專利名稱：一種測(cè)定茶多酚硬脂酸酯含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)定量檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種測(cè)定茶多酚硬脂酸酯含量的方法。
背景技術(shù)：
茶多酹(Green Tea Polyphenols, GTP)是一種性能十分優(yōu)異的純天然抗氧化劑，無毒副作用，具抑制細(xì)菌、抗氧化等性能，但茶多酚易溶于水而難溶于脂，因而直接將其用于抗油脂及高脂食品的氧化變質(zhì)便受到很大限制，茶多酚硬脂酸酯是茶多酚的硬脂酸氧?；a(chǎn)物，是脂溶性茶多酚的一種，與茶多酚一樣，茶多酚硬脂酸酯同樣具有抗氧化等廣泛的藥理作用，且各組分具有較強(qiáng)的協(xié)同作用。現(xiàn)有技術(shù)中有一種在植物油中檢測(cè)微量脂溶性茶多酚的方法，該方法首先以沒食子酸乙酯為標(biāo)準(zhǔn)品，采用酒石酸亞鐵比色法，以亞鐵離子為顯色劑，通過茶多酚類能與亞鐵離子形成紫藍(lán)色絡(luò)合物，測(cè)定脂溶性茶 多酚的含量，然后用已知含量的脂溶性茶多酚作為對(duì)照品，采用福林酚試劑氧化法，測(cè)定植物油中微量脂溶性茶多酚的含量。在實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下問題:相對(duì)于茶多酚的理化性質(zhì)，脂溶性茶多酚在組成、結(jié)構(gòu)、平均分子量、分子中鄰二酚羥基或連三酚羥基的數(shù)量和與亞鐵離子顯色的強(qiáng)度等均發(fā)生了較大的變化，在這種情況下，上述方法仍然采用沒食子酸乙酯與表沒食子兒茶素沒食子酸酯在相同質(zhì)量下與亞鐵離子顯色物吸光度的比值1.5，而且，上述方法是通過測(cè)定酚羥基的含量間接反映脂溶性茶多酚的含量，導(dǎo)致其測(cè)定結(jié)果偏低，不能直接得到脂溶性茶多酚的含量，而且該方法較為繁瑣，只適用于微量脂溶性茶多酚的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中不能準(zhǔn)確測(cè)定脂溶性茶多酚的含量的問題，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種測(cè)定茶多酚硬脂酸酯含量的方法。所述技術(shù)方案如下:本發(fā)明提供了一種測(cè)定茶多酚硬脂酸酯含量的方法，所述方法包括以下步驟:將對(duì)照品和供試品分別制備成對(duì)照品溶液和供試品溶液，所述對(duì)照品為茶多酚硬脂Ife酷；通過分別繪制所述對(duì)照品溶液和所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，獲得所述對(duì)照品溶液和所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)，并根據(jù)所述最大吸收波長(zhǎng)確定檢測(cè)波長(zhǎng)；繪制所述對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；采用紫外分光光度法測(cè)定所述供試品溶液的吸光度；將所述吸光度帶入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算所述供試品中茶多酚硬脂酸酯的含量。具體地，所述供試品為茶多酚硬脂酸酯或含有所述茶多酚硬脂酸酯的制劑，所述供試品溶液的溶劑為有機(jī)溶劑。具體地，通過所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)的方法為:所述供試品為所述茶多酚硬脂酸酯時(shí)，將所述茶多酚硬脂酸酯配制成每毫升含有所述茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的所述供試品溶液，以所述有機(jī)溶劑為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由所述紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為275nm。具體地，通過所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)的方法為:所述供試品為所述含有茶多酚硬脂酸酯的制劑時(shí)，取所述制劑適量，精密稱定，置于容器中，加適量所述有機(jī)溶劑，充分?jǐn)嚢瑁陔x心機(jī)3600rpm離心30min,分取上清液，并重復(fù)提取3次，合并所述上清液并過濾，將濾液移入容量瓶，用所述有機(jī)溶劑定容，配制成每毫升含有所述茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的所述供試品溶液，以制備所述供試品溶液的方法制備等質(zhì)量空白制劑提取液作為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由所述紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為275nm。具體地，所述對(duì)照品溶液的溶劑為所述有機(jī)溶劑。具體地，通過所述對(duì)照品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)的方法為:取所述茶多酚硬脂酸酯，用所述有機(jī)溶劑溶解，配制成每毫升含有所述茶多酹硬脂酸酯為0.04mg的所述對(duì)照品溶液，以所述有機(jī)溶劑為參比,在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到所述對(duì)照品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由所述紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為275nm。具體地，根據(jù)所述對(duì)照品溶液與所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)均為275nm，確定所述檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm誤差為±2nm。具體地，繪制所述對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程的方法為:取干燥的所述茶多酚硬脂酸酯，用所述有機(jī)溶劑溶解，配制成每毫升含有所述茶多酚硬脂酸酯分別為0，20，40，60，80和100 μ g的所述對(duì)照品溶液，以所述有機(jī)溶劑為參比，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并繪制所述對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由所述標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)計(jì)算得所述線性回歸方程為:Y=0.0085Χ+0.0142，其中，線性范圍為0-100 μ g/mL，確定系數(shù)R2為
0.9992，Y為所述對(duì)照品溶液的吸光度，X為所述對(duì)照品溶液的濃度。具體地，測(cè)定所述供試品溶液的吸光度的方法為:所述供試品溶液的濃度在線性回歸方程的線性范圍以內(nèi)，當(dāng)所述供試品為所述茶多酚硬脂酸酯時(shí)，以所述有機(jī)溶劑為參比；當(dāng)所述供試品為所述含有茶多酚硬脂酸酯的制劑時(shí)，以所述空白制劑提取液為參比，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定所述供試品溶液的吸光度。具體地，所述含有茶多酚硬脂酸酯的制劑為以所述茶多酚硬脂酸酯為主藥的凝膠齊U、霜?jiǎng)?、軟膏劑、涂劑、涂膜劑、膜劑和貼劑中的至少一種的藥物制劑。具體地，所述有機(jī)溶劑為無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、石油醚和二甲基亞砜中的至少一種。優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為無水乙醇、乙酸乙酯。本發(fā)明實(shí)施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是:本發(fā)明通過對(duì)茶多酚硬脂酸酯以及含有茶多酚硬脂酸酯的制劑進(jìn)行含量測(cè)定，避免通過測(cè)定酚羥基的含量間接反映茶多酚硬脂酸酯含量，這樣就無需加入顯色劑，避免了使用昂貴的標(biāo)準(zhǔn)品和昂貴的儀器設(shè)備條件，降低了成本， 而且本發(fā)明測(cè)定方法簡(jiǎn)單可行，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，易于推廣應(yīng)用，而且，本發(fā)明的測(cè)定方法也適用于含有茶多酚硬脂酸酯的制劑中有復(fù)雜共存成分存在時(shí)茶多酚硬脂酸酯的含量測(cè)定，其測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。


為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1是本發(fā)明提供的茶多酚硬脂酸酯在275nm波長(zhǎng)處的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；圖2是本發(fā)明提供的茶多酚硬脂酸酯的紫外波長(zhǎng)掃描圖；圖3是本發(fā)明實(shí)施例四提供的含有茶多酚硬脂酸酯凝膠劑的紫外波長(zhǎng)掃描圖；圖4是本發(fā)明實(shí)施例四提供的空白凝膠劑的紫外波長(zhǎng)掃描圖。
具體實(shí)施例方式
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為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明實(shí)施方式作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。本發(fā)明所用試劑均為分析純市售試劑。本發(fā)明提供的方法包括以下步驟:將對(duì)照品和供試品分別制備成對(duì)照品溶液和供試品溶液。通過分別繪制對(duì)照品溶液和供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，獲得對(duì)照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)，并根據(jù)最大吸收波長(zhǎng)確定檢測(cè)波長(zhǎng)。繪制對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算該標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。采用紫外分光光度法測(cè)定供試品溶液的吸光度。將吸光度帶入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算供試品中茶多酚硬脂酸酯的含量。具體如下:取茶多酚硬脂酸酯4mg，用無水乙醇溶解并定容至IOOmL,以無水乙醇為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，并由掃描后得到的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定275nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰。供試品為茶多酚硬脂酸酯或含有茶多酚硬脂酸酯的制劑，供試品溶液的溶劑為有機(jī)溶劑。具體地，有機(jī)溶劑為無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、石油醚和二甲基亞砜中的至少一種。本發(fā)明提供的供試品為茶多酚硬脂酸酯時(shí)，將茶多酚硬脂酸酯配制成每毫升含有茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的供試品溶液，具體地，取茶多酚硬脂酸酯4mg，用無水乙醇溶解并定容至IOOmL,以有機(jī)溶劑無水乙醇為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，如圖2所示，由該紫外波長(zhǎng)掃描圖確定供試品溶液在275nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰。本發(fā)明提供的供試品為含有茶多酚硬脂酸酯的制劑時(shí)，取該制劑適量，精密稱定，置于容器中，加適量有機(jī)溶劑無水乙醇，充分?jǐn)嚢?，于離心機(jī)3600rpm離心30min，分取上清液，并重復(fù)提取3次，合并上清液并過濾，將濾液移入容量瓶，用無水乙醇定容，配制成每毫升含有茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的供試品溶液，以制備該供試品溶液的方法制備空白制劑提取液作為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由該紫外波長(zhǎng)掃描圖確定供試品溶液在波長(zhǎng)275nm處有最大吸收峰。具體地，對(duì)照品為茶多酚硬脂酸酯，對(duì)照品溶液的溶劑為有機(jī)溶劑。具體地，通過對(duì)照品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)的方法為:取茶多酚硬脂酸酯，用有機(jī)溶劑溶解，配制成每毫升含有茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的對(duì)照品溶液，以有機(jī)溶劑為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到對(duì)照品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由紫外波長(zhǎng)掃描圖確定對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為275nm。根據(jù)對(duì)照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)均為275nm，則確定檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm誤差為±2nm，即在275nm誤差為±2nm范圍內(nèi)檢測(cè)有效。具體地，含有茶多酚硬脂酸酯的制劑為以茶多酚硬脂酸酯為主藥的凝膠劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、涂劑、涂膜劑、膜劑和貼劑中的至少一種的藥物制劑。繪制對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程的方法為:取干燥的茶多酚硬脂酸酯，用有機(jī)溶劑溶解，配制成每毫升含有茶多酚硬脂酸酯分別為0，20，40，60，80和100 μ g的對(duì)照品溶液，以有機(jī)溶劑為參比。具體地，取干燥的茶多酹硬脂酸酯50mg,用無水乙醇溶解并定容至IOOmL,分別取該溶液0，2，4，6，8和IOmL于5OmL容量瓶中，用無水乙醇定容，即得每毫升定容后的溶液含有茶多酚硬脂酸酯0，20，40，60，80和100 μ g的對(duì)照品溶液，以無水乙醇為參比，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并繪制對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示，由該標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)計(jì)算得線性回歸方程為:Y=0.0085Χ+0.0142，其中，線性范圍為O-1OOy g/mL，線性范圍為X的取值范圍，R2=0.9992，R2為確定系數(shù)，該R2值越接近I表示該線性回歸方程越可靠，Y為對(duì)照品溶液的吸光度，X為對(duì)照品溶液的濃度。測(cè)定供試品溶液 的吸光度的方法為:供試品溶液的濃度在線性回歸方程的線性范圍以內(nèi)，當(dāng)供試品為茶多酚硬脂酸酯時(shí)，以有機(jī)溶劑為參比；當(dāng)供試品為含有茶多酚硬脂酸酯的制劑時(shí)，以空白制劑提取液為參比，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定供試品溶液的吸光度。對(duì)照例茶多酚硬脂酸酯原料的含量測(cè)定茶多酚硬脂酸酯原料是以茶多酚為原料，酰化劑為硬脂酸酰鹵或硬脂酸酸酐時(shí)，制備的茶多酚硬脂酸酯。取干燥的茶多酚硬脂酸酯200mg，精密稱定，用無水乙醇溶解并定容至IOOmL，作為供試品溶液，取經(jīng)過100°c干燥Ih的沒食子酸乙酯lOOmg，精密稱定，用水溶解并定容至IOOmL,作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液；分別吸取10011^/1001^的標(biāo)準(zhǔn)品溶液2，4，6，8和IOmL于IOmL容量瓶中，用水定容至刻度，制備成每IOOmL含有沒食子酸乙酯20，40，60，80和IOOmg的溶液。測(cè)定:分別準(zhǔn)確吸取供試品溶液及各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各lmL，于IOmL比色管中，各加入三乙醇胺水溶液lmL，混勻，加入酒石酸鐵溶液5mL，加水定容至25mL，以空白試劑作為參比，于540nm波長(zhǎng)下，在Icm比色杯中比色。結(jié)果計(jì)算:茶多酹硬脂酸酯(％)=樣品相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品含量X 1.5X 100+樣品質(zhì)量。按式計(jì)算，茶多酚硬脂酸酯含量為41.63%。該法不足之處是:相對(duì)于茶多酚，在茶多酚硬脂酸酯的組成、結(jié)構(gòu)、平均分子量、分子中鄰二酚羥基或連三酚羥基的數(shù)量、與亞鐵離子顯色的強(qiáng)度等理化性質(zhì)均發(fā)生了較大變化的情況下，該對(duì)照例仍然采用沒食子酸乙酯與表沒食子兒茶素沒食子酸酯在相同質(zhì)量下與亞鐵離子顯色物吸光度的經(jīng)驗(yàn)比值即1.5，而且是通過測(cè)定酚羥基的含量間接反映茶多酚硬脂酸酯的含量，其測(cè)定結(jié)果偏低，不能直接測(cè)定茶多酚硬脂酸酯的含量。實(shí)施例一茶多酚硬脂酸酯原料的含量測(cè)定取茶多酚硬脂酸酯200mg，該樣品與對(duì)照例的樣品相同，精密稱定，置于50mL容量瓶中，用無水乙醇溶解并定容，精密量取該溶液ImL置于IOOmL容量瓶中，用無水乙醇定容，以無水乙醇為參比，按紫外分光光度法，在樣品配制2小時(shí)內(nèi)，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，其吸光度為0.3558，將吸光度代入上述線性回歸方程并計(jì)算含量。結(jié)果測(cè)得茶多酚硬脂酸酯含量為100.47%，本發(fā)明實(shí)施例提供的方法測(cè)得含量值與茶多酚硬脂酸酯的實(shí)際含量接近。實(shí)施例二茶多酚硬脂酸酯原料的含量測(cè)定取茶多酚硬脂酸酯50mg，精密稱定，置于50mL容量瓶中，用正丁醇溶解并定容，精密量取該溶液ImL置于IOOmL容量瓶中，用正丁醇定容，以正丁醇為參比，按紫外分光光度法，在樣品配制2小時(shí)內(nèi)，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，其吸光度為0.1000，將吸光度代入上述線性回歸方程并計(jì)算含量，結(jié)果測(cè)得茶多酚硬脂酸酯含量為100.92%，本發(fā)明實(shí)施例提供的方法測(cè)得含量值與茶多酚硬脂酸酯的實(shí)際含量接近。實(shí)施例三 茶多酚硬脂酸酯原料的含量測(cè)定取茶多酚硬脂酸酯10mg，精密稱定，置于IOOmL容量瓶中，用氯仿溶解并定容，以氯仿為參比，按紫外分光光度法，在樣品配制2小時(shí)內(nèi)，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，其吸光度為0.8798，將吸光度代入上述線性回歸方程并計(jì)算含量，結(jié)果測(cè)得茶多酚硬脂酸酯含量為101.84%，本發(fā)明實(shí)施例提供的方法測(cè)得含量值與茶多酚硬脂酸酯的實(shí)際含量接近。實(shí)施例四茶多酚硬脂酸酯凝膠劑的含量測(cè)定取標(biāo)示量為0.5%的茶多酚硬脂酸酯凝膠劑lg，精密稱定，置于燒杯中，加適量正己烷，充分?jǐn)嚢?，混合物于離心機(jī)3600rpm離心30min，分取上清液，重復(fù)提取3次，合并上清液，過濾，濾液移入IOOmL容量瓶中，用正已烷定容，即得供試品溶液；取等質(zhì)量空白凝膠劑，并按照制備供試品溶液的方法制備空白凝膠劑提取液，并作為參比；取供試品溶液，以制備的空白凝膠劑提取液作參比，按紫外分光光度法，在凝膠劑提取液配制2小時(shí)內(nèi)，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，其中，含茶多酚硬脂酸酯的凝膠劑的紫外波長(zhǎng)掃描圖如圖3所示，處理過的空白凝膠劑的紫外波長(zhǎng)掃描圖如圖4所示，其吸光度為0.4502，將吸光度代入上述線性回歸方程并計(jì)算茶多酚硬脂酸酯含量，該凝膠劑中茶多酚硬脂酸酯的含量為
0.5103%，本發(fā)明實(shí)施例提供的方法測(cè)得含量值與茶多酚硬脂酸酯的實(shí)際含量接近。實(shí)施例五茶多酚硬脂酸酯軟膏劑的含量測(cè)定取標(biāo)示量為2%的茶多酚硬脂酸酯軟膏劑10g，精密稱定，置于燒杯中，加適量乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢?，混合物于離心機(jī)3600rpm離心30min,分取上清液,重復(fù)提取3次,合并上清液，過濾，濾液移入IOOmL容量瓶中，用乙酸乙酯定容，精密量取該溶液ImL置于50mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容，即得供試品溶液；取等質(zhì)量空白軟膏劑，并按照制備供試品溶液的方法制備空白軟膏劑提取液，并作為參比；取供試品溶液，以制備的空白軟膏劑提取液作參t匕，按紫外分光光度法，在供試品溶液配制2小時(shí)內(nèi)，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，其吸光度為0.3593，將吸光度代入上述線性回歸方程并計(jì)算茶多酚硬脂酸酯含量，該凝膠劑中茶多酚硬脂酸酯的含量為2.0301%，本發(fā)明實(shí)施例提供的方法測(cè)得含量值與茶多酚硬脂酸酯的實(shí)際含量接近。需要說明的是，在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，有機(jī)溶劑采用無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿和正已烷，但是在其它實(shí)施例中，也可以采用環(huán)己烷、石油醚或二甲基亞砜，由實(shí)驗(yàn)可知，當(dāng)有機(jī)溶劑采用無水乙醇、正丁醇、氯仿、正己烷、環(huán)己烷、石油醚或二甲基亞砜時(shí)，獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)與前述實(shí)施例基本相同；同樣地，在本發(fā)明提供的實(shí)施例中采用茶多酚棕櫚酸酯為主藥的凝膠劑和軟膏劑，但是在其他實(shí)施例中，采用茶多酚棕櫚酸酯為主藥的霜?jiǎng)⑼縿?、涂膜劑、膜劑或貼劑作為供試品，獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)與前述實(shí)施例基本相同。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替`換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定茶多酚硬脂酸酯含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: 將對(duì)照品和供試品分別制備成對(duì)照品溶液和供試品溶液，所述對(duì)照品為茶多酚硬脂酸酷； 通過分別繪制所述對(duì)照品溶液和所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，獲得所述對(duì)照品溶液和所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)，并根據(jù)所述最大吸收波長(zhǎng)確定檢測(cè)波長(zhǎng)； 繪制所述對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程； 采用紫外分光光度法測(cè)定所述供試品溶液的吸光度； 將所述吸光度帶入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算所述供試品中茶多酚硬脂酸酯的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述供試品為茶多酚硬脂酸酯或含有所述茶多酚硬脂酸酯的制劑，所述供試品溶液的溶劑為有機(jī)溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，通過所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)的方法為:所述供試品為所述茶多酚硬脂酸酯時(shí)，將所述茶多酚硬脂酸酯配制成每毫升含有所述茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的所述供試品溶液，以所述有機(jī)溶劑為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,得到所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由所述紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為275nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，通過所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)的方法為:所述供試品為所述含有茶多酚硬脂酸酯的制劑時(shí)，取所述制劑適量，精密稱定，置于容器中，加適量所述有機(jī)溶劑，充分?jǐn)嚢瑁陔x心機(jī)3600rpm離心30min，分取上清液，并重復(fù)提取3次，合并所述上清液并過濾，將濾液移入容量瓶，用所述有機(jī)溶劑定容，配制成每毫升含有所述茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的所述供試品溶液，以制備所述 供試品溶液的方法制備等質(zhì)量空白制劑提取液作為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由所述紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為275nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述對(duì)照品溶液的溶劑為所述有機(jī)溶劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，通過所述對(duì)照品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)的方法為:取所述茶多酚硬脂酸酯，用所述有機(jī)溶劑溶解，配制成每毫升含有所述茶多酚硬脂酸酯為0.04mg的所述對(duì)照品溶液，以所述有機(jī)溶劑為參比，在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，得到所述對(duì)照品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖，由所述紫外波長(zhǎng)掃描圖確定所述對(duì)照品溶液的最大吸收波長(zhǎng)為275nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，根據(jù)所述對(duì)照品溶液與所述供試品溶液的最大吸收波長(zhǎng)均為275nm,確定所述檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm誤差為±2nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，繪制所述對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程的方法為:取干燥的所述茶多酚硬脂酸酯，用所述有機(jī)溶劑溶解，配制成每毫升含有所述茶多酚硬脂酸酯分別為0，20，40，60，80和IOOyg的所述對(duì)照品溶液，以所述有機(jī)溶劑為參比，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并繪制所述對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由所述標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)計(jì)算得所述線性回歸方程為:Y=0.0085Χ+0.0142，其中，線性范圍為0-100 μ g/mL,確定系數(shù)R2為0.9992，Y為所述對(duì)照品溶液的吸光度，X為所述對(duì)照品溶液的濃度。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，測(cè)定所述供試品溶液的吸光度的方法為:所述供試品溶液的濃度在線性回歸方程的線性范圍以內(nèi)，當(dāng)所述供試品為所述茶多酚硬脂酸酯時(shí)，以所述有機(jī)溶劑為參比；當(dāng)所述供試品為所述含有茶多酚硬脂酸酯的制劑時(shí)，以所述空白制劑提取液為參比，于275nm波長(zhǎng)處測(cè)定所述供試品溶液的吸光度。
10.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的方法，其特征在于，所述含有茶多酚硬脂酸酯的制劑為以所述茶多酚硬脂酸酯為主藥的凝膠劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、涂劑、涂膜劑、膜劑和貼劑中的至少一種的藥物制劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求2、3或4所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為無水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、正 已 烷、環(huán)己烷、石油醚和二甲基亞砜中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測(cè)定茶多酚硬脂酸酯含量的方法，屬于化學(xué)定量檢測(cè)領(lǐng)域。所述方法包括將對(duì)照品和供試品分別制備成對(duì)照品溶液和供試品溶液；通過分別繪制所述對(duì)照品溶液和所述供試品溶液的紫外波長(zhǎng)掃描圖確定檢測(cè)波長(zhǎng)；繪制所述對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程；測(cè)定所述供試品溶液的吸光度；將所述吸光度帶入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算所述供試品中茶多酚硬脂酸酯的含量。本發(fā)明通過對(duì)茶多酚硬脂酸酯以及含有茶多酚硬脂酸酯的制劑進(jìn)行含量測(cè)定，避免通過測(cè)定酚羥基的含量間接反映茶多酚硬脂酸酯含量，這樣就無需加入顯色劑或氧化劑，避免了使用昂貴的標(biāo)準(zhǔn)品和昂貴的儀器設(shè)備條件，降低了成本，而且測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N21/33GK103234932SQ20131010962
公開日2013年8月7日 申請(qǐng)日期2013年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月29日
發(fā)明者張濤, 田永強(qiáng), 陸茜, 艾永循, 徐德 申請(qǐng)人:江漢大學(xué)