專利名稱：：茶多酚的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及茶多酚的新用途，具體地，是在抗空腸彎曲桿菌的禽類藥物中的用途。屬獸藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejimi,Cj)是彎曲菌屬的一種，是革蘭氏陰性菌。1973年Dekeyser和Butzler從急性腸炎患者糞便分離到該菌并首次確定其致病性，后來發(fā)現(xiàn)可引起人和動(dòng)物的各種疾病，如人類發(fā)燒、急性腸炎和格林-巴利綜合征。近年報(bào)道中，空腸彎曲桿菌常在兒童引起腸道外感染，如敗血癥、腦膜炎、膽囊炎、腹膜炎、心內(nèi)膜炎、血栓性靜脈炎和反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等；此外，還可引起牛和綿羊流產(chǎn)，火雞的肝炎和藍(lán)冠病，童子雞和雛雞壞死性肝炎，雛雞、犢牛、仔豬的腹瀉等多種疾病。據(jù)調(diào)查，市場(chǎng)上出售的75%的活禽和80%的禽肉中含有彎曲桿菌，接觸或食用禽類產(chǎn)品被認(rèn)為是主要感染途徑。雞盲腸一旦被空彎曲菌感染，這些細(xì)菌可在長(zhǎng)達(dá)8周的實(shí)驗(yàn)期內(nèi)持續(xù)存在，且雞源性菌株經(jīng)傳代后毒力增強(qiáng)。由此可見，禽群空腸彎曲菌水平傳播，長(zhǎng)期帶菌是家禽隨日齡增長(zhǎng)，帶菌升高的主要原因。至今在食品安全問題上仍然是世界范圍內(nèi)關(guān)注的焦點(diǎn)，世界公共衛(wèi)生的重要課題之一。目前尚無預(yù)防彎曲桿菌感染的疫苗，對(duì)彎曲桿菌的預(yù)防和控制只能針對(duì)其流行環(huán)節(jié)和發(fā)病特點(diǎn)采取對(duì)癥治療的原則。國(guó)內(nèi)暴發(fā)彎曲桿菌主要采用中西結(jié)合的療法，如張立富等對(duì)發(fā)病嚴(yán)重的雞舍，每只雞肌肉注射氨芐青霉素5mg，連注35天，同時(shí)用氯霉素水溶液飲用7天。在每噸飼料中拌入500g強(qiáng)力霉素飼喂5天后，改用氯霉素飲水5天，配合使用中藥熟地、當(dāng)歸、白菊花、枸杞子各150g，茺蔚子、柴胡、青箱子、車前子、草決明、黃芩各100g，水煎供200只育成雞內(nèi)服，1天1劑，連用1015天，經(jīng)治療，3天后病情逐漸好轉(zhuǎn)，除個(gè)別嚴(yán)重病雞不能控制死亡外，l周后基本完全康復(fù)。廖瓊妃等對(duì)上杭縣舊縣鄉(xiāng)暴發(fā)雞弧菌性肝炎的診治種，采用環(huán)丙沙星原粉，按lg加15kg水進(jìn)行全群飲水，連用5d;挑出病雞或疑似病雞50羽，慶大霉素按l萬u/kg體重肌注，每天1次，連用3d，5d后病情得到控制。劉宗鳳等治療該病嚴(yán)重的孔雀，每只孔雀肌肉注射氮芐青霉素10mg，35天為1個(gè)療程；同時(shí)用氯霉素水溶液飲用7天，在每噸飼料中拌入500g強(qiáng)力霉素詞喂5天后，改用氯霉素飲歸、白菊花、枸杞子各100g，柴胡、青葙子、草決明、車前子、黃芩、茺蔚子各70g，煎水，供100只雛孔雀內(nèi)服，每天1劑，連用510天；經(jīng)治療，5天后病情逐漸好轉(zhuǎn)，除個(gè)別嚴(yán)重病例不能控制死亡夕卜，其余的10天基本恢復(fù)正常。彎曲桿菌的血清型多，目前彎曲桿菌有5660個(gè)血清型，而且人畜感染途徑仍然不完全清楚，預(yù)防和治療帶來了巨大的困難。單純靠疫苗不能完全控制，而且目前臨床上應(yīng)用的疫苗效果并不理想；噬菌體、細(xì)菌素的應(yīng)用還處于研究階段；抗生素治療極易產(chǎn)生耐藥性及藥物殘留；而天然藥物無殘留，不產(chǎn)生耐藥性，無毒性或毒性小。因此，很有必要大力開發(fā)天然藥物來預(yù)防和治療彎曲桿菌病，解決臨床耐藥性問題和食品安全問題。茶多酚(TeaPolyphenols)是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，包括黃垸醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等，其中以黃烷醇類物質(zhì)(兒茶素)最為重要。茶多酚又稱茶鞣或茶單寧，是形成茶葉色香味的主要成份之一，也是茶葉中有保健功能的主要成份之一。茶多酚用途廣泛，如清除活性氧自由基，阻斷脂質(zhì)過氧化過程，提高人體內(nèi)酶的活性，從而起到抗突變、抗癌癥的功效；防治高脂血癥引起的疾病增強(qiáng)微血管強(qiáng)韌性、降血脂，預(yù)防肝臟及冠狀動(dòng)脈粥樣硬化；降血壓；降血糖；防止腦中風(fēng)；抗血栓；提高人體的綜合免疫能力的功效，可用于通過調(diào)節(jié)免疫球蛋白的活性，間接實(shí)現(xiàn)提高人體綜合免疫能力；抗風(fēng)濕因子；抗菌抗病毒的功效，抗變態(tài)反應(yīng)和皮膚過敏反應(yīng)；舒緩腸胃緊張、防炎止瀉和利尿作用；促進(jìn)VC的吸收，防治壞血??；改進(jìn)人體對(duì)鐵的吸收，有效防止貧血；抗脂質(zhì)過氧化，預(yù)防衰老；對(duì)重金屬鹽和生物堿中毒的抗解作用；防輻射損傷，減輕放療的不良反應(yīng)；茶多酚具有優(yōu)異的抗輻射功能，茶多酚可吸收放射性物質(zhì)，阻止其在人體內(nèi)擴(kuò)散，被稱為天然的紫外線過濾器；茶多酚能夠阻擋紫外線和清除紫外線誘導(dǎo)的自由基，從而保護(hù)黑色素細(xì)胞的正常功能，抑制黑色素的形成；同時(shí)對(duì)脂質(zhì)氧化產(chǎn)生抑制，減輕色素沉著，防齲固齒和清除口臭的作用；助消化作用等等。目前茶多酚多用于人體疾病，用于動(dòng)物(獸藥)中的報(bào)道較少。人用藥與獸藥在使用上有較大的差別。獸藥是用來預(yù)防、治療和診斷動(dòng)物疾病的藥物。獸藥的使用對(duì)象是動(dòng)物，它包括所有的家禽、各種飛禽走獸等野生動(dòng)物和魚類等；它是專門為防治動(dòng)物的疾病而生產(chǎn)的，它適合于動(dòng)物的生理機(jī)能、代謝特點(diǎn)和一些特有的動(dòng)物病。獸藥的許多劑型，規(guī)定的用藥劑量，投藥的途徑與方法，都是根據(jù)動(dòng)物本身的特點(diǎn)而制定的。樹如許多藥物都是大劑量規(guī)格，是專門為某些大動(dòng)物生產(chǎn)的；某些藥物適合于混在水或飼料內(nèi)，只適合動(dòng)物使用。人用藥物是專門用于醫(yī)治人類疾病的藥。人與種屬不同的4各種動(dòng)物，對(duì)藥物的反應(yīng)差異有時(shí)很大。比如反芻動(dòng)物對(duì)某些麻醉藥比較敏感；牛對(duì)汞劑耐受性很低；禽類對(duì)呋喃類藥物易發(fā)生中毒；抗生素對(duì)草1^動(dòng)物易引起消化機(jī)能失常等等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了茶多酚的新用途，具體地，是在制備抗空腸彎曲桿菌的禽類藥物中的用途。本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該含有茶多酚的用于抗空腸彎曲桿菌的藥物組合物。本發(fā)明提供了茶多酚在制備抗空腸彎曲桿菌的禽類藥物中的用途。其中，所述的藥物是治療禽類細(xì)菌性痢疾的藥物。本發(fā)明還提供了一種抗空腸彎曲桿菌的藥物組合物，它是含有有效量的茶多酚為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。所述的茶多酚的有效劑量為0.01g7g/kg禽體重/天。進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的茶多酚的有效劑量為0.251.0g/kg禽體重/天。更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的茶多酚的有效劑量為0.5g/kg禽體重/天。其中，所述的制劑為散劑、片劑、丸劑、顆粒劑或膠囊劑。本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療禽類細(xì)菌性痢疾的藥物中的用途。本發(fā)明藥物組合物是通過開發(fā)天然藥物來預(yù)防和治療彎曲桿菌病及治療禽類細(xì)菌性痢疾，解決了臨床耐藥性問題和食品安全問題。以下通過具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)--步的詳細(xì)描述，但并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明治療禽類細(xì)菌性痢疾的藥物取茶多酚40g，加入藥學(xué)上常用的輔料，制備成散劑。將該制劑溶于水，按每天茶多酚的用量為0.5g/kg體重口服，連續(xù)用藥5天。以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物的抑菌試驗(yàn)一、材料器材平皿離心管(1.5ml、10ml)移液槍槍頭酒精燈打孔器三角瓶直尺酒精棉球普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基空腸彎曲桿菌基礎(chǔ)培基受試藥物茶多酚待測(cè)細(xì)菌空腸彎曲桿菌二、方法1、空腸彎曲桿菌含菌培養(yǎng)基的制備取布氏肉湯增菌液每100ml空腸彎曲菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入lml布氏肉湯增菌液，并加入5%綿羊血。分裝培養(yǎng)基，打孔備用。2、抑菌試驗(yàn)將茶多酚配成100mg/ml的溶液，5種液體樣品(29、35、37、41、44)直接用原樣篩選，分別加樣(約6()ul)，將平皿培養(yǎng)基置于37r:溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察結(jié)果。3、MIC測(cè)定首先對(duì)茶多酚對(duì)倍稀釋，做六個(gè)稀釋度使?jié)舛确謩e為50g/ml、25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml、1.5625mg/ml。分別加入制備好的培養(yǎng)基中。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果_抑菌圈直徑(mm)藥品編號(hào)_空腸彎曲桿菌茶多酚30備注加樣孔直徑為6mm最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定結(jié)果(mg/ml)藥品編號(hào)_空腸彎曲桿菌茶多酚3.125mg/ml上述試驗(yàn)證明，茶多酚對(duì)于空腸彎曲桿菌有明顯的抑制作用。試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物對(duì)細(xì)菌性痢疾的治療效果的臨床試驗(yàn)1目的評(píng)價(jià)茶多酚對(duì)細(xì)菌性痢疾的臨床用藥效果。2材料2.1茶多酚由實(shí)施例1的方法制備，為黃褐色干燥粉末；試驗(yàn)動(dòng)物來自成都新津商品雞場(chǎng)，為80日齡商品蛋雞，表現(xiàn)為腹瀉，糞便稀薄成黃綠色，但采食和飲水未見異常，隨機(jī)選擇病雞400只，并隨機(jī)分成高、中、低、不加藥物的對(duì)照組，每組100只。2.2試劑及儀器亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)、SS瓊脂培養(yǎng)基、超凈工作臺(tái)、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、干燥箱、振蕩培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋等。3方法3.1雞群空腸彎曲桿菌帶菌率的檢測(cè)3丄1采集肛門拭子1份，棉拭子直接用生理鹽水洗滌，提取DNA，用PCR直接檢測(cè)空腸彎曲桿菌帶菌率，PCR的反應(yīng)條件為94°C5min，94°Clmin，58°Clmin，72°Clmin，共35個(gè)循環(huán)，72°C10min結(jié)束反應(yīng)。3.2給藥方法3.2.1將茶多酚溶于水，每天按每公斤體重口服A組0.25g/kg;B:0.5g/kg;C:lg/kg;D:對(duì)照組，連續(xù)用藥5天。3.2.2用藥后雞群帶菌率的測(cè)定分別于用藥第5天采集各組肛門拭子用于測(cè)定空腸彎曲桿菌帶菌率。4結(jié)果4.1雞群對(duì)藥物的反應(yīng)A組用3天藥后，有31只腹瀉癥狀減輕，69只腹瀉癥狀很嚴(yán)重；用藥5天后，有46只腹瀉癥狀減輕，54只仍然有嚴(yán)重的腹瀉癥狀。B組雞群在用藥后第3天，有67只病雞腹瀉癥狀消失，精神狀態(tài)比用藥前有一定程度的好轉(zhuǎn)，用藥后第5天，僅ll只弱雞有輕度腹瀉，但病雞的精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)。C組用藥3天后，71只腹瀉癥狀減輕，29只有嚴(yán)重腹瀉，但采食量降低，精神沉郁，用藥5天后，有75只未出現(xiàn)腹瀉癥狀，但精神沉郁，采食量仍然沒有恢復(fù)，有7只出現(xiàn)死亡，19只腹瀉癥狀減輕。D組為不加藥的對(duì)照組，100只仍然見腹瀉，糞便稀薄成黃綠色，但采食和飲水未見異常。雞群用藥后的有效率見表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>茶多酚在每天0.251.0g/kg體重口服，連續(xù)用藥5天，治療細(xì)菌性痢疾，藥效明顯，且對(duì)雞群空腸彎曲桿菌帶菌率有一定程度的消除作用。試驗(yàn)例3茶多酚的毒理實(shí)驗(yàn)通過小鼠骨髓細(xì)胞微核遺傳毒性試驗(yàn)，高中低三個(gè)劑量組89.56、45.63、23.10mg/mL中，茶多酚中劑量組(1/4LD50)和高劑量組(1/2LD50)小鼠嗜多染紅細(xì)胞微核率較陰性對(duì)照組有顯著性差異，并且隨著劑量的增加，對(duì)小鼠的遺傳毒性也相應(yīng)的增加，存在劑量一效應(yīng)關(guān)系，但其微核率少于環(huán)磷酰胺的微核率，說明該中藥制劑有對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞一定的遺傳毒性，但小于環(huán)磷酰胺的遺傳毒性。茶多酚制劑對(duì)小鼠精子畸形影響的檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果可知，茶多酚組精子畸變率高于陰性對(duì)照組精子畸變率，經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)法檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(其顯著水平cx=0.05)。但是因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)組所選劑量范圍內(nèi)并未出現(xiàn)隨染毒劑量的增加精子畸變率升高的劑量反應(yīng)關(guān)系，所以依照小鼠精子畸形試驗(yàn)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB15193[1].07-2003)不能判定茶多酚為致精子畸變陽性物。試驗(yàn)組和對(duì)照組畸變精子各型構(gòu)成較為一致，均以無定型和無鉤形為主。茶多酚小鼠半數(shù)致死量的測(cè)定報(bào)告，以茶多酚的劑量為1280mg/kg、2560mg/kg、5000mg/kg、10000mg/kg、15000mg/kg做為預(yù)實(shí)驗(yàn)劑量。結(jié)果1280mg/kg、2560mg/kg劑量組的小鼠全部成活，5000mg/kg、10000mg/kg、15000mg/kg劑量組的小鼠全部死亡。小白鼠的死亡高峰出現(xiàn)在灌胃后的34h。該茶多酚的半數(shù)致死量為3577.7mg/kg，95%可信限為3105.0mg/kg4122.4mg/kg。根據(jù)藥物的毒性分級(jí)，茶多酚屬于安全藥品。根據(jù)上述三個(gè)試驗(yàn)，茶多酚用于抑制彎曲桿菌病，治療禽類細(xì)菌性痢疾的有效劑量為0.01g7g/kg禽體重/天。在該劑量范圍內(nèi)，具有明顯的藥效，且能解決臨床耐藥性問題和食品安全問題。權(quán)利要求1、茶多酚在制備抗空腸彎曲桿菌的禽類藥物中的用途。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的藥物是治療禽類細(xì)菌性痢疾的藥物。3、一種抗空腸彎曲桿菌的藥物組合物，其特征在于它是含有有效量的茶多酚為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗空腸彎曲桿菌的藥物組合物，其特征在于:所述的茶多酚的有效劑量為0.01g7g/kg禽體重/天。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗空腸彎曲桿菌的藥物組合物，其特征在于:所述的茶多酚的有效劑量為0.251.0g/kg禽體重/天。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗空腸彎曲桿菌的藥物組合物，其特征在于:所述的茶多酚的有效劑量為0.5g/kg禽體重/天。7、根據(jù)權(quán)利要求3-6任一一項(xiàng)所述的抗空腸彎曲桿菌的藥物組合物，其特征在于所述的制劑為散劑、片劑、丸劑、顆粒劑或膠囊劑。8、權(quán)利要求3-7任一一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備治療禽類細(xì)菌性痢疾的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了茶多酚的新用途，用于治療禽類細(xì)菌性痢疾。本發(fā)明藥物組合物是通過開發(fā)天然藥物來預(yù)防和治療禽類細(xì)菌性痢疾，對(duì)彎曲桿菌病有抑制作用，解決了臨床耐藥性問題和食品安全問題。文檔編號(hào)A61P1/00GK101439035SQ200810181108公開日2009年5月27日申請(qǐng)日期2008年11月21日優(yōu)先權(quán)日2007年11月23日發(fā)明者劉海燕,琦康,敏李,丹肖,邊燕紅申請(qǐng)人:通威股份有限公司