專利名稱：：三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥領域。技術背景隨著人們社會生活的發(fā)展變化，心血管疾病日趨嚴重的危害著人類所期望的壽命和生存質(zhì)量，是世界上發(fā)病率、死亡率最高的疾病之一。據(jù)有關資料統(tǒng)計，我國一些心血管疾病的發(fā)病率冠心病為10%、急性心肌梗塞為15.4/10萬，加上人口老齡化的加快，以及以腦卒中和心肌梗死為主要表現(xiàn)的具有致殘、致死后果的心血管疾病的發(fā)病率急劇上升，并逐多呈年輕化趨勢。目前，我國大約有心血管疾病患者1300多萬，并且每年以10%的發(fā)病率增長，心血管疾病的防治成為全世界共同關心的問題。心血管疾病成為人類健康的大敵，而防治心腦血管疾病的藥物日趨凸顯其重要地位。而目前防治心血管疾病的藥物還是以西藥為主，其具有的毒副作用可能并不符合大多數(shù)心血管疾病的慢性過程。黃姜，學名盾葉薯蕷(DioscoreazingiberensisC.H.Wright)，系薯蕷科薯蕷屬植物，為我國特有的野生植物資源。三角葉薯蕷皂苷(Deltonin)是盾葉薯蕷所含有的多種皂苷的一種。三角葉薯蕷皂苷具有在對抗心血管疾病方面的多種藥理活性，如保護血管內(nèi)皮細胞，降血脂，預防和治療血栓，改善冠狀動脈供血以及預防和治療心肌梗死。藥物在人體內(nèi)發(fā)揮藥理作用，不僅僅與其本身的藥理活性有關，還與承載藥物的藥物傳遞系統(tǒng)(DDS)關系密切。納米脂質(zhì)體是極具開發(fā)潛力的藥物載體，其作為難溶于水的藥物輸送載體具有許多優(yōu)越性可將難溶藥物以納米級包埋于脂質(zhì)體形成的疏水腔內(nèi)，使得藥物粒子溶解度增大；能促進被包裹的難吸收性的藥物在腸道的傳遞，提高其生物利用度；而且納米脂質(zhì)體制備簡單，可多途徑給藥，易于規(guī)模化生產(chǎn)。對同一藥物選用不同的膜材不同的制備方法包封率會有很大的差距，因而在制備時針對包封藥物要在膜材和制備方法上多做篩選，同時還要解決產(chǎn)品穩(wěn)定性及被包藥物泄露的問題。因此制備脂質(zhì)體的瓶頸在于如何尋找合適的輔料及輔料用量，尋找合適的藥脂比，使其在包封率、載藥量、穩(wěn)定性方面均適應臨床需要。目前，尚無將三角葉薯蕷皂苷制成脂質(zhì)體的相關報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所解決的技術問題是提供三角葉薯蕷皂苷的新劑型，以三角葉薯蕷皂苷為活性成分，加入脂類物質(zhì)制備而得的脂質(zhì)體，具有治療心血管疾病的作用。本發(fā)明脂質(zhì)體是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.515份；其中，所述脂類為脂肪酸、甘油酯、蠟質(zhì)類、類固醇類中的至少一種?？梢圆捎酶邏壕|(zhì)法、薄膜法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得，制備而得的脂質(zhì)體粒徑形態(tài)均一，粒徑為l6um，包封率高，穩(wěn)定性好，符合藥典要求，具有極好的治療心血管疾病的效果。具體實施方式本發(fā)明三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.515份；脂類采用脂肪酸、甘油酯、蠟質(zhì)類、類固醇類中的至少一種；具體地，脂肪酸采用硬脂酸、棕櫚酸、癸酸、二十二酸中的至少一種；甘油酯采用三月桂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯中的至少一種；蠟質(zhì)類采用鯨蠟醇十六酸酯；類固醇類采用膽固醇。根據(jù)組分篩選實驗三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體優(yōu)選如下重量配比的組分三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.510份。綜合考慮包封率、載藥量和穩(wěn)定性，優(yōu)選組分配比為三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.55份。上述脂質(zhì)體中還可以加入O.110份乳化劑，乳化劑采用磷脂、膽酸鹽、泰洛沙姆、短鏈醇中的至少一種；具體地，磷脂采用大豆卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油中的至少一種。本發(fā)明三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體是由高壓均質(zhì)法、薄膜法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得的，因影響本發(fā)明脂質(zhì)體的主要因素為輔料及輔料用量，而制備方法對產(chǎn)品的影響不大，故任意脂質(zhì)體的制備方法均可以應用到本發(fā)明脂質(zhì)體的制備。本發(fā)明脂質(zhì)體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應用，如本發(fā)明脂質(zhì)體可以為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑的原料。以下具體實施例中說明。但本發(fā)明的保護范圍不局限于此。實施例l高壓均質(zhì)法制備三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體取卵磷脂(成都科龍化工試劑有限公司)2.5g，膽固醇(成都科龍化工試劑有限公司)0.5g，在加入15ml三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.5g)升溫至8(TC;將此高溫液相加入到同等溫度的雙肉豆蔻磷脂酰甘油溶液中，快速混勻lmin(8500rpm)，再通過500bar高壓混勻3次；最后降溫固化即得。包封率為65%。實施例2薄膜法制備三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體將卵磷脂(成都科龍化工試劑有限公司)1.25g，膽固醇(成都科龍化工試劑有限公司)0.3g溶解于60ml乙醚，用250ml茄形瓶在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)以除去乙醚，可見脂質(zhì)在錐形瓶壁上形成一薄膜，再加入15ml三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.3g)旋轉(zhuǎn)水化得到三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體。包封率為70%。實施例3逆向蒸發(fā)法制備三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體取卵磷脂2.5g，膽固醇lg用120ml乙醚溶解于250ml錐形瓶中，再加入20ml三角葉薯蕷皂苷8%甘露醇水溶液(含有三角葉薯蕷皂苷0.4g)，水浴超聲使成為均一的單相體系，再減壓蒸發(fā)除去乙醚至凝膠狀態(tài)，后繼續(xù)減壓蒸發(fā)10min，得到三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體。包封率為50%。實施例4冷凍干燥法制備三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體取卵磷脂1.75g，膽固醇0.3g用70ml乙醚溶解于250ml錐形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)出去乙醚，脂質(zhì)在瓶壁上成一薄膜，加入20ml磷酸鹽緩沖液旋轉(zhuǎn)水化得到空白脂質(zhì)體，加入適量海藻糖，混勻，在真空中冷凍干燥，隨即用三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.3g)振搖進行分散，得到三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體。包封率為55%。實施例5熔融法制備三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體取卵磷脂2g，膽固醇lg熔融混勻，將三角葉薯蕷皂苷磷酸鹽緩沖液(含有三角葉薯蕷皂苷0.4g)加入熔融液中，在組織攪拌機中高速攪拌，至脂質(zhì)體形成。包封率為42%。將實施例15制備而得的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體冷凍干燥后，裝入粉末吸入裝置，得到粉末吸入劑。將脂質(zhì)體粉末裝在定量裝置中，由患者主動吸入。實施例6三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體質(zhì)量檢査1、三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體的粒徑及其形態(tài)粒徑測定三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體適量經(jīng)磷酸鹽緩沖液稀釋后，用Zeta電位及粒度測定儀測定其粒徑大小。形態(tài)觀察三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體適量置銅網(wǎng)上，經(jīng)磷鎢酸復染后，于透射電鏡下觀察脂質(zhì)體結構。取適量經(jīng)稀釋后，置于光學顯微鏡下觀察其形態(tài)和分布。三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體為大單室脂質(zhì)體，圓形或橢圓形，外形圓整光滑，形態(tài)分布均一。平均粒徑為lum。2、包封率測定取三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體混懸液適量，置低溫高速離心機中，4°C，20000gX30min離心，取上清液20yl，用磷酸鹽緩沖液稀釋至5ml，搖勻。RP—HPLC法測定游離的三角葉薯蕷皂苷按下式計算包封率。EntrappingEfficiency(%)=(C總-C游離)/C總XlOC)0/03、脂質(zhì)體體外泄漏分別考察三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體在(25±0.5)。C和(37±0.5)。C恒溫水浴中持續(xù)震蕩5天的體外釋放狀況。將脂質(zhì)體適量置于透析袋內(nèi)，釋放介質(zhì)為磷酸鹽緩沖液，震蕩頻率為80r/min，持續(xù)震蕩5天，分別ld，2d，3d，4d，5d取透析液lml，并同時補充同溫新鮮磷酸鹽緩沖液lml，RP-HPLC測定透析液中游離的三角葉薯蕷皂苷。透析完成后，剪破透析袋，收集袋內(nèi)的脂質(zhì)體并用10。/。TritonX-IOO破環(huán)，作為時間無窮大時的藥物泄露量，計算其累積釋放量，評價三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體的體外穩(wěn)定性。體外釋放實驗結果表明三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體在25。C和37。C介質(zhì)中藥物釋放緩慢，37°C5天的體外累積釋放量占時間無窮大時脂質(zhì)體釋放量的1.89%，25°C5天的體外累計釋放量占時間無窮大時脂質(zhì)體釋放量的O.38%。以下通過輔料及輔料篩選實驗說明本發(fā)明脂質(zhì)體的有益效果。發(fā)明人在前期研究過程中發(fā)現(xiàn)，制劑主要存在脂質(zhì)體包封率偏低的技術缺陷，而且制劑不穩(wěn)定，這就限制了本脂質(zhì)體發(fā)揮更好的藥理活性。早期試驗當藥脂比小于l:15時，載藥量小，無法適用于臨床需求；當藥脂比大于l:0.5時包封率較低，約為20%30%，在25。C和37'C介質(zhì)中藥物釋放較快，37'C5天的體外累積釋放量占時間無窮大時脂質(zhì)體釋放量的5.2%，25'C5天的體外累計釋放量占時間無窮大時脂質(zhì)體釋放量的3.2%。通過發(fā)明人長期研究得出當藥脂比為l:0.515時，可以較好的適應臨床需求，篩選實驗結果如下一、將三角葉薯蕷皂苷與不同的輔料制成脂質(zhì)體檢測其包封率，檢測結果見表14。表l三角葉薯蕷皂苷硬脂酸(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2三角葉薯蕷皂苷三棕櫚酸甘油酯(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3三角葉薯蕷皂苷鯨蠟醇十六酸酯(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表4三角葉薯蕷皂苷膽固醇(乳化劑為雙肉豆蔻磷脂酰甘油)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表l中的脂質(zhì)體的平均粒徑，多分散系數(shù)以及Zeta電位數(shù)據(jù)，詳見表5<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表14說明三角葉薯蕷皂苷與脂類的重量配比在1份210份均能實現(xiàn)包封率大于45%的目的，而制備脂質(zhì)體時脂質(zhì)量濃度越高，脂質(zhì)體粒徑越大；而皂苷質(zhì)量濃度相對更低，雖然包封率高，但載藥量低。但隨投藥量增加，體系游離藥物增多，體系穩(wěn)定性變差；這兩種情況均不利于該脂質(zhì)體在臨床中的應用。因此根據(jù)實際需要可選擇藥脂比為l:5。權利要求1.三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷1份、脂類0.5～15份；所述脂類為脂肪酸、甘油酯、蠟質(zhì)類、類固醇類中的至少一種。2根據(jù)權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂肪酸為硬脂酸、棕櫚酸、癸酸、二十二酸中的至少一種；所述甘油酯為三月桂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯中的至少一種；所述蠟質(zhì)類為鯨蠟醇十六酸酯；所述類固醇類為膽固醇。3根據(jù)權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.510份。4根據(jù)權利要求3所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.55份。5根據(jù)權利要求14任一項所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，還含有O.520份的乳化劑；其中，所述乳化劑為磷脂、膽酸鹽、泰洛沙姆、含碳數(shù)為15的短鏈醇中的至少一種6根據(jù)權利要求5所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，所述磷脂為大豆卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油中的至少一種。7根據(jù)權利要求5所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，由高壓均質(zhì)法、薄膜法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得。8以權利要求7所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體制備而得的制劑，其特征在于，所述制劑為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑。9權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體的制備方法，它包括如下步驟A、稱取下述重量配比的組分三角葉薯蕷皂苷l份、脂類0.515份；B、按照高壓均質(zhì)法、薄膜法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備，即得。10權利要求l所述的三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體在制備治療心血管疾病的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，涉及三角葉薯蕷皂苷脂質(zhì)體及其制備方法和用途，本發(fā)明脂質(zhì)體是含有下述重量配比的組分制備而成的三角葉薯蕷皂苷1份、脂類0.5～15份；所述脂類為脂肪酸、甘油酯、蠟質(zhì)類、類固醇類中的至少一種?？梢圆捎酶邏壕|(zhì)法、薄膜法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法或熔融法中任一種方法制備而得，制備而得的脂質(zhì)體粒徑形態(tài)均一，粒徑為1～6μm，包封率高，穩(wěn)定性好，符合藥典要求，具有極好的治療心血管疾病的效果。文檔編號A61K9/127GK101152149SQ20071020191公開日2008年4月2日申請日期2007年9月29日優(yōu)先權日2007年9月29日發(fā)明者揚何,侯曉敏,冀承杰,丹李,旺王,程驚秋,蒙魏,文黃申請人:四川大學華西醫(yī)院