專利名稱：鈉尿肽受體a的激動劑在疼痛治療中的用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)藥領域。更具體地，本發(fā)明涉及鈉尿肽受體激動劑，優(yōu)選鈉尿肽受體A的激動劑(例如B型鈉尿肽或心房鈉尿肽)，在疼痛治療中的用途。
背景技術(shù)：
疼痛，是機體對損傷組織或潛在的損傷產(chǎn)生的一種不愉快的反應，是一種復雜的生理心理活動，也是臨床上最常見的癥狀之一。它由痛覺和痛反應兩部分組成。它包括傷害性刺激作用于機體所引起的痛感覺，以及機體對傷害性刺激的痛反應(軀體運動性反應和/或內(nèi)臟植物性反應，常伴隨有強烈的情緒色彩)。痛覺可作為機體受到傷害的一種警告，引起機體一系列防御性保護反應。但另一方面，某些劇烈或長期的疼痛，對機體已成為一種難以忍受的折磨。因此，鎮(zhèn)痛是本領域研究者所面臨的重要任務。眾所周知，神經(jīng)肽及其受體在疼痛傳遞和調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用。神經(jīng)肽是泛指存在于神經(jīng)組織并參與神經(jīng)系統(tǒng)功能作用的內(nèi)源性活性物質(zhì)，是一類特殊的信息物質(zhì)。 它們的特點是含量低、活性高、作用廣泛而又復雜，在體內(nèi)調(diào)節(jié)多種多樣的生理功能，如痛覺、睡眠、情緒、學習與記憶，甚至于神經(jīng)系統(tǒng)本身的分化和發(fā)育都受神經(jīng)肽的調(diào)節(jié)。背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元在接受痛刺激時會分泌其表達的P物質(zhì)和降鈣素基因相關(guān)肽，從而增強興奮性突觸傳遞(Schaible，1996，Prog Brain Res 113:423-441)。生長抑素及其受體也表達在一部分背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元中，激活生長抑素受體會降低炎癥引起的傷害性感受(HSkfelt等，1976，Neuroscience 1 :131-136 ；Carlton 等，2001，Pain 90 233-244 ；Bar 等，2004，Neuroscience 127 :197-206)。此外，在正常情況下，甘丙肽、神經(jīng)降壓素和神經(jīng)肽Y也都表達在背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中，同時這些神經(jīng)肽也在脊髓背角神經(jīng)元中有表達(Todd等，1994，JNeurosci 14 774-784 ;Simmons 等，1995，Neurosci Lett 187 :119-122 ;Zhang 等，1995，JNeurosci 15: 2733-2747 ;Zhang 等，1997，Proc Natl Acad Sci USA 94 :729-734 ;Zhang 等，1998，Ann N Y Acad Sci 863 :402-413 ;Polgar 等，1999，J Neurosci 19:2637-2646)。和 P 物質(zhì)、 降鈣素基因相關(guān)肽以及生長抑素一樣，這些神經(jīng)肽也參與調(diào)節(jié)背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元電活動 (Zhang 等，1995，J Neurosci 15 :2733-2747 ;Xu 等，1997，Proc Natl Acad Sci USA 94: 13262-13266)。值得注意的是，以上提到的這些神經(jīng)肽及其受體在周圍神經(jīng)損傷或炎癥情況下，它們在背根神經(jīng)節(jié)中的表達會發(fā)生顯著性的改變(Ji等，1994，J Neurosci 14 6423-6434 Ji 等，1995，Neuroscience 68 :563-576 ;Zhang 等，1995，J Neurosci 15: 2733-2747 ；Zhang等，1998，Ann N Y Acad Sci 863 :402-413 ；Xiao等，2002，ProcNatl Acad Sci USA 99 :8360-8365)，這表明它們在調(diào)節(jié)病理性疼痛方面發(fā)揮著潛在的作用。雖然本領域關(guān)于神經(jīng)肽的研究已獲得了上述進展，但本領域仍然迫切需要進一步研究出那些未知的神經(jīng)肽和受體在背根神經(jīng)節(jié)中表達，以及在外圍組織炎癥后其表達所發(fā)生的變化，從而開發(fā)出治療或緩解疼痛的有效途徑和方法。鈉尿肽是旁分泌因子，家族中包括四個成員心房鈉尿肽、B型鈉尿肽和C型鈉尿肽(Potter等，2009，Handb Exp Pharmacol :341-366)。B型鈉尿肽也稱腦鈉尿肽，由心臟的心室表達和分泌。心房鈉尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)是由心房肌細胞合成并釋放的肽類激素，其主要作用是使血管平滑肌舒張和促進腎臟排鈉、排水。D型鈉尿肽是從一種美洲眼鏡蛇中提煉出來的38個氨基酸的多肽，其具有調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、 消化系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的功能。目前，將鈉尿肽受體(natriuretic peptide receptor, NPR)分為 A、B、C 三個亞型，其中A受體(NPR-A)和B受體(NPR-B)是鳥苷酸環(huán)化酶偶聯(lián)受體，鈉尿肽與A、B受體結(jié)合后，激活受體的鳥苷酸環(huán)化酶活性，通過升高細胞內(nèi)cGMP發(fā)揮生理效應；C受體(NPR-C) 為非偶聯(lián)受體，主要介導鈉尿肽的清除。鈉尿肽受體A屬于鳥苷酸環(huán)化酶受體，B型鈉尿肽與鈉尿肽受體A結(jié)合會提高 ^fflIfirtJf^if13' ,5' -iMW. (cyclic guanosine 3' ,5' -monophosphate, cGMP) ^yjC 平(Misono，2002，Mol Cell Biochem 230 :49-60)，然后進一步活化 cGMP 依賴的蛋白激酶 (cGMP-dependent protein kinase, PKG)、離子通道以及其它效應分子(Hofmann 等，2006， Physiol Rev 86 :1_2；3)。鈉尿肽受體A同時也是心房鈉尿肽的受體。鈉尿肽受體A目前主要被發(fā)現(xiàn)表達在心血管、腎臟和腎上腺中，發(fā)揮著調(diào)節(jié)血管舒張、尿鈉排泄和醛固酮合成等功能(Hofmann 等，2006，Wiysiol Rev 86 :1_23)。雖然目前大多數(shù)研究B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A的表達和作用都是集中在心血管系統(tǒng)(Woodard 和 Rosado，2007，J Cell Mol Med 11 :1263-1271 ;Potter 等，2009，Handb Exp Pharmacol :341-366)，最近也有研究表明B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A也在中樞神經(jīng)系統(tǒng)也有低水平表達，并且有調(diào)節(jié)突觸傳遞以及神經(jīng)保護作用(Richard和Bourque，1996， J Neurosci 16 :7526-7532 ;Kuribayashi 等，2006，Brain Resl071:34-41;Cao 和 Yang， 2008，Prog Neurobiol 84 :234-248)。然而，本領域從未對鈉尿肽和其受體(例如B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A)在周圍神經(jīng)系統(tǒng)的表達和功能進行研究，也不清楚其與疼痛之間是否存在關(guān)系。綜上所述，盡管目前本領域已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些在感覺信息傳遞中起作用的分子，然而還迫切需要研究在感覺信息傳遞過程中還有那些分子在起作用，以推動對感覺信息傳遞的了解，提出新的鎮(zhèn)痛策略和開發(fā)新的鎮(zhèn)痛藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一就是揭示周圍神經(jīng)cGMP上調(diào)物質(zhì)(如鈉尿肽受體)在制備用于緩解或治療疼痛(尤其是慢性疼痛)的藥物組合物中的用途。本發(fā)明還具體揭示了鈉尿肽受體(如鈉尿肽受體A)激動劑(如B型鈉尿肽)在周圍神經(jīng)系統(tǒng)的表達和功能。本發(fā)明的另一目的是提供B型鈉尿肽、其受體及其調(diào)節(jié)劑在疼痛治療中的用途。在本發(fā)明的第一方面，提供了外周神經(jīng)cGMP上調(diào)物質(zhì)在制備用于緩解或治療疼痛的藥物組合物中的用途。在本發(fā)明的一個實施方式中，所述外周神經(jīng)cGMP上調(diào)物質(zhì)是鈉尿肽受體激動劑。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述鈉尿肽受體激動劑選自鈉尿肽受體A的激動劑、鈉尿肽受體B的激動劑和/或鈉尿肽受體C的激動劑。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述鈉尿肽受體激動劑選自天然鈉尿肽、它們具有激動鈉尿肽受體活性的類似物、或其組合。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述天然鈉尿肽選自心房鈉尿肽、B型鈉尿肽、C 型鈉尿肽、D型鈉尿肽、尿擴張素、前鈉尿肽、原-前鈉尿肽或它們的組合。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述類似物選自與PEG偶聯(lián)的天然鈉尿肽；與血清白蛋白或其片段偶聯(lián)的天然鈉尿肽；天然鈉尿肽的可變剪切產(chǎn)物；由天然鈉尿肽的環(huán)狀部分與氨基端和/或羧基端尾部形成的融合蛋白，優(yōu)選由一種天然鈉尿肽的環(huán)狀部分與另一種天然鈉尿肽的非環(huán)狀部分組成的融合蛋白。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述衍生物選自；AlbuBNP、⑶_NP、ASBNP, ASBNP. 1、hBNPl-32、hBNP-OM、奈西立肽、或它們的組合。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述鈉尿肽受體激動劑是鈉尿肽受體A的激動劑。在一個優(yōu)選例中，所述鈉尿肽受體A是哺乳動物的鈉尿肽受體A。在另一個優(yōu)選例中，所述哺乳動物選自人、猩猩、猴子、犬、大鼠、小鼠、牛、馬、羊或豬。在本發(fā)明的一個實施方式中，所述鈉尿肽受體A的激動劑選自B型鈉尿肽或心房鈉尿肽。在一個優(yōu)選例中，所述B型鈉尿肽或心房鈉尿肽選自(a) SEQ ID NO 1所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)或SEQ ID NO 2所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)；(b) (a)中所限定的蛋白質(zhì)的保守性變異蛋白質(zhì)或其活性片段；或(c)將(a)中氨基酸序列經(jīng)過1-20個，優(yōu)選1_10個，更優(yōu)選1_5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有激活鈉尿肽受體A的活性的、由(a)衍生的蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述B型鈉尿肽或心房鈉尿肽的形式選自下組: 分離的B型鈉尿肽或心房鈉尿肽、其編碼序列或包含其編碼序列的載體或遺傳工程化的宿主細胞。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述疼痛是自身源性疼痛。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述身源性疼痛選自神經(jīng)病理性疼痛或傷害感受性疼痛。在一個優(yōu)選例中，所述神經(jīng)病理性痛選自背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)源性痛、三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)源性痛、偏頭痛或坐骨神經(jīng)痛，優(yōu)選為選自下組的由周圍神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或病理改變引起的疼痛腰背痛、神經(jīng)痛、纖維性肌痛、糖尿病相關(guān)的神經(jīng)痛、多發(fā)性硬化相關(guān)的神經(jīng)痛、 帶狀皰疹后神經(jīng)痛以及與HIV有關(guān)聯(lián)的神經(jīng)病理性神經(jīng)痛。在另一個優(yōu)選例中，所述傷害感受性疼痛選自軀體傷害感受性疼痛或內(nèi)臟傷害感受性疼痛，優(yōu)選癌痛、關(guān)節(jié)炎痛、術(shù)后痛或與HIV有關(guān)聯(lián)的傷害感受性疼痛。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述疼痛是炎性痛。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述炎性痛選自關(guān)節(jié)炎痛、糖尿病并發(fā)末梢神經(jīng)炎性疼痛、外周組織炎性痛或內(nèi)臟炎性痛。
在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述疼痛是慢性疼痛或急性疼痛，優(yōu)選所述慢性疼痛是慢性感受性疼痛或慢性神經(jīng)病理性疼痛，更優(yōu)選慢性感受性疼痛。在本發(fā)明的另一個實施方式中，所述慢性疼痛選自下組軟組織、關(guān)節(jié)和骨疼痛各種骨關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷后畸形性疼痛、骨骼肌疼痛、腰痛、肌筋膜疼痛綜合征、頭痛、燒傷后疼痛；深部組織和內(nèi)臟痛 心血管疼痛、眼痛、口面部疼痛、慢性婦科疼痛、性交痛、泌尿生殖系統(tǒng)慢性疼痛；神經(jīng)和神經(jīng)根損傷性疼痛截肢后幻肢痛、周圍神經(jīng)性疼痛、反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良和交感神經(jīng)持續(xù)痛、三叉神經(jīng)痛和非典型性面部痛、神經(jīng)根損傷和蛛網(wǎng)膜炎、帶狀皰疹后神經(jīng)痛；中樞性疼痛腦、脊髓的血管損傷，如出血、梗塞、血管畸形；多發(fā)性硬化；外傷性脊髓損傷，腦損傷；脊髓空洞癥和延髓空洞癥；腫瘤；帕金森??；兒童疼痛生長痛；老年人疼痛頸椎病、 腰椎間盤突出癥、腰椎滑脫所致疼痛；或癌性疼痛。在本發(fā)明的第二方面中，提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)緩解或治療疼痛有效量的鈉尿肽受體(例如鈉尿肽受體A)的激動劑；(b)藥學上可接受的載體。在本發(fā)明的一個實施方式中，所述鈉尿肽受體A的激動劑選自B型鈉尿肽或心房鈉尿肽。在一個優(yōu)選例中，所述B型鈉尿肽或心房鈉尿肽選自(a) SEQ ID NO 1所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)或SEQ ID NO 2所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)；(b) (a)中所限定的蛋白質(zhì)的保守性變異蛋白質(zhì)或其活性片段；或(c)將(a)中氨基酸序列經(jīng)過1-20個，優(yōu)選1_10個，更優(yōu)選1_5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有激活鈉尿肽受體A的活性的、由(a)衍生的蛋白質(zhì)。在另一個優(yōu)選例中，所述B型鈉尿肽或心房鈉尿肽的形式選自下組分離的B型鈉尿肽或心房鈉尿肽、其編碼序列或包含其編碼序列的載體或遺傳工程化的宿主細胞。在本發(fā)明的第三方面中，提供了一種篩選可用于緩解或治療疼痛的潛在物質(zhì)的方法，所述的方法包括(1)將候選物質(zhì)與背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元接觸；(2)檢測候選物質(zhì)是否可激活鈉尿肽受體/PKG/BKCa途徑(例如鈉尿肽受體A/ PKG/BKCa 途徑)；若所述候選物質(zhì)可激活鈉尿肽受體/PKG/BKCa途徑，則表明該候選物質(zhì)是緩解或治療疼痛的潛在物質(zhì)。在一個優(yōu)選例中，所述鈉尿肽受體/PKG/BK&途徑活化的檢測是通過測試一個或多個選自下組的指標進行的鈉尿肽受體的表達水平、電活動、鈣離子水平、細胞內(nèi)cGMP水平、已知鈉尿肽受體A/PKG/BK。a途徑的抑制劑對該候選物質(zhì)作用的逆轉(zhuǎn)或抑制。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。


圖1 :B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A在背根神經(jīng)節(jié)中的表達以及在外周組織炎癥后的表達變化。
圖IA 被基因芯片檢測出的外周炎癥后表達有顯著變化的神經(jīng)肽和神經(jīng)肽受體的聚類分析。CFA足底注射后，18個神經(jīng)肽和7個神經(jīng)肽受體在腰(L) 4和L5背根神經(jīng)節(jié)的表達水平顯著增加，包括B型鈉尿肽及其受體鈉尿肽受體A ；圖IB 免疫印跡分析表明與對照組相比，CFA足底注射后L4和L5背根神經(jīng)節(jié)的B 型鈉尿肽和鈉尿肽受體A蛋白質(zhì)水平也相應增加。背根神經(jīng)節(jié)中B型鈉尿肽蛋白質(zhì)水平在外周炎癥后逐漸增加，在注射第4天達到高峰。鈉尿肽受體A在注射后第1天蛋白質(zhì)水平開始增加，并于第2天到達高峰。以甘油三磷酸脫氫酶(GAPDH)用作上樣內(nèi)參0.05， 與正常組比較。圖2 :B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A在背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元中的表達以及在周圍炎癥后的表達變化。圖2A 免疫組織化學染色表明B型鈉尿肽免疫反應和鈉尿肽受體A免疫反應主要分布在L4和L5背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元。CFA足底注射2天后，B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A在背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元表達增加。被B型鈉尿肽免疫染色的神經(jīng)元數(shù)量大于被鈉尿肽受體A 免疫染色的神經(jīng)元數(shù)量。所有鈉尿肽受體A陽性神經(jīng)元也呈B型鈉尿肽陽性。標尺50微米。圖2B 正常和CFA足底注射2天后大鼠B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A陽性的L4和 L5背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細胞大小分布。B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A陽性神經(jīng)元尺寸落在背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元的大小范圍內(nèi)(橫截面面積< 900平方微米)。圖2C 背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元B型鈉尿肽免疫強度從正常大鼠的63. 56士0. 69 (608 個神經(jīng)元)增加到CFA足底注射2天后的81. 64士0. 87 (606個神經(jīng)元)。鈉尿肽受體A免疫熒光強度也從正常的58. 02士0. 83(324個神經(jīng)元)增加至炎癥2天后的51. 14士0. 67(317 個神經(jīng)元)。_p< 0.001，與正常組比較。圖2D 在L4和L5背根神經(jīng)節(jié)，正常和CFA足底注射2天后分別約52%和53%的 B型鈉尿肽陽性神經(jīng)元也染色鈉尿肽受體A ；幾乎所有的鈉尿肽受體A陽性神經(jīng)元均呈B型鈉尿肽陽性。圖3 =B型鈉尿肽在TrkA陽性的背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元中的表達。圖3A 雙染色表明B型鈉尿肽存在于TrkA陽性的大鼠背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元中。圖;3B =B型鈉尿肽存在于背根神經(jīng)節(jié)CGRP陽性和IB4陽性小神經(jīng)元中。比例尺 50微米。圖4 鈉尿肽受體A在背根神經(jīng)節(jié)肽能小神經(jīng)元中的表達。圖4A 雙染色顯示鈉尿肽受體A表達在含CGRP的大鼠背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元中。圖4B 在脊髓背角淺層，鈉尿肽受體A陽性纖維同時也表達CGRP。此外，鈉尿肽受體A免疫反應還發(fā)現(xiàn)沿血管分布(箭頭所指)。比例尺50微米。圖5 存在谷氨酸條件下，B型鈉尿肽對背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元興奮性的降低作用。圖5A 全細胞膜片鉗記錄顯示成年大鼠背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元受去極化斜坡電流刺激(1秒的時間，峰從100至500皮安培)誘發(fā)的動作電位的放電頻率在加了 100納克/ 毫升B型鈉尿肽10分鐘后并沒有發(fā)生明顯改變，加10微摩爾谷氨酸則增加了放電頻率。然而B型鈉尿肽和谷氨酸一起處理(100納克/毫升B型鈉尿肽+10微摩爾谷氨酸，10分鐘) 則顯著地抑制了神經(jīng)元興奮性。
圖5B :電流刺激引起的背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元動作電位的放電頻率比值(加藥后除以加藥前)在加細胞外液(1. 13士0.06，22例)與加B型鈉尿肽(100納克/毫升； 1. 13士0. 09，14例)組間沒有顯著性區(qū)別(p = 0. 971)。但加10微摩爾谷氨酸后有輕微增加(1. 49士0. 14，10例，p = 0. 035)。B型鈉尿肽和谷氨酸一起加很大程度上抑制了誘發(fā)的動作電位(0.08士0.05，21例，_ <0.001)。B型鈉尿肽加谷氨酸導致的神經(jīng)元興奮性抑制可以被預先處理PKG抑制劑KT5823 (1. 81 + 0. 17，11例)或鉀通道BKca阻滯劑 iberiotoxin(IBTX) (1. 14士0. 15，10 例)阻斷。圖6 鞘內(nèi)注射B型鈉尿肽對福爾馬林誘導的急性痛的抑制作用。圖6A:鞘內(nèi)注射B型鈉尿肽(100納克、500納克和2微克，先于足底注射福爾馬林 10分鐘)劑量依賴性地降低福爾馬林誘導的兩相痛反應(P < 0. 001，分別對應100納克、 500納克和2微克B型鈉尿肽；與注射鹽水組比較，AN0VA, 7例鼠/組)。圖6B =B型鈉尿肽誘導的抗傷害性作用可以被鞘內(nèi)預先注射(先于鞘內(nèi)注射B型鈉尿肽10分鐘)PKG抑制劑KT5823(500納克)或鉀通道BKca阻滯劑iberiotoxin (IBTX) (500納克)阻斷(第一相:p = 0.038和0.048，第二相=P = 0. 003和0. 037，為共同給予 B型鈉尿肽和KT5823或IBTX，與B型鈉尿肽單獨給比較，7例鼠/組)，而采用ATP敏感鉀通道阻滯劑格列苯脲(Glib) (50微克)不能阻斷B型鈉尿肽的作用。福爾馬林的致痛行為不能被KT5823、IBTX或Glib單獨處理影響(7例鼠/組)。*p < 0. 05，和鹽水組比；#p < 0. 05、##p < 0.01，與B型鈉尿肽單獨給比較。圖7 鞘內(nèi)注射B型鈉尿肽對CFA誘導的慢性炎性痛的抑制作用。圖7A:在大鼠左后爪足底注射CFA兩天后，鞘內(nèi)注射B型鈉尿肽O微克)大大增加了輻射熱試驗的縮爪潛伏期ΓΡ < 0. 001，AN0VA,與注射鹽水組比較，7例鼠/組)。圖7B CFA足底注射2天和4天后，鞘內(nèi)注射B型鈉尿肽增加了熱刺激縮爪潛伏期。 數(shù)據(jù)采自B型鈉尿肽注射120分鐘點。(P < 0. 001、= 0. 039和0. 211，對應為B型鈉尿肽在CFA注射后第2、4和7天，與注射鹽水組比較，7例鼠/組)。鞘內(nèi)注射KT5823則阻礙了自身熱痛覺恢復。數(shù)據(jù)采自KT5823注射120分鐘點。(P = 0. 056、< 0. 001和< 0. 001，對應為KT5823在CFA注射后第2、4和7天，與注射鹽水組比較，7例鼠/組)。*p < 0. 05和 ***p < 0. 001，與鹽水組比較。
具體實施例方式發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究發(fā)現(xiàn)鈉尿肽受體(例如鈉尿肽受體A)的激動劑 (例如B型鈉尿肽)可通過激活鈉尿肽受體介導的鈉尿肽受體/PKG/BK。a途徑降低疼痛，從而可用于鎮(zhèn)痛(尤其是炎性痛或慢性疼痛)。由此，發(fā)明人提供了一種緩解和/或治療疼痛的新策略和新藥物類型。在此基礎上發(fā)明人完成了本發(fā)明。以發(fā)明人關(guān)于B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A的研究為例，在此項研究中，發(fā)明人利用基因芯片和免疫分析發(fā)現(xiàn)B型鈉尿肽和鈉尿肽受體A的在背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion, DRG)中表達，并且在完全弗氏佐劑(complete Freund' s adjuvant，CFA)足底注射誘導的大鼠炎性痛模型中表達增加。免疫組織化學結(jié)果顯示B型鈉尿肽表達在神經(jīng)生長因子受體(tyrosine kinase receptor A, TrkA)陽性背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元中，其中包括大多數(shù)降鈣素基因相關(guān)肽(calcitoningene-related peptide, CGRP)陽性小神經(jīng)元和IB4(isolectin B4)陽性小神經(jīng)元。而鈉尿肽受體A則僅存在于CGRP陽性小神經(jīng)元中。外源性應用B型鈉尿肽會降低背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元興奮性，其作用主要是通過開放大電導鈣激活鉀通道(large-conductance Ca2+_activated K+channel，zBKCa)而實現(xiàn)。此外，鞘內(nèi)注射B型鈉尿肽能顯著地抑制因腳掌注射福爾馬林引起的痛行為和CFA誘導大鼠熱痛覺過敏。如果鞘內(nèi)預先給予cGMP依賴的蛋白激酶(cGMP-cbpendent protein kinase, PKG)抑制劑KT5823或鉀通道BKea阻滯劑iberiotoxin則阻斷了 B型鈉尿肽介導的鎮(zhèn)痛作用。因此，B型鈉尿肽通過其突觸前受體鈉尿肽受體A反向調(diào)節(jié)了痛覺傳遞。這表明在傷害性感覺神經(jīng)通路中，激活B型鈉尿肽/鈉尿肽受體A是治療或緩解疼痛的潛在策略。發(fā)明人的研究還進一步表明了體內(nèi)激活鈉尿肽受體/cGMP/PKG/BKCa途徑，可緩解對象的疼痛，因此使用合適的激動劑選擇性激活傷害性傳入神經(jīng)元鈉尿肽受體介導的信號通路可以進一步作為治療或緩解疼痛的潛在策略。如本文所用，“含有”、“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……構(gòu)成”、“基本上由……構(gòu)成”、和“由……構(gòu)成”；“主要由……構(gòu)成”、“基本上由……構(gòu)成”和“由……構(gòu)成” 屬于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。疼痛及其分類如本文所用，術(shù)語“疼痛”是指機體對損傷組織或潛在的損傷產(chǎn)生的一種不愉快的反應，是一種復雜的生理心理活動，也是臨床上最常見的癥狀之一。疼痛可分為身源性 (somatogenic)疼痛和心因性(psychogenic)疼痛。身源性疼痛又可分感受性疼痛(如傷害感受性疼痛，nociceptive pain)與神經(jīng)病理性疼痛(Neuropathic Pai) 0疼痛根據(jù)其發(fā)生和持續(xù)的時間和進程可分為急性疼痛和慢性疼痛，慢性疼痛也包括慢性感受性疼痛或慢性神經(jīng)病理性疼痛。神經(jīng)病理性疼痛是由于中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或病理改變引起，包括但不限于腰背痛(lower back pain)、神經(jīng)痛(neuralgia)、纖維性肌痛(Fibromyalgia)、糖尿病相關(guān)的神經(jīng)痛(diabetic neuropathic pain, DNP)、多發(fā)性硬化相關(guān)的神經(jīng)痛(pain associated with multiple sclerosis)、帶狀皰疹后神經(jīng)痛(PHN)和HIV有關(guān)聯(lián)的(神經(jīng)病理性)神經(jīng)痛(HIVNP)等。傷害感受器性疼痛是由于人體內(nèi)的傷害感受器受到機械、熱、化學刺激或損傷引起，可分為軀體傷害感受器性疼痛和內(nèi)臟傷害感受器性疼痛，包括但不限于癌痛 (cancer-related pain)、關(guān)節(jié)炎痛(arthritic pain)、術(shù)后痛(post-operative pain)禾口 HIV有關(guān)聯(lián)的(傷害感受器性)神經(jīng)痛(HIVNP)等。其中，神經(jīng)痛(neuralgia)包括但不限于三叉神經(jīng)痛(Trigeminal neuralgia)、坐骨神經(jīng)痛(sciatic neuralgia)等。疼痛根據(jù)其發(fā)生和持續(xù)的時間和進程可分為急性疼痛和慢性疼痛。急性疼痛是一群隨損傷或各種急癥等明顯刺激因素迅速發(fā)生的復雜而不愉快的感受、知覺和情感上的體驗，伴有自主的、心理的和行為的反應，其包括手術(shù)后、創(chuàng)傷后疼痛、燒傷和各種內(nèi)外科急癥，例如心梗，急性胰腺炎，膽絞痛，腎絞痛，急性闌尾炎、病理性骨折，急性腸梗阻患者出現(xiàn)急性疼痛等。急性疼痛的治療方法包括病房開展自控鎮(zhèn)痛 (PCA)，將局麻藥和/或阿片類藥于硬膜外腔輸注等。在機理或動物試驗中常采用甲醛法、 熱板法等模型或方法造成動物的急性疼痛，并立即給予待測藥物，以觀察待測藥物對急性疼痛的緩解作用。慢性疼痛是是指疼痛持續(xù)較長時間(如超過數(shù)周 1個月)，超過一般急性病的進展，或者超過傷口愈合的合理時間，或與引起持續(xù)疼痛的慢性病理過程有關(guān)，或者經(jīng)過數(shù)月或數(shù)年的間隔時間疼痛復發(fā)。在機理或動物試驗中常采用完全弗氏佐劑等誘導造成動物的慢性疼痛，并在誘導數(shù)日乃至數(shù)周后給予待測藥物，以觀察待測藥物對慢性疼痛的緩解作用。慢性疼痛的病程長、病因復雜；中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的不同結(jié)構(gòu)和功能的異常； 自主神經(jīng)系統(tǒng)和情緒的變化；以及社會適應能力、生活或/和工作能力的降低；精神、家庭多方面的心理障礙的特點，決定了康復治療手段對于慢性疼痛治療的重要意義。慢性疼痛不緩解，會從心理上、生理上給患者造成不良影響；不能緩解的疼痛將延遲患者的恢復，延長住院日期，給患者和家屬增加負擔，加大醫(yī)療保險費用，使之喪失工作、 家庭、尊嚴，引起抑郁、焦慮、自殺，使心理殘廢的群體擴大。不僅如此，還增加了社會的不安定因素。相比較而言，現(xiàn)在一般認為急性疼痛是疾病的一個癥狀，而慢性疼痛是一類疾病。慢性疼痛包括但不限于①軟組織、關(guān)節(jié)和骨疼痛各種骨關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷后畸形性疼痛、骨骼肌疼痛、腰痛、肌筋膜疼痛綜合征、頭痛、燒傷后疼痛。②深部組織和內(nèi)臟痛心血管疼痛、眼痛、口面部疼痛、慢性婦科疼痛、性交痛、泌尿生殖系統(tǒng)慢性疼痛。③神經(jīng)和神經(jīng)根損傷性疼痛截肢后幻肢痛、周圍神經(jīng)性疼痛、反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良和交感神經(jīng)持續(xù)痛、三叉神經(jīng)痛和非典型性面部痛、神經(jīng)根損傷和蛛網(wǎng)膜炎、帶狀皰疹后神經(jīng)痛。④中樞性疼痛腦、脊髓的血管損傷，如出血、梗塞、血管畸形；多發(fā)性硬化；外傷性脊髓損傷，腦損傷；脊髓空洞癥和延髓空洞癥；腫瘤；帕金森病。⑤兒童疼痛生長痛。⑥老年人疼痛各種頸椎病、腰椎間盤突出癥、腰椎滑脫等所致疼痛。⑦癌性疼痛。目前，慢性疼痛治療的主要方法有①慢性疼痛的藥物治療法，如使用阿片類藥物，非阿片類藥物，腎上腺皮質(zhì)激素，解痙藥和維生素類藥物，神經(jīng)安定藥，局部麻醉藥，神經(jīng)破壞藥等；②慢性疼痛的神經(jīng)與局部阻滯法，如硬膜外阻滯療法，蛛網(wǎng)膜下腔阻滯療法，三叉神經(jīng)阻滯療法，顳頌關(guān)節(jié)阻滯療法，肩胛上神經(jīng)阻滯療法，椎旁神經(jīng)根阻滯療法，坐骨神經(jīng)阻滯療法，星狀神經(jīng)節(jié)阻滯療法等；③慢性疼痛的神經(jīng)外科治療法，如神經(jīng)后根切斷術(shù)，低位腦神經(jīng)切斷術(shù)和腦神經(jīng)的經(jīng)皮熱凝固術(shù)，硬脊膜內(nèi)脊神經(jīng)根切斷術(shù)，硬脊膜外神經(jīng)根切斷術(shù)，選擇性后根根絲切斷術(shù)，經(jīng)皮脊神經(jīng)根毀損術(shù)，經(jīng)皮中央分支神經(jīng)切斷術(shù)；④CT 引導下腦立體定向外科毀損術(shù)，如三叉神經(jīng)毀損術(shù)，經(jīng)皮椎間盤切吸術(shù)，晚期頑固性癌痛神經(jīng)毀損術(shù)，腦垂體破壞鎮(zhèn)痛，手術(shù)戒毒；⑤刺激療法，如經(jīng)皮神經(jīng)電刺激，脊髓電刺激， 腦刺激法緩解疼痛；⑥慢性疼痛的心理治療，如安慰劑和安慰劑效應，放松和生物反饋，認知一行為方法，催眠止痛，行為治療；⑦慢性疼痛的物理治療，如超聲波、超短波、微波、激光、表面加熱和冷卻、紅外偏振光等療法緩解疼痛；推拿與按摩緩解疼痛；運動訓練和運動限度緩解疼痛；⑧癌性疼痛的處理；⑨其他方法，如介入性射頻熱凝術(shù)，A-肉毒毒素注射治療慢性疼痛，癌性痛的放療、化療、內(nèi)分泌療法，針灸療法，小針刀療法，患者自控鎮(zhèn)痛療法(PCA)等。雖然本領域中已知疼痛治療和控制的各種方法，但是本領域中仍然迫切需要開發(fā)出有效針對疼痛(尤其是慢性疼痛)的有效藥物。周圍神經(jīng)系統(tǒng)cGMP上調(diào)物質(zhì)和鈉尿肽警體的激活劑如本文所用，術(shù)語“周圍神經(jīng)系統(tǒng)cGMP上調(diào)物質(zhì)”是指施用后可使得周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的cGMP水平上升，從而達到緩解或治療疼痛的效果的活性物質(zhì)。本發(fā)明中的周闈神經(jīng)系統(tǒng)cGMP上調(diào)物質(zhì)優(yōu)詵為鈉尿肽警體激活劑。如本文所用，術(shù)語“鈉尿肽受體激活劑”是指可通過與鈉尿肽受體結(jié)合或通過其它方式激活鈉尿肽受體，由此進一步激活鈉尿肽受體/cGMP/PKG/BK。a途徑，從而達到緩解或治療疼痛的效果的活性物質(zhì)。所述術(shù)語中包括鈉尿肽受體A的激活劑、鈉尿肽受體B的激活劑、鈉尿肽受體C的激活劑或它們的組合。可用于本文中的鈉尿肽受體激動劑包括但不限于天然鈉尿肽、它們具有激動鈉尿肽受體活性的類似物(或衍生物)、和/或其組合。術(shù)語“天然鈉尿肽”是指天然存在的鈉尿肽或它們的前體，包括但不限于心房鈉尿肽、B型鈉尿肽、C型鈉尿肽(例如如SEQ ID NO 3所示)、D型鈉尿肽(例如如SEQ ID NO :4所示)、尿擴張素、前鈉尿肽或原-前鈉尿肽。優(yōu)選所述天然鈉尿肽來自人、犬、鼠、 馬、牛或羊等哺乳動物。術(shù)語“具有激動鈉尿肽受體活性的類似物”是指衍生自鈉尿肽受體的天然激動劑，且可與鈉尿肽受體結(jié)合，并進一步激活鈉尿肽受體/cGMP/PKG/BK。a途徑，從而達到緩解或治療疼痛的效果的活性物質(zhì)，例如，天然鈉尿肽的氨基酸序列被刪除、截斷、插入、取代、 替換、延長和其他蛋白融合等的類似物，該類似物仍然保留天然鈉尿肽生物學活性。優(yōu)選的，該類似物包含一個天然的或人工的鈉尿肽受體結(jié)合功能域，且保留部分或全部結(jié)合鈉尿肽的活性。適用于本發(fā)明的許多鈉尿肽的類似物包含鈉尿肽環(huán)狀部分，例如由ANP、BNP, CNP 或DNP各自序列中的兩個半胱氨酸之間的二硫鍵連接形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(如人BNP CyslO 和Cys26由二硫鍵連接而形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu))。雖然有些類似物的此環(huán)也會包含一些不同于天然鈉尿肽的氨基酸殘基的取代、刪除、和/或插入，只要這些氨基酸的取代、刪除、和/ 或插入并不會減弱該類似物與天然鈉尿肽相同的生物學活性，則該類似物等同于天然鈉尿月太。比如，在 Schoenfelda 等發(fā)表的文章〃 Mutations in B—type natriuretic peptide mediating receptor-Α selectivity, “ FEBS Letters 414 (1997) 263—267 披露了一些 BNP的變異體，這些變異體能更特異地結(jié)合鈉尿肽受體A。(U. S. Patent 6, 525,022 and U. S. Patent 6，028, 055)。在專利W02006076471A2中披露該鈉尿肽環(huán)含有一個或多個保守性取代，但仍保留了該環(huán)的促尿鈉排泄的活性。專利W02006076471A2中披露了被刪除了部分氨基酸從而被縮短了的該環(huán)仍然保留了相關(guān)生物學活性。W02006076471A2中披露了 BNP 的第14位的賴氨酸被甘氨酸或者精氨酸取代后的包含人BNP CyslO和Cyd6之間的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的類似多肽仍然保留了天然鈉尿肽的生物學活性。W02006076471A2中披露了改變了或刪除了 BNP第19位至22位的絲氨酸的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的類似多肽仍然保留了鈉尿肽的生物學活性。專利W02006076471A2中披露的擁有鈉尿肽的生物學活性的鈉尿肽的類似物同樣適用于本發(fā)明。此外，適用于本發(fā)明的鈉尿肽環(huán)及其類似物可以包含一個氨基端和/或羧基端尾部，如人BNP第1至9位氨基酸和第27位至32位氨基酸，DNP的C末端由15個氨基酸組成的線性序列。尾部是并不會改變鈉尿肽環(huán)的生物學活性的單鏈的氨基酸或多肽。類似物中的尾部的氨基酸序列可以被其他氨基酸取代、刪除、和/或插入，只要沒有改變天然序列的相關(guān)的生物學活性，該類似物等同于天然鈉尿肽。這些尾部基于天然序列，可以有1至多個氨基酸的截短。比如氨基端尾部可選自以下人BNP的氨基酸片段8-9，7-9，6-9，8-9，7-9， 6-9，5-9，4-9，3-9，2-9，和1_9 ；上述的任何人BNP的氨基酸片段中的1個或多個賴氨酸殘基可被甘氨酸殘基或精氨酸殘基取代。類似的，羧基端尾部可選自以下人BNP的氨基酸片段:27-28，27-29，27-30，27-31和27-32 ；；上述的任何人BNP的氨基酸片段中的1個或多個賴氨酸殘基可被甘氨酸殘基或精氨酸殘基取代。適用于本發(fā)明的鈉尿肽類似物還包括了由天然鈉尿肽的環(huán)狀部分與其他蛋白或多肽的融合，融合蛋白仍然保留激動鈉尿肽受體的生物學活性，優(yōu)選由一種天然鈉尿肽的環(huán)狀部分與另一種天然鈉尿肽的非環(huán)狀部分組成的融合蛋白。例如Ondrej Lisy等 (Journal of the American College of Cardiology Vol. 52, No. 1,2008 JACC Vol. 52, No. 1，2008 (1)，2008 :60-8)中所記載的由CNP的22個氨基酸與DNP的15個線性C末端氨基酸序列組成的融合蛋白。除上述類似物外，許多在先技術(shù)所披露的類似物也適用于本發(fā)明。例如美國專利5，114，923，披露了擁有鈉尿排泄功能的多肽為R' -Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp -Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-R2,其中 R ‘選自(H) ；GIy- ；Ser-Gly-； Gly-Ser-Gly-；Gln-Gly-Ser-Gly- ；Val-Gln-Gly-Ser-Gly- ；Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-； Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly ；Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly ； Ser-Pro-Lys-Met -Val-Gln-Gly-Ser-Gly-；和 R3-Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser_Gly-，其中 R3 為位置1-99的人蛋白的102個氨基酸序列或羧基端部分，和R2是(0H)，NH2, NHR'或其中的修飾部分是獨立的低烷基(Ch)或 R2 是 Lys ；Lys-Val ；Lys-Val-Leu ；Lys-Val-Leu-Arg ； Lys-Val-Leu-Arg-Arg ；Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His ；或者氨基化合物(NH2，NHR1 或NR‘修飾部分")。U. S.專利4，904，763中披露的鈉尿肽類似物也適用于本發(fā)明，例如，X_Cys PheGIy Arg Lys Met Asp Arg He Ser Ser Ser Ser GIy Leu GIy Cys Lys VaI Leu Arg ArgHis-OH, 其中 X 是 H，H-Gly-Ser-Gly-或 H-Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly.U. S.專利4，904，763披露了鈉尿肽類似物也適用于本發(fā)明，例如，X-Cys-Phe-Gly -Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Y,(其中 2 個半胱氨酸由二硫鍵連接)，其中 X 為 H 或 H-Asp-Ser. -Gly-,和 Y 為 Asn-Val-Leu-Arg-Arg-Tyr-OH,-Asn-Val-Leu-Arg-Arg-OH,-Asn-Val-Leu-Arg-Tyr-OH,-Asn-Val-Leu-Arg-OH,-Asn-Val-Le u-OH 或Asn-kr-Phe-Arg-Tyr-OH，或其鹽的衍生物。另一組適用于本發(fā)明的類似物披露于 W08912069。另一組適用于本發(fā)明的鈉尿肽類似物披露于U. S.專利申請.20030109430， 其結(jié)構(gòu)式為 R ‘ -Cys-Phe-Gly-Arg-Arg/Lys-Leu/Met-Asp-Arg-Ile-Lys-Met-Gly/ Ser-Ser-Leu/Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-R2,其中 Rl 選自下(H) ；GIy- ；Ser-Gly- ；Asp/ Lys/Gly-Ser-Gly- ；Arg/His/Gln-Asp/Lys/Gly-Ser-Gly- ；Met/Val-Arg/His/Gln-Asp/ Lys/Gly-Ser-Gly- ；Thr/Met-Met/Val-Arg/His/Gln-Asp/Lys/Gly-Ser-Gly- ；Lys-Thr/Met-Met/Val-Arg/His/Gln-Asp/Lys/Gly-Ser-Gly ；Pro-Lys-Thr/Met-Met/Val-Arg/His/ Gln-Asp/Lys/Gly-Ser-Gly- ；Ser-Pro-Lys-Thr/Met-Met/Val-Arg/His/Gln-Asp/Lys/ Gly-Ser-Gly-；或豬、犬或人BNP天然序列的上游部分一個10至109氨基酸序列；R2是 (0H)，NH2，or NR' R"其中R' and R"為獨立的低烷基(此處為，1-4C)或者為Asn/Lys ； Asn/Lys-Val ；Asn/Lys-Val-Leu ；Asn/Lys-Val-Leu-Arg ；Asn/Lys-Val-Leu-Arg-Arg/Lys ； Asn/Lys-Val-Leu-Arg-Arg/Lys-Tyr/His ；或者氨基化合物(NH2 或 NR' R〃)，其中假如結(jié)構(gòu)式為 R' -Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys -R2 和 Rl 為 Asp4er-Gly-，R2 不能為 Asn-Val-Leu-Arg-Arg-Tyr.還有一組類似物披露于U. S.專利申請20020086843，其結(jié)構(gòu)式為X-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile-Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-H is-0H[其中2個半胱氨酸殘基橋連]其中X為H，H-Gly-Ser-Gly-，或Hler-Pro-Lys-Met -Val-Gln-Gly-Ser-Gly-.可用于本發(fā)明中的衍生物還可包括(但不限于)天然鈉尿肽的活性片段，如它們的環(huán)狀部分；與PEG偶聯(lián)的天然鈉尿肽、其衍生物或它們的活性片段；與載體蛋白(例如血清白蛋白或其片段)偶聯(lián)的天然鈉尿肽；天然鈉尿肽的可變剪切產(chǎn)物，等等。優(yōu)選所述衍生物選自；AlbuBNP、CD-NP, ASBNP, ASBNP. 1、hBNPl-32、hBNP-054、奈西立肽、或它們的組合。術(shù)語“AlbuBNP”是指1 5拷貝的人BNP (1-32)序列與成熟血清白蛋白的N末端形成的融合蛋白，例如 Wei Wang 等(Pharmaceutical Research, Vol. 21，No. 11,2004 2105-2111)中所記載的 BNP-HAS 和 BNP (2x) /HAS。術(shù)語“CD-NP”是指C型鈉尿肽或其活性片段或與D型鈉尿肽或其活性片段形成的融合蛋白，優(yōu)選所述活性片段是所述鈉尿肽的環(huán)狀部分，例如Ondrej Lisy等(Journal of the American College of Cardiology Vol. 52, No.1,2008 JACC Vol. 52, No.1,2008(1), 2008 :60-8)中所記載的由CNP的22個氨基酸與DNP的15個線性C末端氨基酸序列組成的融合蛋白。術(shù)語“可變剪切產(chǎn)物”是指通過可變RNA剪切(alternative RNA splicing)后產(chǎn)生的鈉尿肽功能性可變剪切體，例如Shuchong Pana等(Proc Natl Acad Sci U S A. 2009， 7 ； 106 (27) :11282-7. Epub 2009 年 6 月 18 日)中所記載的 ASBNP、ASBNPl。術(shù)語“與PEG偶聯(lián)的天然鈉尿肽、其衍生物或它們的活性片段”是指由天然鈉尿肽或其衍生物與聚乙二醇(PEG)分子偶聯(lián)形成的活性分子，該偶聯(lián)可發(fā)生在天然鈉尿肽或其衍生物的N端、C端或鏈中(如BNP1-32的第3位K)，例如Cataliotti A等CTrends Cardiovasc Med. 2007 年 1 月；17(1) :10_4)中所記載的 C0NJ-hBNP-021，Cataliotti A 等 (Circulation, 2008 年 10 月 21 ； 118 (17) 1729-36. Epub 2008 年 10 月 6 日)中所記載的 hBNP-054,以及W0/2006/076471中所記載的PEG化的鈉尿肽。本發(fā)明的鈉尿肽衍生物可為例如,0(3^^01) ^νΛΤ^^^ΒΜΡ
權(quán)利要求
1.外周神經(jīng)cGMP上調(diào)物質(zhì)在制備用于緩解或治療疼痛的藥物組合物中的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述外周神經(jīng)cGMP上調(diào)物質(zhì)是鈉尿肽受體激動劑。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述鈉尿肽受體激動劑選自鈉尿肽受體A 的激動劑、鈉尿肽受體B的激動劑和/或鈉尿肽受體C的激動劑。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述鈉尿肽受體激動劑選自天然鈉尿肽、 它們具有激動鈉尿肽受體活性的類似物、或其組合。
5.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述天然鈉尿肽選自心房鈉尿肽、B型鈉尿肽、C型鈉尿肽、D型鈉尿肽、尿擴張素、前鈉尿肽、原-前鈉尿肽或它們的組合。
6.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述類似物選自與PEG偶聯(lián)的天然鈉尿肽；與血清白蛋白或其片段偶聯(lián)的天然鈉尿肽；天然鈉尿肽的可變剪切產(chǎn)物；由天然鈉尿肽的環(huán)狀部分與氨基端和/或羧基端尾部形成的融合蛋白，優(yōu)選由一種天然鈉尿肽的環(huán)狀部分與另一種天然鈉尿肽的非環(huán)狀部分組成的融合蛋白。
7.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述衍生物選自；AlbuBNP、⑶-NP、ASBNP、 ASBNP. 1、hBNPl-32、hBNP-OM、奈西立肽、或它們的組合。
8.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述鈉尿肽受體激動劑是鈉尿肽受體A的激動劑。
9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述鈉尿肽受體A的激動劑選自B型鈉尿肽或心房鈉尿肽。
10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述B型鈉尿肽或心房鈉尿肽的形式選自下組分離的B型鈉尿肽或心房鈉尿肽、其編碼序列或包含其編碼序列的載體或遺傳工程化的宿主細胞。
11.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述B型鈉尿肽或心房鈉尿肽選自(a)SEQ ID NO :1所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)或SEQ ID NO :2所示氨基酸序列的蛋白質(zhì)；(b)(a)中所限定的蛋白質(zhì)的保守性變異蛋白質(zhì)或其活性片段；或(c)將(a)中氨基酸序列經(jīng)過1-20個，優(yōu)選1-10個，更優(yōu)選1-5個氨基酸殘基的取代、 缺失或添加而形成的，且具有激活鈉尿肽受體A的活性的、由(a)衍生的蛋白質(zhì)。
12.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述疼痛是自身源性疼痛或炎性痛。
13.如權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述自身源性疼痛選自神經(jīng)病理性疼痛或傷害感受性疼痛。
14.如權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述炎性痛選自關(guān)節(jié)炎痛、糖尿病并發(fā)末梢神經(jīng)炎性疼痛、外周組織炎性痛或內(nèi)臟炎性痛。
15.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述疼痛是慢性疼痛或急性疼痛。
16.如權(quán)利要求15所述的用途，其特征在于，所述慢性疼痛是慢性感受性疼痛或慢性神經(jīng)病理性疼痛。
17.如權(quán)利要求15所述的用途，其特征在于，所述慢性疼痛選自下組軟組織、關(guān)節(jié)和骨疼痛各種骨關(guān)節(jié)炎、創(chuàng)傷后畸形性疼痛、骨骼肌疼痛、腰痛、肌筋膜疼痛綜合征、頭痛、燒傷后疼痛；深部組織和內(nèi)臟痛心血管疼痛、眼痛、口面部疼痛、慢性婦科疼痛、性交痛、泌尿生殖系統(tǒng)慢性疼痛；神經(jīng)和神經(jīng)根損傷性疼痛截肢后幻肢痛、周圍神經(jīng)性疼痛、反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良和交感神經(jīng)持續(xù)痛、三叉神經(jīng)痛和非典型性面部痛、神經(jīng)根損傷和蛛網(wǎng)膜炎、帶狀皰疹后神經(jīng)痛；中樞性疼痛腦、脊髓的血管損傷，如出血、梗塞、血管畸形；多發(fā)性硬化；外傷性脊髓損傷，腦損傷；脊髓空洞癥和延髓空洞癥；腫瘤；帕金森??；兒童疼痛 生長痛；老年人疼痛頸椎病、腰椎間盤突出癥、腰椎滑脫所致疼痛；或癌性疼痛。
18.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)緩解或治療疼痛有效量的鈉尿肽受體激動劑；(b)藥學上可接受的載體。
19.如權(quán)利要求18所述的用途，其特征在于，所述鈉尿肽受體激動劑選自鈉尿肽受體 A的激動劑、鈉尿肽受體B的激動劑和/或鈉尿肽受體C的激動劑
20.如權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其特征在于，所述鈉尿肽受體A的激動劑選自 B型鈉尿肽或心房鈉尿肽。
21.—種篩選可用于緩解或治療疼痛的潛在物質(zhì)的方法，其特征在于，所述的方法包括(1)將候選物質(zhì)與背根神經(jīng)節(jié)小神經(jīng)元接觸；(2)檢測候選物質(zhì)是否可激活鈉尿肽受體/PKG/BK&途徑；若所述候選物質(zhì)可激活鈉尿肽受體/PKG/BK。a途徑，則表明該候選物質(zhì)是緩解或治療疼痛的潛在物質(zhì)。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，所述鈉尿肽受體/PKG/BK。a途徑是鈉尿肽受體A/PKG/BKea途徑。
全文摘要
本發(fā)明中提供了鈉尿肽受體的激動劑在疼痛治療中的用途。具體而言，本發(fā)明涉及鈉尿肽受體的激動劑在制備用于緩解或治療疼痛的藥物組合物中的用途，所述激動劑優(yōu)選為B型鈉尿肽或心房鈉尿肽。本發(fā)明還涉及包含鈉尿肽受體A的激動劑的藥物組合物，以及篩選可用于緩解或治療疼痛的潛在物質(zhì)的方法。本發(fā)明首次揭示了鈉尿肽受體A介導的鈉尿肽受體A/PKG/BKCa途徑與疼痛之間的關(guān)系，提供了可通過調(diào)節(jié)該途徑的活化而治療、緩解或改善疼痛的藥物、方法和途徑。
文檔編號A61K38/22GK102370985SQ20101025778
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月11日
發(fā)明者劉興君, 張方雄, 張旭, 鮑嵐 申請人:中國科學院上海生命科學研究院