一種靶向人乳腺癌細(xì)胞的多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種靶向人乳腺癌細(xì)胞的多肽及其應(yīng)用，所述多肽如以下通式所示：X1LX2X3X4X5X6X7；本發(fā)明還涉及編碼該多肽的核苷酸序列，以及表達(dá)該多肽的表達(dá)載體及宿主細(xì)胞；本發(fā)明還涉及了該多肽、其形成的二價體、多價體或多肽偶聯(lián)物及其作為靶向多肽與能殺傷癌細(xì)胞的制劑和顯像制劑形成的藥物組合物及其用途，本發(fā)明的多肽能對乳腺癌細(xì)胞標(biāo)志物HER2蛋白特異性結(jié)合，靶向作用明顯，選擇性強(qiáng)，且本發(fā)明涉及的肽可以采用化學(xué)合成的方法制備得到，純度高，分子量小，特異性強(qiáng)，無免疫原性，安全可靠?？捎糜谥苽浒┌Y的靶向探針和藥物載體。
【專利說明】一種靶向人乳腺癌細(xì)胞的多肽及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種多肽及其應(yīng)用，尤其涉及一種靶向乳腺 癌的多肽和由該肽所衍生的且能與人表皮生長因子受體2蛋白（HER2)結(jié)合的產(chǎn)品及上述 多肽或其衍生的產(chǎn)品在制備抗癌藥物或顯像制劑中的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] HER2 是人類表皮生長因子受體-2,由ErbB2(NCBIGenbank，GeneID= 2064)原 癌基因編碼的具有受體酪氨酸激酶（RTK)活性的跨膜糖蛋白，能啟動酪氨酸激酶調(diào)控的信 號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。
[0003]HER2基因擴(kuò)增及蛋白的過度表達(dá)會過度傳遞信號，刺激癌細(xì)胞增殖（Wanyi Tai,RubiMahato,KunCheng.JournalofControlledReleasel46 (2010) 264-275)。研究 表明，HER2在20-30%的乳腺癌中過度表達(dá)，HER2過表達(dá)的乳腺癌浸潤性強(qiáng)，無病生存期 短，預(yù)后差。卵巢癌，胃癌和子宮頸癌等多種腫瘤中都有HER2的過度表達(dá)，HER2已經(jīng)成為 治療癌癥的重要靶標(biāo)。
[0004] 目前，針對HER2胞外區(qū)的抗體藥物研究比較深入，部分藥物已經(jīng)市場化，如赫 賽汀（trastuzumab)、西妥昔單抗（cetuximab)、泰欣生（nimotuzomab)(DorteLisbet Nielsen，CancerTreatmentReviews35 (2009) 121-136)等。赫賽汀是一種人源化單克隆 抗體，選擇性地作用于HER2的胞外部位，1998年被FDA批準(zhǔn)上市用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療， 治療效果明顯好于現(xiàn)有的抗乳腺癌藥物，現(xiàn)在已成HER2陽性乳腺癌患者的首選治療藥物。
[0005] 然而抗體藥物存在著制備繁瑣、穩(wěn)定性較差、費用昂貴、穿透力弱等缺點。因此，為 了提高乳腺癌診斷和治療的特異性和準(zhǔn)確性，彌補抗體的缺陷，迫切需要尋求針對新的乳 腺癌標(biāo)志物設(shè)計小分子探針，以作為檢測和治療乳腺癌的有效方法。
[0006] 肽庫篩選就是在大量肽段中尋找具有特定結(jié)合功能的小分子多肽。目前肽庫篩選 方法包括噬菌體展示肽庫和化學(xué)合成肽庫篩選。經(jīng)典的組合化學(xué)肽庫構(gòu)建方法之一是在固 相合成中，通過對載體微珠的多次混合與均分，使每個微珠上帶有唯一的一種隨機(jī)多肽序 列，稱之為"一珠一物"肽庫，因合成靈活性高，穩(wěn)定可靠而在親和篩選方面獨具優(yōu)勢。
[0007] 多肽類靶向小分子藥物及診斷探針以成本低、分子量小、生物相容性好、穿透性 強(qiáng)、無免疫原性、制備簡單等特點，在腫瘤靶向給藥、癌癥診斷等方面彰顯出很強(qiáng)的優(yōu)越性， 甚至顯示了替代抗體類診療試劑的趨勢。因此，在癌癥研究中針對腫瘤標(biāo)志物合理設(shè)計并 篩選對癌細(xì)胞的高特異親和多肽，繼而發(fā)展成為腫瘤的診斷試劑及治療藥物，是解決上述 難題的有效途徑。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種多肽及其應(yīng)用，特別是一種能與乳腺癌標(biāo)志物HER2 蛋白結(jié)合的多肽和由該肽所衍生的且能與HER2蛋白結(jié)合的產(chǎn)品及上述多肽或其衍生的產(chǎn) 品在制備抗癌藥物或顯像制劑中的用途。
[0009] 為達(dá)到此發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0010] 第一方面，本發(fā)明提供了一種靶向人乳腺癌細(xì)胞的多肽，其通式為：
[0011]X1LX2X3X4X5X6X7
[0012] 其中，L為亮氨酸，X1是堿性氨基酸或芳香族氨基酸，優(yōu)選為賴氨酸或酪氨酸；X2是 芳香族氨基酸，優(yōu)選為苯丙氨酸和色氨酸；X3是堿性氨基酸，優(yōu)選為賴氨酸或精氨酸；X4是 非極性氨基酸，優(yōu)選為亮氨酸或苯丙氨酸；X5是芳香族氨基酸，優(yōu)選為色氨酸或苯丙氨酸； X6是極性氨基酸或脂肪族氨基酸，優(yōu)選為天冬酰胺或谷氨酸；X7是堿性氨基酸，優(yōu)選為精氨 酸和賴氨酸。
[0013] 本發(fā)明所述的氨基酸殘基可以是L-型，也可以是D-型，或者是L-、D-型的混合。
[0014] 優(yōu)選地，本發(fā)明所述多肽的氨基酸序列如HlOF或H6F所示，其分別對應(yīng)序列表中 的序列1或2所示的氨基酸序列。
[0015] 本發(fā)明所得到的HER2靶向多肽的名稱和對應(yīng)多肽序列分別為：
[0016]H6F：YLFFVFER；H10F：KLRLFWNR〇
[0017] 第二方面，本發(fā)明還提供了一種DNA片段，其包含編碼上述本發(fā)明第一方面所述 多肽的氨基酸序列。
[0018] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述DNA片段包含編碼上述本發(fā)明HlOF或H6F的氨基酸序 列。
[0019] 第三方面，本發(fā)明還提供了一種表達(dá)載體，包括至少一個拷貝的編碼氨基酸序列 為本發(fā)明多肽的如本發(fā)明第二方面所述的DNA片段。
[0020] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明的表達(dá)載體，包括至少一個拷貝的編碼氨基酸序列為 本發(fā)明HlOF或H6F所示多肽的如本發(fā)明第二方面所述的DNA片段。
[0021] 第四方面，本發(fā)明還提供了一種原核或真核宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞含有如本發(fā)明 第三方面所述的表達(dá)載體。
[0022] 第五方面，本發(fā)明還提供了一種二價體或多價體，由本發(fā)明第一方面所述的多肽 組裝而成。
[0023] 本發(fā)明中的二價體或多價體具有靶向HER2陽性的腫瘤細(xì)胞的特性。
[0024] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明的二價體或多價體是通過連接分子共價連接形成或通 過與多聚體混合，非共價連接形成的。
[0025] 本發(fā)明可以根據(jù)具體需要來選擇多聚體，例如可以是聚乙二醇（PEG)或環(huán)糊精。
[0026] 第六方面，本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一種藥物組合物，包括本發(fā)明第一方面所述的 多肽或所述多肽的二價體或多價體作為靶向多肽，和能殺傷癌細(xì)胞的制劑。
[0027] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述的多肽、二價體或多價體作為靶向多肽，與能殺傷 癌細(xì)胞的制劑相綴合或混合。
[0028] 優(yōu)選地，所述的制劑為能殺傷癌細(xì)胞的化學(xué)藥物、生物藥物、納米藥物、放射性藥 物、光熱治療或光動力治療藥物或包裹這些藥物的載體中的任意一種。
[0029] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的制劑為烷化劑、抗代謝藥物、抗腫瘤天然藥物、抗腫瘤抗生 素、激素及金屬絡(luò)合物或腫瘤放射靶向標(biāo)記物中的任意一種。
[0030] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述載體為納米材料，脂質(zhì)體或油性化合物中的任意一種，或者由 多種油性化合物所組成的混合物。
[0031] 本發(fā)明采用將第一方面所述的多肽、及第五方面所述的多肽二價體或多價體和納 米材料、脂質(zhì)體等高分子材料綴合，本發(fā)明涉及的肽、二價體或多價體可以使綴合后生成的 化合物在機(jī)體內(nèi)更穩(wěn)定地被運輸?shù)桨屑?xì)胞。
[0032] 本發(fā)明涉及的多肽、二價體或多價體也可以和油性化合物或多種油性化合物的混 合物相混合，本發(fā)明涉及的肽也可以使所得到的混合物在機(jī)體內(nèi)更穩(wěn)定地被運輸?shù)桨屑?xì) 胞。
[0033] 第七方面，本發(fā)明還進(jìn)一步提供了另外一種藥物組合物，所述藥物組合物包括本 發(fā)明第一方面所述的多肽或所述多肽的二價體或多價體；和顯像制劑。
[0034] 優(yōu)選地，所述多肽、二價體或多價體與顯像制劑相綴合或混合。
[0035] 優(yōu)選地，所述的顯像制劑為放射性核素、放射性核素標(biāo)記物或分子影像制劑中的 任意一種。
[0036] 第八方面，本發(fā)明還提供了如本發(fā)明第一方面所述的多肽或所述多肽的二價體或 多價體在制備用于治療、預(yù)防或診斷癌癥的藥物或顯像制劑中的用途。
[0037] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，本發(fā)明所述癌癥為HER2過表達(dá)的癌癥。
[0038] 優(yōu)選地，所述癌癥為乳腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、膀胱癌或子宮頸癌。
[0039] 本發(fā)明的肽具有靶向HER2蛋白的作用，可以作為靶頭增加藥物或載有藥物的載 體如納米材料、脂質(zhì)體等在HER2陽性細(xì)胞中的含量，再添加藥學(xué)上可接受的輔料或佐劑制 成新型的更有效的靶向抗癌藥物。
[0040] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0041] 本發(fā)明根據(jù)HER2蛋白結(jié)構(gòu)域II主要參與HER2家族異二聚化激活信號通路，而且 該區(qū)域氨基酸比較保守，針對這些特點設(shè)計并構(gòu)建一珠一物肽庫，利用免疫磁珠方法進(jìn)行 多肽庫篩選，陽性肽珠經(jīng)MALDI-T0F-MS鑒定，獲得了一系列能特異性結(jié)合HER2的活性多 肽；
[0042] 本發(fā)明涉及的多肽能對HER2陽性細(xì)胞起靶向作用，選擇性強(qiáng)，且本發(fā)明涉及的肽 可以采用化學(xué)合成的方法制備得到，純度高，分子量小，特異性強(qiáng)，無免疫原性，安全可靠。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0043] 圖1為篩選HER2靶向多肽原理示意圖。
[0044] 圖2為表面等離子共振（SPRi)方法檢測HlOF和H6F分別與人HER2蛋白的結(jié)合 力作用。
[0045] 圖3為HlOF分別與人HER2陽性高表達(dá)細(xì)胞SKBR3細(xì)胞、陰性HER2低表達(dá)乳腺癌 細(xì)胞MCF-7和正常細(xì)胞293A的結(jié)合作用。
[0046] 其中，圖3_(a)?⑷是HlOF與人HER2陽性高表達(dá)細(xì)胞SKBR3細(xì)胞的特異性結(jié) 合，圖3-(f)?（h)是HlOF與陰性（HER2低表達(dá)）乳腺癌細(xì)胞MCF-7無特異性結(jié)合，圖 3 (i)?（1)是HlOF與正常細(xì)胞293A無結(jié)合。
[0047] 圖4為H6F分別與人HER2陽性高表達(dá)細(xì)胞SKBR3細(xì)胞、陰性HER2低表達(dá)乳腺癌 細(xì)胞MCF-7和正常細(xì)胞293A的結(jié)合作用。
[0048] 其中，圖4_(a)?⑷是H6F與人HER2陽性高表達(dá)細(xì)胞SKBR3細(xì)胞的特異性結(jié)合， 圖4-(f)?（h)是H6F與陰性（HER2低表達(dá)）乳腺癌細(xì)胞MCF-7無特異性結(jié)合，圖4-⑴? (1)是H6F與正常細(xì)胞293A無結(jié)合。
[0049] 圖5是流式細(xì)胞學(xué)方法檢測H6F與人乳腺癌HER2高表達(dá)細(xì)胞SKBR3的特異性結(jié) 合作用。
[0050] 圖6是流式細(xì)胞學(xué)方法檢測HlOF與人乳腺癌HER2高表達(dá)細(xì)胞SKBR3的特異性結(jié) 合作用。

【具體實施方式】
[0051] 下面通過【具體實施方式】來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明 了，所述實施例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對本發(fā)明的具體限制。
[0052] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0053] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0054] 實施例1本發(fā)明多肽篩選系統(tǒng)的構(gòu)建
[0055] 1.實驗儀器與材料
[0056]N-甲基嗎啉（NMM)，哌陡，三氟乙酸（TFA)，二氯甲烷（DCM)，茚三酮，維生素C，苯 酚，四甲基脲六氟磷酸鹽（HBTU)，六氫吡陡，三異丙基硅烷（TIS)，乙二硫醇（EDT)，N，N二 甲基甲酰胺（DMF)，無水乙醚，樹脂，甲醇，各種Fmoc保護(hù)氨基酸，多肽合成管，搖床，真空水 泵，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上述試劑和材料均從商業(yè)途徑獲得。
[0057] 2."一珠一物"多肽文庫的合成
[0058] 采用Fmoc固相肽合成方法合成多肽文庫，篩選HER2靶向多肽的過程如圖1所示。 具體方法為將被保護(hù)的氨基酸逐個偶聯(lián)到固相樹脂上，然后在強(qiáng)酸下將肽鏈從樹脂上裂解 同時去除側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)。
[0059] 稱取150mg的Tentagel-NH2樹脂，按照上述固相多肽合成程序循環(huán)，依次加入 180mg的Met、Gly、Cys依次進(jìn)行反應(yīng)三個循環(huán)。待反應(yīng)完成后，把樹脂均份3份，向每管分 別加入60mg的His、Lys、Arg與等量的HBTU進(jìn)行偶聯(lián)，待偶聯(lián)完畢后，把3管樹脂混合，脫 保護(hù)。再把樹脂均分為3份，向每管分別加入60mg的Glu、Leu、Asn與等量的HBTU進(jìn)行偶 聯(lián)，待偶聯(lián)完畢后，把3管樹脂混合，脫保護(hù)。再把樹脂均分為4份，向每管分別加入45mg 的Pr〇、Tyr、Trp、Phe與等量的HBTU進(jìn)行偶聯(lián)，待偶聯(lián)完畢后，把4管樹脂混合，脫保護(hù)。再 把樹脂均分為5份，向每管分別加入36mg的LyS、Phe、Leu、ASp、Ser與等量的HBTU進(jìn)行偶 聯(lián)，待偶聯(lián)完畢后，把5管樹脂混合，脫保護(hù)。再把樹脂均分為5份，向每管分別加入36mg 的His、Ser、Leu、Asp、Tyr與等量的HBTU進(jìn)行偶聯(lián)，待偶聯(lián)完畢后，把5管樹脂混合，脫保 護(hù)。再把樹脂均分為5份，向每管分別加入36mg的Tyr、Val、Ala、Asn、Lys與等量的HBTU 進(jìn)行偶聯(lián)，待偶聯(lián)完畢后，把5管樹脂混合，脫保護(hù)。
[0060] 經(jīng)過上述置換和收縮步驟，真空抽干，得到加載有肽庫的干燥樹脂備用。
[0061] 3.與HER2特異性結(jié)合的多肽的篩選
[0062]用IXPBS把陽性HER2肽珠清洗3次，用5%的脫脂牛奶在混旋儀上37°C對肽珠 封閉此。再用IXPBS清洗3次，然后用生物素標(biāo)記的HER2蛋白與肽庫珠在混旋儀上37°C 混合孵育2h，用PBS清洗3次，把孵育后的多肽庫置I. 5mLEP管中，把EP管置于磁力架上。 陽性多肽受磁力影響吸附于EP管側(cè)壁，而陰性多肽由于重力沉降在EP管底。陽性微珠與 生物素標(biāo)記的受體蛋白孵育后，陽性肽珠特異性識別蛋白，鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠通過識 別生物素而識別陽性肽珠。陽性肽珠表面將包覆一層磁珠從而具有磁性從而被磁場捕獲， 相互作用如圖1所示。
[0063] 小心地用移液槍把管底部的肽珠轉(zhuǎn)移到另一個管中，單個肽珠采用溴化氫裂解， 經(jīng)MALDI-T0F-MS鑒定獲得相應(yīng)序列信息。按序列重新合成部分標(biāo)記FITC，MALDI-T0F鑒定 和HPLC純化用于后續(xù)試驗。
[0064] 經(jīng)化學(xué)合成制得本發(fā)明的兩條多肽分別為：H6F:YLFFVFER;H10F:KLRLFWNR。
[0065] 實驗例I通過表面等離子共振（SPRi)方法檢測HlOF和H6F多肽與HER2蛋白的 親和作用
[0066] 將lmg/mL的HlOF和H6F肽及IXPBS點到芯片上，在4 °C濕潤條件下孵育過 夜，然后用10XPBS清洗lOmin，再用IXPBS清洗lOmin，最后用去離子水清洗2次，每 次lOmin，浸入含5%牛奶的IXPBS中，4°C條件下孵育過夜，然后用IOXPBS清洗lOmin， IXPBS清洗lOmin，最后用去離子水清洗2次，每次lOmin，用氮氣吹干，裝芯片上機(jī) (PlexeraPlexArray?HT表面等離子共振成像系統(tǒng)）。
[0067]流動相依次通過 1XPBS、2XPBS、1. 25μg/mL、2. 5μg/mL、5yg/mL、10yg/mL和 20μg/mL的人HER2純化蛋白，記錄分析SPRi信號。
[0068] 由圖2可以看出，HlOF和H6F肽的SPRi信號隨著人HER2蛋白濃度的增加逐漸增 強(qiáng)，說明本發(fā)明的兩條多肽對HER2是有強(qiáng)結(jié)合的，可以作為靶向HER2的多肽用于相關(guān)的研 究應(yīng)用。
[0069] 實驗例2H10F和H6F分別與人HER2陽性乳腺癌細(xì)胞SKBR3、HER2陰性乳腺癌細(xì)胞 MCF-7和正常細(xì)胞系293A的相互作用
[0070] 冊1?2陽性乳腺癌細(xì)胞系31?1?3〇^2高表達(dá)）細(xì)胞用含10%胎牛血清的1?^11640 培養(yǎng)基培養(yǎng)，HER2陰性乳腺癌細(xì)胞MCF-7 (HER2低表達(dá)）和正常人腎纖維母細(xì)胞293A培 養(yǎng)在含10%胎牛血清的H-DMEM培養(yǎng)液中，以IXlOVmL的細(xì)胞濃度植入圓形玻底培養(yǎng) 皿（35mm)，37°C，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，棄去培養(yǎng)液，三種細(xì)胞中分別加入含 1μmol/LHoechst33342 的 50μmol/L的FITC標(biāo)記HlOF和H6F多肽，4°C避光孵育Ih 后，分別棄去多肽溶液，并用預(yù)冷IXPBS洗滌4次。用激光掃描共聚焦顯微鏡（Olympus FV1000-IX81，日本）檢測細(xì)胞中的熒光分布。
[0071] 結(jié)果如圖3和4所示，加入HlOF和H6F的SKBR3細(xì)胞可以觀測到明顯的綠色熒光， 而對照組的MCF-7有微弱熒光或沒有熒光，而293A細(xì)胞則沒有觀測到綠色熒光信號。同時 利用H〇echst33342 ( -種顯示細(xì)胞核的藍(lán)色熒光染料）進(jìn)行核定位，結(jié)果表明HlOF和H6F 多肽結(jié)合在SKBR3細(xì)胞的細(xì)胞膜上，這與HER2表達(dá)部位相同。
[0072] 上述結(jié)果說明HlOF和H6F多肽與人HER2陽性乳腺癌細(xì)胞系的識別是具有專一性 的，是靶向HER2蛋白的，而且特異性與靶標(biāo)蛋白的表達(dá)量呈正相關(guān)，可以作為靶向分子用 于相關(guān)的診斷和檢測。
[0073] 實驗例3流式細(xì)胞學(xué)方法檢測HlOF和H6F分別對人HER2陽性乳腺癌細(xì)胞的結(jié)合 作用
[0074] 收集人乳腺癌HER2高表達(dá)細(xì)胞株SKBR3及陰性對照細(xì)胞SW480,通過查閱文獻(xiàn)，發(fā) 現(xiàn)SKBR3的HER2表達(dá)可以達(dá)到SW480的400倍。懸浮于含10%熱滅活胎牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)液中，細(xì)胞密度在IxlO6AiL左右，分裝于四個I. 5mLEP管中，200μL/管。分別加入 異硫氰酸熒光素（FITC)標(biāo)記HlOF和H6F，最終濃度為0. 5μmol/L，對照組用與多肽等量的 0.OlmMPBS(磷酸緩沖液pH7. 4)代替多肽。避光冰浴孵育30min后，IOOOg離心4min收集 細(xì)胞，加入ImLPBS清洗，重復(fù)清洗2次后，加入500μLPBS，混勻，使用流式細(xì)胞學(xué)方法檢 測熒光強(qiáng)度及結(jié)合比率。
[0075]由圖5和6可以看出，HlOF和H6F肽可結(jié)合人乳腺癌HER2高表達(dá)細(xì)胞，這說明 HlOF和H6F不僅同HER2陽性細(xì)胞有高的親和力，同時還有比較好的特異性，說明本發(fā)明的 多肽單獨使用對HER2陽性腫瘤細(xì)胞有高親和作用，可以作為靶向HER2的多肽使用。
[0076]從實驗例1-3可以得出，本發(fā)明的多肽具有靶向人乳腺癌陽性腫瘤細(xì)胞的特性， 因而在實際應(yīng)用中，可以將本發(fā)明的多肽作為靶向多肽，與能殺傷癌細(xì)胞的制劑相綴合或 混合，用于腫瘤的靶向治療。
[0077] 申請人:聲明，本發(fā)明通過上述實施例來說明本發(fā)明的工藝方法，但本發(fā)明并不局 限于上述工藝步驟，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述工藝步驟才能實施。所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的 技術(shù)人員應(yīng)該明了，對本發(fā)明的任何改進(jìn)，對本發(fā)明所選用原料的等效替換及輔助成分的 添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種靶向人乳腺癌細(xì)胞的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列通式為： x1lx2x3x4x5x 6x7 其中，L為亮氨酸，Xi是堿性氨基酸或芳香族氨基酸，優(yōu)選為賴氨酸或酪氨酸；X2是芳香 族氨基酸，優(yōu)選為苯丙氨酸和色氨酸；χ3是堿性氨基酸，優(yōu)選為賴氨酸或精氨酸；χ4是非極 性氨基酸，優(yōu)選為亮氨酸或苯丙氨酸；χ 5是芳香族氨基酸，優(yōu)選為色氨酸或苯丙氨酸；χ6是 極性氨基酸或脂肪族氨基酸，優(yōu)選為天冬酰胺或谷氨酸；χ 7是堿性氨基酸，優(yōu)選為精氨酸和 賴氨酸。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽由序列表中的序列1或2所示的 氨基酸殘基組成。
3. -種DNA片段，其特征在于，其包含編碼權(quán)利要求1或2所述肽的核苷酸序列。
4. 一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體含有至少一個拷貝的如權(quán)利要求3所述 的DNA片段。
5. -種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞含有權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多肽形成的二價體或多價體，其特征在于，所述的二價體 或多價體具有靶向HER2陽性腫瘤細(xì)胞的特性； 優(yōu)選地，所述的二價體或多價體是通過連接分子共價連接形成的； 優(yōu)選地，所述的二價體或多價體是通過與多聚體混合，非共價連接形成的； 優(yōu)選地，所述多聚體為聚乙二醇（PEG)或環(huán)糊精。
7. -種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括權(quán)利要求1-2或6任一項所述的 多肽、所述多肽的二價體或多價體和能殺傷癌細(xì)胞的制劑； 優(yōu)選地，所述的多肽、二價體或多價體作為靶向多肽，與能殺傷癌細(xì)胞的制劑相綴合或 混合； 優(yōu)選地，所述的制劑為能殺傷癌細(xì)胞的化學(xué)藥物、生物藥物、納米藥物、放射性藥物、光 熱治療或光動力治療藥物或包裹這些藥物的載體中的任意一種； 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的制劑為烷化劑、抗代謝藥物、抗腫瘤天然藥物、抗腫瘤抗生素、激 素、金屬絡(luò)合物或腫瘤放射靶向標(biāo)記物中的任意一種； 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述載體為納米材料，脂質(zhì)體或油性化合物中的任意一種，或者由多種 油性化合物所組成的混合物。
8. -種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括權(quán)利要求1-2或6任一項所述的 多肽和顯像制劑； 優(yōu)選地，所述的多肽、二價體或多價體與顯像制劑相綴合或混合； 優(yōu)選地，所述的顯像制劑為放射性核素、放射性核素標(biāo)記物或分子影像制劑中的任意 一種。
9. 權(quán)利要求1-2或6任一項所述的肽、二價體或多價體在制備用于治療、預(yù)防或診斷癌 癥的藥物或顯像制劑中的用途。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述癌癥為HER2蛋白過表達(dá)的癌癥； 優(yōu)選地，所述癌癥為乳腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、結(jié)腸癌、膀胱癌或子宮頸癌中的任意一 種。
【文檔編號】C12N15/63GK104262460SQ201410453048
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】王子華, 王蔚芝, 胡志遠(yuǎn) 申請人:國家納米科學(xué)中心