專利名稱：：口服胰島素制劑制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥理學(xué)、內(nèi)科學(xué)，特別是內(nèi)分泌學(xué)，用于制造口服胰島素制劑。
背景技術(shù)：
：胰島素是一種多形r激素，M量約為6000。它對機(jī)體內(nèi)所有類型的物質(zhì)交換均發(fā)生影響，包,強(qiáng)葡萄糖向機(jī)體組織的滲透能力、增強(qiáng)機(jī)體組織對葡萄糖的利用能力、降低肝臟中的糖原含量、增加肌肉中的糖原含量、提高蛋白質(zhì)合成率等。向人體輸入胰島素的主要方法為皮下注射或肌肉注射胰島素制劑?？诜o藥(腸道吸收)的方法對病人最為方便，但這種嘗試并未取得成功，因?yàn)橐葝u素容易被消化酶分解，失去活性。與注射制齊湘比，口服胰島素的商業(yè)優(yōu)勢顯而易見，因?yàn)殚L期每天鄉(xiāng)胰島素會引起一系列嚴(yán)重不良反應(yīng)，如伴隨疼痛并發(fā)癥；導(dǎo)致脂肪代謝障礙，不僅會使面部受損，還會導(dǎo)致激素需用劑量增加；造成心理傷害，特別皿兒童的心理傷害；引起精神緊張，從而導(dǎo)—步升高，激素需用劑sa—步增加等。已知現(xiàn)有一種口服胰島素制劑，為油水混合微乳液，由胰島素、類脂化合物、蛋白M制劑組成，用羧基甲基纖維素包覆(YW.Cho,M.Flynm,Lancet^1989,30，p,1518)。除生產(chǎn)工藝繁瑣、造價高昂之外，這種口腳夷島素制齊啲嚴(yán)重不足是i頓了羧基甲基纖維素作為載體。羧基甲基纖維素易受微生物作用，在工業(yè)化生產(chǎn)^#下尤其如此。此外，纖維素會吸附大量蛋白質(zhì)，必須使用緩沖劑、以高強(qiáng)度離子力予以清洗。這種大規(guī)模的清洗工別戈價高昂，并可能導(dǎo)致胰島素嚴(yán)重失活。己知現(xiàn)有一種口服胰島素制劑制造方法，是培養(yǎng)比例為"100的含紅細(xì)胞胰島素，其中含有多功能粘合劑，最終濃度為0.15%-0.25%。這種方法通常j頓從帶角大牲畜的血液、豬血、人血中提取的紅細(xì)胞作為載體，用溴化氰、氯4E聚氰酰或戊二酸作為粘合劑(俄羅斯聯(lián)邦專利第2058788號，A61K38/28類，27.04.96)。〈OT前將制劑在水中乳化。這種方法的不足之處在于粘合齊嗨性強(qiáng)，因此必須花費(fèi)高昂代價凈化成品。已知現(xiàn)有另一種凝膠型口服胰島素制劑制造方法，是將胰島素固定在經(jīng)a7jC解蛋白,制劑改良的交叉結(jié)合聚合物內(nèi)(RZ.Creenley,etallPolymerMatricesfororoldelivery,PolymerPreprits1990,V31，N2,p.l82-183)。4頓丙烯酸或甲基丙烯酸、交叉結(jié)合三乙二|^二甲基丙烯作為交叉結(jié)合聚合物，使用抗蛋白酶，即胰蛋白酶胰腺抑制劑作為水解蛋白酶抑制劑。這種方法的不^t處在于所得制劑抗消化酶作用的穩(wěn)定性差，導(dǎo)gdSA血液的胰島素活性低。與申請專利的方法最為接近的是將胰島素固定在經(jīng)過水解蛋白酶抑制劑改良的交叉結(jié)合聚合物(在MI^水內(nèi)脹大)內(nèi)的凝膠型口服胰島素審躋脾隨方法。水解蛋白酶抑制劑采用的是從蛋白中提取的濃度為0.2-25mg/g的卵類粘蛋白。固定胰島素的方法是將經(jīng)過改良的交叉結(jié)合聚合物^1A濃度為0.01-5mg/ml的胰島素水溶液內(nèi)1-2個小時，，聚合物完全脹大。經(jīng)過處理的交叉結(jié)合聚合物的用量為每毫升胰島素溶液《頓0.01-1.0g交叉結(jié)合聚合物(俄羅斯聯(lián)邦專利第2066551號，A61K38/28類，20.09.96)。這種方法的不粒處在于提取卵類粘蛋白、用卵類粘蛋白改良交叉結(jié)合聚合物的工藝復(fù)雜，價格昂貴，所得制劑的內(nèi)科療效差。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)為采用將胰島素固定在水解聚合物中的方法，簡化口服胰島素制齊啲制造法，降低其造價，提高其療效。與前述方法相比，申i轉(zhuǎn)利的方法的主要不同之處在于4頓經(jīng)繊電離輻射活化的聚合物改良胰島素，從而簡化制造方法，提高內(nèi)利療效。輻射時發(fā)^^lt化學(xué)氧化反應(yīng)，使聚合物內(nèi)形成高活性羰StJ質(zhì)。通a^種方法進(jìn)行活化后，聚合物與胰島素形成水溶性復(fù)賴擠!l，口服時倉巨顯著降低血糖水平。由于具有良好的水溶性，繊島素聚合物復(fù)賴頓能完全滲入血液中，沒有擴(kuò)散限制。聚合物樣本中含有但不僅限于含有右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮、異戊二烯、聚丙烯、聚氨基甲酸酯等物質(zhì)。以下方法完成技術(shù)任務(wù)。用分子量為0.4-40kDa的聚氧化乙烯配制1-50%的水溶液，然后對其進(jìn)行高能致電離輻射，主要{頓伽瑪射線或加速電子流，輻射劑量為1.0-5.0Mrad，以保證自由基反應(yīng)的進(jìn)行。然后在方嫩活化聚氧化乙烯溶液中加入胰島氣使蛋白質(zhì)最終濃度達(dá)到l-10mg/ml(或者相應(yīng)地4數(shù)夷島素有效濃度達(dá)妾J每毫升10-100個國際單位)，聚氧化乙烯與胰島素的比例為1-500:1。將混合液攪拌10-30分鐘，直至得到均勻透明的或淡乳白色的溶液。該方，用卵粘蛋白作為蛋白,制劑，可保護(hù)胰島素，使其不受水解蛋白酶影響。而聚丙烯鵬凝膠的功能貝提寄存經(jīng)過改良的胰島素。胰島素部分經(jīng)過腸壁iSAl&L液后，并不沉積在肝臟中，因?yàn)樗痪哂信c網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)器官的親種性，因此，其作用將類似于非腸道給藥(注射給藥)。而且，經(jīng)過Wt活化聚合物改良的胰島素洽t^現(xiàn)出了人體自身分泌的胰島素的特性，也就是說其藥理學(xué)效果與人體生理機(jī)制最為接近。這是因?yàn)榫酆衔锬軌騇fF細(xì)胞捕獲。在已知的關(guān)于前述聚合物和胰島素特性的科技資料中，未見取得該項技術(shù)成果，因?yàn)榻?jīng)過方，活化聚合物的改良，胰島素的構(gòu)型及其與細(xì)胞胰島素受體的相互作用情況會改變，從而可能導(dǎo)鵬島素完全喪娥有的,功效。但申i轉(zhuǎn)利的本方法不僅能〗M島素特有的,功效得到保持，而且能使其作用最大P艮度地^P^生理機(jī)制，因?yàn)榛钚跃酆衔镙d體可與胰島素形成不穩(wěn)定的化學(xué)聯(lián)系，僅作為載##胰島雜輸?shù)礁渭?xì)胞中，再在肝細(xì)胞中釋放胰島素。具體實(shí)施例方式為說明本發(fā)明，列舉以下制造胰島素第躋啲具體實(shí)施例。實(shí)施例l用M量為1.5kDa的聚氧化乙烯配制10%的水溶液，再用加速電子》M其進(jìn)行5.0Mrad劑量的輻射。在經(jīng)過輻射的溶液中加入胰島氣使最終濃度達(dá)到10mg/ml(聚氧化乙烯與胰島素的比例為10:1)。將混合液攪拌10^H中，制成淡乳白色溶液狀胰島素制劑。成品率98%。實(shí)施例2用M量為0.4kDa的聚氧化乙烯配制50.0。/。的7jC溶液，再用自伽瑪射線對其進(jìn)行1.0Mmd劑量的輻射。在經(jīng)過輻射的溶液中加入胰島素，使最終濃度達(dá)到lmg/ml(聚氧化乙烯與胰島素的比例為500:1)。將混合液攪拌30辦中，制成透明溶液狀胰島素制劑。成品率97%。實(shí)施例3用M量為15kDa的聚氧化乙烯配制5%的水溶液，再用加速電子、m其進(jìn)行2.5Mrad齊U量的輻射。在經(jīng)過輻射的溶液中加入胰島素，使最終濃度達(dá)到10mg/ml(聚氧化乙烯與胰島素的比例為5:1)。將混合液攪拌15辦中，制成淡乳白色溶液狀胰島素制劑。成品率99%。表1中列舉了含有方M活化聚氧化乙烯的胰島素復(fù)^擠樹Wistar大鼠的,作用研究結(jié)果。i頓聚氧化乙烯改良豬胰島素對實(shí)驗(yàn)組大鼠一次性胃內(nèi)給藥lml(成分豬胰島素30國際單你毫升，1500方鄉(xiāng)活化聚氧化乙烯12.5%質(zhì)量百分比，聚氧化乙烯與胰島素的比例125:l);使用豬胰島素對測試組大鼠一次性胃內(nèi)給藥lml，有效濃度30國際單你毫升。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從表l中列舉的結(jié)果中可以看出，胃內(nèi)給藥3小時后，聚氧化乙烯改良胰島素開始發(fā)揮主要的,效用，并保持至10個小時。該結(jié)果證明，改良胰島素與胰腺自然分泌的胰島素作用相近。表2中列舉了經(jīng)聚氧化乙烯改良的人體基因工程咦島素對大鼠四氧嘧啶型糖尿病的,作用研究數(shù)據(jù)。使用聚氧化乙烯改良胰島素對實(shí)驗(yàn)組大鼠一次性胃內(nèi)給藥lml(成分人胰島素50國際單鵬升，1500方謝活化聚氧化乙烯12.5%質(zhì)量百分比，聚氧化乙烯與胰島素的比例70:1);使用人胰島素對測試組大鼠一次性胃內(nèi)給藥lml，有效濃度50國際單你毫升。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從列舉的結(jié)果中可以看出，胃內(nèi)使用改良胰島素對四氧嘧啶型糖尿病大鼠具有降糖作用。表3中列舉了對大鼠一次性胃內(nèi)給藥后，聚氧化乙烯改良胰島素對大鼠血漿內(nèi)胰島素水平纟M值影響的比，據(jù)(聚氧化乙烯與胰島素的比例70:1)。使用聚氧化乙烯改良人胰島素對體重200-240g的實(shí)驗(yàn)組W^tar大鼠胃內(nèi)給藥，用量為250國際單你千克；測試組大鼠l頓同等劑量的非改良胰島素。{頓免疫酶方法測定大鼠血漿內(nèi)的胰島素含量(p作用單^/ml)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表中所列數(shù)據(jù)中可以看出，胃內(nèi)給藥后，聚氧化乙烯改良胰島或者提高了血漿中的胰島素水平，或者阻礙了血漿中胰島素水平的降低，也就是說，改良胰島素與胰腺在生理標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)自然分泌的胰島素最為接近。申請專利的口服胰島素制劑制造方法與其它方法的不同之處在于其簡單性和經(jīng)濟(jì)性，因?yàn)樵撝圃旆窖シ譃閮刹?，其中艦的聚合物載體是聚氧化乙烯，其活化方法工藝簡單，僅需對聚合物溶液進(jìn)行致離性輻射，而且iOT活化聚合物改良胰島素的方馳很簡單，僅需向活化聚合物溶液中加入胰島素，使其達(dá)至斷要求的濃度(有t濃度)。無論按照血糖濃度降低的情況還是按照直接測得的血液中胰島素的水平來判斷，{頓申i轉(zhuǎn)利的方法制造的胰島素制劑都具剤艮好的內(nèi)禾橋效。權(quán)利要求1.一種口服胰島素制劑的制造方法，包括將胰島素與預(yù)先經(jīng)過致電離輻射活化的水解聚合物相混合的過程。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中聚合物為聚氧化乙烯，分子量為0.440kDa，濃度為1.0-50.0%，胰島素與聚氧化乙烯的比例為l:1-500，混合液中胰島素的最終濃度為l-10mg/ml。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特點(diǎn)為使用加速電子流或伽瑪射線對聚氧化乙烯進(jìn)行輻射，輻射劑量為1.0-5.0Mrad。全文摘要本發(fā)明涉及藥理學(xué)、內(nèi)科學(xué)，特別是內(nèi)分泌學(xué)。方法的要點(diǎn)為將分子量為0.4-40kDa的水溶性聚合物配制成1～50％的水溶液，對其進(jìn)行1.0-5.0Mrad劑量的致電離輻射，然后加入胰島素，使最終濃度達(dá)到1-10mg/ml，聚氧化乙烯與胰島素的比例為1-500∶1。然后攪拌混合劑，制成均勻透明的或淡乳白色的溶液。利用這種方法制成的生物活性胰島素合劑在口服時具有顯著降血糖效果。該方法可簡化口服胰島素制劑的制造方法，增強(qiáng)治療效果。文檔編號A61K38/28GK101384276SQ200780006039公開日2009年3月11日申請日期2007年9月11日優(yōu)先權(quán)日2006年9月13日發(fā)明者安德里·維拉迪米洛維奇·阿爾塔莫諾夫,彼得·伊萬諾維奇·洛迪奧諾夫申請人:O3涉及有限公司