥即得。實施例2、注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶于4體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量20000)溶解于40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次后分裝,冷凍干燥即得。實施例3、注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉
將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶于4體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量35000)溶解于40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將評1相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次后分裝,冷凍干燥即得。實施例4、注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶于4體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為65/35，分子量6000)溶解于40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將評1相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次后分裝,冷凍干燥即得。實施例5、注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉
將O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. 3重量份的明膠溶于4體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將5重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為50/50，分子量6000)溶解于40體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 5000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌5次后分裝,冷凍干燥即得。實施例6、注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉將O. 05重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. I重量份的明膠溶于2體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將I重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量6000)溶解于30體積份的二氯甲烷中作為油
(O)相；將5重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 3000r/min保持4h揮去二氯甲燒，10000r/min高速離心,使用注射用水洗滌3次后分裝,冷凍干燥即得。實施例7、注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉將O. 15重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. 5重量份的明膠溶于6體積份的水中，溶解并混勻作為內水(Wl)相；將10重量份的聚乳酸-羥基乙酸(聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25，分子量6000)溶解于60體積份的二氯甲烷中作為油(O)相；將10重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的1000份的注射用水中作為外水(W2)相；將Wl相緩慢滴入到O相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到W2相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 6000r/min保持4h揮去二氯甲烷，10000r/min高速離心，使用注射用水洗滌7次后分裝，冷凍干燥即得。實施例8.注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉的理化性質和釋放行為試驗8. I微球形態(tài)測定凍干所得微球用注射用水分散后，通過光學顯微鏡及攝像系統(tǒng)觀察微球的形態(tài)并計算微球粒徑。8. I. I微球形態(tài)本發(fā)明所制成的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉微球表面光滑或有少量小孔。8. I. 2微球粒徑跨距在I 5之間，大部分分布在5. O 50. O μ m范圍內，表明微球粒徑分布均勻。實施例1-7所制備得到的微球粒徑的具體檢測數(shù)據(jù)見表I。8. 2包封率測定包封率(EE)是指微球中的藥物量占總投藥量的百分率。包封率低，則藥物的損失大，成本增加，所以包封率是微球最重要的指標。本發(fā)明通過離心沉淀微球后，將上清液與微球洗液合并，將合并液過O. 45 μ m的微孔濾膜，通過HPLC法測定GMl的含量，通過以下公式計算包封率包封率％ =[(投入藥物總量-上清液體含藥量)/投入藥物總量]X 100%實施例1-7所制備得到的微球包封率測定的具體數(shù)據(jù)見表I。8. 3微球載藥量載藥量(DL)是指微球中所含藥物的重量百分率，是評價微球質量的重要指標，直 接關系到制劑的產業(yè)化和臨床應用。載藥量通常按下式計算載藥量(％ )=(微球中藥物含量/微球重量)*100%在本發(fā)明中，我們實驗具體方法為將合并液過O. 45 μ m的微孔濾膜，通過HPLC法測定GMl的含量，通過以下公式計算微球的載藥量載藥量％=(體系中投入藥物總量-合并液中藥物量/微球質量)*100%實施例1-7所制備得到的微球載藥量的具體數(shù)據(jù)見表I。表5微球形態(tài)與包封率
權利要求
1.一種注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉，其特征在于它由O. 05 O. 15重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉、O. I O. 5重量份的明膠和I 10重量份的聚乳酸-羥基乙酸組成。
2.根據(jù)權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉，其特征在于它含有O. I重量份的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉。
3.根據(jù)權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉，其特征在于它含有O.3重量份的明膠。
4.根據(jù)權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉，其特征在于它含有5重量份的聚乳酸-羥基乙酸。
5.根據(jù)權利要求I所述的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉，其特征在于聚乳酸-羥基乙酸的分子量為6000 35000。
6.根據(jù)權利要求5所述的聚乳酸-羥基乙酸，其特征在于聚乳酸-羥基乙酸的分子量為 6000。
7.根據(jù)權利要求I所述的聚乳酸-羥基乙酸，其特征在于聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為50/50、65/35或75/25。
8.根據(jù)權利要求7所述的聚乳酸-羥基乙酸，其特征在于聚乳酸-羥基乙酸中丙交酯與乙交酯的比例為75/25。
9.一種注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉的制備方法，其特征在于將權利要求I所述的單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉和明膠溶于2 6體積份的水中，溶解并混勻作為內水相；將權利要求I所述的聚乳酸-羥基乙酸溶解于30 60體積份的二氯甲烷中作為油相；將5 10重量份的聚乙烯醇溶解于80°C的500 1000份的注射用水中作為外水相；將內水相緩慢滴入到油相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min后，冷卻到10°C，作為初乳，并加入到外水相中，15000r/min高速振蕩乳化約3 5min, 3000 6000r/min保持4h揮去二氯甲烷，10000r/min高速離心，使用注射用水洗滌3 7次后分裝，冷凍干燥即得。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉及其制備方法。本發(fā)明的注射用單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉包含GM1、明膠和PLGA。通過本發(fā)明制備的微球注射劑，重現(xiàn)性好，包封率高，提高了載藥量，藥物釋放持續(xù)而穩(wěn)定，單次給藥量明顯減少，降低了異物感，可以長時間維持有效血藥濃度，避免了每日給藥的缺陷，改善了病人的生活質量，解決了常規(guī)制劑帶來的血藥濃度波動的問題。
文檔編號A61K9/08GK102641281SQ201110043830
公開日2012年8月22日 申請日期2011年2月19日 優(yōu)先權日2011年2月19日
發(fā)明者馮中, 張麗萍, 石其德, 趙志全, 趙震震 申請人:山東新時代藥業(yè)有限公司