專利名稱：治療和預防肝臟、肺臟和食道的癌癥和癌癥前期癥狀的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及治療和預防肝臟、肺臟和食道的癌癥和癌癥前期癥狀的方法和組合物。本發(fā)明還涉及預防和/或抑制由胃泌素誘發(fā)的惡性腫瘤向肝臟、肺臟或食道部位的轉移。
背景技術：
胃泌素是已經(jīng)證實能夠促進正常的胃腸道黏膜以及各種癌癥生長的一種生長因子。這類癌癥包括胃、結腸、直腸、胰腺、肝細胞以及神經(jīng)元等部位的惡性腫瘤。尤其是，如今已經(jīng)充分查明，胃泌素是某些人類腫瘤的生長因子，例如胃泌素瘤和結腸直腸腺癌、包括其轉移(參見Watson等2000，Smith等1989，Seitz等1991和Wong等1991)。(在此引述的參考文獻的全文引用(在正文中未曾引述)都在權利要求一節(jié)之前的參考文獻一節(jié)中列述)。在結腸直腸癌癥患者中都可發(fā)生血漿中的胃泌素總量增高的現(xiàn)象，尤其是，據(jù)采用胃泌素抗血清從多數(shù)結腸直腸癌癥中都可檢出該激素的前體前胃泌素含量的增長(Coccotosto等1995)。本文引用的術語“結腸直腸的”一詞是屬于胃腸系統(tǒng)的一個亞類。
在結腸直腸腫瘤中胃泌素含量的增高，部分是由于在結腸直腸腫瘤細胞中的胃泌素基因的異常表達所致(Hoosein等1990，Baldwin等1992和Finley等1993)。在這類細胞內已經(jīng)鑒定出了一些胃泌素樣肽類(Hoosein等1988，Watson等1991和Finley等1993)，并且已被確認是胃泌素的前體類型(Van-Solinge等1993和Nemeth等1993)。
血清相關性G17具有以CCK-B/胃泌素受體介導的一種內分泌方式，促進結腸直腸腫瘤生長的潛在能力(Watson等1993)。胃泌素-17由于可能提高胃泌素/縮膽囊肽(CCK)-B受體對于腫瘤細胞的親和力，其作用要超過其他類型的胃泌素，因而似乎特別與促進人類的結腸直腸腺癌的生長相關連(Rehfeld，J.F.1972)。據(jù)發(fā)現(xiàn)，CCK-B/胃泌素在56.7％的人體原發(fā)性結腸直腸腫瘤中有高親和力方式的表達(Upp等，1989)。據(jù)新近已經(jīng)證實，一種胃泌素前體分子甘氨酸擴展性胃泌素17(G17-Gly)可促進一株胃腸腫瘤細胞系的生長，由此推測，由于這類腫瘤具有內源性產(chǎn)生前體胃泌素肽類的能力，因而也可能存在一種自泌性循環(huán)過程(Van-Solinge等1993和Nemeth等1993)。據(jù)證實，這種甘氨酸擴展性胃泌素17對于腫瘤的營養(yǎng)作用，是由不同于CCK-B/胃泌素受體的一種受體和一種自泌性生長環(huán)路所介導的，可能有各種胃泌素受體參與其間，據(jù)假定可參與胃腸系腫瘤的增殖過程(Seva等1994)。
對于各種可手術性的結腸癌癥的最有效的治療方法，就是施行外科手術切除。對于結腸直腸區(qū)域的原發(fā)性腫瘤的切除術，例如，由于可能存在無法檢知的“隱蔽部位”或“微型轉移灶”，以至往往不可能徹底摘除全部惡性腫瘤。此外，在切除原發(fā)性腫瘤的物理作用下，可能發(fā)生部分腫瘤細胞脫落，并通過循環(huán)系統(tǒng)傳播，從而在肝臟或軀體的其他部位定居。在肝臟內最為常見的轉移灶是結腸直腸腺癌。
在結腸直腸癌癥患者中的肝臟轉移灶的外科手術治療措施，可引起各種并發(fā)癥。由于肝臟具有再生能力，肝臟的切除過程有可能散放出一些營養(yǎng)性因子，據(jù)認為肝臟的再生過程就依賴于這類營養(yǎng)性因子(Leith等1992，Mizutani等1992，Ballantyne等1993，Vaillant等1993，Ledda-Columbano等1993，Matsumata等1995，Slooter等1995，Hananel等1995)，其中包括胰島素、胰增血糖素、生長激素抑制素(Junge等1997)、成纖維細胞生長因子(FGF)、表皮生長因子(EGF)(Gutman等1994-95)、轉化生長因子a(TGFa)、白細胞介素-6、肝細胞生長因子、以及腫瘤壞死因子(de Jong等1996)。
還已發(fā)現(xiàn)，胃泌素17對于正常的和再生的肝細胞，以及受傷后的肝細胞，例如，酒精性損傷或肝臟手術性損傷，都具有營養(yǎng)性作用。在肝臟損傷后曾經(jīng)記錄到胃泌素量增長2至5倍，在損傷之后24-72小時可見到胃泌素達到最大量。據(jù)認為，因為肝臟組織在損傷之后能夠再生，因而就要求胃泌素量的增高，以促使或誘發(fā)肝細胞的增殖過程。在肝臟損傷之后72小時，胃泌素量就開始逐漸減少至正常水平。轉移性結腸直腸癌細胞專門在肝臟內定居，也要求有胃泌素的作用。此外，通常所謂“肝瘤”的原發(fā)性肝癌或肝細胞癌中的細胞都具有胃泌素受體，因而能夠對胃泌素發(fā)生反應而進行增殖。多肝臟腫瘤都能夠表達CCK-B/胃泌素受體和胃泌素的各種類型的前體(Caplin 1999)。
盡管外科手術對于各種類型的結腸直腸腫瘤、肝瘤、以及在肝臟內的轉移性腫瘤，是一種最有效的治療方法(Supe等1994，F(xiàn)ong等1993，de Jong等1996，Vauthey等1995，Scheele等1991，Ballantyne等1993，Katoh等1990)，但是在肝臟帶有這類腫瘤的患者中大約有90％卻不能施行外科手術治療，因為在多數(shù)情況下，對于腫瘤無法定位，或者其所處的解剖部位不可施行手術治療。這類患者都在其腫瘤被診斷后一年之內死亡。據(jù)報道，在肝臟具有結腸直腸肝轉移灶或肝瘤的其余10％的患者中，大約有50％由于未觀察到腫瘤復發(fā)而達到痊愈(Goletti等1992和Katoh等1990)。然而，據(jù)臨床數(shù)據(jù)表明，即使患有可切除腫瘤的其余50％的患者經(jīng)外科手術之后，患者的壽命都能夠延長，但是在外科手術之后2年，全部都有腫瘤復發(fā)，在外科手術之后5年，有70％的患者再次生長腫瘤。在發(fā)生腫瘤再次生長的患者中，有50％的腫瘤是生長在肝臟內，還有50％是生長在軀體的其他部位，例如，在肺臟、腸道、和腹膜內(Ssheele等1991，Vauthey等1995，Ballantyne等1993)。由此可見，施行肝臟切除術，是在目前對于肝臟腫瘤以及結腸直腸的肝臟轉移灶的一種最有效的治療方法。
對于施行肝臟切除術之后的現(xiàn)有的各種標準治療方法包括，采用各種化學治療藥物，例如5-氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸、順鉑、甲型腫瘤壞死因子(Fong等1995)、以及一種胃泌素拮抗劑丙谷胺(Kameyama等1994)。在多數(shù)情況下，這類腫瘤對于輻射作用以及化療措施都沒有有效的反應，因而，在現(xiàn)有的操作程序中需要有一些新的治療措施進行彌補。對于可切除性腫瘤，一般都不能查明是否所有的惡性腫瘤都已經(jīng)排除，或者在施行外科手術之前或之后是否有腫瘤的轉移性細胞脫落，或者在患者體內是否還存在著有可能在其軀體內的某個部位形成腫瘤再生長的殘留的微型轉移灶。
據(jù)記述，對于胃泌素依賴性腫瘤，具有各種高親和力的CCK-B/胃泌素受體的拮抗物，例如，L-365，260(Bock等1989)和CI-988(Hughes等1990)。已經(jīng)證實，在活體外和在體內，這類拮抗物都能夠有效地中和外源性胃泌素對于胃泌素依賴性腫瘤的生長(Watson等，Kameyama等和Romani等1994)。不過，這類拮抗物都能夠封閉如胃泌素-34(G34)和CCK之類受體的所有潛在的配體，因而缺乏特異性。而且，能夠識別并結合胃泌素前體G17-Gly的各種細胞受體，并不能與所有受測試的各種抑制物相結合(Seva等1994)。因而，如果在自泌性生長鏈鎖內有一種不同的受體參與，那么胃泌素的各種拮抗物就不可能封閉這種腫瘤生長促進機制。還曾經(jīng)調查了在體內用放射性標記的胃泌素相關性和縮膽囊肽相關性肽類，作為探索CCK-B/胃泌素受體表達性腫瘤靶標的物質(參見Behr等，縮膽囊肽-B/胃泌素受體結合性肽類其診斷和治療潛在性能的臨床前期研制和評定，臨床腫瘤研究(1999)10月(增刊10)3124-3138，本文已經(jīng)收錄作為參考文獻)。
能夠選擇性地對胃泌素17激素的(成熟型和甘氨酸擴延的前體型)兩種類型的生物學活性進行免疫中和的一種治療方法，對于因胃泌素17激素的過量產(chǎn)生而引起的胃泌素依賴性腫瘤的再生長，可提供一種控制或預防的有效手段。
本文指定引用作為參考文獻的美國專利號5,023,077和5,468,494披露了用于患者通過產(chǎn)生抗胃泌素抗體來控制G17和G34水平的各種免疫原性成分，以及采用這類成分對胃和十二指腸潰瘍以及胃泌素誘發(fā)性癌癥施行治療的技術。本發(fā)明也涉及了采用該專利號5,023,077和5,468,494披露的抗-G17免疫原性成分，來預防腫瘤的再生長和/或在肝臟切除術之后的轉移性癌癥的發(fā)育。其中腫瘤的再生長是由胃泌素的刺激作用所致，因為在外科手術之后的腫瘤復發(fā)過程是一個常見問題，尤其是在施行肝臟切除術之后。本發(fā)明還涉及了對CCK-B/胃泌素受體施行免疫處理，以封閉腫瘤細胞上的受體的活化過程。在共同指定的美國申請序列號09/076,372中披露了激發(fā)對于CCK-B/胃泌素受體發(fā)生反應的一種抗體的各種免疫原的制備方法。本文在此也已經(jīng)引用作為參考文獻。
上述本發(fā)明用于預防轉移性腫瘤生長，或者在癌癥治療過程預防腫瘤再生長的該種方法，具有若干優(yōu)于現(xiàn)有其他各種治療方法的優(yōu)點。該種方法是非侵入性的、有選擇的可逆性、不破壞正常組織、不要求經(jīng)常反復處置、并且也不會穿透血腦屏障。
在肺部，胃泌素是伴隨著肺癌的形成而增加的。參見Gocyk等2000，在此引用作為參考文獻。與上述的肝癌同樣，胃泌素也是與從胃腸道惡性腫瘤轉移的肺癌相關。本發(fā)明涉及通過對于腫瘤細胞上表達的CCK-B/胃泌素受體的胃泌素依賴性活化作用，對于各種肺臟癌癥的治療，以及對于肺部轉移的預防措施。此外，本發(fā)明定向于對小細胞性肺癌(SCLC)和非小細胞肺癌(NSCLC)都可進行治療。對于小細胞性肺癌和非小細胞肺癌還在繼續(xù)研制各種類型的治療方案。參見Reddy，2000，對于小細胞性肺癌；Evans，2001，對于非小細胞肺癌。該兩篇論文都已在此引用作為參考文獻。
在胃食管反流性疾病(GERD)患者中，有10-20％可發(fā)生巴雷特食管(Barrett’sesophagus)(一種慢性消化性食管潰瘍綜合征)，這是一種癌癥前期期癥狀。大約有2000萬美國公名罹患這種慢性消化性食管潰瘍綜合征，大約有5-10％的慢性消化性食管潰瘍綜合征病例可發(fā)展為癌癥狀態(tài)，尤其是腺癌。(參見國家衛(wèi)生研究院，出版號99-4546，1999年5月)現(xiàn)有的各種預防性治療方法以及實際治療措施都已作了綜述，F(xiàn)ennerty，2001，在此引用作為參考文獻。據(jù)各項研究提示，在慢性消化性食管潰瘍綜合征的病變內存在著胃泌素和/或胃泌素分泌性細胞，由此提示，胃泌素具有促發(fā)慢性消化性食管潰瘍綜合征病變并發(fā)展成癌癥狀態(tài)即腺癌的作用。參見，例如，Buchanan等，在慢性消化性食管潰瘍綜合征中的各種調節(jié)性肽類，病理學雜志(1985)7月號；146(3)227-34；和Trakal等，慢性消化性食管潰瘍綜合征的診斷及其病因學胃泌素分泌性細胞的存在，拉丁美洲胃腸病學論文集(1985)；15(2)67-80；該兩篇論文都在此引用作為參考文獻。本發(fā)明涉及對于慢性消化性食管潰瘍綜合征的治療措施，以及防止或延緩慢性消化性食管潰瘍綜合征向食管腺癌的發(fā)展。本發(fā)明還涉及對于原有的食管腺癌以及食管中其他惡變過程的治療措施。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及通過活化和/或被動免疫處理，以使患者拮抗肽類激素胃泌素和/或胃泌素受體，例如，CCK-B/胃泌素受體，對于肝臟、肺臟和食管的癌癥和/或癌癥癥狀進行治療和/或預防。本發(fā)明的免疫處理方法，可配合例如，化學治療劑和/或放射治療劑，用作單項治療或者輔助治療或綜合治療的一部分。
本發(fā)明可提供用于抑制由胃泌素激發(fā)的腫瘤細胞，從例如，胃腸部位的惡性腫瘤，向肝臟、肺臟和食管位轉移的各種成分和方法。本發(fā)明還可提供對于小細胞性肺癌和非小細胞肺癌都能夠治療的各種成分和方法。本發(fā)明還可提供包括對于胃泌素和/或其受體施行主動和/或被動免疫處理，結合采用紫杉烷如多西他賽，對非小細胞肺癌進行治療的一種聯(lián)合治療方法。本發(fā)明另外還提供了可用于抑制肝臟、肺臟或食管位的前惡性腫瘤(癌癥前期)細胞向癌癥狀態(tài)轉變的各種成分和方法。
發(fā)明詳述本方法包括，在治療或預防肺臟、肝臟或食管的癌癥和/或癌癥前期癥癥狀方面，為了控制患者的胃泌素的水平，而采用抗G17免疫原或抗胃泌素17激素的抗體，對患者施行主動性或被動性免疫處理的各種方法。本發(fā)明還涉及對于胃泌素依賴性腫瘤細胞向肝臟、肺臟和食管成功轉移的防制方法。美國專利號5,203,077和5,785,970都披露了對于患者施行主動性和被動性免疫處理，以拮抗胃泌素的各種方法，在此都被采用作為參考文獻。
本發(fā)明的免疫處理方法，可以采用單項治療、對于外科手術的一種輔助性治療、化學療放和/或放射療法或者綜合療法的一部分，包括，各種化學治療劑、放射治療劑、生物性因子如改型病毒和/或光動力學治療措施等。
通過對患者誘發(fā)抗胃泌素17的抗體，就可在體內，對于激素胃泌素17和前激素前胃泌素G17-Gly進行中和處理，從而抑制其生理性效應。尤其是，對于G17的中和作用，可預防該激素與其生理性受體相結合，從而抑制腫瘤細胞的生長。
各種抗-G17的免疫原，包括G17的氨基酸終端通過一個分隔體肽類與一種免疫原性載體如白喉類毒素(DT)相結合，產(chǎn)生可與G17相結合并使之中和的一類免疫模擬性片段。
在本發(fā)明的一個實例中，抗G17的免疫處理方法包括，主動性免疫處理，其特征在于，采用本發(fā)明的一種免疫原進行免疫處理。該免疫原可促發(fā)接受免疫處理的患者產(chǎn)生抗G17的抗體，而誘發(fā)足夠的抗體效價，以中和并抑制G17的生理性效應，從而限制患者對于外科手術反應所產(chǎn)生的癌癥-營養(yǎng)激素水平。由在患者體內產(chǎn)生的抗G17抗體對于G17激素的生理性中和作用可抑制胃泌素，從而可防止須依賴G17作為其生長的促進因子或誘導因子的腫瘤細胞的再生長。本發(fā)明的這類治療方法，特別適用于在施行肝臟切除術之后，對于G17反應性胃泌素依賴性的轉移性腫瘤細胞的治療措施。
本發(fā)明的這類免疫原，包括由兩個功能區(qū)域組成的各種肽類。其兩個功能區(qū)域是免疫模擬區(qū)域和分隔區(qū)域。免疫模擬區(qū)域的功能是，可與G17產(chǎn)生免疫學交叉反應，并在接受免疫處理的動物體內，誘導可與確定靶標的G17激素相結合的抗體，從而抑制G17的功能，并制止G17依賴性腫瘤細胞的生長。在所有受測試的經(jīng)免疫處理的動物中，施用了這類免疫原之后，都可誘導在生物學方面有效的免疫學反應。本發(fā)明的免疫模擬肽類-分隔物能夠以廣泛范圍的肽與載體的置換比率，與各種免疫性載體偶合，而產(chǎn)生各種有效的免疫原。
實施例1如美國專利號5,785,970所述，能夠誘導對于G17的特異性免疫反應的各種肽類，可以采用各種標準的固態(tài)合成方法進行制備，例如，可按如下所列的氨基酸序列來合成各種肽類肽1-人G17(1-6)pGlu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Arg-Pro-Pro-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO1)肽2-人G17(1-5)pGlu-Gly-Pro-Trp-Leu-Arg-Pro-Pro-Pro-Pro-Cys(SEQID NO2)肽3-人G17(1-4)pGlu-Gly-Pro-Trp-Arg-Pro-Pro-Pro-Pro-Cys(SEQ IDNO3)肽4-人G17(1-9)pGlu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ser-Ser-Pro-Pro-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO4)上述每一種肽類都含有一個G17的氨基末端片段，例如，在肽類1-4中的人體G17的頭4-9個氨基酸；以及羧基終端分隔體肽組分，Arg-Pro-Pro-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO5)，或Ser-Ser-Pro-Pro-Pro-Pro-Cys(SEQ ID NO6)。在進一步制備免疫原之前，每一種合成的肽類都具有其特定的氨基酸含量和純度。
上述這些肽類，都可利用一種異型雙功能連接劑(這類連接劑在其一端含有一個琥珀酰亞胺基酯，另一端含有順丁烯二酰亞胺的)，通過終端肽半胱氨酸殘基，與一種載體如白喉類毒素(“DT”)上的氨基團相結合。
實施例2為完成例如，在上述1-4中的一種肽類與一種載體之間的連接，先將無水的肽溶解在含有超量的30克分子二硫代蘇糖醇(dithiothreitol)(“DTT”)的pH 8.0的0.1克分子的磷酸鈉緩沖液中，并將該溶液在用水飽和的氮氣中攪拌4小時。利用經(jīng)0.2克分子乙酸平衡處理的G10 Sephadex柱(一種交聯(lián)葡聚糖柱)進行層析處理，將其中的含有還原半胱氨酸的肽成分，與其他成分分離。并將該種肽成分經(jīng)凍干處理之后，貯存于真空條件下備用。對于載體采用一種異型雙功能連接劑如戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(“EMCS”)，按足以使每105分子量的載體大約25個游離氨基團活化的比率，進行活化處理。以白喉類毒素為例，每20毫克的白喉類毒素總計須添加6.18毫克的戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(純度75％)。
將每20毫克整除量的白喉類毒素溶解于1毫升0.2克分子量的pH 6.45磷酸鈉緩沖液中，即可完成活化過程。整除量的6.18毫克戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯須溶解在0.2毫升的二甲亞砜中(“DMF”)。其操作須在避光進行，在一邊攪拌的條件下，將戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯按50微升(“μl”)量逐滴加入白喉類毒素(DT)中。經(jīng)無光培育2小時之后，在用含有0.1mM乙二胺四乙酸(EDTA)的0.1克分子量的pH 6.0檸檬酸鈉緩沖液處理的G50Sephadex柱中，對該混合液進行層析處理。
在避光條件下，對于含有經(jīng)戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯活化處理的白喉類毒素的各份組分，用PM 10超濾膜進行濃縮處理。采用Lowry或Bradford的方法測定該濃縮物中的蛋白質含量。對于經(jīng)活化處理的載體中的戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯含量，是將該載體用鹽酸半胱氨酸進行培育之后，再與10mM Elman氏試劑5，5’雙硫-二(2-硝基苯甲酸)10mM進行反應來測定。采用在412納米波長(nm)按對于5-硫代-2-硝基苯甲酸的克分子量消光系數(shù)13.6×103，將含有鹽酸半胱氨酸的空白試管與含有鹽酸半胱氨酸和載體的樣本試管之間的光密度差，換算為戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯基團的含量。
對于該肽成分中還原的半胱氨酸含量(-SH)也利用Elman氏試劑進行測定。將該肽成分大約1毫克，溶于1毫升的飽含氮氣的水中，取該溶液的整分量0.1毫升用Elman氏試劑進行反應。利用5-硫代-2-硝基苯甲酸的克分子量消光系數(shù)(13.6×103)，計算游離的半胱氨酸-SH量。將足以與在載體上含有經(jīng)戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯活化的每25個氨基團發(fā)生反應的游離-SH的肽成分量，溶于含有0.1mM乙二胺四乙酸的pH 6.0的0.1克分子量檸檬酸鈉緩沖液，并在避光條件下逐滴加入經(jīng)戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯活化處理的載體中。當全部肽溶液加入載體之后，在飽含氮氣大氣的水中避光培育過夜。
利用經(jīng)0.2克分子量的重碳酸銨進行平衡處理的G50 Sephadex柱進行層析處理，將通過戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯與載體連接的肽結合物，與該混合液中的其他成分分離。并將從柱管中洗出的結合物進行凍干處理，干貯于-20℃下備用。
對于該種結合物可利用本領域熟練的技術人員所熟知的各種方法，對其中肽含量的特征進行鑒定，其方法包括增重法、氨基酸分析法，等。利用這類方法測定所產(chǎn)生的肽1-3與白喉類毒素的結合物中，在每105個分子量載體中含有20-25克分子量的肽，據(jù)認為全部都是適用于作為對動物施行免疫處理的免疫原。
實施例3另外，還有一種采用密閉式系統(tǒng)的方法，可對肽-載體成分進行制備、結合、分離、以及提純處理。在美國專利號6,359,114已經(jīng)披露了這種方法和系統(tǒng)，在此已經(jīng)全文引用作為參考文獻。該種方法是在密閉的液相系統(tǒng)中進行的，其主要步驟如下(a)在一種液相反應混合物中，將一種肽型免疫原利用(或不利用)分隔物，與一種免疫原性載體物質相結合，形成一種結合型肽與非結合型肽以及其他各種物質的混合物；(b)將該種含有結合型肽與非結合型肽以及其他各種物質的液相反應混合物進行超濾處理，利用這種超濾處理方法在超濾器中分離出的滯留物，就是結合型的肽類物質；(c)利用脫鹽的溶液、水或其他緩沖溶液洗滌在超濾器中的結合態(tài)的肽類物質的滯留物；
(d)用回洗貯器中的緩沖溶液對超濾處理環(huán)節(jié)進行反向洗滌，從超濾環(huán)節(jié)以釋放并分散在超濾環(huán)節(jié)中的結合態(tài)肽類物質的滯留物；(e)重復進行(c)和(d)步驟以提純結合態(tài)肽類物質，直至結合態(tài)肽類物質中基本上不再含有非結合態(tài)的肽類物質；以及(f)從超濾處理環(huán)節(jié)回收結合態(tài)肽類物質滯留物，或者將該滯留物再輸送入超濾環(huán)節(jié)的反應容器中，作進一步處理。
該種裝置是在反應容器與超濾/透析過濾(ultrafiltration/diafiltration)裝置之間，通過一種適當?shù)囊后w通道，如設置閥門或泵唧的管道，以液相方式連通的。含有試劑和產(chǎn)物的液相反應溶液，能夠從反應容器通過適當?shù)娜鋭邮奖猛策M入過濾單元。透析過濾貯器(Diafiltration Reservoir)是通過反應容器與過濾單元相連接，用于對積聚在過濾單元的濾膜上的滯留物進行洗滌和沖淋。滲透物或過濾物都可從過濾單元流入貯器中?！胺礇_貯器”可供應一種溶液，將滯留物從超濾單元反向流入反應容器或其他收容器。含有反應產(chǎn)物的蛋白質或肽類組分，可任選地利用不同分子量規(guī)格的濾器，順次按分子量大小差別進行分級分離，或者根據(jù)需要的產(chǎn)物進行分離。
在涉及以后進一步處理的反應過程，例如，與一種或多種其他成分如蛋白質、肽類或非蛋白物質如碳水化合物的軛合/偶合過程，在至少一種成分的第一次提純處理方面，可以預期須有若干步驟和設施組合進行。
對于該種裝置的各個部件的具體部分序號和廠商都已經(jīng)開列清單；然而，據(jù)認為，另外還有其他商品來源的相應設施，可以取代而不致減損該種裝置的效能；還應當了解，該種裝置能夠按比例提高到任何所需的生產(chǎn)水平，而不會偏離本發(fā)明的原則條件。
該系統(tǒng)的一項實例可以更加詳盡地論述如下。其反應容器是一種2000毫升容量，1級玻璃質的琥珀色的廣口瓶(Wheaton公司)。選用該種容器的標準依據(jù)是(i)其2000毫升的容量適用于處理100毫升至1800毫升的反應用量；(ii)1級玻璃符合美國藥典(USP)對于藥物制造的標準要求；(iii)反應容器的琥珀色玻璃，可限制能夠對合成過程所使用的光敏性化學交聯(lián)物質發(fā)生降解作用的光線的穿透；以及(iv)其廣口結構可為容納3支試管插入的瓶塞提供足夠的空間，并且也便于添加試劑和進行取樣。在該反應容器的瓶壁上，標有以100毫升遞增量分度的溶液容量標記。該種反應容器配有氯丁二烯橡膠質的瓶塞，其上開有3個插管孔，以相等間距按橫過瓶塞的對角線排列。
在瓶塞的3個插孔中，分別插入相應內徑的硼硅酸鹽質玻璃插管。該反應容器還配有相應的連接管，設置在該容器內的泵筒相連接，該泵筒運轉時，就可有效地使該容器內容達到真空狀態(tài)。
該裝置中配備的管道部件的實際長度，以不致妨礙其操作為度。不過，其管道最好應當盡可能保持可操作的最短長度，以便盡量減少其管道內的容量。其管道內的閥門都采用聚丙烯和聚四氟乙烯材料制成。
蠕動式泵筒是LP1型(Amicon公司)。這種型號可變速、可調節(jié)濾器壓力、還能夠可逆性操作。
其中的超濾操作單元包括一個螺旋式濾膜支架分離過濾濃縮器(#54118，Amicon公司)，設置有一個具有適宜的分子量分段控制條件的螺旋式纏卷濾膜筒。選用這種分離過濾操作濃縮器，是因為其容量與該種設施的普通小容量反應能力相適應。
“反向洗滌貯器”包括一個具有整體固定式2通旋塞閥的500毫升玻璃質的分液(Buchner式)漏斗，(#6402，Pyrex公司)。
操作程序1反應過程例如，在“反應容器”內操作的使短肽鏈與大型蛋白質進行化學軛合過程的一種反應。加速分離過濾操作過程的管道26a并不浸入“分離過濾溶液貯器”27。通過開口101向該容器添加反應材料。(必要時，在設置該“反應容器”時，可增加試劑添加管和樣本裝填采集管)。在反應操作過程中，須將開口101關閉。對反應混合液須進行攪拌，直至反應完成。期間可從該反應容器采集樣本以監(jiān)控反應進程。
操作程序2純化過程通過分離過濾工序進行提純處理。在“分離過濾溶液貯器”中裝有分離過濾溶液以及一支供汲取分離過濾溶液用的玻璃管26a，直插到該“分離過濾溶液貯器”的底部。將需要提純的材料加入“反應容器”，并將該容器關閉。再從該“反應容器”將該轉移的溶液經(jīng)入口部泵入“超濾單元”。對于“超濾單元”的操作，須根據(jù)廠商的建議，通過對泵速和該“超濾單元”配套的反壓力閥進行調節(jié)，在指定的流入量和反壓力條件下運行。
對于提純處理的進程，是通過從導向“滲透物貯器”的管道汲取樣本進行測試來監(jiān)控的。該“滲透物貯器”中收容的是反應溶液以及洗滌溶液的過濾流出物。當“分離過濾溶液貯器”中的溶液量減少時須加以補充；對于“滲透物貯器”須在適當情況下，及時予以排空或更換。
當對滲透物測試表明提純處理已經(jīng)完成時，就可通過例如，將“分離過濾溶液”供應容器中的導管提起離開其中的分離過濾溶液，并將其中剩余的溶液排入“反應容器”內。隨后即將閥門關閉。然后就可將“超濾單元”和導管內的測試溶液通過排放或反沖操作，收集入“反應容器”內。
提純處理程序也可采用交換各種緩沖液的方式來實施。其提純操作程序基本是相同的，只是須將新的溶媒/緩沖液加入“分離過濾溶液貯器”中。提純操作過程須進行至陳舊的溶媒/緩沖液被完全更換為止。
操作程序3濃縮過程對于“反應容器”內的各種濃縮溶液，加入相應的緩沖液或貯備溶液。開啟閥門，使?jié)B透物從“超濾單元”流入“滲透物貯器”內。分離過濾溶液的接受導管還未曾放入“分離過濾溶液貯器”中(能夠使空氣通過該導管)。然后按“提純操作程序”啟動“泵筒”和“超濾單元”，在濃縮處理過程中，必須對“反應容器”內的溶液量予以監(jiān)控，以保證在溶液水平下降時，“導管”仍然保持浸入溶液中。當濃縮過程完成時，就可將泵筒和全部“閥門”關閉。隨后再將“超濾單元”以及導管中的溶液排放或反沖進入“反應容器”內。
操作程序4排放/反沖過程在提純和濃縮操作程序完成之后，就可從“超濾單元”和導管中回收含有反應產(chǎn)物的溶液，必須將該兩個部件中的溶液排放入“反應容器”內。在實施該操作步驟時，須將分離過濾溶液的接受導管提離“分離過濾溶液貯器”，以便使空氣能夠通入該分離過濾導管。此時閥門是關閉的。(開啟的閥門可使“反向洗滌貯器”(此時是空的)內的空氣經(jīng)過閥門對閥門流通。)然后就可將閥門開啟，使空氣通過閥門進入“反應容器”內，從而使各部導管排空。如須排空“超濾單元”，可調節(jié)“閥門”使空氣經(jīng)過“閥門”通入“超濾單元13”。然后以反向方式啟動“泵筒”，使帶有反應產(chǎn)物的溶液從“超濾單元”通過“泵筒”流入“反應容器”內。在排放操作完成之后，就可關閉“泵筒”和各處“閥門”。
對“超濾單元”進行反沖處理基本可按對“超濾單元”的排放處理相同的程序實施，只是須將所需回洗的溶液量加入“回洗貯器”內。從而，當開啟“閥門”時，只有回洗溶液而不是空氣從“回洗貯器”通過“閥門”進入“超濾單元”，最后進入作為貯庫的“反應容器”內。當回洗操作完成之后，(例如，已經(jīng)將各種產(chǎn)物提取后)，就可關閉“泵筒”和各處“閥門”。
為合成肽-蛋白質軛合物而設計的該項實例的操作程序，可用于誘導對人的胃泌素17(hG17)的抗體反應。此項未曾公開的操作程序在此進行詳細說明如下實施例4步驟1白喉類毒素(DT)的純化供應的白喉類毒素是一種溶液，其中還含有低分子量的其他各種成分，包括0.3克分子量的甘氨酸以及0.01％硫柳汞(消毒劑)。在能夠進行軛合處理程序之前，須將該其他成分除去。利用超濾單元通過一系列分離過濾處理和濃縮處理操作步驟，對白喉類毒素進行提純處理。每次分離過濾操作的分離過濾物溶液所使用的脫離子水容量，等于在反應容器內存留的樣本容量的5倍。為了防止濾器堵塞，在分離過濾處理過程，還可結合從貯器利用反沖處理進行反向洗滌的操作程序。待對于白喉類毒素的提純處理的分離過濾程序完成之后，就可更換采用磷酸鹽緩沖液(0.5克分子量磷酸鈉)以5倍容量進行3輪分離過濾處理，以準備用戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(EMCS)對白喉類毒素進行活化反應處理。待步驟1結束之后，將該溶液在超濾單元(配備有按30,000分子量分段的螺旋纏卷濾膜筒，Amicon公司，YM30S1)中處理，審慎地除去洗滌滲透物的溶液，使之濃縮至大約20-25毫克白喉類毒素/毫升。然后通過反沖處理程序，將純品白喉類毒素送入反應容器內。再利用高壓液相層析技術(HPLC)對白喉類毒素進行純度分析，并測定其濃度。
步驟2用戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(EMCS)對純化的白喉類毒素進行活化反應處理其次是用戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯對純品白喉類毒素進行活化處理，使之產(chǎn)生順丁烯二酰亞胺-白喉類毒素(MDT)。在這一步驟中，在順丁烯二酰亞胺的琥珀酰亞胺基分子部分與白喉類毒素上的各游離c-氨基團發(fā)生反應，而使戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯與白喉類毒素偶合，在戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯中留出順丁烯二酰亞胺基團與肽相結合(步驟4)。
在白喉類毒素的蛋白質中，每105分子量大約有40個氨基團，其中約有25個可在現(xiàn)有的合成過程被活化。要達到這一活化水平，要求戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯的克分子量須超過白喉類毒素的氨基團4倍。進行活化處理的白喉類毒素的濃度可調節(jié)在20毫克/毫升(+/-0.5毫克/毫升)，再回輸入反應容器內。添加戊型順丁烯二酰亞胺己酸N-羥基琥珀酰亞胺酯后經(jīng)過2小時的反應過程，就可形成順丁烯二酰亞胺白喉類毒素。
步驟3順丁烯二酰亞胺白喉類毒素的純化處理將反應容器內的反應混合物轉移至分離過濾處理、反向洗滌處理以及濃縮處理等一系列步驟(如上所述)，其中包括從反應容器通過超濾裝置環(huán)流檸檬酸鹽洗滌溶液，將濾過液移入貯器內，或者從貯器22反向洗滌，并在該裝置內對于抑留的順丁烯二酰亞胺白喉類毒素(MDT)進行濃縮處理，最后將該提純的順丁烯二酰亞胺白喉類毒素貯存于反應容器內。在這一系列操作程序中，完全用檸檬酸鹽(0.1克分子量檸檬酸鈉)偶合作用緩沖液替換了磷酸鹽緩沖液。在該步驟結束時，測定順丁烯二酰亞胺白喉類毒素的量及其活化程度。
步驟4hG17免疫原肽與順丁烯二酰亞胺白喉類毒素的軛合處理取500毫克hG17免疫原肽溶入25毫升飽含氮氣的0.1克分子量檸檬酸鈉(SC)，并與經(jīng)過活化處理的順丁烯二酰亞胺白喉類毒素(MDT)進行軛合。其操作是，在反應容器11內，將提純的肽逐漸添加于在20毫克/毫升MSC中含有1.17克MDT的純化MDT溶液中。經(jīng)過適當?shù)臅r間，使其完成軛合反應。(在MDT中)按肽∶順丁烯二酰亞胺基團的克分子量比率1.1∶1添加肽成分，以達到所需的25克分子量肽的置換比率。
步驟5軛合物的純化和凍干處理對于軛合物的反應溶液(83.5毫升)用0.2克分子量重碳酸銨溶液(AB)稀釋至1.0升容量，然后濃縮大約5倍至接近100毫升容量。其操作方法是，在密閉系統(tǒng)內進行分離過濾處理，在超濾單元13中，該溶液在30,000道爾頓分子量分段的螺旋式纏卷濾膜上，用500毫升重碳酸銨溶液進行處理，可有效地專門抑留其中的軛合物，然后再用100毫升重碳酸銨溶液進行反向洗滌，再將該產(chǎn)物溶液重新濃縮成100毫升。這一系列分離過濾-反向洗滌-濃縮處理的操作程序，須重復進行兩次以上，然后再再在蒸餾水中進行3輪分離過濾-反向洗滌-濃縮處理的操作程序。經(jīng)最后一次操作之后，將該系統(tǒng)的導管和濾膜筒洌干以除去殘留的重碳酸銨。然后將該軛合物溶液從反應容器中取出，用水稀釋成約為2毫克/毫升，隨后進行凍干處理，以進一步除去或升華殘留的重碳酸銨。據(jù)檢測，軛合物的產(chǎn)率為1.4克。
對該軛合物進行高壓氣相層析技術檢測分析，發(fā)現(xiàn)僅有單一的峰，表明其達到了同質性。相反，采用以往的操作方法產(chǎn)生的軛合物，在高壓氣相層析法分析時，則其純度不佳，其中大約含有3個不同的峰。此外，本實例進行合成的時間，僅需1.5天就可完成，大大少于采用過去的操作方法進行合成所化的3天時間。
無論是軛合處理還是純化處理，本發(fā)明的方法所采用的免疫原組分，可以具有不同的類型，例如，固態(tài)、半固態(tài)、和液態(tài)等劑型，例如，粉劑、溶液、懸浮液、栓劑、以及可注射性和浸漬性溶液。這類組成制劑都含有現(xiàn)有的各種免疫原以及適用的藥物學上可承受的各種成分，其中可包括其他各種醫(yī)用物質、載體、佐劑、賦形劑，等。適用的佐劑包括(但不限于)，非胞蓖酸基二肽(nor-MDP，Peninsula實驗公司，加利福尼亞州)，以及油類，例如，Montanide ISA 703(Seppic公司，法國，巴黎)。這類材料都可采用標準操作程序進行混合。
在本發(fā)明的另一項實例中，其治療方法包括，被動免疫處理方法，其抗G17的抗體以足夠的濃度施用于患者，以減少進入血行循環(huán)的非結合型G17水平。由于施用抗G17抗體而減少患者循環(huán)血行中的游離G17和G17-Gly的水平，就可抑制隱秘性或微型轉移性腫瘤細胞的生長。用于施行被動性免疫治療的抗G17抗體可以例如，用實施例1的各種免疫原對宿主進行免疫處理，熱情濃厚利用各種標準方法例如，制備式親和層析法，從該宿主的血清中分離出抗G17抗體?？蛇x擇的供被動性免疫治療用的抗G17抗體還有，采用本領域的技術人員都已經(jīng)熟知的各種生物技術方法制備的嵌合型、人性化或人型單克隆等類型的抗體。
本發(fā)明還涉及對于患者施行對胃泌素受體如，CCK-B/胃泌素受體的主動和/或被動免疫處理，對肺臟、肝臟和食管的癌癥和/或癌癥前期癥癥狀進行治療和/或預防的措施。可以單獨采用對CCK-B/胃泌素受體進行免疫處理，也可以結合對于胃泌素本身施行免疫處理。在美國申請系列號09/076,372中，已經(jīng)詳細披露了有關可產(chǎn)生抗CCK-B/胃泌素受體的治療用抗體的各種免疫原的生產(chǎn)方法。在此已經(jīng)全文引用作為參考文獻。本分明的供被動性免疫除了用的抗體，可以采用藥學上可接受的載體例如，生理鹽水溶液，如，磷酸鹽緩沖的生理鹽水溶液制備，對患者施行靜脈內注射，或者以其他任何方法施用。
實施例5如美國申請系列號09/076,372所述，由取自CCK-B/胃泌素受體的一種肽成分，與一種免疫原性載體物質軛合，可用于在施行免疫處理的宿主體內，對于CCK-B/胃泌素受體產(chǎn)生抗體反應。例如，免疫原性肽片段KLNRSVQGTGPGPGASL(序列表中的SEQ ID NO7，與CCK-B/胃泌素受體序列中的5-21氨基酸相當)，或GPGAHRALSGAPISF(序列表中的SEQ ID NO8，相當于CCK-B/胃泌素受體的細胞外第四區(qū)域)，都可用于誘導這類反應。在本發(fā)明的一個實例中，這些免疫原性肽類還包括一個羧基終端分隔體肽序列，例如，SSPPPPC(序列表中的SEQ ID NO6)。這種免疫原性載體可以例如，從白喉類毒素、破傷風類毒素、和牛血清白蛋白中選出。在本發(fā)明的一項實例中，CCK-B/胃泌素受體的帶有分隔體的各種免疫原性肽類，可以與本項目的實例1所述的同樣方式，與免疫原性載體白喉類毒素進行軛合。
該免疫原性成分在用于治療胃腸道癌癥方面，對于患者施用的有效劑量范圍為0.001-10毫克。在本發(fā)明的另一項實例中，施用黨紀兩為。0.001-2克。從患者的血液樣本中還可監(jiān)控對于受體的抗體效價水平。為維持有效的抗體效價，可進行若干次強化免疫處理。
供被動免疫治療用的抗CCK-B/胃泌素受體的抗體，也可以采用CCK-B/胃泌素受體的免疫原性肽成分對宿主施行免疫處理，或者采用本領域技術人員所知的其他方法進行生產(chǎn)。
本發(fā)明的下述各項實例，都涉及對于患者施行對G17胃泌素和/或CCK-B/胃泌素受體的主動和/或被動免疫處理。
本發(fā)明的一項實例主要涉及預防癌癥向肝臟轉移的問題。例如，關于患者面臨肝臟發(fā)生腫瘤轉移的風險問題，例如對于一例患有胃腸道惡變病情的患者，施行對G17胃泌素和/或CCK-B/胃泌素受體的主動和/或被動免疫處理。本發(fā)明的另一項實例是著眼于對肺臟轉移性癌癥的預防措施。例如，患者面臨肺臟發(fā)生轉移性腫瘤的問題。例如對于一例患有胃腸道惡變病情的患者，施行對G17胃泌素和/或CCK-B/胃泌素受體的主動和/或被動免疫處理。
本發(fā)明的還有一項實例是關于對肝癌(或者是肝臟本身的內源性癌癥，或者是來自身體其他部位在肝臟中的轉移性癌癥)的治療措施。本發(fā)明的類似的一項實例涉及對于肺臟癌癥(或者是肺臟本身起源的癌癥，或者是來自身體其他部位在肺臟中的轉移性癌灶)的治療措施。本發(fā)明另外還有一項實例關注于對食管癌癥(或者是食管本身內部起源的癌癥，或者是來自身體其他部位在食管中的轉移性病灶)的治療問題。
在相關的一項實例中，采用了綜合性(同時或順次)的治療措施，包括采用紫杉烷，例如，多西他賽(Taxotere)或紫衫醇(Taxol)，結合施行對G17胃泌素和/或CCK-B/胃泌素受體的主動和/或被動免疫處理。根據(jù)本發(fā)明的要求，對于非小細胞性肺癌，除了施行對胃泌素和/或胃泌素受體的免疫處理之外，還可采用每3周一次經(jīng)靜脈內用1-1000毫克/米2的多西他賽或紫衫醇施行治療。在本發(fā)明的另一項實例中，采用聯(lián)合治療措施，包括施用鉑類化合物，例如，順鉑、卡鉑或草酰鉑(oxaloplatin)，結合施行對G17胃泌素和/或CCK-B/胃泌素受體的主動和/或被動免疫處理。本發(fā)明還提供了對于肝癌和食管癌癥的治療，以及對于肝臟、肺臟或食管的癌癥前期癥狀進行治療的這類聯(lián)合治療措施。對于可以單獨或多元組合與本發(fā)明的免疫處理配伍施用的各種化療藥劑包括(但不限于)，伊立替康、托泊替康、5-氟尿嘧啶+甲氧四氫葉酸、以及吉西他濱。
本發(fā)明的另外一項實例，是著眼于對一種前惡變(癌癥前期)癥狀，慢性消化性潰瘍性食管炎的治療措施。本發(fā)明的一項相關性實例，主要關注于預防或延緩慢性消化性潰瘍性食管炎的進展演變?yōu)榘┌Y狀態(tài)，。例如，腺癌。
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序列表<110>埃弗頓有限公司(Aphton Corporation)<120>治療和預防肝臟、肺臟和食道的癌癥和癌癥前期癥狀<130>1102865-0057<150>US 60/303,868<151>2001-07-09<160>8<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>12<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa＝焦谷氨酸<400>1Xaa Gly Pro Trp Leu Glu Arg Pro Pro Pro Pro Cys1 5 10<210>2<211>11<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa＝焦谷氨酸<400>2Xaa Gly Pro Trp Leu Arg Pro Pro Pro Pro Cys1 5 10
<210>3<211>9<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa＝焦谷氨酸<400>3Xaa Gly Trp Arg Pro Pro Pro Pro Cys1 5<210>4<211>16<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>Xaa＝焦谷氨酸<400>4Xaa Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Ser Ser Pro Pro Pro Pro Cys1 5 10 15<210>5<211>6<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>假定的間隔區(qū)肽<400>5Arg Pro Pro Pro Pro Cys1 5
<210>6<211>7<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>假定的間隔區(qū)肽<400>6Ser Ser Pro Pro Pro Pro Cys1 5<210>7<211>17<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>7Lys Leu Asn Arg Ser Val Gln Gly Thr Gly Pro Gly Pro Gly Ala Ser1 5 10 15Leu<210>8<211>15<212>PRT<213>智人(Homo sapiens)<400>8Gly Pro Gly Ala His Arg Ala Leu Ser Gly Ala Pro Ile Ser Phe1 5 10 1權利要求
1.一種治療肺臟、食管或肝臟的癌癥或癌癥前期癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括對有此需要的患者施用一種免疫原，該種免疫原能夠在該患者體內誘導抗G17胃泌素和/或CCK-B/胃泌素受體的抗體，該種抗體可抑制G17與其在癌癥前期或癌癥細胞上的受體相結合。
2.一種治療肺臟、肝臟或食管的癌癥或癌癥前期癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括對患者施用抗-G17抗體和/或抗CCK-B/胃泌素受體的抗體，該類抗體在體內可選擇性中和肽激素G17或在體內抑制該受體的活化。
3.一種治療肺臟、肝臟或食管的癌癥或癌癥前期癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括對有此需要的患者施用一種免疫原，該種免疫原能夠在該患者體內激發(fā)足夠的抗體效價，所述抗體選擇性結合并中和患者本身的G17。
4.一種治療肺臟、肝臟或食管的癌癥或癌癥前期癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括對有此需要的患者施用一種免疫原，該種免疫原能夠在該患者體內激發(fā)足夠的抗體效價，所述抗體選擇性結合并中和在肺臟、肝臟或食管的癌癥或癌癥前期細胞上表達的CCK-B/胃泌素受體物質。
5.如權利要求2、3或4所述的方法，其特征在于，所述癥狀是肺癌，其中所述肺癌至少部分是由胃泌素促發(fā)的。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述肺癌起源于肺部。
7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述肺癌有轉移源。
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述肺癌的轉移源是一種胃腸道的惡性腫瘤。
9.如權利要求2、3或4所述的方法，其特征在于，所述癥狀是肝癌。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述肝癌起源于肝部。
11.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述肝癌有轉移源。
12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述肝癌的轉移源是一種胃腸道的惡性腫瘤。
13.如權利要求2、3或4所述的方法，其特征在于，所述癥狀是一種癌癥前期癥狀。
14.如權利要求13所述的方法，其特征在于，所述癥狀是巴雷特食管。
15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述治療在于預防或延緩巴雷特食管發(fā)展演變?yōu)榘┌Y狀態(tài)。
16.一種通過在體內選擇性中和肽激素G17而在患者中治療由胃泌素誘發(fā)的肺臟、肝臟或食管腫瘤或癌癥前期病變的生長的方法，其特征在于，所述方法包括對患者施用可與定位在G17氨基末端的表位相結合的抗G17抗體，從而抑制G17與其在腫瘤上的生理性受體相結合。
17.一種治療由胃泌素誘發(fā)的肺臟、肝臟或食管疾病的方法，其特征在于，所述方法包括對患者施用能夠選擇性結合十七胃泌素(G17)的抗體。
18.一種在哺乳動物中治療肺臟、肝臟或食管的癌癥或癌癥前期癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括施用可在體內中和激素G17的治療劑。
19.一種治療肺臟、肝臟或食管的癌癥或癌癥前期癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括對有此需要的患者施用一種免疫原，該種免疫原可在該患者體內增加抗CCK-B/胃泌素受體的抗體，所述抗體能夠阻斷因胃泌素與受體結合而導致的胃泌素受體的活化。
20.一種治療肺臟、肝臟或食管的癌癥或癌癥前期癥狀的方法，其特征在于，所述方法包括對患者施用一種抗CCK-B/胃泌素受體的抗體，所述抗體能夠阻斷因胃泌素與受體結合而導致的胃泌素受體的活化。
21.如權利要求22或23所述的方法，其特征在于，所述方法還包括施用一種能夠增加抗G17的抗體的免疫原。
22.如權利要求22或23所述的方法，其特征在于，所述方法還包括施用能夠在體內選擇性中和肽激素G17的抗G17的抗體。
23.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述癥狀是食道癌。
24.根據(jù)如權利要求26所述的方法，其特征在于，所述癌癥是腺癌。
25.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括一種輔助性化學療法，所述化學療法包括施用順鉑、卡鉑、草酰鉑、伊立替康、托泊替康、5-氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸、吉西他濱和/或紫杉烷。
26.一種治療非小細胞肺癌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(a)對患者施行抗G17胃泌素和/或CCK-B/胃泌素受體的主動和/或被動免疫處理，所述抗體可提供和/或誘導抑制G17與其在癌癥前期細胞上的受體相結合，和/或抑制該受體的活化；以及(b)對患者同時或相繼施用有效量的多西他賽。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過主動和/或被動免疫患者抗肽類激素胃泌素和/或胃泌素受體如CCK－B/胃泌素受體，來治療和/或預防肝臟、肺和食道的癌癥和/或癌癥前期癥狀。本發(fā)明的免疫措施可作為單項治療，輔佐性治療，或者聯(lián)合治療的一部分采用。
文檔編號A61K31/282GK1525868SQ02813760
公開日2004年9月1日 申請日期2002年7月9日 優(yōu)先權日2001年7月9日
發(fā)明者P·C·齊瓦斯, D·米卡利, S·格里姆斯, P C 齊瓦斯, 錟匪 申請人:埃弗頓有限公司