專利名稱：：延長EGF或TGF-α水平升高的癌癥患者的存活的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及通過用HER二聚化抑制劑(諸如Pertuzumab)治療癌癥患者來延長該患者的存活，其中所述患者產(chǎn)生升高水平的EGF或TGF-a。
背景技術(shù)：
：HER受體及針對它的抗體HER受體酪氨酸激酶家族是細(xì)胞生長、分化或存活的重要介質(zhì)。該受體家族包括四個(gè)截然不同的成員，包括表皮生長因子受體(EGFR、ErbBl或HER1)、HER2(ErbB2或pl85廳)、HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4或tyro2)。人們認(rèn)為由erbB1基因編碼的EGFR與人惡性腫瘤具有因果關(guān)系。具體而言，在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、頭癌、頸癌和胃癌以及成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中觀察到EGFR表達(dá)升高。EGFR受體表達(dá)升高常常與同一腫瘤細(xì)胞的EGFR配體即轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)的產(chǎn)量升高有關(guān)，通過自分泌刺激途徑導(dǎo)致受體活化。參見Baselga和Mendelsohn,Pharmac.Ther.64:127-154(1994)。針對EGFR或其配體TGF-a和EGF的單克隆抗體已經(jīng)在此類惡性肺瘤的治療中作為治療劑進(jìn)4亍了^平估。參見例如Baselga和Mendelsohn,見上文；Masui等，CancerResearch44:1002-1007(1984);Wu等,J.Clin.Invest.95:1897-1905(1995)。HER家族的第二個(gè)成員pl85腦最初鑒定為來自化學(xué)處理大鼠的成神經(jīng)細(xì)胞瘤的轉(zhuǎn)化基因的產(chǎn)物?；罨问降膎eu原癌基因源自所編碼蛋白質(zhì)跨膜區(qū)中的點(diǎn)突變(纈氨酸變成谷氨酸)。在乳腺癌和卵巢癌中觀察到neu的人同系物的擴(kuò)增，而且這與不良預(yù)后有關(guān)(Slamon等，Science235:177-182(1987);Slamon等，Science244:707-712(1989);美國專利第4，968，603號(hào))。迄今為止，對于人肺瘤尚無與neu原癌基因中類似的點(diǎn)突變的報(bào)道。在其它癌中也已觀察到HER2的過表達(dá)(頻繁但不均一，原因在于基因擴(kuò)增)，包括胃、子宮內(nèi)膜、唾液腺、肺、腎、結(jié)腸、曱狀腺、胰和膀胱的癌。參見King等，Science229:974(1985);Yokota等,Lancet1:765-767(1986);Fukushige等,Mol.CellBiol.6:955-958(1986);Guerin等，OncogeneRes.3:21-31(1988);Cohen等，6Oncogene4:81-88(1989);Yonemura等，CancerRes.51:1034(1991);Borst等，Gynecol.Oncol.38:364(1990);Weiner等，CancerRes.50:421-425(1990);Kern等，CancerRes.50:5184(1990);Park等，CancerRes.49:6605(1989);Zhau等,Mol.Carcinog.3:254-257(19卯);Aasland等，Br.J.Cancer57:358-363(1988);Williams等，Pathobiology59:46-52(1991);McCann等，Cancer65:88-92(1990)等等。HER2可在前列腺癌中過表達(dá)(Gu等，CancerLett.99:185-9(1996);Ross等，Hum.Pathol.28:827-33(1997);Ross等，Cancer79:2162-70(1997);Sadasivan等，J.Urol.150:126-31(1993》。針對大鼠pl85股"和人HER2蛋白質(zhì)產(chǎn)物的抗體已有記載。Drebin及其同事制備了針對大鼠neu基因產(chǎn)物p185neu的抗體。參見例如Drebin等,Cell41:695-706(1985);Myers等,Meth.Enzym.198:277-290(1991);WO94/22478。Drebin等，Oncogene2:273-277(1988)報(bào)道了與pl85,的兩個(gè)不同區(qū)域有反應(yīng)性的抗體混合物對植入棵小鼠的neu轉(zhuǎn)化的NIH-3T3細(xì)胞產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效果。還可參見1998年10月20日公告的美國專利第5，824,311號(hào)。Hudziak等，Mol.Cell.Biol.9(3):1165-1172(1989)記載了一組HER2抗體的生成，并使用人乳瘤細(xì)胞系SK-BR-3進(jìn)行了表征。將SK-BR-3細(xì)胞暴露于抗體后72小時(shí)通過細(xì)胞單層的結(jié)晶紫染色測定了相對細(xì)胞增殖。使用這種測定法，用稱作4D5的抗體獲得了最大抑制，它抑制細(xì)胞增殖達(dá)56%。該組其它抗體在這種測定法中以較低程度降低細(xì)胞增殖。還發(fā)現(xiàn)抗體4D5使過表達(dá)11ER2的乳瘤細(xì)胞系對TNF-a的細(xì)胞毒性作用敏感。還可參見1997年10月14日公告的美國專利第5，677,171號(hào)。Hudziak等人的文章中所討論的HER2抗體在以下文獻(xiàn)中進(jìn)行了進(jìn)一步表征Fendly等，CancerResearch50:1550-1558(1990);Kotts等，InVitro26(3):59A(1990);Sarup等，GrowthRegulation1:72-82(1991);Shepard等，J.Clin.Immunol.11(3):117-127(1991);Kumar等,Mol.Cell.Biol.ll(2):979-986(1991);Lewis等，CancerImmunol.Immunother.37:255-263(1993);Pietras等，Oncogene9:1829-1838(1994);Vitetta等,CancerResearch54:5301-5309(1994);Sliwkowski等,J.Biol.Chem.269(20):14661-14665(1994);Scott等，J.Biol.Chem.266:14300-5(1991);D'souza等，Proc.Natl.Acad.Sci.91:7202-7206(1994);Lewis等,CancerResearch56:1457-1465(1996);Schaefer等，Oncogene15:1385-1394(1997)。鼠HER2抗體4D5的重組人源化型式(huMAb4D5-8、rhuMAbHER2、Trastuzumab或HERCEPTIN⑧；美國專利第5,821，337號(hào))在臨床上對患有HER2過表達(dá)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌并已接受廣泛現(xiàn)有抗癌療法的患者起作用(Baselga等，J,Clin.Oncol.14:737-744(1996》。Trastuzumab在1998年9月25日得到了美國食品和藥品管理局的銷售許可，可用于治療其肺瘤過表達(dá)HER2蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者。以下文獻(xiàn)中記載了具有各種特性的其它HER2抗體Tagliabue等，Int.J.Cancer47:933-937(1991);McKenzie等，Oncogene4.543-548(1989);Maier等，CancerRes.51:5361-5369(1991);Bacus等，MolecularCarcinogenesis3:350-362(1990);Stancovski等,PNAS(USA)88:8691-8695(1991);Bacus等,CancerResearch52:2580-2589(1992);Xu等，Int.J.Cancer53:401-408(1993);WO94/00136;Kasprzyk等，CancerResearch52:2771-2776(1992);Hancock等，CancerRes.51:4575-4580(1991);Shawver等，CancerRes.54:1367-1373(1994);Arteaga等，CancerRes.54:3758-3765(1994);Harwerth等，丄Biol.Chem.267:15160-15167(1992);美國專利第5,783,186號(hào)；Klapper等,Oncogene14:2099-2109(1997)。同源性篩選使得HER受體家族的兩個(gè)其它成員得以鑒定HER3(美國專利第5，183,884和5，480,968號(hào)；Kraus等,PNAS(USA)86:9193-9197(淺9》和I正R4(歐洲專利申請第599，274號(hào);Plowman等，Proc.Natl,Acad.Sci.USA90:1746-1750(1993);Plowman等，Nature366:473-475(1993))。這兩種受體都在至少有些乳腺癌細(xì)胞系中表現(xiàn)出表達(dá)升高。HER受體在細(xì)胞中通常以多種組合出現(xiàn)，而且認(rèn)為異二聚化增加了對各種HER配體的細(xì)胞應(yīng)答的多樣性(Earp等，BreastCancerResearchandTreatment35:115-132(1995))。EGFR受到6種不同配體的結(jié)合表皮生長因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)、雙調(diào)蛋白(amphiregulin)、肝素結(jié)合表皮生長因子(HB-EGF)、卩細(xì)胞調(diào)節(jié)素(betacellulin)和上皮調(diào)節(jié)蛋白(epiregulin)(Groenen等，GrowthFactors11:235-257(1994))。由單一基因的可變剪接產(chǎn)生的一個(gè)調(diào)蛋白(heregulin)蛋白質(zhì)家族是HER3和HER4的配體。調(diào)蛋白家族包括a、卩和Y調(diào)蛋白(Holmes等，Science256:1205-1210(1992);美國專利第5,641，869號(hào)；Schaefer等，Oncogene15:1385-1394(1997》；neu分化因子(NDF);神經(jīng)膠質(zhì)生長因子(GGF);乙酰膽堿受體誘導(dǎo)活性(ARIA);及感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元衍生因子(SMDF)。有關(guān)綜述參見Groenen等，GrowthFactors11:235-257(1994);LemkeG.,Molec.&Cell.Ne腦sci.7:247-262(1996);Lee等，Pharm.Rev.47:51-85(1995)。最近鑒定了另外三種HER配體神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(neuregulin)-2(NRG-2)，據(jù)報(bào)道它結(jié)合HER3或HER4(Chang等，Nature387:509-512(1997);Carraway等，Nature387:512-516(1997));神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-3，它結(jié)合HER4(Zhang等，PNAS(USA)94(18):9562-7(1997));和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-4，它結(jié)合HER4(Harari等，Oncogene18:2681-89(1999))。HB-EGF、p細(xì)胞調(diào)節(jié)素和上皮調(diào)節(jié)蛋白也結(jié)合HER4。雖然EGF和TGFa不結(jié)合HER2，但是EGF刺激EGFR和HER2形成異二聚體，它在異二聚體中活化EGFR并導(dǎo)致HER2的轉(zhuǎn)磷酸。二聚化作用和/或轉(zhuǎn)磷酸作用似乎活化HER2酪氨酸激酶。參見Earp等，見上文。同樣，當(dāng)HER3與HER2共表達(dá)時(shí)，形成有活性的信號(hào)復(fù)合物，針對HER2的抗體能夠破壞此復(fù)合物(Sliwkowski等，J.Biol.Chem.269(20):14661-14665(1994))。另夕卜，在與HER2共表達(dá)時(shí)，HER3對調(diào)蛋白(HRG)的親和力升高到更高的親和力狀態(tài)。關(guān)于HER2-HER3蛋白質(zhì)復(fù)合物還可參見Levi等，JournalofNeuroscience15:1329-1340(1995);Morrissey等,Pro"Natl.Acad.Sci.USA92:1431-1435(1995);Lewis等，CancerRes.56:1457-1465(1996)。與HER3—樣，HER4與HER2形成有活性的信號(hào)復(fù)合物(Carraway和Cantley,Cell78:5-8(1994))。涉及HER抗體的專利出版物包括US5,677,171，US5,720,937，US5,720,954,US5,725,856，US5,770,195，US5,772,997，US6,165,464,US6,387,371,US6,399,063，US2002/0192211Al,US6,015,567,US6,333,169,US4,968,603，US5,821,337，US6,054,297,US6,407，213，US6,719,971,US6,800,738,US2004/0236078Al,US5,648,237，US6,267,958,US6,685,940，US6,821,515，WO98/17797，US6,127,526，US6,333,398，US6,797,814,US6,339,142，US6,417,335，US6,489,447,WO99/31140，US2003/0147884Al，US2003/0170234Al，US2004/0037823Al,US2005/0002928Al,US6,573,043,US6,905,830,US2003/0152987Al,WO99/48527,US2002/0141993Al，US2005/0244417Al，US6,949,245，US2003/0086924,US2004/0013667Al,WO00/69460,US2003/0170235Al,US7,041,292,WO01/00238，US2006/0083739,WO01/15730,US6,627,196Bl，US6,632,979Bl,WO01/00244，US2002/0001587Al，US2002/0090662Al,US6,984,494B2,WO01/89566，US2002/0064785,US2003/0134344,WO2005/099756，US2006/0013819，WO2006/07398Al，US2006/0018899，WO2006/33700,US2006/0088523,US2006/0034840,WO04/24866，US2004/0082047,US2003/0175845Al,WO03/087131,US2003/0228663,WO2004/008099A2,US2004/0106161,WO2004/048525，US2004/0258685Al，WO2005/16968,US2005/0038231Al,US5,985,553，US5,747,261，US4,935,341,US5,401,638,US5,604，107，WO87/07646，WO89/10412,WO91/05264,EP412,116Bl，EP494,135Bl,US5,824,311，EP444,181Bl,EP1,006,194A2，US2002/0155527Al，WO91/02062，US5,571,894,US5,939,531,EP502,812Bl，WO93/03741,EP554,441Bl,EP656,367Al,US5，288，477，US5,514,554，US5,587,458,WO93/12220，WO93/16185,US5,877,305，WO93/21319,WO93/21232，US5,856,089，WO94/22478,US5,910,486，US6,028,059,WO96/07321，US5,804,396,US5,846,749，EP711,565，WO96/16673，US5,783,404,US5,977,322，US6,512,097,WO97/00271，US6,270,765，US6,395,272,US5，837，243,WO96/40789,US5,783,186,US6,458,356,WO97/20858,WO97/38731,US6,214,388,US5,925,519,WO98/02463,US5,922,845,WO98/18489，WO98/33914，US5,994,071,WO98/45479，US6,358,682Bl,US2003/0059790，WO99/55367,WO01/20033，US2002/0076695Al,WO00/78347，WO01/09187,WO01/21192，WO01/32155，WO01/53354，WO01/56604,WO01〃6630，WO02/05791,WO02/11677,US6,582,919，US2002/0192652Al,US2003/0211530Al,WO02/44413，US2002/0142328,US6,602,670B2,WO02/45653，WO02/055106,US2003/0152572，US2003/0165840,WO02/087619,WO03/006509，WO03/012072，WO03/028638,US2003/0068318,WO03/041736,EP1,357,132,US2003/0202973,US2004/0138160，US5,705,157,US6,123,939,EP616,812Bl，US2003/0103973,US2003/0108545,US6,403,630Bl，WO00/61145,WO00/61185，US6,333,348Bl,WO01/05425,WO01/64246，US2003/0022918,US2002/0051785Al,US6,767,541，WO01/76586,US2003/0144252，WO01/87336，US2002/0031515Al，WO01/87334,WO02/05791，WO02/09754,US2003/0157097,US2002/0076408,WO02/055106，WO02/070008,WO02/089842和WO03/86467。用HER2抗體Trastuzumab治療的患者是基于HER2過表達(dá)/擴(kuò)增而選擇接受治療的。參見例如W099/31140(Paton等)、US2003/0170234Al(Hellmann,S.)和US2003/0147884(Paton等)；以及WO01/89566、US2002/0064785和US2003/0134344(Mass等)。關(guān)于檢測HER2過表達(dá)和擴(kuò)增的免疫組織化學(xué)(IHC)和熒光原位雜交(FISH)還可參見美國專利第6,573,043號(hào)；美國專利第6,905,830號(hào)；和US2003/0152987(Cohen等)。WO2004/053497和US2004/024815Al(Bacus等)，以及US2003/0190689(Crosby和Smith)涉及測定或預(yù)觀'J對Trastuzumab療法的響應(yīng)。US2004/013297A1(Bacus等)涉及測定或預(yù)測對ABX0303EGFR抗體療法的響應(yīng)。WO2004/000094(Bacus等)涉及測定對GW572016(—種小分子，EGFR-HER2酪氨酸激酶抑制劑)的響應(yīng)。WO2004/063709(Amler等)涉及用于測定對鹽酸Erlotinib(—種EGFR抑制劑)的每丈感性的生物標(biāo)志和方法。US2004/0209290和WO04/065583(Cobleigh等)涉及用于乳腺癌預(yù)后的基因表達(dá)標(biāo)志。還可參見W003/078662(Baker等)和W003/040404(Bevilacqua等).。WO02/44413(Danenberg，K.)涉及測定EGFR和HER2基因表達(dá)以決定化療方案?？苫贖ER活化或二聚化選擇患者來接受用Pertuzumab進(jìn)行的治療。涉及Pertuzumab及用其治療的患者的選擇的專利出版物包括美國專利第6,949,245號(hào)，WOO1/00245,US2005/0208043,US2005/0238640,US2006/0034842，和US2006/0073143(Adams等)；US2003/0086924(Sliwkowski,M.);US2004/0013667A1(Sliwkowski，M.);及WO2004/008099A2和US2004/0106161(Bossenmaier等)。Cronin等，Am.J.Path.164(1):35-42(2004)記載了檔案石蠟包埋組織中基因表達(dá)的測量法。Ma等，CancerCell5:607-616(2004)記載了使用取自檔案原代活檢的肺瘤組織切片的分離RNA通過基因寡核苷酸微陣列的基因概況分Pertuzumab(又稱為重組人單克隆抗體20^OMNITARG,Genetech，Inc,SouthSanFrancisco)是一類稱為HER二聚化抑制劑(HDI)的新作用劑中第一個(gè)問世的，它的功能是抑制HER2與其它HER受體(諸如EGFR/HER1、HER3和HER4)形成活性異二聚體的能力，而且不論HER2表達(dá)水平如何它都有活性。參見例如Harari和Yarden，Oncogene19:6102-14(2000);Yarden和Sliwkowski,NatRevMolCellBiol2:127-37(2001);Sliwkowski,NatStructBiol10:158-9(2003);Cho等,Nature421:756-60(2003);Malik等,ProAmSocCancerRes44:176-7(2003)。已經(jīng)證明，Pertuzumab對腫瘤細(xì)胞中HER2-HER3異二聚體形成的阻斷抑制關(guān)鍵性的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致肺瘤擴(kuò)增和存活降低(Agus等，CancerCell2:127-37(2002》。Pertuzumab已在臨床上作為單一藥劑進(jìn)行了才全驗(yàn)，其中在患有晚期癌癥的患者中進(jìn)行Ia期試驗(yàn)，在患有卵巢癌和乳腺癌以及肺癌和前列腺癌的患者中進(jìn)行n期試驗(yàn)。在I期研究中，對具有標(biāo)準(zhǔn)治療期間或之后發(fā)展的，不可治愈的、局部發(fā)展為晚期的、復(fù)發(fā)性的或轉(zhuǎn)移性的實(shí)體瘤的患者每三周靜脈內(nèi)給予Pertuzumab進(jìn)行治療。對Pertuzumab的耐受普遍較好。在響應(yīng)可評估的20名患者中有3名實(shí)現(xiàn)了腫瘤消退。兩名患者證實(shí)有部分響應(yīng)。在21名患者中有6名觀察到持續(xù)超過2.5個(gè)月的病情穩(wěn)定(Agus等，ProAmSocClinOnco22:192(2003))。在2.0-15mg/kg的劑量，Pertuzumab的藥動(dòng)學(xué)是線性的，平均清除的范圍是2.69-3.74mL/天/kg,平均終末消除半衰期的范圍是15.3_27.6天。沒有檢測到針對Pertuzumab的抗體(Allison等，ProAmSocClinOncol22:197(2003))。發(fā)明概述本發(fā)明提供了來自經(jīng)HER二聚化抑制劑Pertuzumab治療的人癌癥患者的臨床數(shù)據(jù)。對患者評估了多種血清生物標(biāo)志的表達(dá)水平，并評價(jià)了此類表達(dá)水平和響應(yīng)Trastuzumab治療的臨床益處之間的相關(guān)性。臨床數(shù)據(jù)表明，產(chǎn)生升高的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)水平的卵巢癌患者相對于具有正常EGF或TGF-a水平的患者在Pertuzumab治療響應(yīng)中顯示出存活益處。在另一項(xiàng)正在進(jìn)行的臨床試驗(yàn)中有類似的益處，該臨床試驗(yàn)包括鉑耐藥性卵巢癌、原發(fā)性腹膜癌和輸卵管癌患者。因而，在一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種用于延長癌癥患者存活的方法，包括以延長該患者存活的量給該患者施用HER二聚化抑制劑，其中該患者測定為產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)，且該癌癥選自卵巢癌、腹膜癌和輸卵管癌。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種用于延長卵巢癌、腹膜癌或輸卵管癌患者存活的方法，包括以延長該患者存活的量給該患者施用Pertuzumab，其中該患者測定為產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種用于延長卯巢癌、腹膜癌或輸卵管癌患者無進(jìn)展存活(PFS)的方法，包括以延長該患者PFS的量給該患者施用Pertuzumab,其中該患者的血清測定為其中具有升高水平的表皮生長因子(EGF)。在還一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種用于延長卵巢癌、腹膜癌或輸卯管癌患者無進(jìn)展存活(PFS)的方法，包括以延長該患者PFS的量給該患者施用Pertuzumab，其中該患者的血清測定為其中具有升高水平的表皮生長因子(EGF)和轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)。在一個(gè)別的方面中，本發(fā)明涉及一種為HER二聚化抑制劑治療選4奪患者的方法，包括如果該患者測定為產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a),則用該HER二聚化抑制劑治療該患者。對于所有的方面，在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，在患者血清中發(fā)現(xiàn)該患者具有升高水平的EGF。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在患者血清中發(fā)現(xiàn)該患者具有升高水平的TGF-a。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述HER二聚化抑制劑是HER2二聚化抑制劑。在還另一個(gè)實(shí)施方案中，所述HER二聚化抑制劑抑制HER異二聚化。在又一個(gè)的實(shí)施方案中，所述HER二聚化抑制劑是HER抗體，其可以例如結(jié)合選自EGFR、HER2和HER3的HER受體。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述抗體結(jié)合HER2，諸如HER2胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域II或HER2胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I、II、III間的連接處。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述HER二聚化抑制劑是Pertuzumab。所述癌癥可以是例如晚期(advanced)、頑固性(refractory)或復(fù)發(fā)性(recurrent)卵巢癌、鉑耐藥性(platinum-resistant)卵巢癌、原發(fā)性腹膜癌或輸卵管癌。HER二聚化抑制劑可以作為單一抗腫瘤劑或者與第二種治療劑聯(lián)合地施用于患者。所述第二種治療劑可以是例如化療劑、HER抗體、針對腫瘤相關(guān)抗原的抗體、抗激素化合物、保心藥、細(xì)胞因子、靶向EGFR的藥物、抗血管發(fā)生劑、酪氨酸激酶抑制劑、COX抑制劑、非類固醇抗炎藥、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、結(jié)合癌胚蛋白CA125的抗體、HER2疫苗、HER靶向療法、Raf或ras抑制劑、脂質(zhì)體多柔比星(doxorubicin)、托泊替康(topotecan)、紫杉烷(taxane)、雙重酪氨酸激酶抑制劑、TLK286、EMD-7200、治^f惡心的藥物、預(yù)防或治療皮滲的藥物或標(biāo)準(zhǔn)痤瘡療法、治療或預(yù)防腹瀉的藥物、降低體溫的藥物、和造血生長因子。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述第二種治療劑是化療劑，諸如抗代謝物類化療劑，例如吉西他濱(gemcitabine)、曲妥單抗(Trastuzumab)、Erlotinib或貝4戈單^t(Bevacizumab)。優(yōu)選在存活方面測量臨床益處，所述存活包括總體存活(overallsurvival,OS)和無進(jìn)展存活(progressionfreesurvival,PFS)，優(yōu)選PFS。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種試劑盒，該試劑盒包括HER二聚化抑制劑和包裝插頁或標(biāo)簽，其指出該HER二聚化抑制劑的臨床益處，如果待治療的患者產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a),其中該臨床益處優(yōu)選是延長的存活，特別是延長的PFS。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種宣傳HER二聚化抑制劑治療產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)的患者的方法，其中該宣傳可采用任何形式，包括書面材料的形式，諸如包裝插頁。附圖簡述圖1提供了HER2蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的示意圖，及其胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I-IV的氨基酸序列(分別為SEQIDNo.19-22)。圖2A和2B描繪了鼠單克隆抗體2C4的輕鏈可變(VO域(圖2A)和重鏈可變(VH)域(圖2B)的氨基酸序列(分別為SEDIDNo.l和2)、變體574/Pertuzumab的Vt和VH域的氨基酸序列(分別為SEDIDNo.3和4)、及人Vl和Vh共有框架(humk1,輕鏈k亞組I;humIII，重鏈亞組III)的氨基S吏序列(分別為SEDIDNo.5和6)的比對。星號(hào)標(biāo)明了Pertuzumab與鼠單克隆抗體2C4的可變域之間或者Pertuzumab與人框架的可變域之間的不同之處?；パa(bǔ)決定區(qū)(CDR)括在括號(hào)中。圖3A和3B顯示了Pertuzumab輕鏈(圖3A;SEQIDN0.13)和重鏈(圖3B;SEQIDNO.14)的氨基酸序列。CDR以粗體顯示。輕鏈和重鏈的計(jì)算分子量為23，526.22Da和49，216.56Da(半胱氨酸為還原形式)。碳水化合物模塊附著于重鏈的Asn299。圖4示意性的描繪了2C4在HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)處結(jié)合，從而阻止與活化的EGFR或HER3二聚化的情形。圖5描繪了HER2/HER3與MAPK和Akt途徑的偶聯(lián)。圖6比4交了Trastuzumab與Pertuzumab的多種活性。圖7A和7B分別顯示了Trastuzumab輕鏈(圖7A;SEQIDNo.15)和重鏈(圖7B;SEQIDNo.16)的氨基酸序列。圖8A和8B分別描繪了一種變體Pertuzumab輕鏈序列(圖8A;SEQIDNo.17)和一種變體Pertuzumab重鏈序列(圖8B;SEQIDNo.18)。圖9描繪了生物標(biāo)志HER2、TGF-a、雙調(diào)蛋白和EGF間的Spearman相關(guān)性。圖IO展示了標(biāo)志物的均值/相關(guān)性及臨床協(xié)變量(covariate)。圖11顯示了關(guān)于HER2、TGF-oc、雙調(diào)蛋白和EGF的使用無進(jìn)展存活的截留(cutoff)確定。圖12顯示了關(guān)于HER2、TGF-a、雙調(diào)蛋白和EGF的使用總體存活的截留確定。圖13反映了依照截留的患者分布。圖14描繪了由HER2標(biāo)志物的單變量分析中確定的3個(gè)標(biāo)志物截留所分開的KapLanMeirPFS和OS曲線。圖15描繪了由TGF-a標(biāo)志物的單變量分析中確定的3個(gè)標(biāo)志物截留所分開的KapLanMeirPFS和OS曲線。圖16描繪了由EGF標(biāo)志物的單變量分析中確定的3個(gè)標(biāo)志物截留所分開的KapL肌MeirPFS和OS曲線。優(yōu)選實(shí)施方案的詳述I.定義"存活，，(survival)指患者保持活著，包括總體存活(overallsurvival)和無進(jìn)展存活(progressfreesurvival)。"總體存活，，指保持一定時(shí)期諸如l年、5年等活著的患者，自it斷或治療時(shí)起。"無進(jìn)展存活"指保持活著且癌癥沒有進(jìn)展或惡化的患者。"延長存活"意味著使接受治療的患者的總體存活或無進(jìn)展存活相對于未接受治療的患者(即相對于未用HER二聚化抑制劑諸如Pertuzumab治療的患者)、或相對于不表現(xiàn)出HER活化的患者、和/或相對于用已獲批準(zhǔn)的抗肺瘤劑(諸如托泊替康或脂質(zhì)體多柔比星，在癌癥是卵巢癌時(shí))治療的患者有延長。在本文中"病情進(jìn)展前時(shí)間，，(timetodiseaseprogression)或"TTDP，，或"TTP"指自初始治療(例如使用HER二聚化抑制劑，諸如Pertuzumab)時(shí)起，到癌癥進(jìn)展(progress)或惡化(worsen)止的時(shí)間，一般以周或月計(jì)。這樣的進(jìn)展可以由熟練臨床醫(yī)師來評估。例如，在卯巢癌的情況中，可以通過REClST來評估進(jìn)展(參見例如Therasse等，J.Nat.CancerInst.92(3):205-216(2000》。"延長TTP"意味著使^接受治療的患者的病情進(jìn)展前時(shí)間相對于未接受治療的患者(即相對于未用HER二聚化抑制劑諸如Pertuzumab治療的患者)、或相對于不表現(xiàn)出HER活化的患者、和/或相對于用已獲批準(zhǔn)的抗腫瘤劑(諸如托泊替康或脂質(zhì)體多柔比星，在癌癥是卵巢癌時(shí))治療的患者有延長。"客觀響應(yīng)"(objectiveresponse)指可測量的響應(yīng)，包括完全響應(yīng)(CR)或部分響應(yīng)(PR)。"完全響應(yīng)"(completeresponse)或"CR"指癌癥的所有體征響應(yīng)治療而消失。這并不總是意味著癌癥已經(jīng)治愈。"部分響應(yīng)"(partialresponse)或"PR"指一處或多處肺瘤或損害的大小或體內(nèi)癌癥的程度響應(yīng)治療而減小。"HER受體"是屬于HER受體家族的受體蛋白質(zhì)酪氨酸激酶，包括EGFR、HER2、HER3和HER4受體。HER受體通常將包含胞外結(jié)構(gòu)域，它可結(jié)合HER配體和/或與另一HER受體分子二聚.化；親脂性跨膜結(jié)構(gòu)域；保守的胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域；和含有數(shù)個(gè)可磷酸化的酪氨酸殘基的羧基末端信號(hào)結(jié)構(gòu)域。HER受體可以是"天然序列"HER受體或其"氨基酸序列變體"。優(yōu)選的是，HER受體是天然序列人HER受體。術(shù)語"ErbBl"、"HER1"、"表皮生長因子受體"和"EGFR"在本文中可互換使用，指例如Carpenter等，Ann.Rev.Biochem.56:881-914(1987)中所披露的EGFR,包括其天然存在的突變體形式(例如Humphrey等，PNAS(USA)87:4207-4211(1990)中的刪除突變體EGFR)。erbBl指編碼EGFR蛋白質(zhì)產(chǎn)物的基因。表述"ErbB2"和"HER2"在本文中可互換使用，指例如Semba等，PNAS(USA)82:6497-6501(1985)和Yamamoto等，Nature319:230-234(1986)中記載的人HER2蛋白(Genebank編號(hào)X03363)。術(shù)語"erbB2"指編碼人ErbB2的基因，而"neu"指編碼大鼠pl85,的基因。優(yōu)選的HER2是天然序列人HER2。在本文中，"HER2胞外結(jié)構(gòu)域"或"HER2ECD"指HER2在細(xì)胞外的結(jié)構(gòu)域，或是錨定于細(xì)胞膜或是在循環(huán)中，包括其片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER2的胞外結(jié)構(gòu)域可包含4個(gè)結(jié)構(gòu)域"結(jié)構(gòu)域I"(大約第l-195位氨基酸殘基；SEQIDNO:19)、"結(jié)構(gòu)域n'，(大約第196-319位氨基酸殘基；SEQIDNO:20)、"結(jié)構(gòu)域in"(大約第320-488位氨基酸殘基;SEQIDNO:21)和"結(jié)構(gòu)域IV"(大約第489-630位氨基酸殘基；SEQIDNO:22)(殘基編號(hào)不包括信號(hào)肽)。參見Garrett等，Mol.Cell.11:495-505(2003);Cho等,Nature421:756-760(2003);Franklin等，CancerCell5:317-328(2004);Plowman等，Proc.Natl.Acad.Sci.90:1746-1750(1993),以及本文中的圖l。"ErbB3"和"HER3"指例如美國專利第5，183，884號(hào)和第5，4S0，968號(hào)及Kraus等，PNAS(USA)86:9193-9197(1989)中所披露的受體多肽。術(shù)語"ErbB4"和"HER4"指例如歐洲專利申請第599,274號(hào)；Plowman等，Proc.Natl.Acad.SciUSA90:1746-1750(1993);Plowman等，Nature366:473_475(1993)中所披露的受體多肽，包括其同等型(isoform)，例如l999年4月22日公布的W099/19488中所披露的。"HER配體，，指結(jié)合和/或活化HER受體的多肽。本文中特別感興趣的I正R配體是天然序列人HER配體，諸如表皮生長因子(EGF)(Savage等，J.Biol.Chem.247:7612-7621(1972));轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)(Marquardt等，Science223:1079-1082(1984));雙調(diào)蛋白(amphiregulin),也稱為施旺細(xì)胞瘤或角質(zhì)形成細(xì)胞自分泌生長因子(Shoyab等，Science243:1074-1076(1989);Kimura等，Nature348:257-260(19卯);Cook等,Mol.Cell.Biol.11:2547-2557(1991));(3細(xì)胞調(diào)節(jié)素(betacellulin)(Shing等，Science259:1604-1607(1993);Sasada等，Biochem.Biophys.Res.Commim.190:1173(1993));肝素結(jié)合表皮生長因子(HB-EGF)(Higashi拜a等,Science251:936-939(1991));上皮調(diào)節(jié)蛋白(epiregulin)(Toyoda等，J.Biol.Chem.270:7495-7500(1995);Komurasaki等,Oncogene15:2841-2848(1997));調(diào)蛋白(hereguin)(見下文)；神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(neuregulin)-2(NRG-2)(Carraway等，Nature387:512-516(1997));神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-3(NRG-3)(Zhang等，Proc.Natl.Acad.Sci.94:9562-9567(1997));神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-4(NRG-4)(Harari等，Oncogene18:2681-89(1999));和cripto(CR-1)(Kannan等，J.Biol.Chem.272(6):3330-3335(1997))。結(jié)合EGFR的HER配體包括EGF、TGF-ou雙調(diào)蛋白、卩細(xì)胞調(diào)節(jié)素、HB-EGF和上皮調(diào)節(jié)蛋白。結(jié)合HER3的HER配體包括調(diào)蛋白。能夠結(jié)合HER4的HER配體包括(3細(xì)胞調(diào)節(jié)素、上皮調(diào)節(jié)蛋白、HB-EGF、NRG-2、NRG-3、NRG-4和調(diào)蛋白。"調(diào)蛋白"(HRG)在用于本文時(shí)指由調(diào)蛋白基因編碼的多肽，如美國專利第5,641，869號(hào)或Marchionni等，Nature362:312-318(1993)中所披露的。調(diào)蛋白的例子包括調(diào)蛋白-a、調(diào)蛋白-pi、調(diào)蛋白-(32和調(diào)蛋白-(33(Holmes等，Science256:1205-1210(1992);美國專利第5,641,869號(hào))；neu分化因子(NDF)(Pdes等，Cell69:205-216(1992));乙酰膽堿受體誘導(dǎo)活性(ARIA)(Falls等,Cell72:801-815(1993》；神經(jīng)膠質(zhì)生長因子(GGF)(Marchionni等，Nature362:312-318(1993));感覺和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元衍生因子(SMDF)(Ho等，J.Biol.Chem.270:14523-14532(1995》；y-調(diào)蛋白(Schaefer等，Oncogene15:1385-1394(1997))。"HER二聚體"在本文中指包含至少兩個(gè)HER受體的非共價(jià)結(jié)合二聚體。在表達(dá)兩種或更多HER受體的細(xì)胞暴露于HER配體時(shí)可形成這樣的復(fù)合物，可通過免疫沉淀來分離并通過SDS-PAGE來分析，如例如Sliwkowski等，J.Biol.Chem.269(20):14661-14665(1994)中所記載的。其它蛋白質(zhì)，諸如細(xì)胞因子受體亞基(例如gpl30)可與二聚體結(jié)合。優(yōu)選的是，HER二聚體包含HER2。"HER異二聚體，，在本文中指包含至少兩個(gè)不同HER受體的非共價(jià)結(jié)合異二聚體，諸如EGFR-HER2、HER2-HER3或HER2-HER4異二聚體。"HER抑制劑"指干擾HER活化或功能的藥劑。HER抑制劑的例子包括HER抗體(例如EGFR、HER2、HER3或HER4抗體)；靶向EGFR的藥物；小分子HER拮抗劑；HER酪氨酸激酶抑制劑；HER2和EGFR雙重酪氨酸激酶抑制劑，諸如lapatinib/GW572016;反義分子(參見例如WO2004/87207);和/或結(jié)合下游信號(hào)分子諸如MAPK或Akt(見圖5)或干擾其功能的藥劑。優(yōu)選的是，HER抑制劑是結(jié)合HER受體的抗體或小分子。"HER二聚化抑制劑"指抑制HER二聚體或HER異二聚體形成的藥劑。優(yōu)選的是，HER二聚化抑制劑是抗體，例如在HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合HER2的抗體。本文中最優(yōu)選的HER二聚化抑制劑是Pertuzumab或MAb2C4。2C4對HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合示于圖4。HER二聚化抑制劑的其它例子包括結(jié)合EGFR并抑制其與一種或多種其它HER受體二聚化的抗體(例如EGFR單克隆抗體806，MAb806,它結(jié)合活化的或"未系留的"EGFR;參見Johns等，J.Biol.Chem.279(29):30375-30384(2004));結(jié)合HER3并抑制其與一種或多種其它HER受體二聚化的抗體；結(jié)合HER4并抑制其與一種或多種其它HER受體二聚化的抗體；肽二聚化抑制劑(美國專利第6,417，168號(hào))；反義二聚化抑制劑；等等。"HER2二聚化抑制劑"指抑制包含HER2的二聚體或異二聚體形成的藥劑。"HER抗體"指結(jié)合HER受體的抗體。任選的是，HER抗體還干擾HER活化或功能。優(yōu)選的是，HER抗體結(jié)合HER2受體。本文中特別感興趣的HER2抗體是Pertuzumab。HER2抗體的另一個(gè)例子是Trastuzumab。EGFR抗體的例子包括Cetuximab和ABX0303。"HER活化"指任何一種或多種HER受體的活化或磷酸化。通常，HER活化導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(例如由HER受體胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域引起的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，該激酶結(jié)構(gòu)域磷酸化HER受體或底物多肽中的酪氨酸殘基)。HER活化可由結(jié)合包含感興趣HER受體的HER二聚體的HER配體介導(dǎo)。結(jié)合HER二聚體的HER配體可活化二聚體中一種或多種HER受體的激酶結(jié)構(gòu)域，由此導(dǎo)致一種或多種HER受體中酪氨酸殘基的磷酸化和/或其它底物多肽諸如Akt或MAPK胞內(nèi)激酶中酪氨酸殘基的磷酸化。參見例如圖5。"磷酸化"指對蛋白質(zhì)諸如HER受體，或其底物添加一個(gè)或多個(gè)磷酸基團(tuán)。"抑制HER二聚化"的抗體指抑制或干擾HER二聚體形成的抗體。優(yōu)選的是，此類抗體在HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)處結(jié)合HER2。本文中最優(yōu)選的二聚化抑制性抗體是Pertuzumab或MAb2C4。2C4對HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合示于圖4。抑制HER二聚化的抗體的其它例子包括結(jié)合EGFR并抑制其與一種或多種其它HER受體二聚化的抗體(例如EGFR單克隆抗體806，19MAb806,它結(jié)合活化的或"未系留的"EGFR;參見Johns等，J.Biol.Chem.279(29):30375-30384(2004));結(jié)合HER3并抑制其與一種或多種其它HER受體二聚化的抗體；及結(jié)合HER4并抑制其與一種或多種其它HER受體二聚化的抗體。"比Trastuzumab更有效的阻斷配體對HER受體之活化"的抗體指比Trastuzumab更有效(例如功效提高至少約2倍)的降低或消除HER配體對HER受體之活化的抗體。優(yōu)選的是，此類抗體至少大約像鼠單克隆抗體2C4或其Fab片段或者像Pertuzumab或其Fab片段那樣有效的阻斷HER配體對HER受體之活化?？赏ㄟ^直接研究HER二聚體，或者通過評估由HER二聚化引起的HER活化或下游信號(hào)傳導(dǎo)，和/或通過評估抗體-HER2結(jié)合位點(diǎn)等來評估抗體阻斷配體對HER受體之活化的能力。用于篩選有能力比Trastuzumab更有效的抑制配體對HER受體之活化的抗體的測定法記載于Agus等，CancerCell2:127-137(2002)和美國專利第6,949，245號(hào)(Adams等)。僅作為例示，可測定以下各項(xiàng)對HER二聚體形成的抑制(參見例如Agus等，CancerCell2:127-137(2002)的附圖1A-B和美國專利第6,949，245號(hào))；表達(dá)HER二聚體的細(xì)胞中HER配體活化的降低(例如美國專利第6,949,245號(hào)和Agus等，CancerCell2:127-137(2002)的附圖2A-B);對HER配體結(jié)合表達(dá)HER二聚體的細(xì)胞的阻斷(例如美國專利第6,949,245號(hào)和Agus等，CancerCell2:127-137(2002)的附圖2E);在存在(或缺乏)HER配體時(shí)對表達(dá)HER二聚體的癌細(xì)胞(例如MCF7、MDA-MD-134、ZR-75-l、MD-MB-175、T-47D細(xì)胞)的細(xì)胞生長抑制(例如美國專利第6，949,245號(hào)和Agus等，CancerCell2:127-137(2002)的附圖3A-D);對下游信號(hào)傳導(dǎo)的抑制(例如對HRG依賴性AKT磷酸化的抑制或者對HRG依賴性或TGFa依賴性MAPK磷酸化的抑制)(例如美國專利第6，949,245號(hào)和Agus等，CancerCell2:127-137(2002)的附圖2C-D)。還可通過研究抗體-HER2結(jié)合位點(diǎn)來評估抗體是否抑制HER二聚化，例如通過評估與HER2結(jié)合的抗體的結(jié)構(gòu)或模型，諸如晶體結(jié)構(gòu)(參見例如Franklin等，CancerCell5:3H328(2004))。HER2上的"異二聚體結(jié)合位點(diǎn)"指在HER2與EGFR、HER3或HER4形成二聚體時(shí)，HER2胞外結(jié)構(gòu)域中與EGFR、HER3或HER4胞外結(jié)構(gòu)域中某區(qū)域接觸或形成介面的區(qū)域。已發(fā)現(xiàn)所述區(qū)域在HER2的結(jié)構(gòu)域II中。Franklin等，CancerCell5:317-32S(2004)。20HER2抗體可以比Trastuzumab更有效的(例如功效提高至少2倍)"抑制HRG依賴性AKT磷酸化"和/或抑制"HRG依賴性或TGFa依賴性MAPK磷酸化"(參見例如Agus等，CancerCell2:127-137(2002)和美國專利第6,949,245號(hào))。HER2抗體可以是像Pertuzumab那樣"不抑制HER2胞外結(jié)構(gòu)域切割"的抗體(Molina等，CancerRes.61:4744-4749(2001))。另一方面，Trastuzumab可抑制HER2胞外結(jié)構(gòu)域切割。"結(jié)合HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)的"HER2抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域II中的殘基(任選還結(jié)合HER2胞外結(jié)構(gòu)域的其它結(jié)構(gòu)域，諸如結(jié)構(gòu)域I和III中的殘基)，且至少在一定程度上可在空間上阻礙HER2-EGFR、HER2-HER3或HER2-HER4異二聚體的形成。Franklin等，CancerCell5:317-328(2004)表征了存放在RCSB蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(IDCodelS78)的HER2-Pertuzumab晶體結(jié)構(gòu)，圖解了結(jié)合HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)的例示性抗體。"結(jié)合HER2的結(jié)構(gòu)域II"的抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域II中的殘基和任選HER2的其它結(jié)構(gòu)域，諸如結(jié)構(gòu)域i和ni中的殘基。優(yōu)選的是，結(jié)合結(jié)構(gòu)域n的抗體結(jié)合her2的結(jié)構(gòu)域i、n和m之間的連接處。蛋白質(zhì)"表達(dá)"指基因中所編碼的信息轉(zhuǎn)換成信使RNA(mRNA),然后轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)。在本文中，"表達(dá)，，感興趣蛋白質(zhì)(諸如HER受體或HER配體)的樣品或細(xì)胞指其中測定出存在編碼該蛋白質(zhì)的mRNA或蛋白質(zhì)包括其片段的樣品或細(xì)胞。"聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)"或"PCR"技術(shù)在用于本文時(shí)一般指其中如1987年7月28日公告的美國專利第4,683，195號(hào)中所記載的，擴(kuò)增微量的核酸，RNA和/或DNA特定片段的規(guī)程。通常，需要獲知感興趣區(qū)域末端或以外的序列信息，從而可設(shè)計(jì)寡核苷酸引物；這些引物在序列上將與待擴(kuò)增模板的對立鏈相同或相似。兩條引物的5，末端核苷酸可與所擴(kuò)增物質(zhì)的末端一致。PCR可用于從總基因組DNA和由總細(xì)胞RNA轉(zhuǎn)錄的cDNA、噬菌體或質(zhì)粒序列等擴(kuò)增特定RNA序列、特定DNA序列。一般參見Mullis等，ColdSpringHarborSymp.Quant.Biol.51:263(1987);Erlich編，PCRTechnology,StocktonPress,NY,1989。在用于本文時(shí)，PCR視為用于擴(kuò)增核酸測試樣品的核酸聚合酶反應(yīng)方法的一個(gè)但非唯一的例子，包括使用已知核酸(DNA或RNA)作為引物并利用核酸聚合酶來擴(kuò)增或生成特定核酸片段，或者擴(kuò)增或生成與特定核酸互補(bǔ)的特定核酸片段。"定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)"或"qRT-PCR"指PCR的一種形式，其中在PCR^應(yīng)的每個(gè)步驟測量PCR產(chǎn)物的量。這種技術(shù)已經(jīng)記載f多份出版物，包括Cronin等，Am.J.Pathol.164(1):35-42(2004);Ma等，CancerCell.5:607-616(2004)。術(shù)語"微陣列"指可雜交陣列元素，優(yōu)選多核苷酸探針在基片上的有序排列。術(shù)語"多核苦酸"在以單數(shù)或復(fù)數(shù)使用時(shí)一般指任何多聚核糖核苷酸或多聚脫氧核糖核苷酸，可以是未經(jīng)修飾的RNA或DNA或者是經(jīng)過修飾的RNA或DNA。如此，例如，本文中所定義的多核苷酸包括^旦不限于單《連和雙鏈DNA、包含單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的DNA、單鏈和雙鏈RNA、及包含單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的RNA,包含DNA和RNA的雜合分子，它可以是單鏈的，或者更典型的是雙鏈的，或者包含單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)。另外，術(shù)語"多核苷酸"在用于本文時(shí)指包含RNA或DNA或RNA和DNA二者的三鏈區(qū)。此類區(qū)中的鏈可來自相同分子或來自不同分子。所述區(qū)可包含一種或多種分子的整個(gè)，但是更典型的是只包含有些分子的一個(gè)區(qū)。三股螺旋區(qū)的分子之一常常是寡核苷酸。術(shù)語"多核苷酸"明確包括cDNA。該術(shù)語包括包含一種或多種經(jīng)修飾堿基的DNA(包括cDNA)和RNA。如此，主鏈為穩(wěn)定性或其它原因而修飾的DNA或RNA也是"多核苷酸，，該術(shù)語在本文中的意圖所在。此外，包含罕見堿基諸如肌苦或經(jīng)修飾堿基諸如氚化堿基的DNA或RNA也包括在本文中所定義的術(shù)語"多核苷酸"內(nèi)。一般而言，術(shù)語"多核苷酸"涵蓋未修飾多核苷酸的所有化學(xué)、酶學(xué)和/或代謝修飾形式，以及病毒和細(xì)胞，包括簡單和復(fù)雜細(xì)胞的特征性的DNA和RNA的化學(xué)形式。術(shù)語"寡核苦酸"指相對較短的多核苷酸，包括但不限于單鏈脫氧核糖核普酸、單鏈或雙鏈核糖核苷酸、RNA:DNA雜合物、及雙鏈DNA。寡核苷酸，諸如單鏈DNA探針寡核苷酸，常常通過化學(xué)方法來合成，例如使用商品化的自動(dòng)化寡核芬酸合成儀。然而，寡核苷酸可通過多種其它方法來制備，包括體外重組DNA介導(dǎo)的技術(shù)和通過DNA在細(xì)胞和生物體中的表達(dá)。短語"基因擴(kuò)增"指通過它在特定細(xì)胞或細(xì)胞系中形成基因或基因片段的多個(gè)拷貝的過程。所復(fù)制區(qū)域(一段擴(kuò)增的DNA)常常稱為"擴(kuò)增子"。通常，所生成的信使RNA(mRNA)的量也按所表達(dá)特定基因生成的拷貝數(shù)的比例升高。雜交反應(yīng)的"嚴(yán)格性，，可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易的確定，而且通常根據(jù)探針長度、洗滌溫度和鹽濃度憑經(jīng)驗(yàn)計(jì)算。一般而言，較長的探針要求較高的溫度以正確退火，而較短的探針需要較低的溫度。雜交通常依賴于當(dāng)互補(bǔ)鏈存在于低于其解鏈溫度的環(huán)境中時(shí)變性DNA重新退火的能力。探針與可雜交序列之間的期望同源性程度越高，可使用的相對溫度也越高。結(jié)果，可推出較高相對溫度將趨向于使反應(yīng)條件更為嚴(yán)格，而較低溫度也就較不嚴(yán)格。關(guān)于雜交反應(yīng)嚴(yán)格性的其它細(xì)節(jié)和解釋，參見Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,WileyIntersciencePublishers,1995。"嚴(yán)格條件"或"高嚴(yán)格性條件"，如本文中所定義的，通常(1)采用低離子強(qiáng)度和高溫進(jìn)行洗滌，例如0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉，于50。C;(2)在雜交期間采用變性劑，諸如曱酰胺，例如50%(v/v)甲酰胺及0.1%牛血清清蛋白/0.1%Ficoll/0.1%聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸鈉緩沖液pH6.5及750mM氯化鈉，75mM檸檬酸鈉，于42。C;或(3)采用500/。甲酰胺，5xSSC(0.75MNaCl，0.075M檸檬酸鈉)，50mM磷酸鈉(pH6.8),0,1%焦磷酸鈉，5xDenhardt氏溶液，超聲處理的鮭魚精DNA(50呢/ml),0.1°/。SDS,和10%硫酸右旋糖苷，于42。C，及于42。C在0.2xSSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)和50%甲酰胺中洗滌，接著于55。C在含EDTA的0.1xSSC中進(jìn)行高嚴(yán)格性洗滌。"中等嚴(yán)格條件，'可以如Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual,NewYork,ColdSpringHarborPress,1989中所述來鑒定，包括使用比上文所述較不嚴(yán)格的洗滌溶液和雜交條件(例如溫度、離子強(qiáng)度和。/。SDS)。中等嚴(yán)格條件的例子是于37。C在含20。/c)曱酰胺，5xSSC(150mMNaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5xDenhardt氏溶液，10%硫酸右旋糖苷，和20mg/ml變性剪切的鮭魚精DNA的溶液中溫育過夜，接著于大約37-50。C在lxSSC中洗滌濾膜。熟練技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到如何在必要時(shí)調(diào)整溫度、離子強(qiáng)度等以適應(yīng)諸如探針長度等因素。"天然序列"多肽指與衍生自自然界的多肽(例如HER受體或HER配體)具有相同氨基酸序列的多肽，包括天然存在的或等位的變體。此類天然序列多肽可以從自然界分離，或者可通過重組或合成手段生成。如此，天然序列多肽可具有天然存在人多肽、鼠多肽、或來自任何其它哺乳類物種的多肽的氨基酸序列。術(shù)語"抗體，，在本文中以最廣義使用，明確覆蓋單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、及抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性。術(shù)語"單克隆抗體"在用于本文時(shí)指來自一群基本上同質(zhì)的抗體的抗體，即構(gòu)成群體的各個(gè)抗體相同和/或結(jié)合相同表位，除了生產(chǎn)單克隆抗體的過程中可能產(chǎn)生的可能變體外，此類變體通常以極小量存在。此類單克隆抗體典型的包括包含結(jié)合靶物的多肽序列的抗體，其中結(jié)合把物的多肽序列是通過包括從眾多多肽序列中選擇結(jié)合靶物的單一多肽序列在內(nèi)的過程得到的。例如，選擇過程可以是從眾多克隆諸如雜交瘤克隆、噬菌體克隆或重組DNA克隆的集合中選擇獨(dú)特克隆。應(yīng)當(dāng)理解，所選擇的靶物結(jié)合序列可進(jìn)一步改變，例如為了提高對靶物的親和力、將靶物結(jié)合序列人源化、4是高其在細(xì)胞培養(yǎng)物中的產(chǎn)量、降低其在體內(nèi)的免疫原性、創(chuàng)建多特異性抗體等，而且包含改變后的靶物結(jié)合序列的抗體也是本發(fā)明的單克隆抗體。與典型的包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，單克隆抗體制備物的每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在它們的特異性外，單克隆抗體制備物的優(yōu)勢在于它們通常未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語"單克隆"指示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生產(chǎn)抗體。例如，將依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來生成，包括例如雜交瘤法(例如Kohler等，Nature256:495(1975);I-Iarlow等，Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,第2版1988;Hammerling等，于MonoclonalAntibodiesandT-CellIIybridomas，563-681,Elsevier,N.Y.,1981)、重組DNA法(參見例如美國專利第4,816,567號(hào))、噬菌體展示技術(shù)(參見例如Clackson等，Nature352:624-628(1991);Marks等，J.Mol.Biol.222:581-597(1991);Sidhu等，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse，Proc.Nat.Acad.Sci,USA101(34):12467-12472(2004);Lee等，J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004))、及用于在具有部分或整個(gè)人免疫球蛋白基見例如WO1998/24893;WO1996/34096;WO1996/33735;WO1991/10741;Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:2551(1993);Jakobovits等，Nature362:255-258(1993);Bruggemann等，YearinImmuno.7:33(1993);美國專利第5,545,806號(hào);第5,569,825號(hào)；第5,591，669號(hào)(都是GenPharm的);美國專利第5,545,807號(hào)；WO1997/17852;美國專利第5,545，807號(hào)；第5,545,806號(hào)；第5,569,825號(hào)；第5,625,126號(hào)；第5,633,425號(hào)；和第5，661,016號(hào)；Marks等，Bio/Technology10:779-783(1992);Lonberg等,Nature368:856-859(1994);Morrison,Nature368:812-813(1994);Fishwild等，NatureBiotechnology14:845-851(1996);Neuberger，NatureBiotechnology14:826(1996);Lonberg和Huszar，Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995》。單克隆抗體在本文中明確包括"嵌合"抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(美國專利第4,816，567號(hào)；Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855(1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括包含衍生自非人靈長類(例如舊大陸猴類(OldWorldMonkey)、猿等)的可變域抗原結(jié)合序列和人恒定區(qū)序列的"靈長類化，，抗體，以及"人源化"抗體。非人(例如嚙齒類)抗體的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區(qū)殘基用具有期望特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、家兔或非人靈長類的高變區(qū)殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。進(jìn)行這些修飾是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含至少一個(gè)、通常兩個(gè)基本上整個(gè)這樣的可變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對應(yīng)于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones等，Nature321:522-525(1986);Riechmann等，Nature332:323-329(1988);Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。人源化HER2抗體包括huMAb4D5-1、huMAb4D5-2、huMAb4D5-3、huMAb4D5-4、huMAb4D5隱5、huMAb4D5-6、huMAb4D5-7和huMAb4D5-8或Trastuzumab(HERCEPTIN),如美國專利第5，821，3"號(hào)表3中所記載的，明確收入本文作為參考；人源化520C9(WO93/21319);及人源化2C4抗體，諸如Pertuzumab，如本文所述。為了本發(fā)明的目的，"Trastuzumab"、"HERCEPTIN"和"huMAb4D5-8"指包含分別在SEQIDNo.15和16中示出的輕鏈和重鏈氨基酸序列的抗體。在本文中，"Pertuzumab"和"OMNITARGTM，，指包含分別在SEQIDNo.13和14中示出的輕鏈和重鏈氨基酸序列的抗體。Trastuzumab與Pertuzumab之間的功能差異示于圖6。"完整抗體"在本文中指包含兩個(gè)抗原結(jié)合區(qū)及Fc區(qū)的抗體。優(yōu)選的是，完整抗體具有功能性Fc區(qū)。"抗體片段"包含完整抗體的一部分，優(yōu)選包含其抗原結(jié)合區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。"天然抗體"指通常由兩條相同的輕(L)鏈和兩條相同的重(H)鏈構(gòu)成的約150，000道爾頓的異四聚體糖蛋白。每條輕鏈通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵與重鏈連接，而二硫鍵的數(shù)目在不同免疫球蛋白同種型的重鏈間有變化。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規(guī)律的鏈內(nèi)二硫^t。每條重鏈在一端具有一個(gè)可變域(VH)，接著是多個(gè)恒定域。每條輕鏈在一端具有一個(gè)可變域(vo,而另一端是一個(gè)恒定域。輕鏈的恒定域與重鏈的第一恒定域排列在一起，而輕鏈的可變域與重鏈的可變域排列在一起。認(rèn)為特定的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈可變域之間形成界面。術(shù)語"可變的"指可變域中的某些部分在抗體間序列差異廣泛且用于每種特定抗體對其特定抗原的結(jié)合和特異性的實(shí)情。然而，變異性并非均勻分布于抗體的整個(gè)可變域。它集中于輕鏈和重鏈可變域中稱作高變區(qū)的三個(gè)區(qū)段?？勺冇蛑懈痈叨缺Ｊ氐牟糠址Q作框架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)FR,它們大多采取p-折疊片構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成(3-折疊片結(jié)構(gòu)一部分的三個(gè)高變區(qū)連接。每條鏈中的高變區(qū)通過FR非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的高變區(qū)一起促成抗體的抗原結(jié)合4立點(diǎn)的形成(參見Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5片反，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD1991)。恒定域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，諸如抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC)中抗體的參與。術(shù)語"高變區(qū)"在用于本文時(shí)指抗體中負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的氨基酸殘基。高變區(qū)通常包含來自"互補(bǔ)決定區(qū)"或"CDR'，的氨基酸殘基(例如輕鏈可變域中的殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3)及重鏈可變域中的殘基31-35(Hl)、50-65(H2)和95-102(H3);Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD,1991)和/或那些來自"高變環(huán)"的殘基(例如輕鏈可變域中的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)及重鏈可變域中的殘基26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3);Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。"框架區(qū)，，或"FR"殘基是除此處定義的高變區(qū)殘基外的那些可變域殘基。用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱為"Fab"片段，各自具有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，和一個(gè)剩余的"Fc"片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。胃蛋白酶處理產(chǎn)生一個(gè)F(ab')2片段，它具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)且仍能夠交聯(lián)抗原。"Fv"是包含完整抗原識(shí)別和抗原結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。此區(qū)由緊密、非共價(jià)結(jié)合的一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域的二聚體組成。正是在這種構(gòu)造中，各可變域的三個(gè)高變區(qū)相互作用而在VH-VL二聚體表面上確定了一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個(gè)高變區(qū)共同賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域(或只包含對抗原特異的三個(gè)高變區(qū)的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，只是親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。Fab片段還包含輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域(CH1)。Fab'片段與Fab片段的不同之處在于重鏈CH1域的羧基末端增加了少數(shù)殘基，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。Fab'-SH是本文中對其中恒定域半胱氨酸殘基攜帶至少一個(gè)游離硫醇基的Fab'的稱謂。F(ab')2抗體片段最初是作為在Fab'片段之間有鉸鏈半胱氨酸的成對Fab'片段生成的。還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)形式。根據(jù)其恒定域氨基S吏序列，來自任何脊稚動(dòng)物物種的抗體的"輕鏈"可歸入兩種截然不同類型中的一種，稱作卡帕(K)和拉姆達(dá)(人)。術(shù)語"Fc區(qū)，，在本文中用于定義免疫球蛋白重鏈的C末端區(qū)，包括天然序列Fc區(qū)和變體Fc區(qū)。雖然免疫球蛋白重鏈Fc區(qū)的邊界可能變化，但是人IgG重鏈Fc區(qū)通常定義為從其Cys226或Pro230位置的氨基酸殘基至C末端的區(qū)段。Fc區(qū)的C末端賴氨酸(殘基447，根據(jù)EU編號(hào)系統(tǒng))可以消除，例如在生產(chǎn)或純化抗體的過程中，或者通過對編碼抗體重鏈的核酸進(jìn)行重組工程。因而，完整抗體組合物可包括消除了所有K447殘基的抗體群體、一點(diǎn)沒有消除K447殘基的抗體群體、或者混合了有和沒有K447殘基的抗體的抗體群體。除非另有說明，本文中免疫球蛋白重鏈中殘基的編號(hào)方式是如Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD，1991中(明確收入本文作為參考)的EU索引的編號(hào)方式。"如Kabat中的EU索引"指人IgGlEU抗體的殘基編號(hào)方式。"功能性Fc區(qū)"擁有天然序列Fc區(qū)的"效應(yīng)器功能"。例示性的"效應(yīng)器功能"包括Clq結(jié)合、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性、Fc受體結(jié)合、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、吞噬作用、細(xì)胞表面受體(例如B細(xì)胞受體；BCR)下調(diào)等。此類效應(yīng)器功能通常要求Fc區(qū)與結(jié)合域(例如抗體可變域)聯(lián)合，而且可使用多種測定法來評估，例如本文中所4Hf的。"天然序列Fc區(qū)"包含與自然界中找到的Fc區(qū)的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc區(qū)包括天然序列人IgGlFc區(qū)(非A和A同種異型)、天然序列人IgG2Fc區(qū)、天然序列人IgG3Fc區(qū)、及天然序列人IgG4Fc區(qū)，及其天然存在變體。"變異Fc區(qū)"包含由于至少一處氨基酸修飾，優(yōu)選一處或多處氨基酸替代而與天然序列Fc區(qū)有所不同的氨基酸序列。優(yōu)選的是，變異Fc區(qū)具有與天然序列Fc區(qū)相比或與親本多肽的Fc區(qū)相比至少一處氨基酸替代，例如在天然序列Fc區(qū)中或在親本多肽的Fc區(qū)中具有約l處至約10處氨基酸替代，優(yōu)選約l處至約5處氨基酸替代。變異Fc區(qū)在本文中將優(yōu)選與天然序列Fc區(qū)和/或親本多肽的Fc區(qū)擁有至少約80。/。的同源性，更優(yōu)選至少約90%的同源性，最優(yōu)選至少約95%的同源性。根據(jù)其重鏈恒定域氨基酸序列，完整抗體可歸入不同的"類"。完整抗體有五大類IgA、IgD、IgE、IgG和IgM,其中有些可進(jìn)一步分為"亞類，，(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。將與不同類的抗體對應(yīng)的重鏈恒定域分別稱作a、S、s、Y和p。不同類的免疫球蛋白的亞基結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)造是眾所周知的。"抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性"和"ADCC"指由細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中表達(dá)Fc受體(FcR)的非特異性細(xì)胞毒性細(xì)胞(例如天然殺傷(NK)細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)識(shí)別輩巴細(xì)胞上結(jié)合的抗體，隨后引起耙細(xì)胞溶胞。介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞，NK細(xì)胞，只表達(dá)FcyRIII，而單核細(xì)胞表達(dá)FcyRI、FcyyRII和FcYRin。Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464頁表3總結(jié)了造血細(xì)胞上的FcR表達(dá)。為了評估感興趣分子的ADCC活性，可進(jìn)行體外ADCC測定法，諸如美國專利第5，500,362或5,821，337號(hào)中所記載的?？捎糜诖祟悳y定法的效應(yīng)細(xì)胞包括外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和天然殺傷(NK)細(xì)胞?；蛘?另外，可在體內(nèi)評估感興趣分子的ADCC活性，例如在動(dòng)物模型中，諸如Clynes等，PNAS(USA)95:652-656(1998)中所披露的。"人效應(yīng)纟田月包"指表達(dá)一種或多種FcR并執(zhí)行效應(yīng)器功能的白細(xì)胞。優(yōu)選的是，該細(xì)胞至少表達(dá)FcYRIII并執(zhí)行ADCC效應(yīng)器功能。介導(dǎo)ADCC的人白細(xì)胞的例子包括外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)、天然殺傷(NK)細(xì)胞、單核細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞，優(yōu)選PBMC和NK細(xì)胞。效應(yīng)細(xì)胞可以從其天然來源分離，例如血液或PBMC，如本文中所描述的。術(shù)語"Fc受體"或"FcR"用于描述結(jié)合抗體Fc區(qū)的受體。優(yōu)選的FcR是天然序列人FcR。此外，優(yōu)選的FcR是結(jié)合IgG抗體的FcR(y受體)，包括FcyRI、FcYRII和FcYRIII亞類的受體，包括這些受體的等位變體和可變剪接形式。FcyRII受體包括FcyRIIA("活化受體")和FcyRIIB("抑制受體")，它們具有相似的氨基酸序列，區(qū)別主要在于其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域?；罨荏wFcyRIIA在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受體FqRIIB在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(參見綜述Dagron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR的綜述參見Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol,9:457-492(1991);Capel等，Immunomethods4:25-34(1994);deHaas等，J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。術(shù)語"FcR"在本文中涵蓋其它FcR，包括那些未來將會(huì)鑒定的。該術(shù)語還包括新生兒受體，F(xiàn)cRn,它負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移給胎兒(Guyer等，J.Immunol.117:587(1976);Kim等，J.Immunol.24:249(1994))，并調(diào)控免疫球蛋白的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)。"補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性"或"CDC"指在存在補(bǔ)體時(shí)分子溶解靶物的能力。補(bǔ)體激活途徑是由補(bǔ)體系統(tǒng)第一組分(Clq)結(jié)合與相關(guān)抗原復(fù)合的分子(例如抗體)起始的。為了評估補(bǔ)體激活，可進(jìn)行CDC測定法，例如如Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods202:163(1996)中戶斤i己載的。"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含抗體的VH和VL結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域存在于一條多肽鏈上。優(yōu)選的是，F(xiàn)v多肽在VH和Vt結(jié)構(gòu)域之間還包含多肽接頭，使得scFv能夠形成結(jié)合抗原的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于scFv的綜述參見Pliickthun，于ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113，Rosenburg和Moore編，Springer-Verlag,NewYork,pp.269-315(1994)。HER2抗體scFv片段記載于W093/16185;美國專利第5，571,894號(hào)；美國專利第5，587,458號(hào)。術(shù)語"雙抗體"指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小型抗體片段，該片段在同一條多肽鏈(VH-V!J中包含相連的重鏈可變域(VH)和輕鏈可變域(Vt)。通過使用過短的接頭使得同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間不能配對，迫使這些結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對，從而產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。雙抗體更完整的記載于例如EP404,097;WO93/11161;Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA卯:6444-6448(1993)。"棵抗體(棵露的抗體)"指未偶聯(lián)異源分子，諸如細(xì)胞毒性模塊或放射性標(biāo)記物的抗體。"分離的，，抗體指已經(jīng)鑒定且與/由其天然環(huán)境的一種成分分開和/或回收的抗體。其天然環(huán)境的污染性成分指將會(huì)干擾該抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將抗體純化至(1)根據(jù)Lowry法的測定，抗體重量超過95%，最優(yōu)選重量超過99%，(2)足以通過使用轉(zhuǎn)杯式測序儀獲得至少15個(gè)殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(3)根據(jù)還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE及使用考馬斯藍(lán)或優(yōu)選銀染色，達(dá)到同質(zhì)。既然抗體天然環(huán)境的至少一種成分不會(huì)存在，那么分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體。然而，分離的抗體通常將通過至少一個(gè)純化步驟來制備。"親和力成熟的，，抗體指在其一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)中具有一處或多處改變且導(dǎo)致抗體對抗原的親和力與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進(jìn)的抗體。優(yōu)選的親和力成熟的抗體將具有納摩爾或甚至皮摩爾水平的對靶抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過本領(lǐng)域已知規(guī)程來生成。Marks等,Bio/Technology10:779-783(1992)記載了通過VH和VL結(jié)構(gòu)域改組的親和力成熟。以下文獻(xiàn)記載了CDR和/或框架殘基的隨機(jī)誘變Barbas等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA91:3809-3813(1994);Schier等,Gene169:147-155(1995);Yelton等，J.Immunol.155:1994-2004(1995);Jackson等，J,Immunol.154(7):3310-9(1995);Hawkins等,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。術(shù)語"主要種類抗體"在本文中指組合物中在數(shù)量上占主要的抗體分子/抗體結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，主要種類抗體是HER2抗體，諸如結(jié)合HER2的結(jié)構(gòu)域II的抗體、比Trastuzumab更有效的抑制HER二聚化的抗體、和/或結(jié)合HER2的異二聚體結(jié)合位點(diǎn)的抗體。本文中主要種類抗體的優(yōu)選實(shí)施方案是包含SEQIDNo.3和4中的輕鏈和重鏈可變域氨基酸序列的抗體，最優(yōu)選包含SEQIDNo.13和14中的輕鏈和重鏈氨基酸序列的抗體(Pertuzumab)。"氨基酸序列變體"抗體在本文中指具有與主要種類抗體不同的氨基酸序列的抗體。通常，氨基g臾序列變體將與主要種類抗體具有至少約70。/。的同源性，優(yōu)選的是，它們將與主要種類抗體至少約80%,更優(yōu)選至少約90%同源。氨基酸序列變體在主要種類抗體氨基酸序列內(nèi)部或鄰近的某些位置具有替代、刪除和/或添加。本文中氨基酸序列變體的例子包括酸性變體(例如脫酰胺抗體變體)、堿性變體、在其一條或兩條輕鏈上具有氨基末端前導(dǎo)延伸(例如VHS-)的抗體、在其一條或兩條重鏈上具有C-末端賴氨酸殘基的抗體等，包括重鏈和/或輕鏈氨基酸序列變異的組合。本文中特別感興趣的抗體變體是相對于主要種類抗體在其一條或兩條輕鏈上包含氨基末端前導(dǎo)延伸的抗體，任選還包含其它氨基酸序列和/或糖基化差異。"糖基化變體，，抗體在本文中指附著有一種或多種或者一個(gè)或多個(gè)碳水化合物模塊且所述碳水化合物與附著于主要種類抗體的一種或多種或者一個(gè)或多個(gè)碳水化合物模塊不同的抗體。本文中糖基化變體的例子包括其Fc區(qū)附著有G1或G2寡糖結(jié)構(gòu)代替G0寡糖結(jié)構(gòu)的抗體、其一條或兩條輕鏈附著有一種或兩種或者一個(gè)或兩個(gè)碳水化合物模塊的抗體、其一條或兩條重鏈沒有附著碳水化合物的抗體等，及糖基化改變的組合。若抗體具有Fc區(qū)，則抗體的一條或兩條重鏈，例如殘基299處(298,Eu殘基編號(hào)方式)可附著有寡糖結(jié)構(gòu)。對于Pertuzumab，G0是主要的寡糖結(jié)構(gòu)，而在Pertuzumab組合物中找到的其它寡糖結(jié)構(gòu)諸如GO-F、G-l、Man5、Man6、Gl-l、Gl(l-6)、Gl(1-3)和G2的量4交少。除非另有說明，"Gl寡糖結(jié)構(gòu)，，在本文中包括G-l、Gl-l、Gl(l-6)和Gl(l-3)結(jié)構(gòu)。"氨基末端前導(dǎo)延伸"在本文中指在抗體的任何一條或多條重鏈或輕鏈的氨基末端存在的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的氨基末端前導(dǎo)序列。例示性的氨基末端前導(dǎo)延伸包含三個(gè)氨基酸殘基，VHS或由其組成，它們存在于抗體變體的兩條輕鏈中的一條或兩條上。"脫酰胺"抗體指其中一個(gè)或多個(gè)天冬酰胺殘基衍生成例如天冬氨酸、琥珀酰亞胺或異天冬氨酸的抗體。術(shù)語"癌癥"和"癌性"指向或描述哺乳動(dòng)物中特征通常為細(xì)胞生長不受調(diào)控的生理疾患。癌癥的例子包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母細(xì)胞瘤(包括髓母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜細(xì)胞肉瘤)、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(包括類癌瘤、胃泌素瘤和胰島細(xì)胞癌)、間皮瘤、施旺氏細(xì)胞瘤(包括聽神經(jīng)瘤)、腦膜瘤、腺癌、黑素瘤、和白血病或淋巴樣惡性腫瘤。此類癌癥的更具體例子包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌)、肺癌包括小細(xì)胞肺癌(SCLC)、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、肺的腺癌和肺的鱗癌、月復(fù)月莫癌、肝細(xì)胞癌、胃癌(gastricorstomachcancer)包括胃腸癌、胰&泉癌、成月交質(zhì)纟田月包瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌(livercancerorhepaticcarcinoma)、膀月先癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌(包括轉(zhuǎn)移性乳腺癌)、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌(kidneyorrenalcancer)、前列腺癌、外陰癌、曱狀腺癌、肛門癌、陰莖癌、睪丸癌、食道癌、膽管腫瘤、及頭和頸癌。"晚期"(advanced)癌癥指通過局部侵入或轉(zhuǎn)移而擴(kuò)散到最初的部位或器官之外的癌癥。"頑固性或不應(yīng)性"(refractory)癌癥指即使對癌癥患者施用抗腫瘤劑，諸如化療劑，仍然發(fā)生進(jìn)展的癌癥。頑固性癌癥的一個(gè)例子是鉑不應(yīng)性癌癥。"復(fù)發(fā)性"(recurrent)癌癥指在對初始治療的響'應(yīng)之后，在初始部位或遠(yuǎn)端部位再次生長的癌癥。在本文中，"患者"指人患者?；颊呖梢允?癌癥患者"，即患有或有風(fēng)險(xiǎn)患上癌癥的一種或多種癥狀的患者。"腫瘤樣品，，在本文中指衍生自患者腫瘤或包含來自患者腫瘤的腫瘤細(xì)胞的樣品。腫瘤樣品的例子在本文中包括但不限于腫瘤活檢、循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞、循環(huán)中的血漿蛋白質(zhì)、腹水、衍生自腫瘤或展現(xiàn)出腫瘤樣特性的原代細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞系，以及保存的腫瘤樣品，諸如福爾馬林固定的、石蠟包埋的肺瘤樣品或冷凍的肺瘤樣品。"固定的，，腫瘤樣品指已經(jīng)使用固定劑以組織學(xué)方法保存的腫瘤樣品。"福爾馬林固定的"腫瘤樣品指已經(jīng)使用曱醛作為固定劑保存的腫瘤樣口Oo"包埋的"腫瘤樣品指用堅(jiān)固的且通常是硬的介質(zhì)諸如石蠟、蠟、火棉或樹脂包圍的腫瘤樣品。包埋使得有可能切出薄片供顯微鏡檢查或生成組織微陣列(TMA)。"石蠟包埋的"腫瘤樣品指用衍生自石油的固體碳?xì)寤衔锏募兓旌衔锇鼑姆瘟鰳悠?。在本文中?冷凍的"腫瘤樣品指冷凍的或冷凍過的肺瘤樣品。"展示出HER表達(dá)、擴(kuò)增或活化"的癌癥或生物學(xué)樣品指在診斷測試中表達(dá)(包括過表達(dá))HER受體，具有擴(kuò)增的HER基因，和/或以其它方式展現(xiàn)出HER受體活化或磷酸化的癌癥或生物學(xué)樣品。"展示出HER活化，，的癌癥或生物學(xué)樣品指在診斷測試中展現(xiàn)出HER受體活化或磷酸化的癌癥或生物學(xué)樣品。此類活化可直接(例如通過ELISA來測量HER磷酸化)或間接(例如通過基因表達(dá)概況分析或通過檢測HER異二聚體，如本文中所迷)測定。在本文中，"基因表達(dá)概況分析"(geneexpressionprofiling)指評估一種或多種基因的表達(dá)，代替直接測定HER磷酸化。"磷酸-ELISA測定法，，(phosho-ELISAassay)在本文中指在酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)中評估一種或多種HER受體，尤其是HER2的磷酸化的測定法，其中使用檢測磷酸化的HER受體的試劑(通常是抗體)、底物或下游信號(hào)分子。優(yōu)選的是，使用檢測磷酸化HER2的抗體。該測定法可以對細(xì)胞溶胞物，優(yōu)選來自新鮮的或冷凍的生物學(xué)樣品的細(xì)胞溶胞物進(jìn)行。"HER受體過表達(dá)或擴(kuò)增"的癌細(xì)胞指與同一組織類型的非癌性細(xì)胞相比，具有顯著更高水平的HER受體蛋白質(zhì)或基因的癌細(xì)胞。此類過表達(dá)可以是由基因擴(kuò)增或者轉(zhuǎn)錄或翻譯增加引起的?？稍谠\斷或預(yù)后測定法中通過評估細(xì)胞表面上存在的HER蛋白質(zhì)水平的升高(例如通過免疫組化測定法；IHC)來測定HER受體的過表達(dá)或擴(kuò)增?；蛘?另外，可測量細(xì)胞中編碼HER的核酸的水平，例如通過熒光原位雜交(FISH;參見1998年10月公布的WO98/45479)、Southern印跡或聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)，諸如定量實(shí)時(shí)PCR(qRT-PCR)。還可通過測量生物學(xué)流體諸如血清中的脫落抗原(例如HER胞外結(jié)構(gòu)域)來研究HER受體過表達(dá)或擴(kuò)增(參見例如1990年6月12日公告的美國專利第4，933，294號(hào)；1991年4月18曰公布的WO91/05264;1995年3月28日公告的美國專利第5,401，638號(hào)；Sias等，J.Immunol.Methods132:73-80(1990))。在上述測定法之外，熟練從業(yè)人員還可利用多種體內(nèi)測定法。例如，可將患者體內(nèi)細(xì)胞暴露于任選用可檢測標(biāo)記物例如放射性同位素標(biāo)記的抗體，并且可評估該抗體與患者體內(nèi)細(xì)胞的結(jié)合，例如通過外部掃描;故射性或通過分析取自事先已暴露于所述抗體的患者的活斗全。相反，"HER受體不過表達(dá)或擴(kuò)增"的癌癥指與同一組織類型的非癌性細(xì)胞相比，沒有高于正常水平的HER受體蛋白質(zhì)或基因的癌癥。抑制HER二聚化的抗體，諸如Pertuzumab，可用于治療不過表達(dá)或擴(kuò)增HER2受體的癌癥。在本文中，"抗腫瘤劑"指用于治療癌癥的藥物。本文中的抗腫瘤劑的非限制性例子包括化療劑、HER二聚化抑制劑、HER抗體、針對腫瘤相關(guān)抗原的抗體、抗激素化合物、細(xì)胞因子、靶向EGFR的藥物、抗血管發(fā)生劑、酪氨酸激酶抑制劑、生長抑制劑和生長抑制性抗體、細(xì)胞毒劑、誘發(fā)凋亡的抗體、COX抑制劑、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、結(jié)合癌胚蛋白CA125的抗體、HER2疫苗、Raf或ms抑制劑、脂質(zhì)體多柔比星、托泊替康、紫杉烷、雙重酪氨酸;敦酵才卬制劑、TLK286、EMD-7200、Pertuzumab、Trastuzumab、Erlotinib、和Bevacizumab。"已批準(zhǔn)的抗肺瘤劑"指已經(jīng)得到管理機(jī)構(gòu)諸如食品和藥品管理局(FDA)或其相當(dāng)?shù)耐鈬鴻C(jī)構(gòu)的上市批準(zhǔn)，用于治療癌癥的藥物。若HER二聚化抑制劑作為"單一抗腫瘤劑"施用，則它是唯一施用來治療癌癥的抗腫瘤劑，即它不與另一抗腫瘤劑諸如化療聯(lián)合施用。"護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)，，(standardofcare)在本文中意指常規(guī)用來治療特定形式的癌癥的一種或多種抗腫瘤劑。例如，對于鉑耐藥性卵巢癌，護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)是托泊替康或脂質(zhì)體多柔比星。"生長抑制劑"在用于本文時(shí)指在體外或在體內(nèi)抑制細(xì)胞，尤其是表達(dá)HER的癌細(xì)胞生長的化合物或組合物。如此，生長抑制劑可以是顯著降低處于S期的表達(dá)HER的細(xì)胞百分比的藥劑。生長抑制劑的例子包括阻斷細(xì)胞周期行進(jìn)(處于S期以外的位置)的藥劑，諸如誘導(dǎo)G1停滯和M期停滯的藥劑。經(jīng)典的M期阻斷劑包括長春藥類(vincas)(長春新堿(vincristine)和長春堿(vinblastine))、紫杉烷類(taxanes)、和拓樸異構(gòu)酶II抑制劑諸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、依托泊香(etoposide)和博來霉素(bleomycin)。那些阻滯G1的藥劑也溢出進(jìn)入S期停滯，例如DNA烷化劑類諸如他莫昔芬(tamoxifen)、潑尼松(prednisone)、達(dá)卡巴。秦(dacarbazine)、雙氯乙基曱胺(mechlorethamine)、順柏(cisplatin)、曱氨喋呤(methotrexate)、5-氟尿嘧咬(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可參見TheMolecularBasisofCancer,Mendelsohn和Israel編，章l,題為"CeIlcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs",Murakami等,WBSaunders,Philadelphia,1995，尤其是第13頁。"生長抑制性"抗體的例子是那些結(jié)合HER2并抑制過表達(dá)HER2的癌細(xì)胞生長的抗體。優(yōu)選的生長抑制性HER2抗體在約0.5-30fig/ml的抗體濃度對細(xì)胞培養(yǎng)物中SK-BR-3乳瘤細(xì)胞的生長抑制超過20%，優(yōu)選超過50%(例如約50%至約100%),其中生長抑制是在SK-BR-3細(xì)胞暴露于抗體后6天測定的(參見1997年10月14日公告的美國專利第5，677,171號(hào))。該專利及下文中更詳細(xì)的描述了SK-BR-3細(xì)胞生長抑制測定法。優(yōu)選的生長抑制性抗體是鼠單克隆抗體4D5的人源化變體，例如Trastuzumab。"誘導(dǎo)凋亡"的抗體指根據(jù)膜聯(lián)蛋白V結(jié)合、DNA斷裂、細(xì)胞收縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膨脹、細(xì)胞破裂、和/或膜嚢(稱作凋亡小體)形成的測定，誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的抗體。所述細(xì)胞通常是過表達(dá)HER2受體的細(xì)胞。優(yōu)選的是，所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞，例如乳房、卵巢、胃、子宮內(nèi)膜、唾液腺、肺、腎、結(jié)腸、曱狀腺、胰或膀胱細(xì)胞。在體外，所述細(xì)胞可以是SK-BR-3、BT474、Calu3細(xì)胞、MDA-MB-453、MDA-MB-361或SKOV3細(xì)胞。有多種方法可用于評估與凋亡有關(guān)的細(xì)胞事件。例如，可通過膜聯(lián)蛋白結(jié)合來測量磷脂酰絲氨酸(PS)易位；可通過DNA梯化(laddering)來評估DNA斷裂；及可通過亞二倍體細(xì)胞的任何增加來評估伴隨著DNA斷裂的核/染色質(zhì)濃縮。優(yōu)選的是，誘導(dǎo)凋亡的抗體是在使用BT474細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白結(jié)合測定法(見下文)中導(dǎo)致對膜聯(lián)蛋白的結(jié)合相對于未處理細(xì)胞誘導(dǎo)約2至50倍，優(yōu)選約5至50倍，最優(yōu)選約10至50倍的抗體。談導(dǎo)凋亡的HER2抗體的例子有7C2和7F3。"表位2C4"指HER2的胞外結(jié)構(gòu)域中抗體2C4所結(jié)合的區(qū)域。為了篩選結(jié)合2C4表位的抗體，可進(jìn)行常規(guī)的交叉阻斷測定法，諸如Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlow和DavidLane,1988中所記載的。優(yōu)選的是，抗體將2C4對HER2的結(jié)合阻斷約50。/?；蚋??；蛘?，可進(jìn)行表位作圖以評估抗體是否結(jié)合HER2的2C4表位。表位2C4包含來自HER2月包外結(jié)構(gòu)域中結(jié)構(gòu)域II的殘基。2C4和Pertuzumab在結(jié)構(gòu)域I、II和IU的連接處結(jié)合HER2的胞外結(jié)構(gòu)域。Franklin等,CancerCell5:317-328(2004)。"表位4D5"指HER2的胞外結(jié)構(gòu)域中抗體4D5(ATCCCRL10463)和Trastuzumab所結(jié)合的區(qū)域。此表位接近HER2的跨膜結(jié)構(gòu)域，且在HER2的結(jié)構(gòu)域IV內(nèi)。為了篩選結(jié)合4D5表位的抗體，可進(jìn)行常規(guī)的交叉阻斷測定法，諸如Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlow和DavidL肌e，1988中所記載的?；蛘?，可進(jìn)行表位作圖以評估抗體是否結(jié)合HER2的4D5表位(例如HER2ECD的大約第529位殘基至大約第625位殘基區(qū)域(含兩端點(diǎn))內(nèi)的任何一個(gè)或多個(gè)殘基，殘基編號(hào)方式包括信號(hào)肽)。"表位7C2/7F3"指HER2的胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I內(nèi)N末端處7C2和/或7F3抗體(各自保藏于ATCC,見下文)所結(jié)合的區(qū)域。為了篩選結(jié)合7C2/7F3表位的抗體，可進(jìn)行常規(guī)的交叉阻斷測定法，諸如Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlow和DavidLane，1988中所記載的?；蛘?，可進(jìn)行表位作圖以確定抗體是否結(jié)合HER2上的7C2/7F3表位(例如HER2ECD的大約第22位殘基至大約第53位殘基區(qū)域內(nèi)的任何一個(gè)或多個(gè)殘基，殘基編號(hào)方式包括信號(hào)肽)。"處理'，和"治療"(treatment)指治療性處置和預(yù)防性或防范性措施二者。需要治療的受試者包括那些早就患有癌癥的以及那些要預(yù)防癌癥的。因此，本文中待治療的患者可能已經(jīng)診斷為患有癌癥或者可能有患上癌癥的傾向性或易感性。術(shù)語"有效量"指在患者中有效治療癌癥的藥物量。有效量的藥物可減少癌細(xì)胞的數(shù)目；縮小胂瘤的尺寸；抑制(即一定程度的減緩和優(yōu)選阻止)癌細(xì)胞浸潤到周圍器官中；抑制(即一定程度的減緩和優(yōu)選阻止)腫瘤轉(zhuǎn)移；一定程度的抑制腫瘤生長；和/或一定程度的減輕一種或多種與癌癥有關(guān)的癥狀。就藥物可阻止現(xiàn)有癌細(xì)胞生長和/或殺死現(xiàn)有癌細(xì)胞而言，它可以是細(xì)胞抑制性的和/或細(xì)胞毒性的。有效量可延長無進(jìn)展存活(例如根據(jù)實(shí)體瘤的響應(yīng)評估標(biāo)準(zhǔn)(ResponseEvaluationCriteriaforSolidTumors,RECIST)或CA-125變化的測量)，導(dǎo)致客觀響應(yīng)(包括部分響應(yīng)，PR或完全響應(yīng)，CR),增加總體存活時(shí)間，和/或改善癌癥的一種或多種癥狀(例如根據(jù)FOSI的評估)。術(shù)語"細(xì)胞毒劑"在用于本文時(shí)指抑制或阻止細(xì)胞的功能和/或引起細(xì)胞破壞的物質(zhì)。該術(shù)語意圖包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P"和Lu的放射性同位素)、化療劑、和毒素諸如小分子毒素或者細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶活毒素，包括其片段和/或變體。"化療劑"指可用于治療癌癥的化學(xué)化合物。化療劑的例子包括烷化劑類(alkylatingagents),諸如塞替派(thiotepa)和CYTOXAN環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);石黃酸烴基酯類(alkylsulfonates),諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan),口口底泊舒凡(piposulfan);氮丙口定類(aziridines)，i者嘖口苯佐替〉泉(benzodepa)、卡;皮西昆(carboquone)、美妥替》派(meturedepa)禾口烏^/替》派(uredepa);乙撐亞胺類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六曱蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撐石克代石舞酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羥曱蜜胺(trimethylolomelamine);TLK286(TELCYTA);番篇枝內(nèi)酯類(acetogenins)(尤其是布4立1也辛(bullatacin)和布4立4也辛酉同(buUatacinone));5-9-四氬大麻酚(tetrahydrocannabino1)(屈大麻酚(dronabinol),MARINOL);P-拉帕醌(lapachone);拉帕醇(lapachol);秋水仙素類(colchicines);白樺脂酸(betulinicacid);喜沖對石咸(camptothecin)(包4舌合成類似物4乇泊一弄康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan),CAMPTOSAR)、乙酰喜樹堿、東莨菪亭(scopoletin)和9-氨基喜樹堿)；苔蘚抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinicacid);替尼泊脊(teniposide);隱藻素類(cryptophycins)(4爭另'J是隱藻素l和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成類似物，KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;;爭纟帛承卩素(spongistatin);氮芥類(nitrogenmustards),il"釹口苯丁酉臾氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、月旦石粦酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)石粦酰胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮齊(novembichin)、苯芥月旦甾國孚(phenesterine)、)發(fā)尼莫司'汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧咬氮芥(uracilmustard);亞硝脲類(nitrosoureas),諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);二膦酸鹽類(bisphosphonates)，諸如氯膦酸鹽(clodronate);抗生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(例如加利車霉素(calicheamicin),尤其是力。利車霉素yll和加利車霉素coll(參見例如Agnew，Chem.Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994))和蒽環(huán)類抗生素(anthracyclines)i者如annamycin、AD32、alcarubicin、柔紅霉素(daunombicin)、右雷佐生(dexrazoxane)、DX-52-1、表柔比星(epirubicin)、GPX-IOO、伊達(dá)比星(idambicin)、KRN5500、美諾立爾(menogaril)、dynemidn包4舌dynemicinA、埃斯波霉素(esperamicin)、新制癌素(neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白烯二炔類抗生素發(fā)色團(tuán)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、力丈線菌素D(dactinomycin)、；也4乇比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酉臾、ADRIAMYCIN⑧多柔比星(doxombicin)(包括嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、脂質(zhì)體多柔比星和脫氧多柔比星)、依索比星(esombicin)、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins)諸如絲裂霉素C、霉酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、噪呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、4連黑菌素(streptonigrin)、《連佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司"f也丁(zinostatin)和佐柔比星(zombicin);葉酸類似物，諸如二曱葉酸(denopterin)、蝶羅呤(pteropterin)和三甲曲沙(trimetrexate);噤呤類似物，諸如氟達(dá)4立濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(mercaptopurine)、碌L咪噪呤(thiamiprine)和石克鳥嘌呤(thioguanine);嘧口定類似、物，i者如安西^也濱(ancitabine)、阿4U包香(azacitidine)、6-氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmoflir)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿香(doxifluridine)、依i若4也濱(enocitabine)和氟尿普(floxuridine);雄激素類，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、表石危雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)和睪內(nèi)酯(testolactone);抗腎上腺類，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)和曲洛司坦(trilostane);葉酸補(bǔ)充劑，i者如亞葉酸(folinicacid)(leucovorin);醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone);抗葉酸抗瘤劑，諸如ALIMTA⑧、LY231514培美曲塞(pemetrexed)、二氫葉酸還原酶抑制劑諸如曱氨喋呤(methotrexate)、抗代謝物類，諸如5-氟尿嗜t定(fluorouracil)(5-FU)及其前體藥物諸如UFT、S-l和卡培他濱(capecitabine),及胸苷酸合酶抑制劑和甘氨酰胺核糖核苷酸曱?；D(zhuǎn)移酶抑制劑諸如雷替曲塞(raltitrexed)(TOMUDEX,TDX);二氫嘧啶脫氫酶抑制劑諸如恩尿嘧咬(eniluracil);醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid);安吖咬(amsacrine);bestrabucil;比生群(bisantrene);依達(dá)曲沙(edatraxate);地確酰胺(defosfamide);;也美可辛(demecolcine);i也吖醌(diaziquone);elfornithine;依利醋銨(elliptiniumacetate);埃坡霉素(epothilone);依托格魯(etoglucid);硝酸4家；羥脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼達(dá)明(lonidamine);美登木素生物石威類(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin);米4乇胍月宗(mitoguazone);米4乇蒽酉昆(mitoxantrone);莫口底達(dá)醇(mopidamol);二胺硝吖咬(nitracrine);噴司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);。比柔比星(pirambicin);洛索蒽醌(losoxantrone);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);PSK多糖復(fù)合物(JHSNaturalProducts,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);才艮霉素(rhizoxin);西佐喃(sizofiran);螺旋鍺(spirogermanium);纟田交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid);三亞胺酉昆(triaziquone);2,2'，2"-三氯三乙胺；單端孢菌素類(trichothecenes)(尤其是T畫2毒素、疾孑包菌素(verrucarin)A、桿孑包菌素(roridin)A和蟲它行菌素(anguidin));烏拉坦(urethan);長春地辛(vindesine)(ELDISINE,FILDESIN);達(dá)卡巴嗪(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二淡衛(wèi)矛酉享(mitolactol);口底泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖月包苦(arabinoside)("Ara-C");環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa);類紫杉醇類(taxoids)和紫杉烷類(taxanes),例如TAXOL巾白利他塞(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N丄)、ABRAXANEtm不含克列莫佛(Cremophor)，清蛋白改造的納米顆粒劑型巾自利他塞(AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg,Illinois)和TAXOTERE多西他塞(docetaxel)(Rh6ne-PoulencRorer，Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR);6-硫鳥嘌呤(thioguanine);巰基。票呤(mercaptopurine);柏(platinum);粕類4以物或基于柏的類4以物，i者如順4白(cisplatin)、奧沙利柏(oxaliplatin)和卡鉑(carboplatin);長春石咸(vinblastine)(VELBAN);依托泊苷(etoposide)(VP-16);異環(huán)磷酰胺(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);長春新堿(vincristine)(ONCOVIN);長春花生物堿類(vincaalkaloid);長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE);能滅瘤(novantrone);依達(dá)曲沙(edatrexate);道i若霉素(daunomycin);氨基蟲菜卩令(aminopterin);希羅達(dá)(xeloda);伊本膦酸鹽(ibandronate);拓樸異構(gòu)酶抑制劑RFS2000;二氟曱基鳥氨酸(DMFO);類視黃酸(retinoid),諸如視黃酸(retinoicacid);任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽、酸或衍生物；以及兩種或多種上述物質(zhì)的組合，諸如CHOP(環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿和潑尼松龍聯(lián)合療法的縮寫)和FOLFOX(奧沙利鉑(ELOXATINTM)聯(lián)合5-FU和亞葉酸的治療方案的縮寫)。該定義還包括作用為調(diào)節(jié)或抑制激素對腫瘤作用的抗激素劑，諸如抗雌激素類和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑類(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)和FARESTON⑧托瑞米芬(toremifene);抑制在腎上腺中調(diào)節(jié)雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、MEGACE醋酸曱地孕酮(megestrolacetate)、AROMASIN⑧依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔口坐(fadrozole)、RIVISOR伏氯唑(vorozole)、FEMARA來曲唑(letrozole)和ARIMIDEX阿那曲唑(anastrozole);抗雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin);以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環(huán)核苷月包嘧咬類似物)；反義寡核苷酸，特別是那些抑制涉及異常(abherant)細(xì)胞增殖的信號(hào)傳導(dǎo)途經(jīng)中的基因表達(dá)的，諸如例如PKC-a、Raf、H-Ras和表皮生長因子受體(EGF-R);疫苗，諸如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN⑧疫苗和VAXID⑧疫苗；PROLEUKINrIL-2;LURTOTECAN拓樸異構(gòu)酶l抑制劑；ABARELIX⑧rmRH;及任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽、酸或書f生物。"抗代謝物類化療劑，，指在結(jié)構(gòu)上與代謝物相似但不能被身體以生產(chǎn)性方式利用的藥劑。許多抗代謝物類化療劑干擾核酸，RNA和DNA的生成?？勾x物類化療劑的例子包括吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR)、5-氟尿嘧咬(5-FU)、卡培他濱(capecitabine)(XELODATM)、6-巰基嘌呤、甲氨喋呤(methotrexate)、6-硫鳥。票呤、培美曲塞(pemetrexed)、雷替曲塞(raltitrexed)、阿糖胞芬(arabinosylcytosineARA-Ccytarabine)(CYTOSAR-U)、達(dá)卡巴口秦(dacarbazine)(DTIC-DOME)、偶氮胞嘧卩定(azocytosine)、脫氧胞嘧啶(deoxycytosine)、pyridmidene、氟達(dá)拉濱(fludarabine)(FLUDARA)、克拉屈濱(cladrabine)、2-脫氧-D-葡萄糖等。優(yōu)選的抗代謝物類化療劑是吉西他濱。"吉西他濱"或"2'-脫氧-2',2'-二氟胞苷單鹽酸(b-異構(gòu)體)"是展現(xiàn)出抗肺瘤活性的核苷類似物。鹽酸吉西他濱的經(jīng)驗(yàn)式是C9H11F2N30小HC1。鹽酸吉西他濱由EliLilly以商標(biāo)GEMZAR⑧銷售。"基于鉑的化療劑"包括包含鉑作為分子的主要部分的有機(jī)化合物?；阢K的化療劑的例子包括卡鉑(carboplatin)、順鉑(cisplatin)和奧沙利鉑(oxaliplatinum)。"基于鉑的化療法"指使用一種或多種基于鉑的化療劑的療法，任選聯(lián)合一種或多種其它化療劑。"化療法耐藥性"癌癥指癌癥患者在接受化療方案時(shí)(癌癥)有進(jìn)展(即患者是"化療不應(yīng)性，，的)，或者患者在完成化療方案后12個(gè)月內(nèi)(例如6個(gè)月內(nèi))(癌癥)有進(jìn)展。"鉑耐藥性，，癌癥指癌癥患者在接受基于鉑的化療法時(shí)(癌癥)有進(jìn)展(即患者是"鉑不應(yīng)性，，的)，或者患者在完成基于鉑的化療方案后U個(gè)月內(nèi)(例如6個(gè)月內(nèi))(癌癥)有進(jìn)展。"抗血管發(fā)生劑，，指阻斷或一定程度的干擾血管發(fā)育的化合物?？寡馨l(fā)生因子可以是例如結(jié)合涉及促進(jìn)血管發(fā)生的生長因子或生長因子受體的小分子或抗體。在本文中優(yōu)選的抗血管發(fā)生因子是結(jié)合血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的抗體，諸如Bevacizumab(AVASTIN)。術(shù)語"細(xì)胞因子，，是由一種細(xì)胞群釋^L,作為細(xì)胞間介質(zhì)作用于另一細(xì)胞的蛋白質(zhì)的通稱。此類細(xì)胞因子的例子有淋巴因子、單核因子和傳統(tǒng)的多肽激素。細(xì)胞因子包括生長激素，諸如人生長激素、N-曱硫氨酰人生長激素和牛生長激素；曱狀旁腺素；曱狀腺素；胰島素；胰島素原；松馳素；松馳素原；糖蛋白激素類，諸如促卵泡激素(FSH)、促曱狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH);肝生長因子；成纖維細(xì)胞生長因子；促乳素；胎盤催乳激素；腫瘤壞死因子-a和-P;穆勒氏(Mullerian)抑制性物質(zhì)；小鼠促性腺激素相關(guān)肽；抑制素；激活素；血管內(nèi)皮生長因子；整聯(lián)蛋白；血小板生成素(TPO);神經(jīng)生長因子，諸如NGF-P;血小板(衍生)生長因子；轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)，諸如TGF-a和TGF-P;胰島素樣生長因子-I和-II;紅細(xì)胞生成素(EPO);骨誘導(dǎo)因子(osteoinductivefactor);干擾素，諸如干擾素-a、-卩和-y;集落刺激因子(CSF),諸如巨噬細(xì)胞CSF(M-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞CSF(GM-CSF)和粒細(xì)胞CSF(G-CSF);白介素(IL)，諸如IL-1、IL-la、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12;腫瘤壞死因子，諸如TNF-a或tnf-(3;及其它多肽因子，包括LIF和kit配體(KL)。在用于本文時(shí)，術(shù)語細(xì)胞因子包括來自天然來源或來自重組細(xì)胞培養(yǎng)物的蛋白質(zhì)及天然序列細(xì)胞因子的生物學(xué)活性等效物。在用于本文時(shí)，術(shù)語"靶向EGFR的藥物"指結(jié)合EGFR并任選抑制EGFR活化的治療劑。此類藥劑的例子包括結(jié)合EGFR的抗體和小分子。結(jié)合EGFR的抗體的例子包括MAb579(ATCCCRLHB8506)、MAb455(ATCCCRLIIB8507)、MAb225(ATCCCRL8508)、MAb528(ATCCCRL8509)(參見美國專利第4，943，533號(hào)，Mendelsohn等)及其變體，諸如嵌合化225(C225或Cetuximab;ERBUTIX⑧)和重構(gòu)人225(H225)(參見WO96/40210，ImcloneSystemsInc.);IMC-11F8,—種完全人的EGFR靶向抗體(Imclone);結(jié)合II型突變體EGFR的抗體(美國專利第5,212,290號(hào))；結(jié)合EGFR的人源化和嵌合抗體，如美國專利第5，891，996號(hào)中所記載的；及結(jié)合EGFR的人抗體，諸如ABX-EGF(參見WO98/50433,Abgenix);EMD55900(Stragliotto等，Eur.J.Cancer32A:636-640(1996));EMD7200(matuzumab)，一種針對EGFR的人源化EGFR抗體，其與EGF和TGF-a二者竟?fàn)嶦GFR結(jié)合；及mAb806或人源化mAb806(Johns等，J.Biol.Chem.279(29):30375-30384(2004))。抗EGFR抗體可偶聯(lián)細(xì)胞毒劑，如此產(chǎn)生免疫偶聯(lián)物(參見例如EP659,439A2,MerckPatentGmbH)。結(jié)合EGFR的小分子的例子包括ZD1839或Gefitinib(IRESSA;AstraZeneca);CP-358774或Erlotinib(TARCEVATM;Genentech/OSI);和AG1478、AG1571(SU5271;Sugen);EMD-7200。"酪氨酸激酶抑制劑，，指抑制酪氨酸激酶諸如HER受體的酪氨酸激酶活性的分子。此類抑制劑的例子包括上一段中提到的靶向EGFR的藥物；小分子HER2酪氨酸激酶抑制劑，諸如可從Takeda購買的TAK165;CP-724,714，一種口服的ErbB2受體酪氨酸激酶選擇性抑制劑(Pfizer和OSI);優(yōu)先結(jié)合EGFR但抑制HER2和EGFR二者過表達(dá)細(xì)胞的雙重HER抑制劑，諸如EKB-569(可從Wyeth購買)；GW572016(可從Glaxo購買)，一種口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制劑；PKI-166(可從Novartis購買)；泛(pan)HER抑制劑，諸如canertinib(CI-1033;Pharmacia);Raf國l抑制劑，諸如可從ISISPharmaceuticals購買、抑制Raf-l信號(hào)傳導(dǎo)的反義劑ISIS-5132;非HER耙向TK抑制劑，諸如可從Glaxo購買的Imatinibmesylate(GLEEVAC);MAPK胞外調(diào)控激酶I抑制劑CI-1040(可從Pharmacia購買)；喹唑啉類，諸如PD153035,4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡咬并嘧啶類；嘧啶并嘧，定類；吡咯并嘧咬類，諸如CGP59326、CGP60261和CGP62706;吡唑并嘧啶類，4-(苯氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶；姜黃素(二阿魏酰曱烷，4,5-雙(4-氟笨胺基)-酞亞胺)；含硝基噻吩模塊的tyrphostines;PD-0183805(Warner-Lambert);反義分子(例如那些結(jié)合HER編碼核酸的)；喹喔啉類(美國專利第5，804，396號(hào))；tryphostins(美國專利第5,804,396號(hào))；ZD6474(AstraZeneca);PTK-787(Novartis/ScheringAG);泛HER抑制劑，諸如CI-1033(Pfizer);Affinitac(ISIS3521;Isis/Lilly);Imatinibmesylate(Gleevac;Novartis);PKI166(Novartis);GW2016(GlaxoSmithKline);CI-1033(Pfizer);EKB-569(Wyeth);Semaxinib(Sugen);ZD6474(AstraZeneca);PTK-787(Novartis/ScheringAG);INC-1C11(Imclone);或任何以下專利出版物中所記載的美國專利第5,804,396號(hào)；WO99/09016(AmericanCyanimid);WO98/43960(AmericanCyanamid);WO97/38983(WarnerLambert);WO99/06378(WarnerLambert);WO99/06396(WarnerLambert);WO96/30347(Pfizer，Inc.);WO96/33978(Zeneca);WO96/3397(Zeneca);WO96/33980(Zeneca)。本文中，化療劑的"固定的"(fixed)或"平坦的"(flat)劑量指不考慮患者的體重(WT)和體表面積(BSA)而施用于人類患者的劑量。因此，固定的或平坦的劑量不是作為mg/kg劑量或mg/m^'J量提供的，而是作為治療劑的絕對量提供的。"加載，'(loding)劑量在本文中一般包括施用于患者的治療劑的初始劑量，后續(xù)其一個(gè)或多個(gè)維持劑量。一般而言，施用單個(gè)加載劑量，但本文中還涵蓋多個(gè)加載劑量。通常，所施用的加載劑量的量超過所施用的維持劑量的量，和/或加載劑量的施用比維持劑量更頻繁，從而比使用維持劑量更早達(dá)到治療劑的期望穩(wěn)態(tài)濃度。"維持"(maintenance)劑量在本文中指在治療期間施用于患者的一個(gè)或多個(gè)劑量的治療劑。通常，維持劑量以一定的治療間隔施用，例如大約每周一次，大約每兩周一次，大約每三周一次，或大約每四周一次。II.抗體的生產(chǎn)由于在優(yōu)選的實(shí)施方案中，HER二聚化抑制劑是抗體，下文描述了用于生成依照本發(fā)明使用的HER抗體的例示性技術(shù)。用于生成抗體的HER抗原可以是例如可溶形式的HER受體胞外結(jié)構(gòu)域或其包含期望表位的部分?；蛘?，在其細(xì)胞表面表達(dá)HER的細(xì)胞(例如經(jīng)轉(zhuǎn)化而過表達(dá)HER2的NIH-3T3細(xì)胞；或癌瘤細(xì)胞系，諸如SK-BR-3細(xì)胞，參見Stancovski等，PNAS(USA)88:8691-8695(1991))可用于生成抗體?？捎糜谏煽贵w的其它形式HER受體對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。(i)多克隆抗體多克隆抗體優(yōu)選通過在動(dòng)物中多次皮下(sc)或腹膜內(nèi)(ip)注射相關(guān)抗原和佐劑來生成。使用雙功能或衍生化試劑，例如馬來酰亞胺苯曱?；腔牾啺孵?通過半胱氨酸殘基偶聯(lián))、N-羥基琥珀酰亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐、S0C12、或R'N二C二NR(其中R和W是不同的烴基)，將相關(guān)抗原與在待免疫物種中有免疫原性的蛋白質(zhì)偶聯(lián)可能是有用的，例如匙孔蟲戚血藍(lán)蛋白、血清清蛋白、牛曱狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑。通過將例如100嗎或5嗎蛋白質(zhì)或偶聯(lián)物(分別用于家兔或小鼠)與3倍體積的弗氏完全佐劑混和并將該溶液皮內(nèi)注射于多個(gè)部位，將動(dòng)物針對抗原、免疫原性偶聯(lián)物或衍生物進(jìn)行免疫。一個(gè)月后，通過多個(gè)部位的皮下注射，用弗氏完全佐劑中初始量l/5-l/10的肽或偶聯(lián)物對動(dòng)物進(jìn)行加強(qiáng)免疫。7-14天后，采集動(dòng)物的血液，并測定血清的抗體滴度。對動(dòng)物進(jìn)行加強(qiáng)免疫，直到滴度達(dá)到平臺(tái)(plateau)。優(yōu)選的是，將動(dòng)物用相同抗原但與不同蛋白質(zhì)和/或通過不同交聯(lián)劑偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物進(jìn)行加強(qiáng)免疫。偶聯(lián)物還可在重組細(xì)胞培養(yǎng)中作為蛋白質(zhì)融合物來制備。同樣，適當(dāng)使用凝聚劑諸如明礬來增強(qiáng)免疫應(yīng)答。單克隆抗體本領(lǐng)域有多種方法可用于制備本文中的單克隆抗體。例如，單克隆抗體可使用最初由Kohler等，Nature256:495(1975)記載的雜交瘤方法、通過重組DNA方法(美國專利第4,S1《SW號(hào))來制備。在雜交瘤方法中，如上所述免疫小鼠或其它適宜的宿主動(dòng)物，諸如倉鼠，以引發(fā)生成或能夠生成如下抗體的淋巴細(xì)胞，所述抗體將特異性結(jié)合用于免疫的蛋白質(zhì)?；蛘?，可以在體外免疫淋巴細(xì)胞。然后，使用合適的融合劑諸如聚乙二醇將淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，以形成雜交瘤細(xì)胞(Goding，MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103,AcademicPress,1986)。將如此制備的雜交瘤細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中接種和培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基優(yōu)選含有抑制未融合的親本骨髓瘤細(xì)胞生長或存活的一種或多種物質(zhì)。例如，若親本骨髓瘤細(xì)胞缺乏酶次黃。票呤鳥噤呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT或HPRT),則用于雜交瘤的培養(yǎng)基典型的將含有次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(HAT培養(yǎng)基)，這些物質(zhì)阻止HGPRT缺陷細(xì)胞生長。優(yōu)選的骨髓瘤細(xì)胞是那些高效融合、支持所選抗體生成細(xì)胞穩(wěn)定的高水平生成抗體、并對諸如HAT培養(yǎng)基等培養(yǎng)基敏感的。在這些細(xì)胞中，優(yōu)選的骨髓瘤細(xì)胞系是鼠骨髓瘤系，諸如那些可從索爾克研究所細(xì)胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego，California,USA)獲4尋的MOPC-21和MPC-ll小鼠腫瘤及可從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Rockville，Maryland,USA)獲得的SP-2或X63-Ag8-653細(xì)胞衍生的。人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細(xì)胞系用于生成人單克隆抗體也已有記載(Kozbor,J.Immunol.133:3001(1984);Brodeur等，MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)?？蓪﹄s交瘤細(xì)胞正在其中生長的培養(yǎng)基測定針對抗原的單克隆抗體的生成。優(yōu)選的是，通過免疫沉淀或通過體外結(jié)合測定法，諸如放射性免疫測定法(RIA)或酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA),測定由雜交瘤細(xì)胞生成的單克隆抗體的結(jié)合特異性。單克隆抗體的結(jié)合親和力可通過例如Munson等，Anal.Biochem.107:220(1980)的Scatchard分析來測定。在鑒定得到生成具有期望特異性、親和力和/或活性的抗體的雜交瘤細(xì)胞后，所述克隆可通過有限稀釋規(guī)程進(jìn)行亞克隆，并通過標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行培養(yǎng)(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103,AcademicPress,1986)。適于這一目的的培養(yǎng)基包括例如D-MEM或RPMI-1640培養(yǎng)基。另外，雜交瘤細(xì)胞可在動(dòng)物中作為腹水瘤進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)。可通過常規(guī)抗體純化規(guī)程，諸如例如蛋白A-Sepharose、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析，將亞克隆分泌的單克隆抗體與培養(yǎng)基、腹水或血清適當(dāng)分開。編碼單克隆抗體的DNA易于使用常規(guī)規(guī)程分離和測序(例如通過使用能夠特異性結(jié)合編碼鼠抗體重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)。以雜交瘤細(xì)胞作為此類DNA的優(yōu)選來源。一旦分離，可將DNA置于表達(dá)載體中，然后將該表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到不另外生成抗體蛋白質(zhì)的宿主細(xì)胞中，諸如大腸桿菌細(xì)胞、猿COS細(xì)胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞，以在重組宿主細(xì)胞中獲得單克隆抗體的合成。關(guān)于編碼抗體的DNA在細(xì)菌中的重組表達(dá)的綜述性論文包括Skerra等，Curr.OpinioninImmunol.5:256-262(1993)及Pliickthun,Immunol.Revs.130:151-188(1992)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可從使用McCafferty等，Nature348:552-554(1990)所記載的技術(shù)構(gòu)建的噬菌體抗體庫中分離單克隆抗體或抗體片段。Clackson等，Nature352:624-628(1991)及Marks等，J.Mol.Biol.222:581-597(1991)分別記載了使用噬菌體文庫分離鼠和人抗體。后續(xù)出版物記載了通過鏈改組(Marks等，Bio/Technology10:779-783(1992))，以及組合感染和體內(nèi)重組作為構(gòu)建非常大的噬菌體文庫的策略(Waterhouse等，Nuc.AcidsRes.21:2265-2266(1993))，生成高親和力(nM范圍)的人抗體。如此，這些技術(shù)是用于分離單克隆抗體的傳統(tǒng)單克隆抗體雜交瘤技術(shù)的可行替代方法。還可以修飾DNA,例如通過替代即用人重鏈和輕鏈恒定域的編碼序列代替同源鼠序歹'J(美國專利第4,816,567號(hào);Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851(1984))，或通過將非免疫球蛋白多肽的整個(gè)或部分編碼序列與免疫球蛋白編碼序列共價(jià)接合。典型的是，用此類非免疫球蛋白多肽替代抗體的恒定域，或者用它們替代抗體的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的可變域，以產(chǎn)生嵌合二價(jià)抗體，它包含對一種抗原具有特異性的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)和對不同抗原具有特異性的另一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。人源化抗體本領(lǐng)域已經(jīng)記載了用于將非人抗體人源化的方法。優(yōu)選的是，人源化抗體具有一個(gè)或多個(gè)從非人來源引入的氨基酸殘基。這些非人氨基酸殘基常常稱作"輸入"殘基，它們典型的取自"輸入"可變域。人源化可基本上遵循Winter及其同事的方法進(jìn)行(Jones等，Nature321:522-525(1986);Riechmann等，Nature332:323-327(1988);Verhoeyen等,Science239:1534-1536(1988)),通過用高變區(qū)序列替代相應(yīng)的人抗體序列。因而，此類"人源化"抗體是嵌合抗體(美國專利第4,816，567號(hào))，其中本質(zhì)上少于整個(gè)人可變域用來自非人物種的相應(yīng)序列替代。在實(shí)踐中，人源化抗體典型的是其中一些高變區(qū)殘基和可能的一些FR殘基用來自嚙齒類抗體中類似位點(diǎn)的殘基替代的人抗體。用于構(gòu)建人源化抗體的人可變域的選擇，包括輕鏈和重鏈二者，對于降低抗原性非常重要。依照所謂的"最適"(best-fit)方法，用嚙齒類抗體的可變域序列對已知的人可變域序列的整個(gè)文庫進(jìn)行篩選。然后選擇與嚙齒類最接近的人序列作為人源化抗體的人框架區(qū)(FR)(Sims等，J.Immunol.151:2296(1993);Chothia等，J.Mol.Biol.196:901(1987))。另一種方法使用由特定輕鏈或重鏈亞組的所有人抗體的共有序列衍生的特定框架區(qū)。同一框架可用于數(shù)種不同的人源化抗體(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285(1992);Presta等，J.Immunol.151:2623(1993))。更為重要的是，抗體在人源化后保持對抗原的高親和力及其它有利的生物學(xué)特性。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，依照一種優(yōu)選的方法，通過使用親本和人源化序列的三維模型分析親本序列和各種概念性人源化產(chǎn)物的方法來制備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型是公眾可獲得的，且為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉?？色@得圖解和顯示所選候選免疫球蛋白序列的可能三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)的計(jì)算機(jī)程序。檢查這些顯示圖像容許分析殘基在候選免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。這樣，可從受體和輸入序列中選出FR殘基并進(jìn)行組合，從而獲得期望抗體特征，諸如對耙抗原的親和力提高。一般而言，高變區(qū)殘基直接且最實(shí)質(zhì)的涉及對抗原結(jié)合的影響。美國專利第6，949，245號(hào)記載了結(jié)合HER2并阻斷配體對HER受體之活化的例示性人源化HER2抗體的生成。本文中特別感興趣的人源化抗體基本上像鼠單克隆抗體2C4(或其Fab片段)一樣有效的阻斷EGF、TGF-ct和/或HRG介導(dǎo)的MAPK激活，和/或基本上像鼠單克隆抗體2C4(或其Fab片段)一樣有效的結(jié)合HER2。本文中的人源化抗體可例如包含摻入人重鏈可變域的非人高變區(qū)殘基，而且還可在選自69H、71H和73H的位置包含框架區(qū)(FR)替代，采用的是Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD，1991中歹寸出的可變域編號(hào)系統(tǒng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體在69H、71H和73H的兩個(gè)或所有位置包含F(xiàn)R替代。本文中感興趣的例示性人源化抗體包含重鏈可變域互補(bǔ)決定殘基GFTFTDYTMX，其中X優(yōu)選是D或S(SEQIDNO:7);DVNPNSGGSIYNQRFKG(SEQIDNO:8);和/或NLGPSFYFDY(SEQIDNO:9)，任選包含那些CDR殘基的氨基酸修飾，例如其中修飾基本上保持或改善抗體的親和力。例如，感興趣抗體變體可在上述重鏈可變域CDR序列中具有約1處至約7處或者約5處氨基酸替代。此類抗體變體可通過親和力成熟來制備，例如如下文所述。最優(yōu)選的人源化抗體包含SEQIDNO:4中的重鏈可變域氨基酸序列。例如，在前一段中的那些重鏈可變域CDR殘基之外，人源化抗體還可包含輕鏈可變域互補(bǔ)決定殘基KASQDVSIGVA(SEQIDNO:10);SASYX'X2X3,其中X'優(yōu)選是R或L，X2優(yōu)選是Y或E,而X3優(yōu)選是T或S(SEQIDNO:11);和/或QQYYIYPYT(SEQIDNO:12)。此類人源化抗體任選包含上述CDR殘基的氨基酸修飾，例如其中修飾基本上保持或改善抗體的親和處或者約5處氨基酸替代。此類抗體變體可通過親和力成熟來制備，例如如下文所迷。最優(yōu)選的人源化抗體包含SEQIDNO:3中的輕鏈可變域氨基酸序列。本申請還涵蓋親和力成熟的抗體，它結(jié)合HER2并阻斷配體對HER受體之活化。親本抗體可以是人抗體或人源化抗體，例如所含輕鏈可變域和/或重鏈可變域序列分別為SEQIDNO:3和4(即包含Pertuzumab的VL和/或VH)的抗體。親和力成熟的抗體優(yōu)選以優(yōu)于鼠2C4或Pertuzumab的親和力結(jié)合HER2受體(例如根據(jù)使用HER2胞外結(jié)構(gòu)域(ECD)ELISA的評估，例如親和力提高約2倍或約4倍至約100倍或約1000倍)。例示性的用于替代的重《連可變域CDR殘基包括H28、H30、H34、H35、H64、H96、H99，或者兩個(gè)或更多(例如這些殘基中的2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)或7個(gè))的組合。用于改變的輕鏈可變域CDR殘基的例子包括L28、L50、L53、L56、L91、L92、L93、L94、L96、L97，或者兩個(gè)或更多(例如這些殘基中的2個(gè)至3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)或直到約10個(gè))的組合。涵蓋各種形式的人源化抗體或親和力成熟的抗體。例如，人源化抗體或親和力成熟的抗體可以是抗體片段，諸如Fab，它任選與一種或多種細(xì)胞毒劑偶聯(lián)以產(chǎn)生免疫偶聯(lián)物。或者，人源化抗體或親和力成熟的抗體可以是完整抗體，諸如完整的IgGl抗體。優(yōu)選的完整IgGl抗體包含SEQIDNO:13中的輕鏈序列和SEQIDNO:14中的重鏈序列。(iv)人抗體作為人源化的替代方法，可生成人抗體。例如，現(xiàn)在有可能生成在缺乏內(nèi)源免疫球蛋白生成的情況下能夠在免疫時(shí)生成人抗體完整全集的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)。例如，已經(jīng)記載了嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區(qū)(Jh)基因的純合刪除導(dǎo)致內(nèi)源抗體生成的完全抑制。在此類種系突變小鼠中轉(zhuǎn)移大量人種系免疫球蛋白基因?qū)?dǎo)致在抗原攻擊時(shí)生成人抗體。參見例如Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sci,USA90:2551(1993);Jakobovits等,Nature362:255-258(1993);Bruggermann等，YearinImmuno.7:33(1993);及美國專利第5，591，669號(hào)、第5，589，369號(hào)和第5,545,807號(hào)?；蛘?，噬菌體展示技術(shù)(McCafferty等，Nature348:552-553(1990))可用于在體外從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變(V)域基因全集生成人抗體和抗體片段。依照這種技術(shù)，將抗體V結(jié)構(gòu)域基因以符合讀碼框的方式克隆到絲狀噬菌體諸如M13或fd的主要或次要外殼蛋白基因中，并在噬菌體顆粒表面上展示為功能性抗體片段。因?yàn)榻z狀噬菌體顆粒包含噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，以抗體的功此，噬菌體模擬B細(xì)胞的一些特性。噬菌體展示可以多種形式進(jìn)行；有關(guān)綜述參見例^口Johnson,KevinS.,口Chiswell,DavidJ.，CurrentOpinioninStructuralBiology3:564-571(1993)。V基因區(qū)段的數(shù)種來源可用于噬菌體展示。Clackson等，Nature352:624-628(1991)從衍生自經(jīng)免疫小鼠脾的小型V基因隨機(jī)組合文庫中分離得到大量不同的抗n惡唑酮抗體。可本質(zhì)上遵循Marks等，J.Mol.Biol.222:581-597(1991)或Griffith等,EMBOJ.12:725-734(1993)所記載的技術(shù)，由未免疫人供體構(gòu)建V基因全集和分離針對大量不同抗原(包括自身抗原)的抗體。還可參見美國專利第5,565,332號(hào)和第5，573,905號(hào)。如上所述，還可通過體外激活B細(xì)胞來生成人抗體(參見美國專利第5,567，610號(hào)和第5，229,275號(hào))。1998年6月30曰公告的美國專利第5，772,997號(hào)和1997年1月3日公布的WO97/00271中記載了人HER2抗體。(v)抗體片段已經(jīng)開發(fā)了用于生成包含一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段的多種技術(shù)。傳統(tǒng)上，通過蛋白水解消化完整抗體來衍生這些片段(參見例如Morimoto等，JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-117(1992);Brennan等，Science229:81(1985))。然而，現(xiàn)在可直接由重組主細(xì)胞生成這些片段。例如，可從上文討論的噬菌體抗體庫中分離抗體片段?；蛘撸芍苯訌拇竽c桿菌回收Fab'-SH片段并化學(xué)偶聯(lián)以形成F(ab')2片段(Carter等，Bio/Technology10:163-167(1992))。依照另一種方法，可直接從重組宿主細(xì)是顯而易見的。在其它實(shí)施方案中，選擇的抗體是單鏈Fv片段(scFv)。參見W093/16185;美國專利第5,571,894號(hào)；美國專利第5，587,458號(hào)?？贵w片段還可以是"線性抗體"，例如如美國專利第5,641，870號(hào)中所記載的。此類線性抗體片段可以是單特異性的或雙特異性的。(vi)雙特異性抗體雙特異性抗體指具有對至少兩種不同表位的結(jié)合特異性的抗體。例示性的雙特異性抗體可結(jié)合HER2蛋白質(zhì)的兩種不同表位。其它此類抗體可將HER2結(jié)合位點(diǎn)與EGFR、HER3和/或HER4的結(jié)合位點(diǎn)組合在一起?；蛘?，可將HER2臂與結(jié)合白細(xì)胞上觸發(fā)分子諸如T細(xì)胞受體分子(例如CD2或CD3)或IgG的Fc受體(FcyR),諸如FcyRI(CD64)、FcyRII(CD32)和FcyRI11(CD16)的臂組合在一起，使得細(xì)胞防御機(jī)制聚焦于表達(dá)HER2的細(xì)胞。雙特異性抗體還可用于將細(xì)胞毒劑定位于表達(dá)HER2的細(xì)胞。這些抗體擁有HER2結(jié)合臂和結(jié)合細(xì)胞毒劑(例如肥皂草毒蛋白、抗干擾素-a、長春花生物堿類、蓖麻毒蛋白A鏈、曱氨喋呤或放射性同位素半抗原)的臂?？蓪㈦p特異性抗體制備成全長抗體或抗體片段(例如F(ab')2雙特異性抗體)。WO96/16673記載了一種雙特異性HER2/FcYRIII抗體，美國專利第5，837,234號(hào)披露了一種雙特異性HER2/FcYRI抗體IDMl(Osidem)。WO98/02463顯示了一種雙特異性HER2/Fca抗體。美國專利第5,821，337號(hào)教授了一種雙特異性HER2/CD3抗體。MDX-210是一種雙特異性HER2/FcYRIII抗體。用于構(gòu)建雙特異性抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。全長雙特異性抗體的傳統(tǒng)生成基于兩對免疫球蛋白重鏈-輕鏈的共表達(dá)，其中兩種鏈具有不同的特異性(Millstein等，Nature305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機(jī)分配，這些雜交瘤(四源雜交瘤(quadroma))生成10種不同3瓦體分子的潛在混合物，其中只有一種具有正確的雙特異性結(jié)構(gòu)。通常通過親和層析步驟進(jìn)行的正確分子的純化相當(dāng)麻煩且產(chǎn)物產(chǎn)量低。WO93/08829及Traunecker等，EMBOJ.10:3655-3659(1991)中披露了類似的規(guī)程。依照一種不同的方法，將具有期望結(jié)合特異性(抗體-抗原結(jié)合位點(diǎn))的抗體可變域與免疫球蛋白恒定域序列融合。融合優(yōu)選使用包含至少部分鉸鏈、CH2和CH3區(qū)的免疫球蛋白重鏈恒定域。優(yōu)選的是，在至少一種融合物中，第一重鏈恒定區(qū)(CH1)包含輕鏈結(jié)合所必需的位點(diǎn)。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物和(如果需要)免疫球蛋白輕鏈的DNA插入分開的表達(dá)載體，并共轉(zhuǎn)染到合適的宿主生物體中。在用于構(gòu)建的三種多肽鏈比例不等時(shí)提供最佳產(chǎn)量的實(shí)施方案中，這為調(diào)整三種多肽片段的相互比例提供了極大的靈活性。然而，在至少兩種多肽鏈以相同比率表達(dá)導(dǎo)致高產(chǎn)量時(shí)或在該比率沒有特別意義時(shí)，有可能將兩種或所有三種多肽鏈的編碼序列插入同一個(gè)表達(dá)載體。在該方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，雙特異性抗體由一個(gè)臂上具有第一結(jié)合特異性的雜合免疫球蛋白重鏈，和另一個(gè)臂上的雜合免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結(jié)合特異性)構(gòu)成。由于免疫球蛋白輕鏈僅在半個(gè)雙特異性分子中的存在提供了分離的便利途徑，因此發(fā)現(xiàn)這種不對稱結(jié)構(gòu)便于將期望的雙特異性復(fù)合物與不想要的免疫球蛋白鏈組合分開。該方法披露于WO94/04690。關(guān)于生成雙特異性抗體的進(jìn)一步詳情參見例如Suresh等，MethodsinEnzymology121:210(1986)。依照美國專利第5，731，168號(hào)中記載的另一種方法，可改造一對抗體分子之間的界面，以將從重組細(xì)胞培養(yǎng)物回收的異二聚體的百分比最大化。優(yōu)選的界面包含至少部分抗體恒定域的CH3結(jié)構(gòu)域。在該方法中，將第一抗體分子的界面的一個(gè)或多個(gè)小氨基酸側(cè)鏈用較大側(cè)鏈(例如酪氨酸或色氨酸)替換。通過將大氨基酸側(cè)鏈用較小氨基酸側(cè)鏈(例如丙氨酸或蘇氨酸)替換，腔"。這提供了較之其它不想要的終產(chǎn)物諸如同二聚體提高異二聚體產(chǎn)量的機(jī)制。雙特異性抗體包括交聯(lián)的或"異源偶聯(lián)的"抗體。例如，異源偶聯(lián)物中的一種抗體可與親合素偶聯(lián)，另一種抗體與生物素偶聯(lián)。例如，此類抗體建議用于將免疫系統(tǒng)細(xì)胞靶向不想要的細(xì)胞(美國專利第4，676，980號(hào))，及用于治療HIV感染(W091/00360、WO92/200373和EP03089)?？墒褂萌魏伪憷慕宦?lián)方法來制備異源偶聯(lián)抗體。合適的交聯(lián)劑是本領(lǐng)域眾所周知的，并且連同許多交聯(lián)技術(shù)一起披露于美國專利第4,676,980號(hào)。文獻(xiàn)中還記載了自抗體片段生成雙特異性抗體的技術(shù)。例如，可使用化學(xué)連接來制備雙特異性抗體。Brennan等，Science229:81(1985)記載了通過蛋白水解切割完整抗體以生成F(ab'》片段的規(guī)程。將這些片段在存在二硫醇絡(luò)合劑亞砷酸鈉的情況下還原，以穩(wěn)定鄰近的二^J享并防止分子間二;e克鍵的形成。然后將產(chǎn)生的Fab，片段轉(zhuǎn)變?yōu)榱虼趸綍跛狨?TNB)衍生物。然后將Fab'-TNB衍生物之一通過巰基乙胺的還原重新恢復(fù)成Fab'-硫醇，并與等摩爾量的另一種Fab'-TNB衍生物混合，以形成雙特異性抗體。產(chǎn)生的雙特異性抗體可用作酶的選擇性固定化試劑。最新的進(jìn)展便于從大腸桿菌中直接回收Fab'-SH片段，這些片段可化學(xué)偶聯(lián)以形成雙特異性抗體。Shalaby等，丄Exp.Med,175:217-225(1992)記載了生成完全人源化的雙特異性抗體F(ab')2分子。每個(gè)Fab'片段由大腸桿菌分開分泌，并在體外進(jìn)行定向化學(xué)偶聯(lián)以形成雙特異性抗體。如此形成的雙特異性抗體能夠結(jié)合過表達(dá)HER2受體的細(xì)胞和正常人T細(xì)胞，以及觸發(fā)人細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞針對人乳瘤靶物的溶胞活性。還記載了從重組細(xì)胞培養(yǎng)物直接制備和分離雙特異性抗體片段的多種技術(shù)。例如，已使用亮氨酸拉鏈來生成雙特異性抗體。Kostelny等，J.Immunol.148(5):1547-1553(1992)。將來自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉鏈肽通過基因融合與兩種不同抗體的Fab'部分連接?？贵w同二聚體在鉸鏈區(qū)還原而形成單體，然后重新氧化而形成抗體異二聚體。這種方法也可用于生成抗體同二聚體。由Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)記載的"雙抗體，，技術(shù)提供了構(gòu)建雙特異性抗體片段的替代機(jī)制。該片段包含通過接頭相連的重鏈可變域(VH)和輕鏈可變域(vo，所述接頭太短使得同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間不能配對。因而，迫使一個(gè)片段上的VH和VL結(jié)構(gòu)域與另一個(gè)片段上的互補(bǔ)VL和VH結(jié)構(gòu)域配對，由此形成兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。還報(bào)道了通過使用單鏈Fv(sFv)二聚體構(gòu)建雙特異性抗體片段的另一種策略。參見Gruber等，J.Immunol.152:5368(1994)。涵蓋具有超過兩個(gè)效價(jià)的抗體。例如，可制備三特異性抗體。Tutt等，J.Immunol.147:60(1991)。(vii)其它氨基酸序列修飾涵蓋本文所述抗體的氨基酸序列修飾。例如，可能希望改進(jìn)抗體的結(jié)合親和力和/或其它生物學(xué)特性。通過將適宜的核苷酸變化引入抗體核酸或者通過肽合成來制備抗體的氨基酸序列變體。此類修飾包括例如抗體氨基酸序列內(nèi)的殘基刪除和/或插入和/或替代。只要最終的構(gòu)建物具有期望的特性，可進(jìn)行刪除、插入和替代的任意組合以獲得最終的構(gòu)建物。氨基酸變化還可改變抗體的翻譯后加工，諸如改變糖基化位點(diǎn)的數(shù)目或位置?？捎糜隗芏贵w中作為優(yōu)選誘變位置的某些殘基或區(qū)域的一種方法稱作"丙氨酸掃描誘變"，如Cunningham和Wells,Science244:1081-1085(1989)所記載的。這里，鑒定了一個(gè)殘基或一組靶殘基(例如帶電荷的殘基，諸如精氨酸、天冬氨酸、組氨酸、賴氨酸和谷氨酸)，并用中性或帶負(fù)電荷的氨基酸(最優(yōu)選丙氨酸或多丙氨酸)替代，以影響氨基酸與抗原的相互作用。然后通過在或?qū)μ娲稽c(diǎn)引入更多或其它變體，推敲那些對替代展現(xiàn)出功能敏感性的氨基酸位置。如此，雖然引入氨基酸序列變異的位點(diǎn)是預(yù)先決定的，但是突變本身的性質(zhì)不需要預(yù)先決定。例如，為了分析在給定位點(diǎn)處的突變的后果，在耙密碼子或區(qū)域進(jìn)行丙氨酸掃描誘變或隨機(jī)誘變，并對所表達(dá)的抗體變體篩選期望活性。氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端的融合，長度范圍從一個(gè)殘基至包含上百個(gè)或更多殘基的多肽，以及單個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的序列內(nèi)插入。末端插入的例子包括具有N-末端曱硫氨酰殘基的抗體或與細(xì)胞毒性多肽融合的抗體?？贵w分子的其它插入變體包括在抗體的N-或C-末端融合酶(例如用于ADEPT)或提高抗體血清半衰期的多肽。另一類變體是氨基酸替代變體。這些變體在抗體分子中有至少一個(gè)氨基酸殘基用不同殘基替換。最感興趣進(jìn)行替代誘變的位點(diǎn)包括高變區(qū)，但也涵蓋FR改變。保守替代在表l中顯示在標(biāo)題"優(yōu)選替代，，下。如果此類替代導(dǎo)致生物學(xué)活性的改變，那么可以引入表l中稱為"例示替代"的更多實(shí)質(zhì)性改變，或如下文中關(guān)于氨基酸種類的進(jìn)一步描述，并篩選產(chǎn)物。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>對抗體生物學(xué)特性的實(shí)質(zhì)性修飾通過選擇在保持以下方面的效果上顯著不同的替代來完成(a)替代區(qū)域的多肽主鏈的結(jié)構(gòu)，例如作為折疊片或螺旋構(gòu)象，(b)耙位點(diǎn)處分子的電荷或疏水性，或(c)側(cè)鏈的體積。根據(jù)其側(cè)鏈特性的相似性，可將氨基酸如下分組(A.L.Lehninger,于Biochemistry,第2版，pp.73-75,WorthPublishers,NewYork,1975):(1)非極性的Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)(2)不帶電荷的、極性的Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)(3)酸性的Asp(D)、Glu(E)(4)堿性的:Lys(K)、Arg(R)、His(H)或者，基于共同的側(cè)鏈特性，可將天然存在殘基如下分組(1)疏水性的正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)中性、親水性的Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;(3)酸性的Asp、Glu;(4)堿性的His、Lys、Arg;(5)影響鏈取向的殘基Gly、Pro;(6)芳香族的Trp、Tyr、Phe。非保守替代將需要用這些類別之一的一個(gè)成員替換另一個(gè)類別的。任何不牽涉保持抗體正確構(gòu)象的半胱氨酸殘基也可替代，通常用絲氨酸，以改進(jìn)分子的氧化穩(wěn)定性和防止異常交聯(lián)。相反，可向抗體中添加半胱氨酸鍵以改善其穩(wěn)定性(特別是當(dāng)抗體是抗體片段諸如Fv片段時(shí))。特別優(yōu)選的一類替代變體牽涉替代親本抗體(例如人源化或人抗體)的一個(gè)或多個(gè)高變區(qū)殘基。通常，選擇用于進(jìn)一步開發(fā)的所得變體相對于產(chǎn)生它們的親本抗體將具有改良的生物學(xué)特性。產(chǎn)生此類替代變體的一種便利方法牽涉使用噬菌體展示的親和力成熟。簡單的說，將數(shù)個(gè)高變區(qū)位點(diǎn)(例如6-7個(gè)位點(diǎn))突變，在每個(gè)位點(diǎn)產(chǎn)生所有可能的氨基酸替代。如此產(chǎn)生的抗體變體以單價(jià)形式展示在絲狀噬菌體顆粒上，作為與每個(gè)顆粒內(nèi)包裝的M13基因III產(chǎn)物的融合物。然后如本文所公開的對噬菌體展示的變體篩選其生物學(xué)活性(例如結(jié)合親和力)。為了鑒定用于修飾的候選高變區(qū)位點(diǎn)，可進(jìn)行丙氨酸掃描誘變以鑒定對抗原結(jié)合具有重要貢獻(xiàn)的高變區(qū)殘基?；蛘?另外，分析抗原-抗體復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，以鑒定抗體與人HER2之間的接觸點(diǎn)可能是有益的。此類接觸殘基及鄰近殘基是依照本文詳述的技術(shù)進(jìn)行替代的候選位點(diǎn)。一旦產(chǎn)生此類變體，就如本文所述對該組變體進(jìn)4亍篩選，可選4奪在一抗體的另一類氨基酸變體改變了抗體的原始糖基化樣式。改變意味著刪除在抗體中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)或多個(gè)碳水化合物模塊，和/或添加抗體中不存在的一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)?？贵w的糖基化典型的或是N-連接的或是O-連接的。N-連接指碳水化合物模塊附著于天冬酰胺殘基的側(cè)鏈。三肽序列天冬酰胺-X-絲氨酸和天冬酰胺-X-蘇氨酸(其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸)是將碳水化合物模塊酶促附著于天冬酰胺側(cè)鏈的識(shí)別序列。如此，多肽中這兩種三肽序列任一的存在產(chǎn)生了潛在的糖基化位點(diǎn)。O-連接的糖基化指將糖類N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附著于羥基氨基酸，最常見的是絲氨酸或蘇氨酸，但也可使用5-羥脯氨酸或5-羥賴氨酸。向抗體中添加糖基化位點(diǎn)可通過改變氨基酸序列使其包含一個(gè)或多個(gè)上述三肽序列而便利的完成(用于N-連接的糖基化位點(diǎn))。所述改變還可通過向原始抗體的序列中添加或替代一個(gè)或多個(gè)絲氨酸或蘇氨酸殘基來進(jìn)行(用于O-連接的糖基化位點(diǎn))。若抗體包含F(xiàn)c區(qū)，則可改變附著其上的碳水化合物。例如，美國專利申請US2003/0157108Al(Presta,L.)中記載了有缺乏巖藻糖的成熟碳水化合物結(jié)構(gòu)附著于抗體Fc區(qū)的抗體。還可參見US2004/0093621Al(KyowaHakkoKogyoCo.,Ltd.)。WO03/011878(Jean-Mairet等)和美國專利第6,602，684號(hào)(Umana等)中提到了在附著于抗體Fc區(qū)的碳水化合物中有等分N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)的抗體。WO97/30087(Patel等)中報(bào)告了在附著于抗體Fc區(qū)的寡糖中有至少一個(gè)半乳糖殘基的抗體。關(guān)于有更改碳水化合物附著于其Fc區(qū)的抗體還可參見WO98/58964(Raju，S.)和WO99/22764(Raju,S.)?？赡芟Ｍ谛?yīng)器功能方面改良本發(fā)明的抗體，例如增強(qiáng)抗體的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)和/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。這可通過在抗體Fc區(qū)中引入一個(gè)或多個(gè)氨基酸替代來實(shí)現(xiàn)?；蛘?另外，可在Fc區(qū)中引入半胱氨酸殘基，從而容許在該區(qū)中形成鏈間二硫4建。如此產(chǎn)生的同二聚體抗體可具有改進(jìn)的內(nèi)在化能力和/或提高的補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷和抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC)。參見Caron等，J.Exp.Med.176:1191-1195(1992)和Shopes，B.,J.Immunol.148:2918-2922(1992)。具有增強(qiáng)的抗腫瘤活性的同二聚體抗體還可使用如Wolff等，CancerResearch53:2560-2565(1993)中記載的異雙功能交聯(lián)劑來制備?；蛘?，抗體可改造成具有雙重Fc區(qū)，由此可具有增強(qiáng)的補(bǔ)體溶胞和ADCC能力。參見Stevenson等，Anti-CancerDrugDesign3:219-230(1989)。WO00/42072(Presta，L.)記載了在存在人效應(yīng)細(xì)胞時(shí)具有改進(jìn)的ADCC功能的抗體，其中所述抗體在其Fc區(qū)中包含氨基酸替代。優(yōu)選的是，具有改進(jìn)的ADCC的抗體在Fc區(qū)的位置298、333和/或334(Eu殘基編號(hào)方式)包含替代。優(yōu)選的是，改變的Fc區(qū)是在這些位置中的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)處包含替代或由其組成的人IgGlFc區(qū)。任選將此類替代與一處或多處增加Clq結(jié)合和/或CDC的替代結(jié)合起來。WO99/51642、美國專利第6,194,551Bl號(hào)、美國專利第6,242，195Bl號(hào)、美國專利第6，528,624Bl號(hào)和美國專利第6,538,124號(hào)(Idusogie等)中記載了具有改變的Clq結(jié)合和/和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)的抗體。所述抗體在其Fc區(qū)的氨基酸位置270、322、326、327、329、313、333和/或334(Eu殘基編號(hào)方式)中的一個(gè)或多個(gè)處包含氨基酸替代。為了延長抗體的血清半衰期，可將補(bǔ)救受體結(jié)合表位摻入抗體(尤其是抗體片段)，如例如美國專利第5，739,277號(hào)中所記載的。在用于本文時(shí)，術(shù)語"補(bǔ)救受體結(jié)合表位"指IgG分子(例如lgG"IgG2、IgG;或IgG4)的Fc區(qū)中負(fù)責(zé)延長IgG分子體內(nèi)血清半衰期的表位。WO00/42072(Presta,L,)和US2005/0014934A1(Hinton等)中記載了具有改進(jìn)的對新生兒Fc受體(FcRn)的結(jié)合和延長的半衰期的抗體。這些抗體包含其中具有一處或多處改進(jìn)Fc區(qū)對FcRn結(jié)合的替代的Fc區(qū)。例如，F(xiàn)c區(qū)可在一個(gè)或多個(gè)以下位置具有替代238、250、256、265、272、286、303、305、307、311、312、314、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、428或434(Eu殘基編號(hào)方式)。優(yōu)選的具有改進(jìn)的FcRn結(jié)合的含F(xiàn)c區(qū)抗體變體在其Fc區(qū)的位置307、380和434(Eu殘基編號(hào))中的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)處包含氨基酸替代。還涵蓋具有三個(gè)或更多(優(yōu)選四個(gè))功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的工程改造抗體(美國申請?zhí)朥S2002/0004587Al，Miller等)。編碼抗體氨基酸序列變體的核酸分子可通過本領(lǐng)域知道的多種方法來制備。這些方法包括但不限于從天然來源分離(在天然存在氨基酸序列變體的情況中)，或者通過對早期制備的變體或非變體型式的抗體進(jìn)行寡核苷酸介導(dǎo)的(或定點(diǎn))誘變、PCR誘變和盒式誘變來制備。(viii)篩選具有期望特性的抗體上文已經(jīng)描述了用于生成抗體的技術(shù)。如杲需要，可以進(jìn)一步選擇具有某些生物學(xué)特性的抗體。為了鑒定阻斷配體對HER受體之活化的抗體，可測定抗體阻斷HER配體結(jié)合表達(dá)HER受體(例如連同另一種HER受體，該HER受體與感興趣HER受體形成HER異寡聚體)的細(xì)胞的能力。例如，可將天然表達(dá)或者經(jīng)轉(zhuǎn)染而表達(dá)HER異寡聚體的HER受體的細(xì)胞與抗體一起溫育，然后暴露于經(jīng)標(biāo)記的HER配體。然后可評估抗體阻斷配體結(jié)合HER異寡聚體中的HER受體的能力。例如，可以以24孔板的形式在冰上使用單層MCF7培養(yǎng)物進(jìn)行HER2抗體對HRG結(jié)合MCF7乳瘤細(xì)胞系的抑制，基本上如美國專利第6，949，245號(hào)中所記載的?？蓪ER2單克隆抗體添加到每個(gè)孔中并溫育30分鐘。然后可加入'"I標(biāo)記的rHRG(31n7-224(25pm),并可繼續(xù)溫育4-16小時(shí)?？衫L制劑量-應(yīng)答曲線，并可計(jì)算感興趣抗體的ICso值。在一個(gè)實(shí)施方案中，阻斷配體對HER更低，更優(yōu)選10nM或更低。若抗體是抗體片段諸如Fab片段，則在此測定法中抑制HRG結(jié)合MCF7細(xì)胞的IQ()可以是例如約100nM或更低，更優(yōu)選50nM或更低。或者/另外，可評估抗體阻斷HER配體刺激HER異寡聚體中存在的HER受體的酪氨酸磷酸化的能力。例如，可將內(nèi)源表達(dá)或者經(jīng)轉(zhuǎn)染而表達(dá)HER受體的細(xì)胞與抗體一起溫育，然后使用抗磷酸酪氨酸單克隆(任選偶聯(lián)有可檢測標(biāo)記物)測定HER配體依賴性酪氨酸磷酸化活性。美國專利第5,766，863號(hào)中記載的激酶受體活化測定法也可用于測定HER受體活化和抗體對該活性的阻斷。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以篩選在MCF7細(xì)胞中抑制HRG刺激pl80酪氨酸磷酸化的抗體，基本上如美國專利第6,949,245號(hào)中所記載的。例如，可將MCF7細(xì)胞分配到24孔板中，并將HER2的單克隆抗體加入每個(gè)孔中，于室溫溫育30分鐘；然后可向每個(gè)孔中加入rHRG(31nw44至終濃度0.2nM,并可繼續(xù)溫育8分鐘。從每個(gè)孔中吸走培養(yǎng)基，通過加入100(alSDS樣品緩沖液(5%SDS，25mMDTT，25mMTris-HCl，pH6.8)來終止反應(yīng)?？稍?-12Q/。梯度凝膠(Novex)上對每一份樣品(25^1)進(jìn)行電泳，然后通過電泳轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上。可對抗磷酸酪氨酸(以l嗎/ml)免疫印跡顯影，并通過反射密度法(reflectancedensitometry)對分子量約180,000的主要反應(yīng)性條帶的強(qiáng)度定量。在此測定法中，所選抗體優(yōu)選將HRG刺激pl80酪氨酸磷酸化顯著抑制至對照的大約0-35%?？衫L制通過反射密度法測定的對HRG刺激pl80酪氨酸磷酸化的抑制作用的劑量-應(yīng)答曲線，并可計(jì)算感興趣抗體的IC.so。在一個(gè)實(shí)施方案中，阻斷配體對HER受體之活化的抗體在此測定法中抑制HRG刺激pl80酪氨酸磷酸化的IC5o為約50nM或更低，更優(yōu)選10nM或吏低。若抗體是抗體片段諸如Fab片段，則在此測定法中抑制HRG刺激pl80酪氨酸磷酸化的IC5o可以是例如約100nM或更低，更優(yōu)選50nM或更低。還可評估抗體對MDA-MB-175細(xì)胞的生長抑制效果，例如基本上如Schaefer等，Oncogene15:1385-1394(1997)中所記載的。依照此測定法，可將MDA-MB-175細(xì)胞用HER2單克隆抗體(10昭/mL)處理4天，并用結(jié)晶紫染色。與HER2抗體的溫育對此細(xì)胞系顯示的生長抑制效果可能與使用單克隆抗體2C4所展示的相似。在還有一個(gè)實(shí)施方案中，外源HRG不會(huì)顯著逆轉(zhuǎn)這種抑制作用。優(yōu)選的是，存在和缺乏外源HRG時(shí)，該抗體都將能夠以大于單克隆抗體4D5的程度(并且任選以大于單克隆抗體7F3的程度)抑制MDA-MB-175細(xì)胞的細(xì)胞增殖。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)的測定，諸如美國專利第6，949，245號(hào)中所記載的，感興趣HER2抗體可在MCF7和SK-BR-3細(xì)胞中阻斷調(diào)蛋白依賴性的HER2與HER3結(jié)合，實(shí)質(zhì)上比單克隆抗體4D5更有效，優(yōu)選實(shí)質(zhì)上比單克隆抗體7F3更有效。為了鑒定生長抑制性HER2抗體，可篩選抑制HER2過表達(dá)的癌細(xì)胞生長的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，在約0.5-30昭/m的抗體濃度，所選生長抑制性抗體能夠?qū)⒓?xì)胞培養(yǎng)物中SK-BR-3細(xì)胞的生長抑制約20-100%，優(yōu)選約50-100%。為了鑒定此類抗體，可進(jìn)行美國專利第5,677,171號(hào)中記載的SK-BR-3測定法。依照此測定法，在補(bǔ)充有10%胎牛血清、谷氨酰胺和青霉素鏈霉素的培養(yǎng)基DMEM和F12的1:1混合液中培養(yǎng)SK-BR-3細(xì)胞。將SK-BR-3細(xì)胞以20，000個(gè)細(xì)胞分配入35mm細(xì)胞培養(yǎng)皿(2ml/35mm培養(yǎng)皿)。每個(gè)培養(yǎng)皿加入0.5-30(ig/mlHER2抗體。6天后，使用電子COULTERTM細(xì)胞計(jì)數(shù)器對細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)，與未處理細(xì)胞進(jìn)行比較?？蛇x擇那些將SK-BR-3細(xì)胞的生長抑制約20-100%或約50-100%的抗體作為生長抑制性抗體。關(guān)于用于篩選生長抑制性抗體諸如4D5和3E8的測定法，參見美國專利第5，677，171號(hào)。為了選擇誘導(dǎo)凋亡的抗體，可利用使用BT474細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白結(jié)合測定法。如前一段所討論的，在培養(yǎng)亞中培養(yǎng)和接種BT474細(xì)胞。然后除去培養(yǎng)基，只用新鮮培養(yǎng)基或者含有10pg/ml單克隆抗體的培養(yǎng)基替換。在3天溫育期后，用PBS洗滌細(xì)胞單層，并通過胰蛋白酶消化脫離。然后如上文關(guān)于細(xì)胞死亡測定法所討論的，將細(xì)胞離心，重懸于Ca"結(jié)合緩沖液，并等分到試管中。然后往試管中加入經(jīng)標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白(例如膜聯(lián)蛋白V-FTIC)(1嗎/ml)?？墒褂肍ACSCANTM流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和FACSCONVERTTMCellQuest軟件(BectonDickinson)來分析樣品。選擇那些相對于對照誘導(dǎo)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平的膜聯(lián)蛋白結(jié)合的抗體作為誘導(dǎo)凋亡的抗體。在膜聯(lián)蛋白結(jié)合測定法之外，還可利用使用BT474細(xì)胞的DNA染色測定法。為了進(jìn)行此測定法，將已經(jīng)如前兩段所述用感興趣抗體處理過的BT474細(xì)胞與9昭/mlHOECHST33342tm于37。C溫育2小時(shí)，然后在EPICSELITETM流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(CoulterCorporation)上使用MODFITLTTM軟件(VeritySoftwareHouse)進(jìn)行分析。可選擇在此測定法中誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞百分比變化為未處理細(xì)胞的2倍或更高(優(yōu)選3倍或更高)(直到100%凋亡細(xì)胞)的抗體作為促凋亡抗體。關(guān)于用于篩選誘導(dǎo)凋亡的抗體諸如7C2和7F3的測定法，參見WO98/17797。為了篩選結(jié)合HER2上感興趣抗體所結(jié)合的表位的抗體，可進(jìn)行常規(guī)的交叉阻斷觀寸定法，"i者濁口Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,EdHarlow和DavidLane,1988中所記載的，以評估所述抗體是否交叉阻斷諸如2C4或Pertuzumab等抗體與HER2的結(jié)合。或者/另外，可通過本領(lǐng)域知道的方法進(jìn)行表位作圖和/或可研究抗體-HER2結(jié)構(gòu)(Franklin等，CancerCell5:317-328(2004))以了解抗體結(jié)合HER2的哪個(gè)/哪些結(jié)構(gòu)域。(lx)Pertuzumab纟且合物在HER2抗體組合物的一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物包含主要種類Pertuzumab抗體及其一種或多種變體的混合物。本文中Pertuzumab主要種類抗體的優(yōu)選實(shí)施方案是包含SEQIDNo.3和4中的輕鏈和重鏈可變域氨基酸序列，最優(yōu)選包含選自SEQIDNo.13和17的輕鏈氨基酸序列及選自SEQIDNo.14和18的重鏈氨基酸序列的抗體(包括那些序列的脫酰胺和/或氧化變體)。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含主要種類Pertuzumab抗體及其包含氨基末端前導(dǎo)延伸的氨基酸序列變體的混合物。優(yōu)選的是，所述氨基末端前導(dǎo)延伸位于抗體變體的輕鏈上(例如位于抗體變體的一條或兩條輕鏈上)。所述F(ab，)2片段)，但優(yōu)選二者都是全長抗體。本文中的抗體變體可以在其任何一條或多條重鏈或輕鏈上包含氨基末端前導(dǎo)延伸。優(yōu)選的是，所述氨基末端前導(dǎo)延伸位于抗體的一條或兩條輕鏈上。所述氨基末端前導(dǎo)延伸優(yōu)選包含VHS-或由其組成。組合物中氨基末端前導(dǎo)延伸的存在可通過多種分析技術(shù)來檢測，包括但不限于N-末端序列分析、電荷異質(zhì)性的測定法(例如陽離子交換層析或毛細(xì)管區(qū)帶電泳)、質(zhì)語等。組合物中抗體變體的量通常在如下范圍內(nèi)，從構(gòu)成用于檢測變體的任何測定法(優(yōu)選N-末端序列分析)的檢出限的量至少于主要種類抗體量的量。通常，組合物中約20%或更少(例如從約1%至約15%,例如從5%至約15%)的抗體分子包含氨基末端前導(dǎo)延伸。這樣的百分比量優(yōu)選使用定量N-末端序列分析或陽離子交換分析(優(yōu)選使用高分辨率、弱陽離子交換柱，諸如PROPACWCX-10TM陽離子交換柱)來測定。在氨基末端前導(dǎo)延伸變體之外，還涵蓋主要種類抗體和/或變體的氨基酸序列改變，包括但不限于在其一條或所有兩條重鏈上包含C-末端賴氨酸殘基的抗體、脫酰胺抗體變體等。此外，主要種類抗體或變體還可包含糖基化變異，其非限制性例子包括包含附著于其Fc區(qū)的Gl或G2寡糖結(jié)構(gòu)的抗體、包含附著于其輕鏈的碳水化合物模塊的抗體(例如一種或兩種碳水化合物模塊，諸如葡萄糖或半乳糖附著于抗體的一條或兩條輕鏈，例如附著于一個(gè)或多個(gè)賴氨酸殘基)、包含一條或兩條非糖基化重鏈的抗體、或包含附著于其一條或兩條重鏈的唾液酸化寡糖的抗體等。組合物可從表達(dá)HER2抗體的基因工程細(xì)胞系回收，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系，或者可通過肽合成來制備。(x)免疫偶聯(lián)物本發(fā)明還涉及包含抗體且其與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)的免疫偶聯(lián)物，所述細(xì)胞毒劑諸如化療劑、毒素(例如小分子毒素或者細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或變體)或放射性同位素(即放射偶聯(lián)物)。上文已經(jīng)描述了可用于生成此類免疫偶聯(lián)物的化療劑。本文還涵蓋抗體與一種或多種小分子毒素的偶聯(lián)物，諸如加利車霉素(calicheamicin)、美登素(maytansine)(美國專利第5,208，020號(hào))、單端孢菌毒素(trichothene)和CC1065。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，將抗體與一個(gè)或多個(gè)美登素分子偶聯(lián)(例如每個(gè)抗體分子偶聯(lián)約1個(gè)至約10個(gè)美登素分子)。例如，可將美登素轉(zhuǎn)變?yōu)镸ay-SS-Me,后者可還原為May-SH3并與經(jīng)修飾抗體反應(yīng)(Chari等，CancerResearch51127-131(1992))以生成美登木素生物堿類-抗體免疫偶聯(lián)物。另一種感興趣的免疫偶聯(lián)物包含抗體且其與一個(gè)或多個(gè)加利車霉素分子偶聯(lián)。加利車霉素抗生素家族能夠在亞皮摩爾濃度產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂?？墒褂玫募永嚸顾氐慕Y(jié)構(gòu)類似物包括但不限于^1、a,ot31、N-乙?；?1、PSAG和e、(Hinman等，CancerResearch53:3336-3342(1993);Lode等，CancerResearch58:2925-2928(1998))。還可參見美國專利第5，714，586號(hào)；第5,712，374號(hào)；第5，264，586號(hào)和第5，773，001號(hào)，明確收入本文作為參考?？墒褂玫拿富疃舅丶捌淦伟ò缀矶舅谹鏈、白喉毒素的非結(jié)合活性片段、外毒素A鏈(來自銅綠假單孢菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒蛋白A鏈、相思豆毒蛋白A鏈、蒴蓮根毒素(modeccin)A鏈、a-帚曲毒素(sarcin)、油桐(AIeuritesfordii)毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陸(PhytolacaAmericana)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordicacharantia)抑制物、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、月巴皂草(sapaonariaofficinalis)抑制物、白樹毒素(gelonin)、絲林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酉分霉素(phenomycin)、依i若霉素(enomycin)和單端孑包菌毒素(tricothecenes)。參見例如1993年10月28日公布的WO93/21232。本發(fā)明還涵蓋抗體與具有核酸水解活性的化合物(例如核糖核酸酶或DNA內(nèi)切核酸酶諸如脫氧核糖核酸酶；DNA酶)之間形成的免疫偶聯(lián)物。有多種放射性同位素可用于生成方欠射偶聯(lián)的HER2抗體。例子包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、p32和Lu的放射性同位素?？墒褂枚喾N雙功能蛋白質(zhì)偶聯(lián)劑來制備抗體與細(xì)胞毒劑的偶聯(lián)物，諸如N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP),琥珀酰亞氨基4-(N-馬來酰亞氨基甲基)環(huán)己胺-l-羧酸酯，亞氨基硫烷(IT),亞氨酸酯(諸如鹽酸己二酰亞氨酸二曱酯)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對疊氮苯曱酰基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對重氮笨甲?；?乙二胺)、二異氰酸酯(諸如曱笨-2，6-二異氰酸酯)、和雙活性氟化合物(諸如l,5-二氟-2，4-二硝基苯)的雙功能衍生物。例如，可制備蓖麻毒蛋白免疫毒素，如Vitetta等，Science238:1098(1987)中所記載的。碳-14標(biāo)記的l-異硫氰酸苯甲基-3-曱基二亞乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于將放射性核苷酸與抗體偶聯(lián)的例示性螯合劑。參見WO94/11026。接頭可以是便于在細(xì)胞中釋放細(xì)胞毒性藥物的"可切割接頭"。例如，可使用酸不穩(wěn)定接頭、肽酶敏感接頭、二甲基接頭或含二硫化物接頭(Chari等,CancerResearch52:127-131(1992))?；蛘?，可例如通過重組技術(shù)或肽合成來制備包含抗體與細(xì)胞毒劑的融合蛋白。本文還涵蓋其它免疫偶聯(lián)物。例如，可將抗體與多種非蛋白質(zhì)性質(zhì)聚合物中的一種連接，例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧化烯、或聚乙二醇與聚丙二醇的共聚物。還可將抗體包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠嚢中(例如分別是羥曱基纖維素或明膠微膠嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微膠嚢)、在膠狀藥物投遞系統(tǒng)中(例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠嚢)、或在粗滴乳狀液中。此類技術(shù)披露于Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版，Osol，A.編，1980。本文公開的抗體還可配制成免疫脂質(zhì)體?？赏ㄟ^本領(lǐng)域知道的方法來制備包含抗體的脂質(zhì)體，諸如Epstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:3688(1985);Hwang等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4030(1980);美國專利第4，485,045號(hào)和第4，544,545號(hào)；1997年10月23日公布的WO97/38731中所記載的。美國專利第5,013,556號(hào)中披露了循環(huán)時(shí)間延長的脂質(zhì)體。特別有用的脂質(zhì)體可用含有磷脂酰膽^成、膽固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂質(zhì)組合物通過反相蒸發(fā)法生成。將脂質(zhì)體擠過具有限定孔徑的濾器，以產(chǎn)生具有期望直徑的脂質(zhì)體。可將本發(fā)明抗體的Fab，片段經(jīng)二硫化物交換反應(yīng)與脂質(zhì)體偶聯(lián)，如Martin等，J.Biol.Chem.257:286-288(1982)中所記載的。任選在脂質(zhì)體中包含化療劑。參見Gabizon等，J.NationalCancerInst.81(19):1484(1989)。III.選擇接受治療的患者本文中的患者在治療前進(jìn)行診斷測試。一般而言，如果進(jìn)行診斷測試，那么可以從需要治療的患者獲得樣品。若受試者患有癌癥，則樣品可以是腫瘤樣品或其它生物學(xué)樣品，諸如生物學(xué)流體，包括但不限于血液、尿液、唾液、腹水或衍生物諸如血清和血漿等等。若對腫瘤樣品進(jìn)行診斷測定法，則腫瘤樣品可以來自卵巢癌、腹膜癌、輸卵管癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、前列&泉癌或結(jié)腸直腸癌腫瘤樣品等。本文中的生物學(xué)樣品可以是經(jīng)過固定的樣品，例如福爾馬林固定、石蠟包埋的(FFPE)樣品，或者是冷凍的樣品。在一個(gè)實(shí)施方案中，評估患者中的EGF和/或TGF-a水平，其中EGF和/或TGF-a水平與正常水平相比升高表明該患者是接受HER二聚化抑制劑治療的候選者。此類EGF和/或TGF-a水平可以在體內(nèi)評估或者在取自患者的各種生物學(xué)樣品中評估。優(yōu)選的是，所測試的生物學(xué)樣品是血清或血漿樣品。用于測定mRNA或蛋白質(zhì)表達(dá)的方法有多種，包括但不限于基因表達(dá)概況分析、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)包括定量實(shí)時(shí)PCR(qRT-PCR)、樣i陣列分析、基因表達(dá)系歹'j分卄斤(seriaJanalysisofgeneexpression,SAGE)、MassARRAY、通過大量平行簽名測序(MassiveParallelSignitureSequencing,MPSS)進(jìn)行的基因表達(dá)分析、蛋白質(zhì)組學(xué)、免疫組化(IHC)等。優(yōu)選對mRNA定量。所述mRNA分析優(yōu)選使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)或通過微陣列分析來進(jìn)行。若采用PCR,則優(yōu)選的PCR形式是定量實(shí)時(shí)PCR(qRT-PCR)。在一個(gè)實(shí)施方案中，如果上文提到的一種或多種基因的表達(dá)處于中值或高于中值，例如與相同腫瘤類型的其它樣品相比，那么認(rèn)為是陽性表達(dá)?？梢栽谂c基因表達(dá)的測量基本上同時(shí)測定中值表達(dá)水平，或者可以事先測定。多篇已發(fā)表的期刊論文(例如Godfrey等，J.Molec.Diagnostics2:84-91(2000);Specht等，Am.J.Pathol.158:419-29(2001))中給出了使用固定的、石蠟包埋的組織作為RNA來源的代表性基因表達(dá)概況分析方案的步驟包括mRNA分離、純化、引物延伸和擴(kuò)增。簡單的說，一種代表性方法首先將石蠟包埋的腫瘤組織樣品切成約10微米厚的切片。然后提取RNA并除去蛋白質(zhì)和DNA。分析RNA濃度后，如果需要可以包括RNA修復(fù)和/或擴(kuò)增步驟，并使用基因特異性啟動(dòng)子逆轉(zhuǎn)錄RNA,然后PCR。最后分析數(shù)據(jù)，根據(jù)所檢驗(yàn)?zāi)[瘤樣品中鑒定的特征性基因表達(dá)模式來確定患者可用的最佳治療選項(xiàng)。實(shí)施例1提供了一種特定的血清ELISA生物測定法方案。還可利用體內(nèi)診斷測定法來評估EGF和/或TGF-a,例如通過施用結(jié)合待檢測分子且標(biāo)記有可檢測標(biāo)記物(例如放射性同位素)的分子(諸如抗體)，然后對患者進(jìn)行外部掃描以定位所述標(biāo)記物。在評估EGF和/或TGF-a之外，可以測定癌癥中的HER^達(dá)或擴(kuò)增。多種診斷/預(yù)后測定法可用于此目的。在一個(gè)實(shí)施方案中，可通過IHC來分析HER過表達(dá)，例如使用HERCEPTEST⑧(Dako)?？蓪碜阅[瘤活檢的石蠟包埋組織切片進(jìn)行IHC測定法并對照如下HER2蛋白質(zhì)染色強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)得分0:未觀察到染色或者在少于10%的腫瘤細(xì)胞中觀察到膜染色。得分l+:在超過10%的腫瘤細(xì)胞中檢測到微弱的/剛剛可察覺的膜染色。所述細(xì)胞只在其部分膜中有染色。得分2+:在超過10%的腫瘤細(xì)胞中觀察到微弱至中等的完全膜染色。得分3+:在超過10%的腫瘤細(xì)胞中觀察到中等至強(qiáng)烈的完全膜染色。那些HER2過表達(dá)評估得分為0或1+的腫瘤可表征為HER2未過表達(dá)，而那些得分為2+或3+的肺瘤可表征為HER2過表達(dá)。HER2過表達(dá)的肺瘤可根據(jù)對應(yīng)于每個(gè)細(xì)胞表達(dá)的HER2分子拷貝數(shù)的免疫組化得分進(jìn)行定級(jí)，并且可通過生化方法測定0=0-10，000個(gè)拷貝/細(xì)胞，1+=至少約200,000個(gè)拷貝/細(xì)胞，2+=至少約500,000個(gè)拷貝/細(xì)胞，3+=至少約2,000，000個(gè)拷貝/細(xì)胞。導(dǎo)致酪氨酸激酶的配體依賴性活化的3+水平的HER2過表達(dá)(Hudziak等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:7159-7163(1987))發(fā)生于約30%的乳腺癌中，而且在這些患者中，無復(fù)發(fā)存活和總體存活減少(Slamon等，Science244:707-712(1989);Slamon等,Science235:177-182(1987》?；蛘?另外，可對福爾馬林固定、石蠟包埋的腫瘤組織進(jìn)行FISH測定法諸如INFORM丁M(Ventana，Arizona)或PATHVISIONTM(Vysis,Illinois)以測定腫瘤中HER2擴(kuò)增的程度(如果有的話)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述癌癥是表達(dá)(可以是過表達(dá))EGFR的癌癥，可對所述表達(dá)進(jìn)行評估，如上文所述用于評估HER2表達(dá)的方法。IV.藥用配制劑依照本發(fā)明使用的HER二聚化抑制劑的治療用配制劑可通過將具有期望純度的抗體與任選的藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑(Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版，Osol,A.編，1980)混合，通常以凍干劑型或水溶液的形式制備供貯存。還涵蓋抗體晶體(參見美國專利申請2002/0136719)?？山邮艿妮d體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所采用的劑量和濃度對接受者是無毒的，包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和曱硫氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二曱基千基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；酚、丁醇或苯曱醇；對羥基苯曱酸烴基酯，諸如對羥基苯曱酸曱酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間曱酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA;糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；金屬復(fù)合物(例如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)；和/或非離子表面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICStm或聚乙二醇(PEG)。WO97/04801中記載了凍干抗體配制劑，明確收入本文作為參考。優(yōu)選用于治療用途的Pertuzumab配制劑在20mM乙酸組氨酸，120mM蔗糖，0.02%聚山梨醇20,pH6.0中含有30mg/mLPertuzumab。一種備選的Pertuzumab配制劑含有25mg/mLPertuzumab,10mM組氨酸-HCl緩沖劑，240mM蔗糖，0.02%聚山梨醇20,pH6.0。本文中的配制劑還可含有所治療具體適應(yīng)癥所必需的超過一種活性化合物，優(yōu)選那些活性互補(bǔ)且彼此沒有不利影響的。下面"方法"一節(jié)中描述了可以與HER二聚化抑制劑組合的多種藥物。合適的是，此類分子以對于預(yù)定目的有效的量組合存在?；钚猿煞诌€可包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠嚢中(例如分別是羥曱基纖維素或明膠微膠嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微膠嚢)、在膠狀藥物投遞系統(tǒng)中(例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠嚢)、或在粗滴乳狀液中。此類技術(shù)纟皮露于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版，Osol,A.編,1980?？芍苽涑掷m(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適例子包括含有抗體的固體疏水性聚合物半透性基質(zhì)，該基質(zhì)是定型產(chǎn)品的形式，例如薄膜或微膠嚢。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-曱基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利第3，773,919號(hào))、L-谷氨酸與L-谷氨酸Y乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構(gòu)成的可注射微球體)及聚—D-(-)-3-羥基丁酸。用于體內(nèi)施用的配制劑必須是無菌的。這可容易的通過使用無菌濾膜過濾來實(shí)現(xiàn)。V.使用HER二聚化抑制劑的治療本發(fā)明提供了用于在產(chǎn)生升高水平的EGF和/或TGF-a的癌癥患者中延長存活的方法，包括對患者施用延長該患者的存活的量的HER二聚化抑制劑。優(yōu)選的是，所述HER二聚化抑制劑是HER2二聚化抑制劑和/或抑制HER異二聚化。用于鑒定HER二聚化抑制劑療法候選患者的方法已經(jīng)在上文節(jié)III中討論?？梢杂肏ER二聚化抑制劑治療的多種癌癥的例子已在上文定義部分列出。優(yōu)選的癌癥適應(yīng)證包括卵巢癌、腹膜癌、輸卵管癌、乳腺癌包括轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)、肺癌包括非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌和結(jié)腸直腸癌。在一個(gè)實(shí)施方案中，所治療的癌癥是晚期的、頑固性的、復(fù)發(fā)性的、化療耐藥性的和/或鉑耐藥性的癌癥。HER二聚化抑制劑療法延長TTP和/或存活。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER二聚化抑制劑療法使TTP或存活比通過施用針對所治療癌癥的批準(zhǔn)的抗腫瘤劑或護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)而實(shí)現(xiàn)的TTP或存活多延長至少約5。/。、或至少10%、或至少15%、或至少20%、或至少25%。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于在患有卵巢、腹膜或輸卵管癌癥且其癌癥表現(xiàn)出HER2活化的患者中延長病情進(jìn)展前時(shí)間(TTP)或存活的方法，包括對患者施用延長該患者的TTP或存活的量的Pertuzumab。該患者可患有晚期的、頑固性的、復(fù)發(fā)性的、化療耐藥性的和/或鉑耐藥性的卵巢、腹膜或輸卵管癌癥。對患者施用Pertuzumab可以例如使TTP或存活比對此類患者施用托泊替康或脂質(zhì)體多柔比星而實(shí)現(xiàn)的TTP或存活多延長至少約5。/。、或至少10%、或至少15%、或至少20%、或至少25%。HER二聚化抑制劑依照已知方法施用于人類患者，諸如靜脈內(nèi)施用，例如推注或一段時(shí)間的連續(xù)輸注，通過肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、鞘內(nèi)、口服、表面或吸入路徑。優(yōu)選靜脈內(nèi)施用抗體。對于癌癥的預(yù)防或治療，HER二聚化抑制劑的劑量將取決于如上定義的待治療癌癥的類型、癌癥的嚴(yán)重程度和進(jìn)程、施用抗體是為了預(yù)防還是治療目的、先前的療法、患者的臨床史和對抗體的響應(yīng)、及主治醫(yī)師的判斷。在一個(gè)實(shí)施方案中，施用固定劑量的HER二聚化抑制劑。合適的是，固定劑量可以一次性施用或經(jīng)過一系列治療施用于患者。若施用固定劑量，則該劑量優(yōu)選在約20mg到約2000mgHER二聚化抑制劑的范圍內(nèi)。例如，固定劑量可以是約420mg、約525mg、約840mg、或約1050mgHER二聚化抑制齊'h諸如Pertuzumab。若施用多劑，則可以是例如約每周、約每兩周、約每三周、或約每四周施用，但優(yōu)選約每三周施用。固定劑量可以例如持續(xù)施用直至病情進(jìn)展、不良事件、或醫(yī)師確定的其它時(shí)間為止。例如，可以施用約2劑、3劑、或4劑、直到約17劑或更多劑固定劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，施用一個(gè)或多個(gè)加載劑量的抗體，隨后是一個(gè)或多個(gè)維持劑量的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對患者施用多個(gè)相同的劑量。.根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，施用約840mg(加栽劑量)固定劑量的HER二聚化抑制劑(例如Pertuzumab),隨后是一個(gè)或多個(gè)約420mg(維持劑量)劑量的所述抗體。維持劑量優(yōu)選約每三周施用，總共施用至少2劑，直到17劑或更多劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，施用一個(gè)或多個(gè)約1050mg固定劑量的HER二聚化抑制劑(例如Pertuzumab)，例如每三周施用。根據(jù)該實(shí)施方案，施用一個(gè)、兩個(gè)或更多個(gè)固定劑量，施用例如可長達(dá)l年(17個(gè)周期)及所需更長時(shí)間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，施用約1050mg固定劑量的HER二聚化抑制劑(例如Pertuzumab)作為加載劑量，隨后是一個(gè)或多個(gè)約525mg的維持劑量。根據(jù)本實(shí)施方案，每三周對患者施用約l個(gè)、2個(gè)或更多個(gè)維持劑量。盡管可以作為單一抗腫瘤劑來施用HER二聚化抑制劑，但是任選用HER二聚化抑制劑與一種或多種化療劑的組合來治療患者。優(yōu)選的是，至少一種化療劑是抗代謝物類化療劑，諸如吉西他濱。聯(lián)合施用包括使用分開的配制劑或單一的藥用配制劑的共施用或同時(shí)施用，及任一次序的序貫施用，其中優(yōu)選有一段時(shí)間所有兩種(或多種)活性劑同時(shí)發(fā)揮其生物學(xué)活性。如此，可在施用HER二聚化抑制劑之前或之后施用抗代謝物類化療劑。在此實(shí)施方案中，至少一次抗代謝物類化療劑的施用與至少一次HER二聚化抑制劑的施用之間的計(jì)時(shí)優(yōu)選為約l個(gè)月或更短，最優(yōu)選約2周或更短?；蛘?，以單一的配制劑或分開的配制劑同時(shí)對患者施用抗代謝物類化療劑和HER二聚化抑制劑?；焺?例如抗代謝物類化療劑，諸如吉西他濱)與HER二聚化抑制劑(例如Pertuzumab)的聯(lián)合治療可對患者產(chǎn)生協(xié)同的、或者大于疊加的治療效益?？勾x物類化療劑，如果施用的話，通常以其已知?jiǎng)┝渴┯茫蛘呷芜x由于藥物的聯(lián)合作用或者由于施用抗代謝物類化療劑造成的不良副作用而降低?？梢勒罩圃焐痰恼f明書使用此類化療劑的制備和劑量給藥時(shí)間表，或者由熟練從業(yè)人員憑經(jīng)驗(yàn)確定。若抗代謝物類化療劑是吉西他濱，優(yōu)選的是，例如在三周周期的第l天和第8天施用約600mg/n^至1250mg/mS之間(例如約1000mg/m2)的一劑。在HER二聚化抑制劑和抗代謝物類化療劑之外，還可聯(lián)合其它治療方案。例如，可施用第二(第三、第四等)化療劑，其中第二種化療劑或是另一種不同的抗代謝物類化療劑，或是非抗代謝物的化療劑。例如，第二種化療劑可以是紫杉烷(諸如帕利他塞或多西他塞)、卡培他濱或基于鉑的化療劑(諸如卡鉑、順鉑或奧沙利鉑)、蒽環(huán)類抗生素(諸如多柔比星，包括脂質(zhì)體多柔比星)、托泊替康、培美曲塞、長春花生物堿類(諸如長春瑞濱)和TLK286。可以施用不同化療劑的"雞尾酒"。可以與HER二聚化抑制劑聯(lián)合的其它治療劑包括以下任一種或多種第二種不同的HER二聚化抑制劑(例如生長抑制性HER2抗體諸如Trastuzumab或誘導(dǎo)HER2過表達(dá)細(xì)胞凋亡的HER2抗體諸如7C2、7F3或其人源化變體)；針對不同腫瘤相關(guān)抗原諸如EGFR、HER3、HER4的抗體；抗激素化合物，例如抗雌激素化合物諸如他莫昔芬，或芳香酶抑制劑；保心藥(以預(yù)防或減輕與治療有關(guān)的任何心肌功能障礙)；細(xì)胞因子；靶向EGFR的藥物(諸如TARCEVA、IRESSA⑧或Cetuximab);抗血管發(fā)生劑(尤其是Genentech以商標(biāo)AVASTINTM銷售的Bevacizumab);酪氨酸激酶抑制劑；COX抑制劑(例如COX-l或COX-2抑制劑)；非類固醇抗炎藥，Celecoxib(CELEBREX);法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(例如可從JohnsonandJohnson購買的Tipifarnib/ZARNESTRARl15777或可從Schering-Plough購買的LonafarnibSCH66336);結(jié)合癌胚蛋白CA125的抗體，諸如Oregovomab(MoAbB43.13);HER2疫苗(諸如Pharmexia的HER2AutoVac疫苗，或Dendreon的APC8024蛋白質(zhì)疫苗，或GSK/Corixa的HER2肽疫苗)；其它HER耙向療法(例如Trastuzumab、Cetuximab、ABX-EGF、EMD7200、Gefitinib、Erlotinib、CP724714、C簡3、GW572016、IMC-11F8、TAK165等);Raf和/或ras抑制劑(參見例如WO2003/86467);鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液(DOXIL⑧)；拓樸異構(gòu)酶I抑制劑諸如托泊替康；紫杉烷；HER2與EGFR雙重酪氨酸激酶抑制劑諸如lapatinib/GW572016;TLK286(TELCYTA);EMD-7200;治療惡心的藥物，諸如血清素拮抗劑、類固醇或苯并二氮卓；預(yù)防或治療皮滲的藥物或標(biāo)準(zhǔn)痤瘡療法，包括表面或口服抗生素；治療或預(yù)防腹瀉的藥物；降體溫藥物，諸如醋氨酚(acetaminophen)、苯海4立明(diphenhydramine)或麥"定(meperidine);造血生長因子等。任何上述共施用藥劑的合適劑量就是那些目前所使用的劑量，而且可以由于該藥劑與HER二聚化抑制劑的聯(lián)合作用(協(xié)同作用)而降低。在上述治療方案之外，還可對患者進(jìn)行手術(shù)去除癌細(xì)胞和/或放療。若抑制劑是抗體，優(yōu)選的是，所施用的抗體是棵抗體。然而，所施用的抑制劑可以與細(xì)胞毒劑偶聯(lián)。優(yōu)選的是，所偶聯(lián)的抑制劑和/或其結(jié)合的抗原受到細(xì)胞的內(nèi)在化，導(dǎo)致該偶聯(lián)物殺傷其所結(jié)合的癌細(xì)胞的治療功效提高。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞毒劑靶向或干擾癌細(xì)胞中的核酸。此類細(xì)胞毒劑的例子包括美登木素生物堿類(maytansinoids)、加利車霉素(calicheamicin)、核糖核酸酶和DNA內(nèi)切核酸酶。本申請涵蓋通過基因療法來施用HER二聚化抑制劑。參見例如1996年3月14日公布的WO96/07321,它關(guān)注使用基因療法來生成胞內(nèi)抗體。有兩種主要方法使核酸(任選包含在載體中)進(jìn)入患者的細(xì)胞，即體內(nèi)(invivo)和回體(exvivo)。對于體內(nèi)投遞，通常在需要抗體的部位將核酸直接注射到患者體內(nèi)。對于回體治療，取出患者的細(xì)胞，將核酸導(dǎo)入這些分離的細(xì)胞，并將經(jīng)過修飾的細(xì)胞或是直接施用于患者，或是例如裝入多孔膜內(nèi)并植入患者體內(nèi)(參見例如美國專利第4,892,538號(hào)和第5,283,187號(hào))。有多種技術(shù)可用于將核酸導(dǎo)入可存活細(xì)胞。這些技術(shù)根據(jù)是將核酸轉(zhuǎn)移至體外培養(yǎng)細(xì)胞還是目的宿主的體內(nèi)細(xì)胞而有所變化。適于在體外將核酸轉(zhuǎn)移到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的技術(shù)包括使用脂質(zhì)體、電穿孔、顯^:注射、細(xì)胞融合、DEAE-右旋糖苷、磷酸鈣沉淀法等。常用于回體投遞基因的載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒。目前優(yōu)選的體內(nèi)核酸轉(zhuǎn)移技術(shù)包括用病毒載體(諸如腺病毒、I型單純皰疹病毒或腺伴隨病毒)和基于脂質(zhì)的系統(tǒng)(可用于脂質(zhì)介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的脂質(zhì)有例如DOTMA、DOPE和DC-Chol)進(jìn)行的轉(zhuǎn)染。在有些情況中，希望與靶向耙細(xì)胞的試劑一起提供核酸源，所述試劑諸如對細(xì)胞表面膜蛋白或耙細(xì)胞特異的抗體、靶細(xì)胞上受體的配體等。在采用脂質(zhì)體時(shí)，與胞吞作用相關(guān)細(xì)胞表面膜蛋白結(jié)合的蛋白質(zhì)可用于靶向和/或促進(jìn)攝入，例如對特定細(xì)胞類型具有向性的衣殼蛋白或其片段、在循環(huán)中發(fā)生內(nèi)在化的蛋白質(zhì)的抗體、及靶向細(xì)胞內(nèi)定位和延長細(xì)胞內(nèi)半衰期的蛋白質(zhì)。受體介導(dǎo)的胞吞技術(shù)記載于例如Wu等，J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987);Wagner等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA87:3410-3414(1990)。關(guān)于目前已知的基因標(biāo)記和基因治療方案的綜述參見Anderson等，Science256:808-813(1992)。還可參見WO93/25673及其引用的參考文獻(xiàn)。VI.材料保藏以下雜交瘤細(xì)胞系已經(jīng)保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,10801UniversityBoulevard,Manassas,VA20110-2209,USA)(ATCC):抗體名稱ATCC號(hào)保藏日7C2ATCCHB-122151996.10.177F3ATCCHB-122161996.10.174D5ATCCCRL104631990.05,242C4ATCCHB-126971999.04.08這些保藏是依據(jù)國際承認(rèn)用于專利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯條約(BudapestTreaty)及其(布達(dá)佩斯條約)實(shí)施細(xì)則的規(guī)定進(jìn)行的。這保證了自保藏之日起保存保藏的存活培養(yǎng)物30年。保藏物可根據(jù)布達(dá)佩斯條約的條款通過ATCC獲得，并服從Genentech公司與ATCC之間的協(xié)議，它保證了在有關(guān)美國專利授權(quán)后，保藏人對公眾獲取所保藏材料施加的所有限制將不可撤回的取消，保證了在有關(guān)美國專利授權(quán)后或者在任何美國或外國專利申請向公眾公開后，以兩者中居先者為準(zhǔn)，公眾可永久且不受限制的獲得保藏培養(yǎng)物的后代，而且保證了依據(jù)35USC§122及依照它的管理章程(包括37CFR§1.14，特別要提及8860G638)由美國專利和商標(biāo)局長批準(zhǔn)的個(gè)人將有資格獲得保藏培養(yǎng)物的后代。下文非限制性實(shí)施例例示了本發(fā)明的更多詳情。本說明書中的所有引文的公開內(nèi)容明確收入本文作為參考。實(shí)施例實(shí)施例1:用Pertuzumab治療的卵巢癌患者中的臨#清生物標(biāo)志分析研究設(shè)計(jì)實(shí)施了標(biāo)簽公開的(open-label)、單組的(single-arm)、多中心的(multicenter)1I期研究以評估基于腫瘤的HER2活化對rhuMAb2C4(Pertuzumab)在患有晚期、頑固性或復(fù)發(fā)性卵巢癌的受試者中的功效的影響。在試驗(yàn)分組(cohort)1中，登記了65位患有對先前的化學(xué)療法不應(yīng)或在先前的化學(xué)療法后復(fù)發(fā)的晚期卯巢癌的受試者，他們每個(gè)周期接受420mgrhuMAb(Pertuzumab)。其中，6H立受試者接受了治療，4位受試者從研究中退出且沒有接受任何Pertuzumab治療。分組l中登記且達(dá)到入選標(biāo)準(zhǔn)的受試者經(jīng)受了腫瘤組織的活組織檢查或自腹水吸出腫瘤細(xì)胞。通過ELISA對該組織分析了HER2磷酸化，即定量測量樣品中的磷酸化HER2和總HER2。以單次使用的配制劑提供了Pertuzumab，即在10mML-組氨酸(pH6.0)、240mM蔗糖和0.02%聚山梨醇酯20中含有25mg/mLrhuMAb2C4。每個(gè)10cc小瓶裝有約175mgrhuMAb2C4(7.0mL/瓶)。接收后，將小瓶冷藏于2。C-8。C,直至使用。因?yàn)榕渲苿┎缓栏瘎越o出了僅能刺穿小瓶封口一次的指示。丟棄任何殘余溶液。在裝有0.9%氯化鈉注射液的PVC聚乙烯和非PVC聚烯烴袋(USP)中稀釋的輸注用rhuMAb2C4溶液容許在使用前在2。C-8。C貯存24小時(shí)。為沒有顯示出進(jìn)行性疾病證據(jù)的受試者以IV輸注方式每3周施用Pertuzumab直至l年(17個(gè)周期)。受試者接受840mg加載劑量(loadingdose)(第l個(gè)周期)，接著第2個(gè)及后續(xù)周期為420mg。在完成分組l的登記后，開始分組2的登記。分組2中達(dá)到入選標(biāo)準(zhǔn)的受試者接受1050mgPertuzumab，其以IV輸注方式每3周施用直至l年(H個(gè)周期)。分組2中的受試者沒有經(jīng)受腫瘤組織的活組織檢查或自腹水吸出腫瘤細(xì)胞。在6周、3個(gè)月及此后每3個(gè)月后評價(jià)了響應(yīng)。在18周(4.5個(gè)月)時(shí)僅對分組2中的受試者另外評價(jià)了響應(yīng)。通過臨床評估和CT掃描或等效手段，使用實(shí)體瘤的響應(yīng)評估標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)評價(jià)了可測量的疾病(參見例如Therasse等，丄Nat.CancerInst.92(3):205-216(2000))。依照CA-125變化和疾病的臨床和放射學(xué)證據(jù)評價(jià)了患有可評估(evaluable)但不是可測量(measurable)疾病的受試者的響應(yīng)。主要的功效終點(diǎn)在開始Pertuzumab治療后的研究過程中任何時(shí)間的最佳總響應(yīng)，其在開始Pertuzumab治療后由調(diào)查人員使用RECIST的評價(jià)或CA-125變化來測定。次要的功效終點(diǎn)病'l"青進(jìn)展前日寸間(timetodiseaseprogression,TTDP)，響應(yīng)持續(xù)時(shí)間，存活時(shí)間(總體存活，OS),和3、6和12個(gè)月時(shí)沒有疾病進(jìn)展的受試者的百分比(無疾病存活，DFS)。疾病進(jìn)展定義為有記錄的進(jìn)行性(progressive)疾病或死亡，以先發(fā)生者為準(zhǔn)。病情進(jìn)展前時(shí)間(TTDP)定義為自研究藥物治療的第一天(第l天)直至有記錄的疾病進(jìn)展或死亡時(shí)間之間的時(shí)間。存活的持續(xù)時(shí)間定義為自第1天直至死亡時(shí)間之間的時(shí)間。響應(yīng)持續(xù)時(shí)間定義為自初始完全或部分響應(yīng)至疾病進(jìn)展或死亡時(shí)間之間的時(shí)間。為本研究中3、6和12個(gè)月后沒有進(jìn)展的受試者的百分比設(shè)立了95%精確置4言區(qū)間(exactconfidenceinterval)。使用Kaplan-Meier存活方法計(jì)算了病情進(jìn)展前時(shí)間和存活持續(xù)時(shí)間的中值。此試驗(yàn)中摻入了生物學(xué)標(biāo)志物的探索性評價(jià)。該評價(jià)的目的是找到一種或多種可預(yù)測哪些受試者會(huì)或不會(huì)響應(yīng)Pertuzumab治療的治療前(pre-treatment)生物學(xué)標(biāo)志物，或者鑒定一種或多種可充當(dāng)Pertuzumab活性生物標(biāo)志的治療后(post-therapeutic)生物學(xué)標(biāo)志物。具體而言，生物學(xué)標(biāo)記物評價(jià)容許鑒定尤其有可能自Pertuzumab治療受益的患者群體，所述受益通過一種或多種重要終點(diǎn)來測量，諸如總體存活(OS)或無疾病存活(DFS)。如此，已經(jīng)對正常卵巢上皮組織和卵巢上皮肺瘤進(jìn)行了基因表達(dá)概況分析(profiling)。對在本研究中獲得的卵巢腫瘤樣品進(jìn)行了RNA表達(dá)概況分析以探索RNA表達(dá)和對Pertuzumab響應(yīng)間的關(guān)系。血清生物標(biāo)志的測量對用Pertuzumab治療的、表達(dá)HER2的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的血清評價(jià)了雙調(diào)蛋白、EGF、TGF-a和脫落的HER2(HER2ECD)水平，正如下文所述的。用于評價(jià)血清生物標(biāo)志的試劑盒:<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>依照制造商的推薦實(shí)施HER2-ECDELISA。雙調(diào)蛋白遵循制造商的說明書來準(zhǔn)備試劑、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液和樣品。將EvenCoat山羊抗小鼠IgG微量板條(microplatestrip)(R&D,產(chǎn)品目錄號(hào)CP00A不是該試劑盒所提供的)附著于平板以構(gòu)建ELISA平板。將100(il稀釋的捕捉抗體(該試劑盒所提供的；在PBS中1:180)添加至每個(gè)孔，并將孔在室溫溫育l小時(shí)。抽吸并清洗每個(gè)孔，并將該過程重復(fù)3次，總計(jì)4次清洗。如下清洗孔，即使用多管分液器用400pl洗滌緩沖液(PBS中0.05。/。Tween-20)充滿每個(gè)孔，隨后吸出。最后一次清洗后，通過抽吸除去任何剩余的洗滌緩沖液。然后將平板顛倒并在干凈紙巾上吸干。向每孔添力。100(ll標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或稀釋的樣品(見下文)。在每次移液步驟后更換槍頭。用膠帶(該試劑盒所提供的)覆蓋平板，并于室溫在搖床(rockingplatform)上溫育2小時(shí)。此后，如上文所迷重復(fù)抽吸和清洗步驟。用實(shí)驗(yàn)室消毒劑處理吸出的樣品和清洗溶液。向每孔添加100p檢測抗體(該試劑盒所提供的)，其在試劑稀釋劑(1%BSA，Roth;清蛋白成分V，產(chǎn)品目錄號(hào)T844.2，在PBS中)中1:180稀釋，并將平板在室溫溫育2小時(shí)。此后，如上文所述重復(fù)抽吸和清洗步驟。將1OOiil鏈霉親合素-HRP工作稀釋液添加至每個(gè)孔(該試劑盒所提供的；在試劑稀釋劑中l(wèi):200稀釋)，并將孔用新的膠帶覆蓋且在室溫溫育20分鐘。如上文所述重復(fù)抽吸和清洗步驟。將100fil底物溶液(R&D，產(chǎn)品目錄號(hào)DY999;不是該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔，并將孔在無光照條件下在室溫溫育20分鐘。將50(il停止溶液(1.5MH2S04,Schwefelsaurereinst,Merck,產(chǎn)品目錄號(hào)713)添加至每個(gè)孔，接著小心混合。使用設(shè)置成450nm的微量板讀板儀，立即測定每個(gè)孔的光密度。雙調(diào)蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線在PBS中的1。/。BSA中制備40ng/ml雙調(diào)蛋白儲(chǔ)液，分成小份并貯存在-80。C。PBS中20。/。BSA中的雙調(diào)蛋白溶液超過2周就不穩(wěn)定，因此不被使用。在每次實(shí)驗(yàn)前，自小份雙調(diào)蛋白儲(chǔ)液，在PBS中的20。/。BSA中新鮮準(zhǔn)備雙調(diào)蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線。最高濃度為1000pg/ml(雙調(diào)蛋白儲(chǔ)液的l:40稀釋液)。ELISA試劑盒所提供的標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生線性標(biāo)準(zhǔn)曲線?；贓xcel的曲線分析容許確定每次ELISA的曲線方程。雙調(diào)蛋白樣品在將樣品在試劑稀釋劑中1:1稀釋后，所有樣品都在ELISA的線性范圍內(nèi)。一式兩份測量每個(gè)樣品。根據(jù)數(shù)據(jù)質(zhì)量和足夠的血清量，在需要時(shí)在隨后的實(shí)驗(yàn)中重復(fù)測定。EGF遵循制造商的說明書來準(zhǔn)備試劑、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液和樣品。自框架除去過量的抗體包被的微量滴定板條(該試劑盒所提供的)以構(gòu)建ELISA平板。在確定需要的孔數(shù)目和平板規(guī)劃后，將50pl測定稀釋劑RDl(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔。然后給每個(gè)孔添力o200(il標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或稀釋的樣品(例如在校準(zhǔn)液稀釋劑RD6H中1:20)。在每次移液步驟后更換槍頭。將平板用膠帶(該試劑盒所提供的)覆蓋，并在搖床上在室溫溫育2小時(shí)。抽吸并清洗每個(gè)孔，并將該過程重復(fù)3次，總計(jì)4次清洗。如下實(shí)施清洗，即使用多管分液器用400pl洗滌緩沖液(該試劑盒所提供的)充滿每個(gè)孔，隨后吸出。最后一次清洗后，通過抽吸去除任何剩余的洗滌緩沖液。然后將平板顛倒并在干凈紙巾上吸干。用實(shí)驗(yàn)室消毒劑處理吸出的樣品和清洗溶液，并將200nl偶聯(lián)物(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔。然后將平板用新膠帶覆蓋，并在室溫溫育2小時(shí)。如先前所述重復(fù)抽吸和清洗步驟。將200^d底物溶液(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔，接著在無光照條件下在室溫溫育20分鐘。將50]iil停止溶液(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔，接著小心混合。使用設(shè)置成450nm的微量板讀板儀，在30分鐘內(nèi)測定每個(gè)孔的吸光度。P二GF標(biāo)準(zhǔn)曲線ELISA試劑盒所提供的標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生線性標(biāo)準(zhǔn)曲線。非常小的濃度亦顯示出可檢測的結(jié)果。EGF樣品用樣品實(shí)施了總共4次測定。對每個(gè)樣品測量2-5次，測定的數(shù)目取決于結(jié)果的質(zhì)量(平均值+ASD)和足夠量血清的可獲得性。在將樣品在校準(zhǔn)液稀釋劑RD6H中l(wèi):20稀釋后，所有樣品都在ELISA的線性范圍內(nèi)。TGF-a遵循制造商的說明書來準(zhǔn)備試劑、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液和樣品。自框架去除過量的抗體包被的微量滴定板條(該試劑盒所提供的)以構(gòu)建ELISA平板。在確定需要的孔數(shù)目和平板規(guī)劃后，將100(il測定稀釋劑RDlW(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔，接著給每個(gè)孔添加50(il標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或樣品。在每次移液步驟后更換槍頭。將平板用膠帶(該試劑盒所提供的)覆蓋，并在搖床上在室溫溫育2小時(shí)。抽吸并清洗每個(gè)孔，并將該過程重復(fù)3次，總計(jì)4次清洗。在如下清洗步驟中，使用多管分液器用40(^1洗滌緩沖液(該試劑盒所提供的)充滿每個(gè)孔，隨后抽吸。最后一次清洗后，通過抽吸去除任何剩余的洗滌緩沖液，并將平板顛倒并在干凈紙巾上吸干。用實(shí)驗(yàn)室消毒劑處理吸出的樣品和清洗溶液。將200(ilTGF-a偶聯(lián)物(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔，并將平板用新膠帶覆蓋，并在室溫溫育2小時(shí)。如上文所述重復(fù)抽吸和清洗步驟。此后，將200pl底物溶液(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔，并在無光照條件下在室溫溫育30分鐘。將50pl終止溶液(該試劑盒所提供的)添加至每個(gè)孔，且小心混合。使用設(shè)置成450nm的微量板讀板儀，在30分鐘內(nèi)測定每個(gè)孔的光密度。TGF-a標(biāo)準(zhǔn)曲線ELISA試劑盒所提供的標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生線性標(biāo)準(zhǔn)曲線。非常小的濃度亦顯示出可檢測的結(jié)果。TGF-a樣品用樣品實(shí)施了總共4次測定。在2-4次獨(dú)立的測定中測量樣品。結(jié)果^吏用Spearman氏等級(jí)相關(guān)系凄t斥企馬僉(Spearman，srank-ordercorrelationcoefficienttest)來測試多種標(biāo)志物間的相關(guān)性，且結(jié)果顯示于圖9。依照該檢驗(yàn)，將相關(guān)性在-1(賦予最大負(fù)相關(guān)性)和+1(賦予最大正相關(guān)性)之間定級(jí)。如圖9所示，HER2、TGF-a、雙調(diào)蛋白和EGF的血清水平顯示出非常小的相關(guān)性，這證明了這些基因充當(dāng)獨(dú)立的標(biāo)志物。圖IO顯示了用臨床協(xié)變量檢驗(yàn)的標(biāo)志物的相關(guān)性，所述臨床協(xié)變量包括ECOG得分(BECOG^基線ECOG得分)、先前的化學(xué)療法(PRITCN)、腫瘤負(fù)荷和診斷持續(xù)時(shí)間(DIAGDUR，即受試者在診斷前患有癌癥多久了)。較低的ECOG得分(0和1)表明疾病不太嚴(yán)重，且患者處于相對好的狀態(tài)。較高的ECOG得分(>1)表明自得分2至4逐漸增加的嚴(yán)重程度。如圖10所示，所測試的標(biāo)志物的血清水平和疾病嚴(yán)重程度之間沒有顯著的相關(guān)性。另一方面，雙調(diào)蛋白和EGF血清水平在進(jìn)行了超過4次先前化學(xué)療法治療的受試者中顯著較高。依照Kaplan-Meier方法繪制了存活曲線。使用等級(jí)對數(shù)檢驗(yàn)(log-ranktest)在患者亞組間比較了這些曲線以確定在定義無進(jìn)展存活(PFS)和總體存活(OS)的可能性方面給出最佳辨別的截留(cutoff)。關(guān)于PFS和OS的結(jié)果分別顯示于圖11和12。如圖ll所示，依據(jù)PFS的截留點(diǎn)對EGF水平是特別清楚的(清楚的正相關(guān)性)。依照截留(使用PFS)的患者分布顯示于圖13。如圖所示，所確定的截留對單獨(dú)的標(biāo)志物RGF-a和EGF工作良好，且作為這些標(biāo)志物組合的函數(shù)是特另ll有用的(particularlyusefUlasaflinctionofthesetomarkerscombined)。通過Kaplan-Meier存活分析計(jì)算了存活曲線。通過圖M所示的Kaplan-Meier曲線說明了HER2水平對PFS和OS的影響。通過圖15所示的Kaplan-Mder曲線說明了TGF-a水平對PFS和OS的影響。通過圖16所示的Kaplan-Meier曲線說明了EGF水平對PFS和OS的影響。實(shí)施例2:用Pertuzumab和化學(xué)療法治療的卵巢癌、原發(fā)性劇度癌或輸卵管癌患者中的血清生物標(biāo)志分析研究設(shè)計(jì)實(shí)施了隨機(jī)化的、安慰劑對照的、雙盲的(double-blind)、多中心的II期臨床試驗(yàn)以在患有鉑耐藥性卵巢癌、原發(fā)性腹膜癌或輸卵管癌的受試者中進(jìn)行Pertuzumab(rhuMAb2C4)與化療劑吉西他濱聯(lián)合相對于吉西他濱與安慰劑聯(lián)合的功效的初步評估，正如通過所有受試者的無進(jìn)展存活(PFS)所測量的。另一個(gè)試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)是在患有鉑耐藥性卵巢癌、原發(fā)性腹膜癌或輸卵管癌的受試者中評估Pertuzumab與吉西他濱聯(lián)合相對于吉西他濱與安慰劑聯(lián)合的安全性和耐受性。在接受為晚期疾病施用的基于鉑的化療方案的6個(gè)月時(shí)或6個(gè)月內(nèi)經(jīng)歷了疾病進(jìn)展的受試者入選該研究。容許不超過一種針對鉑耐藥性疾病的先前方案。以l:l的比率將受試者隨機(jī)化分成處理組l(吉西他濱+Pertuzumab)或組2(吉西他濱+安慰劑)。在21天周期的第1天和第8天時(shí)施用吉西他濱。在30分鐘里(+/-5分鐘)以800mg/n^的起始劑量輸注吉西他濱。在21天周期的第l天時(shí)在吉西他濱施用后30分鐘施用盲試研究藥物(blindedstudydrug)(吉西他濱或安慰劑)。Pertuzumab施用的起始加載劑量為840mg(第l個(gè)周期)，接著第2個(gè)及后續(xù)周期為420mg。所施用的匹配安慰劑體積等于準(zhǔn)備Pertuzumab劑量所需懸浮液的量。在該研究中容許沒有進(jìn)行性疾病的受試者接受吉西他濱加盲試研究藥物治療，直至17個(gè)周期。在前8個(gè)周期每6周評估響應(yīng)，然后約每3個(gè)月一次(即在第2、4、6、8、12和17個(gè)周期結(jié)束時(shí))。通過臨床評估和計(jì)算機(jī)斷層照相術(shù)掃描或等效手段，使用實(shí)體瘤的響應(yīng)評估標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)評價(jià)可測量的疾病。依照CA-125變化和疾病的臨床放射學(xué)證據(jù)評價(jià)患有可評估疾病的受試者的響應(yīng)。提供額外同意書的患者可選擇提供血清和血漿樣品，供探索性生物學(xué)標(biāo)志物研究用。這些研究包括HER受體基因家族中潛在突變的評價(jià)、HER家族蛋白和與I正R信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)的下游蛋白的免疫組織化學(xué)、評估HER2活化的二聚化測定法或接近度測定法(proximityassay)、和特定基因的表達(dá)水平測定(所述特定基因被鑒定為與HER2信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)或可充當(dāng)響應(yīng)的標(biāo)志物或預(yù)測物)。所述研究包括基因表達(dá)分析和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)。主要結(jié)果測量無進(jìn)展存活，其由調(diào)查人員使用RECIST的評價(jià)或CA-125變化(僅僅是患有不可測量疾病的受試者)來測定。次要結(jié)果測量客，見響應(yīng)率(部分響應(yīng)或完全響應(yīng))、響應(yīng)持續(xù)時(shí)間、存活時(shí)間和在4個(gè)月時(shí)沒有進(jìn)展。主要的終點(diǎn)主要的功效終點(diǎn)是無進(jìn)展存活，定義為自隨機(jī)化至有記錄的疾病進(jìn)展或研究時(shí)由任何原因?qū)е碌乃劳?以先發(fā)生者為準(zhǔn))之間的時(shí)間。調(diào)查人員依照RECIST或CA-125變化分別對患有可測量的和不可測量的疾病的受試者評價(jià)疾病進(jìn)展。研究時(shí)的死亡定義為服用最后一劑研究藥物后30天內(nèi)由任何原因?qū)е碌乃劳?。在最后一次肺瘤或CA-125評價(jià)時(shí)檢查沒有疾病進(jìn)展或死亡的受試者的數(shù)據(jù)(或者，如果在基線訪問后沒有實(shí)施腫瘤或CA-125評估，那么在隨機(jī)化的時(shí)間加1天時(shí)進(jìn)4亍)。使用Kaplan-Meier方法估算每個(gè)處理組的無進(jìn)展存活中值。使用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型(Coxproportionalhazardmodel)以兩種模型(具有和沒有隨機(jī)化分層因子[東部合作腫瘤學(xué)小組(EastemCooperativeOncologyGroup,ECOG)狀態(tài)、疾病可測性和用于鉑耐藥性疾病的先前方案數(shù)目])估算風(fēng)險(xiǎn)率(即在95%置信區(qū)間的治療效果量級(jí))。分層模型產(chǎn)生主要置信區(qū)間(primaryconfidenceinterval)。使用通過隨機(jī)化分層因子(ECOG狀態(tài)、疾病可測性和用于鉑耐藥性疾病的先前方案數(shù)目)分層的等級(jí)對數(shù)檢驗(yàn)實(shí)施探索性假設(shè)測試(exploratoryhypothesistesting),用于評價(jià)處理組間的差異。還提供了非分層的等級(jí)對數(shù)檢驗(yàn)。還對患有可測量疾病的受試者和患有不可測量疾病的受試者提出分開的無進(jìn)展存活分析；因?yàn)槊拷M中受試者的數(shù)目可能是少的，所以不可對兩組都實(shí)施探索性等級(jí)對數(shù)檢驗(yàn)。還對不經(jīng)受任何用于鉑耐藥性疾病的先前方案的受試者和經(jīng)受一種用于鉑耐藥性疾病的先前方案的受試者實(shí)施分開的無進(jìn)展存活分析；對兩組均實(shí)施探索性等級(jí)對數(shù)檢驗(yàn)。次要的終點(diǎn)客觀#客觀響應(yīng)定義為相隔大于等于4周的兩個(gè)連續(xù)時(shí)機(jī)所測定的完全或部分響應(yīng)。將沒有基線后(post-baseline)腫瘤或CA-125評價(jià)的受試者視為非響應(yīng)者。為每個(gè)處理組計(jì)算客觀響應(yīng)率估值和95。/。置信區(qū)間(Blyth-Still-Casella)。計(jì)算腫瘤響應(yīng)率差異的置信區(qū)間(Santer和Snell,J.Am.Stat.Assoc.75:386-94(1980);Berger和Boss,J.Am.Stat.Assoc.89:4087-91(1990))。使用Fisher氏精確檢驗(yàn)實(shí)施探索性假設(shè)測試，用于探索處理組間的差異?？陀^"/t^的掙鍵^柯對于具有客觀響應(yīng)的受試者，客觀響應(yīng)的持續(xù)時(shí)間定義為自初始響應(yīng)至疾病進(jìn)展或由研究時(shí)任何原因?qū)е碌乃劳鲋g的時(shí)間。用于操作檢查和用于分析的方法與關(guān)于無進(jìn)展存活所述的方法相同。自無進(jìn)展存活的Kaplan-Meier曲線估算每個(gè)處理組4個(gè)月時(shí)沒有進(jìn)展的受試者的比例。對每個(gè)處理組計(jì)算無進(jìn)展率的估值和95%置信區(qū)間(Greemwood,Rep.Pub.Health.Med.Subjects33:1-26(1926))。使用雙向Z檢驗(yàn)(two-sidedZ-test)實(shí)施探索性假設(shè)測試，用于評價(jià)處理組間的差異。存法的^^#好河存活的持續(xù)時(shí)間定義為自隨機(jī)化直到由任何原因?qū)е碌乃劳鲋g的時(shí)間。包括所有死亡，無論它們發(fā)生在研究時(shí)或治療停止后。對于尚未去世的受試者，在最后一次聯(lián)系那天檢查存活的持續(xù)時(shí)間。分析方法與關(guān)于無進(jìn)展存活所述的那些方法相同。根據(jù)血清或血漿樣品的基因表達(dá)分析，產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)和/或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)的患者會(huì)響應(yīng)Pertuzumab和吉西他濱治療而顯示出延長的存活(尤其是無進(jìn)展存活)。權(quán)利要求1.一種用于延長癌癥患者存活的方法，包括以延長該患者存活的量給該患者施用HER二聚化抑制劑，其中所述患者測定為產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)，且所述癌癥選自卵巢癌、腹膜癌和輸卵管癌。2.權(quán)利要求l的方法，其中所述患者測定為產(chǎn)生升高水平的EGF。3.權(quán)利要求2的方法，其中在所述患者血清中發(fā)現(xiàn)該患者具有升高水平的EGF。4.權(quán)利要求l的方法，其中所述患者測定為產(chǎn)生升高水平的TGF-a。5.權(quán)利要求4的方法，其中在所述患者血清中發(fā)現(xiàn)該患者具有升高水平的TGF-ot。6.權(quán)利要求l的方法，其中所述HER二聚化抑制劑是HER2二聚化抑制劑。7.權(quán)利要求l的方法，其中所述HER二聚化抑制劑抑制HER異二聚化。8.權(quán)利要求l的方法，其中所述HER二聚化抑制劑是HER抗體。9.權(quán)利要求8的方法其中所述抗體結(jié)合選自EGFR、HER2和HER3的HER受體。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述抗體結(jié)合HER2。11.權(quán)利要求10的方法，其中所述HER2抗體結(jié)合HER2胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域II。12.權(quán)利要求ll的方法，其中所述抗體結(jié)合HER2胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I、II和III間的連接處。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述HER抗體包含SEQIDNo.3的輕鏈可變域氨基酸序列和SEQIDNo.4的重鏈可變域氨基酸序列。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述HER二聚化抑制劑是Pertuzumab。15.權(quán)利要求8的方法，其中所述HER抗體是棵抗體。16.權(quán)利要求8的方法，其中所述HER抗體是完整的抗體。17.權(quán)利要求8的方法，其中所述HER抗體是包含抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段。18.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中所述癌癥是晚期、頑固性或復(fù)發(fā)性卵巢癌。19.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中所述癌癥是鉑耐藥性卵巢癌。20.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中所述癌癥是原發(fā)性腹膜癌或輸卵管癌。21.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中施用所述HER二聚化抑制劑作為單一抗肺瘤劑。22.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，包括給所述患者施用第二種治療劑。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述第二種治療劑選自化療劑、HER抗體、針對腫瘤相關(guān)抗原的抗體、抗激素化合物、保心藥、細(xì)胞因子、輩巴向EGFR的藥物、抗血管發(fā)生劑、酪氨酸激酶抑制劑、COX抑制劑、非類固醇抗炎藥、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、結(jié)合癌胚蛋白CA125的抗體、HER2疫苗、HER靶向療法、Raf或ras抑制劑、脂質(zhì)體多柔比星、托泊替康、紫杉烷、雙重酪氨酸激酶抑制劑、TLK286、EMD-7200、治療惡心的藥物、預(yù)防或治療皮滲的藥物或標(biāo)準(zhǔn)痤瘡療法、治療或預(yù)防腹瀉的藥物、降低體溫的藥物、和造血生長因子。24.權(quán)利要求23的方法，其中所述第二種治療劑是化療劑。25.權(quán)利要求24的方法，其中所述化療劑是抗代謝物類化療劑。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述抗代謝物類化療劑是吉西他濱。27.權(quán)利要求22的方法，其中所述第二種治療劑是曲妥單抗、Erlotinib或貝伐單抗。28.權(quán)利要求l的方法，其中延長了無進(jìn)展存活(PFS)。29.權(quán)利要求l的方法，其中延長了總體存活(OS)。30.—種用于延長卵巢癌、腹膜癌或輸卵管癌患者存活的方法，包括以延長該患者存活的量給該患者施用Pertuzumab,其中所述患者測定為產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)。31.權(quán)利要求30的方法，其中所述患者患有卵巢癌。32.權(quán)利要求30或權(quán)利要求31的方法，其中所述患者患有晚期、頑固性或復(fù)發(fā)性卵巢癌。33.權(quán)利要求30-32中任一項(xiàng)的方法，還包括給所述患者施用化療劑。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述化療劑是抗代謝物類化療劑。35.權(quán)利要求34的方法，其中所述抗代謝物類化療劑是吉西他濱。36.—種用于延長卯巢癌、腹膜癌或輸卵管癌患者的無進(jìn)展存活(PFS)的方法，包括以延長該患者PFS的量給該患者施用Pertuzumab,其中所述患37.—種用于延長卵巢癌、腹膜癌或輸卵管癌患者的無進(jìn)展存活(PFS)的方法，包括以延長該患者PFS的量給該患者施用Pertuzumab,其中所述患者的血清測定為在其中具有升高水平的表皮生長因子(EGF)和轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)。38.權(quán)利要求26或權(quán)利要求37的方法，其中所述癌癥是卵巢癌。39.權(quán)利要求38的方法，其中所述卯巢癌是晚期、頑固性或復(fù)發(fā)性卵巢癌。40.用HER二聚化抑制劑治療的患者的選擇方法，包括用HER二聚化抑制劑治療該患者，如果所述患者測定為產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)的話。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述患者的存活相對于不產(chǎn)生升高水平的EGF或TGF-a且接受相同治療的患者的存活是延長的。42.權(quán)利要求41的方法，其中所述存活是總體存活(OS)。43.權(quán)利要求41的方法，其中所述存活是無進(jìn)展存活(PFS)。44.權(quán)利要求41的方法，其中所述HER二聚化抑制劑是HER2二聚化抑制劑。45.權(quán)利要求41的方法，其中所述HER二聚化抑制劑抑制HER異二聚化。46.權(quán)利要求31的方法，其中所述HER二聚化抑制劑是HER抗體。47.權(quán)利要求46的方法，其中所述抗體結(jié)合選自EGFR、HER2和HER3的HER受體。48.權(quán)利要求47的方法，其中所述抗體結(jié)合HER2。49.權(quán)利要求48的方法，其中所述HER2抗體結(jié)合HER2胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域II。50.權(quán)利要求49的方法，其中所述抗體結(jié)合HER2胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)域I、II和ffl間的連接處。51.權(quán)利要求50的方法，其中所述HER抗體包含SEQIDNo.3的輕鏈可變域氨基酸序列和SEQIDNo.4的重鏈可變域氨基酸序列。52.權(quán)利要求51的方法，其中所述HER二聚化抑制劑是Pertuzumab。53.權(quán)利要求46的方法，其中所述HER抗體是棵抗體。54.權(quán)利要求46的方法，其中所述HER抗體是完整的抗體。55.權(quán)利要求46的方法，其中所述HER抗體是包含抗原結(jié)合區(qū)的抗體片段。56.權(quán)利要求40-55中任一項(xiàng)的方法，還包括用化療劑治療所述患者。57.權(quán)利要求56的方法，其中所述化療劑是吉西他濱。58.—種試劑盒，該試劑盒包含HER二聚化抑制劑和包裝插頁或標(biāo)簽，其指出該HER二聚化抑制劑的有益用途，如果待治療的患者產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)的話。59.權(quán)利要求58的方法，其中所述癌癥是卵巢癌、腹膜癌或輸卵管癌。60.權(quán)利要求38的方法，其中所述有益用途是存活的延長。61.權(quán)利要求60的方法，其中所述存活是無進(jìn)展存活。62.權(quán)利要求58-61中任一項(xiàng)的方法，其中所述HER二聚化抑制劑是抗體。63.權(quán)利要求62的方法，其中所述抗體是HER2抗體。64.權(quán)利要求63的方法，其中所述抗體是Pertuzumab。65.—種宣傳HER二聚化抑制劑治療產(chǎn)生升高水平的表皮生長因子(EGF)或轉(zhuǎn)化生長因子a(TGF-a)的患者的方法。66.權(quán)利要求65的方法，其中所述宣傳是書面材料的形式。67.權(quán)利要求66的方法，其中所述宣傳是包裝插頁的形式。全文摘要本申請描述了通過用HER二聚化抑制劑(諸如Pertuzumab)治療癌癥患者來延長該患者的存活，其中該患者產(chǎn)生升高水平的EGF或TGF-α。文檔編號(hào)A61K39/395GK101495142SQ200780027466公開日2009年7月29日申請日期2007年5月31日優(yōu)先權(quán)日2006年6月5日發(fā)明者喬基姆·莫克斯,努斯拉特·拉貝,盧卡斯·C·阿姆勒,安德烈亞斯·斯特勞斯申請人:健泰科生物技術(shù)公司;霍夫曼-拉羅奇有限公司