專利名稱：靶向pax2用于治療乳腺癌的制作方法
靶向PAX2用于治療乳腺癌本申請要求于2010年2月18日提交的美國專利申請?zhí)?2/708，294的優(yōu)先權(quán)，以及于2009年8月M日提交的美國專利申請?zhí)?2Λ46，292的優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
乳腺癌是女性最常見的癌癥原因，并且在美國是女性第二大常見的癌癥死亡原因。雖然多數(shù)初期乳腺癌是基于發(fā)現(xiàn)乳腺影像異常來診斷的，但是腫塊或乳腺組織堅實度的變化也可能是疾病的警報信號。過去幾十年內(nèi)提高乳腺癌風(fēng)險意識已致使進(jìn)行乳腺攝影篩查的女性數(shù)量增加，導(dǎo)致更早期檢測癌癥并且由此提高存活率。盡管如此，乳腺癌是45 至陽歲女性最常見的死亡原因。已知許多類型的癌癥是由遺傳畸變即突變引起的。突變的積聚和細(xì)胞控制功能受損致使從正常組織到早期癌前的進(jìn)行性表型變化，如上皮內(nèi)瘤變(IEN)到日益嚴(yán)重的IEN 到淺表癌以及最終到浸潤性疾病。該過程通常在幾年甚至十幾年內(nèi)相對緩慢地發(fā)生，雖然在一些情況下可能相對迅速。癌基因依賴是，癌細(xì)胞對維持惡性表型的單一癌基因的連續(xù)活化或過表達(dá)的生理依賴。這種依賴發(fā)生于標(biāo)志腫瘤進(jìn)程的其它變化的環(huán)境中。浸潤性癌癥的長期進(jìn)程為臨床干預(yù)提供了時機(jī)。因此，重要的是鑒定指征癌前疾病的生物標(biāo)志物，以便可以采取治療措施預(yù)防或延緩浸潤性癌癥的發(fā)展。發(fā)明概述本發(fā)明一方面涉及預(yù)防或治療個體中乳腺疾病的方法。所述方法包括向個體乳腺組織給予抑制PAX2表達(dá)或PAX2活性的組合物。在一實施方案中，所述乳腺疾病是乳腺癌或乳腺上皮內(nèi)瘤變(MIN)。在另一實施方案中，所述抑制PAX2表達(dá)包括向個體的乳腺癌組織或MIN組織給予編碼PAXkiRNA的核酸。在相關(guān)實施方案中，所述SiRNA包含選自以下的序列SEQ ID NO :3_6和11-15。在另一實施方案中，所述組合物包含抑制PAX2與DEFBl啟動子結(jié)合的寡核苷酸。在相關(guān)實施方案中，所述寡核苷酸包含正向或反向的SEQ ID NO :1。在相關(guān)實施方案中，所述寡核苷酸包含X1GGAACX2序列，其中Xl和X2是與DEFBl 編碼序列中SEQ ID NO 1的鄰近核苷酸互補(bǔ)的0至30個核苷酸。在相關(guān)實施方案中，所述寡核苷酸包含選自以下的序列SEQ IDNO =18-21,25,26, 28 禾口 29。在另一實施方案中，所述組合物包含RAS信號通路的阻斷劑。在另一實施方案中，所述組合物包含選自以下的拮抗劑血管緊張素II的拮抗齊U，血管緊張素II受體的拮抗劑，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的拮抗劑，絲裂原活化蛋白激酶 (MEK)的拮抗劑，ERK1，2(細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶)的拮抗劑，以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子 3 (STAT3)的拮抗劑。還公開了治療個體中乳腺癌或MIN的方法，所述方法包括增強(qiáng)個體乳腺癌組織或 MIN組織中的DEFBl表達(dá)。在一實施方案中，增強(qiáng)DEFBl表達(dá)包括向個體的乳腺癌組織或MIN組織給予有效量的DEFBl。在另一實施方案中，增強(qiáng)DEFBl表達(dá)包括向個體的乳腺癌組織或MIN組織給予有效量的編碼DEFBl的表達(dá)載體。還公開的是用于治療個體乳腺疾病的方法，所述方法包括(a)測定來自所述個體的患病乳腺組織中PAX2-比-DEFBl的表達(dá)率；(b)測定來自所述個體的所述患病乳腺組織的ERA5R狀態(tài)；以及(c)基于(a)和(b)的結(jié)果，向所述個體的乳腺組織給予組合物，所述組合物(1)抑制PAX2表達(dá)或PAX2活性，(2)表達(dá)DEFBl，或(3)抑制PAX2表達(dá)或PAX2活性并且表達(dá)DEFBl。附圖簡要說明附圖與說明書一起闡述本發(fā)明的一個或多個實施方案，用于說明本發(fā)明的原理。 只要有可能，整個附圖所使用的相同附圖標(biāo)記是指實施方案的相同或類似元件。圖IA至ID給出β -防御素-1 (DEFBl)表達(dá)的定量RT-PCROlRT-PCR)分析。圖2給出DEFBl誘導(dǎo)膜完整性和細(xì)胞形態(tài)改變的顯微鏡分析。黑色箭頭指示膜波動，白色箭頭指示凋亡小體。圖3給出前列腺癌細(xì)胞中DEFBl的細(xì)胞毒性分析。用PonA處理前列腺細(xì)胞系 DU145、PC3和LNCaP來誘導(dǎo)DEFBl表達(dá)1_3天，之后進(jìn)行MTT測定以確定細(xì)胞活力。結(jié)果表示為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，η = 9。圖4Α和4Β給出由DEFBl誘導(dǎo)DU145和PC3細(xì)胞的細(xì)胞死亡。圖5給出DEFBl誘導(dǎo)之后的泛半胱天冬酶(pan-caspase)分析。圖6給出PAX2 siRNA處理之后配對盒同源基因2 (PAX2)蛋白表達(dá)的沉默。圖7給出對用PAX2 siRNA處理之后的前列腺癌細(xì)胞生長的分析。圖8給出對siRNA沉默PAX2之后的細(xì)胞死亡的分析。結(jié)果表示為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，η = 9。圖9給出對半胱天冬酶活性的分析。

圖10給出對ΡΑΧ2 siRNA處理之后的凋亡因子的分析。圖11給出PAX2與DNA識別序列結(jié)合的模型。圖12示出DEFBl報告子構(gòu)建體。圖13給出抑制PAX2導(dǎo)致DEFBl表達(dá)。圖14給出抑制PAX2導(dǎo)致DEFBl啟動子活性增強(qiáng)。圖15給出DEFBl表達(dá)致使膜完整性受損。圖16給出PAX2抑制導(dǎo)致膜完整性受損。圖17A和17B給出PAX2與DEFBl啟動子結(jié)合的ChIP分析。圖17A中，泳道1包含IOObp的分子量標(biāo)志物。泳道2是陽性對照，代表交聯(lián)和免疫沉淀反應(yīng)之前從DU145擴(kuò)增的DEFBl啟動子的160bp區(qū)。泳道3是陰性對照，代表無DNA進(jìn)行的PCR。泳道4和5 是陰性對照，分別代表用IgG從交聯(lián)的DU145和PC3進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)的PCR。交聯(lián)之后用抗-PAX2抗體免疫沉淀的25pg DNA (泳道6和8)和50pg DNA (泳道7和9)的PCR擴(kuò)增分別顯示DU145和PC3中160bp的啟動子片段。圖17B中，泳道1包含IOObp分子量標(biāo)志物。泳道2是陽性對照，代表交聯(lián)和免疫沉淀反應(yīng)之前從DU145擴(kuò)增的DEFBl啟動子的 160bp區(qū)。泳道3是陰性對照，代表無DNA進(jìn)行的PCR。泳道4和5是陰性對照，分別代表用IgG從交聯(lián)的DU145和PC3進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)的PCR。交聯(lián)之后用抗-PAX2抗體免疫沉淀的25pgDNA (泳道6和8)和50pg DNA (泳道7和9)的PCR擴(kuò)增分別顯示DU145和PC3 中160bp的啟動子片段。圖18給出PrdPD和PrdHD與DNA的預(yù)測結(jié)構(gòu)。圖19給出不同配對結(jié)構(gòu)域共有序列的比較。在圖頂部示出ftxl-配對-結(jié)構(gòu)域士 DNA復(fù)合物晶體學(xué)分析中所描述的蛋白士 DNA接觸的示意圖?？湛蛑甘睛?螺旋，陰影框指示折疊，以及粗線指示轉(zhuǎn)角。接觸的氨基酸由單字母代碼給出。僅給出直接接觸的氨基酸士堿基?？杖χ甘敬鬁辖佑|，而紅箭頭指示小溝接觸。該示意圖是配對結(jié)構(gòu)域蛋白所有已知共有序列的比對(僅給出正義鏈)。共有序列之間的垂直線指示保守的堿基對。位置編號在圖底部給出。圖20給出靶向ΡΑΧ2作為化學(xué)預(yù)防性策略。圖21給出血管緊張素II (Ang II)對DU145細(xì)胞中ΡΑΧ2表達(dá)的影響。圖22Α給出洛沙坦(Losartan，Los)對DU145細(xì)胞中PAX2表達(dá)的影響。圖23給出Los阻斷AngII對DU145中PAX2表達(dá)的影響。圖M給出AngII增加DU145細(xì)胞增殖。圖25A，圖25B和圖25C給出Los和MAP激酶抑制劑對DU145細(xì)胞中PAX2表達(dá)的影響。圖25A給出用洛沙坦處理DU145細(xì)胞阻抑磷酸化-ERK1/2和PAX2表達(dá)；圖25B給出 MEK激酶抑制劑和AICAR阻抑PAX2蛋白表達(dá)；圖25C給出MEK激酶抑制劑和洛沙坦阻抑磷酸化-STAT3蛋白表達(dá)。圖26A和26B給出Los和MEK激酶抑制劑對DU145細(xì)胞中PAX2活化的影響。圖27給出AngII在UrEC細(xì)胞中增加PAX2表達(dá)而降低DEFBl表達(dá)。圖28給出AngII信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和PAX2前列腺癌的示意圖。圖四給出阻斷PAX2表達(dá)作為前列腺癌療法的示意圖。圖30給出用Gleason評分對DEFBl和PAX2表達(dá)的比較。圖31A和31B給出PAX2-DEFB1比值作為前列腺癌發(fā)展的預(yù)測因子。圖32給出Donald預(yù)測因子(DPF)是基于相對的PAX2-DEFB1表達(dá)率。圖33A和3 給出對人前列腺組織中hBD_l表達(dá)的分析。圖34A和34B給出對前列腺細(xì)胞系中hBD_l表達(dá)的分析。圖34A給出與hPrEC細(xì)胞相比，hBD-Ι誘導(dǎo)之前和之后前列腺癌細(xì)胞系中hBD-Ι的表達(dá)水平。一個星號代表相比 hPrEC統(tǒng)計學(xué)更高的表達(dá)水平。兩個星號代表相比hBD-Ι誘導(dǎo)之前的細(xì)胞系統(tǒng)計學(xué)顯著的表達(dá)水平(學(xué)生t-檢驗，ρ < 0. 05)。圖34B給出通過免疫細(xì)胞化學(xué)驗證前列腺癌細(xì)胞系 DU145中的異常hBD-Ι表達(dá)。將UrEC細(xì)胞對hBD_l進(jìn)行染色作為陽性對照(A =DIC和B 熒光)。用hBD-Ι轉(zhuǎn)染DU145細(xì)胞并誘導(dǎo)18小時(C =DIC和D 熒光)。比例尺=20 μ Μ。圖35給出前列腺癌細(xì)胞中hBD-Ι的細(xì)胞毒性分析。各柱子代表一式三份進(jìn)行三個獨(dú)立試驗的平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤。圖36A和圖36B給出正常、PIN和腫瘤的LCM人前列腺組織切片中hBD_l和cMYC 表達(dá)的QRT-PCR分析。每種基因的表達(dá)表示為與β-肌動蛋白相比的表達(dá)率。圖36Α給出正常、PIN和腫瘤切片中hBD-Ι表達(dá)水平的比較。圖36B給出正常、PIN和腫瘤切片中cMYC 表達(dá)水平的比較。
圖37給出用siRNA敲低PAX2之后的hBDl表達(dá)的QRT-PCR分析。hBD_l表達(dá)水平表示為與β-肌動蛋白相比的表達(dá)率。星號代表與PAXkiRNA處理之前的細(xì)胞系相比統(tǒng)計學(xué)更高的表達(dá)水平(學(xué)生t-檢驗，ρ < 0. 05)。圖38A和38B給出PAX2 siRNA處理之后PAX2蛋白表達(dá)的沉默。圖38A給出通過 Western印跡分析檢測HPrEC前列腺原代細(xì)胞(泳道1)以及DU145 (泳道2)，PC3 (泳道3) 和LNCaP(泳道4)前列腺癌細(xì)胞中的PAX2表達(dá)。將印跡清除并重新探測作為內(nèi)參的β-肌動蛋白，以確保等量上樣。圖38Β給出對用ΡΑΧ2 siRNA雙螺旋轉(zhuǎn)染之后證實ΡΑΧ2表達(dá)敲低的全部DU145，PC3和LNCaP的Wfestern印跡分析。同樣地，將印跡清除并重新探測作為內(nèi)參的β-肌動蛋白。圖39給出對用ΡΑΧ2 siRNA處理之后的前列腺癌細(xì)胞生長的分析。比例尺= 20 μ m0圖40給出對siRNA沉默PAX2之后的細(xì)胞死亡的分析。結(jié)果表示為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，η = 9。圖41給出對半胱天冬酶活性的分析。比例尺=20 μ m.圖42A至42C給出對PAX2 siRNA處理之后的凋亡因子的分析。結(jié)果表示為平均值士標(biāo)準(zhǔn)偏差，η = 9。星號代表統(tǒng)計學(xué)差異(ρ < 0. 05)。發(fā)明詳述本發(fā)明一方面提供預(yù)防或治療個體中乳腺癌的方法。所述方法包括給予個體組合物，所述組合物包含ΡΑΧ2表達(dá)或ΡΑΧ2活性的抑制劑，或者DEFB-I表達(dá)或DEFB-I活性的增強(qiáng)劑。在一實施方案中，所述個體被診斷患有乳腺上皮內(nèi)瘤變(MIN)。在某些方面，乳腺組織的ΡΑΧ2在MIN之前被上調(diào)。因而，本申請還提供了治療或預(yù)防個體中MIN的方法。所述方法包括給予個體組合物，所述組合物包含ΡΑΧ2表達(dá)或ΡΑΧ2 活性的抑制劑，或者DEFB-I表達(dá)或DEFB-I活性的增強(qiáng)劑。蛋白“活性”包括，例如轉(zhuǎn)錄、翻譯、細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)位、分泌、通過激酶的磷酸化、通過蛋白酶的剪切、與其它蛋白的嗜同和嗜異結(jié)合、泛素化作用。在某些方面，“ΡΑΧ2活性”具體是指ΡΑΧ2與DEFB-I啟動子的結(jié)合。乳腺癌普遍用于乳腺癌篩選的方法包括自我和臨床乳腺檢查，X-射線乳腺攝影以及乳腺磁共振成像(MRI)。乳腺癌篩查的最新技術(shù)是超聲計算機(jī)斷層成像術(shù)，其利用聲波形成三維圖像并且乳腺癌在不用χ-射線乳腺攝影中所用的危險放射線的情況下檢測乳腺癌。還可以使用基因測試。用于乳腺癌的基因測試一般包括測試BRCA基因中的突變。這除了對那些有提高乳腺癌風(fēng)險的患者，通常是不推薦的技術(shù)。女性死亡的主要原因，乳腺癌的發(fā)生率，在美國過去這三十年逐漸增加。雖然乳腺癌的發(fā)病機(jī)理尚不清楚，但是正常乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化成惡性表型可能是遺傳因素的結(jié)果， 尤其是30歲以下的女性。最近，BRCAl和BRCA2的發(fā)現(xiàn)和表征已擴(kuò)大了我們對能促進(jìn)家族乳腺癌的遺傳因素的理解。這兩個基因座內(nèi)的生殖細(xì)胞系突變與50-85%的乳腺癌和/或卵巢癌的終身風(fēng)險相關(guān)。然而，其它非遺傳因素很可能對該疾病的病因也具有重大影響。無論其起因是什么，如果在其進(jìn)程早期未被檢測到，那么乳腺癌發(fā)病率和死亡率會顯著增加。 因而，大量工作已集中于乳腺組織的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成的早期檢測上。
目前，鑒定乳腺癌的主要方式是通過檢測致密腫瘤組織的存在。這可以通過直接檢查乳腺外部或通過乳腺攝影或其它X-射線成像方法來實現(xiàn)不同程度的效力。然而，后面的方法有相當(dāng)大的代價。每當(dāng)進(jìn)行乳腺攝影時，患者承受測試過程中所使用的放射線的電離特性所誘導(dǎo)的較小的患有乳腺腫瘤的風(fēng)險。此外，該方法昂貴并且技術(shù)員的主觀解釋可能導(dǎo)致不精確，例如，一項研究表明，對于由所調(diào)查的一組放射科醫(yī)生單獨(dú)解釋的一組乳腺影像，大約三分之一存在主要臨床分歧。此外，許多女性感到進(jìn)行乳腺攝影是痛苦的經(jīng)歷。 因此，國家癌癥研究所并不推薦50歲以下的女性進(jìn)行乳腺攝影，因為與年紀(jì)較大的女性相比，該群體發(fā)展成乳腺癌的可能性較低。然而，引人注意的是，雖然50歲以下的女性僅有約 22%發(fā)生乳腺癌，但數(shù)據(jù)顯示絕經(jīng)前女性的乳腺癌更具侵襲性。PAX2PAX基因是編碼核轉(zhuǎn)錄因子的九個發(fā)育調(diào)控基因家族。它們在胚胎發(fā)生中起重要作用，并且以非常有序的時空模式表達(dá)。它們?nèi)堪幋aDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的384個堿基對的“配對盒”區(qū)，所述“配對盒”區(qū)在整個進(jìn)化過程中是高度保守的(Stuart，ET, et al. 1994)。通過許多可直接歸因于PAX基因的雜合不足的天然鼠和人類綜合癥已證實PAX 基因?qū)Πl(fā)育過程的影響。Dressier等(1990)已給出PAX2序列。人PAX2蛋白及其變體的氨基酸序列，以及編碼這些蛋白的DNA序列列于SEQ ID NO :39-59 (SEQ ID N0:39，由人PAX2 基因的外顯子1編碼的氨基酸序列；SEQ ID N0:40，人PAX2基因啟動子和外顯子1 ;SEQ ID NO :41，人PAX2的氨基酸序列；SEQ ID NO :42，人PAX2基因；SEQ ID NO :43，人PAX2基因變體b的氨基酸序列；SEQ ID NO :44，人PAX2基因變體b ;SEQ IDNO :45，人PAX2基因變體c的氨基酸序列；SEQ ID NO :46，人PAX2基因變體c ；SEQ ID NO :47，人PAX2基因變體d的氨基酸序列；SEQ IDNO 48,人PAX2基因變體d ；SEQ ID NO :49，人PAX2基因變體e的氨基酸序列；SEQ ID NO :50，人PAX2基因變體e)。據(jù)報道，PAX2通過與DEFB-1啟動子(Bose SK et al. ,MoI Immunol. 2009，46 :1140-8.)在緊鄰 DEFBl TATA盒的 5，-CCTTG_3，(SEQ ID NO 1) 識別位點(diǎn)處相結(jié)合而阻抑DEFB-I表達(dá)。在一些文獻(xiàn)中，結(jié)合位點(diǎn)還稱為3’-GTTCC-5’ (SEQ IDNO 1)或 5，-CAAGG-3，(SEQ ID NO :2)識別位點(diǎn)，5，-CAAGG-3，(SEQ IDNO :2)是相對鏈上的序列。兩個序列都涉及DEFBl啟動子上的PAX2結(jié)合位點(diǎn)。已檢測PAX2表達(dá)的癌癥的例子列于表1。表1 表達(dá)PAX2的癌癥
表達(dá)PAX2美國估計的美國估計的全球估計的全球估計的
的癌癥__新病例__死亡數(shù)__新病例__死亡數(shù)
前列腺__234,460 27,350__679,023 221,002
乳腺__214,600 41,430__1,151,298 410,712
卵巢__20,180__15,310__204,500124,860
_ 38,89012,840208,479101,895
8J __12,820__18,820__189,485141,650
權(quán)利要求
1.用于治療個體中乳腺疾病的方法，所述方法包括向所述個體的乳腺組織給予抑制 PAX2表達(dá)和/或PAX2活性的組合物，其中所述組合物包含一種或多種選自以下的成分編碼PAXkiRNA的多核苷酸，抑制 PAX2與DEFBl啟動子結(jié)合的多核苷酸，血管緊張素II的拮抗劑，血管緊張素II受體的拮抗齊U，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的拮抗劑，絲裂原活化蛋白激酶(MEK)的拮抗劑，細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1，2(ERK1，2)的拮抗劑，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3 (STAT3)的拮抗劑，以及RAS 信號通路的阻斷劑。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述乳腺疾病是乳腺癌或乳腺上皮內(nèi)瘤變(MIN)。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包含編碼siRNA的多核苷酸，所述siRNA 包含選自以下的序列:SEQ ID NO :3-6和11-15。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包含多核苷酸，所述多核苷酸包含正向或反向的SEQ ID NO :1。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述多核苷酸包含V-CCTTG-W序列及其互補(bǔ)序列，其中V和W是在DEFBl啟動子的PAX2結(jié)合位點(diǎn)側(cè)翼的1至35個核苷酸的連續(xù)核苷酸序列。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述多核苷酸包含選自以下的序列SEQID NO 18-21，25，26，28 和 29。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包含依那普利。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包含纈沙坦、奧美沙坦或替米沙坦。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物包含U0U6或PD98059。
10.治療個體中乳腺癌或MIN的方法，所述方法包括增強(qiáng)所述個體乳腺癌組織或MIN組織中的DEFBl表達(dá)。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述增強(qiáng)DEFBl表達(dá)包括向所述個體的乳腺癌組織或MIN組織給予有效量的DEFBl。
12.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述增強(qiáng)DEFBl表達(dá)包括向所述個體的乳腺癌組織或MIN組織給予有效量的編碼DEFBl的表達(dá)載體。
13.如權(quán)利要求1所述的方法，其還包括向所述個體給予有效量的抗激素劑的步驟。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述抗激素劑是他莫昔芬。
15.如權(quán)利要求1所述的方法，其還包括向所述個體給予有效量的抗-ERBB-2劑的步馬聚ο
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述抗-ERBB-2劑是赫賽汀。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其還包括向所述個體給予有效量的抗-Her-2劑的步驟。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述抗-Her-2劑是曲妥珠單抗。
19.如權(quán)利要求1所述的方法，其還包括向所述個體給予有效量的抗-AIB-1/SRC-3劑的步驟。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物還包含一種或多種選自以下的試劑抗激素劑、抗-ERBB-2劑、抗-Her-2劑以及抗-AIB-1/SRC-3劑。
21.用于治療個體中乳腺疾病的方法，所述方法包括(a)測定來自所述個體的患病乳腺組織中PAX2-比-DEFBl的表達(dá)率；(b)測定來自所述個體的所述患病乳腺組織的ERA5R狀態(tài)；以及(c)基于(a)和(b)的結(jié)果，向所述個體的乳腺組織給予第一組合物，所述第一組合物 (1)抑制PAX2表達(dá)或PAX2活性，(2)表達(dá)DEFBl，或(3)抑制PAX2表達(dá)或PAX2活性并且表達(dá)DEFB1。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述乳腺疾病是乳腺癌或MIN。
23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第一組合物包含編碼siRNA的多核苷酸，所述 siRNA包含選自以下的序列=SEQ ID NO 3-6禾口 11-15。
24.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第一組合物包含多核苷酸，所述多核苷酸包含正向或反向的SEQ ID NO :1。
25.如權(quán)利要求對所述的方法，其中所述多核苷酸包含V-CCTTG-W序列及其互補(bǔ)序列， 其中V和W是在DEFBl啟動子的PAX2結(jié)合位點(diǎn)側(cè)翼的1至35個核苷酸的連續(xù)核苷酸序列。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述多核苷酸包含選自以下的序列SEQID NO 18-21，25，26，28 和 29。
27.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第一組合物包含選自以下的拮抗劑血管緊張素II的拮抗劑，血管緊張素II受體的拮抗劑，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的拮抗劑，絲裂原活化蛋白激酶(MEK)的拮抗劑，細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1，2 (ERK1，2)的拮抗劑，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)的拮抗劑。
28.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第一組合物包含RAS信號通路的阻斷劑。
29.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第一組合物是與抗體、受體或配體綴合以靶向所述個體腫瘤組織的抗-PAX2劑。
30.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述第一組合物是含有干擾或抑制PAX2與DEFBl 啟動子結(jié)合的小分子抗-PAX2劑。
31.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述步驟(c)還包括給予包含抗激素劑的第二組合物。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述抗激素劑是他莫昔芬。
33.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述步驟(c)還包括給予包含抗-ERBB-2劑的第二組合物。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中所述抗-ERBB-2劑是赫賽汀。
35.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述步驟(c)還包括給予包含抗-Her-2劑的第二組合物。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述抗-Her-2劑是曲妥珠單抗。
37.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述步驟(c)還包括給予包含抗-AIB-1/SRC-3劑的第二組合物。
全文摘要
本申請?zhí)峁┝送ㄟ^抑制PAX2的表達(dá)來預(yù)防和/或治療個體中乳腺癌的方法。在某些實施方案中，抑制PAX2表達(dá)的方法是給予個體編碼PAX2siRNA的核酸。還提供了通過給予DEFB1或通過提高DEFB1的表達(dá)來治療個體中癌癥的方法。
文檔編號A61P35/00GK102481379SQ201080037397
公開日2012年5月30日 申請日期2010年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月24日
發(fā)明者卡爾頓·D·唐納德 申請人:菲吉尼克斯公司