專利名稱：黃珠子草中有效成分短葉蘇木酚及8,9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的提取分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥的提取、分離方法，具體涉及一種黃珠子草中有
效成分短葉蘇木酚及8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的提取分離方法。
背景技術(shù)：
黃珠子草為大戟科葉下珠屬植物黃珠子草(尸力^7朋^M 67/z pJe;r Retz.)的全草，具有平肝、清熱、利水、解毒之功效，用于治療腸炎、 肝炎、尿路感染、無名腫痛等。黃珠子草對(duì)乙肝病毒有很強(qiáng)的殺滅作用和 保護(hù)肝損傷的作用，實(shí)驗(yàn)證明，黃珠子草中的短葉蘇木酚和8， 9-單環(huán)氧 短葉蘇木酚是它的主要活性成分。
由于短葉蘇木酚和8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚在植物體中含量較低，所 以提取分離是富積有效成分，提高藥材藥效減少副作用的主要方法之一。 提取分離過程中在盡可能的保留有效成分的前提下，簡(jiǎn)化提取分離步驟， 減少成本，是由藥材轉(zhuǎn)換為藥用原料的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡(jiǎn)單，提取率高的黃珠子草中有效成分 短葉蘇木酚和8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的提取方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是首先取黃珠子草藥材粉 碎成粗粉，然后加入粗粉重量的6 8倍的質(zhì)量濃度為50 70%的乙醇回流 提取2 3次，每次1 3小時(shí)，過濾，合并提取液，備用；將提取液減壓 回收乙醇至無醇味，再向其中加入回收后溶液體積3 4倍的蒸餾水形成 混懸液，用石油醚在60 9(TC下對(duì)混懸液提取至無色，去除石油醚后用乙酸乙酯提取，回收M幌到M珠子草的乙酸乙酯提取液；將黃珠子草的乙
酸乙酯提取液減壓回收溶劑，回收后的殘?jiān)拥攘康募状荚?0 5(TC下溶
解，活性炭脫色，拌樣，裝入硅膠柱進(jìn)行分離，用氯仿一甲醇(9:1 —1:9)
為洗脫劑梯度洗脫，采用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫液700mL，共收集
200份洗脫液；合并第68 102份的洗脫液，減壓回收溶劑至總量三分之
一，在4'C靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收溶劑，在回收后的殘?jiān)性?br> 加入等量的質(zhì)量濃度為60 70%的乙醇溶解用聚酰胺柱分離，再用分別用
質(zhì)量濃度為10%—100%的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫，采用TLC法檢測(cè)洗
脫液，每份洗脫液600mL，共收集110份洗脫液；合并第37 61份的洗脫
液，濾過，回收乙醇，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇(9:1—1:9)為洗
脫劑梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶，得淡黃色粉末短葉蘇木酚；合并第72 95
份的洗脫液，濾過，減壓回收溶劑，在回收的殘?jiān)屑尤氲攘康募状既芙猓?br> 拌樣，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇(9:1—1:9)為洗脫劑梯度洗脫，
用甲醇重結(jié)晶，得黃色粉末8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚。
本發(fā)明采用乙醇提取，硅膠柱分離，利用短葉蘇木酚和8， 9-單環(huán)氧
短葉蘇木酚的極性不同進(jìn)行分離，大大節(jié)約時(shí)間和能源。而且提取的短葉
蘇木酚和8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚可作為制藥生產(chǎn)的對(duì)照品或原料也可以
用其單成分制藥。


圖1是本發(fā)明提取的短葉蘇木酚及8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的純度檢
査圖，其中l(wèi)是短葉蘇木酚，2是8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1，首先取黃珠子草藥材粉碎成粗粉，然后加入粗粉重量的7 倍的質(zhì)量濃度為70%的乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，過濾，合并提取液，備用；將提取液減壓回收乙醇至無醇味，再向其中加入回收后溶液體 積3倍的蒸餾水形成混懸液，用石油醚在8(TC下對(duì)混懸液提取至無色，去 除石油醚后用乙酸乙酯提取，回收溶劑得到含黃珠子草的乙酸乙酯提取 液；將黃珠子草的乙酸乙酯提取液減壓回收溶劑，回收后的殘?jiān)拥攘康?甲醇在45。C下溶解，活性炭脫色，拌樣，裝入硅膠柱進(jìn)行分離，用氯仿一 甲醇(9:1—1:9)為洗脫劑梯度洗脫，采用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫 液700mL，共收集200份洗脫液；合并第68 102份的洗脫液，減壓回收 溶劑至總量三分之一，在4i:靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收溶劑，在 回收后的殘?jiān)性偌尤氲攘康馁|(zhì)量濃度為66%的乙醇溶解用聚酰胺柱分 離，再用分別用質(zhì)量濃度為10%—100%的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫，采 用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫液600mL，共收集110份洗脫液；合并第 37 61份的洗脫液，濾過，回收乙醇，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇 (9:1—l:9)為洗脫劑梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶，得淡黃色粉末短葉蘇木酚； 合并第72 95份的洗脫液，濾過，減壓回收溶劑，在回收的殘?jiān)屑尤?等量的甲醇溶解，拌樣，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇(9:1 — 1:9)為 洗脫劑梯度洗脫，用甲醇重結(jié)晶，得黃色粉末8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚。
實(shí)施例2，首先取黃珠子草藥材粉碎成粗粉，然后加入粗粉重量的8 倍的質(zhì)量濃度為50%的乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，過濾，合并提取
液，備用；將提取液減壓回收乙醇至無醇味，再向其中加入回收后溶液體 積3. 5倍的蒸餾水形成混懸液，用石油醚在9(TC下對(duì)混懸液提取至無色， 去除石油醚后用乙酸乙酯提取，回收溶劑得到含黃珠子草的乙酸乙酯提取 液；將黃珠子草的乙酸乙酯提取液減壓回收溶劑，回收后的殘?jiān)拥攘康?甲醇在40。C下溶解，活性炭脫色，拌樣，裝入硅膠柱進(jìn)行分離，用氯仿一 甲醇(9:1—1:9)為洗脫劑梯度洗脫，采用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫 液700mL，共收集200份洗脫液；合并第68 102份的洗脫液，減壓回收 溶劑至總量三分之一，在4。C靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收溶劑，在回收后的殘?jiān)性偌尤氲攘康馁|(zhì)量濃度為60%的乙醇溶解用聚酰胺柱分 離，再用分別用質(zhì)量濃度為10%—100%的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫，采 用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫液600mL，共收集110份洗脫液；合并第 37 61份的洗脫液，濾過，回收乙醇，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇
(9:1 —l:9)為洗脫劑梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶，得淡黃色粉末短葉蘇木酚; 合并第72 95份的洗脫液，濾過，減壓回收溶劑，在回收的殘?jiān)屑尤?等量的甲醇溶解，拌樣，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇(9:1 — 1:9)為 洗脫劑梯度洗脫，用甲醇重結(jié)晶，得黃色粉末8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚。
實(shí)施例3，首先取黃珠子草藥材粉碎成粗粉，然后加入粗粉重量的6 倍的質(zhì)量濃度為60%的乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，過濾，合并提取 液，備用；將提取液減壓回收乙醇至無醇味，再向其中加入回收后溶液體 積4倍的蒸餾水形成混懸液，用石油醚在6(TC下對(duì)混懸液提取至無色，去 除石油醚后用乙酸乙酯提取，回收溶劑得到含黃珠子草的乙酸乙酯提取 液；將黃珠子草的乙酸乙酯提取液減壓回收溶劑，回收后的殘?jiān)拥攘康?甲醇在5(TC下溶解，活性炭脫色，拌樣，裝入硅膠柱進(jìn)行分離，用氯仿一 甲醇(9:1 — 1:9)為洗脫劑梯度洗脫，采用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫 液700mL，共收集200份洗脫液；合并第68 102份的洗脫液，減壓回收 溶劑至總量三分之一，在4。C靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收溶劑，在 回收后的殘?jiān)性偌尤氲攘康馁|(zhì)量濃度為70%的乙醇溶解用聚酰胺柱分 離，再用分別用質(zhì)量濃度為10%—100%的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫，采 用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫液600mL,共收集110份洗脫液；合并第 37 61份的洗脫液，濾過，回收乙醇，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇
(9:1—l:9)為洗脫劑梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶，得淡黃色粉末短葉蘇木酚; 合并第72 95份的洗脫液，濾過，減壓回收溶劑，在回收的殘?jiān)屑尤?等量的甲醇溶解，拌樣，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇(9:1—1:9)為 洗脫劑梯度洗脫，用甲醇重結(jié)晶，得黃色粉末8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚。短葉蘇木酚及8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的結(jié)構(gòu)解析與鑒定 短葉蘇木酚及8, 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的結(jié)構(gòu)解析
化合物I (短葉蘇木酚)、化合物II (8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚)
黃色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp〉30(TC，難溶于丙酮、氯仿、甲醇，可溶 于二甲亞砜中，三氯化鐵反應(yīng)顯藍(lán)色，示含有酚羥基。
IR(KBr)cm、 3400示具有0H， 1700， 1685為C=0的吸收峰，1625示 具有不飽和鍵OC， 1600、 1548、 1502為芳環(huán)的特征吸收峰，2930， 1445 示具有亞甲基一CH2—結(jié)構(gòu)。
'H-NMR(DMS0-d6) Sppm: 7. 28處有一尖銳單峰，為苯環(huán)上質(zhì)子的特征 信號(hào)，積分1個(gè)H，示苯環(huán)為五取代結(jié)構(gòu)；9.85、 10.15、 10.90出現(xiàn)三個(gè) 寬單峰，各1個(gè)H，為酚羥基的特征峰，示存在三個(gè)酚羥基；3.16、 2.50 各為三重峰，J二1.6Hz,各2個(gè)H，為-CH2-CH2-中H的特征信號(hào)，并且與這 兩個(gè)碳相連的原子上不含H。
13C-腿(DMSO) S ppm:有12個(gè)碳信號(hào)，其中195. 48、 160. 42為兩個(gè) 羰基碳的特征譜線；107.76 149.10為典型的烯碳信號(hào)區(qū)，示含有8個(gè)烯 碳；23.71、 32.85為飽和碳信號(hào)。
將化合物I的"C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的短葉蘇木酚酸甲酯相對(duì)照， 它比短葉蘇木酚酸甲酯少一個(gè)羰基碳(172. 83ppm)和一個(gè)甲氧基碳 (52.18ppm)的信號(hào)，即少一個(gè)-COOCHa基團(tuán)。綜合以上分析，故鑒定該化合 物為短葉蘇木酚(brevifolin)。對(duì)其13C-NMR譜歸屬見表1。
表l化合物I、 n的"c-NMR數(shù)據(jù) C I II
1 160.42 160.42
2 144.83 144.853139. 89139. 90
3a115.31115. 33
4144. 06144. 08
5149. 10149. 10
6141.33141. 32
7107. 76107. 78
7a113. 08113. 10
823. 7223. 72
932. 8532. 86
10195. 48195. 47
1153.71
1248. 45
化合物n (8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚)
黃色粉末，mp〉30(TC，難溶于丙酮、氯仿，可溶于甲醇，三氯化鐵反 應(yīng)顯藍(lán)色，示含有酚羥基。
IR(KBr)cm、 3400示具有0H， 1700、 1685為O0的吸收峰，1625示 具有不飽和鍵OC， 1600、 1548、 1502為芳環(huán)的特征吸收峰，2919、 1450 示具有亞甲基-CH廠結(jié)構(gòu)。
iH-NMR(DMSO-d6) Sppm: 7. 25處有一尖銳單峰，為苯環(huán)上質(zhì)子的特征 信號(hào)，積分1個(gè)H，示苯環(huán)為五取代結(jié)構(gòu)；9.85、 10.15、 10.88出現(xiàn)三個(gè) 寬單峰，各1個(gè)H，為酚羥基的特征峰，示存在三個(gè)酚羥基；3.17、 3.23 各為三重峰，J=0. 8Hz，各1個(gè)H，為-CH-中H的特征信號(hào),并且與此相連的 原子上含2個(gè)H; 3.38、 3.32各為雙峰，J二l. 8Hz，各2個(gè)H，為-CH2-中H 的特征信號(hào)，并且與這兩個(gè)碳相連的原子上含1個(gè)H，可能的結(jié)構(gòu)為一五元環(huán)醚基。
13C_NMR(DMS0) 6 ppm:有14個(gè)碳信號(hào)，與上述化合物VDI的譜圖數(shù)據(jù) 相對(duì)照，多出了 48.45、 53.71ppm兩個(gè)峰，即多出兩個(gè)飽和碳，與文獻(xiàn)所 列標(biāo)準(zhǔn)圖譜數(shù)據(jù)對(duì)照，確定為與氧相連的兩個(gè)-CH2-。
綜合以上分析，故鑒定該化合物為8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚 (8， 9-印oxybrevifolin)。對(duì)其13C-兩R譜歸屬見表1。
短葉蘇木酚及8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的結(jié)構(gòu)鑒定
化合物I (短葉蘇木酚)
短葉蘇木酚黃色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp〉30(TC，難溶于丙酮、氯仿、 甲醇，可溶于二甲亞砜中，F(xiàn)eCl3反應(yīng)陽(yáng)性。 UV入咖隨nm: 278， 350， 364。
IR(KBr)cnf、 3400(0H)， 1700， 1685(C=0)， 1625(C=C)， 1600, 1548, 1502 (芳環(huán))，2930， 1445 (-CH2-)。
'H-NMR(DMS0-d6) S ppm: 7.28(1H， s， H-7) ， 10.90(1H， br， s， 4-0H)， 10.15(1H， br， s， 6-0H)， 9.85(1H， br， s， 5-0H) ， 3. 16(2H， t， J=1.6Hz， H-8)， 2.50(2H， t， J=1.6Hz， H-9)。
"C-NMR譜數(shù)據(jù)及歸屬見表1。
化合物II (8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚)
8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚黃色粉末，mp〉300'C，難溶于丙酮、氯仿， 可溶于甲醇，三氯化鐵反應(yīng)顯藍(lán)色。
IR(KBr)cnf、 3400(0H)， 1700， 1685(C=0)， 1625(C=C)， 1600， 1548， 1502(芳環(huán))，2919， 1450("CH2-)。
W-NMR(DMS0—d6) Sppm: 7.25(1H, s， H—7) ， 10.90(1H， br， s， 4—OH)， 10.15(1H， br， s， 6"0H)， 9.85(1H， br， s， 5-0H) ， 3.17(1H， t， J=0.8Hz，H—9) ， 3. 23(1H， t， J二l. 8Hz， H—8) ， 3. 38(2H， d， J=0. 8Hz， H—11) ， 3. 32(2H， d， J=L8Hz， H-12)。
"C-NMR譜歸屬見表1。
短葉蘇木酚及8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的純度測(cè)定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
色譜柱Thermo Hypersil-Keystone 0DS Cw柱(250畫X4. 6mm)，流動(dòng) 相甲醇-1%醋酸(35:65)，檢測(cè)波長(zhǎng)278nm，流速1. 0mL min—1，柱溫 室溫，進(jìn)樣量10uL。理論塔板數(shù)以8-9單環(huán)氧短葉蘇木酚峰計(jì)算應(yīng)不低 于2000。
對(duì)照品溶液的制備
分別精密稱取短葉蘇木酚及8， 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚對(duì)照品各5mg， 置50mL的量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取lmL， 置10mL量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。
供試品溶液的制備
分別精密稱取所制備的短葉蘇木酚及8, 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚化合物 5mg，分別置50mL的量瓶中，力Q 50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精 密吸取lmL，置10mL量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。
純度檢測(cè)
采用高效液相色譜法，對(duì)所制備的化合物進(jìn)行了純度檢測(cè)，面積歸一 化法計(jì)算，兩種化合物的純度都達(dá)到了98%以上，可作為原料藥供試驗(yàn)用。 結(jié)果見圖1。上述檢測(cè)方法適用于黃株子草生藥及有效成分短葉蘇木酚及 8, 9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的純度檢查和含量測(cè)定。
權(quán)利要求
1. 黃珠子草中有效成分短葉蘇木酚及8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的提取分離方法，其特征在于1)首先取黃珠子草藥材粉碎成粗粉，然后加入粗粉重量的6～8倍的質(zhì)量濃度為50～70％的乙醇回流提取2～3次，每次1～3小時(shí)，過濾，合并提取液，備用；2)將提取液減壓回收乙醇至無醇味，再向其中加入回收后溶液體積3～4倍的蒸餾水形成混懸液，用石油醚在60～90℃下對(duì)混懸液提取至無色，去除石油醚后用乙酸乙酯提取，回收溶劑得到含黃珠子草的乙酸乙酯提取液；3)將黃珠子草的乙酸乙酯提取液減壓回收溶劑，回收后的殘?jiān)拥攘康募状荚?0～50℃下溶解，活性炭脫色，拌樣，裝入硅膠柱進(jìn)行分離，用氯仿-甲醇(9∶1→1∶9)為洗脫劑梯度洗脫，采用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫液700mL，共收集200份洗脫液；4)合并第68～102份的洗脫液，減壓回收溶劑至總量三分之一，在4℃靜置24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收溶劑，在回收后的殘?jiān)性偌尤氲攘康馁|(zhì)量濃度為60～70％的乙醇溶解用聚酰胺柱分離，再用分別用質(zhì)量濃度為10％→100％的乙醇對(duì)分離液進(jìn)行梯度洗脫，采用TLC法檢測(cè)洗脫液，每份洗脫液600mL，共收集110份洗脫液；5)合并第37～61份的洗脫液，濾過，回收乙醇，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇(9∶1→1∶9)為洗脫劑梯度洗脫，甲醇重結(jié)晶，得淡黃色粉末短葉蘇木酚；6)合并第72～95份的洗脫液，濾過，減壓回收溶劑，在回收的殘?jiān)屑尤氲攘康募状既芙?，拌樣，再進(jìn)行硅膠柱分離，氯仿-甲醇(9∶1→1∶9)為洗脫劑梯度洗脫，用甲醇重結(jié)晶，得黃色粉末8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚。
全文摘要
黃珠子草中有效成分短葉蘇木酚及8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的提取分離方法，取黃珠子草粉粗用乙醇回流提取，提取液減壓回收乙醇后再加蒸餾水并用石油醚對(duì)其提取至無色，去除石油醚后用乙酸乙酯提取，得到含黃珠子草的乙酸乙酯提取液；將黃珠子草的乙酸乙酯提取液減壓回收溶劑得殘?jiān)跉堅(jiān)屑蛹状?，活性炭脫色，拌樣，裝入硅膠柱進(jìn)行分離，用氯仿-甲醇洗脫；采用乙醇溶解用聚酰胺柱分離，再用不同濃度的乙醇洗脫，收集不同濃度乙醇的洗脫液，再次用氯仿-甲醇洗脫甲醇重結(jié)晶，得短葉蘇木酚和8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚。本發(fā)明采用乙醇提取，硅膠柱分離，利用短葉蘇木酚和8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚的極性不同進(jìn)行分離，大大節(jié)約時(shí)間和能源。
文檔編號(hào)A61K36/47GK101298450SQ20081001804
公開日2008年11月5日 申請(qǐng)日期2008年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日
發(fā)明者李建軍, 李維鳳, 牛曉峰, 賀浪沖 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)