專利名稱：用于促進(jìn)血管屏障功能和治療肺纖維化的組合物和方法
用于促進(jìn)血管屏障功能和治療肺纖維化的組合物和方法關(guān)于聯(lián)邦資助研究的陳述本發(fā)明在國立衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health)提供的資金號ROl HL077671的政府支持下做出。政府對本發(fā)明享有一定的權(quán)利。
背景技術(shù)：
急性和慢性肺部血管炎癥和滲漏與多種病理狀況相關(guān)。例如，流感感染和膿毒癥 可以具有急性并潛在地威脅生命的肺部血管炎癥的特征。此外，慢性肺部血管炎癥與肺纖 維化的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。肺纖維化是在肺中纖維狀瘢痕組織的異常形成，其中瘢痕形成之 前出現(xiàn)并伴有炎癥。肺纖維化是引起肺泡和肺的間質(zhì)組織膨脹和瘢痕形成的慢性疾病。肺 纖維化的病因通常是從未確定的(即特發(fā)性肺纖維化)，但在某些情況下，肺纖維化的發(fā)生 和發(fā)展與疾病或感染例如結(jié)核病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性硬化癥，一種或多種環(huán)境條件諸 如例如暴露于二氧化硅粉塵和石棉或甚至特定藥物例如硝呋妥因妥英、乙胺碘呋酮和博來 霉素相關(guān)。盡管肺纖維化可能溫和到幾乎不引起癥狀，但是它也可能是致命的。發(fā)明簡述本文描述了促進(jìn)血管屏障功能的活性藥劑和組合物。本文描述的組合物包括至少 一種能夠促進(jìn)血管屏障功能的活性藥劑，并且在一個這樣的實(shí)施方案中，本文描述的組合 物包含促進(jìn)血管內(nèi)皮屏障功能的活性藥劑。在另一個實(shí)施方案中，本文描述的組合物包括 在選自肺臟的血管內(nèi)皮、腎臟的血管內(nèi)皮和脾臟的血管內(nèi)皮之一的內(nèi)皮組織中促進(jìn)血管屏 障功能的活性藥劑。在另一個實(shí)施方案中，本文描述的組合物包括抑制與肺部炎癥相關(guān)的 血管通透性的活性藥劑，所述血管通透性包括與導(dǎo)致急性肺部炎癥和慢性肺部炎癥或由急 性肺部炎癥和慢性肺部炎癥引起的病癥相關(guān)的血管通透性。正如由本文提供的實(shí)驗例所顯 示的，本說明書、特別是實(shí)施方案的活性藥劑，即使在存在炎癥和血管通透性的多種介導(dǎo)物 包括例如內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF- α )和IL-I β的情況下，也促進(jìn)血 管屏障功能。本文還提供了用于促進(jìn)血管內(nèi)皮屏障功能的方法。在一個實(shí)施方案中，用于促進(jìn) 血管內(nèi)皮屏障功能的方法包括用本文描述的活性藥劑處理一種或多種血管內(nèi)皮細(xì)胞。在 一個這樣的實(shí)施方案中，處理一種或多種血管內(nèi)皮細(xì)胞的步驟，可以通過向需要的患者給 藥治療有效量的本文描述的活性藥劑來進(jìn)行。在具體實(shí)施方案中，使用活性藥劑處理一種 或多種血管內(nèi)皮細(xì)胞引起下列一種或多種效應(yīng)血管內(nèi)皮屏障功能的保留；在存在一種或 多種炎癥介導(dǎo)物、包括內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β中的一 種或多種的情況下，促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在存在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括內(nèi)毒素(例如 LPS)、腫瘤壞死因子中的一種或多種的情況下，抑制血管滲漏；促 進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)pl20-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞 表面的表達(dá)。在另一個這樣的實(shí)施方案中，在血管內(nèi)皮細(xì)胞暴露于一種或多種炎癥介導(dǎo)物 后，使用活性藥劑治療一種或多種血管內(nèi)皮細(xì)胞，至少部分恢復(fù)了血管屏障功能，其中炎癥 的一種或多種介導(dǎo)物選自內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β中的 一種或多種。
附圖簡述

圖1 :Slit2N通過增強(qiáng)VE-鈣粘著蛋白在細(xì)胞表面的定位而使內(nèi)皮穩(wěn)定。(A)，在 存在模擬物或S1U2N的情況下，在用LPS、TNF- α或IL-I β刺激的HMVEC-肺中測量的體 外通透性。(B)，在存在模擬物或S1U2N的情況下，用IL-I β刺激Robo4或?qū)φ誷iRNA敲 除的HMVEC-肺，以評估體外通透性。(C-E)，將HMVEC-肺用模擬物或S1U2N處理，進(jìn)行膜 分級，然后對VE-鈣粘著蛋白(C)、pl20-連環(huán)蛋白(D)或β-連環(huán)蛋白(E)進(jìn)行免疫印跡。 (F)，將HMVEC-肺用模擬物或S1U2N刺激，并對VE-鈣粘著蛋白進(jìn)行免疫熒光分析(綠 色)。白色箭頭指示VE-鈣粘著蛋白細(xì)胞表面定位增強(qiáng)的區(qū)域。對于所有實(shí)驗來說，Ν>3， *Ρ < 0. 05，***Ρ < 0. 005，****Ρ < 0. 001，誤差線表示 s. e. m。圖2 :Slit2N增強(qiáng)VE-鈣粘著蛋白/pl20-連環(huán)蛋白的相互作用。(A) JfHMVEC^i 在存在模擬物或S1U2N的情況下用IL-I β處理，并對VE-鈣粘著蛋白和ρ120-連環(huán)蛋白進(jìn) 行免疫染色。白色箭頭指示在模擬物處理的細(xì)胞中缺少VE-鈣粘著蛋白或ρ120-連環(huán)蛋白 的細(xì)胞表面區(qū)域。黃色箭頭指示在S1U2N處理的細(xì)胞中VE-鈣粘著蛋白或ρ120-連環(huán)蛋白 的細(xì)胞表面定位增強(qiáng)的區(qū)域。(B)，將HMVEC-肺在存在模擬物或S1U2N的情況下用IL-I β 刺激。將裂解物進(jìn)行對VE-鈣粘著蛋白的免疫沉淀，然后對Ρ120-連環(huán)蛋白和VE-鈣粘著蛋 白進(jìn)行免疫印跡。(C)，將HMVEC-肺在存在模擬物或S1U2N的情況下用IL-I β刺激。評 估VE-鈣粘著蛋白的內(nèi)化(綠色)，內(nèi)化的區(qū)域用白色箭頭指示。(D)，在存在對照IgG或 VE-鈣粘著蛋白抗體的情況下測量體外通透性。對于所有實(shí)驗來說，N ^ 3, *Ρ < 0. 05，**Ρ
<0. 01，***Ρ < 0. 005，誤差線表示 s. e. m。圖3 :Slit2N在體內(nèi)抑制LPS誘導(dǎo)的通透性、蛋白滲出和細(xì)胞浸潤。(A)，對Robo4+A 和R0b04AP/AP小鼠進(jìn)行模擬物或Slit2N靜脈內(nèi)注射，然后氣管內(nèi)滴注IOyg LPS。然后小 鼠接受伊文思藍(lán)白蛋白(EBA)靜脈內(nèi)注射，并使用EBA在肺中的積累來評估血管通透性 (N > 4)。(B-D)，可選地，在LPS給藥后M小時獲取支氣管肺泡灌洗液，并評估蛋白含量 (B)、總炎性細(xì)胞積累(C)或中性粒細(xì)胞積累⑶(N>5)。(E)，在來自在模擬物或Slit2N 存在下暴露于LPS的小鼠的肺臟切片上，進(jìn)行H&E染色。爾)，在用3.348 LPS處理的小 鼠中測量到蛋白滲出(N = 5)。(G-I)，對小鼠進(jìn)行模擬物或S1U2N與對照或VE-鈣粘著 蛋白阻斷抗體的靜脈內(nèi)注射，然后氣管內(nèi)滴注LPS。獲取支氣管肺泡灌注液，并評估蛋白含 量(G)、總炎性細(xì)胞積累(H)或中性粒細(xì)胞積累(I) (N > 5)。*P < 0. 05，***P < 0. 005，****P
<0. 001，誤差線表示s. e. m。圖4 :Slit2N在膿毒癥的盲腸結(jié)扎和穿刺模型中降低通透性和死亡率。(A)，將小 鼠進(jìn)行CLP或假手術(shù)。對小鼠進(jìn)行伊文思藍(lán)白蛋白(EBA)靜脈內(nèi)注射，并測量腎臟(A)或 脾臟⑶中的EBA積累以評估血管通透性(N = 5)。(C)對Robo4v+小鼠進(jìn)行CLP并用模 擬物或S1U2N治療，并評估存活率(模擬物治療N= 15，Slit2N治療N= 14)。在模擬物 或S1U2N治療的CLP小鼠(N = 6)的血清中細(xì)胞因子⑶或趨化因子(E)的水平。(F)， 對Robo4AlVAP小鼠進(jìn)行CLP并用模擬物或S1U2N治療，并評估存活率(模擬物治療N= 13， Slit2N 治療 N = 13)。*P < 0. 05，**P < 0. 01，****P < 0. 001，誤差線表示 s. e. m。圖5 :Slit2N在H5m感染模型中降低死亡率。(A)，將Balb/c小鼠用H5W病毒進(jìn) 行鼻內(nèi)感染。對小鼠進(jìn)行伊文思藍(lán)白蛋白(EBA)靜脈內(nèi)注射，并測量肺中EBA的積累以評 估血管通透性(N=5)。(B)，在H5m感染后小鼠的存活率(模擬物治療N = 20，Slit2N治療N = 20)。(C)，在感染后6天，在來自H5m感染的小鼠的肺部切片上進(jìn)行H&E染色。左 上圖中的白色箭頭指示肺部小動脈周圍水腫液的積累。中上圖證實(shí)了嚴(yán)重的肺泡炎癥。右 上圖中的黑色箭頭指示泡沫狀巨噬細(xì)胞的出現(xiàn)。(D)，在感染后6天測量H5W病毒的滴度 (N = 3個合并的小鼠組)。在感染后6天測量肺勻漿液中細(xì)胞因子(E)或趨化因子(F)的 水平(N = 3個合并的小鼠組)。圖6 =Slit通過增加細(xì)胞表面的VE-鈣粘著蛋白降低由多種炎癥刺激引起的血管 滲漏。(A)，在正常條件下，肺泡毛細(xì)血管提供半透性屏障。(B)，炎癥刺激引起細(xì)胞因子大 量釋放，導(dǎo)致VE-鈣粘著蛋白的內(nèi)化和屏障功能的破壞。這引起血管滲漏和富含蛋白質(zhì)的 水腫液在肺泡空間中的積累。(C)，Slit通過增加細(xì)胞表面的VE-鈣粘著蛋白增加抗多種 細(xì)胞因子的血管屏障功能。圖7 小至Slit2_Dl(40kD)的重組Slit肽是有活性的。在圖7A中，描述了用于 Slit蛋白的不同構(gòu)建物。標(biāo)出了四個富含亮氨酸的結(jié)構(gòu)域(LRR)、表皮生長因子同源區(qū) (EGF)和 C-末端標(biāo)簽(MYC/HIS)。圖7B中顯示了 VEGF介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移被不同Slit構(gòu)建物QnM)的抑制。圖8 :SecinH3抑制博來霉素誘導(dǎo)的纖維化。對6_8周齡的BL/6小鼠進(jìn)行鹽水或 0. 05U博來霉素的鼻內(nèi)滴注。每天兩次通過腹膜內(nèi)注射給藥100 μ L介質(zhì)或30 μ M SecinH30 肺纖維化通過Sircol膠原蛋白測定法進(jìn)行評估。N >每組7只動物，*P < 0. 05。圖9 :SecinH3的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖10 :Robo4信號傳導(dǎo)途徑的圖示。圖11 在LPS滴注后6小時，肺中的Robo4表達(dá)增加。圖12 在禽流感的小鼠模型中，給藥Slit2蛋白對禽流感病毒感染的小鼠的存活
率的影響。圖13 (a)在博來霉素給藥后11天，Slit2極大降低了在Robo4+A小鼠肺中博來 霉素誘導(dǎo)的EBA積累。Slit2的效應(yīng)在Robo4AlVAP小鼠中喪失。(b) Slit2也極大降低博來 霉素誘導(dǎo)的肺纖維化。這種效應(yīng)在R0b04AP/AP小鼠中喪失，表明Slit2直接作用于內(nèi)皮以減 少肺纖維化。(c)使用三色染色以增加膠原蛋白沉積的可視性進(jìn)行的肺組織學(xué)檢查證實(shí)了 Slit2以Robo4依賴性方式的作用。圖14 =Slit以劑量依賴性方式抑制LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞浸潤。㈧通過免疫印跡評估 了 Robo4或?qū)φ誷iRNA敲除的HMVEC-肺的Robo4表達(dá)。(B) Z-軸的共聚焦圖像顯示在下 方，旁邊用黃色線標(biāo)出。在S1U2N處理的細(xì)胞中觀察到接合厚度的增加。(C-D)在水平逐 漸增加的S1U2N存在下對小鼠進(jìn)行LPS誘導(dǎo)的ALI。顯示了細(xì)胞浸潤和中性粒細(xì)胞。N = 4，*P < 0. 05。圖15 正如通過定量組織學(xué)所評估的，S1U2N減少LPS誘導(dǎo)的ALI。在存在S1U2N 的模擬物的情況下，對Robo4+A和Robo4AlVAP小鼠進(jìn)行LPS誘導(dǎo)的ALI。由不知情研究人員 對來自這些小鼠的肺切片進(jìn)行H&E染色和定量組織學(xué)，以評估肺損傷的程度。N = 3，***P < 0. 005。圖16 =Slit不降低人初始PMN的遷移。(A)在模擬物Slit2存在下對細(xì)胞進(jìn)行了 向白細(xì)胞趨化物fMLP的遷移。(B)從hPMN分離RNA，并進(jìn)行定量PCR。使用腦cDNA作為陽 性對照。N = 3，***P < 0. 005，誤差線表示s. e. m。
圖17 :Slit2在整個肺中表達(dá)在內(nèi)皮近端。如箭頭所標(biāo)出，Slit2與Robo4堿性磷 酸酶(AP)表達(dá)被共定位。圖18 在CLP過程中不存在顯著的肺損傷。(A-C)對小鼠進(jìn)行CLP，并用模擬物或 S1U2N處理。將肺切片用H&E染色(A)，并進(jìn)行定量組織學(xué)以評估所執(zhí)行的肺損傷程度(B)， N = 3。(C)使用伊文思藍(lán)白蛋白評估了小鼠肺中的通透性。N = 5。圖19 :Robo4的喪失不影響早期發(fā)育中的肺中血管內(nèi)皮的圖式形成。A_C、D_F和 G-I分別顯示R0b04v+、R0b04VAP和Robo4AlVAP E12. 5肺，對內(nèi)皮(E-鈣粘著蛋白)和血管 系統(tǒng)(⑶31)進(jìn)行染色。箭頭指示左肺動脈EC管的遠(yuǎn)端范圍。B、E和H是第一左側(cè)部次級 氣路支路的遠(yuǎn)端分支的放大圖，其中橫線表示從遠(yuǎn)端支路頂點(diǎn)向外線性延伸的CD31+網(wǎng)狀 組織區(qū)劃的厚度。C、F和I顯示了用針對⑶31的抗體染色的遠(yuǎn)端左肺動脈EC管區(qū)域的放 大圖。第一、第二和第三左背部次級氣路分支的位置用Dl、D2和D3表示。圖20 :Robo4的喪失不影響發(fā)育中的肺中血管內(nèi)皮的圖式形成。A_B、C-D和E-F 分別顯示R0b04v+、R0b04+Au^n Robo4AlVAP E14. 5肺，對肺內(nèi)皮(E-鈣粘著蛋白)和血管發(fā) 育(⑶31)進(jìn)行染色。箭頭表示位于左主支氣管側(cè)方的左肺動脈。A、C和E中的深色箭頭 指示向右副葉供血的右肺動脈支路，其位于通向副葉的右側(cè)次級氣路支路的后方。詳細(xì)描述I.定義公開了可以用于本公開的活性藥劑、組合物和方法、可以與它們結(jié)合使用、可用于 制備它們或是它們的產(chǎn)物的材料、組合物和組分。在本文中公開了這些以及其他的材料，并 應(yīng)該理解，當(dāng)這些材料的組合、子集、相互作用、組群等被公開時，盡管可能沒有專門公開這 些化合物的每個不同的個體和集合的組合和排列的具體指稱，但它們每個都在本文中具體 考慮并描述。例如，如果公開并討論到多肽，并且討論到對于包含多肽的大量分子可以進(jìn)行 大量修飾時，多肽和可能的修飾的每個和所有的組合和排列都被具體考慮到了，除非明確 指明不是這樣。因此，如果公開了一組分子A、B和C以及一組分子D、E和F，并且公開了組 合分子A-D的實(shí)例，那么即使沒有對每種組合分子進(jìn)行單獨(dú)列舉，它們也被單獨(dú)地和集合 地考慮到了。因此，在本例中，每個組合A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F被具體地 考慮到了，并應(yīng)該被認(rèn)為從A、B和C，D、E和F以及示例組合A-D的公開中得到公開。同樣 地，它們的任何子集或組合也被具體考慮到并公開。因此，例如，亞組A-E、B-F和C-E被具 體考慮到了，并應(yīng)該被認(rèn)為從A、B和C，D、E和F以及示例組合A-D的公開中得到公開。這 種概念適用于本申請的所有情況，包括但不限于在制造和使用本公開的組合物的方法中的 步驟。因此，如果存在各種不同的可以執(zhí)行的附加步驟，應(yīng)該理解每個這些附加步驟可以與 本公開的方法的任何具體實(shí)施方案或?qū)嵤┓桨傅慕M合一起執(zhí)行，并且每個這樣的組合都被 具體考慮到了，并應(yīng)該被當(dāng)作公開了。本領(lǐng)域技術(shù)人員只使用常規(guī)實(shí)驗即可識別或能夠確定本文描述的方法和組合物 的具體實(shí)施方案的等價物。這樣的等價物打算被所包含的權(quán)利要求書涵蓋。還應(yīng)該理解，本文中使用的術(shù)語僅僅是為了描述具體的實(shí)施方案，而不打算用于 限制本文描述的發(fā)明的范圍。除非另有定義，否則本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語，具有本領(lǐng)域技術(shù)人員在 本說明書背景下所通常理解的意義。
必須指出，當(dāng)在本文和隨附的權(quán)利要求書中使用時，單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)指稱物，除 非上下文明確表示不是這樣。因此，例如，指稱“多肽”包括大量這樣的多肽，指稱“多肽”是 指一個或多個多肽或其本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的等價物，等等?！叭芜x的”或“任選地”是指隨后描述的事件、情況或材料可以發(fā)生或存在，或者可 以不發(fā)生或不存在，并且該描述包括了事件、情況或材料發(fā)生或存在的情形，以及它不發(fā)生 或不存在的情形。在本文中，范圍可以表示成從約一個特定值和/或到約另一個特定值。當(dāng)用這樣 的范圍表示時，另一個實(shí)施方案包括從一個特定值和/或到另一個特定值。類似地，當(dāng)通過 使用先行詞“約”將值表示成近似值時，應(yīng)該理解具體的值形成了另一個實(shí)施方案。還應(yīng)該 理解，每個范圍的端點(diǎn)的重要性在于既與另一個端點(diǎn)有關(guān)，又獨(dú)立于另一個端點(diǎn)。還應(yīng)該理 解，本文中公開了許多數(shù)值，每個值在本文中除了該值本身之外，還公開為約該特定值。例 如，如果公開了值10，那么也公開了約10。還應(yīng)該理解，兩個特定單位之間的每個單位也被 公開。例如，如果公開了 10和15，那么11、12、13和14也被公開了。烷基是指由碳-碳單鍵相連并具有1到8個連接在一起的碳原子的任選被取代的 烴基。烷基烴基可以是直鏈，或包含一個或多個分支。這些基團(tuán)包括甲基、乙基、丙基、異丙 基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基等。低級烷基是指具有1到4個碳原子的任選被取代 的支鏈或直鏈烷基。烯基是指在碳原子之間包含至少一個碳-碳雙鍵并含有連接在一起的2-8個碳原 子的任選被取代的烴基。烯基烴基可以是支鏈或直鏈的。環(huán)烷基是指任選被取代的環(huán)狀烷基或任選被取代的非芳香族環(huán)狀烯基，并包括單 環(huán)和例如二環(huán)和三環(huán)的多元稠合環(huán)結(jié)構(gòu)。環(huán)烷基可以具有例如3到15個碳原子。在一個 實(shí)施方案中，環(huán)烷基具有5到12個碳原子。適合的環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊 基、環(huán)己基等。雜環(huán)是指任選被取代的飽和或部分飽和的非芳香族成環(huán)部分，包含至少一個碳原 子。雜環(huán)部分典型地包含單環(huán)或例如二環(huán)和三環(huán)的多元稠合環(huán)結(jié)構(gòu)。在一個實(shí)施方案中， 環(huán)是5到6元的，并典型地包含1到3個非碳原子。雜環(huán)的非碳原子可以獨(dú)立地選自氮、氧 和硫。芳基是指帶有至少一個具有共軛π電子環(huán)系統(tǒng)的環(huán)的任選被取代的芳香基團(tuán)， 包括單環(huán)或例如二環(huán)和三環(huán)的多元稠合環(huán)結(jié)構(gòu)。芳基包括任選被取代的碳環(huán)芳基。適合的 芳基的實(shí)例包括苯基、萘基、蒽基、菲基等。雜環(huán)芳基是指帶有至少一個具有共軛π電子環(huán)系統(tǒng)的環(huán)、包含至少一個非碳原 子的任選被取代的芳香基團(tuán)。雜環(huán)芳基部分典型地包含一個環(huán)或例如二環(huán)和三環(huán)的多元稠 合環(huán)結(jié)構(gòu)。適合的雜環(huán)芳基的實(shí)例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡啶基等。烷氧基是指與烷基相連的氧。低級烷氧基是指與低級烷基相連的氧。在一個實(shí)施 方案中，氧與長度為1到4個碳的未取代烷基相連。例如，烷氧基可以是甲氧基、乙氧基等。亞烷基是指在碳原子之間只含碳-碳單鍵的任選被取代的烴鏈。亞烷基鏈具有1 到6個碳，并在兩個位置處與其他官能團(tuán)或結(jié)構(gòu)部分相接。適合的亞烷基的實(shí)例包括亞甲 基、亞乙基等。當(dāng)在本文中使用時，小分子是指低分子量化合物。例如，在特定實(shí)施方案中，這樣的小分子化合物是顯示出50道爾頓到800道爾頓之間的分子量的化合物。在可選實(shí)施方 案中，本文中描述的小分子表現(xiàn)出選自100道爾頓到500道爾頓之間和250道爾頓到475 道爾頓之間范圍內(nèi)的分子量。本文中使用的術(shù)語“對象”是指任何給藥的靶。對象可以是脊椎動物例如哺乳動 物。因此，對象可以是人類。該術(shù)語不指定具體年齡或性別。因此，成年和新生對象以及胎 兒，不論是雄性還是雌性，都打算被涵蓋。術(shù)語患者是指遭受病狀的對象。術(shù)語患者包括人 類和獸醫(yī)對象?！耙种啤笔侵缸柚埂⒔档?、失活或逆轉(zhuǎn)活性、反應(yīng)、狀況、疾病或其他生物參數(shù)。抑制 可以包括但不限于完全消除活性、反應(yīng)、狀況或疾病。抑制還可以包括例如與天然水平相 比減慢或降低活性、反應(yīng)、狀況、疾病或其他生物參數(shù)，其中術(shù)語“天然水平”是指在不存在 抑制劑的情況下表現(xiàn)出的水平。抑制還可以包括例如與天然水平相比活性、反應(yīng)、狀況、疾 病或其他生物參數(shù)的逆轉(zhuǎn)，其中術(shù)語“天然水平”是指在不存在抑制劑的情況下表現(xiàn)出的水 平。就此而言，降低可以是任何可測量到的降低。在具體實(shí)施方案中，降低可以是例如與天 然水平相比降低 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%，或在具體列舉 的百分率之間的任何量?！按龠M(jìn)”是指活性、反應(yīng)、狀況、疾病或其他生物參數(shù)的保留、恢復(fù)或增加。促進(jìn)可以 包括但不限于活性、反應(yīng)、狀況或生物參數(shù)的引發(fā)?；蛘撸紤]到否則相關(guān)的活性、反應(yīng)、狀 況或其他生物參數(shù)將降解、降低或消除，促進(jìn)可以包括活性、反應(yīng)、狀況或其他生物參數(shù)的 保留。促進(jìn)還可以包括例如與天然或?qū)φ账较啾然钚?、反?yīng)、狀況或生物參數(shù)的增加。在 具體實(shí)施方案中，活性、反應(yīng)、狀況或其他生物參數(shù)的增加可以是與天然或?qū)φ账较啾仍?加 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100% 或以上，包括在具體列舉的百 分率之間的任何量的增加，其中術(shù)語“天然水平”是指在不存在促進(jìn)劑的情況下表現(xiàn)出的水 平。術(shù)語“載體”是指當(dāng)與化合物或組合物組合時，輔助或促進(jìn)化合物或組合物的制 備、儲存、給藥、遞送、有效性、選擇性或其目標(biāo)應(yīng)用或目的的任何其他特點(diǎn)的化合物、組合 物、物質(zhì)或結(jié)構(gòu)。例如，載體可用于提供藥物制劑，并可以進(jìn)行選擇以使活性藥劑的任何降 解最小化，并使在對象中的任何不利副作用最小化。在本文中使用時，術(shù)語“治療”是指治療性益處，由其阻止、降低、中止、逆轉(zhuǎn)或減緩 特定病狀、疾病、病癥、事件或傷害的有害效應(yīng)或發(fā)展。治療有效量是通過例如抑制或逆轉(zhuǎn)與病狀相關(guān)的活性、反應(yīng)、情況、疾病或其他參 數(shù)來實(shí)現(xiàn)治療性益處的化合物的量。治療有效量可以是至少在一定程度上緩解對象中病狀 的一種或多種癥狀、使與病狀相關(guān)或是其病因的一種或多種生理或生化參數(shù)部分或完全恢 復(fù)正常、和/或降低病狀發(fā)生的可能性的量。術(shù)語病理或病狀是指可能作為疾病、狀況、事件或受傷的結(jié)果而發(fā)生的與健康、正 ?；蛴行顩r的任何偏離。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語蛋白或肽是指廣義的多肽分子，并且不用于指稱任何具 體尺寸、長度或分子量的多肽分子。蛋白變體和衍生物對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的， 并可以包含氨基酸序列修飾。例如，氨基酸序列修飾典型地屬于三種類型中的一種或多種 取代、插入或缺失變體。插入包括氨基和/或羧基末端融合以及單個或多個氨基酸殘基的序列內(nèi)插入。插入一般是比氨基或羧基末端融合更小的插入，例如在1到4個殘基的量級 上。免疫原性融合蛋白衍生物，例如在實(shí)施例中所描述的，是通過體外交聯(lián)將足夠大從而賦 予免疫原性的多肽與靶序列融合，或通過對用編碼融合蛋白的DNA轉(zhuǎn)化的重組細(xì)胞進(jìn)行培 養(yǎng)來制造的。缺失的特征在于從蛋白序列中移除一個或多個氨基酸殘基。典型情況下，在 蛋白分子中任一位點(diǎn)處缺失不超過約2到6個殘基。這些變體一般通過在編碼蛋白的DNA 中進(jìn)行核苷酸的位點(diǎn)特異性突變從而產(chǎn)生編碼變體的DNA，然后將DNA在重組細(xì)胞培養(yǎng)物 中表達(dá)來制備。用于在具有已知序列的DNA中特定位點(diǎn)處制造取代突變的技術(shù)是眾所周知 的，例如M13引物致變和PCR致變。氨基酸取代典型是單殘基的，但是可以一次發(fā)生在眾多 不同位置處；插入通常在約1到10個氨基酸殘基的量級上；缺失將在約1到30個殘基的范 圍內(nèi)。缺失或插入優(yōu)選鄰近成對制造，即，缺失兩個殘基或插入兩個殘基。取代、缺失、插入 或其任何組合，可以進(jìn)行組合以獲得最終構(gòu)建物。突變不可放置在閱讀框外的序列中，并優(yōu) 選不產(chǎn)生能夠產(chǎn)生mRNA 二級結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)區(qū)。取代變體在本技術(shù)領(lǐng)域中是熟知的，其中已經(jīng) 移除至少一個殘基并在其位置中插入了不同殘基。典型情況下，在取代變體形成中制造的 取代是本技術(shù)領(lǐng)域公知的保守取代，并且取代變體通?？梢灾圃斐筛倪M(jìn)多肽分子的一種或 多種特性，例如循環(huán)半衰期、穩(wěn)定性等，并同時保留或增加多肽的生物活性。功能或免疫性質(zhì)的顯著改變，可以通過選擇對維持(a)取代區(qū)域中多肽骨架的結(jié) 構(gòu)例如片層或螺旋構(gòu)型、(b)靶位點(diǎn)處分子的電荷或疏水性或(c)側(cè)鏈的體積具有不同效 應(yīng)的取代來制造。一般來說預(yù)計將在蛋白性質(zhì)方面產(chǎn)生最大變化的取代，是其中發(fā)生下列 情況的取代(a)親水性殘基例如絲氨酸基或蘇氨酸基取代(或被取代成)疏水殘基例如 亮氨酸基、異亮氨酸基、苯丙氨酸基、纈氨酸基或丙氨酸基；(b)半胱氨酸或脯氨酸取代(或 被取代成)任何其他殘基；(c)具有正電性側(cè)鏈的殘基例如賴氨酸基、精氨酸基或組氨酸基 取代(或被取代成)負(fù)電性殘基例如谷氨酸基或天冬氨酸基；或(d)具有大體積側(cè)鏈的殘 基例如苯丙氨酸取代(或被取代成)不具有側(cè)鏈的殘基例如這種情形下為甘氨酸，(e)通 過增加用于硫酸鹽化和/或糖基化的位點(diǎn)數(shù)量。例如，將一個氨基酸殘基用另一個生物和/或化學(xué)相似的氨基酸殘基取代，被本 領(lǐng)域技術(shù)人員稱為保守取代。例如，保守取代是用一個疏水殘基取代另一個疏水殘基，或用 一個極性殘基取代另一個極性殘基。取代包括組合，例如Gly，Ala ；Val, lie, Leu ；Asp,Glu ； Asn, Gln ；Ser, Thr ；Lys, Arg ；和Phe, Tyr。每個明確公開的序列的這種保守取代變異包括 在本文提供的多肽中。取代或缺失致變可用于插入N-糖基化(Asn-X-Thr/Ser)或O-糖基化(Ser或Thr) 位點(diǎn)。半胱氨酸或其他不穩(wěn)定殘基的缺失也可能是需要的。缺失或取代潛在的蛋白水解位 點(diǎn)例如Arg，通過缺失一個堿性殘基或用谷氨酰胺或組氨酸殘基取代它來實(shí)現(xiàn)。在重組生產(chǎn)多肽的情形下，某些翻譯后衍生作用是重組宿主細(xì)胞對表達(dá)的多肽 的作用的結(jié)果。谷氨酰胺和天冬酰胺殘基通常在翻譯后脫胺形成相應(yīng)的谷氨酸殘基和天 冬氨酸殘基?；蛘撸@些殘基在溫和的酸性條件下脫胺。其他翻譯后修飾包括脯氨酸和賴 氨酸的羥化、絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基的羥基的磷酸化、賴氨酸、精氨酸和組氨酸側(cè)鏈的 ο-氨基的甲基化(Τ. E. Creighton,《蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與分子性質(zhì)》(Proteins Structure and Molecular Properties), W. H. Freeman & Co.，San Francisco 79—86 頁[1983]，在此引為 參考)、N-末端氨基的乙酰化以及某些情況下C-末端羧基的酰胺化。
應(yīng)該理解，確定本文公開的多肽的衍生物、類似物和同源物的一種方式是通過確 定衍生物、類似物和同源物與具體已知序列的同源性/同一性。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解 如何確定兩個蛋白的同源性。例如，同源性可以在將兩個序列進(jìn)行比對以使同源性處于其 最高水平后進(jìn)行計算。計算同源性的另一種方式可以通過已發(fā)表的算法來進(jìn)行。用于比較的序列最優(yōu) 化比對可以通過Smith和Waterman Adv. App 1. Math. 2 :482(1981)的局部同源性算法、 Needleman 和 Wunsch，J. Mol. Biol. 48 :443(1970)的同源性比對算法、Pearson 和 Lipman， Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α. 85 :2444(1988)的相似性搜索方法，以及這些算法的計算機(jī) 化實(shí)施(Wisconsin 遺傳學(xué)軟件包(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr.，Madison，WI)中的 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA)或 通過檢查來進(jìn)行。應(yīng)該理解，存在大量可以摻入到本公開的多肽中的氨基酸和肽類似物。例如，存在 大量D-氨基酸或與表1中顯示的氨基酸具有不同功能性取代基的氨基酸。已經(jīng)公開了天 然存在的肽的反立體異構(gòu)體以及肽類似物的立體異構(gòu)體。通過為tRNA分子裝上所選的氨 基酸和利用例如琥珀密碼子以位點(diǎn)特異性方式將類似氨基酸插入到肽鏈中的遺傳工程改 造的構(gòu)建物，可以容易地將這些氨基酸摻入到多肽鏈中(Thorson等，Methods in Molec. Biol. 77 :43-73(1991) ；Zoller, Current Opinion in Biotechnology,3 :348-354(1992)； Ibba, Biotechnology & Genetic Engineering Reviews 13:197-216(1995) ；Cahill 等， TIBS,14(10) :400-403(1989) ；Benner, TIB Tech, 12 :158-163(1994) ；Ibba 和 Hennecke, Bio/technology, 12 :678-682 (1994)，其全部在此引為參考)。D-氨基酸可用于產(chǎn)生更穩(wěn)定的肽，因為D-氨基酸不被肽酶等識別。將共有序列的 一種或多種氨基酸用同樣類型的D-氨基酸系統(tǒng)地取代(例如D-賴氨酸取代L-賴氨酸)， 可用于產(chǎn)生更穩(wěn)定的肽。半胱氨酸可用于環(huán)化或?qū)蓚€或多個肽連接在一起。這對于限制 肽成為特定構(gòu)象可能是有益的(Rizo和Gierasch，Ann. Rev. Biochem. 61 :387 (1992)，在此 引為參考)。當(dāng)在本文中使用時，血管通透性是指小分子(例如離子、水、營養(yǎng)物)、大分子(例 如蛋白和核酸)或甚至整個細(xì)胞(通往炎癥位點(diǎn)的淋巴細(xì)胞)通過血管壁的能力。II. R0B04信號傳導(dǎo)途徑Robo4信號傳導(dǎo)抑制病理性血管形成和新生血管化的信號傳導(dǎo)途徑，描述在國際 公布號 WO 2009/129408、國際公布號 WO 2008/073441 和 Jones 等(CA. Jones 等，2008. Robo4通過抑制病理性血管形成和內(nèi)皮滲透性過高使血管網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)定(Robo4 stabilizes the vascular network by inhibiting pathologic angiogenesis and endothelial hyperpermeability) ,Nat Med 14:448-453)中。正如在這些參考文獻(xiàn)中所述，Robo4的表 達(dá)產(chǎn)生了對Slit2的響應(yīng)性，并且Slit2-Robo4信號傳導(dǎo)對細(xì)胞粘附刺激的細(xì)胞侵入活性 具有負(fù)調(diào)控作用。這種負(fù)調(diào)控由Robo4與連接物蛋白樁蛋白及其旁系同源物的相互作用所 介導(dǎo)，所述相互作用召集ARF-GAP例如GITl，導(dǎo)致ADP核糖基化因子6 (ARF6)的局部失活。 由此該信號傳導(dǎo)途徑(在圖10中顯示)干擾了粘附介導(dǎo)的Racl活化和細(xì)胞侵入。圖10 中所描述的信號傳導(dǎo)途徑提出了用于調(diào)節(jié)Robo-4信號產(chǎn)道途徑的多個靶，并且Jones等、 國際公布號WO 2009/129408和國際公布號W02008/073441進(jìn)一步描述了參與Robo4信號傳導(dǎo)途徑的ARF-GAP和ARF-GEF的調(diào)節(jié)，可以不需要Slit/Robo4信號傳導(dǎo)來實(shí)現(xiàn)。Jones 等、國際公布號WO 2009/129408和國際公布號WO 2008/073441，其每個的內(nèi)容在此引為參考。Robo4信號傳導(dǎo)在多種不同炎癥介導(dǎo)物存在的情況下起到保護(hù)血管完整性的作 用。例如，Robo-4信號傳導(dǎo)途徑可用于在內(nèi)毒素(例如脂多糖或“LPS”)、腫瘤壞死因子 (例如TNF-α )和白介素-1 β ("IL-1 β ”)的存在下保護(hù)血管完整性，這些物質(zhì)每個都是已 知的炎癥介導(dǎo)物(Dinarello，CA. 1997.膿毒性休克病理發(fā)生中作為介導(dǎo)物的前炎性和抗 It生:導(dǎo)· (Proinflammatory and antiinflammatory cytokines as mediators in the pathogenesis of septic shock) ,Chest 112 :321S_3^S)。此外，Robo-4 信號傳導(dǎo)途徑在 多種不同組織中，例如在肺臟、腎臟和脾臟中起到保護(hù)內(nèi)皮屏障功能的作用。此外，Robo4信 號傳導(dǎo)途徑不僅在與急性炎癥反應(yīng)相關(guān)的病癥中起到保護(hù)血管完整性的作用，而且Robo-4 信號傳導(dǎo)途徑可用于在急性和慢性肺部炎癥的模型中在體內(nèi)保護(hù)內(nèi)皮屏障功能。II.活性藥劑和組合物本文描述的活性藥劑和組合物用于促進(jìn)血管屏障功能。在每個實(shí)施方案中，本文 描述的組合物包括至少一種能夠促進(jìn)血管屏障功能的活性藥劑，并且在一個這樣的實(shí)施方 案中，本文描述的組合物包含促進(jìn)血管內(nèi)皮屏障功能的活性藥劑。在另一個實(shí)施方案中，本 文描述的組合物包括在選自肺臟的血管內(nèi)皮、腎臟的血管內(nèi)皮和脾臟的血管內(nèi)皮之一的內(nèi) 皮組織中促進(jìn)血管屏障功能的活性藥劑。在另一個實(shí)施方案中，本文描述的組合物包括抑 制與導(dǎo)致急性肺部炎癥的病癥以及與慢性肺部炎癥相關(guān)的病癥例如肺纖維化的發(fā)生與發(fā) 展相關(guān)的血管通透性的活性藥劑。正如本文提供的實(shí)驗例所說明的，在特定實(shí)施方案中，本 文描述的活性藥劑甚至在多種炎癥和血管通透性的介導(dǎo)物、例如內(nèi)毒素(例如LPQ、腫瘤 壞死因子(例如TNF- α )和IL-I β的存在下，也促進(jìn)血管屏障功能。在具體實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑和組合物適用于治療患有病理癥狀例如 肺纖維化以及其他與急性肺部血管炎癥相關(guān)的病癥的個體。在一個這樣的實(shí)施方案中，本 文描述的組合物包括抑制一種或多種與肺纖維化包括特發(fā)性肺纖維化的發(fā)生或發(fā)展相關(guān) 的急性肺部血管水腫、急性肺部血管炎癥和慢性肺部血管炎癥的活性藥劑。在另一個這樣 的實(shí)施方案中，本文描述的組合物包括在暴露于微生物內(nèi)毒素或患有流感感染例如禽流感 感染的動物、包括人類中，促進(jìn)血管屏障功能的活性藥劑。在其他實(shí)施方案中，本文描述的 組合物包括促進(jìn)血管屏障功能和抑制與病狀例如細(xì)菌膿毒癥或流感感染例如禽流感感染 相關(guān)的血管通透性的活性藥劑。在血管內(nèi)皮中，關(guān)鍵性的穩(wěn)定化相互作用受粘著連接蛋白，血管內(nèi)皮鈣粘著蛋 白(VE-鈣粘著蛋白)的調(diào)節(jié)(Dejana，Ε.，F(xiàn). Orsenigo 和 M. G. Lampugnani. 2008.粘著 連接和VE-鈣粘著蛋白在血管通透性控制中的作用(The role of adherens junctions and VE-cadherin in the control of vascular permeability), J Cell Sci 121 2115-2122 ；Vestweber, D. 2008. VE-鈣粘著蛋白控制細(xì)胞連接和血管形成的主要內(nèi)皮 粘附分子(VE-cadherin :the major endothelial adhesion molecule controlling cellular junctions and blood vessel formation), Arterioscler Thromb Vasc Biol 28 :223-232). VE-鈣粘著蛋白的表面表達(dá)受到pl20_連環(huán)蛋白與VE-鈣粘著蛋白的結(jié)合 的調(diào)控，并且已知P120-連環(huán)蛋白與VE-鈣粘著蛋白的結(jié)合抑制VE-鈣粘著蛋白從細(xì)胞表面內(nèi)化并促進(jìn)血管穩(wěn)定性(Potter，Μ. D.，S. Barbero和D. A. Cheresh. 2005. VE-鈣粘著 蛋白的酪氨酸磷酸化阻止P120-和β-連環(huán)蛋白的結(jié)合并維持細(xì)胞間質(zhì)狀態(tài)(Tyrosine phosphorylation of VE-cadherin prevents binding of pl20-and beta-catenin and maintains the cellular mesenchymal state. J Biol Chem 280 :31906-31912 ； Xiao, K. , J. Garner, K. M. Buckley, P. A. Vincent, C. M. Chiasson, E. Dejana, V. Faundez 和A. P. Kowalczyk. 2005. pl20_連環(huán)蛋白調(diào)控VE-鈣粘著蛋白的網(wǎng)格蛋白依賴性胞吞作 用(pl20-catenin regulates clathrin-dependent endocytosis of VE-cadherin)， Mol Biol Cell 16 :5141-5151)。在具體實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑促進(jìn)VE-鈣粘著蛋 白在細(xì)胞表面連接處的出現(xiàn)。在一個這樣的實(shí)施方案中，本發(fā)明的活性藥劑促進(jìn)細(xì)胞表面 P120-連環(huán)蛋白的表達(dá)。不受具體理論的限制，目前相信在促進(jìn)細(xì)胞表面P120-連環(huán)蛋白 的表達(dá)中，這樣的實(shí)施方案保護(hù)了 VE-鈣粘著蛋白與pl20-連環(huán)蛋白之間的結(jié)合，從而通過 減少例如否則在一種或多種炎癥介導(dǎo)物(例如一種或多種細(xì)胞因子)的存在下可能發(fā)生的 VE-鈣粘著蛋白的胞吞作用，來促進(jìn)血管完整性。因此，在特定實(shí)施方案中，本文描述的活性 藥劑通過促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞例如血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)和促進(jìn)pl20-連環(huán) 蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞例如血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)之一或二者，在包括人類的動物中促進(jìn)血管 屏障功能。本文描述的活性藥劑可以包括Slit多肽，例如Slit2多肽。當(dāng)討論本文所考慮的 Slit2多肽時，全長Slit2蛋白以及全長Slit2蛋白的衍生物、類似物和同源物都考慮到了， 只要該多肽在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPQ、腫瘤壞死因子 (例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能，并在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種 或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑制血管滲漏、 促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)或促進(jìn)ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表 面的表達(dá)即可。衍生多肽分子是指從天然化合物直接或通過修飾或部分取代形成的多肽。 同源多肽分子是指源自于不同物種的特定基因的多肽產(chǎn)物。類似多肽分子是結(jié)構(gòu)上相似但 不一致，與參比多肽序列中包含的氨基酸在數(shù)量和性質(zhì)方面有差異的多肽。例如，給定多肽 的類似物將表現(xiàn)出一定水平的序列同源性，但是可以包含一個或多個氨基酸取代或缺失。在具體實(shí)施方案中，當(dāng)活性藥劑是Slit2多肽時，活性藥劑可以選自哺乳動物 Slit2多肽，例如人類Slit2多肽。當(dāng)活性藥劑是哺乳動物Slit2時，活性藥劑可以選自已 知的、全長的、天然存在的哺乳動物Slit2多肽，諸如例如SEQ ID NO 1所顯示的Slit2多 肽，及其能夠執(zhí)行下列一種或多種功能的衍生物、類似物和同源物在一種或多種炎癥介導(dǎo) 物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn) 內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因 子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表 面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)Ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。正如將被容易地認(rèn)識到 的，可以根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域已知的技術(shù)分離和純化天然存在的Slit2多肽(Wang，KH等，1999. 作為感覺軸突延長和分支的正調(diào)控物的哺乳動物slit蛋白的生物化學(xué)純化(Biochemical purification of a mammalian slit protein as a positive regulator of sensory axon elongation and branching.), Cell Mar 19 ；96 (6) :771-84 ;Chedotal，A. 2007. Slit 及其
(Slits and their receptors), Adv Exp Med Biol 621 :65_80)。
除了天然存在的Slit2多肽之外，本文所考慮的Slit2活性藥劑可以通過本技術(shù) 領(lǐng)域公知的重組或合成生產(chǎn)技術(shù)來獲得。此外，活性藥劑可以選自天然存在的、重組或合成 的哺乳動物Slit2多肽的衍生物、類似物或同系物。在具體實(shí)施方案中，Slit2活性藥劑可 以選自天然存在的Slit2蛋白的片段，例如由SEQ ID NO :2或SEQ ID NO :3所顯示的片段， 及其能夠執(zhí)行下列一種或多種功能的衍生物、類似物和同源物在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、 包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF- α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi) 皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子 (例如TNF-α)和IL-I β存在下抑制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面 的出現(xiàn)；以及促進(jìn)Ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。在其他實(shí)施方案中，可以使用由SEQ ID NO :4到SEQ ID NO :12所顯示的Slit2 多肽作為活性藥劑。具體來說，本文描述的活性藥劑可以選自Slit2N(SEQ ID NO 4)、SEQ ID NO :5 所顯示的 Slit2 多肽、Slit2AP(SEQ ID N0:6)、Slit2 Dl (SEQ ID N0:7)、Slit2 D1-D2(SEQ ID N0:8)、Slit2 D1_D3(SEQ ID N0:9)、Slit2 D1_D4(SEQ ID N0:10)、Slit2 D1-E5(SEQ ID NO :11)和Slit2 D1_E6(SEQ ID NO : 12)，及其能夠執(zhí)行下列一種或多種功 能的衍生物、類似物和同源物在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如 LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎 癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存 在下抑制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)ρ120-連 環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。在其他實(shí)施方案中，當(dāng)活性藥劑選自本文描述的Slit2多肽之一的衍生物、類似 物或同源物時，活性藥劑可以選自天然存在的哺乳動物Slit2多肽或由SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2和SEQ ID NO :4到SEQ ID NO 12所描述的Slit2多肽之一的衍生物、類似物或同 源物，其中這樣的活性藥劑與相關(guān)的天然存在的哺乳動物Slit2多肽或SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2 禾口 SEQ ID NO :4 至IjSEQ ID NO 12 的任一個，顯示出至少約 80%、81 %、82%、83%、 84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%, 99%或以上的多肽序列同源性。在每個這樣的實(shí)施方案中，選擇的衍生物、類似物或同源物 具有下列一種或多種能力在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、 腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo) 物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑 制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)ρ120-連環(huán)蛋白 在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。在另一個實(shí)施方案中，活性藥劑是天然存在的哺乳動物Slit2多肽或由SEQ ID NO =USEQ ID NO :2和SEQ ID NO :4到SEQ ID NO 12所描述的Slit2多肽之一的衍生物、類 似物或同源物，還表現(xiàn)出與其所源自的多肽較低的多肽序列同源性，例如選自80%或以下、 70%或以下、60%或以下或50%或以下之一的同源性，同時保留下列一種或多種能力在 一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α) 和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素 (例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著 蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)Ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。
在一個實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑是Robo4受體的配體。在這樣的實(shí)施方 案中，Robo4的配體可以是任何通過Robo4起作用以促進(jìn)血管屏障功能的分子。在本文中 使用時，表述“通過…起作用”是指配體對需要Robo4受體存在的內(nèi)皮細(xì)胞有效應(yīng)。在一個 實(shí)施方案中，對內(nèi)皮細(xì)胞有效應(yīng)的配體可以通過以引起Robo4信號傳導(dǎo)的方式與Robo4受 體結(jié)合或聯(lián)合而通過Robo4起作用。不受具體理論的限制，目前相信本文描述的Slit2多 肽通過Robo4受體起作用。因此，在本文描述的活性藥劑是Robo4受體的配體的具體實(shí)施 方案中，活性藥劑可以選自本文描述Slit多肽。在另一個這樣的實(shí)施方案中，Robo4的配 體可以是任何通過Robo4起作用以促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在細(xì)胞表面連接處出現(xiàn)的分子。在 具體實(shí)施方案中，Slit配體或其片段或變體，以產(chǎn)生下列一種或多種效應(yīng)的方式與Robo4 結(jié)合或聯(lián)合在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPQ、腫瘤壞死因子 (例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種 或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑制血管滲漏； 促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì) 胞表面的表達(dá)。在另一個實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑可以是Robo4的配體，其中配體通過 Robo4起作用以促進(jìn)pl20-連環(huán)蛋白的細(xì)胞表面表達(dá)。在其他實(shí)施方案中，本文描述的活性 藥劑包括Robo4受體的配體，其中配體通過Robo4起作用以起始GITl的樁蛋白活化。在另 一個實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑包括Robo4受體的配體，其中配體通過Robo4起作用 以活化GITl對ARF6的抑制。在其他實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑包括Robo4受體的 配體，其中配體以引起下列一種或多種效應(yīng)的方式通過Robo4起作用在一種或多種炎癥 介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在 下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤 壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮 細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)Ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。當(dāng)本發(fā)明的活性 藥劑包括Robo4的配體時，在具體實(shí)施方案中，配體可以是與Robo4的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合弓I 起Robo4信號傳導(dǎo)的分子。所需結(jié)構(gòu)的多肽可以使用本技術(shù)領(lǐng)域公知的方法和材料進(jìn)行生產(chǎn)。例如，各種 用于分離天然存在的多肽或生產(chǎn)重組多肽的方法是眾所周知的。此外，用于合成生產(chǎn)所 需序列的多肽的各種方法是已知的。例如，可以使用目前可以獲得的實(shí)驗室設(shè)備，使用 Fmoc (9-芴基甲氧羰基)或Boc (叔丁氧基羰基)化學(xué)來化學(xué)合成肽(Applied Biosystems, Inc.，F(xiàn)oster City, CA)。本文描述的Slit多肽可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的重組和 合成技術(shù)來獲得，包括在本文中以及例如在國際公布號WO 2009/129408和國際公布號WO 2008/073441中描述的方法來獲得。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地認(rèn)識到，對應(yīng)于所需蛋白的肽可以通過標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng) 來合成。例如，肽可以被合成并不從其合成樹脂上切下，而蛋白的另一個片段可以被合成然 后從樹脂上切下，由此暴露出在另一個片段上被功能性阻斷的末端基團(tuán)。通過肽縮合反應(yīng)， 可以將這兩個片段通過肽鍵分別在它們的羧基和氨基末端處共價相連，以形成抗體或其片 段(Grant GA (1992)《合成肽用戶指南》(Synthetic Peptides :A User Guide), W. H. Freeman and Co.，N. Y. (1992) ；Bodansky M 和 Trost B.主編，(1993)《肽合成原理》(Principlesof Peptide Synthesis), Springer-Verlag Inc.，NY (其在此至少以其與肽合成相關(guān)的材 料引為參考))?；蛘?，所需蛋白或肽可以使用標(biāo)準(zhǔn)的重組技術(shù)在體內(nèi)合成。當(dāng)將要連接 在一起形成所需蛋白的獨(dú)立的肽在體內(nèi)獨(dú)立進(jìn)行生產(chǎn)時，一旦這些獨(dú)立的肽被產(chǎn)生并分離 后，可以通過類似的肽縮合反應(yīng)將它們連接以形成所需蛋白或其片段。例如，克隆或合成的肽區(qū)段的酶法連接允許將相對短的肽片段相連，以產(chǎn)生較大 的肽片段、多肽或整個蛋白結(jié)構(gòu)域(Abrahmsen L等，Biochemistry，30 :4151 (1991))?；?者，可以利用合成肽的天然化學(xué)連接從較短的肽片段合成地構(gòu)建大的肽或多肽。該方法由 兩步化學(xué)反應(yīng)構(gòu)成(Dawson等，通過天然化學(xué)連接合成蛋白(Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation)，Science, 266 :776-779 (1994))。第一步是將未保護(hù)的合成 肽-硫酯與另一種含有氨基末端Cys殘基的未保護(hù)的肽區(qū)段進(jìn)行化學(xué)選擇性反應(yīng)，以產(chǎn)生 硫酯連接的中間體作為起始共價產(chǎn)物。不改變反應(yīng)的條件，該中間體經(jīng)歷自發(fā)、快速的分 子內(nèi)反應(yīng)，在連接位點(diǎn)處形成天然肽鍵(Baggiolini M等，(1992)FEBS Lett. 307 :97-101 ； Clark-Lewis I 等，J. Biol. Chem. , 269 16075 (1994) ；Clark-Lewis I 等，Biochemistry, 30 :3128(1991) ；Rajarathnam K^, Biochemistry 33:6623—30(1994))。或者，將未保護(hù)的肽區(qū)段化學(xué)連接，其中肽區(qū)段之間形成的鍵作為化學(xué)連接的結(jié) 果是非天然的(非肽)鍵(Schnolzer, M等，Science，256 :221 (1992))。這種技術(shù)已被用 于合成蛋白結(jié)構(gòu)域的類似物以及大量具有完全生物活性的相對純的蛋白(deLisle Milton RC 等，《蛋白質(zhì)化學(xué)技術(shù) IV》(Techniques in Protein Chemistry IV), Academic Press, New York,pp.257-267(1992))。在另一個實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑可以是小分子活性藥劑，其抑制選自 胞粘蛋白的ARNO家族的胞粘蛋白的活性。選自以導(dǎo)致一種或多種ARF、例如ARF6和ARFl 的抑制的方式抑制ARF-GEF，例如胞粘蛋白、選自胞粘蛋白的ARNO家族的胞粘蛋白或ARNO 的可利用性、活化或活性的化合物的小分子活性藥劑，描述在Jones等、國際申請公布號WO 2009/U9408和國際申請公布號WO 2008/073441中。在本文描述的組合物和方法的情形 下，已經(jīng)確定，以導(dǎo)致一種或多種ARF、例如ARF6和ARFl的抑制的方式抑制ARF-GEF、例如 胞粘蛋白、選自胞粘蛋白的ARNO家族的胞粘蛋白或ARNO的可利用性、活化或活性的小分子 活性藥劑，能夠抑制肺部血管通透性和/或炎癥以及可能由此發(fā)生的肺纖維化。在具體實(shí)施方案中，本文描述的小分子活性藥劑以導(dǎo)致下列一種或多種效應(yīng)的方 式抑制選自胞粘蛋白的ARNO家族的胞粘蛋白的活性抑制ARF6的活性或可利用性；抑制 ARFl的活性或可利用性；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫 瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo) 物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑 制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)ρ120-連環(huán)蛋白 在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。在另一個實(shí)施方案中，小分子活性藥劑以導(dǎo)致下列一種或多 種效應(yīng)的方式抑制ARNO的活性抑制ARF6 ；保護(hù)血管內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介 導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下 促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞 死因子(例如1順-叫和11^-13存在下抑制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì) 胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)P120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。在另一個實(shí)施方案中，小分子活性藥劑抑制ARF6的活性或可利用性，導(dǎo)致下列一種或多種效應(yīng)保護(hù)血管內(nèi) 皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子 (例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種 或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑制血管滲漏； 促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì) 胞表面的表達(dá)。在具體實(shí)施方案中，本文描述的活性藥劑可以是％(^11!13，其結(jié)構(gòu)提供在圖9中。 SecinH3是胞粘蛋白的抑制劑(參見例如Hafner等，通過SeCinH3抑制胞粘蛋白導(dǎo)致肝 臟姨島素抗性(Inhibition of cytohesins by SecinH3 leads to hepatic insulin resistance), Nature (2006)，444，941-944，以及國際專利申請公布號 WO 2006/053903，二 者的內(nèi)容在此引為參考)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，SeCin-H3抑制炎癥介導(dǎo)物的效應(yīng)和血管通透性。因 此，在一個實(shí)施方案中，SeCinH3可以被選做以導(dǎo)致選自ARF6和ARFl的ARF的抑制的方式 抑制選自胞粘蛋白的ARNO家族的胞粘蛋白的活性的小分子活性藥劑，并提供一種或多種 下列效應(yīng)在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPQ、腫瘤壞死因子 (例如TNF-α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種 或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α )和IL-I β存在下抑制血管滲漏； 促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促進(jìn)ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì) 胞表面的表達(dá)。在另一個實(shí)施方案中，本文描述的組合物包括一種或多種小分子活性藥劑，其選 自以導(dǎo)致下列一種或多種效應(yīng)的方式抑制ARF-GEF、例如胞粘蛋白、選自胞粘蛋白的ARNO 家族的胞粘蛋白或ARNO的可利用性、活化或活性抑制ARF6的活性或可利用性；抑制ARFl 的活性或可利用性；保護(hù)血管內(nèi)皮屏障功能；在一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種 內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF- α )和IL-I β存在下促進(jìn)內(nèi)皮屏障功能；在 一種或多種炎癥介導(dǎo)物、包括一種或多種內(nèi)毒素(例如LPS)、腫瘤壞死因子(例如TNF-α) 和IL-Ιβ存在下抑制血管滲漏；促進(jìn)VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)；以及促 進(jìn)Ρ120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。當(dāng)本文描述的活性藥劑包括小分子活性藥劑時，在具體實(shí)施方案中，活性藥劑可 以包括一種或多種具有下列化學(xué)式(式1)的化合物或其可藥用鹽、溶劑化物或水合物
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)對象中血管屏障功能的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的至少一種Slit多肽，其中給藥所述至少一種Slit多肽引起 內(nèi)皮屏障功能的促進(jìn)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中至少一種Slit多肽是Robo4的配體。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中至少一種Slit多肽是至少一種Slit2多肽。
4.權(quán)利要求3的方法，其中至少一種Slit2多肽是Slit2N(SEQID NO 4)。
5.權(quán)利要求1或2的方法，其中至少一種Slit多肽包含至少下列之一的多肽序列SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO 12，及其組 合、衍生物、同源物和類似物。
6.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中血管屏障功能的促進(jìn)在至少一種炎癥介導(dǎo)物的存 在下發(fā)生，所述介導(dǎo)物選自脂多糖、TNF-α、IL_li3及其組合。
7.前述權(quán)利要求任一項的方法，其中內(nèi)皮屏障功能的促進(jìn)包含促進(jìn)血管內(nèi)皮鈣粘著蛋 白(VE-鈣粘著蛋白)在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)和促進(jìn)pl20-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞 表面的表達(dá)中的至少一種。
8.一種促進(jìn)對象中血管屏障功能的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的至 少一種ARF GTP交換因子(ARF-GEF)的至少一種抑制劑，其中調(diào)節(jié)至少一種ARF-GEF導(dǎo)致 對象中血管通透性的抑制。
9.權(quán)利要求8的方法，其中抑制至少一種ARF-GEF導(dǎo)致至少一種ADP核糖基化因子 (ARF)的抑制。
10.權(quán)利要求9的方法，其中至少一種ARF選自ARF6、ARFl及其組合。
11.權(quán)利要求8到10任一項的方法，其中至少一種抑制劑是小分子化合物，所述小分 子化合物抑制至少一種ARF-GEF的可利用性、至少一種ARF-GEF的活化和至少一種ARF-GEF 的活性中的至少一種。
12.權(quán)利要求8到11任一項的方法，其中至少一種ARF-GEF的至少一種抑制劑包含 SecinH3。
13.權(quán)利要求8到10任一項的方法，其中至少一種ARF-GEF的至少一種抑制劑包含式 1的化合物和式2的化合物中的至少一種。
14.權(quán)利要求8到10任一項的方法，其中至少一種ARF-GEF的至少一種抑制劑選自下 列之一
15.權(quán)利要求8到14任一項的方法，其中至少一種ARF-GEF的至少一種抑制劑抑制選 自胞粘蛋白的ARNO家族的胞粘蛋白。
16.權(quán)利要求15的方法，其中胞粘蛋白是ARN0。
17.權(quán)利要求8到16任一項的方法，其中對象中血管通透性的抑制在至少一種炎癥介 導(dǎo)物的存在下發(fā)生，所述炎癥介導(dǎo)物選自脂多糖、TNF-a、IL_li3及其組合。
18.權(quán)利要求8到17任一項的方法，其中對象中血管通透性的抑制包含促進(jìn)VE-鈣粘 著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)和促進(jìn)P120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)中 的至少一種。
19.一種促進(jìn)對象中VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的至少一種Slit多肽；其中向?qū)ο蠼o藥至少一種Slit多肽促 進(jìn)了對象中VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)。
20.權(quán)利要求19的方法，其中至少一種Slit多肽選自至少下列之一SEQID NO=USEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID N0:8、EQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO : 12，及其組合、衍生物、同源 物和類似物。
21.權(quán)利要求19或權(quán)利要求20的方法，其中促進(jìn)對象中VE-鈣粘著蛋白在血管內(nèi)皮 細(xì)胞表面的出現(xiàn)，在至少一種炎癥介導(dǎo)物的存在下發(fā)生，所述介導(dǎo)物選自脂多糖、TNF-a、 IL-I β及其組合。
22.權(quán)利要求19或權(quán)利要求20的方法，其中給藥至少一種Slit多肽促進(jìn)pl20-連環(huán) 蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。
23.一種治療患有肺部血管炎癥的對象的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的至少一種Slit多肽，其中給藥至少一種Slit多肽引起對象 中肺部血管炎癥的減輕。
24.權(quán)利要求23的方法，其中至少一種Slit多肽是至少一種Slit2多肽。
25.權(quán)利要求24的方法，其中至少一種Slit2多肽是Slit2N(SEQID NO 4)。
26.權(quán)利要求23或權(quán)利要求M的方法，其中至少一種Slit多肽包含至少下列之一的 多月太序列SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :11、SEQ ID NO :12，及其組合、衍生物、同源物和類似物。
27.權(quán)利要求23到沈任一項的方法，其中血管炎癥的減輕在至少一種炎癥介導(dǎo)物的存 在下發(fā)生，所述介導(dǎo)物選自脂多糖、TNF-α、IL_li3及其組合。
28.權(quán)利要求23到27任一項的方法，其中給藥至少一種Slit多肽促進(jìn)了對象中VE-鈣 粘著蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)。
29.權(quán)利要求23到28任一項的方法，其中給藥至少一種Slit多肽促進(jìn)了對象中 P120-連環(huán)蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。
30.權(quán)利要求23到四任一項的方法，其中治療血管炎癥還包含促進(jìn)對象中pl20-連環(huán) 蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的表達(dá)。
31.一種降低與任何急性肺部血管水腫、慢性肺部血管水腫、急性肺部血管炎癥、慢性 肺部血管炎癥、肺纖維化包括特發(fā)性肺纖維化、細(xì)菌膿毒癥或流感感染相關(guān)的血管通透性 的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的至少一種Slit多肽，其中給藥至少一種Slit多肽降低了對 象中與病狀相關(guān)的血管通透性。
32.權(quán)利要求31的方法，其中病狀是肺纖維化，包括特發(fā)性肺纖維化。
33.權(quán)利要求31或權(quán)利要求32的方法，其中至少一種Slit多肽在至少一種炎癥介導(dǎo) 物的存在下向?qū)ο蠼o藥，所述介導(dǎo)物選自脂多糖、TNF-α、IL_li3及其組合。
34.權(quán)利要求31到33任一項的方法，其中給藥至少一種Slit多肽促進(jìn)了VE-鈣粘著 蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的出現(xiàn)。
35.一種治療患有肺纖維化的對象的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的化合物，所述化合物選自式1的化合物和式2的化合物。
36.權(quán)利要求35的方法，其包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的kcinH3及其可藥用鹽、溶劑 化物或水合物。
37.權(quán)利要求35的方法，其包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的選自下列之一的化合物
38.一種抑制對象中肺纖維化發(fā)生的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的化合物，所述化合物選自式1的化合物和式2的化合物。
39.權(quán)利要求38的方法，其包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的SeCinH3及其可藥用鹽、溶劑 化物或水合物。
40.權(quán)利要求38的方法，其包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的選自下列之一的化合物
41.一種治療患有肺纖維化的對象的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的Slit多肽。
42.權(quán)利要求41的方法，其包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的Slit2多肽。
43.權(quán)利要求42的方法，其中Slit2多肽是Slit2N(SEQID NO :4)。
44.權(quán)利要求41或權(quán)利要求42的方法，其中Slit多肽選自由SEQID NO :1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID NO: 8,SEQ ID N0:9、SEQ ID NO : 10、SEQ ID NO =IUSEQ ID NO : 12 所顯示的多肽，及其組合、衍 生物、同源物和類似物之一。
45.一種抑制對象中肺纖維化的發(fā)生的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的Slit多肽。
46.權(quán)利要求45的方法，其包含向?qū)ο蠼o藥治療有效量的Slit2多肽。
47.權(quán)利要求45或權(quán)利要求46的方法，其中Slit多肽選自由SEQIDNO =USEQ ID NO: 2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、 SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12 所顯示的多肽，及其組合、衍生 物、同源物和類似物之一。
全文摘要
本文描述了促進(jìn)屏障功能或抑制與肺部炎癥相關(guān)的血管內(nèi)皮通透性的活性藥劑和組合物。
文檔編號A61K38/00GK102083452SQ200980125675
公開日2011年6月1日 申請日期2009年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月12日
發(fā)明者尼亞爾·隆東, 朱偉銓, 狄恩·Y·李 申請人:猶他大學(xué)研究基金會