專利名稱：抗btla的完全人抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總的來說涉及結(jié)合BTLA的抗體或抗原結(jié)合片段及其用途。更具體而言，本發(fā)明涉及識別人BTLA并調(diào)節(jié)其特別是在炎性、自體免疫性和增殖性病癥中的活性的完全人抗體。
背景技術(shù)：
免疫系統(tǒng)起保護個體免遭感染原(例如細菌、多細胞生物和病毒)以及癌癥的作用。該系統(tǒng)包括若干類型的淋巴樣細胞和骨髓細胞，例如單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞(DC)、嗜酸性粒細胞、T細胞、B細胞和嗜中性粒細胞。這些淋巴樣細胞和骨髓細胞常常產(chǎn)生稱為細胞因子的信號轉(zhuǎn)導蛋白。免疫應答包括炎癥，即免疫細胞在全身或在機體特定部位蓄積。在響應感染因素或外源物質(zhì)時，免疫細胞分泌細胞因子，后者進而調(diào)節(jié)免疫細胞增殖、發(fā)育、分化或遷移。例如在涉及過度炎癥時，像自身免疫病癥一樣，免疫應答可產(chǎn)生病理性后果(參見例如 Abbas 等(主編)(2000)Cellular and Molecular Immunology,ff. B. Saunders Co.，Philadelphia, PA ；Oppenheim 和 Feldmann(主編)(2001)CytokineReference, Academic Press, San Diego, CA ;von Andrian 和 Mackay(2000)New Engl.J. Med. 343 :1020-1034 ；Davidson 和 Diamond(2001)New Engl. J. Med. 345 :340-350)。正性和負性共刺激信號在B細胞和T細胞活性的調(diào)節(jié)中起決定性作用，而且已證實介導這些信號的分子是免疫調(diào)節(jié)劑的有效靶標。除T細胞受體(TCR)參與(engagement)夕卜，幼稚T細胞的最佳活化也需要正性共刺激，而負性共刺激則被認為是自身免疫耐受性的獲得以及效應T細胞功能的終止所需要的。與抗原呈遞細胞(APC)表面上的B7. I或B7. 2相互作用時，原型(prototypic)T細胞共刺激分子⑶28響應TCR參與而發(fā)出促進T細胞增殖和分化的信號，但是CD28同源物細胞毒性T淋巴細胞抗原-4(CTLA-4)介導T細胞增殖和效應子功能的抑制(Chambers 等,Ann. Rev. Tmmunol. ,19 :565-594, 2001 ;Egen 等,NatureImmunol, 3 :611-618, 2002)。已發(fā)現(xiàn)與B7家族同源的若干新分子(Abbas等，Nat. Med. , 5 :1345-6,1999 ；Coyle 等，Nat. Immunol. ,2 :203-9, 2001 ；Carreno 等，Annu. Rev. Immunol.,20 :29-53,2002 ;Liang 等，Curr. Opin. Immunol. , 14 :384_90，2002)，并且剛開始闡明它們在T細胞活化中的作用。這些新的共刺激配體包括B7h、PD-LU PD-L2和B7-H3。B7h(Swallow等，Immunity, 11 :423-32,1999)亦稱為 B7RP-1 (Yoshinaga 等，Nature, 402 :827-32,1999),GL50(Ling 等，J. Immunol.，164 :1653-7，2000)、B7H2 (Wang 等，Blood，96 :2808-13,2000)和LICOS (Brodie等，Curr. Biol.，10 :333-6, 2000)，其與活化T細胞上的可誘導的共刺激因子(ICOS)結(jié)合，并共刺激T細胞增殖和細胞因子(例如白介素4(IL-4)和IL-10)的產(chǎn)生。PD-Ll (Freeman 等，J. Exp. Med.，192 :1027-34，2000)亦稱為 B7-H1 (Dong 等，Nat. Med.，5，1365-9，1999)和 PD-L2 (Latchman 等，Nat. Immunol.，2 :261-8,2001)亦稱為B7-DC (Tseng等，J. Exp. Med.，193，839-46，2001)，兩者與T細胞和B細胞上的程序性死亡I (PD-I)受體結(jié)合。最后，B7-H3與目前尚未了解的活化T細胞上的反受體結(jié)合，據(jù)報道提高⑶4+T輔助(Th)細胞和CD8+細胞毒性T淋巴細胞(CTL或Tc)的增殖并選擇性提高IFN- Y表達(Chapoval 等，Nat. Tmmunol, 2, 269-74, 2001 ；Sun 等，J. Immunol.，168,6294-7, 2002)。由于具有T細胞共刺活化性的其它分子的重大生物學重要性以及能夠影響它們的活性的作用劑的治療潛力，因此其鑒定令人極感興趣。能夠調(diào)節(jié)共刺激信號并由此能夠調(diào)節(jié)CD8+CTL和CD4+Th細胞的活化和/或效應子功能的作用劑可應用于調(diào)節(jié)免疫應答，并且是十分需要的。
尤其是已知許多自身免疫病癥涉及自體反應性T細胞和自身抗體。非常需要能夠在不損害免疫系統(tǒng)抵御病原體的能力的情況下抑制或消除自體反應性淋巴細胞的作用劑。相反，許多癌癥免疫療法(例如過繼免疫療法)使腫瘤特異性T細胞群擴繁，并指引其攻擊并殺死腫瘤細胞(Dudley 等,Science 298 :850-854, 2002 ； Par doll, NatureBiotech. ,20 :1207-1208,2002 ;Egen 等，Nature Immunol.，3 :611-618,2002)。也非常需要能夠提高腫瘤攻擊的作用劑。另外，針對不同抗原(例如微生物抗原或腫瘤抗原)的免疫應答雖然可檢出，但幅度常常不足以提供針對表達這些抗原的作用劑(例如感染性微生物或腫瘤細胞)介導的疾病過程的保護。通常需要聯(lián)合抗原將用作在受試者中提高對抗原的免疫應答的佐劑給予受試者。在某些情況下，還需要抑制對抗原的正常免疫應答。例如，在接受移植的患者中需要抑制正常的免疫應答，并且非常需要具有這種免疫抑制活性的作用劑。共刺激信號，特別是正性共刺激信號，還在B細胞活性的調(diào)節(jié)中起作用。例如，除受抗原刺激以外，B細胞活化和生發(fā)中心B細胞的存活也需要T細胞衍生信號。存在于輔助T細胞表面上的⑶40配體與B細胞表面上的⑶40相互作用，并在B細胞中介導許多這種T細胞依賴性作用。蛋白質(zhì)BTLA(B和T淋巴細胞弱化子)是受體⑶28家族的成員，該家族還包括⑶28、CTLA-4、ICOS和TO-I。根據(jù)在加入單克隆抗體后對提高T細胞增殖的功能作用，發(fā)現(xiàn)了該家族最初的成員 CD28 和 ICOS(Hutloff 等(1999)Nature 397 :263-266 ；Hansen 等(1980) Immunogenics 10:247-260)。通過篩選THl細胞中的差別表達發(fā)現(xiàn)了 BTLA。另外，BTLA被描述為提供類似于CTLA-4的負性抑制信號。在激動劑抗BTLA Mab存在下，抗CD3和抗CD28活化的T細胞顯示IL-2的產(chǎn)生和增殖降低(Kreig等，J. Immunol.，175，6420-6472，2005)。缺乏完整BTLA基因的小鼠顯示在免疫后DNP-KLH的效價較高，且對EAE的敏感性提高(Watanabe等,Nat. Immunol, 4,670-679, 2003)。已經(jīng)表明HVEM(皰疫病毒進入介體)是 BTLA 的配體(Scully 等(2005)Nat. Immunol. 6 :90-98 ；Gonzalez 等(2005)Proc. Nat.Acad. Sci. U. S. A. 102 :1116-1121)。因此，需要識別BTLA的作用劑、特別是識別BTLA的抗體及其結(jié)合作用劑和使用這些作用劑的方法。抗體可用作治療藥物。某些抗體在體內(nèi)用作治療藥物時可引起不需要的抗體免疫原性。因為大多數(shù)單克隆抗體來源于嚙齒動物，所以在人中重復使用導致產(chǎn)生針對治療性抗體(例如，人抗小鼠抗體或HAMA)的免疫應答。這類免疫應答至少導致喪失治療功效，而最高則導致潛在致死過敏反應。降低嚙齒動物抗體的免疫原性的一種方法包括嵌合抗體的產(chǎn)生，其中將小鼠可變區(qū)(Fv)與人恒定區(qū)融合(Liu等(1987)Proc. Natl. Acad. Sci. USA84 :3439-43)。然而，用人可變區(qū)和小鼠恒定區(qū)的雜合體注射的小鼠發(fā)生針對人可變區(qū)的強抗抗體應答，這就表明這種嵌合抗體中的完整哨齒動物Fv區(qū)的保留仍可在患者中引起有害的免疫原性。另外，將嚙齒動物可變結(jié)構(gòu)域的互補決定區(qū)(CDR)環(huán)移植到人構(gòu)架上(即人源化)已被用于進一步將哨齒動物序列減至最低。Jones等(1986)Nature 321 522 ；Verhoeyen等(1988) Science 239:1534。然而，⑶R環(huán)交換仍不能均勻產(chǎn)生具有與起始抗體相同的結(jié)合性質(zhì)的抗體。在人源化抗體中，常常還需要構(gòu)架殘基(FR)(參與CDR環(huán)支持的殘基)改變以保持抗原結(jié)合親和力。Kabat等(1991) J. Immunol. 147 :1709。雖然已經(jīng)報道了許多人源化抗體構(gòu)建體中CDR移植和構(gòu)架殘基保持的使用，但是難以預測特定序列是否可產(chǎn) 生具有所需結(jié)合性質(zhì)以及間或具有生物學性質(zhì)的抗體。參見例如Queen等(1989)Proc.Natl. Acad. Sci. USA 86 :10029 ；Gorman 等(1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 :4181 ；以及Hodgson (1991) Biotechnology (NY) 9 :421_5。此外，大部分現(xiàn)有研究對動物輕鏈和重鏈可變序列使用不同人序列，致使這種研究的預測性成問題。已在使用已知抗體的序列，或者更通常使用具有已知X射線晶體結(jié)構(gòu)的抗體例如抗體NEW和KOL的序列。參見例如Jones等，同上；Verhoeyen等，同上；以及Gorman等，同上。已經(jīng)報道了少數(shù)人源化構(gòu)建體的確切序列信息。存在對用于治療人病癥(例如炎性病癥、自身免疫病癥和增殖性病癥)的抗BTLA抗體、特別是抗BTLA單克隆抗體的需要。這種抗體可優(yōu)選在人受試者中具有低免疫原性，允許重復給予而無不良免疫應答。發(fā)明概述本發(fā)明涉及在人受試者中具有一種或多種以下所需性質(zhì)的抗人BTLA抗體包括高結(jié)合親和力、中和活性、良好的藥代動力學和低抗原性。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的抗體在治療疾病中的用途。在某些實施方案中，本發(fā)明涉及與人B和T淋巴細胞弱化子(BTLA)結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包括一種或多種選自以下的性質(zhì)a)不阻斷BTLA與皰疹病毒進入介體(HVEM)結(jié)合；b)與食蟹猴BTLA交叉反應；c)與人BTLA結(jié)合的Kd為至多約2. 4X 10_9 ；和d)在測量B或T細胞活化的體外測定中EC5tl約為lO-lOOnM。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及與人BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包括選自以下的一種或多種性質(zhì)a)阻斷BTLA與HVEM結(jié)合；b)與食蟹猴BTLA交叉反應；和c)與人BTLA結(jié)合的Kd為至多約4. 6X 1θΛ在其它實施方案中，本發(fā)明涉及選自hu Mab8D5和hu Mab8A3的與BTLA結(jié)合的分離激動劑抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體與BTLA特異性結(jié)合且不阻斷與HVEM結(jié)合。在其它實施方案中，本發(fā)明涉及選自hu Mab21H6和hu Mabl9A7的與BTLA結(jié)合的分離激動劑抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體與BTLA特異性結(jié)合且還阻斷與HVEM結(jié)合。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一個選自SEQ ID NO :12、13和14的Vl⑶R結(jié)構(gòu)域和至少一個選自SEQ IDNo. :5、6和7的Vh CDR結(jié)構(gòu)域。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及與BTLA結(jié)合的分離拮抗劑抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一個選自SEQ ID NO :26、27、28的' ⑶R結(jié)構(gòu)域和至少一個選自SEQID NO :19、20 和 21 的 Vh CDR 結(jié)構(gòu)域。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其中(a)重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO :11(8D5重鏈)的氨基酸序列；和
(b)輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID N0:18(8D5輕鏈)的氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含以下的分離抗體或其抗原結(jié)合片段(a)包含SEQ ID NO 5(8D5HCDR1)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDRl ； (b)包含SEQ ID NO 6 (8D5HCDR2)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDR2 ; (c)包含SEQ ID NO :7 (8D5HCDR3)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)⑶R3 ； (d)包含SEQ ID NO :12 (8D5IXDR1)的氨基酸序列的輕鏈可變 區(qū)CDRl ；(e)包含SEQ ID NO 13 (8D5LCDR2)的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)CDR2 ;和(f)包含SEQ ID N0:14(8D5LCDR3)的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)CDR3 ;其中抗體與BTLA特異性結(jié)合且不阻斷與HVEM結(jié)合。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含以下的分離抗體或其抗原結(jié)合片段(a)為人VH基因(SEQ ID NO :8)[編碼8D5]的產(chǎn)物或來源于該基因的重鏈可變區(qū)；和(b)為人VK基因(SEQ ID N0:15)[編碼8D5]的產(chǎn)物或來源于該基因的輕鏈可變區(qū)；其中抗體與BTLA特異性結(jié)合。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體與包含以下序列的參比抗體交叉競爭結(jié)合BTLA : (a)包含SEQ ID NO :9或SEQ ID NO 11(8D5重鏈)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；(b)包含SEQ ID N0:16或SEQ ID N0:18(8D5輕鏈)的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；其中分離單克隆抗體或其抗原片段是BTLA激動劑。在某些實施方案中，重鏈和輕鏈通過撓性接頭連接形成單鏈抗體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段是單鏈Fv抗體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段是Fab抗體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段是Fab'抗體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段是(Fab' )2抗體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段是完全人單克隆抗體或完全人重組抗體。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段降低BTLA活性和/或信號轉(zhuǎn)導。在某些實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段提高BTLA活性和/或信號轉(zhuǎn)導。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含本文所述任何抗體或抗原結(jié)合片段的Vl結(jié)構(gòu)域或Vh結(jié)構(gòu)域的分離多肽。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及編碼本文所述任何抗體或抗原結(jié)合片段的Vl結(jié)構(gòu)域或Vh結(jié)構(gòu)域的分離核酸。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含本文所述一種或多種抗體或抗原結(jié)合片段和藥學上可接受的載體或稀釋劑的組合物。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及治療受試者的因BTLA表達和/或活性降低所引起的病況的方法，所述方法包括將有效量的本文所述藥物組合物給予受試者。特別地，以T細胞或B細胞的存在或活性為特征的任何疾病或病癥可通過BTLA激動劑抗體治療(即涉及BTLA陽性免疫細胞存在的疾病或病癥可通過活化BTLA受體功能來控制或治療)。在某些實施方案中，一種或多種抗體或其抗原結(jié)合片段選自hu Mab8D5、hu Mab8A3、hu Mab21H6、hu Mabl9A7 或 hu Mab4C7。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及治療受試者的炎性病癥或自身免疫病癥的方法，該方法包括將有效量的本文所述抗體或抗原結(jié)合片段給予受試者。在某些實施方案中，炎性病癥或自身免疫病癥選自炎性腸病癥(例如克羅恩病(Crohn’ s disease)、潰瘍性結(jié)腸炎和炎性腸病)、炎性纖維化(例如硬皮病、肺纖維化和肝硬化)、類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、哮喘(包括變應性哮喘)、變態(tài)反應、慢性阻塞性肺病(COPD)、多發(fā)性硬化、銀屑病、眼色素層炎、移植物抗宿主病(GVHD)、青少年早發(fā)性I型糖尿病、移植排斥、SLE和斯耶格倫綜合征(Sj0gren’s syndrome)。這種治療方法還可包括給予一種或多種其它的治療藥物，例如免疫抑制劑或抗炎劑。在另外的其它實施方案中，病癥為類風濕性關(guān)節(jié)炎。
在另外的其它實施方案中，炎性腸病癥選自克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎和炎性腸病。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及治療移植排斥和/或移植物抗宿主病的方法。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及治療I型糖尿病的方法。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述抗體或抗原結(jié)合片段在制備治療受試者的炎性病癥或自身免疫病癥的藥物中的用途。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述抗體或抗原結(jié)合片段在制備降低BTLA的活性的藥物中的用途。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及提高受試者的免疫應答的方法，該方法包括將有效量的藥物組合物給予受試者。在某些實施方案中，一種或多種抗體或其抗原結(jié)合片段是hu Mab4C7。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述拮抗劑抗體在制備提高BTLA的活性的藥物中的用途。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述任何抗體或抗體片段用于診斷應用中的用途。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含本文所述任何抗體或抗原結(jié)合片段的藥盒。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含BTLA和本文述任一種抗體或抗原結(jié)合片段的復合物。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及表達載體，其包含編碼多肽的分離核酸，所述多肽編碼本文所述任何VH或VL鏈。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含本文所述表達載體的宿主細胞。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及產(chǎn)生本文所述抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，該方法包括(a)在表達核酸序列的條件下，將本文所述宿主細胞在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，由此產(chǎn)生包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的多肽；和
(b)從宿主細胞或培養(yǎng)基中回收多肽。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體與包含以下序列的參比抗體交叉競爭結(jié)合BTLA (a)包含SEQ ID NO 23 (4C7重鏈)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；(b)包含SEQ ID NO 30 (4C7輕鏈)的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；其中分離單克隆抗體或其抗原片段是BTLA拮抗劑。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及編碼包含存在于輕鏈可變區(qū)中的CDR-L1、⑶R-L2和⑶R-L3的免疫球蛋白多肽的分離核酸，所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 18所示
氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含存在于輕鏈可變區(qū)中的CDR-L1、 ⑶R-L2和⑶R-L3的分離免疫球蛋白多肽，所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 18所示氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及編碼包含存在于重鏈可變區(qū)中的⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3的免疫球蛋白多肽的分離核酸，所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 11所示
氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含存在于重鏈可變區(qū)中的⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3的分離免疫球蛋白多肽，所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO : 11所示氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及編碼包含存在于輕鏈可變區(qū)中的CDR-L1、⑶R-L2和⑶R-L3的免疫球蛋白多肽的分離核酸，所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 32所示
氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含存在于輕鏈可變區(qū)中的CDR-L1、⑶R-L2和⑶R-L3的分離免疫球蛋白多肽，所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 32所示氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及編碼包含存在于重鏈可變區(qū)中的⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3的免疫球蛋白多肽的分離核酸，所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 25所示
氨基酸序列。在另外的其它實施方案中，本發(fā)明涉及包含存在于重鏈可變區(qū)中的⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3的分離免疫球蛋白多肽，所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 25所示氨基酸序列。在某些實施方案中，這些核酸構(gòu)建體和/或多肽可用于制備抗體的方法。附圖簡述圖IA-C表示hu Mab 8D5的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的序列。圖IA表示VH鏈的成熟氨基酸序列和編碼核酸序列。CDR1、CDR2和CDR3序列用氨基酸序列上方的波紋線表示。圖IB表示VL鏈的成熟氨基酸序列和編碼核酸序列。⑶R1、⑶R2和⑶R3序列用氨基酸序列上方的波紋線表示。圖IC表示Hu Mab8D5的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的序列特征。圖2A-C表示hu Mab 4C7的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的序列。圖2A表示VH鏈的成熟氨基酸序列和編碼核酸序列。CDR1、CDR2和CDR3序列用氨基酸序列上方的波紋線表示。圖2B表示VK的成熟氨基酸序列和編碼核酸序列。⑶R1、⑶R2和⑶R3序列用氨基酸序列上方的波紋線表示。圖2C表示hu Mab4C7的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的序列特征。圖3A-D表示hu Mab8D5和hu Mab4C7的結(jié)合和交叉反應性特征。圖3A表示huMab8D5對在CHO細胞上表達的人BTLA的結(jié)合概況。圖3B表示hu Mab8D5對在CHO細胞上表達的食蟹猴BTLA的結(jié)合概況。圖3C表示hu Mab4C7對在CHO細胞上表達的人BTLA的結(jié)合概況。圖3D表示hu Mab4C7對CHO細胞上表達的食蟹猴BTLA的結(jié)合概況。圖4A-B表示測試抗體阻斷人HVEM與表達人BTLA的CHO細胞結(jié)合的能力的結(jié)果。圖4A表示hu Mab4C7阻斷人HVEM與表達人BTLA的CHO細胞結(jié)合。圖4B表示hu Mab8D5不能阻斷人HVEM與表達人BTLA的CHO細胞結(jié)合。圖5圖示hu Mab8D5以及hu Mab8D5Fab’片段抑制抗⑶3誘導的人原始T細胞增殖。
圖6A-D圖示hu Mab8D5和hu Mab4C7對SEB誘導的人和食蟹猴T細胞應答的作用。圖7A-B圖示hu Mab8D5減弱對破傷風類毒素攻擊的人記憶T細胞應答。圖8A-B圖示hu Mab4C7提高對破傷風類毒素攻擊的人記憶T細胞應答。圖9圖示hu Mab8D5抑制人B細胞功能。

圖10A-B圖示hu Mab8D5抑制外周血B細胞趨化因子的產(chǎn)生。圖11圖示hu Mab8D5不自主刺激健康供體血液中的免疫活性。圖12A-B為蛋白質(zhì)印跡，表示hu Mab8D5和hu Mab4C7與BTLA結(jié)合(圖12A)，且hu Mab8D5減少TCR ξ磷酸化(圖12Β)。圖13Α-Β圖示hu Mab8D5以劑量依賴性方式抑制SEB應答和B細胞增殖。圖14A-D圖示受測抗BTLA激動劑抗體不會在人PBMC培養(yǎng)物中引起細胞因子風暴(storm)，正如在人PBMC培養(yǎng)物中測量的缺乏IL_2(圖14A、B)、IFNy (圖14C)和TNF α (圖14D)的產(chǎn)生一樣。圖15圖示第28天ELISA結(jié)果，表明hu Mab8D5在SCIDhu SPL小鼠中抑制人抗TT記憶IgG應答。圖16圖示第28天ELISA結(jié)果，表明hu Mab8D5在SCIDhu SPL小鼠中抑制人總IgG應答。圖17A-B圖示各個治療小鼠的效價，說明了與同種型對照(圖17B)相比，huMab8D5在SCIDhu SPL小鼠中抑制人抗TT記憶IgG應答(圖17A)。圖18A-B圖示各個治療小鼠的效價，表明了與同種型對照(圖18B)相比，huMab8D5在SCIDhu SPL小鼠中抑制人總IgG應答(圖18A)。發(fā)明詳述哺乳動物免疫系統(tǒng)已發(fā)展控制T淋巴細胞和B淋巴細胞的潛在有害活性的若干途徑。它們包括各種細胞因子-受體途徑以及涉及受體(像^28、(1'1^-4、？0-1和^'1^)的共刺激途徑。盡管CD28-B7相互作用是正性共刺激途徑的實例(即CD28觸發(fā)提高對抗原特異性觸發(fā)物的T細胞應答)，但其它3種受體表示抑制性共刺激途徑。CTLA-4、PD-1和BTLA顯示重疊但獨特的表達概況，并以非豐余方式限制T淋巴細胞和B淋巴細胞以及其它免疫細胞的活性。(參見 Deppong 等，JImmunol 2006, Tao 等，J Immunol 2005)。雖然 CTLA-4與⑶28競爭結(jié)合B7. I和B7. 2 (⑶80和⑶86)并為淋巴結(jié)和脾中的幼稚T細胞活化設定原始閾值，但是ro-Ι和BTLA各有自己獨特的配體(分別為ro-Ll/-L2和HVEM)，并且似乎控制外周T細胞穩(wěn)態(tài)和再活化。(參見Krieg等，Nat Immunol 2007。)BTLA下調(diào)B細胞和T細胞活化如其名稱所表示的一樣，B和T淋巴細胞弱化子(BTLA)在靜息和活化的B淋巴細胞和T淋巴細胞兩者上表達。BTLA是I型跨膜糖蛋白，具有含有若干抑制酪氨酸基序的胞質(zhì)尾(Watanabe，2003)。BTLA具有⑶28/CTLA-4家族成員的某種結(jié)構(gòu)相似性，但幾個因素使之成為獨特成員。人BTLA含有下列表征的結(jié)構(gòu)域Ig包外結(jié)構(gòu)域殘基51-117 ;跨膜結(jié)構(gòu)域殘基153-173 ；ITIM結(jié)構(gòu)域殘基255-260 ；以及ITSM結(jié)構(gòu)域殘基280-285 (對于人SEQ ID NO 2) 0 ITIM表示基于免疫受體酪氨酸的抑制基序，而ITSM表示基于免疫受體酪氨酸的轉(zhuǎn)換基序。相當于SEQ ID NO 2的殘基43-134的BTLA Ig中間類型(I類類型)胞外結(jié)構(gòu)域負責配體結(jié)合，且不存在于⑶28/CTLA-4家族的其它成員中。另外，BTLA的配體不是B7 家族成員，倒不如說它是TNFR超家族受體皰疹病毒進入介體(HVEM) (Sedy，2005)。HVEM在外周B細胞和T細胞及單核細胞上表達，并且已解析了與BTLA結(jié)合的HVEM的晶體結(jié)構(gòu)(Compaan,2005)。若干體內(nèi)研究證實了 BTLA在淋巴細胞應答中的抑制作用。由Murphy與同事(Washington University St. Louis)制備的BTLA缺陷型小鼠在響應T依賴性抗原產(chǎn)生的IgG方面表現(xiàn)出3倍增加。另外，自BTLA+小鼠分離的T細胞和B細胞對分別使用-CD3和抗IgM進行抗原-受體刺激顯示較大的增殖應答(Watanabe，2003)。在過量表達研究中，發(fā)現(xiàn)BTLA與B細胞受體復合物以及與T細胞受體締合。與該研究結(jié)果一致，在BTLA缺陷型淋巴細胞中，使用Con A(T細胞)或LPS(B細胞)進行抗原-受體非依賴性刺激不受影響，而且使用抗BTLA抗體也不能被調(diào)節(jié)。已經(jīng)表明BTLA敲除小鼠隨時間推移發(fā)生自發(fā)性自身免疫病，且壽命縮短(Oya，2008)。BTLA被HVEM連接導致T細胞活化和增殖的下調(diào)(Sedy，2005)。BTLA敲除小鼠顯示在自身免疫性腦脊髓炎(EAE)和變應性氣道炎癥模型中疾病嚴重程度加劇，這兩種模型均有賴于T細胞活性(Watanabe，2005 ;D印pong，2006)。也已表明了人BTLA基因中的SNP與RA易感性之間的聯(lián)系(Lin，2006)。然而，有關(guān)BTLA信號轉(zhuǎn)導在病理狀態(tài)中的作用仍是知之甚少。因此，對于自身免疫病和某些增殖性疾病，存在開發(fā)利用BTLA在淋巴細胞應答中的抑制作用而同時允許BTLA-HVEM結(jié)合的治療的持續(xù)需要。激動劑BTLA抗體特別適于這種作用。在選擇利用Ultimab平臺產(chǎn)生的200多種mAb的過程中，鑒定出許多激動劑抗體和拮抗劑BTLA抗體。200多種mAb之中，鑒定出活化抑制性BTLA受體功能的幾種抗體(即激動劑抗體)，包括hu Mab8D5、hu Mab8A3、huMab21H6 和 hu Mabl9A7。Hu Mab8D5 和 hu Mab8A3 是不阻斷 HVEM 配體與 BTLA 結(jié)合的 BTLA激動劑。Hu Mab21H6和hu Mabl9A7活化抑制性BTLA受體功能，同時還阻斷HVEM配體與BTLA結(jié)合。這些激動劑抗體對BTLA的結(jié)合親和力約為12_14nM，并且還在人供體血液中抑制T細胞和B細胞應答，其EC50約為30-100nM。當作為IgG4和單價Fab’片段重新表達時，hu Mab8D5體外保持其免疫抑制活性。這些激動劑BTLA抗體也以類似親和力與食蟹猴BTLA結(jié)合，并表明對食蟹猴T細胞應答的等同抑制。然而，這些激動劑抗體不與小鼠BTLA交叉反應。在小鼠藥理學研究中，hu Mab8D5的半壽期為約16天，與對人IgG4的預期一致。這些受體激動劑性mAb體外抑制和阻抑T淋巴細胞和B淋巴細胞活性，而且在體內(nèi)模型系統(tǒng)中也具有這種活性。本發(fā)明的激動劑抗體的特征是具有在不消耗B細胞的情況下通過關(guān)聯(lián)抗原抑制B細胞活化的能力。另外，本發(fā)明的激動劑抗體的特征還在于同時靶向B細胞和T細胞活化的能力。除了上述4種激動劑抗BTLA抗體以外,選擇還鑒定出拮抗劑抗體hu Mab4C7。該抗體具有圖6C-D和圖8A-B中所示的免疫刺激作用，因此預期可用作癌癥治療或用于治療某些病原體感染及用作疫苗的佐劑。預期在癌癥情況下使用BTLA拮抗劑(例如Mab4C7)以刺激免疫應答與這些結(jié)果以及表明在幼稚⑶8+T細胞初敏期間阻斷BTLA-HVEM連接有助于T細胞增殖增加的結(jié)果有關(guān)。(參見Derre等，J. Clin. Invest. 2010，120 :157-167)。至于BTLA激動劑，抑制抗原特異性T細胞應答和B細胞應答兩者的能力可提供預期可用于以下病況的調(diào)節(jié)BTLA活性的方法例如關(guān)節(jié)炎、SLE、斯耶格倫病、潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病以及實體器官移植(即腎、肝和其它器官，包括組織移植)。現(xiàn)有治療有缺點，部分因為只抑制T細胞不足以達到所需效果。本發(fā)明的抗BTLA抗體可通過抑制T細胞應答 和B細胞應答兩者的能力有效用于治療關(guān)節(jié)炎、潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病以及實體器官移植(即腎、肝和其它器官)。在作為IgG4以及單價Fab’片段再表達以保持免疫抑制活性體外和體內(nèi)模型時，本發(fā)明的各種激動劑抗體的能力提供用于新治療的所需特征?？s略語在整個本發(fā)明的詳述和實施例中將使用下列縮略語
ADCC抗體依賴性細胞毒性
BTLAB和T淋巴細胞弱化子
HVEM皰疹病毒進入介體
Hu Mab8D5 完全人單克隆激動劑抗BTLA抗體 Hu Mab8A3 完全人單克隆激動劑抗BTLA抗體 Hu Mab21H6 完全人單克隆激動劑抗BTLA抗體 Hu Mabl9A7 完全人單克隆激動劑抗BTLA抗體 Hu Mab4C7 完全人單克隆拮抗劑抗BTLA抗體 Hu Mab 20H4 完全人單克隆抗BTLA抗體 Hu Mab 15C5 完全人單克隆抗BTLA抗體 CDC依賴補體的細胞毒性
CDR免疫球蛋白可變區(qū)中的互補決定區(qū)，釆用Kabat編號系統(tǒng)定義CHO中國倉鼠卵巢
CTL細胞毒性T淋巴細胞
EC50產(chǎn)生50%功效或結(jié)合的濃度
ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定
FW抗體構(gòu)架區(qū)不包括CDR區(qū)的免疫球蛋白可變
區(qū)
HRP辣根過氧化物酶
IL-2白介素2
IL-5白介素5
IFN干擾素
IC50產(chǎn)生50%抑制的濃度
IgG免疫球蛋白G
KabatElvin A. Kabat首創(chuàng)的免疫球蛋白比對和編號系 統(tǒng)((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版， Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.) mAb或Mab或MAb單克隆抗體
MES2-(N-嗎啉代)乙磺酸
MOA作用機制
NHS正常人血清
PCR聚合酶鏈式反應
PK藥代動力學 SEB葡萄球菌腸毒素B
TT破傷風類毒素
V區(qū)在不同抗體之間的序列中是可變的IgG鏈的區(qū) 段。它在輕鏈中延伸到Kabat殘基109，在重鏈中延伸到113。
VH免疫球蛋白重鏈可變區(qū)
VK免疫球蛋白K輕鏈可變區(qū)定義
為了可以更容易地理解本發(fā)明，某些科技術(shù)語具體定義如下。除非本文獻其它部分有明確定義，否則本文所用的所有其它科技術(shù)語都具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。
本文(包括隨附權(quán)利要求書)所用單數(shù)形式包括其相應的復數(shù)形式，除非文中另有明確規(guī)定。用于細胞或受體的“活化”、“刺激”和“處理”可具有相同含義，例如細胞或受體用配體活化、刺激或處理，除非上下文另外或明確規(guī)定?！芭潴w”包括天然和合成配體，例如細胞因子、細胞因子變體、類似物、突變蛋白和來源于抗體的結(jié)合化合物?！芭潴w”還包括小分子，例如細胞因子的肽模擬物和抗體的肽模擬物。“活化”可指通過內(nèi)部機制以及外部或環(huán)境因素調(diào)節(jié)的細胞活化?！皯?反應”，例如細胞、組織、器官或生物體的應答，包括生化或生理行為(例如生物區(qū)室內(nèi)的濃度、密度、粘附或遷移、基因表達速率或分化狀態(tài))的改變，其中改變與活化、刺激或處理有關(guān)，或者與例如遺傳編程等內(nèi)部機制有關(guān)。分子的“活性”可描述或指該分子與配體或受體的結(jié)合；催化活性；刺激基因表達或細胞信號轉(zhuǎn)導、分化或成熟的能力；抗原活性；調(diào)節(jié)其它分子的活性等。分子的“活性”還可指在調(diào)節(jié)或保持細胞-細胞間相互作用(例如粘附)中的活性，或在保持細胞結(jié)構(gòu)(例 如細胞膜或細胞骨架)中的活性?！盎钚浴币部芍副然睿鏪催化活性]/[mg蛋白質(zhì)]或[免疫活性]/[mg蛋白質(zhì)]、生物區(qū)室中的濃度等?！盎钚浴笨芍赶忍烀庖呦到y(tǒng)或適應性免疫系統(tǒng)的組分的調(diào)節(jié)?！霸鲋郴钚浴卑ù龠M、對以下方面是必需的或與以下方面明確有關(guān)的活性例如正常的細胞分裂以及癌癥、腫瘤、發(fā)育異常、細胞轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)移和血管生成。應用于動物、人、實驗對象、細胞、組織、器官或生物流體的“給予”和“治療”是指使外源藥物、治療藥、診斷藥或組合物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體接觸。“給予”和“治療”可指例如治療、藥代動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的治療包括使試劑與細胞接觸以及使試劑與流體(其中該流體與細胞接觸)接觸?！敖o予”和“治療”還意指體外和離體治療，例如細胞用試劑、診斷、結(jié)合化合物或用另一種細胞的體外和離體治療。術(shù)語“受試者”包括任何生物體，優(yōu)選動物，更優(yōu)選哺乳動物(例如大鼠、小鼠、狗、貓、兔)，最優(yōu)選人。本文所用BTLA激動劑抗體是指與BTLA結(jié)合并加強其對B細胞和T細胞的共抑制信號的抗體。本文所用BTLA拮抗劑抗體是指與BTLA結(jié)合并防止共抑制信號遞送給B細胞和T細胞的抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，可能時，按照Physicians ' DeskReference2003 (Thomson Healthcare ;第57版(2002年11月I日))，將本發(fā)明的組合物給予受試者。在某些實施方案中，可通過侵入性途徑例如通過注射(參見上文)給予抗BTLA抗體或其抗原結(jié)合片段。通過非侵入性途徑(例如口服；例如以丸劑、膠囊劑或片劑口服)給藥也落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的一個實施方案中，經(jīng)靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、動脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)(例如在關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)中)、通過吸入、氣霧劑遞送或腫瘤內(nèi)給予抗BTLA抗體或其抗原結(jié)合片段或其藥物組合物。在某些實施方案中，與以片劑形式口服給予的化療藥物(例如吉非替尼(例如Iressa ))組合，給予抗BTLA抗體或其抗原結(jié)合片段。在另一個實施方案中，化療藥物是靜脈內(nèi)給予的紫杉醇(例如Taxol )。在又一個實施方案中，抗BTLA抗體或其抗原結(jié)合片段與至少一種其它治療藥物組合給予，其它治療藥物例如而不限于針對CTLA-4的其它單克隆抗體(例如AVASTIN(貝伐單抗)、MYL0TARG (吉妥珠單抗)、BEXXAR (托西莫單抗)、RITUXAN (利妥昔單抗)、HERCEPTIN(曲妥珠單抗))，或具有類似作用的蛋白質(zhì)配體；活化抗原呈遞細胞(樹突細胞、巨噬細胞、B細胞、單核細胞)的作用劑，包括I型干擾素(例如干擾素α和β);干擾素Y ;BCG;提供任何和所有形式的腫瘤抗原(包括蛋白質(zhì)抗原、肽抗原、完整細胞裂解物及其衍生物)的作用劑；遺傳編碼抗原(例如腺病毒編碼抗原)；體內(nèi)或離體改變以加強其免疫性質(zhì)的免疫系統(tǒng)的細胞組分(例如自體樹突細胞、淋巴細胞、熱激蛋白等)；化療藥物例如但不限于尤其環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、依托泊苷、阿霉素、紫杉烷類、氟尿嘧啶、阿糖胞苷(AraC)和含鉬藥物?？乖膶嵗≒SA抗原(例如PROSTVAC/TRICOM)和黑素瘤來源的gplOO抗原。也可與以下成分組合給予聯(lián)合藥物細胞因子或生長因子，例如但不限于GM-CSF，或者免疫刺激核苷酸，例如但不限于CpG ODN PF3512676 (亦稱為ProMune，參見W02007/008463)。另外，在某些實施方案中，抗BTLA抗體或其抗原結(jié)合片段與以下抗體組合給予，例如抗CTLA-4和抗HH，包括美國專利號6，682，736和美國專利號7，563，869中分別描述的抗體。
可用本領(lǐng)域已知的醫(yī)療裝置給予組合物。例如，可用皮下注射針經(jīng)注射給予本發(fā)明的藥物組合物。還可用無針皮下注射裝置給予本發(fā)明的藥物組合物；例如美國專利號6，620，135,6,096，002,5,399，163,5,383，851,5,312，335,5,064，413,4, 941，880、4，790，824或4，596，556中公開的裝置。給予藥物組合物的眾所周知的植入物和組件形式的實例包括美國專利號4，487，603，其公開了用于以受控速率分配藥物的可植入微型輸注泵；美國專利號4，447，233，其公開了以精確的輸注速率遞送藥物的藥物輸注泵；美國專利號4，447，224，其公開了用于連續(xù)藥物遞送的可變流速可植入輸注裝置；美國專利號4，439，196，其公開了具有多室區(qū)室的滲透藥物遞送系統(tǒng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知許多其它的這類植入物、遞送系統(tǒng)和組件?！爸委煛币庵笇⒅委熕幬锢绾斜景l(fā)明的任何結(jié)合化合物的組合物，經(jīng)內(nèi)部或外部給予具有藥物對其具有已知治療活性的一種或多種疾病癥狀的患者。通常，以有效減輕受治療的患者或群體的一種或多種疾病癥狀的量給予藥物，而不論是通過誘導這些癥狀的消退還是抑制這些癥狀的進展達任何臨床可測量的程度。有效減輕任何特定疾病癥狀的治療藥物的量(亦稱為“治療有效量”)可隨例如患者的疾病狀態(tài)、年齡和體重及藥物在患者中引起所需反應的能力等因素而變化?？赏ㄟ^醫(yī)師或其他專業(yè)保健提供者常用于評價疾病癥狀的嚴重程度或進展狀態(tài)的任何臨床測量來評價該癥狀是否減輕。雖然本發(fā)明的實施方案(例如治療方法或制品)可能不會有效減輕每位患者的靶疾病癥狀，但其應在按本領(lǐng)域已知的任何統(tǒng)計檢驗測定的統(tǒng)計顯著數(shù)量的患者中減輕靶疾病癥狀，統(tǒng)計檢驗例如斯氏t檢驗、X 2檢驗、Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere-Terpstra 檢驗和 Wilcoxon 檢驗。用于人、獸醫(yī)或研究對象的“治療”是指治療性治療、預防措施、研究和診斷應用。用于人、獸醫(yī)或研究對象或者細胞、組織或器官的“治療”包括使BTLA激動劑或拮抗劑與人或動物受試者、細胞、組織、生理區(qū)室或生理流體接觸?！凹毎闹委煛辈粌H包括例如在流體相或膠態(tài)相中BTLA激動劑或拮抗劑與BTLA受體接觸的情況,而且還包括激動劑或拮抗劑不與細胞或受體接觸的情況。在某些實施方案中，可單獨或組合使用抗BTLA抗體或其抗原結(jié)合片段以治療或預防需要這種治療或預防的受試者的任何疾病或病況。至于拮抗劑抗BTLA抗體，在某些實施方案中，病況受例如BTLA的表達或活性升高或者其配體(例如HVEM)的表達升高介導，并且可通過調(diào)節(jié)BTLA-HVEM配體結(jié)合、活性或表達來治療或預防。 某些實施方案中，疾病或病況受BTLA和/或HVEM水平提高的介導，并且通過降低BTLA-HVEM配體結(jié)合、活性或表達來治療或預防。本文所述拮抗劑抗BTLA抗體可作為負性信號轉(zhuǎn)導分子阻斷BTLA的活性，并且可通過T細胞和B細胞引起對腫瘤應答的上調(diào)。術(shù)語“B和T淋巴細胞弱化子”和“BTLA”基因/蛋白質(zhì)可互換使用，其包括變體、同種型、同源物、直向同源物(ortholog)和種內(nèi)同源物(paralog)。例如,在某些實施方案中，人BTLA特異性抗體可與來自非人物種的BTLA交叉反應。在其它實施方案中，人BTLA特異性抗體可以是人BTLA完全特異性的，并且不具有物種交叉反應性或其它類型的交叉反應性。除非另有說明，否則術(shù)語“人BTLA”是指人BTLA序列。除非另有說明，否則人BTLA序列包括所有人同種型和BTLA變體，例如Genbank登記號為AAP44003的人BTLA的完整氨基酸序列。還存在至少兩種人BTLA轉(zhuǎn)錄物變體。GenBank登記號NP_861445記載的轉(zhuǎn)錄物變體I長度為289個氨基酸，并且與登記號AAP44003的BTLA序列有近98%同一性。這種變體代表較長的轉(zhuǎn)錄物，并編碼較長的289個氨基酸的同種型。轉(zhuǎn)錄物變體2 (GenBank登記號NM_001085357)與變體I相比，缺乏可變框內(nèi)外顯子，產(chǎn)生與同種型I相比較短的241個氨基酸的蛋白質(zhì)(同種型2，GenBank登記號NP_001078826)。人BTLA序列可因具有例如保守突變或非保守區(qū)的突變而不同，該BTLA具有與SEQID NO 2, SEQ ID NO :35或SEQ ID NO :37的人BTLA基本相同的生物功能。例如，人BTLA的生物功能是抑制免疫應答，例如T細胞應答。也就是說，BTLA被視為負性調(diào)節(jié)因子。它具有參與降低IL-2產(chǎn)生和T細胞擴繁的C端抑制基序(Watanabe等，Nat. Immunol. ,4,670-679,2003 ；Chemnitz 等，J. Immunol.，176，6603-6614，2006)。另外，人 BTLA 的生物功能可為具有例如在被本公開內(nèi)容的抗體特異性結(jié)合的BTLA的胞外結(jié)構(gòu)域中表位。具體的BTLA序列一般可與SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :35 或SEQ ID N0:37 的人BTLA或其它同種型的氨基酸序列有至少90%同一性，并且當與其它物種(例如鼠)的BTLA氨基酸序列相比時，含有鑒定為人的氨基酸序列的氨基酸殘基。在某些情況下，人BTLA可與SEQID N0:2、SEQ ID NO :35或SEQ ID NO :37的人BTLA或其它同種型或變體有至少95%或甚至至少96%、97%、98%或99%同一性。在某些實施方案中，人BTLA序列與SEQ ID NO :2、SEQ ID NO 35或SEQ ID NO 37的BTLA或者其它同種型或變體的差異將不超過10個氨基酸。在某些實施方案中，人 BTLA 與 SEQ ID N0:2、SEQ ID NO :35 或 SEQ ID NO :37 的 BTLA或其它同種型或變體的差異可不超過5個或甚至不超過4、3、2、或I個氨基酸。百分比同一性可按本文所述確定。術(shù)語“免疫應答”是指例如淋巴細胞、抗原呈遞細胞、吞噬細胞、粒細胞和由上述細胞或肝產(chǎn)生的可溶性大分子(包括抗體、細胞因子和補體)的作用，該作用導致從人體選擇性損害、破壞或清除侵入病原體、感染病原體的細胞或組織、癌細胞或者在自體免疫或病理性炎癥的情況下的正常人細胞或組織。在某些情況下，對小鼠類似抗體進行推論研究是有用的?？刹捎帽疚乃龊线m方法產(chǎn)生抗BTLA小鼠抗體以及選擇和表征小鼠抗BTLA抗體。雖然具有所需性質(zhì)和活性的任何小鼠BTLA肽可用來產(chǎn)生小鼠BTLA抗體,但優(yōu)選Watanabe等，Nat. Immunol. 4 (7),670-679 (2003)描述的序列，包括GenBank登記號AY293285編碼的GenBank登記號AAP44002 (306 個氨基酸)。另外，已表征了許多小鼠BTLA剪接變體，在某些情況下，這些中的任一種都可用于產(chǎn)生抗小鼠BTLA抗體。對于較長轉(zhuǎn)錄物變體I (長為306個氨基酸)，小鼠BTLA剪接變體包括編碼序列ΝΜ_001037719和相應的氨基酸序列ΝΡ_001032808，較短轉(zhuǎn)錄物2變體序列描述于GenBank NP_808252 (長為305個氨基酸)；其與變體I相比使用3 ^編碼區(qū)中的可變框內(nèi)剪接位點，產(chǎn)生較短的蛋白質(zhì)(同種型2)。本文所用術(shù)語“抗體”是指具有所需生物活性的任何形式的抗體。因此，其以最廣義使用，具體包括但不限于單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗 體(例如雙特異性抗體)、人源化抗體、完全人抗體、嵌合抗體和駱騎源化(camelized)單結(jié)構(gòu)域抗體。本文所用術(shù)語“抗BTLA抗體”或抗體(“親代抗體”)的“抗原結(jié)合片段”包括抗體的片段或衍生物，通常包括親代抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)(例如一個或多個CDR)的至少一個片段，其保持親代抗體的至少一些結(jié)合特異性?？贵w結(jié)合片段的實例包括但不限于Fab、Fab' >F(ab/ )2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子,例如sc_Fv ;由抗體片段形成的納米抗體(nanobody)和多特異性抗體。當BTLA結(jié)合活性在摩爾濃度基礎(chǔ)上表示時，結(jié)合片段或衍生物通常保持其BTLA結(jié)合活性的至少10%。優(yōu)選結(jié)合片段或衍生物保持親代抗體的BTLA結(jié)合親和力的至少20 %、50 %、70 %、80 %、90 %、95 %或100 %或更高。還預期抗BTLA抗原結(jié)合片段可包括不明顯改變其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(稱為抗體的“保守變體”或“功能保守變體”)。術(shù)語“結(jié)合化合物”是指抗體及其結(jié)合片段兩者。“分離抗體”是指結(jié)合化合物的純化狀態(tài)，且在這種情況下意指該分子基本不含其它生物分子，例如核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖或其它物質(zhì)例如細胞碎片和生長培養(yǎng)基。術(shù)語“分離(的)”并非意指完全不存在這類物質(zhì)或不存在水、緩沖液或鹽，除非它們以明顯干擾本文所述結(jié)合化合物的實驗或治療應用的量存在。“Fab片段”由一條輕鏈及ChI和一條重鏈的可變區(qū)組成。Fab分子的重鏈不能與另一重鏈分子形成二硫鍵。“Fe”區(qū)含有包含抗體的ChI和Ch2結(jié)構(gòu)域的2個重鏈片段。該2個重鏈片段通過兩個或更多個二硫鍵以及通過Ch3結(jié)構(gòu)域的疏水相互作用保持在一起?！癋ab'片段”含有一條輕鏈和一條重鏈的部分或片段，該重鏈的部分或片段含有Vh結(jié)構(gòu)域和ChI結(jié)構(gòu)域以及ChI和Ch2結(jié)構(gòu)域之間的區(qū)域，使得2個FaY片段的2條重鏈之間可形成鏈間二硫鍵以形成F(ab' )2分子?！癋(ab' )2片段”含有2條輕鏈和2條含有介于ChI和Ch2結(jié)構(gòu)域之間的恒定區(qū)的一部分的重鏈，使得在2條重鏈之間形成鏈間二硫鍵。因此，F(xiàn)(ab' )2片段由通過2條重鏈間的二硫鍵保持在一起的2個Fab'片段組成。“Fv區(qū)”包含來源于重鏈和輕鏈兩者的可變區(qū)，但缺乏恒定區(qū)。術(shù)語“單鏈Fv”或“scFv”抗體是指包含抗體的Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體片段，其中這些結(jié)構(gòu)域存在于單條多肽鏈中。Fv多肽一般還包含V1^P '結(jié)構(gòu)域之間的多肽接頭，其使scFv能夠形成用于抗原結(jié)合的所需結(jié)構(gòu)。有關(guān)scFv的綜述,參見Pluckthun (1994)THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES,第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 主編Springer-Verlag, New York,第269-315頁。另參見國際專利申請公開號WO 88/01649和美國專利號 4，946，778 和 5，260，203?！敖Y(jié)構(gòu)域抗體”是只含有重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)的免疫功能性免疫球蛋白片段。在某些情況下，兩個或更多個Vh區(qū)與肽接頭共價連接形成二價結(jié)構(gòu)域抗體。二價結(jié)構(gòu)域抗體的2個Vh區(qū)可靶向相同或不同的抗原?！岸r抗體”包含2個抗原結(jié)合部位。在某些情況下，2個結(jié)合部位具有相同的抗原特異性。然而，二價抗體可以是雙特異性的(參見下文)。除非另有規(guī)定，否則本文所用“抗BTLA”抗體是指針對人BTLA或其變體或其任何抗原片段產(chǎn)生的抗體。 本文所用術(shù)語“單克隆抗體”是指獲自基本均質(zhì)抗體群的抗體，即組成該群的各個抗體除可少量存在的可能天然存在的突變之外是相同的。單克隆抗體是高度特異性的，針對單一抗原表位。相比之下，常規(guī)(多克隆)抗體制備物通常包括大量針對不同表位(或?qū)Σ煌砦挥刑禺愋?的抗體。修飾語“單克隆”表明獲自基本均質(zhì)抗體群的抗體的特征，且不得解釋為需要通過任何特定方法產(chǎn)生抗體。例如，本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過Kohler等(1975)Nature 256 :495最早描述的雜交瘤方法制備,或可通過重組DNA方法(參見例如美國專利號4，816，567)制備。還可采用例如Clackson等(1991)Nature 352 624-628和Marks等(1991) J. Mol. Biol. 222 :581-597描述的技術(shù)，從噬菌體抗體文庫分離“單克隆抗體”。另參見 Presta(2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116 :731。在某些實施方案中，單克隆抗體包括“嵌合”抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與來源于特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體的相應序列相同或同源，而該鏈的其余部分與來源于另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體以及這類抗體的片段的相應序列相同或同源，只要它們具有所需生物活性即可(美國專利號4，816，567 ；以及 Morrison 等，(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 :6851-6855)。本文所用“嵌合抗體”是具有第一抗體的可變結(jié)構(gòu)域和第二抗體的恒定結(jié)構(gòu)域的抗體，其中第一抗體和第二抗體來自不同物種。通?？勺兘Y(jié)構(gòu)域獲自嚙齒動物等實驗動物的抗體(“親代抗體”)，而恒定結(jié)構(gòu)域序列獲自人抗體，使得與親代嚙齒動物抗體相比，所得嵌合抗體在人受試者中誘導不良免疫應答的可能性較低。在某些實施方案中，本文的單克隆抗體還包括駱駝源化單結(jié)構(gòu)域抗體。參見例如 Muyldermans 等(2001) Trends Biochem. Sci. 26 :230 ；Reichmann 等(1999) J. Immunol.Methods 231 25 ；W0 94/04678 ；W0 94/25591 ;美國專利號 6，005，079)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供單結(jié)構(gòu)域抗體，其包含帶有修飾的2個Vh結(jié)構(gòu)域從而形成單結(jié)構(gòu)域抗體。本文所用術(shù)語“雙抗體”是指具有兩個抗原結(jié)合部位的小抗體片段，所述片段包含在同一多肽鏈(Vh-'或'-Vh)中與輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(')連接的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)。通過使用短得不允許在同一鏈的兩個結(jié)構(gòu)域之間配對的接頭，迫使該結(jié)構(gòu)域與另一鏈的互補結(jié)構(gòu)域配對并產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合部位。在例如EP 404，097、WO 93/11161以及Holliger等(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :6444-6448 中，對雙抗體進行了更充分的描述。有關(guān)工程改造抗體變體的綜述一般參見Holliger和Hudson(2005)Nat. Biotechnol. 23 1126-1136。本文所用術(shù)語“人源化抗體”是指含有來自人和非人(例如鼠、大鼠)抗體的序列的抗體形式。一般而言，人源化抗體包含基本所有的至少一個、通常兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本所有的超變環(huán)相當于非人免疫球蛋白的超變環(huán)，而所有或基本所有的構(gòu)架(FR)區(qū)是人免疫球蛋白序列的構(gòu)架區(qū)。人源化抗體任選可包含至少一部分的人免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)。本發(fā)明的抗體還包括具有修飾的(或封閉的)Fe區(qū)以提供改變的效應子功能的抗體。參見例如美國專利號 5，624，821、TO2003/086310、TO2005/120571、TO2006/0057702。這類修飾可用來促進或抑制免疫系統(tǒng)的各種反應，在診斷和治療方面具有可能的有益作用。Fe區(qū)的變化包括氨基酸改變(取代、缺失和插入)、糖基化或去糖基化和加入多個Fe。Fe的變化還可改變治療性抗體中抗體的半壽期，使得能夠不太頻繁地給藥，因此增加了方便性，減少了材料使用。參見 Presta(2005) J. Allergy Clin. Tmmunol. 116 :731 第 734-35 頁。 術(shù)語“完全人抗體”是指只包含人免疫球蛋白蛋白質(zhì)序列的抗體。如在小鼠中、在小鼠細胞中或在來源于小鼠細胞的雜交瘤中產(chǎn)生，則完全人抗體可含有鼠糖鏈。同樣，“小鼠抗體”是指僅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗體?；蛘?，如果在大鼠中、在大鼠細胞中或在來源于大鼠細胞的雜交瘤中產(chǎn)生，則完全人抗體可含有大鼠糖鏈。同樣，“大鼠抗體”是指僅包含大鼠免疫球蛋白序列的抗體?？贵w結(jié)構(gòu)總的來說，已知基本的抗體結(jié)構(gòu)單位包含四聚體。每個四聚體包括兩個相同的多肽鏈對，每對具有一條“輕”鏈(約25kDa)和一條“重”鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基端部分或片段可包括主要負責抗原識別的約100-110個或更多個氨基酸的可變區(qū)。每條鏈的羧基端部分或片段可限定主要負責效應子功能的恒定區(qū)。通常將人輕鏈歸類為K和λ輕鏈。此外，通常將人重鏈歸類為μ、δ、Y、α或ε ,并將抗體的同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)通過約12個或更多個氨基酸的“J”區(qū)連接，其中重鏈還包括約10多個氨基酸的“D”區(qū)。一般參見Fundamental ImmunoloRY第 7 章(Paul, W.主編，第 2 版。Raven Press, N. Y. (1989)。每個輕鏈/重鏈對的可變區(qū)配對形成抗體結(jié)合部位。因此，完整IgG抗體一般具有2個結(jié)合部位。除雙功能或雙特異性抗體以外，2個結(jié)合部位通常相同。通常，各鏈均具有相同的通過3個超變區(qū)(亦稱為互補決定區(qū)或⑶R)連接的相對保守構(gòu)架區(qū)(FR)的通用結(jié)構(gòu)。每對的2條鏈的CDR通常通過構(gòu)架區(qū)對準，使之能與特定表位結(jié)合。總的來說，輕鏈和重鏈兩者從N端到C端包含結(jié)構(gòu)域FRl、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3和FR4。一般按照以下文獻中的定義指定每個結(jié)構(gòu)域的氨基酸Sequences of Proteins ofImmunoloRical Interest,Kabat 等National Institutes of Health, Bethesda, Md.;第
5版；NIH 公告號 91-3242(1991) ；Kabat (1978)Adv. Prot. Chem. 32 :1-75 ；Kabat 等(1977)J.Biol. Chem. 252 :6609-6616 ；Chothia 等(1987)J Mol. Biol. 196 :901-917 或 Chothia 等(1989) Nature 342:878-883。本文所用術(shù)語“超變區(qū)”是指負責抗原結(jié)合的抗體氨基酸殘基。超變區(qū)包含“互補決定區(qū)”或“CDR”的氨基酸殘基(即輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的殘基24-34 (CDRLl)、50_56 (CDRL2)和89-97 (CDRL3)和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的殘基 31-35 (CDRHl)、50_65 (CDRH2)和 95-102 (CDRH3)；Kabat 等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.)和/或“超變環(huán)”的那些殘基(即輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的殘基26-32 (CDRLl)、50-52 (CDRL2)和91-96 (CDRL3)和重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的 26-32 (CDRHl)、53-55 (CDRH2)和 96-101 (CDRH3) ； Chothia Lesk (1987)J. Mol. Biol. 196 :901-917)。本文所用術(shù)語“構(gòu)架”或“FR”殘基是指本文定義為CDR殘基的超變區(qū)殘基以外的可變結(jié)構(gòu)域殘基?！敖Y(jié)合物質(zhì)”是指能夠與靶標結(jié)合的分子、小分子、大分子、抗體、其片段或類似物或可溶性受體?！敖Y(jié)合物質(zhì)”也可指能夠與靶標結(jié)合的分子復合物(例如非共價復合物)、離子化分子和例如通過磷酸化、?；?、交聯(lián)、環(huán)化或有限切割修飾的共價或非共價修飾分子?！敖Y(jié)合物質(zhì)”還可指能夠與穩(wěn)定劑、賦形劑、鹽、緩沖劑、溶劑或添加劑組合而結(jié)合靶標的分子?！敖Y(jié)合”可定義為結(jié)合物質(zhì)與靶標締合，其中締合導致結(jié)合物質(zhì)的正常布朗運動減少，在這種情況下結(jié)合物質(zhì)可溶解或懸浮在溶液中?！坝行Я俊卑ㄗ阋愿纳苹蝾A防醫(yī)學病癥的癥狀或體征的量。有效量還意指足以 允許或便于診斷的量。特定患者或獸醫(yī)對象的有效量可根據(jù)例如待治療的病況、患者的總體健康狀況、給藥的方法途徑和劑量及副作用的嚴重程度等因素而變化(參見例如授權(quán)給Netti等的美國專利號5，888，530)。有效量可以是避免明顯副作用或毒性作用的最大劑量或給藥方案。結(jié)果可導致診斷測量或參數(shù)改進至少5%、通常為至少10%、更常為至少20%、最常為至少30%、優(yōu)選至少40%、更優(yōu)選至少50%、最優(yōu)選至少60%、理想為至少70%、更理想為至少80%、最理想為至少90%，其中100%定義為正常受試者顯示的診斷參數(shù)(參見例如 Maynard 等(1996) A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice,Interpharm Press, Boca Raton, FL ；Dent (2001)Good Laboratory and Good ClinicalPractice, Urch PubI. , London, UK)。“外源的”是指根據(jù)上下文在生物體、細胞或人體外部產(chǎn)生的物質(zhì)?！皟?nèi)源的”是指根據(jù)上下文在細胞、生物體或人體內(nèi)產(chǎn)生的物質(zhì)?！巴葱浴笔侵竷蓚€多核苷酸序列之間或兩個多肽序列之間的序列相似性。當所比較的兩個序列中某一位置被相同堿基或氨基酸單體亞單元占據(jù)時，例如如果兩個DNA分子每個中某一位置均被腺嘌呤占據(jù)，則分子在該位置上是同源的。兩個序列間的同源性百分比是兩個序列共有的匹配位置或同源位置數(shù)除以所比較的位置數(shù)X100的函數(shù)。例如，如果在對序列進行最佳比對時兩個序列10個位置中有6個匹配或同源，則兩個序列是60%同源的。一般在比對兩個序列時進行比較以得到最大百分比同源性?！懊庖卟r”或“免疫病癥”包括例如病理性炎癥、炎性病癥和自身免疫病癥或疾病?！懊庖卟r”還指感染、持續(xù)感染和增殖性病況，例如癌癥、腫瘤和血管生成，包括抵抗免疫系統(tǒng)根除的感染、腫瘤和癌癥。“癌性病況”包括例如癌癥、癌細胞、腫瘤、血管生成和癌前病況，例如發(fā)育異常?！把仔圆“Y”意指其中病理全部或部分由例如免疫系統(tǒng)細胞的數(shù)目改變、遷移速率改變或活化改變引起的病癥或病理狀況。免疫系統(tǒng)細胞包括例如T細胞、B細胞、單核細胞或巨噬細胞、抗原呈遞細胞(APC)、樹突細胞、小膠質(zhì)細胞、NK細胞、NKT細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞或與免疫學特別有關(guān)的任何其它細胞，例如產(chǎn)細胞因子的內(nèi)皮或上皮細胞。
“分離結(jié)合化合物”是指結(jié)合化合物的純化狀態(tài)，在這種情況下意指分子基本不含其它生物分子，例如核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖或其它物質(zhì)，例如細胞碎片和生長培養(yǎng)基。術(shù)語“分離(的)”一般并非是指完全不存在這類物質(zhì)或不存在水、緩沖劑或鹽，除非它們以明顯干擾本文所述結(jié)合化合物的實驗或治療應用的量存在?！胺蛛x核酸分子”意指基因組、mRNA、cDNA或合成來源或其某些組合的DNA或RNA，其不與多核苷酸的全部或部分締合(其中分離多核苷酸天然存在)，或者與其天然不連接的多核苷酸連接。對于本公開內(nèi)容的目的，應當理解的是，“包含”特定核苷酸序列的“核酸分子”不包括完整的染色體。除規(guī)定序列外，“包含”規(guī)定核酸序列的分離核酸分子還可包括多達10個或甚至多達20個或更多個其它蛋白質(zhì)或其部分或片段的編碼序列，或者可包括有效連接的控制所列舉的核酸序列編碼區(qū)表達的調(diào)節(jié)序列，和/或可包括載體序列。表述“調(diào)控序列”是指特定宿主生物體中表達有效連接的編碼序列所必需的DNA序列。例如，適于原核生物的調(diào)控序列包括啟動子、任選操縱基因序列和核糖體結(jié)合位點。已知真核細胞使用啟動子、聚腺苷酸化信號和增強子。
當與另一核酸序列處于功能關(guān)系中時，核酸是“有效連接的”。例如，如果前序列或分泌前導區(qū)的DNA作為參與多肽分泌的前蛋白質(zhì)表達，則前序列或分泌前導區(qū)的DNA與多肽的DNA有效連接；如果啟動子或增強子影響序列的轉(zhuǎn)錄，則啟動子或增強子與編碼序列有效連接；或者如果核糖體結(jié)合位點的定位有利于翻譯，則核糖體結(jié)合位點與編碼序列有效連接?？偟膩碇v，“有效連接”意指所連接的DNA序列是鄰接的，而在分泌前導區(qū)的情況下，是鄰接的且是符合讀相的(in reading phase)。然而,增強子不一定是鄰接的。連接通過在合宜的限制位點連接而實現(xiàn)。如果這種位點不存在，則按常規(guī)實踐使用合成寡核苷酸銜接子或接頭本文所用表述“細胞”、“細胞系”和“細胞培養(yǎng)物”可互換使用，所有這類名稱包括子代。因此，術(shù)語“轉(zhuǎn)化體”和“轉(zhuǎn)化細胞”包括原代主題細胞和由其得到的培養(yǎng)物而不論傳遞次數(shù)。還要理解的是，由于有意的或不經(jīng)意的突變所致，所有子代的DNA內(nèi)容物可能并不完全相同。包括了在最初轉(zhuǎn)化的細胞中篩選的具有相同功能或生物活性的突變型子代。雖然指定不同名稱，但從上下文看將是清楚的。本文所用“聚合酶鏈式反應”或“PCR”是指其中按照例如美國專利號4，683，195中所述擴增極少量的核酸、RNA和/或DNA的特定片段的方法或技術(shù)。一般目標區(qū)末端或以外的序列信息必須是可得的，使得可設計寡核苷酸引物；這些引物可與待擴增模板的相反鏈的序列相同或相似。2個引物的5'端核苷酸可與擴增材料的末端一致。可采用PCR擴增特定的RNA序列、來自全基因組DNA的特定DNA序列和自細胞總RNA、噬菌體或質(zhì)粒序列轉(zhuǎn)錄的 cDNA 等。一般參見 Mullis 等(1987) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51 263 ；Erlich 主編(1989) PCR TECHNOLOGY (Stockton Press, N. Y)。本文所用 PCR 被視為是一個(但不是唯一的)用于擴增核酸試驗樣品的核酸聚合酶反應方法的實例，該方法包括使用作為引物的已知核酸和核酸聚合酶以擴增或產(chǎn)生特定的核酸片段。本文所用術(shù)語“種系序列”是指未重排的免疫球蛋白DNA序列的序列?？墒褂萌魏魏线m來源的未重排的免疫球蛋白?！耙种苿焙汀稗卓箘被颉盎罨铩焙汀凹觿狈謩e是指抑制或活化分子，例如用
于例如配體、受體、輔因子、基因、細胞、組織或器官的活化。例如基因、受體、配體或細胞的調(diào)節(jié)劑是改變基因、受體、配體或細胞的活性的分子，其中活性可因其調(diào)節(jié)性質(zhì)被活化、抑制或者改變。調(diào)節(jié)劑可單獨起作用，或者可以使用輔因子，例如蛋白質(zhì)、金屬離子或小分子。抑制劑是降低、阻斷、防止、延遲活化、鈍化、脫敏或下調(diào)例如基因、蛋白質(zhì)、配體、受體或細胞的化合物。活化物是提高、活化、利于、促進活化、敏化或上調(diào)例如基因、蛋白質(zhì)、配體、受體或細胞的化合物。抑制劑還可定義為降低、阻斷或鈍化組成型活性的化合物?！凹觿笔桥c靶標相互作用引起或促進靶標活化增加的化合物?！稗卓箘笔菍辜觿┑淖饔玫幕衔铩＾卓箘┓乐?、降低、抑制或中和激動劑的活性。甚至在沒有已鑒定的激動劑的情況下，拮抗劑還可防止、抑制或降低靶標(例如靶受體)的組成型活性。在BTLA的情況下，BTLA激動劑可啟動和增強BTLA遞送給B細胞和T細胞的負信號。另一方 面，BTLA拮抗劑可阻斷對B細胞和T細胞的信號轉(zhuǎn)導，因此增加B細胞和T細胞活化/增殖。為了檢查抑制程度，將例如包含給定蛋白質(zhì)、基因、細胞或生物體的樣品或?qū)嶒炍镉脻撛诨罨锘蛞种苿┨幚恚⑴c無抑制劑的對照樣品進行比較。將對照樣品(即未用拮抗劑處理的樣品)的相對活性值指定為100%。當活性值相對于對照為以下值時便達到抑制約90%以下、通常85%以下、更通常80%以下、最通常75%以下、普遍70%以下、更普遍65%以下、最普遍60%以下、通常55%以下、通常50%以下、更常45%以下、最常40%以下、優(yōu)選35%以下、更優(yōu)選30%以下、甚至更優(yōu)選25%以下、最優(yōu)選小于25%。當活性值相對于對照為以下較高值時便達到活化約110%、普遍至少120%、更普遍至少140%、更普遍至少160%、時常至少180%、更時常至少2倍、最時常至少2. 5倍、通常至少5倍、更常為至少10倍、優(yōu)選至少20倍、更優(yōu)選至少40倍和最優(yōu)選超過40倍。可如下監(jiān)測活化或抑制中的終點?？赏ㄟ^終點監(jiān)測例如細胞、生理流體、組織、器官和動物或人受試者的活化、抑制和對治療的反應。終點可包括例如炎癥跡象、致腫瘤性或細胞脫?；蚍置?例如細胞因子、毒性氧或蛋白酶的釋放)的預定量或百分比。終點可包括例如預定量的離子流出或轉(zhuǎn)運、細胞遷移、細胞粘附、細胞增殖、轉(zhuǎn)移潛力、細胞分化以及表型的改變，例如與炎癥、細胞凋亡、轉(zhuǎn)化、細胞周期或轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因表達的改變(參見例如 Knight (2000) Ann. Clin. Lab. Sci. 30 :145-158 ；Hood 和 Cheresh (2002)Nature Rev.Cancer 2 :91-100 ;Timme 等(2003)Curr. Drug Targets 4 :251-261 ;Robbins和 Itzkowitz (2002)Med. Clin. North Am. 86 1467-1495 ；Grady 和 Markowitz (2002) Annu.Rev.Genomics Hum. Genet. 3 :101-128 ;Bauer 等(2001)Glia 36 :235-243 ；Stanimirovic和 Satoh(2000)Brain Pathol. 10 :113-126)。抑制的終點一般是對照的75%以下，優(yōu)選對照的50%以下，更優(yōu)選對照的25%以下，最優(yōu)選對照的10%以下?；罨慕K點一般為對照的至少150%，優(yōu)選至少2倍于對照，更優(yōu)選至少4倍于對照，最優(yōu)選至少10倍于對照?！芭潴w”是指例如可用作受體的激動劑或拮抗劑的小分子、肽、多肽和膜締合或膜結(jié)合分子或其復合物?！芭潴w”還包括不是激動劑或拮抗劑但可與受體結(jié)合的物質(zhì)。此外，“配體”包括例如通過化學或重組方法改變成膜結(jié)合配體的可溶性形式的膜結(jié)合配體。按慣例，如果配體在第一細胞上是膜結(jié)合的，則受體通常出現(xiàn)在第二細胞上。第二細胞可具有與第一細胞相同或不同的特性。配體或受體可以是完全胞內(nèi)的，也就是說，它可存在于細胞溶膠、核或某些其它胞內(nèi)區(qū)室中。配體或受體可改變其位置，例如從胞內(nèi)區(qū)室變到質(zhì)膜的外表面。配體和受體的復合物稱為“配體受體復合物”。如果配體和受體參與信號轉(zhuǎn)導途徑，則配體出現(xiàn)在信號轉(zhuǎn)導途徑的上游位置，而受體出現(xiàn)在下游位置。HVEM是TNF受體超家族成員。除與BTLA結(jié)合以外，其還可與LIGHT、LTa和CD160結(jié)合。“小分子”定義為分子量小于lOkDa、通常小于2kDa、優(yōu)選小于lkDa、最優(yōu)選小于約500Da的分子。小分子包括但不限于無機分子、有機分子、含有無機組分的有機分子、包含放射性原子的分子、合成分子、肽模擬物和抗體模擬物。作為治療藥，與大分子相比，小分子可以是更易透過細胞、較不易降解和較不易誘導免疫應答。已對小分子例如抗體的肽模擬物和細胞因子以及小分子毒素進行了描述(參見例如Casset等(2003)Biochem. Biophys.Res. Commun. 307 :198-205 ;MuyIdermans (2001)J. Biotechnol. 74:277-302 ；Li(2000)Nat. Biotechnol. 18 1251-1256 ；Apostolopoulos 等(2002)Curr. Med. Chem. 9 :411-420 ；Monfardini 等(2002)Curr. Pharm. Des. 8 :2185-2199 ；Domingues 等(1999)Nat. Struct.Biol. 6 :652-656 ；Sato 和 Sone (2003) Biochem. J. 371 :603-608 ;授權(quán)與 Stewart 等人的美國專利號6，326,482)。提及配體/受體、抗體/抗原或其它結(jié)合對時的“特異性”或“選擇性”結(jié)合，是指確定異質(zhì)蛋白質(zhì)群和其它生物制劑中蛋白質(zhì)存在的結(jié)合反應。因此，在指定條件下，具體配 體與特定受體結(jié)合，而不以顯著的量與樣品中存在的其它蛋白質(zhì)結(jié)合。預期方法的抗體或由抗體的抗原結(jié)合部位衍生的結(jié)合化合物與其抗原或其變體或突變蛋白結(jié)合，其親和力比與任何其它抗原的親和力高，為至少2倍、優(yōu)選至少10倍、更優(yōu)選至少20倍、最優(yōu)選至少100 倍。本文所用術(shù)語“免疫調(diào)節(jié)劑”是指抑制或調(diào)節(jié)免疫應答的天然或合成的作用劑。免疫應答可以是體液應答或細胞應答。免疫調(diào)節(jié)劑包括免疫抑制劑或抗炎劑。本文所用“免疫抑制劑”、“免疫抑制藥物”或“免疫抑制藥”是用于免疫抑制治療以抑制或防止免疫系統(tǒng)活性的治療藥。在臨床上它們用于防止移植器官和組織(例如骨髓、心臟、腎、肝)排斥和/或用于以下疾病的治療自身免疫病或很可能是自身免疫起因的疾病(例如類風濕性關(guān)節(jié)炎、重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化)。免疫抑制藥可分為糖皮質(zhì)激素；細胞抑制劑；抗體；生物反應修飾劑，例如Ig融合蛋白，包括CTLA-4/Ig(AbataCept );作用于抑免蛋白的藥物；其它藥物，包括用于治療增殖性病癥的已知化療藥物，例如霉酚酸嗎乙酯(MMF)。特別是對于多發(fā)性硬化，本發(fā)明的抗體可與稱為copaxone的一類新的髓磷脂結(jié)合蛋白樣治療藥聯(lián)合給予。“抗炎劑”或“抗炎藥”是指留體治療藥和非留體治療藥兩者。留體，亦稱為皮質(zhì)甾類，是非常像皮質(zhì)醇(一種由腎上腺天然產(chǎn)生的激素)的藥物。留體用作某些炎性病況例如系統(tǒng)性血管炎(血管炎癥)和肌炎(肌肉炎癥)的主要治療。還可選擇性使用留體以治療炎性病況，例如類風濕性關(guān)節(jié)炎(身體兩側(cè)關(guān)節(jié)內(nèi)發(fā)生的慢性炎性關(guān)節(jié)炎)；系統(tǒng)性紅斑狼瘡(因免疫系統(tǒng)功能異常引起的全身性疾病)；斯耶格倫綜合征(引起眼干和口干的慢性病癥)。非留體抗炎藥，通?？s寫為NSAID，是具有鎮(zhèn)痛、解熱和抗炎作用的藥物一它們減輕疼痛、發(fā)熱和炎癥。使用術(shù)語“非甾體”將這些藥物與(除多種其它作用以外)具有類似的降類二十烷酸、抗炎作用的留體區(qū)分開來。NSAID—般適用于以下病況的癥狀緩解類風濕性關(guān)節(jié)炎；骨關(guān)節(jié)炎；炎性關(guān)節(jié)病(例如強直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、賴特綜合征(Reiter; s syndrome));急性痛風；痛經(jīng)；轉(zhuǎn)移性骨疼痛；頭痛和偏頭痛；術(shù)后疼痛；因炎癥和組織損傷所致的輕度-中度疼痛；發(fā)熱和腎絞痛。NSAID包括水楊酸酯、芳基烷酸類(arlyalknoic acid)、2_芳基丙酸(洛芬)、N-芳基氨茴酸(芬那酸)、昔康、昔布和磺苯胺?？山o予緩解疾病的抗風濕性藥物(DMARD)，時常與NSAID聯(lián)用。普遍處方使用的DMARD包括羥氯喹/氯喹、甲氨蝶呤、金療法、柳氮磺吡啶和硫唑嘌呤?！靶盘栟D(zhuǎn)導途徑”是指在信號從細胞的一個部分傳遞到細胞的另一個部分中起作用的各種信號轉(zhuǎn)導分子間的生化關(guān)系。本文所用表述“細胞表面受體”包括例如能夠接收信號和跨細胞質(zhì)膜傳遞這種信號的分子和分子復合物。本公開內(nèi)容的“細胞表面受體”的實例是BTLA受體。人BTLA特異性抗體
本發(fā)明總的來講涉及與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段和這類抗體或其抗原結(jié)合片段的用途。更具體而言，本發(fā)明提供分離的完全人抗BTLA抗體以及這些抗體或其抗原結(jié)合片段在疾病治療中的應用方法。完全人抗BTLA抗體的實例包括但不限于HuMab8D5,hu Mab8A3,hu Mab21H6,hu Mabl9A7和 hu Mab4C7。本發(fā)明提供分離的抗BTLA激動劑抗體或其抗原結(jié)合片段，其中抗體或抗原結(jié)合片段具有一種或多種下列性質(zhì)(I)不阻斷HVEM或LIGHT與人BTLA結(jié)合；(2)與食蟹猴BTLA交叉反應；(3)在蛋白質(zhì)結(jié)合測定(例如Biacore)中與人BTLA結(jié)合的Kd為至多約
2.5xl0_9 ;和⑷在T細胞和B細胞活化測定中的EC5tl為至少約ΙΟηΜ。在一個實施方案中，在蛋白質(zhì)結(jié)合測定(例如Biacore ;實施例2-3)中，抗BTLA抗體或其抗原結(jié)合片段與人BTLA結(jié)合的Kd為至多約2. 5xl(T9，在T細胞和B細胞活化測定中的EC5tl為約ΙΟ-ΙΟΟηΜ。在另一個實施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段是阻斷HVEM與BTLA結(jié)合的分離的完全人抗體或其抗原結(jié)合片段。在又一個實施方案中，這種抗體的實例包括但不限于完全人抗 BTLA 抗體 hu Mab4C7。與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段可包含本發(fā)明所述抗體和抗原結(jié)合片段的1、2、3、4、5或6個互補決定區(qū)(⑶R)。1、2、3、4、5或6個⑶R可獨立選自本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段的所述⑶R序列(例如表1，表2)?；蛘?，1、2、3、4、5或6個⑶R可選自本發(fā)明的單個所述抗體或抗原結(jié)合片段的CDR序列。在某些實施方案中，I、2或3個CDR選自所述激動劑抗體的Vl CDR(例如表I ；SEQ ID NO :12-14)和/或1、2或3個CDR選自所述發(fā)明的Vh⑶R(例如表2;SEQ ID NO :5-7)。在另一個實施方案中，1、2或3個⑶R選自所述拮抗劑抗體的\⑶R(例如表I ;SEQ ID NO :26-28)和/或1、2或3個⑶R選自所述發(fā)明的 Vh CDR(例如表 2;SEQ ID NO :19-21)。與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段可包含至少一個抗體輕鏈可變(')結(jié)構(gòu)域，其包含一個或多個選自以下的⑶R-Ll、⑶R-L2或⑶R-L3 (a)抗體hu Mab8D5可變區(qū)的 CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3 ； (b)抗體 hu Mab8A3 可變區(qū)的 CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3 ；
(c)抗體 hu Mab21H6 可變區(qū)的 CDR-L1、CDR-L2 和 CDR-L3 ;和(d)抗體 hu Mabl9A7 可變區(qū)的 CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3。與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段可包含至少一個抗體重鏈可變(VH)結(jié)構(gòu)域，其包含一個或多個選自以下的CDR-Hl、CDR-H2或CDR-H3 (a)抗體hu Mab8D5可變區(qū)的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3 ； (b)抗體 hu Mab8A3 可變區(qū)的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3 ；(C)抗體 hu Mab21H6 可變區(qū)的 CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3 ;和(d)抗體 hu Mabl9A7 可變區(qū)的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3。在一個優(yōu)選的實施方案中，與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段包含至少一個抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和至少一個抗體重鏈可變(Vh)結(jié)構(gòu)域，所述抗體輕鏈可變(')結(jié)構(gòu)域包含選自以下的⑶R-Ll、⑶R-L2和⑶R-L3 (a)抗體hu Mab8D5可變區(qū)的CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3 ； (b)抗體 hu Mab8A3 可變區(qū)的 CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3 ； (c)抗體 hu Mab21H6 可變區(qū)的 CDR-Ll、CDR-L2 和 CDR-L3 ；和(d)抗體 hu Mabl9A7 可變區(qū)的⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3 ;而所述抗體重鏈可變(Vh)結(jié)構(gòu)域包含選自以下的⑶R-H1、CDR-H2 和 CDR-H3 (a)抗體 hu Mab8D5 可變區(qū)的 CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3 ； (b)抗體 huMab8A3 可變區(qū)的 CDR-Hl、CDR_H2 和 CDR-H3 ； (c)抗體 hu Mab21H6 可變區(qū)的 CDR-Hl、CDR_H2和 CDR-H3 ;和(d)抗體 hu Mabl9A7 可變區(qū)的 CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3。本發(fā)明抗體輕鏈和重鏈⑶R的序列分別見表I和表2。通過舉例而非限制，激動劑抗體的'結(jié)構(gòu)域⑶R選自SEQ ID NO : 12-14，而拮抗劑抗體的'結(jié)構(gòu)域⑶R選自SEQ ID N0:26-28。同樣，激動劑抗體的Vh結(jié)構(gòu)域CDR選自SEQ ID NO :7_9，而拮抗劑抗體的Vh結(jié)構(gòu)域 CDR 選自 SEQ ID NO: 10-12。表I:輕鏈 CDR
抗體CDRlCDR2CDR3
8D5(激動劑)
(SEQ ID NO 12)(SEQ ID NO 13)(SEQ ID NO 14)
4C7(拮抗劑)
(SEQ ID NO 26, VK) (SEQ ID NO 27, VK)(SEQ ID NO :28，Vk)表2:重鏈 CDR
抗體CDRlCDR2CDR3
8D5(激動劑)
(SEQ ID NO 5)(SEQ ID NO 6)(SEQ ID NO 7)
4C7(拮抗劑)
(SEQ ID NO 19) (SEQ ID NO 20)(SEQ ID NO 21)本發(fā)明還提供與BTLA結(jié)合、起激動劑抗體作用并包含抗體HuMab8D5的成熟\結(jié)構(gòu)域(SEQ ID No 18)的分離抗體或其抗原結(jié)合片段。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗體是完全人單克隆抗體。優(yōu)選的完全人激動劑抗BTLA抗體的實例包括但不限于hu Mab8D5.huMab8A3,hu Mab21H6,hu Mabl9A7 及其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還提供與BTLA結(jié)合、起拮抗劑作用并包含抗體Hu Mab4C7的成熟'結(jié)構(gòu)域(SEQ ID NO 32)的分離抗體或其抗原結(jié)合片段。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗體是完全人單克隆抗體。優(yōu)選的完全人拮抗劑抗BTLA抗體的實例包括但不限于hu Mab4C7及其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還提供與BTLA結(jié)合、起激動劑作用并包含選自(a)抗體Hu Mab8D5的成熟Vh結(jié)構(gòu)域(SEQ ID NO 11)的至少一個Vh結(jié)構(gòu)域的分離抗體或其抗原結(jié)合片段。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗體是完全人單克隆激動劑抗BTLA抗體。優(yōu)選的完全人激動劑抗BTLA抗體的實例包括但不限于hu Mab8D5、hu Mab8A3、hu Mab21H6、hu Mabl9A7及其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還提供與BTLA結(jié)合、起拮抗劑作用和包含選自(a)抗體hu Mab4C7的成熟Vh結(jié)構(gòu)域(SEQ ID NO 25)的至少一個Vh結(jié)構(gòu)域的分離抗體或其抗原結(jié)合片段。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗體是完全人拮抗劑抗BTLA抗體。優(yōu)選的完全人拮抗劑抗BTLA抗體的實例包括但不限于hu Mab4C7及其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明提供與BTLA結(jié)合并且具有選自SEQ ID NO : 12、13和14的至少一個Vl結(jié)構(gòu)域和選自SEQ ID NO :5、6和7的至少一個Vh結(jié)構(gòu)域的分離激動劑抗體或其抗原結(jié)合片 段。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗體是完全人激動劑抗BTLA抗體。優(yōu)選的完全人激動劑抗BTLA抗體的實例包括但不限于hu Mab8D5,hu Mab8A3,hu Mab21H6、hu Mabl9A7及其抗原
結(jié)合片段。本發(fā)明提供與BTLA結(jié)合并具有選自SEQ ID NO :26、27、28的至少一個Vl結(jié)構(gòu)域和選自SEQ ID NO 19,20和21的至少一個Vh結(jié)構(gòu)域的分離拮抗劑抗體或其抗原結(jié)合片段。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗體是完全人拮抗劑抗BTLA抗體。優(yōu)選的完全人拮抗劑抗BTLA抗體的實例包括但不限于hu Mab4C7及其抗原結(jié)合片段。在一個實施方案中，本發(fā)明的分離抗體包含重鏈恒定區(qū)，優(yōu)選人恒定區(qū)，例如Y I、Y 2、γ3或Y 4人重鏈恒定區(qū)或其變體。在另一個實施方案中，結(jié)合化合物包含輕鏈恒定區(qū)，優(yōu)選人輕鏈恒定區(qū)，例如λ或K人輕鏈區(qū)或其變體。通過舉例而非限制，人重鏈恒定區(qū)可為Y 1，人輕鏈恒定區(qū)可為K。在一個備選的實施方案中，抗體的Fe區(qū)是具有Ser228Pro突變的 Y 4 (Schuurman, J 等，Mol. Immunol. 38 1-8, 2001)。在一個實施方案中，抗原結(jié)合片段選自Fab、Fab’、Fab’ _SH、Fv、scFv、F (ab，)2和雙抗體。本發(fā)明還提供包含本發(fā)明抗體的Vl結(jié)構(gòu)域(例如SEQ ID NO : 16、18、30、32、37和38)的分離多肽和包含本發(fā)明抗體的Vh結(jié)構(gòu)域(例如SEQ ID NO :9、11、23和25)的分離多肽。在一個實施方案中，本發(fā)明提供與BTLA結(jié)合并具有至少95%、90%、85%、80%、75%或50%序列同源的'結(jié)構(gòu)域Vh結(jié)構(gòu)域的抗體或其抗原結(jié)合片段。在另一個實施方案中，本發(fā)明的結(jié)合化合物包含具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或以上的保守或非保守氨基酸取代，同時仍具有所需結(jié)合性質(zhì)的\和Vh結(jié)構(gòu)域(含或不含信號序列)?！氨Ｊ匦揎椬凅w”或“保守取代”是指蛋白質(zhì)中的氨基酸被具有相似性質(zhì)(例如電荷、側(cè)鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構(gòu)象和剛性等)的其它氨基酸取代，使得在不改變蛋白質(zhì)的生物活性的情況下可頻繁進行變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員認識到，多肽非必要區(qū)的單個氨基酸取代一般不會顯著改變生物活性(參見例如Watson等(1987)Molecular Biology ofthe Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co.,第 224 頁(第 4版))。另外，結(jié)構(gòu)或功能上相似的氨基酸的取代不太可能破壞生物活性。本發(fā)明各種實施方案的結(jié)合化合物包含具有下述序列的多肽鏈與本文公開的具體氨基酸序列(例如SEQ ID N0:5、6、7、9、ll、12、13、
14、16、18、19、20、21、23、25、30、32 和 37)比較時，其包括至多 O (無變化)、1、2、3、4、5、6、7、
8、9、10、12、15、20個或更多個保守氨基酸取代。本文所用表述“至多X個”保守氨基酸取代包括O個取代和取代至多X的任何數(shù)目并包括X個取代的取代。這種示例性取代優(yōu)選按照下列表3給出的取代進行表3示例性保守氨基酸取代
權(quán)利要求
1.一種與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一個選自SEQ ID NO:.12、13和14的Vl CDR結(jié)構(gòu)域和至少一個選自SEQ ID NO :5、6和7的Vh CDR結(jié)構(gòu)域。
2.一種與BTLA結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含至少一個選自SEQ ID NO:.26、27、28的Vl CDR結(jié)構(gòu)域和至少一個選自SEQ ID NO : 19、20和21的Vh CDR結(jié)構(gòu)域。
3.一種分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中 (a)所述重鏈可變區(qū)包含SEQID NO :11 (8D5重鏈)的氨基酸序列；和 (b)所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO:18(8D5輕鏈)的氨基酸序列。
4.一種分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含 (a)包含SEQID NO 5(8D5HCDR1)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDRl ； (b)包含SEQID NO 6(8D5HCDR2)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDR2 ； (c)包含SEQID NO 7(8D5HCDR3)的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDR3 ; (d)包含SEQID NO :12(8D5LCDR1)的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)CDRl ； (e)包含SEQID NO :13(8D5LCDR2)的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)CDR2 ;和 (f)包含SEQID NO :14(8D5LCDR3)的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)CDR3 ; 其中所述抗體與BTLA特異性結(jié)合且不阻斷與HVEM結(jié)合。
5.—種分離抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含 (a)重鏈可變區(qū)，其是人VH基因(SEQID NO:8)[編碼8D5]的產(chǎn)物或來源于所述人VH基因；和 (b)輕鏈可變區(qū)，其是人VK基因(SEQID NO :15)[編碼8D5]的產(chǎn)物或來源于所述人VK基因；其中所述抗體與BTLA特異性結(jié)合。
6.一種分離多肽，其包含權(quán)利要求1-5中任一項的抗體或抗原結(jié)合片段的'結(jié)構(gòu)域或Vh結(jié)構(gòu)域。
7.一種分離核酸，其編碼權(quán)利要求1-5中任一項的抗體或抗原結(jié)合片段的'結(jié)構(gòu)域或Vh結(jié)構(gòu)域或者權(quán)利要求6的分離多肽。
8.一種組合物，其包含一種或多種權(quán)利要求1-5中任一項的抗體或抗原結(jié)合片段或者權(quán)利要求6的分離多肽，以及藥學上可接受的載體或稀釋劑。
9.一種治療受試者的因BTLA表達和/或活性降低引起的病況的方法，所述方法包括將有效量的包含一種或多種權(quán)利要求I或3-5中任一項的抗體或抗原結(jié)合片段的組合物給予受試者。
10.一種治療受試者的炎性病癥或自身免疫病癥的方法，所述方法包括將有效量的權(quán)利要求I或3-5中任一項的激動劑抗體或抗原結(jié)合片段給予受試者。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述炎性病癥或自身免疫病癥選自克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、炎性纖維化、硬皮病、肺纖維化、和肝硬化、類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、哮喘(包括變應性哮喘)、變態(tài)反應、慢性阻塞性肺病(COPD)、多發(fā)性硬化、銀屑病、眼色素層炎、移植物抗宿主病(GVHD)、青少年早發(fā)性I型糖尿病、移植排斥、SLE和斯耶格倫綜合征。
12.一種提高受試者的免疫應答的方法，所述方法包括將有效量的包含權(quán)利要求2的抗體或抗原結(jié)合片段的組合物給予受試者。
13.—種表達載體,其包含權(quán)利要求7的分離核酸。
14.一種宿主細胞，其包含權(quán)利要求13的表達載體。
15.—種產(chǎn)生權(quán)利要求1-5中任一項的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包括 a.在表達核酸序列的條件下，將權(quán)利要求14的宿主細胞在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，從而產(chǎn)生包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的多肽；和 b.從所述宿主細胞或培養(yǎng)基中回收所述多肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及對BTLA有特異性的結(jié)合化合物及其用途。更具體而言，本發(fā)明涉及識別人BTLA并調(diào)節(jié)其在癌癥、炎性病癥和自身免疫病癥中的活性的完全人抗體。
文檔編號A61K39/395GK102762593SQ201080045118
公開日2012年10月31日 申請日期2010年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月31日
發(fā)明者A·J·科爾曼, A·范埃爾薩斯, E·L·霍爾克, H·N·勒不蘭, J·M·馬塔拉扎, K·B·圖久姆, M·塞爾比, T·W·斯普羅爾 申請人:米德列斯公司