專利名稱：：一種黃芩素提取物在制備防治高脂血癥性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種黃芩素提取物在制備防治高脂血癥性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：黃吝素是從唇形科(Labiatae)黃吝屬(Scutellaria)多年生草本植物黃吝(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根部提取出來的有效成分之一，其化學(xué)結(jié)構(gòu)屬于黃酮類。研究表明黃芩素具有降低腦血管阻力，改善腦血循環(huán)、增加腦血流量及抗血小板凝集的作用，且有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝利膽、利尿、抗癌等多種藥理作用。此外，黃芩素還是一種有效的自由基清除劑和黃嘌呤氧化酶抑制劑，用于防治心血管疾病。脂肪肝(FatyLiver)是常見的彌漫性肝病之一，是由多種原因引起的肝臟脂肪代謝紊亂的一種代謝性疾病，主要是肝細(xì)胞攝取的脂肪增加而氧化減少所致的肝細(xì)胞內(nèi)蓄積脂肪過多的病理狀態(tài)。脂肪肝的病因比較復(fù)雜，常見如肥胖、糖尿病、營養(yǎng)不良等，特別是與高脂血癥有密切關(guān)系。根據(jù)形成脂肪肝病因的不同，通常分為酒精性脂肪性肝病(alcoholicfattyliverdisease，AFLD)禾口非酒精性月旨肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)。非酒精性脂肪肝是一種無過量飲酒史，而以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪貯積和脂肪變性為特征的臨床病理綜合癥。隨著人類生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的變化，非酒精性脂肪肝的發(fā)病也呈現(xiàn)上升趨勢。非酒精性脂肪肝病因復(fù)雜，多種病因均能導(dǎo)致脂肪肝的發(fā)生，而其中高脂血癥是最常見的病因之一。高脂血癥是指血漿中的膽固醇(TC)或(和)甘油三酯(TG)水平升高，使脂質(zhì)代謝紊亂的一種常見病。高脂血癥是形成脂肪肝的基礎(chǔ)，而肝臟的脂肪病變又影響脂質(zhì)代謝，可加重高脂血癥并形成惡性循環(huán)，從而導(dǎo)致高脂血癥性脂肪肝。高脂血癥性脂肪肝如未得到及時的治療，可逐漸發(fā)展為脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化、末期肝衰竭以及肝癌。若能早期發(fā)現(xiàn)并及時治療，則可阻止其進(jìn)一步的發(fā)展并使其逆轉(zhuǎn)。脂肪肝是由遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)因素所致的以肝細(xì)胞脂肪變性為主的臨床病理綜合癥性疾病。肝臟在脂類的消化、吸收、分解、合成及運(yùn)輸?shù)冗^程中起著重要作用，是內(nèi)源性血脂和脂蛋白合成及其代謝的主要器官，肝外組織的TC主要由高密度脂蛋白(HDL)攜帶通過HDL受體途徑進(jìn)入肝臟代謝。長期攝入高脂飲食，外源性脂肪吸收增加，導(dǎo)致高脂血癥。當(dāng)高脂血癥形成后，肝臟攝取脂肪酸及其酯化作用增強(qiáng)，肝內(nèi)脂肪酸除部分合成磷脂和膽固醇外，主要合成TG，TG再與肝細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成的載脂蛋白結(jié)合，形成極低密度脂蛋白-甘油三酯(VLDL-TG)釋放入血，當(dāng)肝內(nèi)TG過多超過了肝臟的轉(zhuǎn)運(yùn)能力，或者極低密度脂蛋白(VLDL)分泌障礙時，均可導(dǎo)致TG在肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)堆積，從而壓迫肝血竇逐漸造成肝細(xì)胞缺血、變性、壞死。因此，降低血脂、清除肝臟中堆積的脂肪是治療脂肪肝的重要方法之一脂質(zhì)過氧化是非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制的的重要環(huán)節(jié)。機(jī)體抗氧化能力減弱，體內(nèi)脂質(zhì)過氧化作用加強(qiáng)，產(chǎn)生大量自由基不能被及時清除，造成組織損傷。超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)是體內(nèi)重要的清除氧自由基的酶，對機(jī)體的氧化/抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，可以保護(hù)肝組織細(xì)胞免受損傷。其活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力。氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacid，PUFA)，形成脂質(zhì)過氧化物，主要是丙二醛(malonaldehyde，MDA)，其含量的高低可以反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映出細(xì)胞損傷程度。因此，降低自由基引起的脂質(zhì)過氧化作用并提高機(jī)體清除自由基的能力是治療脂肪肝的另一重要途徑。脂肪肝的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確，因而目前尚缺乏理想的治療藥物。中藥具有多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)，近半個世紀(jì)以來，國內(nèi)外學(xué)者相繼開展了調(diào)血脂、抗脂肪肝藥物的研究，特別是近二十年來通過動物實(shí)驗(yàn)和藥效學(xué)研究，已篩選出一批有效的保肝調(diào)脂抗氧化作用的中藥。這些中藥主要集中在調(diào)節(jié)血脂、肝脂質(zhì)、抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物產(chǎn)生和提高機(jī)體清除自由基的能力，并保護(hù)肝臟等方面。鑒于黃芩素具有抗菌、抗炎、保肝利膽和有效的自由基清除劑和黃嘌呤氧化酶抑制劑等多方面的藥理作用，且至今尚未見有應(yīng)用黃芩素防治高脂血癥性脂肪肝疾病方面的報道，因此本發(fā)明人研究了黃芩素對高脂血癥性脂肪肝大鼠動物模型是否具有防治作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種黃芩素提取物在制備防治高脂血癥性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用，解決了現(xiàn)有技術(shù)中藥物難以控制和治療高脂血癥性脂肪肝的難題。為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是—種黃芩素提取物在制備防治高脂血癥性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選的，所述黃芩素提取物中黃芩素含量^50%，所述黃芩素提取物還包括藥學(xué)上可接受的載體。優(yōu)選的，所述黃芩素提取物的劑型選自片劑、口腔崩解片、注射劑、凍干粉針劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑、丸劑或口服液。原料藥材的說明所述原料藥材黃芩根據(jù)《中華人民共和國藥典》2005年版第一部的標(biāo)準(zhǔn)，敘述如下黃芩，為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根。性寒味苦，歸肺、膽、脾、大腸、小腸經(jīng)。主要具有清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎的功效。用于濕溫、暑溫胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動不安。原料藥材經(jīng)過粉碎、提取工藝得到活性部位或活性成分，對活性成分進(jìn)行各種劑型的制備。如本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所能了解的，原料藥材的提取可以采用溶劑提取法或者根據(jù)需要采用水蒸氣蒸餾法。當(dāng)然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道原料藥材的粉碎度對原料藥材活性成分的提取有著重要的影響。溶劑提取法中包括浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等。提取溶劑可以有機(jī)溶劑或者水，有機(jī)溶劑包括如乙醇(酒精)、甲醇(木精)、丙酮等等的親水性有機(jī)溶劑和石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等親脂性有機(jī)溶劑，其中乙醇較為常用。有效成分為芳香揮發(fā)性成分，優(yōu)選用蒸餾法提??；有效成分為熱敏性成分，優(yōu)選用滲漉法或溫浸法提?。灰话闼幬锟梢圆捎眉逯蠡蛘呋亓魈崛》?。而一般可以采用的水提醇沉或者醇提水沉工藝來完成活性成分的提取和除雜。提取工藝需要考慮藥材的粉碎度、藥材浸泡時間、吸水性；另外還需對提取時間、溶劑的選擇和濃度、提取次數(shù)、加水量等等因素進(jìn)行考慮。可優(yōu)選采用正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)方法來獲得這些因素的最佳方式和影響提取效率、提取結(jié)果的因素順序，這些都是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過有限的試驗(yàn)可以優(yōu)化找到的。現(xiàn)就本發(fā)明中一些術(shù)語進(jìn)行解釋如本文所用，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"指用于治療劑給藥的載體，包括各種賦形劑和稀釋劑。該術(shù)語指這樣一些藥劑載體它們本身并不是必要的活性成分，且施用后沒有過分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPub.Co.N.J.1991)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的賦形劑的充分討論。在組合物中藥學(xué)上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如填充劑、崩解齊U、潤滑齊U、助流齊IJ、泡騰齊IJ、潤濕劑或乳化劑、矯味劑、pH緩沖物質(zhì)等。來自于黃芩的，除必要活性成分如黃芩素或活性部位黃芩提取物之外的非必要成分，以及其它非必要成分(例如其它輔助性藥材)，也包括在藥學(xué)上可接受的載體的定義中。在本發(fā)明的藥物中，作為發(fā)揮藥物作用的主要組分的是黃芩素提取物，其中重要的活性成分為黃芩素。本發(fā)明的藥物可直接用于治療或預(yù)防高脂血癥性脂肪肝，或可與其它藥物協(xié)同給藥。本發(fā)明的組合物藥物中，各主要成分也可以以"生理學(xué)可接受的鹽"或"生理學(xué)可接受的酸或堿衍生的鹽"形式使用，或以"酰胺"的形式使用。所述的鹽包括(但不限于)與如下無機(jī)酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及與有機(jī)酸形成的鹽，而有機(jī)酸則指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和馬來酸。其它鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以酯、氨基甲酸酯或其它常規(guī)的"前體藥物"的形式(當(dāng)以這種形式給藥時，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成活性部分)。本發(fā)明的藥物可以通過常規(guī)方法制成任何常規(guī)的制劑形式，包括但不限于片劑、口腔崩解劑、注射劑、凍干粉針劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑、丸劑、或口服液。從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊等。本發(fā)明的藥物對高脂血癥性脂肪肝的治療效果與必要活性成分的含量密切相關(guān)。研究表明，為了取得穩(wěn)定的治療和/或預(yù)防高脂血癥性脂肪肝的效果，應(yīng)使該藥物中的活性成分含量達(dá)到一定的范圍。本發(fā)明的藥物的用量可隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明的組合物每天以約l-50mg/kg動物體重的劑量給予時，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以l-4次分開的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為60-5000mg，較佳地約為80-2000mg?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的需要，可每天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。本發(fā)明的藥物基于黃芩素提取物，有效成分明確，療效確切，使用方便，可廣泛應(yīng)用于制備防治高脂血癥性脂肪肝及相關(guān)疾病的藥物中。相對于現(xiàn)有技術(shù)中的方案，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1.本發(fā)明人以脂肪乳劑灌胃的方法建立高脂血癥性脂肪肝大鼠模型，以黃芩素提取物作為治療藥物，觀察黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝動物肝組織、血清相關(guān)生化指標(biāo)及病理形態(tài)學(xué)的影響，研究黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝動物模型的防治作用。在研究防治高脂血癥性脂肪肝過程中，發(fā)現(xiàn)黃芩素提取物給藥四周后可使高脂血癥性脂肪肝大鼠的肝重和肝系數(shù)明顯降低(P<0.01);其血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)、游離脂肪酸(FFA)的水平降低或明顯降低(P〈0.05或P<0.01)，血清高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)水平升高(P<0.05);其肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平降低或明顯降低(P<0.05或P<0.01);肝組織中TC和TG含量明顯降低(P<0.01);肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)的活性明顯升高(P<0.01)，同時肝組織中丙二醛(MDA)水平明顯降低(P<0.01)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明黃吝素提取物具有防治高脂血癥性脂肪肝的作用，具體體現(xiàn)為降低大鼠肝重和肝系數(shù)、降低血脂及肝臟脂質(zhì)的含量。本發(fā)明人經(jīng)長期研究發(fā)現(xiàn)，其作用涉及調(diào)節(jié)血脂、肝脂質(zhì)、抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物產(chǎn)生和提高機(jī)體清除自由基的能力，并保護(hù)肝臟等方面。2、本發(fā)明的黃芩素提取物來源于傳統(tǒng)中藥，其毒副作用小、價格低廉、服用方便、可長期使用；而且經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其療效確切，是一種較為安全可靠、可長期服用的防治高脂血癥性脂肪肝藥物。下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述圖1為本發(fā)明實(shí)施例正常對照組大鼠肝臟的H-E染色圖，200X顯微鏡下；圖2為本發(fā)明實(shí)施例模型組大鼠肝臟的H-E染色圖，200X顯微鏡下；圖3為本發(fā)明實(shí)施例力平之組大鼠肝臟的H-E染色圖，200X顯微鏡下；圖4為本發(fā)明實(shí)施例黃芩素大劑量組大鼠肝臟的H-E染色圖，200X顯微鏡下；圖5為本發(fā)明實(shí)施例黃芩素提取物小劑量組大鼠肝臟的H-E染色圖，200X顯微鏡下；圖6為本發(fā)明實(shí)施例正常對照組大鼠肝臟細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)圖，6000X透射顯微鏡下；圖7為本發(fā)明實(shí)施例模型組大鼠肝臟細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)圖，6000X透射顯微鏡下；圖8為本發(fā)明實(shí)施例力平之組大鼠肝臟細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)圖，6000X透射顯微鏡下；圖9為本發(fā)明實(shí)施例黃芩素大劑量組大鼠肝臟細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)圖，6000X透射顯微鏡下；圖IO為本發(fā)明實(shí)施例黃芩素提取物小劑量組大鼠肝臟細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)圖，6000X透射顯微鏡下。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對上述方案做進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中采用的實(shí)施條件可以根據(jù)具體廠家的條件做進(jìn)一步調(diào)整，未注明的實(shí)施條件通常為常規(guī)實(shí)驗(yàn)中的條件。實(shí)施例藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)1、試驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠，雄性，體重170-190g，清潔級，由蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號XCYK(蘇)2002-0008，使用許可證號SYXK(蘇)2007-0035。實(shí)驗(yàn)期間飼養(yǎng)室溫度(20±2)°C。藥品及主要試劑黃芩素提取物黃芩素含量為^50%，棕黃色結(jié)晶，批號090429，由本所植化室從黃芩根中提取而得，4t:冰箱保存。力平之(非諾貝特)膠囊，法國利博福尼制藥有限公司生產(chǎn)，批號93405，進(jìn)口藥品注冊證號H20050004，臨用時用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液(CMC-Na)配成1%藥物濃度。自制豬油；膽固醇，上?？笊锛夹g(shù)有限公司生產(chǎn)，批號20070712;3號膽鹽，上?？笊锛夹g(shù)有限公司生產(chǎn)，批號20070816;丙基硫氧嘧啶，蘇州東瑞制藥有限公司生產(chǎn)，批號080411001;丙二醇和吐溫-80，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號分別為T20061207和F20061016。各指標(biāo)檢測試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。脂肪乳劑配方含豬油15%，膽固醇6%，3號膽鹽2%，丙基硫氧嘧啶0.2%，丙二醇20%，吐溫-8016%配制而成。主要儀器光學(xué)顯微鏡CX31，OLYMPUS;分光光度計(jì)T6，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；電熱恒溫水浴鍋HHS-6型，上海浦東躍欣科學(xué)儀器廠；離心沉淀器，80-2型，上海手術(shù)器械廠；內(nèi)切式勻漿機(jī)ZS83-1型，浙西機(jī)械廠；高速冷凍離心機(jī)5417R型，德國印pendorf公司。2、實(shí)驗(yàn)方法動物分組、造模及給藥方法將50只SD雄性大鼠，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只，依次為正常對照組(Control)、模型組(Model)、陽性對照藥力平之(Lipanthyl)組、黃芩素提取物小(25mg*kg—0、大(50mg*kg—0劑量組。各給藥組預(yù)防給藥4天后，除正常對照組外，其余各組每天上午9:00-10:30按時灌服脂肪乳劑(10mlkg-1d-0，下午2:00-3:00分別按不同劑量以2mlkg—1d—1體積灌服給藥，正常組和模型組灌服等體積的CMC-Na，連續(xù)給藥4周。于末次給藥后禁食12h，不禁水，然后以4%水合氯醛10mlkg—1d—1體重腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，取肝臟稱其濕重計(jì)算肝重系數(shù)，分別用生理鹽水和三氯甲烷甲醇(l:1)混合液制成10%肝組織勻漿液，另取同一部位兩塊肝臟分別以10%福爾馬林溶液和4%戊二醛溶液固定，分別用光鏡和電鏡檢查肝組織的形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變。肝重系數(shù)計(jì)算和血清生化檢測肝重系數(shù)=肝重(g)/體重(100g)。按試劑盒提供的方法分別測定血清TC，TG，HDL-C，LDL-C，F(xiàn)FA，ALT和AST。按下列公式計(jì)算，LDL-C=TC-(TG/2.2+HDL-C)。肝臟生化測定精確稱取大鼠肝組織500mg，加三氯甲烷甲醇(1:1)混合液至5ml后勻漿，勻漿液置4°C24h后3500轉(zhuǎn)離心15min，取上清20yL置另一試管中，室溫放置12h以上，待三氯甲烷和甲醇揮發(fā)后，按試劑盒提供的方法分別測定肝中的TC和TG含量。在相同部位稱取大鼠肝組織200mg，加冰生理鹽水2ml后勻漿，3500轉(zhuǎn)離心15min后取上清，按試劑盒方法分別測定SOD、MDA和蛋白含量。組織學(xué)觀察取同一部位肝臟以10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE染色。根據(jù)光學(xué)顯微鏡下組織學(xué)變化，將肝臟脂肪變性程度分為_，+，++和+++四個等級"-"表示肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正?；蚺家娭究张?；"+"表示肝小葉內(nèi)1/3肝細(xì)胞脂肪變性，累及的肝小葉數(shù)<50%;"++"表示肝小葉內(nèi)2/3肝細(xì)胞脂肪變性，累及的肝小葉數(shù)<50%，或肝小葉內(nèi)1/3肝細(xì)胞脂肪變性，累及肝小葉數(shù)>50%;"+++"表示肝小葉內(nèi)>2/3肝細(xì)胞脂肪變性，累及的肝小葉數(shù)>50%。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用(x士s)表示，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行t檢驗(yàn)處理，對肝臟的病理學(xué)檢查觀察結(jié)果，采用等級資料的秩和檢驗(yàn)。經(jīng)上述方法，得到以下結(jié)果1)黃芩素提取物對高脂性血癥性脂肪肝大鼠體重、肝重和肝系數(shù)的影響如表1所示，與正常對照組相比較，高脂血癥性脂肪肝模型組大鼠肝重和肝系數(shù)升高或明顯升高(P<0.05或P<0.01)。連續(xù)給藥4周后，與模型組相比，黃芩素提取物各劑量組大鼠肝重和肝系數(shù)明顯降低(P<0.01)，陽性對照藥力平之組大鼠肝重和肝系明顯升高數(shù)(P<0.01)。(見表1)表1黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝重和肝系數(shù)的影響(；士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>#P<0.05，##P<0.01與正常對照組比較，*P<0.05，**P<0.01與模型組比較2)黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠血脂的影響與正常對照組相比較，高脂血癥性脂肪肝模型組大鼠血清TC、TG、FFA和LDL_C明顯升高(P<0.01)。連續(xù)給藥4周后，與模型組相比黃芩素提取物各劑量組大鼠血清TC、TG、LDL-C和FFA的水平降低或明顯降低(P<0.05或P<0.01)，黃芩素提取物小劑量可使血清HDL-C升高(P<0.05)。陽性對照藥力平之也能降低或明顯降低高脂血癥性脂肪肝大鼠血清TC、TG和FFA含量(P<0.05或P<0.01)，但對LDL-C、HDL-C未見明顯影響(見表2)。表2黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、FFA的影響(；±s，n=10)組別劑量TCTGHDL-CLDL-CFFA(mg-kg-1)(mmol■Tji)(mmolL_1)(mmolL—》(mmolI/1)正常對照組—1.17±0.190.52±0.100.69±0.080.24±0.09478,13±81.17模型組—1.84±0.27##0.99±0.32胖0.61±0.07613,21±123,62雜力平之組201,63±0.16*0.57±0.20林0.67土0.120.70±0.05471.26±39.15*黃萃素提取物小劑量組251.53±0.21**0.60±0.07**0.67±0.08*0.56±0.06林427.44士63.45神大劑量組501.63±0.22*0.68±0.14林0.66±0.060.66±0.04*441.57±81.38**#P<0.05，##P<0.01與正常對照組比較，*P<0.05，**P<0.01與模型組比較3)黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝功能指標(biāo)的影響與正常對照組相比較，脂肪肝模型組大鼠血清ALT和AST水平升高(P<0.05)。連續(xù)給藥4周后，與模型組相比黃芩素提取物大、小劑量大鼠血清ALT和AST降低或明顯降低(P<0.05或P〈0.01)。但陽性對照藥力平之對ALT和AST未見有明顯影響(見表3)。表3黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝功能指標(biāo)的影響G±s，n=10)劑量IE1(mg.kg—1)(KarUL—1)(KarUL—1)一17.26±5.2556.54±9.42—25.43±1.76#66.95±7.93#2022.83±5.4658.36±9.722515.06±6.12**54.44±6.66**5017.19±3.29*55.07±8.47*組別正常對照組模型組力平之組黃零素提取物小劑量組黃苳素提取物大劑量組#P<0.05，##P<0.01與正常對照組比較，**P<0.05，**P<0.01與模型組比較4)黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝組織中TC、TG、MDA、SOD的影響與正常對照組相比較，高脂血癥性脂肪肝模型組大鼠肝組織中TC、TG和MDA明顯增加(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.01)。連續(xù)給藥4周后，與模型組相比黃芩素提取物各劑量組大鼠能明顯降低高脂血癥性脂肪肝大鼠肝組織中TC、TG、MDA含量(P<0.01)，明顯升高SOD活性(P<0.01)。陽性對照藥力平之也能夠明顯降低肝組織中TC、TG含量(P<0.01)，但對SOD、MDA無明顯影響(見表5)。表5黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝組織中TC、TG、SOD、MDA的影響(;±s，n=10)組別劑量TCSODMDAC呢*k(啤*g_1wettissue)(mg-g_1wettissue)(U，mg、rot)(nmol呢—irot)g1)正常對照組一7.27土1.8114.98±4.08126.59±8.562,78±0,17模型組—14.33±2.79##29.71土8.31抑93.92±6.85##3.50±0.10##力平之組208.48±1.75**20.69±1.68**91.43±9.702.80±0.43黃萃素提取物小劑量組大劑量組258.83±1.06**18.16±4.79**141.22±14.94**2.16±0.18**509.49±0.40林18.82±6.57**138.62±15.47**2.22±0.15**9#P<0.05，##P<0.01與正常對照組比較，*P<0.05，**P<0.01與模型組比較5)黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝臟的病理組織學(xué)觀察大鼠肝臟組織石蠟切片并進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察其病理組織學(xué)變化，結(jié)果表明正常對照組大鼠肝細(xì)胞排列成索狀，結(jié)構(gòu)正常(如圖l)，大鼠肝臟無出現(xiàn)脂質(zhì)聚集和脂質(zhì)空泡。模型組大鼠肝組織可見彌漫性的脂質(zhì)空泡，并有融合現(xiàn)象(圖2)，出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)聚集；黃芩素提取物各劑量組大鼠給藥四周后，肝細(xì)胞脂質(zhì)變性的程度明顯減輕，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)趨于正常(圖45)，脂質(zhì)聚集和脂質(zhì)空泡均呈現(xiàn)出不同程度減輕(表6)。陽性對照藥力平之對大鼠肝臟的病理組織學(xué)變化基本上與黃芩素提取物小劑量作用相似(圖3)。表6黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝臟的病理組織學(xué)觀察黃萃素提取物力平之脂質(zhì)變性程度正常對照組模型組-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>0322266771211000<0.01<0.01<0.01<0.016)黃芩素提取物對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝臟的超微結(jié)構(gòu)觀察電子顯微鏡下正常對照組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常(圖6)，而高脂血癥性脂肪肝模型組大鼠肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)明顯改變，出現(xiàn)空泡變性、線粒體腫脹和染色質(zhì)邊聚等(圖7)。黃芩素提取物大、小劑量能明顯改善肝細(xì)胞的線粒體腫脹、空泡變性和染色質(zhì)邊聚(圖9-10)，陽性對照藥力平之組大鼠的肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)也得到明顯改善(圖8)。經(jīng)以上的藥效學(xué)試驗(yàn)可知，給藥4周后，黃芩素提取物可明顯降低高脂血癥性脂肪肝大鼠肝重和肝系數(shù)。光鏡和電鏡結(jié)果顯示，給與黃芩素提取物防治4周后，高脂血癥性脂肪肝大鼠肝細(xì)胞脂肪變性程度和超微結(jié)構(gòu)改變明顯減輕。給與黃芩素提取物4周后，高脂血癥性脂肪肝大鼠血清TC、TG、LDL-C、FFA降低或明顯降低，并且肝組織中的TC和TG也明顯降低。這些結(jié)果表明，黃芩素提取物通過降低血脂以及肝臟脂質(zhì)的含量可能對高脂血癥性脂肪肝大鼠具有一定的防治作用。給與黃芩素提取物防治4周后，高脂血癥性脂肪肝大鼠血清ALT、AST水平降低或明顯降低。此結(jié)果表明，黃芩素提取物不僅對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝臟沒有毒性作用反而具有一定的保肝作用。給與黃芩素提取物防治4周后，高脂血癥性脂肪肝大鼠肝臟中SOD含量明顯升高，MDA水平明顯降低，表明黃芩素提取物可能通過抗氧化作用對高脂血癥性脂肪肝大鼠肝臟具有一定的保護(hù)作用。上述實(shí)例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。10000權(quán)利要求一種黃芩素提取物在制備防治高脂血癥性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述黃芩素提取物中黃芩素含量^50%，所述黃芩素提取物還包括藥學(xué)上可接受的載體。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述黃芩素提取物的劑型選自片劑、口腔崩解片、注射劑、凍干粉針劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑、丸劑或口服液。全文摘要本發(fā)明公開了一種黃芩素提取物在制備防治高脂血癥性脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。該黃芩素提取物在藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中證實(shí)具有防止高脂血癥性脂肪肝的作用，具體體現(xiàn)為降低大鼠肝重和肝系數(shù)、降低血脂及肝臟脂質(zhì)的含量。文檔編號A61K36/539GK101732411SQ20091018687公開日2010年6月16日申請日期2009年12月30日優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日發(fā)明者彭蕾,蔣小崗,郭次儀,顧振綸申請人:蘇州中藥研究所