專利名稱：酪氨酸衍生物類組蛋白去乙?；敢种苿┘捌鋺?yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類酪氨酸衍生物類組蛋白去乙酰化酶抑制劑及其制備方法和用途，屬于化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
組蛋白去乙?；?HDACs)是一類功能復(fù)雜的水解酶。在細胞核中，由DNA鏈纏繞著的組蛋白八聚體構(gòu)成的核小體是構(gòu)成染色體的結(jié)構(gòu)單元，組蛋白去乙酰化酶(HDACs)能將組蛋白中的賴氨酸殘基末端氨基上的乙?；獾?如反應(yīng)式II)，從而導(dǎo)致組蛋白的正電荷密度增高，繼而引起組蛋白與負電性的DNA的親和力增強，基因轉(zhuǎn)錄被抑制，(參見Christian，A.H.，et al.Curr.Opin.Chem.Biol.，1997，1，300；Kouzarides，T.，Curr.Opin.Genet.Dev.，1999，9，40)；Wolffe，A.P.Sci.Washington，1996，272，371。此外，核小體組蛋白的去乙?；€與染色質(zhì)組裝，DNA修復(fù)與重組密切相關(guān)，(參見Polo，S.E.，et al.Cancer Lett.，2005，220，1；Vidanes，G.M.，etal.Cell，2005，121，973)。近來，越來越多的非組蛋白被證實為HDACs的底物，如轉(zhuǎn)錄因子，細胞骨架蛋白，分子伴侶等，(參見Glozak，M.A.，et al.Gene，2005，363，15)。正是由于HDACs具有如此復(fù)雜的功能，它的表達和活性失調(diào)與許多疾病密切相關(guān)，包括癌癥，神經(jīng)變性疾病，病毒感染，炎癥，白血病，瘧疾和糖尿病等，其中，癌癥無疑是對人類生命健康威脅最為嚴(yán)重的疾病。研究表明，HDACs與腫瘤細胞發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如抑制腫瘤細胞分化和凋亡，促進腫瘤細胞增殖，遷移和血管生成，增強腫瘤細胞對化療藥物的抵抗力等，(參見Witt，O.，et al.Cancer Letter.，2009，277，8)。

反應(yīng)式II 目前在人體中發(fā)現(xiàn)了HDACs家族有18個成員，根據(jù)其結(jié)構(gòu)，功能和分布的不同可分為四類。其中，I類(HDAC1，2，3和8)，II類(IIaHDAC4，5，7和9；IIbHDAC6，10)，IV類(HDAC11)屬于鋅離子依賴性水解酶，而III類HDACs(SIRT 1-7)是NAD+依賴性的。研究表明，與腫瘤密切相關(guān)的主要是鋅離子依賴性HDACs，HDAC抑制劑(HDACs Inhibitors，HDACi)能有效抑制癌細胞增殖，促進細胞凋亡。而且，HDACi具有抗瘤譜廣，毒副作用低的優(yōu)點，它們對實體瘤，白血病，淋巴瘤都具有很好的抑制活性。因此，針對HDACs為靶點設(shè)計抑制劑已成為抗腫瘤藥物研究的熱點。
目前報道的HDACi藥效團大都包括如下三個部分鋅離子螯合基團(ZBG)，疏水性的長鏈(Linker)和蛋白表面識別區(qū)(Surface Recognition Domain)。鋅離子螯合基團可以螯合HDACs活性中心的鋅離子，從而抑制酶的活性。目前已知的活性最強，應(yīng)用最廣的鋅離子螯合基團是異羥肟酸基團，因此，本發(fā)明也采用異羥肟酸基團為鋅離子螯合基團。(S)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸，簡稱(S)-Tic，是一種非蛋白α-氨基酸。(S)-Tic所具有的特殊的分子幾何構(gòu)象和特定的生物活性已受到人們的極大關(guān)注，它已經(jīng)作為關(guān)鍵的手性原料被用作合成多種酶的肽類和類肽類抑制劑，如血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑(參見Hayashi，K.，et al.Chem.Pharm.Bull.，1985，33，2011.)，基質(zhì)金屬蛋白酶-8(MMP-8)抑制劑(參見Matter，H.，etal.Bioorg.Med.Chem.，2002，10，3529.)，法尼基轉(zhuǎn)移酶(FTase)抑制劑(參見Kotha，S.，et al.Eur.J.Org.Chem.，2001，17，3375)，脯氨酰內(nèi)肽酶(PEPs)抑制劑(參見Vendeville，S.，et al.Bioorg.Med.Chem.，2002，10，1719)，以及阿片類受體(Opioid Receptor)選擇性激動劑和拮抗劑等(參見Balboni，G.，et al.J.Med.Chem.，2002，45，5556和Balboni，G.，et al.J.Med.Chem.，2002，45，713.)。然而，(S)-Tic用于HDACi的設(shè)計尚未有人報道，因此，本發(fā)明用光學(xué)純的3，5-二碘-L-酪氨酸為原料構(gòu)建(S)-Tic結(jié)構(gòu)片段，并將其用于HDACi的設(shè)計與合成。此外，考慮到化合物的柔性，我們也用酪氨酸骨架代替(S)-Tic骨架設(shè)計合成HDACi。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種酪氨酸衍生物類組蛋白去乙酰化酶抑制劑及其制備方法和用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下 具有通式I的化合物，以及其光學(xué)異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和消旋體混合物，其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑合物或前藥，
其中， R1是芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基或環(huán)烷基，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基； R2是氫，各種氨基酸制備的?；减；?，雜芳?；?，芳基C1-6烷酰基，雜芳基C1-9烷酰基，C1-6烷?；?，環(huán)烷酰基，芳磺酰基，雜磺?；?，芳基C1-6烷磺?；螂s芳基C1-9烷磺酰基，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，羧基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基或芳基C1-8烷氧羰基，芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基； R3是異羥肟酸基，羧基，甲氧羰基，酰胺基或酰肼基； n是1或2； m是0或1； *是立體構(gòu)型為S或R光學(xué)純度或其消旋體。
優(yōu)選的，上述化合物(I)是下列之一 (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7a)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-芐基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7b)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-苯乙基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹(7c)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲氧基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7d)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7e)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-鄰甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7f)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7g)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對氟苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7h)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間氯苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7i)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(2，4-二甲基苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7j)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(3-氯-4-氟苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7k)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-萘基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7l)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-聯(lián)苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7m)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-戊基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7n)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-己基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7o)； (S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-叔丁基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7p)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8a)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-芐基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8b)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-苯乙基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8c)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲氧基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8d)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8e)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-鄰甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8f)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8g)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對氟苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8h)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間氯苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8i)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(2，4-二甲基苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8j)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(3-氯-4-氟苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8k)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-萘基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8l)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-聯(lián)苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8m)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-戊基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8n)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-己基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8o)； (S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-叔丁基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8p)； (S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13a)； (S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(芐胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13b)； (S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(對甲氧基苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13c)或 (S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(戊胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13d)。
制備上述通式(I)的類肽化合物中間體為(S)-7-羥基-6，8-二碘-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸鹽酸鹽，(S)-2-叔丁氧羰-7-羥基-6，8-二碘-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸，(S)-2-叔丁氧羰-7-羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸或(S)-N-芐氧羰基-酪氨酸。
本發(fā)明還提供了這些化合物在預(yù)防或治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常表達相關(guān)的哺乳動物疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的與組蛋白去乙酰化酶活性異常表達的相關(guān)哺乳動物疾病包括癌癥，神經(jīng)變性疾病，病毒感染，炎癥，白血病，瘧疾和糖尿病等。因此，本發(fā)明還涉及含有(I)結(jié)構(gòu)化合物的藥物組合物。
此外，本發(fā)明還包括一種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物，包含上述通式(I)的任一化合物，和藥學(xué)上可接受載體，任選包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
此外，本發(fā)明還包括一種適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物，包含上述通式(I)的任一化合物，和藥學(xué)上可接受載體，任選包含一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
發(fā)明詳述 所用的定義和術(shù)語 本文中所用的術(shù)語和定義含義如下 “芳基”是指芳族碳環(huán)基團。優(yōu)選的芳環(huán)含有6-10個碳原子。
“雜芳基”是芳族雜環(huán)，可以是單環(huán)或雙環(huán)基團。較佳的雜芳基包括，例如噻吩基，呋喃基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噻唑基、嘧啶基、喹啉基、以及四氮唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、吲哚基等。
“雜烷基”指飽和或不飽和、含碳原子和至少一個雜原子的鏈，其中任意一個雜原子不相鄰。雜烷基中含有2-15個原子(碳原子)，優(yōu)選含有2-10個原子。雜烷基可以是直連或支鏈、取代或未取代的。
“環(huán)烷基”是取代或未取代的，飽和或不飽和的環(huán)狀基團，其含有碳原子和/或一個或多個雜原子。該環(huán)可以是單環(huán)或稠環(huán)，橋環(huán)或螺環(huán)的環(huán)系。單環(huán)通常有3-9個原子，優(yōu)選有4-7個原子，多環(huán)含有7-17個原子，優(yōu)選含有7-13個原子。
“鹵”，或“鹵素”包括氟、氯、溴或碘，優(yōu)選氟和氯。
“各種氨基酸制備的?；笔侵笇⒏鞣N氨基酸的羧基經(jīng)?；蟮玫降幕鶊F，優(yōu)選疏水性氨基酸，如甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸。
“芳酰基”是指芳香族碳環(huán)末端連有羰基的基團，優(yōu)選的芳環(huán)含有6-10個碳原子。
“雜芳酰基”指芳族雜環(huán)末端連有羰基的基團，可以是單環(huán)或雙環(huán)基團。較佳的雜芳基包括噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡啶基，吡嗪基，噻唑基，嘧啶基，喹啉基以及四氮唑基，苯并噻唑基，苯并呋喃基，吲哚基等。
“環(huán)烷?；敝溉〈驗槿〈?，飽和或不飽和的環(huán)狀末端連有羰基的基團，其含有碳原子和/或一個或多個雜原子。該環(huán)可以是單環(huán)或稠環(huán)，橋環(huán)或螺環(huán)的環(huán)系。單環(huán)通常有3-9個原子，優(yōu)選有4-7個原子，多環(huán)含有7-17個原子，優(yōu)選含有7-13個原子。
“藥學(xué)上可接受的鹽”是指式(I)化合物具有療效且無毒的鹽形式。其可由任一酸性基團(如羧基)形成陰離子鹽，或由任一堿性基團(如氨基)形成陽離子鹽。本領(lǐng)域已知許多這樣的鹽。在任何酸性基團(如羧基)上形成的陽離子鹽，或是在任何堿性基團(如氨基)上形成的陰離子鹽。這些鹽有許多是本領(lǐng)域已知的，如陽離子鹽包括堿金屬(如鈉和鉀)和堿土金屬(如鎂和鈣)的鹽以及有機鹽(如銨鹽)。還可通過使用相應(yīng)的酸處理堿性形式的(I)方便地獲得陰離子鹽，這樣的酸包括無機酸如硫酸、硝酸、磷酸等；或有機酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、2-羥基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、2-羥基-1，2，3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、環(huán)己基亞磺酸、2-羥基苯甲酸、4-氨基-2-羥基苯甲酸等。這些鹽是熟練技術(shù)人員熟知的，熟練的技術(shù)人員可制備本領(lǐng)域知識所提供的任何鹽。此外，熟練技術(shù)人員可根據(jù)溶解度、穩(wěn)定性、容易制劑等因素取某種鹽而舍另一種鹽。這些鹽的測定和最優(yōu)化在熟練技術(shù)人員的經(jīng)驗范圍內(nèi)。
“溶劑合物”是溶質(zhì)(如金屬蛋白酶抑制劑)和溶劑(如水)組合形成的配合物。參見J.Honig等，The Van Nostrand Chemist’s Dictionary，p.650(1953)。本發(fā)明采用的藥學(xué)上可接受的溶劑包括不干擾金屬蛋白酶抑制劑的生物活性的那些溶劑(例如水、乙醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜以及該領(lǐng)域技術(shù)人員所知的或容易確定的溶劑)。
本文所用的“光學(xué)異構(gòu)體”、“對映體”、“非對映體”、“消旋體”等定義了本發(fā)明化合物或其生理上的衍生物所有可能的立體異構(gòu)體的形式。除非另有指示，本發(fā)明化合物的化學(xué)命名包括所有可能的立體化學(xué)形式的混合物，所屬混合物包含基本結(jié)構(gòu)分子的所有非對映體和對映體，以及基本純凈的本發(fā)明化合物的單個異構(gòu)體形式，即其中含有低于10％，優(yōu)選低于5％，特別是低于2％，最優(yōu)選低于1％的其它異構(gòu)體。本發(fā)明類肽化合物各種立體異構(gòu)體形式均明顯包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
式(I)化合物還可以其它被保護的形式或衍生物的形式存在，這些形式對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，均應(yīng)該包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
如上所述的取代基自身還可被一個或多個取代基取代。這樣的取代基包括在C.Hansch和A.Leo，Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistry and Biology(1979)中列出的那些取代基。優(yōu)選的取代基包括，例如烷基，烯基，烷氧基，羥基，氧基，硝基，氨基，氨基烷基(如氨甲基等)，氰基，鹵，羧基，羰基烷氧基(如羰基乙氧基等)，硫基，芳基，環(huán)烷基，雜芳基，雜環(huán)烷基(如哌啶基，嗎啉基，吡咯基等)，亞氨基，羥烷基，芳基氧基，芳基烷基，及其結(jié)合。
所述化合物的制備方法，反應(yīng)步驟及反應(yīng)式如下 制備方法包括如下步驟 合成路線1以光學(xué)純的3，5-二碘-L-酪氨酸為原料，相繼經(jīng)Pictet-Spengler環(huán)合，保護仲胺基，氫化還原脫碘，多肽縮合連接R1基團，與溴乙酸甲酯親核反應(yīng)，最后做成羥肟酸并脫掉Boc保護基得到終產(chǎn)物。反應(yīng)式如下 合成路線1
其中，R1是芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基，環(huán)烷基，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基。
上述合成路線1反應(yīng)式中的試劑(a)多聚甲醛，37％鹽酸，乙二醇二甲醚，72-75℃，反應(yīng)18小時；(b)碳酸二叔丁酯，1mol/L氫氧化鈉溶液，四氫呋喃；(c)10％鈀碳，氫氣，甲醇；(d)各種胺類，二環(huán)己基碳二亞胺，1-羥基苯并三氮唑，無水四氫呋喃；(e)溴乙酸甲酯，碳酸鉀，無水N，N-二甲基甲酰胺；(f)羥胺鉀，無水甲醇；(g)氯化氫飽和的乙酸乙酯溶液。
合成路線1的目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示



合成路線2以L-酪氨酸為原料，經(jīng)保護胺基，多肽縮合連接R1基團，與溴乙酸甲酯親核反應(yīng)，最后做成羥肟酸。反應(yīng)式如下 合成路線2
其中，R1是芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基，環(huán)烷基，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基。
上述合成路線2反應(yīng)式中的試劑(h)氯甲酸芐酯，1mol/L氫氧化鈉溶液；(i)各種胺類，二環(huán)己基碳二亞胺，1-羥基苯并三氮唑，無水四氫呋喃；；(j)溴乙酸甲酯，碳酸鉀，無水N，N-二甲基甲酰胺；(k)羥胺鉀，無水甲醇。
合成路線2的目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)式如下所示

所述化合物的具體操作步驟在實施例中將加以詳細說明。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對上述步驟進行變動以提高收率，他們可據(jù)本領(lǐng)域的基本知識確定合成的路線，如選擇反應(yīng)物，溶劑和溫度，可以通過使用各種常規(guī)保護基以避免副反應(yīng)的發(fā)生從而提高收率。這些常規(guī)的保護方法可參見例如T.Greene，Protecting Groups in OrganicSynthesis. 顯然，上述路線為立體選擇性合成，通過上述路線還可制備得到其光學(xué)活性的類肽化合物。例如將原料3，5-二碘-L-酪氨酸或L-酪氨酸替換為其光學(xué)異構(gòu)體(D構(gòu)型)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可方便地獲得各種其他異構(gòu)體，并可通過常規(guī)分離手段純化，如手性鹽或手性層析柱等。
由于鋅離子依賴性組蛋白去乙?；?HDACs)各亞型催化中心的高度同源性，我們選擇目前已知X-衍射晶體結(jié)構(gòu)的組蛋白去乙?；?亞型(HDAC8)來進行酶活性測試。HDACs活性熒光分析方法(兩步法)，能快速、方便檢測HDACs活性，操作簡單，靈敏度高。第一步，含一個乙?；瘋?cè)鏈的賴氨酸HDACs熒光底物(Boc-Lys(acetyl)-AMC)，用含表達的HDAC8樣本孵育，使底物脫去乙?；せ畹孜?。第二步，用胰酶水解Boc-Lys-AMC，產(chǎn)生AMC這一熒光基團(即發(fā)色團)，在發(fā)射波長/激發(fā)波長(390nm/460nm)測定熒光強度，從而根據(jù)抑制劑組及對照組的熒光強度計算抑制率，并求算IC50值。酶活性測試原理見反應(yīng)式III。
化合物的細胞活性的測試使用噻唑蘭檢測方法(MTT法)，人結(jié)腸癌細胞株(HCT116)，人卵巢癌細胞株(SKOV3)，人急性白血病細胞株(HL60)的細胞懸液分別接種于96孔板，每孔中加入含不同濃度化合物的培養(yǎng)基，經(jīng)孵育后，用MTT染色，繼續(xù)孵育后，于酶標(biāo)儀上在570nm處測定每孔的吸光度(OD值)，計算出細胞生長抑制率，從而確定化合物的活性。
通式(I)的類肽化合物的體外抑酶試驗證明該類化合物為一種酪氨酸衍生物類組蛋白去乙?；敢种苿?。
本發(fā)明的酪氨酸衍生物在空間上與組蛋白去乙?；傅幕钚晕稽c相匹配，因此在體外顯示了較高的抑制活性。

反應(yīng)式III 反應(yīng)式III中Histone deacetylase為組蛋白去乙?；?，Trypsin為胰蛋白酶，4-amino-7-methylcoumarin為4-氨基-7-甲基香豆素。
含有本發(fā)明化合物的藥物組合物 本發(fā)明的部分衍生物可以游離形式或以鹽形式存在。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知許多化合物類型的藥學(xué)上可接受的鹽及其制備方法。藥學(xué)上可接受的鹽包括常規(guī)的無毒性的鹽，包括這樣的化合物堿與無機或有機酸形成的季銨鹽。
本發(fā)明的化合物可形成水合物或溶劑合物。本領(lǐng)域熟練人員已知將化合物與水一起凍干時所形成的水合物或在溶液中與合適的有機溶劑濃縮時形成溶劑合物的方法。
本發(fā)明包含含有治療量本發(fā)明化合物的藥物，和一種或多種藥學(xué)上可接受載體和/或賦形劑的藥物組合物。載體包括如鹽水，緩沖鹽水，葡萄糖，水，甘油，乙醇和它們的結(jié)合物，下文更詳細地論述。如果需要，該組合物還可以包含較小量的潤濕劑或乳化劑，或pH緩沖劑。該組合物可以是液體，懸浮液，乳劑，片劑，丸劑，膠囊，持續(xù)釋放制劑或粉末。該組合物可以用傳統(tǒng)的黏合劑和載體如三酸甘油酯配制成栓劑。口服制劑可以包括標(biāo)準(zhǔn)載體如藥物品級的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸鎂，糖精鈉，纖維素和碳酸鎂等等。視需要制劑而定，配制可以設(shè)計混合，制粒和壓縮或溶解成分。在另一個途徑中，該組合物可以配制成納米顆粒。
使用的藥物載體可以為固體或者液體。
典型的固體載體包括乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，凝膠，瓊脂，果膠，阿拉伯膠，硬脂酸鎂，硬脂酸等等。固體載體可以包括一種或多種可能同時作為增香劑，潤滑劑，增溶劑，懸浮劑，填料，助流劑，壓縮助劑，粘合劑或片劑-崩解劑的物質(zhì)；它還可以是包封材料。在粉末中，載體為精細粉碎的固體，它與精細粉碎的活性成分的混合。在片劑中活性成分與具有必要的壓縮性質(zhì)的載體以合適的比例混合，以需要的形狀和大小壓縮。粉末和片劑優(yōu)選包含至多99％活性成分。合適的固體載體包括，例如，磷酸鈣，硬脂酸鎂，滑石，糖，乳糖，糊精，淀粉，凝膠，纖維素，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉鹽，聚乙烯吡咯烷酮烷酮，低熔點蠟和離子交換樹脂。
典型的液體載體包括糖漿，花生油，橄欖油，水等等。液體載體用于制備溶液，懸浮液，乳劑，糖漿，酊劑和密封的組合物?；钚猿煞挚梢匀芙饣驊腋∮谒帉W(xué)上可接受的液體載體如水，有機溶劑，二者的混合物或藥學(xué)上可接受的油類或脂肪。液體載體可以包含其他合適的藥物添加劑如增溶劑，乳化劑，緩沖劑，防腐劑，增甜劑，增香劑，懸浮劑，增稠劑，顏料，粘度調(diào)節(jié)劑，穩(wěn)定形或滲透壓-調(diào)節(jié)劑。用于口服和腸胃外給藥的液體載體的合適的例子包括水(部分地包含如同上述的添加劑，例如纖維素衍生物，優(yōu)選羧甲基纖維素鈉鹽溶液)，醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)和它們的衍生物，和油類(例如分餾椰子油和花生油)。用于腸胃外給藥的載體還可以為油脂如油酸乙酯和異丙基肉豆蔻酸鹽。無菌的液體載體用于腸胃外給藥的無菌的液態(tài)組合物。用于加壓組合物的液體載體可以為鹵代烴或其他藥學(xué)上可接受的推進劑。無菌溶液或懸浮溶液液體藥物組合物可以用來，例如，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)或皮下注射。注射時可單次推入或逐漸注入，入30分鐘的經(jīng)脈內(nèi)灌注。該化合物還可以以液體或者固體組合物的形式口服給藥。
載體或賦形劑可以包括本領(lǐng)域已知的時間延遲材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，還可包括蠟，乙基纖維素，羥丙基甲基纖維素，異丁烯酸甲酯等等。當(dāng)制劑用于口服時，公認PHOSALPG-50(磷脂(phospholipid)與1，2-丙二醇濃縮，A.Nattermann&Cie.GmbH)中的0.01％吐溫80用于其他化合物的可接受的口服制劑的配制，可以適應(yīng)于本發(fā)明各種化合物的配制。
給予本發(fā)明化合物時可以使用各式各樣的藥物形式。如果使用固體載體，制劑可以為片劑，被放入硬膠囊中的粉末或小藥丸形式或錠劑或糖錠形式。固體載體的量在很大程度上變化，但是優(yōu)選從約25mg到約1.0g。如果使用液體載體，制劑可以為糖漿，乳劑，軟膠囊，在安瓿或小瓶或非水的液體懸浮液中的無菌注射溶液或懸浮液。
為了獲得穩(wěn)定的水溶性的劑型，可以將化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽溶于有機或無機酸的水溶液，0.3M琥珀酸或檸檬酸溶液。選擇性地，酸性的衍生物可以溶于合適的堿性溶液。如果得不到可溶形式，可將化合物溶于合適的共溶劑或它們的結(jié)合。這樣的合適的共溶劑的例子包括，但是不局限于，濃度范圍從0-60％總體積的乙醇，丙二醇，聚乙二醇300，聚山梨酸酯80，甘油，聚氧乙烯脂肪酸酯，脂肪醇或甘油羥脂肪酸酯等等。
各種釋放系統(tǒng)是已知的并且可以用于化合物或其他各種制劑的給藥，這些制劑包括片劑，膠囊，可注射的溶液，脂質(zhì)體中的膠囊，微粒，微膠囊，等等。引入的方法包括但是不局限于皮膚的，皮內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)的，靜脈內(nèi)的，皮下的，鼻腔內(nèi)的，肺的，硬膜外的，眼睛的和(通常優(yōu)選的)口服途徑?；衔锟梢酝ㄟ^任何方便的或者其它適當(dāng)?shù)耐緩浇o藥，例如通過注入或快速濃注，通過上皮的或粘膜線路(例如，口腔粘膜，直腸和腸粘膜，等等)吸收或通過負載藥物的支架以及可以于其他生物活性劑一起給藥?？梢匀砘蚓植拷o藥。用于鼻，支氣管或肺疾病的治療或預(yù)防時，優(yōu)選的給藥途徑為口服，鼻給藥或支氣管煙霧劑或噴霧器。
本發(fā)明中的化合物13a，7d，8l，7i，7a對組蛋白去乙酰化酶8亞型(HDAC8)的抑制活性優(yōu)于陽性對照藥，具有良好的開發(fā)前景，并可作為發(fā)現(xiàn)新型高效組蛋白去乙酰化酶抑制劑的先導(dǎo)化合物。此外，化合物7d，7i和8l在體外抗腫瘤細胞增殖的試驗中顯示出優(yōu)于陽性對照Vorinostat(SAHA)的活性，具有良好的開發(fā)前景。



圖1為化合物(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲氧基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7d)與組蛋白去乙?；?亞型的活性區(qū)域的對接結(jié)果通過Sybyl7.3以三維顯示示意圖。

具體實施例方式 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明，但不限于此。
實施例1.本發(fā)明化合物的合成 以(7a)，(8a)和(13a)為例 1)(S)-7-羥基-6，8-二碘-1，2，3，4-四氫異喹啉3-羧酸鹽酸鹽2 向250mL濃鹽酸中加入3，5-二碘-L-酪氨酸(1，30.0g，69.3mmol)，乙二醇二甲醚(20mL)和多聚甲醛(7.8g，260.0mmol)，并逐漸升溫至72℃。0.5小時后，再加入濃鹽酸(50mL)，乙二醇二甲醚(10mL)和多聚甲醛(5.2g，173.3mmol)，油浴控溫在72-75℃繼續(xù)反應(yīng)18小時。反應(yīng)混懸液冰浴冷卻并過濾，濾餅用乙二醇二甲醚充分洗滌，干燥后得19.41g白色粉末2。產(chǎn)率58.17％，ESI-MS m/z446.2[M+H+]，1H-NMR(DMSO-d6)δ3.07(dd，J＝16.8Hz，10.8Hz，1H)，3.22(dd，J＝16.8Hz，4.8Hz，1H)，4.02(d，J＝16.2Hz，1H)，4.15(d，J＝16.2Hz，1H)，4.32(dd，J＝4.8Hz，10.8Hz，1H)，7.73(s，1H)，9.68(s，1H)，10.00(brs，2H)，14.17(brs，1H)。
2)(S)-2-叔丁氧羰基-7-羥基-6，8-二碘-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸3 化合物2(4.81g，10.0mmol)溶于22mL1mol/L的氫氧化鈉溶液中，并加入5mL碳酸二叔丁酯(2.40g，11.0mmol)的四氫呋喃溶液。反應(yīng)過程中用1mol/L的氫氧化鈉溶液控制反應(yīng)液pH在9-11。室溫反應(yīng)6小時后，蒸除反應(yīng)液中的四氫呋喃，再用石油醚將反應(yīng)液萃取3次，并用1mol/L的檸檬酸溶液酸化至pH4-5，然后用乙酸乙酯萃取三次，有機相合并后用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，蒸干溶劑得4.99g淺黃色粉末3。產(chǎn)率91.56％，1H-NMR(DMSO-d6)δ1.34+1.40(s，9H，cis/trans)，2.87-3.00(m，2H)，4.13-4.41(m，2H)，4.61-4.75(m，1H)，7.57(s，1H)，9.41(br s，1H)，12.71(br s，1H)。
3)(S)-2-叔丁氧羰基-7-羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸4 化合物3(2.73g，5.0mmol)溶于30mL無水甲醇中，并向其中加入三乙胺(1.11g，11.0mmol)和10％鈀碳(0.23g)。通入氫氣反應(yīng)5小時后，用硅藻土濾除催化劑，蒸除甲醇，加入1mol/L的檸檬酸溶液至pH4-5，然后用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯層后用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，蒸干溶劑得1.10g淺黃色粉末4。產(chǎn)率75.32％，1H-NMR(DMSO-d6)δ1.39+1.45(s，9H，cis/trans)，2.92-3.04(m，2H)，4.26-4.51(m，2H)，4.57-4.82(m，1H)，6.52(s，1H)，6.57(d，J＝8.4Hz，1H)，6.97(d，J＝8.4Hz，1H)，9.28(s，1H)，12.60(s，1H)。
4)(S)-2-叔丁氧羰基-7-羥基-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉5a 化合物4(2.93g，10.0mmol)和1-羥基苯并三氮唑(1.49g，11.0mmol)溶于40mL無水四氫呋喃中，冰浴條件下滴加二環(huán)己基碳二亞胺(2.27g，11.0mmol)的四氫呋喃溶液。30分鐘后，加入苯胺(1.02g，11.0mmol)繼續(xù)室溫反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后，蒸除四氫呋喃，加入乙酸乙酯，放入冰箱中冷凍過夜使二環(huán)己基脲(DCU)充分析出，濾除二環(huán)己基脲(DCU)，濾液依次用飽和碳酸鈉溶液，1mol/L的鹽酸溶液和飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥后蒸除溶劑得到2.55g黃色粉末5a。產(chǎn)率69.29％，ESI-MS m/z369.5[M+H+]，1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30+1.45(s，9H，cis/trans)，2.85-3.11(m，2H)，4.27-4.52(m，2H)，4.55-4.74(m，1H)，6.57-6.64(m，2H)，6.96-7.04(m，2H)，7.25-7.30(m，2H)，7.49-7.56(m，2H)，9.29(s，1H)，9.96(s，1H)。
5)(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(甲氧基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉6a。
向化合物5a(2.55g，6.93mmol)的40mLN，N-二甲基甲酰胺溶液中加入碳酸鉀粉末(1.91g，13.86mmol)和溴乙酸甲酯(2.12g，13.86mmol)，室溫攪拌反應(yīng)3小時后將反應(yīng)液傾入300mL水中，有大量沉淀析出，用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯層后用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，蒸干溶劑得產(chǎn)物粗品，該粗品用硅膠柱分離(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)得1.16g無色油狀物6a。產(chǎn)率38.10％，ESI-MS m/z441.6[M+H+]，1H-NMR(DMSO-d6)δ1.33+1.47(s，9H，cis/trans)，2.93-3.16(m，2H)，3.70(s，3H)，4.34-4.58(m，2H)，4.62-4.88(m，1H)，4.78(s，2H)，6.72-6.90(m，2H)，7.02-7.16(m，2H)，7.26-7.31(m，2H)，7.49-7.56(m，2H)，10.00(s，1H)。
6)(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉7a 羥胺鉀(NH2OK)溶液的制備14mL氫氧化鉀的飽和無水甲醇溶液滴加到24mL含有4.67g(67mmol)鹽酸羥胺的無水甲醇溶液中，控制內(nèi)溫低于40℃，滴加完畢，冷卻反應(yīng)液，濾除白色氯化鉀沉淀，所得濾液密閉保存?zhèn)溆谩?br> 化合物6a(0.88g，2.0mmol)溶于10mL無水甲醇后，向其中加入3.5mL上述羥胺鉀(NH2OK)溶液。0.5小時后，蒸除甲醇，2mol/L的鹽酸溶液酸化至pH3-4，然后用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯層后用飽和食鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，蒸干溶劑得粗品，粗品經(jīng)乙酸乙酯/乙醇重結(jié)晶得0.23g白色粉末7a。產(chǎn)率26.05％，mp179-181℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30+1.46(s，9H，cis/trans)，2.89-3.19(m，2H)，4.34-4.65(m，2H)，4.44(s，2H)，4.57-4.80(m，1H)，6.70-6.88(m，2H)，7.01-7.17(m，2H)，7.24-7.32(m，2H)，7.49-7.56(m，2H)，8.97(s，1H)，10.01(s，1H)，10.81(s，1H)；HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C23H28N3O6[M+H]+442.1978，found 442.1980。
7)(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽8a 化合物7a(0.15g，0.34mmol)溶于5mL無水乙酸乙酯后，向其中加入10mL氯化氫飽和的乙酸乙酯溶液。反應(yīng)過程中逐漸有白色沉淀析出，8小時后將沉淀濾除，用乙醚充分洗滌，干燥后得0.12g白色粉末8a。產(chǎn)率91.35％，mp187-189℃；1H-NMR(DMSO-d6)δ2.98-3.37(m，2H)，4.28-4.30(m，2H)，4.32-4.37(m，1H)，4.45(s，2H)，6.89-6.92(m，2H)，7.12-7.23(m，2H)，7.36-7.41(m，2H)，7.65-7.67(m，2H)，9.00(br s，1H)，9.60(br s，1H)，9.81(br s，1H)，10.77(s，1H)，10.87(s，1H)；HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C18H20N3O4[M+H]+ 342.1454，found 342.1459。
8)(S)-N-芐氧羰基-酪氨酸10 將化合物2(1.81g，10.0mmol)溶于11mL1mol/L的氫氧化鈉溶液中，冰鹽浴條件下滴加氯甲酸芐酯(1.87，11.0mmol)。反應(yīng)過程中用1mol/L的氫氧化鈉溶液控制反應(yīng)液pH在9-11。室溫反應(yīng)2小時后，用石油醚將反應(yīng)液萃取3次，再用1mol/L的檸檬酸溶液酸化至pH4-5，然后用乙酸乙酯萃取三次，有機相合并后用飽和食鹽水洗滌，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，蒸干溶劑得2.95g棕色油狀物10。產(chǎn)率93.65％，ESI-MS m/z316.2[M+H+]。
9)(S)-芐基3-(4-羥基苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯11a 化合物11a的合成方法與5a的一致。所不同的是以(S)-N-芐氧羰基-酪氨酸(化合物10)為原料，所得產(chǎn)品(S)-芐基3-(4-羥基苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯11a，產(chǎn)率93.65％，ESI-MS m/z391.5[M+H+]。
10)(S)-芐基3-(4-(2-(甲氧基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯12a 化合物12a的合成方法與6a的一致。所不同的是以(S)-芐基3-(4-羥基苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(化合物11a)為原料，所得產(chǎn)品(S)-芐基3-(4-(2-(甲氧基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯12a，產(chǎn)率63.67％，1H-NMR(DMSO-d6)δ2.78(dd，J＝13.8Hz，10.8Hz，1H)，2.96(dd，J＝13.8Hz，4.8Hz，1H)，3.69(s，3H)，4.36(dd，J＝10.8Hz，4.8Hz，1H)，4.75(s，2H)，4.97(s，2H)，6.84-6.85(m，2H)，7.05-7.07(m，1H)，7.24-7.35(m，9H)，7.59-7.60(m，2H)，7.67-7.68(m，1H)，10.11(s，1H)。
11)(S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯13a 化合物13a的合成方法與7a的一致。所不同的是以(S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(化合物12a)為原料，所得產(chǎn)品(S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯13a，產(chǎn)率27.46％，1H-NMR(DMSO-d6)δ2.78(dd，J＝13.8Hz，10.8Hz，1H)，2.96(dd，J＝13.8Hz，4.8Hz，1H)，4.36(dd，J＝10.8Hz，4.8Hz，1H)，4.41(s，2H)，4.97(s，2H)，6.86-6.87(m，2H)，7.05-7.07(m，1H)，7.24-7.36(m，9H)，7.59-7.60(m，2H)，7.66-7.67(m，1H)，8.96(s，1H)，10.11(s，1H)，10.81(s，1H)；HRMS(AP-ESI)m/z calcd for C25H26N3O6[M+H]+464.4904，found 464.4910。
實施例2目標(biāo)化合物抑制組蛋白去乙酰化酶活性試驗(In vitro) 組蛋白去乙?；?HDACs)活性熒光分析方法主要分兩步第一步，含一個乙?；瘋?cè)鏈的賴氨酸HDACs熒光底物(Boc-Lys(acetyl)-AMC)，用含表達的組蛋白去乙?；?亞型(HDAC8)樣本孵育，使底物脫去乙?；?，激活底物。第二步，用胰酶水解Boc-Lys-AMC，產(chǎn)生AMC這一熒光基團(即發(fā)色團)，在發(fā)射波長/激發(fā)波長(390nm/460nm)測定熒光強度，從而根據(jù)抑制劑組及對照組的熒光強度計算抑制率，并求算IC50值。酶活性測試原理見本專利說明書部分相關(guān)內(nèi)容。實驗結(jié)果見表1。

表1.化合物(I)的體外抑酶試驗結(jié)果



a表中數(shù)值為三次試驗的平均值，“±”后的數(shù)值表示標(biāo)準(zhǔn)偏差。
SAHA商品名為Zolinza，通用名為Vorinostat，為美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)于2006年批準(zhǔn)上市的組蛋白去乙?；敢种苿?br> 上述測試結(jié)果表明，酪氨酸衍生物類化合物均表現(xiàn)出對組蛋白去乙?；?亞型(HDAC8)較強的抑制活性，其中化合物13a，7d，8l，7i，7a對組蛋白去乙酰化酶8亞型(HDAC8)的抑制活性優(yōu)于陽性對照藥Vorinostat(SAHA)，具有良好的開發(fā)前景，并可作為發(fā)現(xiàn)新型高效組蛋白去乙酰化酶抑制劑的先導(dǎo)化合物。
實施例3目標(biāo)化合物抑制細胞增殖的活性試驗(In vitro) 選取酶活性較好的化合物7d，7i，8l進行體外抑制癌細胞增殖的活性試驗，結(jié)果見表2。
術(shù)語說明 HCT116人結(jié)腸癌細胞株。
SKOV3人卵巢癌細胞株。
HL60人急性白血病細胞株。
SAHA商品名為Zolinza，通用名為Vorinostat，為美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)于2006年批準(zhǔn)上市的組蛋白去乙酰化酶抑制劑。
DMSO二甲基亞砜。
IC50半數(shù)抑制濃度。
1.[材料]HCT116，SKOV3，HL60細胞株，四甲基偶氮唑藍MTT，10％胎牛血清，96孔板 2.[方法] 細胞培養(yǎng)HCT116，SKOV3，HL60三種腫瘤細胞株都采用常規(guī)培養(yǎng)。實驗時均用對數(shù)生長期細胞。
細胞生長檢測(MTT法)HCT116，SKOV3，HL60細胞懸液均調(diào)整至1×105/ml，分別接種于96孔板(50μl/孔)，5000個細胞/孔。鋪板4h后，每孔中加入50ul含不同濃度化合物的培養(yǎng)基，使孔中化合物終濃度分別為1000、200、40、8、1.6、0.32ug/ml，每個濃度設(shè)三個復(fù)孔，不加細胞的孔讀數(shù)時作空白，加細胞不加化合物的孔作化合物空白孔，SAHA作化合物陽性對照。于37℃，5％二氧化碳中孵育48h，每孔加入10μl0.5％的MTT染色液，繼續(xù)孵育4h后，2500rpm，離心30min，然后拋棄板孔中培養(yǎng)基，加入二甲基亞砜，200ul/孔。酶標(biāo)儀上于570nm處測定每孔的吸光度OD值，細胞生長抑制率按下式計算
表2細胞增殖實驗結(jié)果 a表中數(shù)值為三次試驗的平均值，“±”后的數(shù)值表示標(biāo)準(zhǔn)偏差。
上表測試數(shù)據(jù)表明，化合物7d，7i和8l在體外抗腫瘤細胞增殖的試驗中顯示出優(yōu)于陽性對照SAHA的活性，具有良好的開發(fā)前景。
權(quán)利要求
1.具有通式I的化合物，以及其光學(xué)異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和消旋體混合物，其藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑合物或前藥，
其中，
R1是芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基或環(huán)烷基，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基；
R2是氫，各種氨基酸制備的?；?，芳酰基，雜芳?；?，芳基C1-6烷?；s芳基C1-9烷?；?，C1-6烷?；h(huán)烷?；蓟酋；?，雜磺?；蓟鵆1-6烷磺?；螂s芳基C1-9烷磺?；?，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，羧基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基或芳基C1-8烷氧羰基，芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基；
R3是異羥肟酸基，羧基，甲氧羰基，酰胺基或酰肼基；
n是1或2；
m是0或1；
*是立體構(gòu)型為S或R光學(xué)純度或其消旋體。
2.如權(quán)利要求1的化合物，其特征在于是下述化合物之一
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7a)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-芐基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7b)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-苯乙基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹(7c)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲氧基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7d)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7e)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-鄰甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7f)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7g)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對氟苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7h)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間氯苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7i)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(2，4-二甲基苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7j)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(3-氯-4-氟苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7k)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-萘基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7l)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-聯(lián)苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7m)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-戊基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7n)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-己基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7o)；
(S)-2-叔丁氧羰基-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-叔丁基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉(7p)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8a)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-芐基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8b)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-苯乙基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8c)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲氧基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8d)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8e)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-鄰甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8f)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間甲基苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8g)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-對氟苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8h)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-間氯苯基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8i)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(2，4-二甲基苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8j)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(3-氯-4-氟苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8k)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-萘基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8l)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-聯(lián)苯基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8m)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-戊基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8n)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-(1-己基)-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8o)；
(S)-7-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)-3-(N-叔丁基-酰胺基)-1，2，3，4-四氫異喹啉鹽酸鹽(8p)；
(S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-(苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13a)；
(S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-芐胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13b)；
(S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-對甲氧基苯胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13c)或
(S)-芐基3-(4-(2-(羥胺基)-2-羰基乙氧基)苯基)-1-氧-1-戊胺基)丙烷-2-基-氨基甲酸酯(13d)。
3.制備權(quán)利要求1所述化合物的中間體，其特征在于該中間體是(S)-7-羥基-6，8-二碘-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸鹽酸鹽，(S)-2-叔丁氧羰-7-羥基-6，8-二碘-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸，(S)-2-叔丁氧羰-7-羥基-1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸或(S)-N-芐氧羰基-酪氨酸。
4.權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟
合成路線1以光學(xué)純的3，5-二碘-L-酪氨酸為原料，相繼經(jīng)Pictet-Spengler環(huán)合，保護仲胺基，氫化還原脫碘，多肽縮合連接R1基團，與溴乙酸甲酯親核反應(yīng)，最后做成羥肟酸并脫掉Boc保護基得到終產(chǎn)物；反應(yīng)式如下
合成路線1
其中，R1是芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基，環(huán)烷基，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基；
上述合成路線1反應(yīng)式中的試劑(a)多聚甲醛，37％鹽酸，乙二醇二甲醚，72-75℃，反應(yīng)18小時；(b)碳酸二叔丁酯，1mol/L氫氧化鈉溶液，四氫呋喃；(c)10％鈀碳，氫氣，甲醇；(d)各種胺類，二環(huán)己基碳二亞胺，1-羥基苯并三氮唑，無水四氫呋喃；(e)溴乙酸甲酯，碳酸鉀，無水N，N-二甲基甲酰胺；(f)羥胺鉀，無水甲醇；(g)氯化氫飽和的乙酸乙酯溶液；
合成路線2以L-酪氨酸為原料，經(jīng)保護胺基，多肽縮合連接R1基團，與溴乙酸甲酯親核反應(yīng)，最后做成羥肟酸；反應(yīng)式如下
合成路線2
其中，R1是芳基，雜芳基，芳基C1-6烷基，雜芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，雜芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，雜芳基C2-6炔基，C1-6烷基，雜烷基，環(huán)烷基，任選被一個或多個如下基團取代羥基，鹵素，硝基，氰基，鹵C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基，芳基C1-8烷氧羰基；
上述合成路線2反應(yīng)式中的試劑(h)氯甲酸芐酯，1mol/L氫氧化鈉溶液；(i)各種胺類，二環(huán)己基碳二亞胺，1-羥基苯并三氮唑，無水四氫呋喃；；(j)溴乙酸甲酯，碳酸鉀，無水N，N-二甲基甲酰胺；(k)羥胺鉀，無水甲醇。
5.權(quán)利要求1或2所述的化合物在制備預(yù)防或治療與組蛋白去乙?；富钚援惓１磉_相關(guān)的哺乳動物疾病的藥物中的應(yīng)用；所述的與組蛋白去乙酰化酶活性異常表達的相關(guān)哺乳動物疾病包括癌癥，神經(jīng)變性疾病，病毒感染，炎癥，白血病，瘧疾和糖尿病。
6.一種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物，包含權(quán)利要求1或2的化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。
7.一種適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物，包含權(quán)利要求1或2的化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及酪氨酸衍生物類組蛋白去乙酰化酶抑制劑及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一類強效的組蛋白去乙?；敢种苿?，可有效治療組蛋白去乙酰化酶活性異常表達的疾病。具體而言，本發(fā)明涉及具有通式(I)結(jié)構(gòu)的化合物，還涉及其各種光學(xué)異構(gòu)體，藥學(xué)上可接受的鹽，溶劑合物以及前藥。本發(fā)明還涉及含有式(I)結(jié)構(gòu)化合物的藥物組合物及其制藥用途。
文檔編號A61P29/00GK101723896SQ20091001949
公開日2010年6月9日 申請日期2009年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月3日
發(fā)明者徐文方, 張穎杰, 方浩 申請人:山東大學(xué)