專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯b的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物提取物制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取藥物有效成分銀杏內(nèi)酯B的制備方法。
背景技術(shù)：
銀杏(Ginkgo hiloba L.)為銀杏科銀杏屬植物。隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)銀杏葉的研究不斷深入，發(fā)現(xiàn)銀杏葉中含有銀杏內(nèi)酯A、B、C，銀杏黃酮和其他雜質(zhì)等多種組分，而銀杏葉中有效成分銀杏內(nèi)酯B為一種高效的血小板活化因子拮抗劑，具有獨(dú)特的藥理作用和治療價(jià)值，可用以治療中風(fēng)、休克、移植排拆、血液透析、哮喘等疾病，引起了世界范圍制藥工業(yè)的極大興趣。在銀杏內(nèi)酯B的生產(chǎn)過(guò)程中，最關(guān)鍵的步驟是分離提純。
目前，生產(chǎn)銀杏內(nèi)酯B，一種方法是經(jīng)過(guò)多步分離得到含量較高的產(chǎn)品，這些分離過(guò)程包括浸提、過(guò)濾、萃取、沉淀等粗提過(guò)程，在粗提物中仍有不少雜質(zhì)；另一種方法是采用樹(shù)脂柱層析、三氧化二鋁柱層析法，樹(shù)脂柱層析是藥物與食品工業(yè)中常采用的精制手段，這種設(shè)備簡(jiǎn)單，設(shè)備一次投資低，這種方法的不足之處在于分離的效率較低，流動(dòng)相和固定相的利用率較低，成本高，產(chǎn)量低，產(chǎn)品含量和收率之間的矛盾在柱層析中難以兼顧，要保持含量，只有犧牲收率，這種低收率必將導(dǎo)致高成本；還有一種是采用模擬移動(dòng)床色譜和重結(jié)晶有機(jī)結(jié)合的方法通過(guò)萃取、模擬移動(dòng)床純化、重結(jié)晶得到成品，該方法收率高(約1.5％)、提取率高(60％以上)、含量高，但是難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯B的制備方法。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行，成本低，收率高，無(wú)樹(shù)脂殘留，得到的銀杏內(nèi)酯B含量達(dá)95％以上，收率為2％以上。
本發(fā)明提供的銀杏內(nèi)酯B的制備方法包括以下步驟一、原料的選擇及處理1、銀杏浸膏(總黃酮24％、總內(nèi)酯6％，15-25婆美度)；2、銀杏提取物(粉末總黃酮24％、總內(nèi)酯6％)，用適量(1-2倍體積)純凈水溶解后，待用；3、新鮮、干燥的銀杏綠葉，烘干，溫度控制在70℃，去雜、粉碎，過(guò)60目篩，用60％乙醇提取2次，每次60-90分鐘，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇；濃縮液加2倍的水，沉淀24小時(shí)，離心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水沖洗，然后用80％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮。
二、高速逆流萃取1)將銀杏浸膏或濃縮后的提取液導(dǎo)入萃取塔內(nèi)，從塔底均勻加入乙酸乙酯進(jìn)行對(duì)流溶劑萃取，乙酸乙酯用量一般為藥液的1.5～2.5倍，循環(huán)次數(shù)為4～5次，不同塔體，分開(kāi)收集；2)將萃取后的乙酸乙酯進(jìn)行回收，得到稠膏，濃縮至20-25婆美度，65-70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到銀杏內(nèi)酯產(chǎn)品；三、柱層析、重結(jié)晶1)將得到的銀杏內(nèi)酯，用75-85％乙醇溶解后，通過(guò)80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；2)將流出液再通過(guò)型號(hào)為HP-20的大孔樹(shù)脂柱，然后，用去離子水清洗樹(shù)脂至流出液體為無(wú)色，再用濃度為75-85％的乙醇溶液洗脫，當(dāng)流出液顏色接近無(wú)色時(shí)，停止洗脫，收集洗脫液，濃縮至20-25婆美度的浸膏；
3)將浸膏置于4℃以下環(huán)境冷藏，靜置后，逐漸有晶體析出，3小時(shí)后，收集結(jié)晶，抽濾，再用75-85％乙醇溶解結(jié)晶，重結(jié)晶，重結(jié)晶兩次后，將白色沉淀真空烘干至恒重，得銀杏內(nèi)酯B產(chǎn)品，含量可達(dá)95％以上。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，對(duì)于不同制備方法，結(jié)果見(jiàn)下表(所有原藥材為同批次，采用同一工藝)

由上表可知①傳統(tǒng)法方式萃取+氧化鋁樹(shù)脂、②傳統(tǒng)方式萃取+模擬移動(dòng)床色譜、③傳統(tǒng)方式萃取+聚酰胺樹(shù)脂+大孔樹(shù)脂、④高速逆流萃取+聚酰胺樹(shù)脂+大孔樹(shù)脂對(duì)銀杏內(nèi)酯B進(jìn)行分離、純化的效果●從含量上看①、③、④的三種方式都可以達(dá)到95％以上，②較低；●從收率上看，②的收率最高，④其次，①、③最后；●①、③、④的三種方式都可以達(dá)到9 5％以上，但是①、③的收率低；●②的收率最高，但是，模擬移動(dòng)床色譜的設(shè)備資金投入大，產(chǎn)量小，不適合工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)；●高速逆流溶劑萃取，有效避免了傳統(tǒng)溶劑萃取方法中溶劑損耗大，萃取率低的問(wèn)題，達(dá)到了很好的效果，此工藝使產(chǎn)品收率及品質(zhì)都有了較大提高，且節(jié)約溶媒用量，降低成本。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，從銀杏葉或銀杏葉提取物中分離提取出銀杏內(nèi)酯B，其含量可達(dá)95％以上，收率2％以上，優(yōu)點(diǎn)如下1、高速逆流溶劑萃取是在傳統(tǒng)溶劑萃取法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種新的分離手段，它巧妙利用了傳統(tǒng)溶劑萃取法中，溶劑和物料的密度差異及不混溶的特性，先將提取濃縮液裝入萃取塔內(nèi)，如萃取溶媒密度大則從塔頂加入，這樣萃取溶媒由于重力作用緩慢下降至塔底，再用泵抽上塔頂，往復(fù)循環(huán)，密度小的萃取溶媒則由塔底進(jìn)，由于浮力作用而上升到塔頂，再回至塔底，期間并不斷補(bǔ)充新的溶劑，如此往復(fù)循環(huán)；2、采用高速逆流萃取取代普通的固液萃取，使得萃取的連續(xù)性大大增強(qiáng)；同時(shí)，萃取用溶劑以乙酸乙酯代替含水的乙酸乙酯(如30-40％乙酸乙酯)，針對(duì)性更強(qiáng)，使得萃取液中銀杏黃酮甙等物質(zhì)的含量降低，銀杏內(nèi)酯的含量提高；3、將結(jié)晶的步驟置于4℃以下環(huán)境進(jìn)行，避免了常溫結(jié)晶過(guò)程中，銀杏內(nèi)酯A的大量析出，提高了產(chǎn)品銀杏內(nèi)酯B的含量。
本發(fā)明與目前精提銀杏內(nèi)酯B的柱層析法比較，收率高，產(chǎn)量大，提純所得銀杏內(nèi)酯B含量大于95％；與模擬移動(dòng)床方法比較，工藝簡(jiǎn)單，設(shè)備投入小，適于工業(yè)化生產(chǎn)；與多步萃取、分離法相比，得到的產(chǎn)品含量高。高速逆流萃取、柱層析分離、重結(jié)晶都是成熟的規(guī)模化純化工藝，三者的有機(jī)結(jié)合是本發(fā)明的突出特點(diǎn)，是工業(yè)化精細(xì)分離的保證。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1一、以銀杏浸膏(總黃酮24％、總內(nèi)酯6％，15-25婆美度，桂林萊茵生物科技股份有限公司生產(chǎn))為原料；二、高速逆流萃取1)將銀杏浸膏或濃縮后的提取液導(dǎo)入萃取塔內(nèi)，從塔底均勻加入乙酸乙酯進(jìn)行對(duì)流溶劑萃取，乙酸乙酯用量一般為藥液的1.5倍，循環(huán)次數(shù)為4次，不同塔體，分開(kāi)收集；2)將萃取后的乙酸乙酯進(jìn)行回收，得到稠膏，濃縮至20婆美度，65℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到銀杏內(nèi)酯產(chǎn)品；
三、柱層析、重結(jié)晶1)將得到的銀杏內(nèi)酯，用75％乙醇溶解后，通過(guò)80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；2)將流出液再通過(guò)型號(hào)為HP-20的大孔樹(shù)脂柱，然后，用去離子水清洗樹(shù)脂至流出液體為無(wú)色，再用濃度為75％的乙醇溶液洗脫，當(dāng)流出液顏色接近無(wú)色時(shí)，停止洗脫，收集洗脫液，濃縮至25婆美度的浸膏；3)將浸膏置于4℃以下環(huán)境冷藏，靜置后，逐漸有晶體析出，3小時(shí)后，收集結(jié)晶，抽濾，再用75％乙醇溶解結(jié)晶，重結(jié)晶，重結(jié)晶兩次后，將白色沉淀真空烘干至恒重，得銀杏內(nèi)酯B產(chǎn)品，含量可達(dá)95.5％。
實(shí)施例2一、銀杏提取物(粉末總黃酮24％、總內(nèi)酯6％，桂林興達(dá)制藥廠生產(chǎn))為原料，用2倍量純凈水溶解；二、高速逆流萃取1)將銀杏浸膏或濃縮后的提取液導(dǎo)入萃取塔內(nèi)，從塔底均勻加入乙酸乙酯進(jìn)行對(duì)流溶劑萃取，乙酸乙酯用量一般為藥液的2倍，循環(huán)次數(shù)為4次，不同塔體，分開(kāi)收集；2)將萃取后的乙酸乙酯進(jìn)行回收，得到稠膏，濃縮至22婆美度，70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到銀杏內(nèi)酯產(chǎn)品；三、柱層析、重結(jié)晶1)將得到的銀杏內(nèi)酯，用80％乙醇溶解后，通過(guò)80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；2)將流出液再通過(guò)型號(hào)為HP-20的大孔樹(shù)脂柱，然后，用去離子水清洗樹(shù)脂至流出液體為無(wú)色，再用濃度為80％的乙醇溶液洗脫，當(dāng)流出液顏色接近無(wú)色時(shí)，停止洗脫，收集洗脫液，濃縮至25婆美度的浸膏；
3)將浸膏置于4℃以下環(huán)境冷藏，靜置后，逐漸有晶體析出，3小時(shí)后，收集結(jié)晶，抽濾，再用80％乙醇溶解結(jié)晶，重結(jié)晶，重結(jié)晶兩次后，將白色沉淀真空烘干至恒重，得銀杏內(nèi)酯B產(chǎn)品，含量可達(dá)96.1％。
實(shí)施例3一、取新鮮、干燥的銀杏綠葉100kg，烘干，溫度控制在70℃，去雜、粉碎，過(guò)60目篩，用60％乙醇提取2次，第一次90分鐘，第二次60分鐘，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇；濃縮液加2倍的水，沉淀24小時(shí)，離心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水沖洗，然后用80％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮。
二、高速逆流萃取1)將銀杏浸膏或濃縮后的提取液導(dǎo)入萃取塔內(nèi)，從塔底均勻加入乙酸乙酯進(jìn)行對(duì)流溶劑萃取，乙酸乙酯用量一般為藥液的2.5倍，循環(huán)次數(shù)為5次，不同塔體，分開(kāi)收集；2)將萃取后的乙酸乙酯進(jìn)行回收，得到稠膏，濃縮至22婆美度，70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到銀杏內(nèi)酯產(chǎn)品；三、柱層析、重結(jié)晶1)將得到的銀杏內(nèi)酯，用85％乙醇溶解后，通過(guò)80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；2)將流出液再通過(guò)型號(hào)為HP-20的大孔樹(shù)脂柱，然后，用去離子水清洗樹(shù)脂至流出液體為無(wú)色，再用濃度為85％的乙醇溶液洗脫，當(dāng)流出液顏色接近無(wú)色時(shí)，停止洗脫，收集洗脫液，濃縮至25婆美度的浸膏；3)將浸膏置于4℃以下環(huán)境冷藏，靜置后，逐漸有晶體析出，3小時(shí)后，收集結(jié)晶，抽濾，再用85％乙醇溶解結(jié)晶，重結(jié)晶，重結(jié)晶兩次后，將白色沉淀真空烘干至恒重，得銀杏內(nèi)酯B產(chǎn)品，含量可達(dá)97.7％以上。
權(quán)利要求
1.一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯B的制備方法，包括下列步驟一、原料的選擇及處理(1)、銀杏浸膏(總黃酮24％、總內(nèi)酯6％，15-25婆美度)；(2)、銀杏提取物(粉末總黃酮24％、總內(nèi)酯6％)，用適量(1-2倍體積)純凈水溶解后，待用；(3)、新鮮、干燥的銀杏綠葉，烘干，溫度控制在70℃，去雜、粉碎，過(guò)60目篩，用60％乙醇提取2次，每次60-90分鐘，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇；濃縮液加2倍的水，沉淀24小時(shí)，離心，取上清液上HP-20吸附柱，先用水沖洗，然后用80％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮。二、高速逆流萃取1)將銀杏浸膏或濃縮后的提取液導(dǎo)入萃取塔內(nèi)，從塔底均勻加入乙酸乙酯進(jìn)行對(duì)流溶劑萃取，乙酸乙酯用量一般為藥液的1.5～2.5倍，循環(huán)次數(shù)為4～5次，不同塔體，分開(kāi)收集；2)將萃取后的乙酸乙酯進(jìn)行回收，得到稠膏，濃縮至20-25婆美度，65-70℃真空干燥、粉碎到90-100目，得到銀杏內(nèi)酯產(chǎn)品；三、柱層析、重結(jié)晶1)將得到的銀杏內(nèi)酯，用75-85％乙醇溶解后，通過(guò)80-120目的聚酰胺柱，收集流出液；2)將流出液再通過(guò)型號(hào)為HP-20的大孔樹(shù)脂柱，然后，用去離子水清洗樹(shù)脂至流出液體為無(wú)色，再用濃度為75-85％的乙醇溶液洗脫，當(dāng)流出液顏色接近無(wú)色時(shí)，停止洗脫，收集洗脫液，濃縮至20-25婆美度的浸膏；3)將浸膏置于4℃以下環(huán)境冷藏，靜置后，逐漸有晶體析出，3小時(shí)后，收集結(jié)晶，抽濾，再用75-85％乙醇溶解結(jié)晶，重結(jié)晶，重結(jié)晶兩次后，將白色沉淀真空烘干至恒重，得銀杏內(nèi)酯B產(chǎn)品，含量可達(dá)95％以上。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從銀杏葉或銀杏葉提取物中提取銀杏內(nèi)酯B的制備方法，采用高速逆流萃取、柱層析分離、重結(jié)晶相結(jié)合的方法，不但可除去銀杏葉粗提物中的烷基酚酸類(lèi)等多種有害雜質(zhì)，而且，提高了銀杏內(nèi)酯B的收率，提高了產(chǎn)品的含量，達(dá)到十分理想的分離純化目的，且適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/16GK101054384SQ200710106040
公開(kāi)日2007年10月17日 申請(qǐng)日期2007年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月30日
發(fā)明者孫步祥, 湯凌志, 李 杰, 梁遠(yuǎn)勝, 楊文國(guó), 蔣小三, 易永基 申請(qǐng)人:桂林萊茵生物科技股份有限公司