專利名稱：：作為通道活化蛋白酶抑制劑的化合物和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：概括而言，本發(fā)明涉及通道活化蛋白酶(CAP)抑制劑。
背景技術(shù)：
：前列腺蛋白酶是一種存在于多種哺乳動(dòng)物組織中的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶。它是在細(xì)胞的胞外膜表達(dá)的膜錨定蛋白酶，但是也可以分泌到體液如精液、尿液和氣道表面液體中。前列腺蛋白酶(PRSS8)與蛋白酶例如蛋白裂解酶(matriptase)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、PRSS22、TMPRSSll、組織蛋白酶A和嗜中性細(xì)胞彈性蛋白酶一起可以刺激阿米洛利敏感的上皮鈉通道(ENaC)的活性。抑制這些酶可以誘導(dǎo)上皮離子轉(zhuǎn)運(yùn)的改變，并且因而誘導(dǎo)穿過上皮細(xì)胞膜的液體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的改變。例如，認(rèn)為腎中的CAP抑制促進(jìn)利尿，而氣道中的CAP抑制促進(jìn)肺中粘液和痰的清除。因此，腎中的CAP抑制可以治療性地用于治療高血壓。氣道中的CAP抑制阻止了呼吸分泌物的滯留，否則會(huì)4吏患者易受次級(jí)細(xì)菌感染。發(fā)明公開本發(fā)明提供了化合物、藥物組合物以及應(yīng)用所述化合物調(diào)節(jié)通道活化蛋白酶(CAP)的方法。例如，本發(fā)明的化合物和組合物可以用于調(diào)節(jié)前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP腸2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A和嗜中性細(xì)胞彈性蛋白酶,一方面，本發(fā)明提供了式(l)化合物或其可藥用鹽其中(CR2)nB是R3—Y—H卜或(CR2)k-RS;Y是-SO廣、—NHCO—、-CO-或-O"C(-O)-，糾是當(dāng)R2是d-6烷基或苯基時(shí)，Y是S02;J是任選地纟皮取代的5-12元單環(huán)的或稠合的雜環(huán)，其包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O和S的雜原子；R1是H、任選地卣代的烷基、C2-6鏈烯基或C3-6炔基；M、OH、O(CRz),R6、S02R6、CONR(CR2),R6、CONR7R8或+NRR8，其中W和RS與NR7R8中的N—起形成任選地被取代的5-7元雜環(huán)，其經(jīng)由氮原子連接于(CR2)m上；或R'是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、芳基，或5-7元的雜環(huán)或不含氮原子的雜芳基；或十^=(^)，其中環(huán)P是任選地被取代的5-7元碳環(huán)；R2是C^烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基或-L"(CR2)p-R5，其中L是O、S、S(O)、S02或OC(0);R3是d-6烷基、Cw鏈烯基、C2.6炔基或-(CR2)廣R5;R4是H、d—6烷基、<:2-6鏈烯基、-CR=CR-R6、<:2_6炔基，或任選地被取代的5-12元碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基；或議4是+^=(5)，其中環(huán)E是任選地被取代的5-12元單環(huán)的或稠合的碳環(huán)或雜環(huán)；115和116獨(dú)立地是任選地被取代的5-12元碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基;或R6可以是Cw烷基或C2_6鏈烯基；各R是H,或d-6烷基、C2_6鏈烯基或C2_6炔基；l是0-6;且k、m、n和p獨(dú)立地是l-6。在以上式(l)中，R"可以是d-6烷基、任選地被取代的苯基或-I^(CR2)p-R5，其中L是O。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有式(2)的化合物、J(CR2)mIR1(2)其中J是苯并噴、唑基；1，2，3-噴、二唑-4-基；1，3，4-悉二唑-2-基；1，2，4-悉二哇-3-基；、噪唑并[4，5-6吡咬-2-基、，噪、唑并[4，5-c吡咬-2-基、？悉哇并[5，4-c吡咬-2-基或S悉唑并[5，4-W吡咬-2-基，其各自任選地被d-6烷基、鹵素、環(huán)丙基、S02(C"烷基)、OCH3、S02N(CH3)2、S02NH2、CF3或—(CR2)rR5所取代；Y是S02或-O—C(-O)-；Q是1-5;R9是卣素、烷基或0(C,_6烷基)；且R、R1、R3、R4、R5、m和n如式(l)中所定義。在一些實(shí)施例中，式(2)中的Y是S02且R"是d-6烷基。在其它實(shí)施是任選地被取代的哌啶基，環(huán)己基、苯基、。在特定的實(shí)施例中，R"是哌梵基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有式(3)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>(3)其中R1是C3_7環(huán)烷基或苯基；q是1-5;R9是卣素、烷基或0(d-6烷基)；且R、R5、J、k和m如式(l)中所定義。在以上式(2)和(3)中，q可以是l-2，且119是鹵素。在一些實(shí)施例中，在式(3)中的R5可以是任選地被取代的環(huán)己基、哌咬基或噻唑基。在特定的實(shí)施例中，R5是任選地被哌U所取代的噻唑基。在以上式(l)、(2)和(3)中，J可以是苯并5惡唑基；1，2，3-5悉二唑-4-基；1，3，4-5悉二唑-2-基；1，2，4-悉二唑-3-基；？悉唑并[4，5-6吡啶-2-基、、噪、唑并4，5-cI吡啶-2-基、，瑪唑并[5，4-cl吡啶-2-基或？惡唑并[5，4-6吡啶-2-基，其各自任選地被d.6烷基、鹵素、環(huán)丙基、S02(d-6烷基)、OCH3、S02N(CH3)2、S02NH2、CF3或^CR2)「R5所取代。在特定的實(shí)施例中，J是1,2,4-噁二哇-3-基，其可以任選地被例如d_6烷基、CF3或-(CR2),-rS所取代，其中RS是任選地被取代的苯基或Cw環(huán)烷基。在以上式(l)、(2)和(3)中，！^可以是d-6烷基、<:2_6鏈烯基、<:2_6炔基、CF3、OH、d_6烷緣、O(千基)、S02(d-6烷基)、CONH(d.6烷基)、CON(C^烷基)2或氰基；或Ri是苯基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、四氬吡喃基、呋喃基、咪咬-2-酮基、吡咯烷-2-酮基、吡咯烷-l-羰基、其各自任選地被鹵素、d，6烷基、<:2.6鏈烯基、C3-6炔基、氰基、oh或c"烷氧基所取代。另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，該藥物組合物包含式(l)、(2)或(3)化合物及可藥用賦形劑。本發(fā)明還提供了調(diào)節(jié)通道活化蛋白酶的方法，該方法包括向系統(tǒng)或哺乳動(dòng)物施用治療有效量的具有式(l)、(2)或(3)的化合物或其可藥用鹽或藥物組合物，從而調(diào)節(jié)所述通道活化蛋白酶。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制通道活化蛋白酶的方法，該方法包括向細(xì)胞或組織系統(tǒng)或向哺乳動(dòng)物施用治療有效量的具有式(l)、(2)或(3)的化合物或其可藥用鹽或藥物組合物；其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白4、PRSS22、TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP誦2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，從而抑制所述通道活化蛋白酶。在特定的實(shí)施例中，本發(fā)明提供了用于抑制前列腺蛋白酶的方法。另一方面，本發(fā)明提供了改善或治療由通道活化蛋白酶所介導(dǎo)病癥的方法，該方法包括向細(xì)胞或組織系統(tǒng)或向哺乳動(dòng)物施用有效量的具有式(1)、(2)或(3)的化合物或其可藥用鹽或藥物組合物，并且任選與第二種治療劑組合；其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶，由此治療所述病癥。另外，本發(fā)明提供了應(yīng)用于治療由通道活化蛋白酶所介導(dǎo)病癥的方法中的式(l)、(2)或(3)化合物。本發(fā)明還提供了具有式(l)、(2)或(3)的化合物任選與第二種治療劑組合在制備用于治療由通道活化蛋白酶所介導(dǎo)病癥的藥物中的用途。在特定的實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物可用于治療前列腺蛋白酶-介導(dǎo)的病癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二種治療劑可以是抗炎藥、支氣管擴(kuò)張藥、抗組胺藥、止咳藥、抗生素或脫氧核糖核酸酶，且在式(l)、(2)或(3)化合物之前、與其同時(shí)或在其之后施用。在一些實(shí)施例中，將本發(fā)明化合物施用于支氣管上皮細(xì)胞、特別是人類支氣管上皮細(xì)胞?？墒褂帽景l(fā)明化合物改善或治療的病癥的實(shí)例非限制性地包括與液體經(jīng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)上皮的移動(dòng)或呼吸組織中粘液和痰的聚集或它們的組合有關(guān)的病癥。在一些實(shí)施例中，可使用本發(fā)明化合物的病癥是嚢性纖維化、原發(fā)性纖毛運(yùn)動(dòng)障礙、肺癌、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病、哮喘或呼吸道感染。定義"烷基"指的是基團(tuán)或作為其它基團(tuán)例如卣素-取代的-烷基和烷氧基的結(jié)構(gòu)元件，并且可以是直鏈的或支鏈的。本文所用的任選取代的烷基、鏈烯基或炔基可以是任選卣代的(例如CF3)，或者可以具有一個(gè)或多個(gè)被雜原子(例如NR、O或S)取代或代替的碳(例如-OCH2CH20-、烷基硫醇、硫代烷氧基、烷基胺等)。"芳基"指的是包含碳原子的單環(huán)或稠合的二環(huán)芳環(huán)。例如芳基可以是苯基或萘基。"亞芳基"指的是衍生自芳基的二價(jià)基團(tuán)。本文所用的"雜芳基"如對(duì)以上芳基所定義的，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)成員是雜原子。雜芳基的實(shí)例非限制性地包括吡梵基、吲咮基、吲唑基、喹喔啉基、會(huì)啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并瘞喃基、苯并[1，31間二氧雜環(huán)戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、四唑基、吡喳基、瘞吩基等。本文所用的"碳環(huán)"指的是包含碳原子的飽和的或部分不飽和的單環(huán)、稠合的二環(huán)或橋連的多環(huán)，其可以任選被取代，例如#皮=0取代。碳環(huán)的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)丙烯、環(huán)己酮等。本文所用的"雜環(huán)"如對(duì)以上碳環(huán)所定義的，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)^A雜原子。例如，雜環(huán)可以包含N、O、S、-N-、-S-、-S(O)、-S(0)2-或-NR-,其中R可以是氫、C^烷基或保護(hù)基。雜環(huán)的實(shí)例非限制性地包括嗎啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌溱基、哌咬基、哌咬基酮、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基等。除非另有說明，當(dāng)取代基被認(rèn)為是"任選地被取代的"時(shí)，表示取代基是可以被一個(gè)或多個(gè)單獨(dú)地和獨(dú)立地選自以下的基團(tuán)所取代的基團(tuán)例如任選地卣代的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷基胺、烷硫基、炔基、酰胺、氨基、包括單或二取代的氨基、芳基、芳基氧基、芳硫基、羰基、碳環(huán)、氰基、環(huán)烷基、鹵素、雜烷基、雜鏈烯基、雜炔基、雜芳基、雜環(huán)、羥基、異氰?；惽枇蚧?isothiocyanato)、巰基、硝基、O-氨基曱?；?、N-氨基曱?；?、O-硫代氨基甲?；?、N-硫代氨基甲?；-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰M、N-磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、全鹵代烷基、全氟代烷基、硅烷基、磺酰基、硫代羰基、氰硫基、三鹵代甲磺酰基及其被保護(hù)的化合物?？梢孕纬梢陨先〈谋槐Ｗo(hù)的化合物的保護(hù)基團(tuán)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知且可以在參考中找到，如Greene和Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán))，第三版，JohnWiley&Sons,紐約，NY，1999和Kocienski，ProtectiveGroups(保護(hù)基團(tuán))，ThiemeVerlag，紐約，NY，1994,將這些文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容引入本文作為參考。本文所用的術(shù)語"共同施用"或"組合施用"等指的是包括向單個(gè)患者施用選擇的各治療劑，且旨在包括治療方案，其中治療劑不是必須通過相同施用途徑或在相同時(shí)間施用。本文所用的術(shù)語"藥物組合"指的是通過將活性成分混合或組合而獲得的產(chǎn)物，并且包括活性成分的固定組合和非固定組合。術(shù)語"固定組合"指的是將活性成分例如式(l)化合物與共同活性劑以單一實(shí)體或劑型的形式同時(shí)施用于患者。術(shù)語"非固定組合"指的是將活性成分例如式(l)化合物與共同活性劑以分開的實(shí)體同時(shí)、共同或者沒有特定的時(shí)間限制地依次施用于患者，其中此類施用在患者體內(nèi)提供了治療有效水平的活性成分。后者也應(yīng)用于雞尾酒療法，例如三種或多種活性成分的施用。術(shù)語"治療有效量"指的是在研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)生所探索的細(xì)胞、組織、器官、系統(tǒng)、動(dòng)物或人類中引起生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的主題化合物的量。術(shù)語主題化合物的"施用"應(yīng)當(dāng)被理解為是指向需要治療的個(gè)體提供包括本發(fā)明化合物的前藥的本發(fā)明化合物。本文所用的術(shù)語"治療"指的是減輕或緩和疾病和/或其伴隨癥狀的方法。術(shù)語"前列腺蛋白酶"也可以稱為人通道活化蛋白酶(hCAP);通道活化蛋白酶-l;和PRSS8、MERPOPSIDS01.159。實(shí)施本發(fā)明的方式本發(fā)明提供了化合物、藥物組合物以及應(yīng)用所述化合物調(diào)節(jié)通道活化蛋白酶(CAP)的方法。一方面，本發(fā)明提供了式(l)化合物及其可藥用鹽Y是—S02-、—NHCO—、—CO-或—0~C(=0)-，糾是當(dāng)R2是d-6烷基或苯基時(shí)，Y是S(V，J是任選地祐匸取代的5-12元單環(huán)的或稠合的雜環(huán)，其包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O和S的雜原子；R1是H、任選地卣代的d-6烷基、C2-6鏈烯基或C3-6炔基；M、OH、0(CR2),R6、S02R6、CONR(CR2),R6、CONR7R8或+NRR8，其中R7和R8與NR7R8中的N—起形成任選地被取代的5-7元雜環(huán)，其經(jīng)由氮原子連接于(CR2)一，或W是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、芳基，或5-7元的雜環(huán)或不含氮原子雜芳基；或+eR=CS，其中環(huán)P是任選地被取代的5-7元碳環(huán)；其中:R2是C"烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基或-L"(CR2)p-R5，其中L是O、S、S(O)、S02或OC(0);R3是d—6烷基、<:2-6鏈烯基、C2_6炔基或一(CR2)廣R5;R4是H、d—6烷基、C2—6鏈烯基、—CR=CR—R6、C2-6炔基，或任選地被取代的5-12元碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基；或議4是-^^=(5)，其中環(huán)E是任選地^L取代的5-12元單環(huán)的或稠合的碳環(huán)或雜環(huán)；115和116獨(dú)立地是任選地被取代的5-12元碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基；或R6可以是d-6烷基或C2-6鏈烯基；各R是H，或d-6烷基、C2-6鏈烯基或C2—6炔基；l是0-6;且k、m、n和p獨(dú)立地是l-6。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有式(2)的化合物(2)其中J是苯并巧悉喳基；1，2，3-悉二唑-4-基；1，3，4-5悉二唑-2-基；1，2，4-巧悉二唑-3-基；，港唑并4，5-A吡咬-2-基、、懲唑并[4，5-c吡咬-2-基、？悉喳并[5，4-c吡咬-2-基或惡唑并[5，4-6吡咬-2-基，其各自任選地被d-6烷基、囟素、環(huán)丙基、S02(C"烷基)、OCH3、S02N(CH3)2、S02NH2、CF3或-(CR2)「R5所取代；Y是S02或—O—C(-O)-；q是1-5;R9是鹵素、烷基或O(C"烷基)；且R、R1、R3、R4、R5、m和n如式(l)所定義。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有式(3)的化合物:R5—(CR2)k_其中R1是C3-7環(huán)烷基或苯基；q是l畫5;W是卣素、Cw烷基或O(C"烷基)；且R、R5、J、k和m如式(l)所定義。在其它的實(shí)施方案中，以上式(l)、(2)和(3)中的J選自非限制性地包括以下的基團(tuán)咪唑啉-2-基；咪唑-2-基；，瑪唑淋-2-基；、懲唑-2-基；蓉唑啉-2-基；噻唑-2-基；噢峻-5-基；1，3，4-蓉二唑-2-基；1，2，4-噻二唑-3-基；1，2，4-漆二唑-5-基；異噻唑-3-基；1，2，3-三唑-4-基；1,2，3-三唑-5-基；1，2，4-三喚-3-基；1，3，5-三療-2-基；四唑-5-基；異5惡唑-3-基；1，2，3，4-S悉三唑-5-基；1，2，3-巧悉二唑-4-基；1,3，4-悉二唑-2-基；1，2，4-巧悉二唑-3-基；2-吡唾啉-3-基；處峻-3-基；吡溱-2-基；逸噪-3-基；嘧咬-2-基；1H-吲喳-3-基；苯并噁唑-2-基；苯并咪唑-2-基；苯并噻唑-2-基；4，5，6，7-四氫-苯并噻唑-2-基；噌啉-3-基；酞溱-l-基；萘并2，l-d噻唑-2-基；萘并l，2-d噻唑-2-基；喹喔#~2-基；4-氧代喹唑啉-2-基；喹唑#~2-基；會(huì)哇啉-4-基；噪呤-2-基；噪呤-8-基；蝶梵-2-基；蝶咬-6-基；、噪唑并[4,5-6吡咬-2-基；、港唑并[4，5-c吡咬-2-基；？惡唑并[5，4-c吡咬-2-基；，懲唑并[5,4-6吡咬-2-基；噻唑并[4，5-b吡咬-2-基；嚷唑并5，4-b吡咬-2-基和噻唑并[5，4-c吡咬-2-基。在特定的實(shí)施例中，J是苯并5悉喳基；1，2，3-5悉二唑-4-基；1，3，4-5悉二唑-2-基；1，2，4-悉二唑-3-基；？悉唑并[4，5-W吡咬-2-基、巧惡唑并[4，5-c吡咬-2-基、巧悉唑并[5，4-c吡咬-2-基或S悉唑并[5，4-6吡咬-2-基，其各自任選地被d-6烷基、鹵素、環(huán)丙基、S02(d.63H—烷基)、OCH3、S02N(CH3)2、S02NH2、CF3或—(CR2)rR5所取代。在以上式(l)、(2)和(3)中，W是非堿性取代基或或相對(duì)弱堿性的基團(tuán)，具有例長(zhǎng)口pKa〈5、pKa〈2或pKa〈0。R1的實(shí)例非限制性地包括H、4壬選地卣代的d-6烷基、C2-6鏈烯基或C3_6炔基；絲、OH、0(CR2)，R6、S02R6、CONR(CR2),R6、CONR7R8或+NRR8，其中R7和R8NR7R8中的N—起形成任選地被取代的5-7元雜環(huán)；或R1是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、芳基，或5-7元的雜環(huán)或不含氮原子雜芳基；或+"=°2)，其中環(huán)P是任選地被取代的5-7元碳環(huán)。在以上的式(l)、(2)和(3)中，各任選地被取代的基團(tuán)可以被以下的基團(tuán)所取代鹵素、=0、d-6烷氧基、絲、Cw烷基、C2-6鏈烯基或C2.6炔基，其各自可以任選地被囟代或可以任選地具有可以被N、O或S替代或取代的碳；C02R1()、O—(CR2)rC(0)—R10;—(CR2)「R1()、—(CR2)r-C(0)—R10或-(CR2)廣S02-r^;或它們的組合，其中各rW是H、氨基、d.6烷基，或任選地被取代的碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基。本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物所有適合的同位素變體或其可藥用鹽。將本發(fā)明化合物的同位素變體或其可藥用鹽定義為其中至少一個(gè)原子被具有相同的原子序數(shù)但其原子質(zhì)量與自然界中常見的原子質(zhì)量不同的原子所代替?？梢該饺氡景l(fā)明化合物和其可藥用鹽的同位素非限制性地包括氫、碳、氮和氧的同位素如211、3H、"C、13C、"C、15N、170、180、35S、18F、36C1和123I。本發(fā)明化合物和其可藥用鹽的某些同位素變化，例如放射性同位素如311或"C摻入其中的那些，可用于藥物和/或底物組織分布研究。在特定的實(shí)施例中，由于其易于制備和檢測(cè)，可使用"H和"C。在其它的實(shí)施例中，具有同位素的取代基如2H由于其較高的代謝穩(wěn)定性如增加體內(nèi)半衰期或減少所需劑量，可提供一定的治療上的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明化合物或其藥用鹽的同位素變體通?？梢允褂眠m合試劑的適當(dāng)?shù)耐凰刈凅w通過常規(guī)方法來制備。本發(fā)明的化合物和組合物可以用于調(diào)節(jié)通道活化蛋白酶?？梢詰?yīng)用本腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶。本發(fā)明化合物還可以抑制刺激離子通道(例如上皮鈉通道)活性的蛋白酶的活性，并且可以用于治療CAP相關(guān)疾病。藥理學(xué)和用途本發(fā)明化合物調(diào)節(jié)通道活化蛋白酶、特別是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶如前列腺蛋白酶的活性，并且因此用于治療其中由前列腺蛋白酶例如引起其病理和/或癥狀的疾病或障礙。通過抑制通道活化蛋白酶、特別是通過胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶如前病。例如，氣道表面液體的體積是粘膜纖毛清除和保持肺健康的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器。通道活化蛋白酶的抑制將促進(jìn)氣道上皮粘膜側(cè)的液體聚集，從而促進(jìn)粘液清除并且防止呼吸組織(包括肺氣道)中粘液和痰的聚集。此類疾病包括呼吸疾病例如嚢性纖維化、原發(fā)性纖毛運(yùn)動(dòng)障礙、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘、呼吸道感染(急性和慢性；病毒性和細(xì)菌性)和肺癌。通過抑制通道活化蛋白酶介導(dǎo)的疾病還包括除呼吸疾病外的疾病，該疾病與經(jīng)過上皮的異常液體調(diào)節(jié)有關(guān)，可能涉及在它們表面的保護(hù)表面液體的異常生理學(xué)，例如口干燥癥(口干燥)或干燥性角膜結(jié)膜炎(keratoconjunctivitissire)(干目艮)。另外，腎中ENaC的CAP調(diào)節(jié)可以用于促進(jìn)利尿并且因而誘導(dǎo)低血壓作用。慢性阻塞性肺疾病包括慢性支氣管炎或與^M目關(guān)的呼吸困難、肺氣肺以及其它藥物治療(特別是其它吸入藥物治療)后的氣道高反應(yīng)性惡化。本發(fā)明還適用于治療任何類型或起源的支氣管炎包括例如急性、花生仁吸入性、卡他性、格魯布性、慢性或結(jié)核性支氣管炎。哮喘包括內(nèi)源性(非過敏性)哮喘和外源性(過敏性)哮喘、輕度哞喘、中度哮喘、重度哞喘、支氣管哮喘、運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的哞喘、職業(yè)性哮喘和細(xì)菌感染后誘導(dǎo)的哮喘。哮喘還包括被提及為"喘鳴嬰兒綜合征"的情況，其包括小于4或5歲的出現(xiàn)喘息癥狀并且被確診或可能被診斷為"喘鳴嬰兒"的個(gè)體，這是一種確立的醫(yī)學(xué)界重點(diǎn)關(guān)注的患者類型并且現(xiàn)在通常被確診為初始或早期哞喘。用于治療由抑制通道活化蛋白酶介導(dǎo)的疾病的通道活化蛋白酶抑制劑(例如前列腺蛋白酶抑制劑)的適合性可以根據(jù)下文描述的試驗(yàn)和本領(lǐng)域已知的方法通過確定通道活化蛋白酶抑制劑的抑制作用來測(cè)試。與前述一致，本發(fā)明進(jìn)一步提供了在需要該治療的個(gè)體中預(yù)防或治療上述任何疾病或障礙的方法，該方法包括向給所述個(gè)體施用治療有效量的式(1)、(2)或(3)化合物或其可藥用鹽。對(duì)于以上任何用途，所需劑量將根據(jù)施用方式、待治療的特定病癥和預(yù)期作用而不同。(參見下文，"施用和藥物組合物")。施用和藥物組合物通常，本發(fā)明化合物以治療有效量通過本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)的和可接受的方式單獨(dú)施用或與一種或多種治療劑組合施用。本發(fā)明的通道活化蛋白酶抑制劑還用作共同治療劑，用于與其它藥物組合。例如通道活4匕蛋白酶抑制劑可以與抗炎藥、支氣管擴(kuò)張藥、抗組胺藥或止咳藥、抗生素或脫氧核糖核酸酶治療劑組合使用。通道活化蛋白酶抑制劑和其它的治療劑可以處于相同的或不同的藥物組合物中。通道活化蛋白酶抑制劑可以在固定的藥物組合物中與其它治療劑混合或者它可以在其它治療劑之前、同時(shí)或之后單獨(dú)施用。所述組合尤其可用于治療嚢性纖維化或阻塞性或炎性氣道疾病，如以上所提及的那些，例如作為這些藥物治療活性的增效劑或作為降低這些藥物所需的劑量或可能的副作用的方法。適合的抗炎治療劑包括類固醇，特別是糖皮質(zhì)激素例如布地奈德、倍氯美松雙丙酸酯、丙酸氟替卡松、環(huán)索奈德或莫米松糠酸酯，或在國(guó)際專利申請(qǐng)WO02/88167、WO02/12266、WO02/100879、WO02/00679(例如，實(shí)施例3、11、14、17、19、26、34、37、39、51、60、67、72、73、卯、99和101)、WO03/35668、WO03/48181、WO03/62259、WO03/64445、WO03/72592、WO04/39827和WO04/66920中描述的類固醇；非類固醇類糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑，例如在DE10261874、WO00/00531、WO02/10143、WO03/82280、WO03/82787、WO03/86294、WO03/104195、WO03/101932、WO04/05229、WO04/18429、WO04/19935和WO04/26248中描述的那些；LTD4拮抗劑例如孟魯司特和扎魯司特；PDE4抑制劑例如西洛司特(ARIFLO⑧GlaxoSmithKline)、ROFLUMILAST(BykGulden)、V-11294A(Napp)、BAY19-8004(Bayer)、SCH-351591(Schering-Plough)、AROFYLLINE(AlmirallProdesfarma)、PD189659/PD168787(Parke-Davis)、AWD-12畫281(AstaMedica)、CDC-801(Celgene)、SelCID(TM)CC-10004(Celgene)、VM554/UM565(Vernalis)、T畫440(Tanabe)、KW-4490(KyowaHakkoKogyo)，以及在WO92/19594、WO93/19749、WO93/19750、WO93/19751、WO98/18796、WO99/16766、WO01/13953、WO03/104204、WO03/104205、WO03/39544、WO04/000814、WO04/000839、WO04/005258、WO04/018450、WO04/018451、WO04/018457、WO04/018465、WO04/018431、WO04/018449、WO04/018450、WO04/018451、WO04/018457、WO04/018465、WO04/019944、WO04/019945、WO04/045607和WO04/037805中公開的那些；以及腺甘A2B受體拮抗劑如在WO02/42298中描述的那些，將其各自的全部?jī)?nèi)容引入本文。適合的支氣管擴(kuò)張治療劑包括P-2腎上腺素受體激動(dòng)劑，例如沙丁胺醇(舒喘靈)、奧西那林、特布他林、沙美特羅、非諾特羅、丙卡特羅、福莫特羅、卡莫特羅或其可藥用鹽；以及在WO00/75114中描述的式(l)化合物(游離或鹽或溶劑化物形式)，下式化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>oh、WO04/16601的式(l)化合物(游離或鹽或溶劑化物形式)以及EP1440966、JP05025045、WO93/18007、WO99/64035、US2002/0055651、WO01/42193、WO01/83462、WO02/66422、WO02/704卯、WO02/76933、WO03/24439、WO03/42160、WO03/42164、WO03/72539、WO03/91204、WO03/99764、WO04/16578、WO04/22547、WO04/32921、WO04/33412、WO04/37768、WO04/37773、WO04/37807、WO04/39762、WO04/39766、WO04/45618、WO04/46083和WO04/80964的化合物或它們的可藥用鹽，將其各自的全部?jī)?nèi)容引入本文。適合的支氣管擴(kuò)張治療劑還包括抗膽堿能藥或抗毒覃堿藥，特別是異丙托溴銨、氧托溴銨、噢托銨(tiotropium)鹽和CHF4226(Chiesi)及格隆溴銨，還有在EP424021、US3714357、US5171744、WO01/04118、WO02/00652、WO02/51841、WO02/53564、WO03/00840、WO03/33495、WO03/53966、WO03/87094、WO04/018422和WO04/05285中描述的那些，將其各自的全部?jī)?nèi)容引入本文。適合的雙重抗炎和支氣管擴(kuò)張治療劑包括雙重|3-2腎上腺素受體激動(dòng)劑/毒萆堿拮抗劑，例如在US2004/0167167、WO04/74246和WO04/74812中公開的那些。適合的抗組胺治療劑包括鹽酸西替利溱、對(duì)乙酰氨基酚、富馬酸氯馬斯汀、異丙嗪、氯雷他定、地氯雷他定、苯海拉明和鹽酸非索非那定、艾替瓦斯汀(activastine)、阿司咪唑、氮萆斯汀、依巴斯汀、依匹斯汀、咪唑斯汀和特芬那定(tefenadine)，以及在JP2004107299、WO03/099807和WO04/026841中7>開的那些，將其各自的全部?jī)?nèi)容引入本文。適合的抗生素包括大環(huán)內(nèi)酯類抗生物，例如妥布霉素(TOBF，。適合的脫氧核糖核酸酶治療劑包括阿法鏈道酶(PULMOZYMET，，其是重組人脫氧核糖核酸酶I(rhDNase)的高純度溶液，選擇性裂解DNA。阿法鏈道酶用于治療嚢性纖維化。通道活化蛋白酶抑制劑和抗炎治療劑的其它有用的組合是與趨化因子受體枯抗劑的組合，所述的趨化因子受體例如CCR-1、CCR-2、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CCR-6、CCR-7、CCR-8、CCR-9和CCRIO、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5，特別是CCR-5拮抗劑例如先靈葆雅(Schering-Plough)拮抗劑SC-351125、SCH-55700和SCH畫D，Takeda拮抗劑例如N-[4-[[[6，7-二氫-2-(4-曱基-苯基)-5H-苯并-環(huán)庚烯-8-基羰基l氨基l苯基]-甲基]四氫-N,N-二甲基-2H-吡喃-4-氯化銨(TAK-770)和在US6166037、WO00/66558、WO00/66559、WO04/018425和WO04/026873中描述的CCR-5拮抗劑，將其各自的全部?jī)?nèi)容引入本文。在根據(jù)本發(fā)明治療由前列腺蛋白酶的抑制介導(dǎo)的疾病中，游離形式或施用，例如口服，例如以片劑、膠嚢劑或液體形式施用；胃腸外，例如以可注射溶液劑或混懸劑形式施用；或鼻內(nèi)，例如以應(yīng)用適合的鼻內(nèi)傳遞裝置以氣霧劑或其它可霧化制劑形式施用，例如鼻腔噴霧劑例如本領(lǐng)域已知的那些；或通過吸入施用，特別是應(yīng)用噴霧器。通道活化蛋白酶抑制劑可以在藥物組合物中與可藥用稀釋劑或載體一起施用。該組合物可以是例如干粉、片劑、膠嚢劑和液體，但也可以是注射溶液劑、輸液或吸入混懸劑，其可以應(yīng)用本領(lǐng)域已知的其它配制成分和技術(shù)制備。游離形式或可藥用鹽形式的通道活化蛋白酶抑制劑的劑量可以取決于多種因素例如活性成分的活性和作用持續(xù)時(shí)間、待治療病癥的嚴(yán)重程度、施用方式、個(gè)體的種類、性別、種族起源、年齡和體重和/或其個(gè)體情況。施用例如口月良施用于溫血?jiǎng)游?、特別是重約75kg的人的通常的日劑量估計(jì)約0.7mg至約1400mg,更尤其是約5mg至約200mg。該劑量可以例如以單劑量施用或分為幾部分劑量施用，例如5至200mg。當(dāng)組合物包含氣霧劑時(shí)，其可以包含例如氫-氟-烷(HFA)拋射劑例如HFA134a或HFA227或它們的混合物，且可以包含一種或多種本領(lǐng)域已知的共溶劑例如乙醇(至多20%重量)，和/或一種或多種表面活性劑如油酸或失水山梨醇三油酸酯，和/或一種或多種膨脹劑如乳糖。當(dāng)組合物包含干粉制劑時(shí)，其可以包含例如粒徑至多IO微米的通道活化蛋白酶抑制劑，任選包含具有所需粒度分布的稀釋劑或載體如乳糖，以及有助于保護(hù)產(chǎn)物性能免受濕氣石皮壞的化合物例如硬脂酸鎂。當(dāng)組合物包含霧化制劑時(shí)，其可以包含例如溶于或懸浮于含水、共溶劑例如乙醇或丙二醇以及穩(wěn)定劑(其可以是表面活性劑)載體中的通道活化蛋白酶抑制劑。在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了可吸入形式的式(l)、(2)或(3)化合物，例如氣霧劑或其它可霧化組合物或可吸入顆粒例如微?；男问健１景l(fā)明還提供了可吸入藥物，其包含可吸入形式的本發(fā)明化合物；藥物產(chǎn)品，其包含可^7v形式的本發(fā)明化合物以及吸入裝置；以及包含可吸入形式的本發(fā)明化合物的吸入裝置。制備本發(fā)明化合物的方法本發(fā)明化合物可以依據(jù)在實(shí)施例中例舉的方法來制備。在描述的反應(yīng)中，在終產(chǎn)物中需要的反應(yīng)的官能團(tuán)(例如羥基、氨基、亞氣基、硫代或^J^)可以應(yīng)用本領(lǐng)域已知的保護(hù)基保護(hù)，以避免它們參與不希望的反應(yīng)。常規(guī)的保護(hù)基可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作來使用，例如參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts的"ProtectiveGroupsinOrganicChemistry(有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán))"，JohnWiley&Sons,1991。還可以通過將游離堿形式的化合物與可藥用的無機(jī)或有機(jī)^jl應(yīng)而將本發(fā)明化合物制備成可藥用酸加成鹽?；蛘撸景l(fā)明化合物的可藥用4^>成鹽可以通過將游離酸形式的化合物與可藥用無機(jī)或有;Ml^應(yīng)而制備。或者，本發(fā)明化合物的鹽形式可以應(yīng)用原料或中間體的鹽制備。游離酸或游離堿形式的本發(fā)明化合物可以分別W目應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽形式制備。例如通過用適合的堿(例如氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)處理，可以將酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離堿。通過用適合的酸(例如鹽酸等)處理，可以將堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離酸。在ox:至8ox:下，在適合的惰性有機(jī)溶劑(例如乙腈、乙醇、含水二噴、烷等)中，通過用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)處理，可以從本發(fā)明化合物的N-氧化物制備非氧化形式的本發(fā)明化合物。本發(fā)明化合物的前藥衍生物可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法帝備(，'H口,詳見Saulnier等人(1994)，BioorganicandMedicinalChemistryLetters,第4巻，第1985頁(yè))。例如，適合的前藥可以通過將未衍生化的本發(fā)明化合物與適合的氨基甲?；噭?例如l，l-?；趸榛减Ｂ?、碳酸對(duì)-硝基苯基酯等)反應(yīng)而制備。本發(fā)明化合物的保護(hù)衍生物可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法制備。可應(yīng)用于保護(hù)基的引入和脫去的技術(shù)的詳細(xì)描述可參見T.W.Greene,"ProtectingGroupsinOrganicChemistry(有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán))"，第3版，JohnWiley&Sons,Inc.,1999。在本發(fā)明的制備過程中，本發(fā)明化合物可以方便地制備或形成溶劑化物(例如水合物)。本發(fā)明化合物的7jC合物可以通過應(yīng)用有機(jī)溶劑(例如二氧芑、四氫呋喃或甲醇)從7JC/有機(jī)溶劑混合物中重結(jié)晶而方便地制備。本發(fā)明化合物可以通過以下方法制備成其單獨(dú)的立體異構(gòu)體將化合對(duì)，將非對(duì)映異構(gòu)體分離并且回收旋光純的對(duì)映異構(gòu)體。盡管對(duì)映異構(gòu)體的拆分可以應(yīng)用本發(fā)明化合物的共價(jià)非對(duì)映異構(gòu)體衍生物進(jìn)行，但是優(yōu)選可解離的復(fù)合物(例如結(jié)晶的非對(duì)映異構(gòu)體鹽)。非對(duì)映異構(gòu)體具有不同的物理學(xué)特性(例如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解性和反應(yīng)性等)并且可以通過利用這些區(qū)別容易地分離?？梢酝ㄟ^色譜法，或者通過基于溶解性不同的分離/拆分技術(shù)將非對(duì)映異構(gòu)體分離。然后，通過不會(huì)引起外消旋化的任何實(shí)用的方法，回收旋光純的對(duì)映異構(gòu)體以及拆分試劑?？蓱?yīng)用于將化合物的立體異構(gòu)體從它們的外消旋體混合物中拆分出來的技術(shù)的更詳鈿描述可參見JeanJacques,AndreCollet,SamuelH.Wilen,"Enantiomers，.RacematesandResolutions(對(duì)映異構(gòu)體、外消旋體和拆分)"，JohnWiley&Sons,Inc.,1981。簡(jiǎn)而言之，本發(fā)明化合物可以按照實(shí)施例中所例舉的制備，且式(l)、(2)和(3)可以通過以下方法制備，其涉及(a)任選將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用鹽；(b)任選將本發(fā)明化合物的鹽形式轉(zhuǎn)化為非鹽形式；(c)任選將本發(fā)明化合物的非氧化形式轉(zhuǎn)化為可藥用N-氧化物；(d)任選將本發(fā)明化合物的N-氧化物形式轉(zhuǎn)化為其非氧化形式；(e)任選將本發(fā)明化合物的單個(gè)異構(gòu)體從異構(gòu)體混合物中拆分出來；(f)任選將未^t生化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用前藥衍生物；以及(g)任選將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉(zhuǎn)化為其未衍生化形式。在文中當(dāng)沒有具體描述原料的制備時(shí)，所述化合物為已知的或可以通領(lǐng)域的技術(shù)人員之一將意識(shí)到以上轉(zhuǎn)化僅是制備本發(fā)明化合物的方法的代表，并且也可以類似地應(yīng)用其它眾所周知的方法。通過以下說明本發(fā)明化合物的制備的中間體(參考化合物)和實(shí)施例，進(jìn)一步舉例說明了本發(fā)明，但不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。參考化合物1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>1畫B:將原料Cbz-Phe-OH(15.0g，50.0mmol)溶于THF(150mL)中并將該溶液冷卻至-10。C,隨后加入三乙胺(7.1ml，50.0mmol)并滴加氯曱酸異丁酯(7.1ml,55mmol)。將得到的混懸液在0°C攪拌2小時(shí)。過濾該反應(yīng)混合液并冷卻至-10。C。將NaBH4(3.97g，105mmol)在0。C溶于水中，并將該溶液分批入THF溶液中。使該反應(yīng)混合液溫至室溫并攪拌1小時(shí)。用1NHC1溶液酸化該反應(yīng)混合液并將7JC相用EtOAc萃取幾次。用水、飽和NaHC03水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)層；經(jīng)MgS04干燥；在真空中除去溶劑。將產(chǎn)物通過快速柱色鐠(己烷/乙酸乙酯)純化，得到白色泡沫形式的所需產(chǎn)物。l-C:將醇(12.02g，42.1mmol)溶于DCM(100ml)中并冷卻至0。C。分批加入Dess曙Martin試劑(19.5g，46.2mmol)的DCM(100ml)溶液。使該混懸液溫至室溫并且攪拌直至完全轉(zhuǎn)化(2小時(shí))。加入飽和NaHC03水溶液和1MNa2S;j03溶液1:1的混合液，并且將產(chǎn)生的雙相系統(tǒng)劇烈攪拌20分鐘。分離有機(jī)層并用DCM將水層萃取一次。在真空中蒸餾合并的有機(jī)層并將得到的油狀物溶于EtOAc;用NaHC03/Na2S203混合液、水和鹽水洗滌六次；經(jīng)MgS04干燥；在真空中除去溶劑，得到淡黃色油狀物的粗制醛。該物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化地直接用于下一步。l-D:在-20"C下，向異丙基-氯化鎂(70.3mmol，35ml的2M-THF溶液，購(gòu)自Sigma-Aldrich)的THF(100ml)的溶液中加入在THF(20ml)中的苯并^悉唑(8.36g，70.3mmol)。將該反應(yīng)混合物在-20。C下攪拌30分鐘(顏色改變深紅色)并且緩慢加入醛(11.9g,42.0mmol)的THF(20mL)溶液，溫度控制在-20'C至-15'C。將該反應(yīng)混合物溫至室溫并且攪拌直至完成。將反應(yīng)混合物用飽和的NH4C1水溶液猝滅并且將在真空中除去溶劑。將水相用EtOAc萃取三次，將合并的有機(jī)層用1NHC1溶液、水和鹽水充分洗滌；經(jīng)MgS04干燥；在真空中除去溶劑，得到為深紅色油狀物形式的粗制苯并^惡唑。用EtOAc/己烷(l:5至l:l)經(jīng)硅膠純化，得到淡黃色固體狀苯并噁唑。1畫E:將化合物5(1.6g，5.96mmol)溶于乙醇(3mL)中。加入Pd/C(100/。，濕潤(rùn)，Degussa型)，并且將燒瓶置于Parr振蕩器上過夜并且通入40psi的氫氣。將催化劑通過硅藻土過濾并且真空中除去溶劑。將粗制物質(zhì)經(jīng)快速色譜純化，首先應(yīng)用梯度為己烷/EtOAc以除去較低極性有色雜質(zhì)，然后用DCM/MeOH梯度洗脫需要的化合物5。在真空中除去溶劑，得到白色固體狀所需化合物。參考化合物20H2-D2-E2-B:該化合物使用類似于參考化合物l-B中所描述的方法從L-Boc-烯丙甘氨酸制備。2-C:該化合物使用類似于參考化合物l-C中所描述的方法從參考化合物2-B制備。2-D:該化合物使用類似于參考化合物l-D中所描述的方法從參考化合物2-C制備。2-E:將參考化合物2-D(350mg，1.10mmol)溶于二氯甲烷(3mL)。加入TFA(2mL)，并將該反應(yīng)在室溫下攪拌直至原料^。在真空中除去溶劑，得到作為TFA鹽的產(chǎn)物2-E，其未經(jīng)進(jìn)一步純化地^f吏用。參考化合物3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>將細(xì)粉狀KOH(19.4g，0.346mol)溶于DMSO中并在室溫下攪拌20分鐘，然后冷卻至0。C。將N-Boc-反式-4-羥基-L-脯氨酸(Boc-Hyp-OH)(10g，43，3mmol)溶于DMSO(10mL)中并且加入上述混合物中，并且將反應(yīng)混合物在0*€下再攪拌10分鐘。然后加入4-氯節(jié)基氯(33g，0.204mol)，并且將反應(yīng)混合物在0n下再攪拌15分鐘，然后將冰浴除去，并且將反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾倒入水(300mL)中，并且將反應(yīng)容器用另外的等量的水(300mL)沖洗。將合并的水層用醚(2x300mL)萃取并且棄去。將水層用87%H3P04酸化至pH2.3,然后用醚(3x300mL)萃取。將合并的醚萃取液用水(2x400mL)和鹽水(2x400mL)洗滌，然后經(jīng)MgS04干燥，過濾并且真空濃縮。將殘余物經(jīng)硅膠色譜用EtOAc/己烷(梯度0至100%)純化，得到澄清油狀物形式的化合物3。MSm/z256.1(M+1-Boc);&NMR(DMSO-D6，400MHz)S7.39-7.31(4H，m)，4.524.40(2H，m)，4.16-4.10(2H，m),3.48-3.41(2H，m)，2.40-2.30(1H，m)，2.03-1.94(1H，m)，1.39-1.34(9H，m)。參考化合物44-G4畫B:將4-旅咬乙醇(4-A)(5g，39.7mmol)溶于THF(120mL)中。加入三乙胺(5.6mL，40mmo1)，并且將溶液冷卻至0*€。加入Boc20(9.59g，44mmol)，并且將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，加入溶于乙酸乙酯(120mL)中的粗制殘余物，將溶液用0.1NHCl(3xl00mL)和鹽7JC(lxl00mL)洗滌，用MgS04干燥，過濾并且將溶劑真空蒸發(fā)，得到化合物4-B，為澄清油狀物。4-C:將三氯異氰脲酸(2.66g，11.46mmol)加入醇(2.39g,10.42mmol)的dcm溶液中，并且將溶液攪拌并且保持在ox:，然后加入催化量的TEMPO。加入后，將混合物溫至室溫并且攪拌1小時(shí)，然后經(jīng)硅藻土過濾。將有W目用飽和的Na2C03水溶液洗滌，然后用1NHC1和鹽水洗滌。干燥有機(jī)層(MgS04)，并且蒸發(fā)溶劑，得到4-C。NMR(CDC13，400MHz)59.72(1H，s)，4.07-4.01(2H，m)，2.70-2.57(2H，m)，2.35-2.31(2H，m)，2.05-1.94(1H，m)，1.64-1.46(2H，m)，1.39(9H，s)，1.30-1.02(2H，m)。4-D:在-78匸下，向Cbz-a-膦酰基甘氨酸三甲酯(2.8g,8.45mmol)的THF溶液中加入l,l，3，3-四甲基-胍(1.022ml，8.14mmol)。10分鐘后，加入醛3(1.76g，7.76mmo1)。然后將溶液置于0*€冰浴中1小時(shí)，然后將其溫至室溫并且再攪拌1小時(shí)。將溶液用EtOAc稀釋，用1MNaHS04洗滌，干燥(MgS04)并且真空濃縮。將殘余物經(jīng)色語(ISCO)用乙酸乙酯/己烷0至100%純化，得到4-D，為白色固體。MSm/z333.2(M+1)，NMR(CDC13，400MHz)5.7.35-7.33(5H，m)，6.63(1H，t，J=8Hz),6.30(1H，bs)，5.12(2H，s)，4.10-4.04(2H，m)，3.73(3H，s)，2.67-2.62(2H，m)，2.14(2H，t，J=6.8Hz)，1.63-1.46(3H，m)，1.43(9H,s),1.14-1.06(2H，m)。4-F(步驟d和e):在氮?dú)庀?，在Parr容器中裝入4-D(1.0g，2.31mmol)和MeOH(100mL)。對(duì)溶液進(jìn)行三次真空循環(huán)并且鼓入氮?dú)?，并且加入催化?R，R)-乙基-DuPHOS-Rh(COD)三氟曱磺酸鹽(30mg，0.04mmol)。將混合物在60psi氫氣下、室溫下放置24小時(shí)。向4-E的轉(zhuǎn)化在24小時(shí)后完成，并將其未經(jīng)分離地用于下一步驟(e)中。將該溶液用氮?dú)獯祾?，并且加入Pd/碳(以重量計(jì)5%)。將混合物在50psiH2、室溫下再方文置24小時(shí)。將混合物用氮?dú)獯祾卟⑶医?jīng)硅藻土過濾。將珪藻土濾餅用MeOH洗滌，并且將該有機(jī)溶液真空濃縮。加入己烷，然后在真空中蒸發(fā)以使剩余的甲醇共沸，得到4-F，為油狀物，然后將其未經(jīng)進(jìn)一步純化地用于下一步中。4-G:將粗品4-F(0.6g，1.99mmol)溶于THF(10mL)中，并且向溶液中加入2，4，6-可力丁(315mg，2.38mmol)和甲磺酰氯(0.170mL，2.19mmol)并攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)用EtOAc(50mL)溶液稀釋；用1MNaHS04(2x25mL)和鹽水(25mL)洗滌；并且干燥(MgS04)。在真空中除去溶劑，并且將粗制殘余物經(jīng)快速色譜純化，使用己烷和EtOAc梯度洗脫，得到所需產(chǎn)物4-G。4-H:將化合物4-G(0.70g，1.84mmol)溶于二巧悉烷(7mL)中，并且加入溶于水(4mL)中的LiOH*H20(232mg，5.55mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，并將殘余物用EtOAc(25mL)稀釋，用1NNaHS04(25mL)和鹽水(25mL)洗滌，并且干燥(MgS04)。在真空中除去溶劑，并且將粗品經(jīng)硅膠色鐠(己烷/EtOAc梯度洗脫)純化，得到參考化合物4，為白色固體。參考化合物5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage40</formula>S'e參考化合物5在以上制備參考化合物5的反應(yīng)流程圖中，試劑和M是(a)SOCl2(3.0當(dāng)量)，MeOH，0°C,100%;(b)甲磺酰氯(1.2當(dāng)量),Et3N(3.0當(dāng)量)，催化劑DMAP，THF，23°C，79%;(c)Hoveyda-Grubbs復(fù)分解催化劑(8mol%)，7V畫Boc-4-亞甲基哌啶(3.0當(dāng)量)，DCM，40°C，51%;(d)LiOH,二鳴烷，H20，23°C，100%。5-A:將D-烯丙甘氨酸(5.03g,43.73mmol,1.0當(dāng)量)混合于冰水浴中的甲醇(70mL)的混懸液中。經(jīng)10分鐘滴加亞硫酰氯(9.6mL，131.19mmol,3.0當(dāng)量)。將該反應(yīng)溫至室溫直至通過LC/MS顯示反應(yīng)完成。蒸發(fā)溶劑并將得到的白色固體狀的5-A直接用于下一步中。5-B:D-歸丙甘氨酸甲酯鹽酸鹽(5-A，7.20g，43.73mmol)、Et3N(18mL,131,19mmol，3,0當(dāng)量)和DMAP(10mg，作為催化劑)溶于THF(110mL)中并在室溫下攪拌。滴加甲磺酰氯(4.0mL，52，48mmo1，1.2當(dāng)量)，并在室溫下將該反應(yīng)攪拌6小時(shí)。蒸發(fā)掉THF并將粗制反應(yīng)產(chǎn)物溶于EtOAc(100mL)中，用水(IOOmL)、INHC1(2x100mL)和鹽水(100mL)洗滌，并千燥(MgS04)。在真空中除去溶劑并將粗制物質(zhì)經(jīng)快速色譜(己烷:EtOAc)純化，得到黃色油狀物狀的5-B。5-C:在氮?dú)鈿夥障聦o水二氯甲烷(10mL，0.1M)通過注射器加入至5-B(2.15g，10.37mmol，1.0當(dāng)量)和Hoveyda-Grubbs第二代復(fù)分解催化劑(1，3-二-(2，4，6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亞基)二氯(鄰-異丙氧基苯基亞甲基)釕II二氯化物)(510mg，0.815mmol，8mol%)中。通過注射器加入N-Boc-4-亞甲基旅咬(6mL，31.11mmol，3.0當(dāng)量)，并且給反應(yīng)器裝上回流冷凝器，并且加熱至40X:達(dá)12小時(shí)。通過LC/MS顯示反應(yīng)完成后，將該反應(yīng)混合物直接通過自動(dòng)硅膠純化(0-100%在己烷中的乙酸乙酯)來純化，得到5-C，為'深綠色油狀物。MSwi/z277.2(M-Boc+1)。參考化合物5:使用前述的制備參考化合物4(步驟g)的方法完成5-C的皂化反應(yīng)。參考化合物6o■OMe■OMe參考化合物66-D"6-A:在0。C在水浴中、在攪拌下將亞硫酰氯(9.1mL，125mmol)緩慢地加入甲醇(250mL)中。攪拌30分鐘后，加入N-a-Cbz-L-2，3-二^J^丙酸(Z-Dap-OH)(15g、63mmol)并將該反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，并將得到的白色固體在醚(300mL)中研磨并過濾，得到鹽酸鹽狀的甲酯6-A。6-B:將參考化合物6-A(5.0g，17.4mmol)溶于CH2C12(70mL)中并冷卻至0。C。向該溶液中加入三乙胺(5.4ml，39.0mmol)，隨后加入5-氯戊酰氯(2.63g，18.7mmol)。將該反應(yīng)混合液溫至室溫并攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)傾入鹽水(IOOmL)，用DCM(2x50mL)萃:f^機(jī)層，用INHC1洗滌，并干燥(MgS04)。在真空中除去溶劑并將粗制物質(zhì)經(jīng)快速色鐠(己烷/EtOAc)純化，得到澄清油狀物形式的所需產(chǎn)物。6-C:將氯化物6-B(4.1g、11.1mmol)溶于DMF(110mL)中并冷卻至0。C。向該溶液中加入NaH(0.53g的在礦物油中的60%分散物，13.3mmol),并將該混合液在室溫下攪拌4小時(shí)。在真空中除去DMF并將殘余物溶于EtOAc;用1NHC1、飽和NaHC03和鹽水洗滌；經(jīng)MgS04干燥。將粗制物質(zhì)經(jīng)硅膠色鐠純化，得到澄清油狀物形式的內(nèi)酰胺6-C。6-D:使用前述的制備參考化合物4(步驟g)的方法完成6-C的皂化反應(yīng)。參考化合物6(步驟e、f、g和h):使用前述的制備參考化合物1的方法完成6-D向參考化合物6的轉(zhuǎn)化。參考化合物7將D-高苯基丙氨酸乙酯鹽酸鹽(5.00g,20.5mmol)和DIEA(8.7mL，51.25mmol)溶于THF(100mL)中，并且在室溫下攪拌。滴加甲磺酰氯(1.67mL,21.52mmol)，并且將反應(yīng)在室溫下攪拌6小時(shí)。將THF蒸發(fā)并且將粗品溶于EtOAc(lOOmL)中并且用水(lOOmL)、1NHCl(2x100mL)和鹽水(100mL)洗滌，并且干燥(MgS04)。將溶劑真空除去，并且將粗制物質(zhì)用快速色譜(己烷:EtOAc)純化，得到乙酯。將得到的乙酯溶于二噁烷(50mL)中，并且在室溫下攪拌。加入溶于水(20mL)中的LiOH.H2O(1.00mg，24mmol)，并且攪拌反應(yīng)物直至乙酯消失(通過TLC和LCMS監(jiān)測(cè))。將溶劑真空除去，并且將粗制物質(zhì)在EtOAc(50mL)和1NHC1(50mL)之間分配。將水層用EtOAc(2x50mL)萃取并且將合并的有;M目用1MNaHSO4(2x50mL)和鹽水(50mL)洗滌，并且用MgS04干燥。將溶劑蒸發(fā)，并且將粗制物質(zhì)通過快速色傳(EtOAc:己烷梯度)純化，得到參考化合物7，為白色粉末。參考化合物89)Me一S一Nii、參考化合物7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>參考化合物8使用類似于參考化合物7的制備中所述的方法由D-高環(huán)己基丙氨酸乙酯鹽酸鹽開始制備該化合物。參考化合物9<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>使用類似于參考化合物始制備該化合物。參考化合物10<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>參考化合物10在參考化合物10的反應(yīng)流程圖中，試劑和糾是(a)Cbz-OSu，Et3N,THF，水，76%;(b)Hoveyda-Grubbs復(fù)分解催化劑，7V-Boc-4-亞甲基派啶，DCM，40DC,47%。10-B:將D-烯丙甘氨酸(2.07g，18.011111101)和^(千基氧基羰基#^)-琥珀酰亞胺(Cbz-OSu)(4.49g,18.0mmol)加入含有THF(60mL)和水(20niL)的圓底燒瓶中。將混合物在室溫下攪拌并且加入Et3N(l(UmL,72.0mmol)，并且將反應(yīng)在室溫下攪拌過夜。將該澄清的溶液用EtOAc(200mL)稀釋，用1NHCl(3xl00mL)和鹽水(lxl00mL)洗滌；并且經(jīng)MgS04干燥。將溶劑真空蒸發(fā)，得到10-B，為白色固體，其未經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>參考化合物97的制備中所述的方法由3-^苯基丙氨酸開參考化合物10:在氮?dú)鈿夥障?，將無水二氯甲烷(4mL，0.2M)通過注射器加入至10-B(193mg，0.766mmol，1.0當(dāng)量)和Hoveyda-Grubbs第二代復(fù)分解催化劑(l，3-二-(2，4，6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亞基)二氯(鄰-異丙氧基苯基亞曱基)釕II二氯化物)(98mg,0.115mmol，15mol。/o)中。通過注射器加入N-Boc-4-亞曱基哌咬(604mg,3.06mmol，4.0當(dāng)量)，并且在反應(yīng)器上安裝回流冷凝器并且加熱至40^達(dá)12小時(shí)。LC/MS顯示反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物直接通過自動(dòng)硅膠純化(0-100%在己烷中的乙酸乙酯)來純化，得到參考化合物IO,為深綠色油狀物。MSm/z422.3(M-Boc+1)。參考化合物11厶u參考化合物11使用類似于參考化合物10的合成中所采用的方法完成用亞甲基環(huán)己烷的2-D的交叉復(fù)分解反應(yīng)。使用類似于2-E的合成中所采用的方法完成接下來的Boc脫保護(hù)，得到參考化合物11。參考化合物12OH,N—"一12-A12-B12.c參考化合物1212-B:將Cbz-Asp國(guó)OMe(2.5g,8.89mmol)溶于DCM(50mL)中，加入二曱胺鹽酸鹽(797mg，9.78mmol)和HATU(3.72g，9.78mmol),并且將該溶液在室溫下攪拌10分鐘。然后加入DIEA(3.8mL，22.23mmol)，并且將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，并將粗制物質(zhì)經(jīng)快速色譜(己烷/EtOAc梯度洗脫)直接純化。在真空中除去溶劑得到參考化合物12-B012-C:向曱酯12-B(2.71g，8.8mmol)在100mL無水DCM中的冷(-78。C)溶液中滴加DiBAL-H的己烷(22mL，21.1mmol)的1M溶液，同時(shí)使反應(yīng)溫度保持在-70°C以下。將得到的溶液在-78。C下攪拌1小時(shí)，并向該反應(yīng)混合液中加入5。/。檸檬酸水溶液(60mL)。在室溫下將該混合液攪拌10分鐘然后分層。用DCM將7jC層萃取兩次。用水洗滌合并的DCM溶液，經(jīng)Na2S04干燥，并過濾。濃縮濾液，得到醛12-C，其未經(jīng)進(jìn)一步純化地直接用于下一步中。使用前述參考化合物1的制備(步驟c和d)中的方法完成12-C向參考化合物12的轉(zhuǎn)化。參考化合物1313-B(步驟a和b):使用前述參考化合物l-C的制備(步驟a和b)中的方法完成可商購(gòu)的Boc-Cha-OH向醛13-B的轉(zhuǎn)化。13-C:將溶于二惡烷(IOmL)中的醛13-B(5.06g，19.8mmol)加入亞硫酸氫鈉(2.07g，19.8mmol)在水中(10mL)的冷(-5。C)溶液中。加入溶于水(5mL)中的KCN(1.29g，19.8mmol)，并使該溶液逐漸地溫至室溫同時(shí)攪拌過夜。在真空中濃縮該反應(yīng)然后用水稀釋。用1MNaHS04將pH調(diào)節(jié)至5，并用EtOAc萃取水相。經(jīng)Na2S04干燥合并的有機(jī)層并濃縮。將粗制物質(zhì)經(jīng)快速色i普(己烷/EtOAc)純化，得到羥腈13-C。13-D:將羥腈13-C(3.61g，12.8mmol)溶于EtOAc(50mL)并用50%含水羥胺(lmL)處理。攪拌該溶液并加熱至60。C達(dá)2h,此時(shí)通過LCMS觀測(cè)到反應(yīng)完成。在真空中除去溶劑并將得到的粗制物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化地直接用于下一步中。13E:將羥基脒13-D(1,0g，3.17mmol)溶于在SMITHPROCESSVIALTM中的二嗜、烷(10mL)中。加入丙酸酐(0.45mL，3.49mmol)并將該溶液置于微^A應(yīng)器(例如，PersonalChemistryEmrysOptimizer微》^L^應(yīng)器)中并加熱至150。C達(dá)35分鐘。在真空中除去溶劑，并將粗制殘余物經(jīng)^色鐠(己烷/EtOAc作為洗脫劑)純化，得到S惡二唑13-E。參考化合物13:將13-E(515mg，1.46mmol)溶于二氯甲烷(30mL)。加入TFA(20mL)并將該反應(yīng)物在室溫下攪拌直至原料耗盡。在真空中除去溶劑，與己烷共沸，并蒸發(fā)至干燥，得到TFA鹽形式的產(chǎn)物，其未經(jīng)進(jìn)一步純化地使用。參考化合物140M二。H2N_NHN、N14-A14-B14.C參考化合物1414-B:將可商購(gòu)的環(huán)丙烷甲酰肼14-A(1.0，10.0mmol)加入原甲酸三曱酯(10mL)中。加入對(duì)甲苯磺酸一水合物(5mg),并攪拌該反應(yīng)混合液，并加熱回流過夜。在真空中除去溶劑并將得到的殘余物真空蒸餾，得到2-環(huán)丙基-[l，3，41嗜、二唑14-B。14-C:將2-環(huán)丙基-[l，3，45悉二唑14-B(257mg，2.33mmol)的無水THF(12mL)溶液冷卻至-78。C。滴加n-BuLi(1.6M在己烷中，1.46mL，2.33mmol)并將該反應(yīng)混合液在-78。C下攪拌40分鐘。加入BrOEt(603mg,2.33mmol),并使該反應(yīng)物溫至-45°C，然后在此溫度下攪拌90分鐘。加入醛13-B(595mg，2.33mmol)的THF(5mL)溶液，并4吏該反應(yīng)物溫至-20。C并再攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)用飽和NH4C1水溶液淬滅，然后用EtOAc萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取液，并經(jīng)MgS04干燥。在真空中除去溶劑，并將粗制殘余物經(jīng)硅膠色譜(己烷/EtOAc)純化，得到所需產(chǎn)物14-C。參考化合物14:使用前述參考化合物13的制備(步驟f)的方法完成14-C的脫保護(hù)。參者化合物15<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>15-A:在-65。C將正丁基鋰(2,5M在己烷中，19.8mL，49.7mmol)經(jīng)10分鐘加入三(甲疏基)甲坑(7.0mL，49.7mmol)在THF(135mL)中的攪拌的溶液中。20分鐘后沉淀形成，并經(jīng)30分鐘加入醛13-B(2.96g，11.6mmol)在THF(50mL)中的預(yù)冷(-65。C)溶液，加入后沉淀溶解。在-65。C繼續(xù)攪拌5小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合液傾入飽和的含水NH4C1/DCM(400mL,1:12)的攪拌的混合液中。分層并用DCM(3x100mL)萃取水層。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(MgS04)，過濾，并在真空中蒸發(fā)至干燥。經(jīng)硅膠色語純化粗制產(chǎn)物，得到油狀的15-A。15-B:將石危^R原酸酯15-A(0.988g，2.41mmol)在MeOH(46mL)和水(4mL)中的溶液與HgCl2(2.20g，8.10mmol)和HgO(0.658g，3.04mmol)攪拌3天。經(jīng)硅藻土過濾該反應(yīng)混合液，并用DCM(300mL)、MeOH(50mL)和水(50mL)洗滌殘余物。將濾液的兩相分離，并用DCM(3x50mL)萃取水層。用飽和NH4OAc水溶液(3x100mL)和飽和NH4C1水溶液(2x100mL)洗滌合并的有機(jī)相，干燥(Na2S04)，過濾并在真空中濃縮。經(jīng)硅膠色鐠得到的粗制油狀物，得到曱酯15-B。15-C:向攪拌的甲酯15-B(302mg，0.96mmol)在THF/MeOH/H20(20mL/5mL/5mL)中的溶液中加入粉末LiOH.H20(112mg,2.67mmol)。15分鐘后，加入1MNaHS04水溶液(8mL)，并減壓蒸發(fā)溶劑。用H20(10mL)稀釋殘余物，用1MNaHS04水溶液酸化至pH=2，并用EtOAc(3x10mL)萃取。用水和鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(Na2S04)，過濾并在真空中濃縮，得到酸15-C。15-D:將酸15-C(50mg，0.16mmol)溶于DCM(5mL)。加入N-羥基丙脒(15mg，0.16mmol)和DCC(34mg，0.16),并將該反應(yīng)物攪拌2小時(shí)。濾出二環(huán)己基脲副產(chǎn)物，并減壓除去溶劑。將殘余物溶于THF(5mL)中，轉(zhuǎn)移至SMITHPROCESSVIALTM，置于PersonalChemistryEmrysOptimizer微波反應(yīng)器中并加熱至180°C達(dá)10分鐘。在真空中除去溶劑并將粗制殘余物經(jīng)硅膠色譜(己烷/EtOAc作為洗脫劑)純化，得到嗜、二喳15誦D。參考化合物15:使用前述參考化合物13的制備(步驟f)中的方法完成15-D的脫保護(hù)。實(shí)施例11-D實(shí)施例11畫A:將TFA鹽形式的參考化合物1(895mg,3.34mmol)溶于CH2C12(50mL)。加入?yún)⒖蓟衔?(1.30g，3,67mmol)和HATU(1.40g，3.67mmol)，并將該溶液在室溫下攪拌10分鐘。通過注射器加入DIEA(1.5mL，8.4mmol)并將該反應(yīng)混合液在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，并將粗制物質(zhì)將快速色譜(100g二氧化硅，己烷/EtOAc梯度洗脫)直接純化。在真空中除去溶劑得到泡沫形式的l-A。l-B:將20mL的螺紋蓋小瓶中裝入攪拌棒和l-A(100mg，0.16mmol)。加入在DCM(5mL)中的TFA(20%)，蓋上小瓶，并將該溶液在室溫下攪拌l小時(shí)。在真空中除去溶劑，加入己烷然后在真空中再次蒸發(fā)至干燥，如需要重復(fù)該過程以共沸留下的TFA。將粗制物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化地直接用于下一步中。l-C:將TFA鹽形式的化合物l-B(99mg，0.16mmol)溶于CH2C12(5mL)中。加入?yún)⒖蓟衔?(55mg，0.152mmol)和HATU(67mg，0.176mmol),并將該溶液在室溫下攪拌10分鐘。通過注射器加入DIEA(0.1mL，0.19mmol)并將該反應(yīng)混合液在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，并將粗制物質(zhì)將快速色譜(己烷/EtOAc梯度洗脫)直接純化。在真空中除去溶劑得到泡沫形式的l-C。l-D:將醇1畫C(113mg，0.13mmol)溶于DCM(10mL)中并加入Dess-Martin過珙烷(66mg,0.15mmol)。將該反應(yīng)混合液在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，并將粗品經(jīng)快速色鐠純化，使用EtOAc:己烷梯度洗脫，得到白色泡沫狀的酮。實(shí)施例1:將酮1-D(59mg，0.069mmol)溶于DCM(1mL)中并加入在DCM(5mL)中的50%的TFA。將該反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)，并在真空中除去溶劑。將粗制物質(zhì)經(jīng)反相HPLC純化，并將溶劑凍干，得到白色粉末狀的實(shí)施例1。實(shí)施例2-74依據(jù)類似于實(shí)施例1中的方法，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的適合的酸和胺組分制備實(shí)施例2-74。實(shí)施例75實(shí)施例7575-A:在室溫下將(三曱基硅烷基)重氮甲烷(2M在乙醚中)溶液(4.7mL，9.45mmol)加入溶于CH2Cl2/MeOH5:1(25mL)中的參考化合物3(2.4g，8.6mmol)中。當(dāng)通過LCMS確定原料耗盡時(shí)，將反應(yīng)混合物用乙酸淬滅，真空濃縮，并且將粗制殘余物通過快速色譜(EtOAc:己烷梯度洗脫)純化，得到甲酯75-A,為澄清油狀物。75-B:在圓底燒瓶中裝入攪拌棒和75-A(510mg，1.38mmol)。加入在DCM(6mL)中的TFA(50%)，并且將溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。在真空中除去溶劑，加入己烷，然后再次真空蒸干，并且如果需要，重復(fù)該過程以將剩余的TFA共沸。將粗制物質(zhì)未經(jīng)進(jìn)一步純化地直接用于下一步中。75-C:將TFA鹽形式的脯氨酸75-B(1.07g，2.8mmol)溶于CH2C12(30mL)中；加入?yún)⒖蓟衔?(1.02g，2.7mmol)和HATU(1.12g，2.94mmol)，并將該溶液在室溫下攪拌10分鐘。通過注射器加入DIEA(1.5mL，8.4mmol)并將該反應(yīng)混合液在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，并將粗制物質(zhì)經(jīng)快速色諳(120g二氧化硅，己烷/EtOAc梯度洗脫)直接純化。在真空中除去溶劑得到油狀半固體形式的75-C。75-D:將甲酯75-C(1.15g，1.87mmol)溶于二嗝烷(15mL)中。將氫氧化鋰(84mg，2.00mmol)溶于7JC(5mL)中并且滴加至甲酯75-C的溶液中，并且將其在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮以除去二悉烷，然后用1MNaHS04酸化，用EtOAc萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并且經(jīng)MgS04干燥。將溶劑真空除去，得到羧酸75-D，為蠟狀固體。75畫E:將羧酸75-D(102mg，0.17mmol)溶于DCM(5mL)中。加入?yún)⒖蓟衔?3(62mg，0.17mmol)和HATU(71mg，0.19mmol)，并且將該混合液在室溫下攪拌10分鐘。然后加入DIEA(0.10mL,0.51mmol)，并且將該反應(yīng)混合液在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，將粗品重溶于EtOAc(15mL)中并且用1MHC1(2x15mL)洗滌，然后用飽和的NaHC03水溶液(2x15mL)和鹽水(15mL)洗滌，并且經(jīng)無水Na2S04干燥。將溶劑除去，并將殘余物經(jīng)快速色譜(己烷/EtOAc)純化，得到白色泡沫狀的所需產(chǎn)物。75-F:將醇75-E(94mg，0.11mmol)溶于DCM(10mL)中，并且加入Dess-Martin過缺烷(56mg，0.13mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空中除去溶劑，并且將粗品經(jīng)快速色語純化，應(yīng)用EtOAc:己烷梯度洗脫，得到白色泡沫狀的酮。實(shí)施例75:將酮75-F(60mg，0.072mmol)溶于DCM(1mL)中，并加入在DCM(5mL)中的50。/。TFA。將該反應(yīng)物在室溫下攪拌2小時(shí)，在真空中除去溶劑。將粗制物質(zhì)經(jīng)反相HPLC純化并凍干溶劑，得到白色粉末。實(shí)施例76-91依據(jù)類似于實(shí)施例1和75中的方法，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的適合的酸和胺組分制備實(shí)施例76-91。表1顯示了如實(shí)施例1-91中所述的式(l)化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>下的抑制作用而測(cè)定(l)天然的、分離的、純化的或重組的通道活化蛋白酶，應(yīng)用適合的生物化學(xué)試驗(yàn)形式，應(yīng)用Shipway等人;BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications2004;324(2):953畫63中描述的方法；和/或(2)在適合的分離細(xì)胞或融合上皮中的離子通道/離子轉(zhuǎn)運(yùn)功能，應(yīng)用Bridges等人；AmericanJournalofPhysiologyLungCellMolecularPhysiology2001;281(l):L16-23和Donaldson等人;JournalofBiologicalChemistry2002;277(10):8338-45中描述的方法。生物化學(xué)試驗(yàn)重組人前列腺蛋白酶和蛋白裂解酶以及豚鼠前列腺蛋白酶是根據(jù)Shipway等人；Biochem.andBiophys.Res.Commun.2004;324(2):953-63中描述的方法產(chǎn)生的。將重組酶在適合的多孔試驗(yàn)板例如96或384孔板上在包含試驗(yàn)化合物或載體的電解質(zhì)緩沖液中培養(yǎng)。在酶與化合物或載體混合后的指定時(shí)間，將適合的熒光狀底物加入至試驗(yàn)混合物中。當(dāng)?shù)孜锉换钚悦噶呀夂?，熒?用適合的熒光板讀數(shù)器測(cè)定)增加并且底物的轉(zhuǎn)換率(即酶活性)可以被定量，并且因此任何試驗(yàn)化合物的抑制作用可以被定量。試驗(yàn)化合物的作用表示為誘導(dǎo)酶活力降低50。/。的濃度(K0。通常，本發(fā)明化合物的Ki值可以為0.1nM至5(iM。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明化合物的Ki值可以為0.1nM至500nM;0.1nM至50nM;0.1nM至5nM;或0.1nM至0.5nM。在特定的實(shí)施例中，本發(fā)明化合物的值可以為0.1nM至0.5nM;0.5nM至5nM;5nM至50nM;50nM至500nM;或500nM至5|iM。在其它實(shí)施例中，化合物的Ki值可以小于0.1nM或大于5pM。上皮離子轉(zhuǎn)運(yùn)根據(jù)Danahay等人，Am.J.Physiol.LungCellMol.Physiol.2002;282(2):L226-36中描述的方法培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞。當(dāng)適當(dāng)分化(形成頂端空氣界面后14-21天)時(shí)，將上皮細(xì)胞用載體、抑肽酶(200pg/mL)或試驗(yàn)化合物處理卯分鐘。然后將上皮置于以上Danahay等人所描述的各室中，保持上皮頂端側(cè)的載體、抑肽酶或試驗(yàn)化合物的濃度。然后通過電壓鉗制上皮至零毫伏來測(cè)定短路電流(ISC)。然后通過將阿米洛利(IO^M)加入至上皮的頂端表面來測(cè)定阿米洛利敏感ISC。試驗(yàn)化合物的潛能表示為誘導(dǎo)阿米洛利敏感ISC的總的抑肽,感分量抑制50%的濃度。通常，本發(fā)明化合物的ICso值可以為1nM至10^M。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明化合物的ICso值可以為1nM至1^M;或尤其是1nM至100nM。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明化合物的ICso值可以為100nM至1jliM，或1^M至10pM。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明化合物的ICso值可以小于1nM或大于10pM。氣管電位差(體內(nèi))將豚鼠用短效的吸入麻醉劑例如氟烷和N20麻醉。在短效麻醉下，將口腔灌胃針通過口咽途徑插入至氣管中。一旦進(jìn)入氣管，將小體積(50-200pL)載體或試驗(yàn)化合物(在適合的基于水的稀釋劑中)灌入氣道中。然后動(dòng)物恢復(fù)并且變得完全能走動(dòng)?；蛘?，可以將試驗(yàn)化合物用氣霧劑或干粉施用于動(dòng)物。在給藥后的指定時(shí)間，將動(dòng)物用適合的麻醉劑例如氯胺酮和賽拉溱外科麻醉。然后將氣管暴露并且將塑料的瓊脂橋電極插入氣管腔中。將參比電極也插入動(dòng)物頸部的肌肉層中。然后應(yīng)用Takahashi等人，ToxicolApplPharmacol.1995;131(1):31-6中描述的適合的高阻抗伏特計(jì)測(cè)定氣管電位差。試驗(yàn)化合物的潛能表示為誘導(dǎo)氣管電位差的敏感分量降低50%的劑量。應(yīng)當(dāng)理解的是本文描述的實(shí)施例和實(shí)施方案僅用于說明目的，并且根據(jù)其的多種修飾和改變將給本領(lǐng)域技術(shù)人員以建議并且包括在本申請(qǐng)的主旨和范圍以及附屬權(quán)利要求的范圍內(nèi)。本文引用的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)為了所有目的并入本文作為參考。權(quán)利要求1.式(1)化合物或其可藥用鹽其中B是id="icf0002"file="A2008800044230002C2.tif"wi="37"he="28"top="77"left="43"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或(CR2)k-R5；Y是-SO2-、-NHCO-、-CO-或-O-C(＝O)-，條件是當(dāng)R2是C1-6烷基或苯基時(shí)，Y是SO2；J是任選地被取代的5-12元單環(huán)的或稠合的雜環(huán)，其包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O和S的雜原子；R1是H、任選地鹵代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C3-6炔基；氰基、OH、O(CR2)lR6、SO2R6、CONR(CR2)lR6、CONR7R8或id="icf0003"file="A2008800044230002C3.tif"wi="22"he="8"top="161"left="18"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中R7和R8與NR7R8中的N一起形成任選地被取代的5-7元雜環(huán)，其經(jīng)由氮原子連接于(CR2)m；或R1是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、芳基，或5-7元的雜環(huán)或不含氮原子雜芳基；或id="icf0004"file="A2008800044230002C4.tif"wi="28"he="10"top="180"left="160"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中環(huán)P是任選地被取代的5-7元碳環(huán)；R2是C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基或-L-(CR2)p-R5，其中L是O、S、S(O)、SO2或OC(O)；R3是C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基或-(CR2)l-R5；R4是H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、-CR＝CR-R6、C2-6炔基，或任選地被取代的5-12元碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基；或R4是id="icf0005"file="A2008800044230002C5.tif"wi="25"he="8"top="244"left="18"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中環(huán)E是任選地被取代的5-12元單環(huán)的或稠合的碳環(huán)或雜環(huán)；R5和R6獨(dú)立地是任選地被取代的5-12元碳環(huán)、雜環(huán)、芳基或雜芳基；或R6可以是C1-6烷基或C2-6鏈烯基；各R是H，或C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；l是0-6；且k、m、n和p獨(dú)立地是1-6。2.權(quán)利要求1的化合物，其中J是苯并噴、唑基；1，2，3-巧悉二喳-4-基；1，3，4-惡二唑畫2-基；1，2，4-嗜、二唑-3-基；嗜'峻并[4，5畫6p比咬-2-基、，嗯唑并[4，5-c吡啶-2-基、、瑪唑并[5，4<吡啶-2-基或？惡唑并5,4-6]吡啶-2-基，其各自任選地被d-6烷基、卣素、環(huán)丙基、S02(d.6烷基)、OCH3、S02N(CH3)2、S02NH2、CF3或一(CR2),-R5所取代。3.權(quán)利要求1的化合物，其中J是1，2，4-噁二唑-3-基，且任選地被d-6烷基、CF3或-(CR2)(m-R5所取代，其中R5是任選地被取代的苯基或Cw環(huán)烷基。4.權(quán)利要求1的化合物，其中W是Cw烷基、C2_6鏈烯基、C2_6炔基、CF3、OH、d_6烷氧基、O(芐基)、S02(d-6烷基)、CONH(d.6烷基)、CON(d-6烷基)2或氰基；或W是苯基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、四氫吡喃基、呋喃基、哌啶-2-酮基、吡咯烷-2-酮基、吡咯烷-l-羰基、e\_/或？V^，其各自任選地被囟素、d.6烷基、C2.6鏈烯基、C3.6炔基、氰基、OH或d.6烷氧基所取代。5.權(quán)利要求1的化合物，其中R"是d-6烷基、任選地被取代的苯基或-L-(CR2)P-R5，其中L是O。6.權(quán)利要求l的化合物，其中所述化合物具有式(2)的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中J是苯并哺、唑基；1，2，3-惡二唑-4-基；1，3，4-悉二唑-2-基；1，2，4-7惡二唑-3-基；，懲唑并[4,5-6吡啶-2-基、，懲唑并[4，5-c吡啶-2-基、，噪、唑并[5，4-c吡啶-2-基或？悉唑并[5，4-6吡啶-2-基，其各自任選地被d-6烷基、卣素、環(huán)丙基、S02(d-6烷基)、OCH3、S02N(CH3)2、S02NH2、CF3或一(CR2)廣R5所取代；Y是S。2或-O-C(=0)-;q是1-5;且R9是卣素、C,_6烷基或O(d"烷基)。7.權(quán)利要求6的化合物，其中J是1，2,4-鳴二唑-3-基，且任選地被C,-6烷基、CF3或-(CRz)(M-R5所取代，其中R5是任選地被取代的苯基或Qj-7環(huán)烷基。8.權(quán)利要求6的化合物，其中Y是S02且RS是d.6烷基。9，權(quán)利要求6的化合物，其中q是l-2且R"是自素。10.權(quán)利要求6的化合物，其中R"是任選地被取代的哌啶基、環(huán)己基、苯基、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>11.權(quán)利要求10的化合物，其中R"是哌啶基。12.權(quán)利要求l的化合物，其中所述化合物具有式(3)的結(jié)構(gòu)R5—(CR2)k-、O其中1^是<:3-7環(huán)烷基或苯基；q是1-5;且R9是鹵素、Cw烷基或0(d-6烷基)。13.權(quán)利要求11的化合物，其中RS是任選地被取代的環(huán)己基派咬基或噻唑基。14.權(quán)利要求1的化合物，其選自HIN0:S—N、Me'、H'0Me、HOMe'<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>15.藥物組合物，其包含治療有效量的依據(jù)權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)的化合物。16.用于抑制細(xì)胞或組織系統(tǒng)或哺乳動(dòng)物中的通道活化蛋白酶的權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)的化合物的應(yīng)用，其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶。17.權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)的化合物任選地與第二種治療劑組合在制備用于治療由細(xì)胞或組織系統(tǒng)或哺乳動(dòng)物中的通道活化蛋白酶所介導(dǎo)的病癥的藥物中的應(yīng)用；其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A，或嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶。18.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述病癥與液體經(jīng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)上皮的移動(dòng)或呼吸組織中粘液和痰的聚集或它們的組合有關(guān)。19.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述病癥是嚢性纖維化、原發(fā)性纖毛運(yùn)動(dòng)障礙、肺癌、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病、哮喘或呼吸道感染。20.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中所述第二種治療劑是抗炎藥、支氣管擴(kuò)張藥、抗組胺藥、止咳藥、抗生素或脫氧核糖核酸酶，且可在依據(jù)權(quán)利要求1-13中任意一項(xiàng)的化合物之前，與之同時(shí)或在其之后施用。21.權(quán)利要求16或17的應(yīng)用，其中所述通道活化蛋白酶是前列腺蛋白酶。22.斥又利要求16或17的應(yīng)用，其中所述細(xì)胞或組織系統(tǒng)包括支氣管上皮細(xì)胞。全文摘要本發(fā)明提供了用于調(diào)節(jié)通道活化蛋白酶的化合物和其藥物組合物，以及應(yīng)用這些化合物治療、改善或預(yù)防與通道活化蛋白酶有關(guān)的病癥的方法，所述通道活化蛋白酶非限制性地包括前列腺蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11(例如TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4(MTSP-2)、蛋白裂解酶(MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或嗜中性白細(xì)胞彈性蛋白酶。文檔編號(hào)A61K31/423GK101646437SQ200880004423公開日2010年2月10日申請(qǐng)日期2008年1月4日優(yōu)先權(quán)日2007年2月9日發(fā)明者A·K·查特吉,A·維達(dá)爾,B·布爾蘇拉亞,D·C·塔利申請(qǐng)人:Irm責(zé)任有限公司